Clase 1 Introduccion

Introduccin
Aspectos reglamentarios y
administrativos
Qumica y Farmacia
Universidad Catlica del Norte
2014

Microbiologa
30-03-2014 1 Microbiologa QF504
Horario de clases
Lunes bloque A
Martes bloque A
Horario de laboratorios
Grupo 1 Jueves A-B
Grupo 2 jueves D-E
LOS LABORATORIOS COMIENZAN EL DA JUEVES 20
Inscribirse en la plataforma
Horario de atencin a alumnos
Martes C 3
Organizacin del curso
RESULTADOS DE APRENDIZAJE
A. Identificar las diferencias estructurales entre los distintos tipos de
microorganismos y parsitos.
B. Asociar las caractersticas metablicas de los microorganismos con las
condiciones de cultivo para su crecimiento, mantencin y
almacenamiento.
C. Relacionar el tipo de agente patgeno como causante de una
enfermedad, considerando la estrategia para su identificacin.
D. Valorar el uso del antibiograma como herramienta para velar por una
indicacin racional del antibitico-terapia.
E. Formular una hiptesis diagnstica rigurosa del agente etiolgico que
cursa una determinada patologa, considerando la opinin del grupo
para la resolucin de un caso clnico.
Polticas de aprobacin
Ctedra. Porcentaje de Asistencia: mnimo 80%;
Porcentaje de Calificacin: 60%
Laboratorio. Porcentaje de Asistencia: 100%; Porcentaje de
Calificacin: 40%
Ctedra y laboratorio tienen aprobacin independiente
Mnimo tres evaluaciones para ctedra y laboratorio
Nota mnima de aprobacin es 4,0 (cuatro coma cero).
(Art. 39 Reglamento General de Docencia de Pre-Grado).
Con un nivel de exigencia del 60%.
Para aquellos estudiantes que no alcanzan la aprobacin
podrn acogerse al Art. 42 letra a) y b) del Reglamento
General de Docencia de Pre-Grado.
Reglamento
Clases tericas :
1. La asignatura se rige por el reglamento de docencia de pre-grado de la
Universidad Catlica del Norte (Decreto de Rectora N 53/94).
2. La asistencia a clases es obligatoria en un 80%, pudiendo reprobar la asignatura de
no cumplirse este requisito y asumiendo que no se realizarn recuperaciones de
clases.
3. Las inasistencias a las actividades de ctedra debern ser justificadas a travs de
certificados mdicos o documentos originales de la UCN que acrediten que la
ausencia se debi a que el alumno estaba representando a la universidad en
actividades oficiales.
4. El plazo para entregar los certificados mdicos o equivalentes, ser de 7 das, a
partir del primer da de la inasistencia. Despus de este plazo no se recibirn
ningn tipo de certificado.
5. Despus de 15 minutos de comenzada la clase, se prohibir el ingreso de alumnos
al aula, cerrndose la puerta de la sala de clases.
6. Los alumnos que lleguen atrasados a una prueba, slo podrn entrar a rendir sta, hasta el
momento previo a que alguno de sus compaeros entregue la prueba y abandone la sala
de clases. Todos los alumnos tendrn el mismo tiempo estipulado al comienzo de la prueba
para rendir sta.
7. En caso de retraso del profesor a la clase, los alumnos debern esperar 15 minutos su
llegada. Si despus de este de tiempo el profesor no llegase, los alumnos debern
confeccionar una lista (nombre y firma), la que deber ser entregada en la secretara de la
carrera.

Reglamento
Reglamento
6. Quedar absolutamente prohibido el uso de telfono celular dentro de las clases
de ctedra, los cuales debern ser apagados durante sta.
7. Para cualquier asunto relacionado con la ctedra y el laboratorio, el nico medio
de comunicacin reconocido entre profesor y alumno es el correo UCN y la
plataforma Educ@ de la UCN.

30-03-2014 Microbiologa QF504 7
Por respeto a todos
En el laboratorio
INTRODUCCIN A LA
MICROBIOLOGA
CLASE N 1
HISTORIA
30-03-2014
Microbiologa QF504
10
ANTON VAN LEEUWENHOEK
Robert Hooke
Louis Pasteur
Robert Koch
cmo podemos observar a los microorganismos?
Teora de la generacin espontnea.
?
Aristoteles
Francesco Redi
Agente infeccioso L. Pauster
Concepto de enfermedad.
Microscopio de luz transmitida
Microscopio de fluorescencia
Microscopio electrnico
Invencin del microscopio
La creacin del microscopio y las
observaciones acerca del origen de los
insectos (aparicin de larvas de moscas y
gusanos) se crea la disciplina de la
microbiologa
DEFINICIN DE LA DISCIPLINA
La microbiologa es el estudio de los micro-
organismos (MO).

Distintos tipos de los organismos pueden
producir enfermedades.
qu MO se ven a travs del microscopio?
Bacterias
Hongos y levaduras
Parsitos
Protozoos
Virus X
Tinciones
Forma
Estructuras
Para visualizar :
Gram (pared)
Tinta china (cpsula)
Verde malaquita (esporas)
Naranja de acridina (cidos nuclicos)
Qu se estudia
en microbiologa?

BACTERIOLOGA
MICOLOGA
VIROLOGA
PARASITOLOGA
Identificacin y clasificacin
Morfologa
G(+) o G(-) BACTERIAS . DNA O RNA VIRUS
Caractersticas de tincin
Aspecto de las colonias
Pruebas bioqumicas
Mediante tcnicas de cultivo
Bacteriocinas (pptidos)
Sensibilidad a antibiticos
rbol filogentico de todos los seres vivos
Organizacin
La microbiologa organiza a estos organismos vivos ,
por medio de la jerarquizacin de grupos
taxonmicos.

Sistema de clasificacin compuesto por una jerarqua
de taxones anidados

Taxonoma :
Del griego taxis, "ordenamiento", y, nomos, "norma" o "regla.
Corresponde a la ciencia de la clasificacin.
Taxn :
Del griego taxis, "ordenamiento
Corresponde a un grupo de organismos emparentados, que en una
clasificacin dada han sido agrupados, asignndole al grupo un nombre en
latn, una descripcin, y un "tipo", que si el taxn es una especie es un
espcimen o ejemplar concreto.
Taxn y filogenia
Para clasificar los
organismos, la taxonoma
utiliza desde Carlos Linneo
un sistema jerrquico.

En este esquema
organizativo, cada grupo de
organismos en particular es
un taxn, y el nivel
jerrquico en el que se lo
sita es su categora.
Taxn y filogenia
La siguiente es una lista general (ordenada de lo general a
particular) de categoras taxonmicas a las que se asocian los
diversos taxones:

Dominio (Reino)
Phylum (animales o plantas) o Divisin (plantas)
Clase
Orden
Familia
Gnero
Especie
Subespecie

Sistemtica bacteriolgica
Sistemtica bacteriolgica
Nomenclatura de los taxones
La nomenclatura establece una terminologa
concensuada que permite saber, a partir del
sufijo de un taxn cualquiera, cul es su
categora taxonmica y dar cuenta de su
posicin en la jerarqua sistemtica.
Nomenclatura de taxones

Categora taxonmica \
Reino
Planta
(Plantae)
Alga
(Protista)
Hongo
(Fungi)
Bacteria
(Prokariota)
Animal
(Animalia)
Divisin o Phylum -phyta -mycota -bacteria
subfilo -phytina -mycotina
Clase -opsida -phyceae -mycetes -bacteria
subclase -idae -phycidae -mycetidae
superorden -anae
Orden -ales
suborden -ineae
infraorden -aria
superfamilia -acea -oidae
Famila -aceae -idae
subfamilia -oideae -inae
tribu -eae, ae -eae -ini
subtribu -inae -ina
Gnero -us, -a, -um, -is, -os, -ina, -ium, -ides, -ella, -ula, -aster, -cola, -ensis, -oides,
-opsis
Ejemplos
Gnero especie
Escherichia coli
Salmonella tiphy
Staphylococus aureus
Campylobacter pilori
Helicobacter pilori
Streptococus mutans
Gnero especie no conocida
Salmonella sp
Gnero y varias especies
Salmonella spp

Bacterias
Taxonoma
Taxonoma bacteriana
Comprende tres partes independientes
aunque relacionadas:

La clasificacin, que es la ordenacin de los seres vivos en grupos o
taxones en funcin de semejanzas o parentesco evolutivo.
La nomenclatura, que se ocupa de asignar nombres a los grupos
taxonmicos de acuerdo con normas establecidas.
La identificacin, es el proceso para determinar que un aislamiento
particular pertenece a un taxn reconocido. (es el lado prctico de la taxonoma)
Taxonoma bacteriana
Todos los microorganismos se agrupan
homogneamente.
A su vez stos pertenecen a otro grupo ms
extenso siguiendo una estructura jerrquica
sin superposiciones.

