CROMATOGRAFIA

1.- Introduccin
La cromatografa es un mtodo fsico o de
separacin para la caracterizacin
de mezclas complejas, la cual tiene aplicacin
en todas las ramas de la ciencia y la fsica. Es
un conjunto de tcnicas basadas en el principio
de retencin selectiva, cuyo objetivo es separar
los distintos componentes de una mezcla,
permitiendo identificar y determinar las
cantidades de dichos componentes.
Las tcnicas cromatografas son muy variadas,
pero en todas ellas hay una fase mvil que
consiste en un fluido (gas, lquido o fluido
supercrtico) que arrastra a la muestra a travs
de una fase estacionaria que se trata de un
slido o un lquido fijado en un slido. Los
componentes de la mezcla interaccionan en
distinta forma con la fase estacionaria. De este
modo, los componentes atraviesan la fase
estacionaria a distintas velocidades y se van
separando. Despus de que los componentes
hayan pasado por la fase estacionaria,
separndose, pasan por un detector que genera
una seal que puede depender de
la concentracin y del tipo de compuesto.
Diferencias sutiles en el coeficiente de particin de los compuestos da como
resultado una retencin diferencial sobre la fase estacionaria y por tanto una
separacin efectiva en funcin de los tiempos de retencin de cada componente
de la mezcla.

La cromatografa puede cumplir dos funciones bsicas que no se excluyen
mutuamente:
Separar los componentes de la mezcla, para obtenerlos ms puros y que
puedan ser usados posteriormente (etapa final de muchas sntesis).
Medir la proporcin de los componentes de la mezcla (finalidad analtica). En
este caso, las cantidades de material empleadas son pequeas.

4.2 Historia
La etimologa de la palabra cromatografa es curiosa. Por las palabras griegas que
la forman significara: escritura en colores.
El botnico ruso Mikhail S. Tsvet formaliz el uso de la cromatografa en los
estudios cientficos -por el ao 1910-, dio ese nombre a la tcnica y la aplic a la
separacin de los pigmentos naturales que se encuentran en las plantas
(conocidos como carotinoides y clorofilas).
Tsvet empac material adsorbente en una columna de vidrio vertical (de unos
cuantos centmetros de dimetro). Posteriormente, por dicha columna vertical
verti una disolucin que contena la mezcla de pigmentos provenientes de las
hojas molidas de una planta. Pasados unos minutos, el material empacado en la
columna haba adquirido una coloracin diferente por segmentos. Es decir, se
haba logrado la separacin de los pigmentos naturales de la planta.
En cada segmento de color definido haba un pigmento diferente
.
La cromatografa es un mtodo fsico de separacin en el que los componentes a
separar se distribuyen entre dos fases, una de las cuales est en reposo (fase
estacionaria o lecho estacionario) mientras que la otra (fase mvil) se mueve en
una direccin definida.
El proceso cromatogrfico se da como resultado de la mayor o menor capacidad
para ser retenidos los diferentes componentes de una muestra por la fase
estacionaria, es decir, se basa en los repetidos procesos de interaccin durante el
movimiento de los componentes de una mezcla arrastrados por la fase mvil a lo
largo de la fase estacionaria (elucin), producindose la separacin debido a las
diferencias en las constantes de distribucin de los componentes de la mezcla
entre la fase estacionaria y la mvil.
Fundamento de la cromatografa
La cromatografa es la tcnica que separa una mezcla de solutos basada en la
velocidad de desplazamiento diferencial de los mismos que se establece al ser
arrastrados por una fase mvil (liquida o gaseosa) a travs de un lecho
cromatogrfico que contiene la fase estacionaria, la cual puede ser slida o
lquida.

Para explicar el fenmeno cromatogrficoes necesario establecer dos tipos de
fundamento, uno remoto y otro prximo.

Fundamento remoto:Este fundamento se encuentra en alguna o algunas
propiedades fsicas o fsico qumicas de los analitos: solubilidad, adsorcin
(tendencia a ser retenidos en slidos finamente divididos), volatilidad, tamao,
carga, reactividad qumica o bioqumica, etc. La mezcla de sustancias a separar
se coloca en una situacin experimental dinmica donde exhiben dos de estas
propiedades, o bien una de ellas pero por duplicado tal como la solubilidad en dos
lquidos diferentes como ocurre en cromatografa liquido - liquido. Deben cumplirse
las condiciones siguientes:

Los componentes de los sistemas empleados deben estar en intimo
contacto entre si.