Taxonoma bacteriana
En la taxonoma bacteriana los niveles o rangos utilizados son
los siguientes (en orden ascendente):

ESPECIE
GNERO
FAMILIA
ORDEN
CLASE
REINO
DOMINIO

Particular
General
El grupo taxonmico bsico es la ESPECIE
Gnero y Especie
ESPECIE BACTERIANA : Es un conjunto de poblaciones clonales que
presentan un elevado grado de similitud fenotpica entre s y que a su vez
difieren de otros conjuntos de poblaciones clonales.
Una CEPA es una poblacin de microorganismos que desciende de un
nico organismo o de un aislamiento en cultivo puro.
Cada especie se asigna a un GNERO, el siguiente rango de la jerarqua
taxonmica.
Un GNERO es un grupo bien definido de una o ms especies que est
claramente separado de otros gneros.
SISTEMA BINOMIAL
Botnico sueco Carl Von Linneo
El nombre en latn y en cursiva consta de dos partes:

El primer nombre, escrito con mayscula, es el nombre genrico.
El segundo nombre, en minscula, es el nombre de la especie.

Ejemplo Escherichia coli

A menudo se abrevia el nombre genrico con una letra mayscula.

E. coli
ESTRUCTURACIN JERRQUICA EN TAXONOMA
Rango Nombre taxonmico
Dominio
Phylum o Reino
Clase
Orden
Familia
Gnero
Especie
Bacteria
Proteobacteria
-Proteobacteria
Enterobacteriales
Enterobacteriaceae
Shigella
S. dysenteriae
SISTEMAS DE CLASIFICACIN
Las caractersticas taxonmicas de los microorganismos se utilizan
para formar un sistema de clasificacin.
Existen dos formas generales para elaborar un sistema de clasificacin:

SISTEMA FENTICO

Los microorganismos se agrupan en funcin de semejanzas en sus
caractersticas fenotpicas.
Los microorganismos que comparten muchas caractersticas forman un
nico taxn.

SISTEMA FILOGENTICO

Los microorganismos se agrupan en funcin de probables relaciones
evolutivas.
Es difcil de realizar para las bacterias debido a la falta de registros
fsiles.
PRINCIPALES CARACTERSTICAS APLICADAS EN TAXONOMA BACTERIANA
CARACTERSTICAS
CLSICAS
MORFOLGICAS
1. Forma celular
2. Tamao de las clulas
3. Morfologa de las colonias
4. Caractersticas ultraestructurales
5. Tincin
6. Cilios y flagelos
7. Mecanismo de movilidad
8. Forma y localizacin de endoesporas
9. Inclusiones celulares
10. color
FISIOLOGICAS Y
METABLICAS
1. Fuentes de C y N
2. Componentes de la pared celular
3. Fuentes de energa
4. Productos de fermentacin
5. Tipo nutricional
6. Temperatura de crecimiento
7. Luminiscencia
8. Mecanismo de conversin de energa
9. Movilidad
10. Tolerancia osmtica
11. Relaciones con el oxgeno
12. pH ptimo de crecimiento
13. Pigmentos fotosintticos
14. Necesidad y tolerancia a la sal
15. Metabolitos secundarios
16. Sensibilidad a antibiticos
ECOLGICAS
1. Ciclo vital
2. Relaciones simbiticas
3. Patogenicidad
4. Preferencia de hbitat
5. Necesidad de temperatura; pH;
6. Necesidad de oxgeno
7. Necesidad de concentracin osmtica
GENTICAS
1. Posibilidad de recombinacin por
Conjugacin o
Transformacin

1. Plsmidos
Identificacin de una bacteria entrica
mediante tcnicas microbiolgicas
clsicas utilizando exclusivamente criterios
fenotpicos.
La mayora de los pasos a seguir
requieren que el microorganismo crezca
en cultivo puro.
PRINCIPALES CARACTERSTICAS APLICADAS EN TAXONOMA BACTERIANA
CARACTERSTICAS
MOLECULARES
COMPARACIN DE
PROTENAS
HIBRIDACIN DE CIDOS NUCLEICOS SECUENCIACIN DE CIDOS NUCLEICOS
COMPOSICIN DE CIDOS
NUCLICOS
(CONTENIDO EN G+C)
Estructura secundaria del ARNr 16/18 S de los tres Dominios
Los puntos rojos sealan posiciones en las que arqueas y bacterias suelen diferir
Bacteria
Archaea Eucarya
Caracterstica Bacteria Archaea Eukarya
- Estructura celular procaritica
- ADN circular
- Histonas
- Ncleo rodeado de membrana
S
S
No
Ausente
S
S
S
Ausente
No
No
S
Presente
- Pared celular de peptidoglicano
- Lpidos de membrana
- Ribosomas
- Intrones
S
Enlaces ster
70S
No
No
Enlaces ter
70S
No
No
Enlaces ster
80S
S
- Plsmidos
- Sensibilidad de ribosomas a la
toxina diftrica
- Sensibilidad a cloranfenicol,
estreptomicina y kanamicina
Si
No

S
S
S

No
Raro
S

No
- Metanognesis
- Reduccin desasimilativa de
sulfatos y frrico
- Nitrificacin
- Desnitrificacin
No
S

S
S
S
S

No
S
No
No

No
No
- Fijacin de nitrgeno
- Fotosntesis oxignica
- Quimiolitotrofa
- Vesculas de gas
- Sintesis de grnulos de reserva de
carbono (-hidroxialcanoatos)
- Crecimiento por encima de 80
S
S
S
S
S

S
S
No
S
S
S

S
No
S (en cloroplastos)
No
No
No

No
Resumen de las principales caractersticas diferenciales entre Bacteria, Archaea y
Eukarya
PROCARIONTES: BACTERIAS

Formas bacterianas
Clasificacin Gram
Christian Gram desarroll la tcnica en 1884.
Tincin diferencial de microorganismos.
Permite determinar morfologa bacteriana
Gram positivas (G+)
Bacterias de color violeta
Gram negativas (G-)
Bacterias de color rosado
Fijacin
Cristal violeta
Tratamiento con lugol
Decoloracin
Tincin de contraste con
safranina
Evaluaciones
Primera evaluacin 21 de abril

Segunda evaluacin 27 de mayo

Tercera evaluacin 24 de junio

Ponderacin igual para todas
Los contenidos son acumulativos
Preguntas ?
En qu consiste que una bacteria sea variable,
conservadora o hipervariable?
R:
No existen bacterias conservadoras , variables o hiper-
variables , sino que las bacterias poseen en sus genes
estructurales (por ejemplo gen 16sRNA), regiones que son
conservadas , variables o hiper-variables.
Lo anterior significa que en una regin conservada la
secuencia de nucletidos en el ADN no varia entre una
especie y otra. En cambio cuando existen regiones variable o
hiper-variables , las secuencias de nuclletidos son distintas
parcial o totalamente, permitiendo discriminar entre
gneros y especies.
Preguntas ?
cmo se pueden detectar los tipos de virus?
R:
Se pueden detectar las especies de virus ,
utilizando tcnicas de biolog molecular como por
ejemplo PCR , sondas para hibridizacin o por
tcnicas de deteccin de anticuerpos como las
tcnicas de ELISA.
Mtodos

REACCION EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)
Amplificacin enzimtica de un fragmento de DNA
(simulando una replicacin natural del DNA in vitro)

Eventos en la Replicacin del DNA:

Apertura de las cadenas (origen de replicacin)
Colocacin de los iniciadores (primers de RNA)
( La cadena lder utilizar un solo iniciador mientras que las
cadenas rezagadas utilizarn varios iniciadores de RNA.)
Sntesis de cadenas de DNA (partiendo de los iniciadores)
Eliminacin de los iniciadores de RNA.
Unin de los fragmentos de DNA (por la enzima DNA
ligasa)
Reaccin en cadena de la polimerasa
(PCR)
Componentes
Desoxinucleotidos (dNTPs) dATP, dTTP, dGTP,
dCTP

Enzima Taq (Thermus aquaticus)

Iniciadores (Primers) Complementarios a la cadena
de ADN

ADN molde Concentracion de 20ng

Desoxinucleotidos (dNTPs)
Bases Nitrogenadas del ADN
Union por puentes de hidrogeno
Adenina-Timina
Guanina-Citocina

ADN polimerasa (Taq polimerasa)
Actuar altas temperaturas
Thermus
aquaticus
Thermococcus
litoralis

Estable a altas
temperaturas

Enzima de 95kDa.

Actividad
Exonucleasa: 53

5 3

PRIMERS
(Iniciadores, Cebadores)

nicos: Asegura alta especificidad:
La secuencia del extremo 3 es critica para el
funcionamiento
Dos oligonucletidos que
son, cada uno,
complementarios a una de
las dos hebras del ADN.
CARACTERSTICAS
IMPORTANTES
nicos
Tamao
Dimeros de primers
5
3
3
5
Tamao
Efectos en:
Carcter de nico
Mas tamao (15pb)
Temperaturas de anillaje (Tm)
La temperatura a la cual la mitad de las hebras de ADN son
doble cadena (dc) y la mitad cadena sencilla (cs)

Denaturacin
94
o
C
94
o
C
Anillaje
50-60
o
C
Extension
72
o
C
T
e
m
p
e
r
a
t
u
r
a

100
0
50
Tiempo
1. Denaturacin: Apertura de la doble cadena
2. Alineamiento: Anillaje de primers
3. Extensin: Generacin de la nueva cadena
Etapas de la PCR
30 ciclos
Denaturacin
El numero de copias del DNA delimitado por los primers se
duplica en cada ciclo de PCR.
0

1
3
8
2
4
1
2
4
16
5
32
6
64
Numero de ciclos
Numero de copias
Electroforesis
Revelado
Separacin de molculas en un campo elctrico

Cmara de electroforesis
Electrodo (+)
Electrodo (-)
Camas para preparacin del gel
de agarosa
Fuente de poder
Tincin con Bromuro de etidio
Agente intercalante Bromuro
de Etidio
Molcula fluorescente que se
intercala entre la s bases de la
molcula de DNA

Absorcin a 330 nm
(UV)emisin en luz visible

Factores que afectan la velocidad de migracin
TAMAO DEL FRAGMENTO
la velocidad de migracin del fragmento es
inversamente proporcional al log del n de
pares de bases
CONFORMACION DE LA
MOLECULA
ADN circular ADN Lineal
VOLTAJE APLICADO

La velocidad de migracin es
proporcional al voltaje aplicado
CONCENTRACIN AGAROSA

Inversamente proporcional a
velocidad de corrido
2% 1.5% 1% 0.5%
Interpretacin de electroforesis
Marcador de peso molecular

1.Permite identificar tamao de fragmentos
25pb 100pb 50pb
100pb
150pb
250pb
300pb
400pb
400pb
300pb
250pb
Ejemplos de corridos de electroforesis
Con marcador de 50pb
Con marcador de 100pb
M 1 2 3 4 5 6 7
M 1 2 3 4 M
350pb
En qu consiste la tcnica del PCR?

http://www.dnalc.org/view/15924-Making-
many-copies-of-DNA.html
Qu es una bacteria facultativa ?
Crecen tanto como anaerobios (es decir sin
oxgeno), al igual que como aerobios (es decir
en presencia de oxgeno)
qu es un zimograma?
Es una batera de tubos con medio de cultivo
que contienen sustratos especiales como
azcares, aminocidos, indicadores , que
permitan visualizar propiedades metablicas
particulares que son caractersticas de un
gnero o especie.
Importancia de la cpsula
Capa de material gelatinoso que rodea toda la
bacteria
Producto de desecho metablico de la
bacteria y vara su composicin
Las cpsulas estn formadas por polmeros
simples de un mismo azcar o de unos pocos
azcares diferentes
Evita el reconocimiento del sistema inmune por
lo que es considerado un factor de virulencia
Existen mas formas bacterianas que las ya
nombradas
30-03-2014
Microbiologa QF504 69
FORMAS COCCEAS
1 plano:
2 cocos juntos:
Diplococos
4-20 cocos juntos:
Estreptococos
2 planos: Micrococos
3 planos: Sarcina
Varios planos:
Estafilococos
FORMAS BACILOS
Parejas: Diplobacilos
Cadenas: Estreptobacilos
Bacillus sp.
Empalizada:
Corynebacterium sp.
Bacilos curvados:
Vibrio sp.
FORMAS SPIRILOS
Espirilos:
Rgida: Brachispira sp.
Espiroquetas:
Flexible: Leptospira sp.
COMPOSICIN DE MEDIOS DE CULTIVOS
DNA CROMOSOMAL
CONJUGACIN

SON CONTENIDOS QUE VEREMOS MS
ADELANTE DE MANERA PARTICULAR
MORFOLOGA
MORFOLOGA CELULAR
MORFOS = FORMA
BACILOS
COCOS
ESPIRILOS
ESPIROQUETAS
CARACTERISTICA IMPORTANTE DE
CLASIFICACIN BACTERIANA.
MORFOLOGA
Las formas que presentan las bacterias
pueden ser:

Coco Bacilo Vibrin Espirilo
Bacilos: con forma de bastn. Pueden agruparse y formar
diplobacilos, empalizadas y estreptobacilos.
BACILO
E. coli
ESTREPTOBACILOS
Cocos: con forma esfrica. Pueden agruparse y formar
diplococos, estafilococos (racimos) y estreptococos
(cadenas).
COCOS GRAM POSITIVOS
Staphylococcus Streptococcus
COCOS GRAM POSITIVOS
COCOS GRAM NEGATIVOS
Neisseria sp
Espirilios: bastones en forma de sacacorchos.

Campylobacter sp

Espiroquetas: espirales muy largas y fina.

Leptospira sp
ARQUITECTURA CELULAR
MEMBRANA CITOPLASMTICA
Es una envoltura que rodea al citoplasma bacteriano.

Su estructura y composicin es similar a la membrana de eucariotas.
Difieren en la composicin lipdica
NO CONTIENE COLESTEROL

Controla el intercambio de sustancias con el medio y presenta
ciertas evaginaciones, llamadas mesosomas.

Sirve de barrera selectiva.

Mantiene la integridad de la clula, y por tanto la supervivencia
bacteriana.
1. Barrera osmtica (que mantiene constante el medio interno), impidiendo el paso libre
de sales y de compuestos orgnicos polares.
2. Es el lmite metablicamente activo de la clula: establece la frontera entre el
protoplasto y el medio externo, impidiendo la prdida de metabolitos y macromolculas
del protoplasto
3. Permite selectivamente el paso de sustancias entre el exterior y el interior (y viceversa).
4. Interviene en procesos bioenergticos (fotosntesis, respiracin).
5. Participa en la biosntesis de componentes de membrana, de pared y de cpsulas.
6. En la secrecin de protenas.

Mesosomas
Prolongaciones internas de la membrana
plasmtica que contienen enzimas respiratorios y
colaboran en el proceso de la divisin celular.
Sirven de anclaje para el ADN bacteriano
COMPOSICIN
Bicapa lipdica.
Fosfolpidos (acidos grasos/glicerol)
Protenas
Integrales/transporte
Periplsmicas
Perifricas de membrana
Se estabiliza mediante puentes de hidrogeno.
Calcio y magnesio
Es flexible debido a los fosfolpidos que la
componen.

Posee alta movilidad.

PROTEINAS
PERIPLSMICAS
Se encuentran en el entorno celular.
Efectan el procesamiento de macromolculas
para la formacin de las sub-unidades que se
transportan al interior de la clula.
OTRAS PROTENAS
Requieren de una segunda sustancia para
transportar a la primera.
SIMPORTADORES, transportan las dos
sustancias en la misma direccin.
ANTIPORTADORES, transporta una de las
sustancias en un sentido, y la otra en el
sentido opuesto.
PROTENAS PERIFERICAS DE MEMBRANA.
Se localizan en el citoplasma celular.
Tienen como funcin la obtencin de energa,
principalmente.
Actan directamente con las protenas integrales
de la membrana
Existen protenas que se encuentran en el
interior de la clula y se encuentran asociadas
con la cara interna de la membrana
citoplasmtica.

Protenas perifricas de membrana
(lipoprotenas).
Poseen una cola lipdica unida al extremo
aminoterminal de la protena.


FUNCIONES
TRANSPORTE
Todos los nutrientes y los materiales de desecho
deben atravesar la membrana plasmtica.
La mayora de las molculas que atraviesan la
membrana no lo hacen de forma pasiva.
Muchas de las molculas son TRANSPORTADAS a
travs de la membrana.
La caracterstica hidrofbica de la membrana
impide el paso de compuestos polares
SELECTIVIDAD.

Los aminocidos y sales inorgnicas
(hidroflicas) no pueden atravesar la
membrana, por lo que tienen que ser
transportados de forma especifica.
TRANSPORTE A TRAVS DE LA MEMBRANA
TIPOS:
UNIPORTADORES
TRANSPORTE ACTIVO
TRANSLOCACION DE GRUPO

Citoplasma:
Medio celular limitado por las membranas, muy
semejante al de la clula eucariota.
En el se realizan la mayora de las reacciones
metablicas de la bacteria.
Ribosomas 70 S:
Son orgnulos globulares, formado por dos
subunidades la 50 S y la 30 S, visibles nicamente
al microscopio electrnico, pueden estar libres o
asociados.
Intervienen en la sntesis proteica.
Inclusiones:
Son grnulos de reserva, en poca de abundancia,
o bien son residuos de su metabolismo.
Estn formadas de polisacridos o gotitas de
grasa.
Neisseria gonorrhoeae
NUCLOIDE

Formado por una molcula de ADN circular y
doble, no asociado a histonas.
Contiene la informacin gentica Cromosoma
(nucleoide
Plasmidio
Genoma
bacteriano
Comparacin de tamao de genomas en distintas
especies

El cromosoma principal bacteriano (nucleoide)
es ADN doble hlice circular.
Superenrollado.
Organizado en dominios o lazos.
Interacciona con protenas bsicas.
semejantes a las histonas (HU y H).
Sugieren la formacin de una cromatina
rudimentaria
El genoma de las bacterias puede estar
constituido por ms de un cromosoma.
El cromosoma principal (nucleoide),
Una o varias copias de cromosomas pequeos de
ADN doble hlice circular (plasmidios o
plasmidos).