El equilibrio establecido entre esos componentes debe ser lo mas completo
posible.

Fundamento prximo:Se encuentra en el hecho de que es muy improbable que
dos especies presenten cuantitativamente el mismo par de propiedades fsicas o
fsico - qumicas frente a un sistema cromatogrfico dado. Por tanto, en estas
diferencias, que pueden ser muy pequeas, se basa la separacin cromatogrfica.




Cromatografa
La cromatografa es una tcnica de separacin extraordinariamente verstil que
presenta distintas variantes. En toda separacin cromatogrfica hay dos fases
(slida, lquida o gas) una mvil y otra estacionaria, que se mueven una con
respecto de la otra manteniendo un contacto ntimo. La muestra se introduce en la
fase mvil y los componentes de la muestra se distribuyen entre la fase
estacionaria y la mvil. Los componentes de la mezcla a separar invierten un
tiempo diferente en recorrer cada una de las fases, con lo que se produce la
separacin. Si un componente est la mayor parte del tiempo en la fase mvil el
producto se mueve rpidamente, mientras que si se encuentra la mayor parte en
la fase estacionaria, el producto queda retenido y su salida es mucho ms lenta.
Tipo fase estacionaria fase mvil
lquido-slido
slido inerte como gel
de slice o almina

disolventes
intercambio
inico

resina cambiadora

soluciones
acuosas
lquido-
lquido

lquido adsorbido en
un soporte slido

lquido
gas-lquido
pelcula de lquido
adsorbida sobre un
soporte slido

Gas
La ms utilizada en qumica orgnica es cromatografa lquido-slido en sus dos
variantes: cromatografa en columna (CC) y cromatografa de capa fina (TLC)



2.-Aplicaciones
El campo de la cromatografa, de gases, liquida, de alta presin, es muy amplia,
donde haya productos orgnicos, all tiene aplicacin la cromatografa, pero como
los cromatgrafo, no son baratos, casi siempre se limitan a empresas muy
grandes, transnacionales, o que tengan una cantidad de produccin enorme por
da.

Algunos ejemplos de aplicacin:

Determinacindel porcentaje de formacin de la molcula de sntesis,
en una planta de sntesisorgnica.
Determinacinde porcentaje de solvente en un producto agroqumico
terminado.
Determinacinde concentracin de producto activo, en un producto
agroqumico terminado.
Control de calidad de pureza de solventes, como alcohol etlico anhidro,
tolueno, xileno, benceno, que entran como materias primas a una planta.
Determinacindel contenido de principio activo de un antitxico en una
planta de medicamentos.
Determinacinde concentracin de alcohol benclico, en un producto
inyectado en una fabrica de medicamentos.
Separaciones de componentes de plantas medicinales

Separacipon de componentes de una sntesis orgnica

Separacin de colorantes

Separacin e identificacin de hioscina y morfina

En la produccin sintetica de acetamofen

Identificacin durante la biosntesis de la penicilina
Aplicaciones
Control de calidad de la pureza de materias primas entrantes a bodega
de una fabrica de productos medicinales, tales como: alcohol etlico al
95%, propilenglicol, glicerina, alcohol isopropilico, o-toluidina, paracetamol,
butanol, octanol, benzaldehdo, acetato de etilo, terdi etlico, alcanfor, y
muchos otros.

Control de calidad de producto terminado en una fabrica de cosmticos,
como por ejemplo, porcentaje de alcohol en una laca para el cabello,
acetona en un esmalte de uas, colorantes en casi todos los productos
elaborados, porcentaje de control, en las esencias que se utilizan para la
confeccin de perfumes, all es muy importante, realizar esta prueba.

En fbricas de adhesivos, pegamentos, pinturas, para controlar que el
producto terminado lleve las cantidades indicadas de solventes,
humectantes, colorantes, gomas, resinas, poliuretanos, secantes,
rellenantes, esponjantes, suspensores, emulsificantes.