Ms pequeo: Buchnera spp. 460 kb (0.46 Mb)
Mycoplasma genitalium 580 kb (0.58 Mb)
Ms grande : Myxococcus xanthus 9200 kb (9.2Mb)
Mediano : ~2000 kb (2.0 Mb)
Promedio de tamao de gen: 0.9-1.0 kb
~90% del genoma codifica para protenas y RNA estables
El genoma bacteriano ms grande implica que contine ms genes.
El nmero de genes refleja el ciclo de vida:
pequeos genomas = parsitos obligados
grandes genomas = flexibilidad metablica,
vivir en ambientes complejos

Tamao del genoma y nmero de genes en bacteria
Graur and Li , 2000
Genoma Bacteriano
Cromosoma
Plasmidio
Elementos transponibles (facultativos)
Virus bacteriano (bacterifago) (facultativos)

Caractersticas de los genomas bacterianos

Las bacterias tienen un nico cromosoma circular
Muchas bacterias poseen plasmidios
Los genomas bacterianos contienen entre ~700 a varios miles de genes
El genoma de una bacteria es mucho ms pequeo que los genomas
eucariticos
No contiene intrones

Plegamiento del ADN bacteriano
Nucleoide

ADN de E. coli
obtenido
tras la lisis de la
clula
ADN CCC
Topoisomerasa I Topoisomerasa II
ADN de
E. coli
ENZIMAS
1. Toposisomerasa II: promueve el
superenrollarmiento (DNA girasa).

2. Toposisomerasa I: controla el
desenrrollamiento.
Organizacin en dominios del cromosoma bacteriano
RNA bacteriano
Las bacterias contienen 3 tipos de RNA:

1. RNAm: (mensajero), su funcin es copiar el
cdigo gentico del gen (DNA cromosmico) y
llevar este mensaje al sitio de sntesis de
protenas (Ribosomas).

2. RNAt (transferencia), traduccin del mensaje de
RNA en una secuencia especifica de aminocidos.

3. RNA (ribosomal) sntesis de protenas.
ESTRUCTURAS VARIABLES
Pili (Pelos):
Filamentos protenicos derivados de la pared que funcionan
como estructuras de fijacin.
Algunos estn huecos y permiten el intercambio de material
gentico en el mecanismo parasexual de la conjugacin.
Flagelos:
Son prolongaciones cuya longitud es varias veces la de la
bacteria.
Aparecen en nmero entre 1 y 100.
Intervienen en el desplazamiento
Su estructura no es homloga a la de los flagelos de
eucariotas.
Cromatforos:
Se localizan en las bacterias fotosintticas, y
contienen las enzimas y pigmentos necesarios
para la fotosintesis.
GLUCOCALIZ
Cubierta de azcares que se ubica por encima
de la pared.
Los componentes son sintetizados en el
interior celular
La composicin vara segn la especie
Tambin se conoce como cpsula.

Cpsula:
Capa gelatinosa de naturaleza glucoproteica que
rodea por la parte externa a algunas bacterias.
Es una proteccin contra la accin de los
anticuerpos y la fagocitosis y evita la prdida de
humedad.
Las bacterias con cpsula son ms virulentas
(patgena).
PARED BACTERIANA
Pared bacteriana:
El peptidoglicano, principal constituyente de la pared, es
un polmero constituido por unidades repetidas del
monmero formado por: dos derivados de carbohidratos,
N-acetil Glucosamina y N-acetil Murmico (N-Ac.G, NAc.
M), unidas por enlaces beta 1-4 y asociados a cortas
cadenas peptdicas a travs del N-acetil Murmico
a los antibioticos.
PARED BACTERIANA
Es una envoltura rgida y fuerte que da forma a las clulas bacterianas.
Evita los posibles daos que producen cambios de presin osmtica.
Existen dos tipos:
La Gram positiva
son ms gruesas y est compuesta por una capa de glucopptidos.
La Gram negativa
compuesta por dos capas,
una de glucopptidos rodeada de una
bicapa fosfolipdica, lipoprotenas y glucolipdica.
Son ms resistentes
Bacterias Gram-positivas
OPared externa de la envoltura celular tiene como base
qumica fundamental el peptidoglicano.
OJunto a otros componentes forman un sculo de
murena.
OUna funcin de esta pared es regular el potencial
hdrico de la clula.

bacterias Gram positivas
La red de peptidoglucanos origina varias capas
superpuestas.
Es gruesa y homognea y no hay membrana
externa.

Bacterias Gram-negativas
La pared casi no contiene peptidoglicano
Presenta lipolisacridos, lipoprotenas y
protenas
O Es una estructura de dos membranas:
Oexterna e interna
OEntre ellas existe un espacio periplasmtico.
OEsta membrana funciona principalmente como
una especie de filtro (porinas)
O Selectividad de sustancias
O Bacterias gram negativas son menos susceptibles a los
antibiticos (resistencia).

Gram negativas
Existe una sola capa de peptidoglucanos
sobre la que se dispone una membrana
externa.
Membrana externa constituida por una capa
de fosfolpidos y otra de glicolpidos
asociados.
Estos ltimos se asocian a polisacridos que se
proyectan hacia el exterior

Membrana externa de las bacterias Gram negativas
Poseen, adems del peptidoglican.
Una capa adicional en su pared, compuesta de lipopolisacrido (LPS)
Representa una segunda capa lipdica, la cual contiene polisacridos y protenas
Lpidos y polisacridos unidos estrechamente en la capa externa formando
estructuras lipopoliscaridas especificas
Composicin del LPS
Capa de LPS bacteriano
Endotoxina Propiedad biolgica de muchas bacterias Gram negativas
Endotoxina
Propiedad biolgica importante de la membrana externa
de las Bact. Gram Negativa
Propiedades txicas asociadas al Lpido A
Modo de accin: fiebre , diarrea, vmitos
Toxicidad: dbilmente txicas, raramente mortal
Inmunogeneidad: Inmunogeno pobre, respuesta inmune
insuficiente para neutralizar la toxina.
Estructura bacteriana
Existe diferencias entre las paredes celulares de las
bacterias Gram positivas y Gram negativas.

La pared celular de las bacterias Gram positivas
posee una gruesa capa de peptidoglucano.

la capa de peptidoglucano de las Gram negativas es
delgada.
Principales caractersticas
estructurales
MEMBRANAS
PARED CELULAR
Formada por polmeros
de azcar.
N-acetil-glucosamina.
N-acetil-murmico.

N-acetil-murmico unido
a pptidos cortos ,
formar puentes con N-
acetilglucosamina y N-
acetilmurmico.
Red.
Unidos por carbono b 14
Peptido glicano de bacterias Gram positivas
Penicilina
Derivados b-lactmicos
Inhibidores de la sntesis de pared celular.

Inhibicin de la sntesis de la pared
bacteriana
La penicilina inhibe la sntesis del pptidoglicano, en su fase
final, el ensamble de los precursores.

La Vancomicina la sntesis del pptidoglicano, dentro del
citoplasma.

La Bacitricina inhibe el portador lipdico que saca los
precursores del citoplasma.

La Benzomicina destruye el pptidoglicano.

Acidos teicoico
Polmeros de glicerol o ribitol unidos por
enlaces fosfo-dister.

Se encuentran en la pared celular de las
bacterias Gram-positivas.

Staphylococci
Streptococci
Bacillus
Clostridium
Corynebacterium
Listeria

Se extiende sobre la capa de
peptidoglicano.

Las bacterias Gram negativas no poseen
cido teicoico.

Poseen carga (-) por lo que aportan carga
a la pared celular de las bacterias G(+).