En fabricas de alimentos, para control de calidad de producto
terminado y materias primas, tales como:
protenas, sabores, sustancias que dan el olor, o sea aromatizantes, pues
algunos son sintticos, como el olor a pollo, y solo este tiene variantes,
como pollo con barbacoa, pollo frito, pollo asado, determinacin de
colorantes.

En la industria petrolera, es un mtodo indispensable, para analizar las
composiciones de casi todos los productos que van saliendo, del cracking,
los tipos de gasolinas, los compuestos orgnicos destinados a sntesis.


En el control de la produccinvincola, tiene infinidad de usos, desde
usarse como una nariz electrnica, para caracterizacin de vinos, de
acuerdo a parmetros previamente establecidos por expertos,
concentracin de componentes, anlisis de aminas, como etanol amina,
etilamina, agatina, triptamina. Determinacin de ocratoxina-A.

3.- Tipos de cromatografa
Los mtodos cromatogrficos se pueden clasificar segn la situacin de la fase
estacionaria en:

Cromatografa en columna

Cromatografa plana.

Ventajas de la cromatografa
Es sencilla, rpida y no
requiere aparatos
complicados
Abarca escalas
microanalticas hasta
escalas industriales
Es una tcnica poco o
nada destructiva que
puede aplicarse a
sustancias lbiles



O bien segn la Fase mvil en:


Cromatografa slida

Cromatografa lquida

Cromatografa de gases

Cromatografa de Fluidos Supercrticos.

Cromatografa plana
Cromatografa en
papel
Cromatografa en
capa fina
Cromatografa en
columna
Cromatografa de
lquidos
Cromatografa de
gases

Cromatografa de
fluidos supercrticos



Breve descripcin de cada una de las cromatografas:

4.11.1 CROMATOGRAFIA SLIDA
Cromatografa de absorcin
Se realiza generalmente en columna (tambin es posible en capa fina), que se
rellena de un adsorbente adecuado. El sistema es baado por un solvente que
fluye a travs de la columna para comprobar el funcionamiento de la misma. Por la
parte superior se introduce la sustancia a separar disuelta adecuadamente. Se
deja fluir por la columna. Antes de que sta quede totalmente seca se incorporan
los disolventes de acuerdo con la solubilidad de las sustancias, sufriendo durante
su arrastre interacciones de polaridad con el slido adsorbente. Los eluatos son
recogidos para su determinacin posterior, normalmente por un mtodo
espectroscpico (espectrofotometra, espectrofluorimetra). Las separaciones se
basan en las diferencias de distribucin de los solutos entre el adsorbente (fase
estacionaria) y el disolvente (fase mvil) de acuerdo con sus respectivas isotermas
de adsorcin.
Los adsorbentes ms utilizados, ordenados de mayor a menor actividad son:
Almina
Cromatografia
slida
Cromatografia de absorcin
Croma de intercambio ionico
Croma de afinidad
Cromatografia de exclusin (o de geles)
Cromatografia
de lquidos
Cromatografa liquido-liquido (CLL)
Cromatografa liquido-slido (CLS)
Cromatografia
de gases
Cromatografa gas-liquido (CGL)
Cromatografa gas-slido (CGS
Cromatografia
de fluidos
supercriticos
Cromatografa de particin
Cromatografia de adsorcin
Slice
Carbonato clcico
Este tipo de cromatografa se utiliza en el laboratorio clnico para la separacin de
17-cetoteroides, 17-hidroxicorticoides, catecolaminas y otras sustancias urinarias.
Fuerzas de Van der Waals
Las fuerzas de atraccin o repulsin entre entidades moleculares (o entre grupos
dentro de la misma entidad molecular) diferentes de aquellas que son debidas a la
formacin de enlace o la interaccin electroesttica de iones o grupos inicos unos
con otros o con molculas neutras.