Lipolisacridos
Las Bacteria Gram negativas, adems del
peptidoglicano, poseen una capa adicional en
su pared que est compuesta de
lipopolisacrido.
Antgeno O
Ncleo polisacrido
Lpido A
Antgeno O
El polisacrido O o antgeno O especfico est unido al centro o ncleo.
Galactosa
Glucosa
Ramnosa
manosa
Dideoxiazcares
Estos azcares estn unidos entre s formando secuencias de cuatro o
cinco unidades que a menudo se hallan ramificados.
La repeticin de estas secuencias de azcar da lugar a la formacin del
polisacrido 0.
Ncleo polisacrido
Formado por :
cetodesoxioctonato (KDO).
Azcares de siete carbonos (heptosas)
Glucosa.
Galactosa
N- acetilglucosamina.
Lpido A
Disacrido compuesto de N-acetilglucosamina fosfato.
une lpidos mediante uniones de ster amina.
El disacrido est unido al ncleo de polisacridos 0 a travs
del KDO.
Entre los cidos grasos que se hallan habitualmente en el
lpido A estn :
cido caproico
cido larico
cido mirstico
cido palmtico
cido esterico.
qu tipo de bacteria soy?
Bacterias alcohol resistentes
Tienen pared celular
Poseen una membrana externa de rica en
lpido
60% de cido miclico (capa crea)
40% de pptido glicano
No se tien con Gram
Tincin diferentes
Ejemplo Mycobacterium tuberculosis
Mycobacterium tuberculosis
(Bacilo de Koch)
cido-alcohol resistencia
Las bacterias cido-alcohol resistentes no pueden ser clasificados segn la
tincin de Gram.

Teidas con algunas tinciones concentradas combinadas con calor.

Una vez teida tiene la capacidad de resistir la decoloracin de una combinacin
de alcohol- cido, el cual es el decolorante ms comn en los protocolos de
tincin de bacterias, de donde viene el nombre Alcohol-cido resistente.

La alta concentracin de cido micolico en la pared celular es la causante de la
baja absorcin y alta retencin de la tincin (fucsina).

La forma ms comn para poder identificar este tipo de bacterias es a travs de
la tcnica de tincin de Ziehl-Neelsen

la bacteria queda teida en rojo y se agrega una tincin de contraste de nombre azul
de metileno la cual permite apreciar de mejor forma la bacteria.
Metabolismo y crecimiento
bacteriano
Qumica y Farmacia
2014
Metabolismo bacteriano
FUENTES DE ENERGA
(DADORES DE ELECTRONES)
Radiacin solar y pigmentos
fotosintticos
Glucosa, azufre elemental, amonaco
o hidrgeno gaseoso
Electrones
ATP
Transporte de electrones
NADP
+
NAD
+
; FAD
ATP
Aceptores de electrones
O
2

(respiracin aerbica)
NO
3
-
(respiracin Anaerbica)
Compuestos
(fermentacin)
RESPIRACIN CELULAR
Fermentacin
Tipo de fermentacin Producto(s)
Fermentacin lctica Lactato
Fermentacin alcohlica etanol, CO
2

Fermentacin cida-mixta etanol, succinato, acetato, formiato, lactato, CO
2
, H
2

Fermentacin butilngliclica butilnglicol, CO
2

Fermentacin aceto-butrica acetato, acetona, butirato, butanol, etanol, CO
2
, H
2

Respiracin celular
anaerobia
Aceptor y prod. reducido Procariotas (Ejemplos)
NO
3
-
y NO
2
-
y N
2
Pseudomonas, Bacillus
NO
3
-
y NO
2
-
Enterobacterias
SO
4
2-
S
0
y SH
2
Sulfatorreductoras (Desulfovibrio, Desulfotomaculum)
fumarato y succinato Enterobacterias
CO
2
CH
4
Arqueas metanognicas
Fe
3+
Fe
2+
Shewanella, Geobacter

Crecimiento en un volumen fijo de medio o cultivo cerrado
(batch)
Fase lag - las clulas se adaptan al Nuevo ambiente, aun no se dividen.
Fase exponencial (log) - velocidad mxima de crecimiento bajo condiciones particulares,
tiempo de generacin mnimo .
Fase estacionaria - sin crecimiento neto, vc=0 estadsticamente = 0
cuando: Vc=Vm (vel. crecimiento es igual a la de muerte)
nutrientes limitantes, pero suficientes para mantener actividad
acumulacin de desechos, inhibicin del crecimiento
Fase de muerte - velocidad de muerte celular > velocidad de divisin celular
Luego de la adicin de bacterias al medio lquido fresco se observa la
siguiente cintica de crecimiento
Crecimiento de un microorganismo en medio
de cultivo lquido

1. Fase de latencia
2. Fase
exponencial
3. Fase
estacionaria
4. Fase de muerte
Efecto de las sustancias
qumicas
Agentes antimicrobianos
Son sustancias qumicas que matan o inhiben el crecimiento
microbiano, es decir tienen un efecto cida o esttico.

Desinfectantes: agentes qumicos usados para la reduccin o
eliminacin de microorganismos de objetos inanimados.

Antispticos: agentes qumicos usados para la desinfeccin de
tejidos animales (piel, mucosas).

Factores que influyen en la accin antimicrobiana
a) concentracin del agente qumico
b) temperatura en la que el agente debe ser usado
c) el tipo de microorganismo presente en el material
d) el nmero de microorganismos presentes
e) la naturaleza del material a desinfectar
Antispticos y desinfectantes ms comunes
Sustancia Modo accin Usos
Etanol Desnaturaliza protenas y
solubiliza lpidos
Antisptico (piel)
Formaldehdo Reacciona con grupos -SH y -
COOH
Desinfectante
Nitrato de plata Precipita protenas Antisptico
Detergentes Altera membranas Antisptico
Desinfectante
Compuestos
fenlicos
Desnaturaliza protenas
Daa membranas
Antisptico
Desinfectante
Agentes que daan la membrana
1. Detergentes
Catinicos
Aninicos
No aninicos
2. Compuestos fenlicos
Fenol
Cresol
Difenilos halogenados
Alquilsteres de para-
hidroxibenzoico
Aceites esenciales de plantas
3. Alcoholes
Etanol
Isopropanol

Agentes que destruyen las
protenas
1. cidos y bases fuertes
2. cidos orgnicos no
disociables
Agentes modificadores de grupos funcionales

1. Metales pesados
Mercuriales
Compuestos de plata
Compuestos de cobre
2. Agentes oxidantes
Halgenos
Agua oxigenada
Permanganato de potasio
Acido paractico

3. Colorantes
Derivados de la anilina
Derivados de la acridina
(flavinas)
4. Agentes alquilantes
Formaldehdo
Glutaraldehdo
Oxido de etileno
B-propillactona
SUSTANCIAS CON ACTIVIDAD BIOCIDA
Se pueden clasificar en tres categoras segn su potencia y
efectividad contra los microorganismos:

Desinfectantes de bajo nivel
Pueden destruir la mayor parte de las formas vegetativas bacterianas,
tanto grampositivas como gramnegativas, algunos virus con envoltura
lipdica y hongos levaduriformes, pero no Mycobacterium spp, ni las
esporas de bacterias.

Desinfectantes de nivel intermedio
Consiguen inactivar todas las formas bacterianas vegetativas,
incluyendo Mycobacterium tuberculosis, la mayora de los virus con o
sin envoltura y hongos filamentosos, pero no destruyen
necesariamente las esporas bacterianas.

Desinfectantes de alto nivel
Consiguen destruir todos los microorganismos, excepto algunas
esporas bacterianas.

FACTORES QUE INFLUYEN EN EL
CRECIMIENTO MICROBIANO
1. Temperatura
Las reacciones enzimticas
ocurren a la mxima
velocidad posible
Las velocidades de las
reacciones enzimticas
van aumentando
A bajas
temperaturas los
mecanismos de
transportes no
ocurren

A altas temperaturas se lisa
la clula por temperatura.
Colapsa la membrana
plasmtica.

Crecimiento bacteriano
Requerimientos fsicos :
1. Temperatura

Producen el deterioro de los alimentos ,
crecen en el refrigerador
Forman esporas
como estructuras
de resistencia .
No son eliminadas
por autoclavado
Sicrfilos - rango: < 0-20C, ptimo < 15
o
C
organismos marinos, algas: Chlamydomonas nivalis (nieve rosada), bacterias:
Pseudomonas, Flavobacterium
membrana contiene alto % de cidos grasos insaturados
Sicrtrofos o Sicrfilos facultativos - rango: 0-35C, ptimo 20-30
o
C
Pseudomonas - crecen en el refrigerador
Mesfilos - rango: 15-45 C, ptimo: 30-40C
la mayora de los microorganismos (del suelo, aguas, patgenos)
Termfilos - rango: 40-70C, ptimo de 55-65
o
C
membrana contiene alto % de cidos grasos saturados
enzimas estables al calor
Bacillus stearothermophilus, organismos de compostaje
Hipertermfilos - rango: 80-113C, ptimo > 90
o
C
Pyrococcus, Pyrodictium (aguas termales)

2. Presin osmtica
En bacterias entre 80-90% de su constitucin es agua.
Plasmolisis y conservacin de alimentos con sal o azcar.
qu ocurre con los microorganismos Halfilos?

3. pH:
Clasificacin de los microorganismos
segn su pH ptimo
Neutrfilo: pH ptimo 7 - Ej.: bacterias
patgenas humanas.
Acidfilo: pH ptimo 7 - Ej.: muchas de las
archeobacterias y hongos.
Basfilo: pH ptimo 7 - Suelos y aguas ricas en
carbonatos.

cido (inh)
Neutro (norm)
Alcalino (inh)
Obs: en medios de cultivo se utilizan tampones para evitar
la inhibicin del crecimiento bacteriano , dado por la
produccin de cidos.
Los aminocidos tambin tienen un efecto amortiguador.

Requerimiento de oxgeno
1. Aerobios obligados: requieren de oxgeno para sus demandas
energticas (21% de aire). Aceptor final de electrones.

2. Microaeroflico: crecen a bajas concentraciones de oxgeno (1-
12%),. Tienen capacidad limitada de respiracin.

3. Anaerobios aerotolerantes: crecen en presencia o ausencia de
oxgeno. Obtienen su energa de la fermentacin.

4. Anaerobios estrictos: crecen en ausencia total de oxgeno, no
pueden eliminar H
2
O
2
, perxido, hidroxilo (OH
-
). Los aceptores
finales de electrones son fumarato, SO
4
-2
, CO
3
-2
.

5. Anaerobio facultativos: pueden crecer en presencia o ausencia de
oxgeno. Pueden usar oxgeno como aceptor final de electrones en
la cadena respiratoria cuando est disponible. En ausencia de
oxgeno la energa la obtienen por fermentacin. Tambin por
respiracin anaerobia , en enterobacterias el aceptor final de
electrones es NO
3
-
.

Cmo evitar el stress oxidativo?
1.- Proteccin respecto de los perxidos: En muchas bacterias aerobias
existe el enzima catalasa:
catalasa
H
2
O
2
----------------------------------------------------> H
2
O + O
2

2.- Algunos anaerobios aerotolerantes producen peroxidasa, capaz de
eliminar cualquier perxido, incluyendo el de hidrgeno. Las peroxidasas
catalizan la oxigenacin de compuestos orgnicos por el perxido de
hidrgeno, que pasa a agua:
peroxidasa
H
2
O
2
+ NADH + H
+
---------------------------> 2 H
2
O + NAD
+

Proteccin respecto del superxido: El radical superxido se produce
por:
1. Accin de oxidasas.

2. Autooxidacin de quinonas, ferredoxinas y flavoprotenas.
Este radical es muy txico, de modo que todas las bacterias aerobias y
anaerobias aerotolerantes presentan el enzima superxido dismutasa
(SOD), que cataliza la conversin del superxido en oxgeno molecular y
agua oxigenada, que a su vez se destruye por los mecanismos que
acabamos de ver:
SOD
2 O
2
-
+ 2 H
+
--------------------> O
2
+ H
2
O
2

Microaeroflicos
Anaerobios
Requerimiento de oxgeno
Crecimiento bacteriano
Requerimientos qumicos :
1. Fuente de carbono
Materia orgnica hetertrofos
CO
2
quimioauttrofos, Fotoauttrofos
2. Fuente de azufre , fsforo y nitrgeno
3. Oligoelementos , las bacterias los utilizan como
cofactores (Cu, Zn, Fe, Mo)
4. Requerimientos de oxgeno

Nutrientes
1- Fuente de energa
2- Macronutrientes
H K
O Mg
C Na
N 95% Ca
S Fe
P
3- Micronutrientes (elementos traza)
Co, Zn, Mo, Cu, Mn, Ni, Se, W
4- Factores de crecimiento
Vitaminas
Purinas y pirimidinas
Aminocidos

Fuente de
carbono
- CO
2

- Compuestos
orgnicos
Carbohidratos, azcares,
protenas, aminocidos,
lpidos, cidos grasos,
glicerol
Fuente de
nitrgeno
- Inorgnica
- Orgnica
NH
4
, NO
3
-
, N
2

Protenas, peptonas, aa,
bases pricas y
pirimdicas, urea
Fuente de
fsforo
- Inorgnica
- Orgnica
Fosfatos
Esteres del cido fosfrico
Fuente de
azufre
- Inorgnica
- Orgnica
Sulfuros y sulfatos
Aminocidos sulfurados,
vitaminas

Macronutrientes
Condiciones para el crecimiento microbiano

Nutrientes
agua
fuente de energa
fuentes de C, N, otros
elementos
micronutrientes,
factores de crecimiento
Condiciones
de cultivo
temperatura
pH
luz
aireacin
actividad de agua
potencial redox
Crecimiento
Medios de cultivo
Factores de crecimiento

Microorganismos auto o heterotrfos pueden requerir
pequeas cantidades de ciertos compuestos orgnicos que no
pueden sintetizar y deben incorporarse en los medios

* bases pricas y pirimdicas ADN, ARN
* aminocidos esenciales sntesis proteica
* vitaminas coenzimas
Factor o vitamina funciones principales
p-aminobenzoico (PABA) precursor del cido flico
Acido flico metabolismo de compuestos C
1
, transferencia de
grupos metilo
Biotina biosntesis de cidos grasos; fijacin de CO
2

Cobalamina (vitamina B
12
) reduccin y transferencia de compuestos C
1
;
sntesis de desoxirribosa
Niacina (cido nicotnico) precursor del NAD; transferencia de electrones en
reacciones redox
Riboflavina precursor de FAD y FMN
cido pantotnico precursor de la CoA
Tiamina (vitamina B
1
) descarboxilaciones; transcetolasas.
Complejo B
6
(piridoxal,
piridoxamina)
transformaciones de aminocidos y cetocidos
Grupo Vitamina K, quinonas transportadores de electrones (ubiquinonas,
menaquinonas, etc.)
Clasificacin de los medios de cultivo
Segn su naturaleza fsica
* lquidos
* slidos - solidificante: agar-agar, silico-gel
* semi-slidos
Clasificacin de los medios de cultivo
Segn su composicin
Qumicamente Definidos o sintticos:
composicin qumica conocida.
No definidos o complejos: composicin qumica
no definida, enriquecidos con peptonas, extracto de
carne, de levadura, sangre (para las mayora de
quimiohetertrofos).

* Selectivos o inhibitorios: medios que contienen,
adems de los nutrientes, ciertas sustancias que inhiben el
desarrollo de algunos microorganismos permitiendo el
crecimiento de otros o cuya composicin permite el
desarrollo de un grupo determinado.
Ej. agar-antibiticos; agua, sales, luz, para algas,
medios con NaCl superior a la concentracin fisiolgica.
Segn su uso en el laboratorio
Segn su uso en el laboratorio

* Diferenciales: medios que contienen indicadores
para diferenciar los distintos tipos de
microorganismos que puedan crecer en l.
Ej. azcar fermentable: lactosa, indicador: rojo neutro
* Enriquecidos

1. Recuento en placa
2. Nmero ms probable
3. Reduccin de
colorantes
4. Recuento directo al
microscopio
Tcnicas de
manejo de
muestras.
Agua peptonada 0.1% pH 6.8-7
Solucin amortiguadora de fosfatos
0.1M pH 7
Solucin de Ringer
Medio enriquecido para clostridios
Solucin de sacarosa al 20% o NaCl al
15%, osmfilos y halfilos
respectivamente.

Diluyentes de uso general
SISTEMAS DE RECUENTO BACTERIANO
Sistema de recuento en placa
Dilucin
seriada
UFC
Sistema de recuento en placa
Mtodo : Nmero ms probable
Ventajas
Sencillo
Es ms probable que los resultados coincidan entre laboratorios a
diferencia del recuento en placa.
Con medios selectivos y diferenciales se puede determinar el
nmero de microorganismos a que grupo pertenecen.
Desventajas
Gran cantidad de material
No se puede observar la morfologa de las colonias
Poco exacto
Se basa en el tiempo transcurrido para que
tenga lugar la reduccin del colorante es
inversamente proporcional al nmero de
microorganismos existentes en la muestra.
Mtodo de la reduccin de
colorantes
Resazurina
morada rosa
dihydroresorufin
blanco
Azul de metileno
Ventajas
Sencillas, rpidas, baratas y solamente las clulas
viables reducen los colorantes.
Desventajas
Las sustancias reductoras propias de los alimentos
pueden afectar el resultado.
No todos los microorganismos reducen de igual
modo los colorantes.

Sistema de recuento en cmara
Recuento directo al microscopio
Consiste en:
Frotis de la muestra o cultivo
en portaobjetos
Tincin mediante un colorante
Observacin al microscopio y
recuento
Para calcular el nmero de microorganismos
por ml de la muestra:
Calcular el promedio contado por cada cuadro
Multiplicar el promedio por 10,000 para obtener
el nmero de clulas por ml de la muestra diluida.
Multiplicar el resultado obtenido por el factor de
dilucin.