Cromatografa de intercambio inico
Esta cromatografa est basada en las interacciones electrostticas que se
producen entre los grupos ionizables de los productos a separar y los grupos
cargados unidos a un soporte inerte (fase estacionaria). Existen dos clases
principales de soportes (cambiadores), segn el tipo de grupos enlazados que
posea:

Catinicos: con grupos cargados negativamente y que intercambian iones del
medio con carga positiva.
Aninicos: con grupos positivos y que intercambian iones negativos.
Los grupos cargados de la matriz insoluble determinan el tipo y la fuerza del
cambiador. La fase cargada inmvil est inicialmente neutralizada por cationes o
aniones (contra iones), dependiendo de su naturaleza. Cuando la mezcla inica a
separar se pone en contracto con la fase inmvil, en condiciones oportunas de
fuerza inica y pH, se produce el intercambio inico formndose sales y
asociaciones inicas entre la fase estacionaria y la mvil:
Los grupos fenlico, carboxilo y sulfnico se utilizan como cambiadores
catinicos.
Los grupos amino, aliftico y aromtico, se utilizan como cambiadores
Aninicos.
Este tipo de cromatografa se usa para la separacin de aminocidos, pptidos,
protenas, nucletidos y, en general, para los compuestos que tengan naturaleza
inica. En clnica, se utilizan para la separacin de hemoglobinas, isoenzimas,
esteroides, etc.


Cromatografa de exclusin o de geles
La fase inmvil es un gel, polmero anhidro muy hidrfilo, que al sumergirlo en la
fase mvil (agua o cualquier solucin electroltica) se hincha formndose una
matriz de poros semiuniformes que actan como un tamiz molecular, til para
separar macromolculas (ejemplo protenas). Las sustancias que se van a separar
se aplican sobre el lecho de gel, previamente dispuesto como relleno de una
columna, y posteriormente se eluyen con un disolvente apropiado. En la elucin, al
pasar la muestra a travs del gel, las molculas mayores que el dimetro mximo
de los poros de ste, pasan por los espacios que dejan entre s las partculas del
gel, siendo eluidas en primer lugar. Por el contrario, cuanto menores sean las
molculas, ms se incluirn dentro de las partculas del gel y retrasarn su salida.


La elucin, por tanto, se produce en orden decreciente al tamao de las
molculas.
Esta tcnica permite, usando patrones adecuados, calcular los pesos moleculares
de las sustancias que se separan.








Cromatografa de afinidad

Se basa en la fijacin por enlace covalente de un ligando sobre un soporte inerte,
bien de manera directa o a travs de un brazo espaciador. El ligando debe
interaccionar especficamente con la sustancia que se desea separar, con lo que
la mezcla sobrante puede eliminarse.
Son frecuentes en este tipo de cromatografa interacciones especficas como las
existentes entre un antgeno y su anticuerpo, entre una hormona y su receptor,
entre una enzima y su sustrato, etc.

4.11.2 CROMATOGRAFA DE LQUIDOS
La Cromatografa lquida, tambin conocida como Cromatografa de lquidos,
es una tcnica de separacin y no debe confundirse con una tcnica cuantitativa o
cualitativa de anlisis. Es una de las tcnicas analticas ampliamente utilizadas, la
cual permite separar fsicamente los distintos componentes de una solucin por la
absorcin selectiva de los constituyentes de una mezcla.
En toda cromatografa existe un contacto entre dos fases, una fija que suele
llamarse fase estacionaria, y una mvil (fase mvil) que fluye permanente durante
el anlisis, y que en este caso es un lquido o mezcla de varios lquidos. La fase
estacionaria por su parte puede ser almina, slice o resinas de intercambio
inico que se encuentran disponibles en el mercado.
Los intercambiadores inicos son matrices slidas que contienen sitios activos
(tambin llamados grupos ionognicos) con carga electrosttica (positiva o
negativa). De esta forma, la muestra queda retenida sobre el soporte slido por
afinidad electrosttica. Dependiendo de la relacin carga/tamao unos
constituyentes de la mezcla sern retenidos con mayor fuerza sobre el soporte
slido que otros, lo que provocar su separacin.

Las sustancias que permanecen ms tiempo libre en la fase mvil, avanzan ms
rpidamente con el fluir de la misma y las que quedan ms unidas a la fase
estacionaria o retenidas avanzan menos y por tanto tardarn ms en salir o fluir.
ste es el principio fundamental de la cromatografa. Un ejemplo notable es la
cromatografa de intercambio inico. Las columnas ms utilizadas son las de
slice.