METABOLISMO
Sntesis de carbohidratos
OBTENCIN DE ENERGA
FERMENTACIN
Gluclisis
Fermentacin
Alcohlica
Fermentacin
Lctica
Modelo de fermentacin
Agente oxidante (toma electrones)
Agente reductor (dona electrones)
Pierde electrones
la energa liberada se usa
para formar ATP
Gana electrones
Gluclisis
Fermentacin
Lctica
FERMENTACIN
Gluclisis: Oxidacin parcial de una molcula
de glucosa a piruvato

2ATP
2NADH (6ATP)
----------------------------
8ATP
piruvato
Etanol
Gluclisis
lactato
GLUCOSA
cido pirvico
cido actico
+ cido frmico
cido succnico
cido actico
Acetona
Acetil CoA
cido frmico
Alcohol etlico
CO
2

cido actico
H
2

Diferentes rutas de fermentacin
Homolctica
De Butadienol
De cidos mixtos
Butanol-acetona
Del cido
propinico
Embden-Meyerhof
FERMENTACIN
Oxidacin parcial de una molcula de piruvato
a un compuesto orgnico (etanol, lactato,
acetato,

2NADH (6ATP)
8ATP (Gluclisis)
------------------------------
14 ATP de la fermentacin de 1 Mol de Glucosa
RESPIRACIN
Aerobia: el aceptor final de electrones de
O2 (se reduce y se forma H2O)

Anaerobia: el aceptor final de electrones no
es O2 (N2, S)
Reduccin
Reduccin
Oxidacin
Transportador
de electrones
RESPIRACIN AEROBIA
Gluclisis
Ciclo de Krebs
RESPIRACIN AEROBIA
Oxidacin completa de 1 molcula de piruvato a 3CO2

4 NADH2 (12ATP)
1 FADH2 (2ATP)
1 GTP (1ATP)
-----------------------------
15 ATP x molcula de piruvato
X2 piruvatos por glucosa
-----------------------------
30 ATP x 2piruvato por glucosa
8ATP Gluclisis
-----------------------------
38 ATPs por la oxidacin total de una molcula de Glucosa

Electron reduced end
Aceptor product name of process organism
O2 H2O aerobic respiration Escherichia, Streptomyces

NO3 NO2, NH3
o N2 denitrification Bacillus, Pseudomonas

SO4 S or H2S sulfate reduction Desulfovibrio
RESPIRACIN ANEROBIA
Desnitrificacin
El uso de nitratos como aceptores de electrones en la cadena
respiratoria es normalmente una alternativa al uso de O
2

Si bacterias del suelo como Pseudomonas o Bacillus usan O
2
como aceptor de electrones dejan disponible los nitratos del
suelo y los cultivos pueden aprovecharlos.
Respiracin de nitrato
Desnitrificacin
ASIMILATORIA (hongos, plantas, bacterias):
NO
3
NO
2
NH
2
OH NH
3
R-NH
2

DESASIMILATORIA (bacterias y arqueas):
NO
3
NO
2
NO N
2
O N
2
NH
2
OH NH
3
R-NH
2

6 ATP

Respiracin de nitrato
Reduccin de sulfatos
No es alternativo al uso de O
2
es un proceso
obligado de condiciones anaerobias.

SO
4
APS SO3 H
2
S

8e- (8ATP)
Respiracin de Sulfatos
QUIMIOLITOAUTOTROFA
NITRIFICACIN
Oxidacin de amonaco y nitrito
NH4 NO2 NO2 NO3
(Nitrosomonas spp) (Nitrobacter spp)

Oxidacin completa: 8e- (8ATP)

Fermentacin del piruvato
La fermentacin del
piruvato por diferentes
micro-organismos produce
la aparicin de distintos
productos metablicos
finales.

El laboratorio utiliza estas
rutas y productos
metablicos finales para
diferenciar las distintas
bacterias.
Metabolismo lipdico
Lpidos en clulas bacterianas
cido miclico , bacterias
alcohol resistentes .
Carotenoides.
cidos grasos (energa).

Metabolismo de los aminocidos
Sntesis de toxinas
Aminocidos de
pptidoglicano.
Enzimas involucradas
en mecanismos de
resistencia.

Ejemplo de metabolismos especficos
30-03-2014 Microbiologa QF504
234
DIVISIN CELULAR
FISIN BINARIA
Requiere replicacin del
DNA
Replicacin bacteriana
Formacin de la horquilla de replicacin
DnaB es una helicasa, que se une a OriC
Helicasas
Helicasas constituyen una clase de
enzimas que se pueden mover a lo
largo de un DNA doble hebra, utiliza
la energa de la hidrlisis de ATP para
separar las hebras.

Son procesivas
FIGURE 12-8HELICASE ACTIVITY OF E. COLI DNAB PROTEIN

Molecular Cell Biology. 4th edition.
Lodish H, Berk A, Zipursky SL, et al.
New York: W. H. Freeman; 2000.
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK21650/figure/A3167/?report=objectonly
Estructura del Ori C
El origen de replicacin de E. coli se llama oriC y es de aproximadamente 245 bp
en longitud. Contiene tres copias de un motivo de repeticin 13-nucletido,
consenso secuencia 5-GATCTNTTNTTTT-3 ' donde n es cualquier nucletido y
cinco copias de un consenso de repeticin, de nueve-nucletido
Crecimiento de la horquilla de replicacin
DNA polimerasas
Enzima Subunidades 35 53 Funcin
DNA polimerasas Bacterianas
DNA polimerasa
I
1 si si Reparacin del ADN,
replicacin
DNA polimerasa
III
Al menos 10 Si No Principal enzima replicativa
Replicacin de E. coli
Topoisomerasas una solucin al superenrrollamiento
Tipo Sustrato Examples
Tipo IA DNA simple hebra Escherichia coli topoisomerasas I
and III; yeast and human
topoisomerase III; archaeal reverse
gyrase
Tipo IB DNA simple hebra Eukaryotic topoisomerase I
Tipo II DNA doble hebra E. coli topoisomerases II (DNA
gyrase) and IV; eukaryotic
topoisomerases II and IV
Revisar videos
http://www.youtube.com/watch?v=EYGrElVyHnU

http://www.youtube.com/watch?v=IkKZ_gxAOXI

Topoisomerasas
Tema 6: Estructura y replicacin del
material gentico
249
Origen de replicacin:
Secuencia reconocida (Ori C en E. coli) por
protenas iniciadoras. Varios orgenes en eucariotas
La replicacin es bidireccional

Replicacin del DNA
Horquilla
replicacin
Mecanismo de accin de quinolonas
- Comun para todas las quinolonas.
- Inhiben el enzima bacteriano: ADN-girasa-ATP-dependiente.
- Interfieren la sintesis del DNA: Muerte celular.
Cromosoma cromosoma
Trenzado superenrrollado
Elementos Genticos Transponibles
Definicin: Segmentos de
ADN capaces de mudarse de
una localizacin a otra.
Propiedades
Movimiento al azar
No poseen autorreplicacin
Transposicin mediante recombinacin
especfica
Transposasa
Transposones
Transposicin por un DNA intermediario (CLASE II)

PROCARIOTAS

Elementos IS (Is1, IS2, IS3, IS30, IS200)
Transposones compuestos (Tn5, Tn10)
Transposones de la famlia Tn3
Bacterifagos (Mu, lambda, P22)
Tipos de Elementos Transponibles
Secuencias de Insercin (IS)
Elementos que portan solo los genes de
transposicin
Denominacin - IS1
Estructura
Importancia
Mutaciones
Insercin de plsmidos
Variacin de fase
Transposasa ABCDEFG GFEDCBA
Tipos de Elementos Transponibles
Transposones (Tn)
Elementos que portan otros genes ademas
de los de transposicin
Denominacin - Tn10
Estructura
Tns complejos
Importancia
Resistencia Antibiticos

Cromosoma bacteriano y secuencias de
insercin

Fago Mu: Presenta ciclo ltico y lisognico. El profagose inserta dentro del genoma de
bacterias, pero no como una combinacin especfica sino que se integra al azar por un
mecanismo transposiconal. Cuando Muse reproduce lo hace por transposicin replicativa
en la que cada copia de Muse inserta en otra parte del cromosoma bacteriano. i
RECOMBINACION GENETICA
Es el proceso por el que los elementos
genticos contenidos en dos genomas
separados se juntan en una unidad.

Trae como consecuencia un cambio.

Se transfieren genes completos, grupos de
genes o cromosomas completos.
Formas de Recombinacin
Transformacin: el DNA libre se incorpora a
una clula.
Transduccin: La transferencia del DNA
donador esta mediada por un virus.
Conjugacin: la transferencia de DNA implica
contacto clula clula y la presencia de un
plasmido y de una estructura llamada pili.
TRANSFORMACION
Este descubrimiento fue uno de los hechos mas
relevantes, pues condujo a experimentos que
probaron que el DNA es el material gentico. Fred
Grifth (1920).
Trabajos con Streptococcus pneumoniae.