Cromatografa liquido-liquido (CLL): En la que ambas fases son liquidas y, por
tanto, se trata de una cromatografa de particin.

Cromatografa liquido-slido (CLS): En la que la fase estacionaria es slida
(adsorcin, cambio inica, exclusin, afinidad).



4.11.3 CROMATOGRAFA DE FLUIDOS SUPERCRTICOS
La cromatografa de fluidos supercrticos (SFC) es una tcnica hbrida entre
la cromatografa de gases (GC) y la HPLC, que combina lo mejor de ambas
tcnicas. Esta tcnica es importante porque permite la separacin de mezclas en
las que no es adecuada la aplicacin de la GC ni de la HPLC. En concreto, se
aplica a compuestos no voltiles o trmicamente inestables que no pueden ser
separados mediante GC, o aquellos que contienen grupos funcionales que
imposibilitan su deteccin en HPLC.

La SFC se aplica a una gran
variedad de compuestos,
entre los que podemos citar
drogas, alimentos,
herbicidas, tensioactivos,
polmeros y aditivos para
stos, impelentes,
explosivos o combustibles
fsiles.

Como fases estacionarias
se pueden emplear, al igual
que en la GC, las columnas
capilares o de relleno,
prefirindose las primeras.
Las dimensiones son parecidas en longitud, de 10 a 20 m, y el dimetro interno es
bastante menor, de 0,05 a 0,10 mm. La pelcula interna es de siloxanoentrelazado
y polimerizado. Si se emplean columnas de relleno, su dimetro interno vara entre
0,5 y 4,6 mm, y el grosor de la partcula de relleno es de 3 a 10 m. En este caso,
el recubrimiento es parecido al empleando en HPLC de reparto.

NOTA:
1 CO
2

2 Bomba
3 Sistema de inyeccin
4 Horno
5 Columna
6 Detector
7 Cromatograma

La fase mvil estrella en la SFC es el dixido de carbono, por sus excelentes
propiedades:
Apolar, disuelve una gran variedad de molculas orgnicas.
Transparente a la radiacin ultravioleta
Inodoro
No txico
Fcil de obtener
Barato
No inflamable
El CO
2
tiene la ventaja de que se puede obtener fcilmente como fluido
supercrtico. Su temperatura crtica es de 31C y la presin crtica de 72,9 atm,
condiciones realmente asequibles y por debajo del rango de condiciones usuales
en la HPLC.
Otras fases mviles tambin probadas y empleadas son
el etano, pentano, dietilter, amonaco, tetrahidrofurano, diclorofluorometano y
xido nitroso.

Cromatografa de adsorcin: Las propiedades responsables de la separacin
son las fuerzas de adsorcin. Si una mezcla de sustancias disuelta en una fase se
pone en contacto con otra fase, las sustancias se concentrarn ms o menos en la
superficie de la otra fase; esto se llama adsorcin.
El slido adsorbe al componente que inicialmente estaba en fase mvil (liquida o
gaseosa).

Cromatografa de particin: La separacin se basa en la distinta solubilidad de
las sustancias en dos fases diferentes. Esta diferencia de solubilidad se expresa
mediante coeficientes de reparto.

CROMATOGRAFIA EN PAPEL
La cromatografa en papel es la tcnica de separacin e identificacin de
sustancias qumicas mediante un disolvente que se mueve sobre hojas o tiras de
papel de filtro.
Se toma una pieza de papel de filtro y cerca de uno de sus extremos se deposita
una gota de la solucin que contiene la mezcla de las sustancias que se quieren
separar. Se deja secar la gota y quedara la mancha de las sustancias mezcladas.
El extremo del papel ms prximo a la mancha se introduce en un disolvente
apropiado, pero sin que la mancha llegue a introducirse en l.


Existen muchos tipos de cromatografa sobre papel, una primera divisin de
las variadas clases podra ser:
1.- Cromatografa ascendente: el disolvente se encuentra en el fondo del
recipiente que sostiene al papel y va subiendo a travs de el por capilaridad.
2.- Cromatografa descendente: el disolvente esta en un recipiente del que
cuelga el papel, fluye por l hacia abajo por una combinacin de capilaridad y
gravedad.
En ambos casos el disolvente avanza a lo largo del papel pasando por encima de
la mancha, al avanzar disuelve y arrastra las sustancias de la mancha, cada una
de ellas se mueve, por lo general a distinta velocidad que las otras.
Se deja actuar el disolvente un tiempo determinado, se seca el papel y se
observan las sustancias separadas si tienen color, o en caso de no tener color se
procede al revelado por una reaccin qumica apropiada.
Esta tcnica se conoce como cromatografa monodimencional y el papel resultante
recibe el nombre de cromatograma monodimencional.

CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA
Introduccin
La cromatografa se define como la separacin de una mezcla de dos o ms
compuestos por distribucin entre dos fases una de las cuales es estacionaria y la
otra una fase mvil
Los mtodos de cromatografa en plano incluyen la cromatografa en capa fina
(TLC), la cromatografa en papel (PC), y la electrocromatografia (EC).
La cromatografa en plano se centra en la tcnica de la capa fina, que es ms
rpida, tiene mejor resolucin, y es ms sensible que su alternativa en papel.

Fundamentos
La separacin de mezclas de molculas mediante la cromatografa de capa fina se
basa en el principio del reparto entre dos fases.
En la cromatografa de capa fina, la fase estacionaria es una delgada capa de un
soporte solido granulado.
La fase mvil es inmiscible con la fase estacionaria se hace fluir a travs de esta
para eluir a las molculas en la muestra.se utiliza una placa recubierta con la fase
estacionaria manteniendo un pequeo espesor constante a lo largo de la placa. El
eluyente ascender, por capilaridad, por la placa y arrastrara los componentes a lo
largo de esta produciendo manchas de los componentes.
La tcnica se basa en la separacin de las sustancias que componen una muestra
cuando migran sobre una capa de adsorbente depositado sobre una capa
cromatografica al ser arrastrados por un eluyente. El eluyente se encarga de
disolver y desplazar a las sustancias sobre el adsorbente.

Aplicaciones
Sirve de gua para el desarrollo de las condiciones optimas para realizar la
cromatografa de lquidos en columna.
Industria Farmacutica
Laboratorios Clnicos
Laboratorios Industriales
Identificacin de drogas, extracto de plantas y preparaciones bioqumicas
Sirve para poner en evidencia algn contaminante o adulterante.
Se utiliza para medir el nivel de azcar o glucosa en las persona diabticas.

Ventajas
El equipo utilizado en este tipo de cromatografa es ms simple comparado
con las dems.
Esta cromatografa se realiza en menor tiempo.
Es adecuada para fines analticos

Desarrollo de la cromatografa
El desarrollo de los cromatogramas en capa fina se realiza normalmente por el
mtodo ascendente al permitir que un eluyente ascienda por una placa casi en
vertical, por la accin de la capilaridad.
El tiempo de desarrollo, por lo general, no llega a los 30 minutos. El tiempo de una
cromatografa cualitativa suele ser de un par de minutos, mientras que el tiempo
de una cromatografa preparativa puede llegar a un par de horas.
La mejor posicin de desarrollo para un componente es el punto medio entre el
origen y el frente del eluyente, ya que permite separar las impurezas que se
desplazan con mayor y menor velocidad. El frente del eluyente nunca debe llegar
a tocar el borde de la placa.