No todas las bacterias tienen esta capacidad,
sino clulas competentes que son capaces de
tomar una molcula de DNA y lo integran a su
cromosoma.

Intervienen: protenas especiales que
intervienen en el trasporte e incorporacin del
DNA.
Transformacion: Etapas
1. Unin del DNA: protena asociada a la
membrana: autolisina y nucleasas.
2. Incorporacion del DNA:
Primero se fija reversiblemente, luego se
vuelve irreversible.
3. Integracion del DNA: protena de unin, en el
cromosoma protena RecA
Cuando una clula es capaz de tomar una
molcula o un fragmento de DNA y
transformarse se denomina clula
competente.
Solo algunas cepas poseen esta caracterstica,
parece ser una propiedad hereditaria.
Experimento de Griffith
Neumococo vivo
capsulado. (S)
Ratn muerto
Se aslan cepas lisas
Neumococo muerto
por calor
Ratn vivo.
Neumococo vivo
rugoso (R) no
capsulado
Ratn vivo.
Neumococo (R)
vivo +
Neumococo muerto
Ratn muerto: se aslan
cepas S
TRANSDUCCION
El DNA se transfiere de una clula a otra por
medio de un virus: bacterifago.

Transduccion
Transduccin
Cuando un fago infecta a una bacteria, capta
fragmentos del genoma de la clula que lo
hospeda.
Al infectar a otra bacteria el fago transductor
puede transferir sus propios genes y tambin
los de la clula hospedadora de la cual
procede.
Transduccin
Puede ocurrir de 2 formas:
1. Transduccin generalizada:
Cualquier porcin del genoma bacteriano
pasa a formar parte del genoma de la
partcula vrica.

Transduccin
2. Transduccion especializada:
El DNA de una regin especifica del
cromosoma del hospedador se integra
directamente en el genoma del virus.

No todos los fagos pueden transducir, ni todas
las bacterias son transducibles.
Transduccin
El mecanismo de transduccin fue descubierto
por Zinder y Lederberg (1952).
Estudiando la recombinacin gentica entre
diferentes cepas de Salmonella typhimurium.
CONJUGACION
Implica el contacto clula clula.
El material gentico transferido puede ser un
plasmido, o una porcin del cromosoma.
Una clula donadora trasmite la informacin
gentica a otra clula, la receptora.
La clula donadora posee el pili o pelo sexual.
conjugacin
La capacidad de la clulas para actuar como
donantes se debe a la presencia de factor f o
factor de fertilidad.
Las clulas que carecen de factor f, son
receptoras.
REGULACIN DE LA TRANSCRIPCIN
REGULACIN DE LA EXPRESIN GNICA EN
PROCARIONTES
Francois Jacob
Elementos Opern
Lactosa
Jacques Monod
Regulacin fago SP01
SEALES
AMBIENTALES
genes
En bacterias: Presencia o ausencia de nutrientes, temperatura, oxgeno, pH, etc.
En organimos multicelulares: Factores de crecimiento y hormonas, nutrientes,
entre otros factores. La expresin de genes depende de tipo de clula y de la
etapa de diferenciacin de las clulas
TIPOS DE GENES
EXPRESIN A UN NIVEL
CONSTANTE
CONSTITUTIVOS
GENES INACTIVOS QUE SE
ACTIVAN BAJO CIERTAS
CONDICIONES
INDUCIBLES
GENES ACTIVOS, PERO SE
SILENCIAN BAJO CIERTAS
CONDICIONES
REPRESIBLES
Regulacin de la
expresin de
genes ocurre
principalmente
en la etapa de la
transcripcin
Estructura de un promotor en procariontes
Sitio de inicio de la transcripcin
+1 +20 -7 -12 -31 -36
5
mRNA
TTGACA
AACTGT
regin -35
TATAAT
ATATTA
regin -10
RNA polimerasa
Protenas reguladoras de la transcripcin
Activadores: Ayudan a la RNA polimerasa a unirse
con mayor fuerza al PROMOTOR
Aumento de la velocidad de
sntesis de mRNA

Represores: Impiden la transcripcin por la RNA
polimerasa
disminucin de la velocidad
de sntesis de mRNA
Transcripcin
Basal
DNA
RNA
Promotor
RNA pol
ACTIVACIN DE LA TRANSCRIPCIN
Transcripcin
activada
DNA
RNA
Promotor
RNA pol
ACTIVADOR
GEN
GEN
A
B
Transcripcin
DNA
RNA
Promotor
RNA pol
NO Transcripcin
DNA
Promotor
RNA pol
operador
represor
REPRESIN DE LA TRANSCRIPCIN
El opern lactosa en bacterias
Contiene los genes de las
enzimas que permiten
hidrolizar el disacrido
lactosa
b galactosidasa
La sntesis de b-galactosidasa es inducible
C
o
n
c
e
n
t
r
a
c
i
n

d
e

B
e
t
a

g
a
l
a
c
t
o
d
a
s
i
d
a
s
a

Tiempo (minutos)
Descripcin del opern lactosa
b-galactosidasa permeasa acetilasa
La funcin del opern lactosa (lac) es producir las enzimas requeridas para
metabolizar lactosa y obtener energa cuando sta es requerida por la clula
lacI
En ausencia de lactosa
15 de Enero 2008
En presencia de lactosa
Tiempo (min)
Glucosa tambin regula la
transcripcin de los genes
del metabolismo de
lactosa
Qu sucede cuando las
bacterias estn en presencia
de glucosa y lactosa?
Resumen de la regulacin del opern
lactosa
Glucosa cAMP Lactosa Transcripcin del opern lac
Alta Bajo Ausente No transcripcin
Alta Bajo Presente Baja transcripcin
Baja Alto Ausente No transcripcin
Baja Alto Presente Alta transcripcin
Opern triptofano
Enzimas de la biosntesis del aminocido
triptofano
S1 S2 S3 S4 S5 TRIPTOFANO
A B C D E
Regulacin de la transcripcin del opern triptofano
Bacterias en
medio sin
triptofano
Bacterias en
medio con
triptofano
No transcripcin
Molculas que inhiben la transcripcin
BACTERIAS GRAM POSITIVAS
FORMA FAMILIA /GRUPO GNERO
Cocos Micrococcaceae Staphylococcus
Micrococcus
Planococcus
Stomacoccus
Streptococcaceae Streptococcus
Enterococcus
Miscelnea Aerococcus
Gemella
Lactococcus
Leuconostoc
Pediococcus
Peptostreptococcus
Sarcina
Coprococcus

BACTERIAS GRAM POSITIVAS
Bacilos Esporulados Bacillus
Clostridium
Lactobacillaceae Lactobacillus
Actinonomycetaceae Actinomyces
Bifidobacterium
Nocardiaceae Nocardia
Rhodococcus
Mycobacteriaceae Mycobacterium
Miscelnea Propionibacterium
Eubacterium
Corynebacterium
Arcanobacteria
Listeria
Erysipelothrix
Gardnerella
BACTERIAS GRAM NEGATIVAS
Cocos Neisseriaceae
Neisseria
Moraxellaceae
Moraxella
Branhamella
Actinobacter
Anaerobios
Veillonella
Acinominococcus
Megasphaera
Bacilos Enterobacteriaceae
Escherichia
Edwardsiella
Citrobacter
Salmonella
Shigella
Klebsiella
Enterobacter
Serratia
Proteus
Providencia
Morganella
Yersinia
Bacilos Vibrionaceae Vibrio
Aeromonas
Plesiomonas
Spirillaceae Campylobacter
Helicobacter
Actinonomycetaceae Actinomyces
Bifidobacterium
Pseudomonadaceae Pseudomonas
Xanthomonas
Pasteurellaceae Pasteurella
Haemophilus
Actinobacillus
Legionellaceae Legionella
Tatlockia
Fluoribacter
Bacilos Miscelnea Brucella
Bordatella
Francisella
Cardiobacterium
Kingella
Eikenella
Flavobactereium
Calymmatobacterium
Streptobacillus
Spirillumm
Apifia
Bartonella
Bacteroidaceae Bacteroides
Prevotella
Porphyromonas
Fusobacterium
Bilophora
Leptotrichia
Wolinella

Clase 1 Introduccion

Caricato da

Informazioni sul documento

Copyright

Formati disponibili

Condividi questo documento

Condividi o incorpora il documento

Opzioni di condivisione

Hai trovato utile questo documento?

Questo contenuto è inappropriato?

Copyright:

Formati disponibili

Clase 1 Introduccion

Caricato da

Copyright:

Formati disponibili

Introduccin

Potrebbero piacerti anche