Preparacin de la placa.
El adsorbente se deshace en agua destilada. Para mezclar la papilla
homogneamente es preferible agitar de modo mecnico. La porcin de
adsorbente y de agua depende del tipo de adsorbente. Dos partes de aguan y una
de adsorbente pueden tomarse como norma general, no obstante, habr de
consultarse las instrucciones del fabricante.
En general para realizar una separacin preparativa de un gramo de muestra es
necesario una placa de vidrio de 20 x 20cm., 35 gramos de adsorbente y 80ml de
agua destilada.
Las propiedades de la fase estacionaria pueden alterarse mediante la adicin de
compuestos tales como disoluciones tamponadoras para mantener para mantener
el pH deseado. En la preparacin de las placas tambin se pueden adicionar
indicadores fluorescentes o aglomerantes.
La placa debe quedar libre de grumos y rugosidades. Para ello existen en el
mercado extensores que se utilizan para crear de forma mecnica placas
homogneas del espesor deseado. Si no se dispone de extensor, el proceso a
seguir es el siguiente:
1) Mezclar en un matraz elermeyer el agua y el adsorbente.
2) Agitar energticamente.
3) Extender la papilla sobre el soporte de vidrio
4) Hacer oscilar la papilla de un lado a otro.
5) Golpear con el dedo la parte inferior del soporte.
Se dejan reposar un corto espacio de tiempo despus de cubrirlas; luego se
colocan en bandejas metlicas. Puede activarse el agente adsorbente, dejando las
placas reposar toda la noche a temperatura ambiente, bien calentndolas durante
30- 60 minutos a 105- 110C (las placas de celulosa no deben calentarse ms de
10 minutos a 105C) para expulsar as el aire.

Localizacin de sustancias
Los diversos compuestos se localizan directamente si son coloreados, o con la
ayuda de un indicador o luz ultravioleta, si son incoloros, los compuestos que
avanzan a lo largo de la placa se ven atrados por fuerzas electrostticas sobre la
superficie del adsorbente, interaccionando el disolvente con ambos.
Si los compuestos separados no son coloreados es necesario revelar la posicin
de dichos compuestos, para ello existen dos tipos de mtodos:
Mtodos qumicos
Mtodos fsicos

Mtodos qumicos
Consiste en realizar una reaccin qumica entre un reactivo y los componentes
separados.
Generalmente se utiliza como reactivo revelador yodo, el cual forma complejos
coloreados con los componentes orgnicos (con tonos amarillo- marrn), pero las
manchas desaparecen con el tiempo con lo que es conveniente sealar las
manchas aparecidas.
Otro reactivo revelador bastante utilizado es el acido sulfrico, que reacciona con
los componentes orgnicos produciendo manchas negras. El tamao de las
manchas no est relacionado con la cantidad de componente separado.

Mtodos Fsicos
El ms comn consiste en aadir al adsorbente un indicador fluorescente. De tal
forma que al colocar la placa bajo una lmpara ultravioleta, y dependiendo del
indicador y de la longitud de onda, aparecen manchas fluorescentes en las zonas
en las que hay componentes, o en otros casos aparece toda la placa fluorescente
excepto donde hay componentes.
Algunos compuestos poseen cierta fluorescencia (aunque no es normal) con lo
que pueden ser detectados directamente en una lmpara de ultravioleta.

Reveladores ms comunes
Las manchas de color son, por supuesto, inmediatamente visibles; las incoloras
pueden revelarse mediante:
Luz UV: si la sustancia absorbe luz ultravioleta, se puede usar una fase
estacionaria impregnada con un indicador fluorescente, (F254 o F366), el
nmero que aparece como subndice nos da la longitud de onda de
excitacin del indicador utilizado.
La introduccin de la placa en vapores de yodo.
El roco con una solucin de agua/H2SO4 1:1 (dentro de un compartimiento
especialmente protegido y bajo una campana de extraccin de gases).
Despus calentar intensamente, por ejemplo, con un mechero hasta
carbonizar los compuestos.
El acido sulfrico: en este caso la placa se calienta y los componentes de
la muestra se carbonizan dejando manchas caf oscuro. La placa se
colocara en la estufa de 500 a 600C durante 10 minutos.
Adsorbentes ms comunes
Silica Gel
Oxido de aluminio(alumina)
Celulosa
Poliamidas
Almidn
Azucares
Carbn en polvo
Kieselguhr
Para la seleccin del adsorbente se deben tomar en cuenta las siguientes
consideraciones:
Polaridad
Tamao de la partcula
Dimetro
rea superficial
Homogeneidad
Pureza

Eluyentes ms comunes
Eter de petrleo
Tolueno
Dietil-eter, t-butil-eter
Diclorometano
Acetato de etilo
Ciclohexano
Tetracloruro de carbono
Eter dietlico
Cloroformo
Acetona
Iso-propanol
Metanol
Acido actico
Benceno
Tetracloruro de carbono
piridina
alcohol etlico (Etanol)
agua


Eleccin del eluyente
La eleccin del eluyente depende del componente que se va a separar y del
material en que la separacin se lleva a cabo. En la eleccin del eluyente influyen
varios factores:

precio
pureza
reproducibilidad
no utilizar compuestos muy voltiles
no catalizadores
La eleccin del eluyente se realiza de forma emprica. Hay que estudiar la
polaridad del componente y probar con eluyentes cada vez menos polares.


a) Toque de la muestra sin aplicar ningn
eluyente.
b) Aplicando un eluyente poco polar.
c) Aplicando un eluyente ms polar.

Al aplicar en primer lugar eluyentes poco polares, podemos seguir utilizando la
misma placa para aplicar otros eluyentes ms polares, hasta dar con el ms
apropiado.
Otra tcnica para realizar la eleccin del eluyente consiste en sembrar varias
muestras distanciadas suficientemente, y aplicar con un tubo capilar distintos
eluyentes sobre el centro de cada muestra. Esto permite desarrollar cada eluyente
radialmente por capilaridad, de forma que se aprecie el eluyente con el cual la
separacin se realiza de una manera ms eficaz.
Influencia de la polaridad
Cuanto mayor es la polaridad de los compuestos, mas intensamente se ven estos
atrados por el adsorbente.
La polaridad del disolvente influye en la velocidad de ascensin del soluto a lo
largo de la capa del adsorbente. A mayor polaridad del disolvente, mayor grado de
ascensin del soluto por la placa, pudindose establecer un orden orientativo de
polaridad creciente de los disolventes:
eter de petroleo
tetracloruro de carbono
ciclihexano
eter dietlico
acetona
benceno
acetato de etilo

Hay compuestos poco polare, suficientemente polares y demasiado polares:
Poco polares: en este caso el eluyente casi no desplaza las sustancias
desde el punto de aplicacin.
Suficientemente polar: En este caso el eluyente tiene la polaridad suficiente
para desplazar las sustancias sobre el adsorbente y es adecuado para
realizar la cromatografa en capa fina.
Demasiado polar: desplaza las sustancias por el frente del eluyente y
provoca que el eluyente se desplace con mas rapidez y se salga del lecho
cromatografico.

Factores que influyen en una separacin
Temperatura: a menor temperatura las sustancias se adsorben ms en la
fase estacionaria.
La cromatografa debe llevarse a cabo en un rea sin corrientes de aire.
Limpieza de las placas. Muchas placas estn contaminadas con grasa o
agentes plastificantes o adhesivos. Para el trabajo a pequea escala, stas
deben limpiarse corriendo primero una mezcla de cloroformo y metanol y
despus dejar secar completamente antes de aplicar la muestra
Pureza de los disolventes.

Registro RF
El valor de Rf depende de las condiciones en las cuales se corre la muestra (tipo
de adsorbente, eluyente, as como las condiciones de la placa, temperatura, vapor
de saturacin, etc.)
Se define como la distancia recorrida por la muestra desde el punto de aplicacin
entre la distancia que recorre el disolvente hasta el frente del eluyente.







4.- Conceptos bsicos
Fase estacionaria
Es una de las dos fases que forman un sistema cromatogrfico. Puede ser un
slido, un gel o un lquido. Si es un lquido, puede estar distribuido en un
slido, el cual puede o no contribuir al proceso de separacin. El lquido puede
tambin estar qumicamente unido al slido (fase ligada) o inmovilizado
sobre l (fase inmovilizada).



Fase ligada
Una fase estacionaria que esta unida de forma covalente a las partculas de
soporte o a la pared interior de la columna (lugar donde se produce la
separacin).
Fase inmovilizada
En esta fase se encuentra la muestra problema
Una fase estacionaria que esta inmovilizada sobre las partculas del soporte o
sobre la pared interior de la columna, por ejemplo por polimerizacin in situ
(entrecruzamiento qumico) tras un recubrimiento.
Fase mvil
Es la fase que se mueve en una direccin definida.
Fluido que se filtra a travs o a lo largo del lecho estacionario, en una direccin
definida. Puede ser un lquido (cromatografa lquida, LC), un gas (cromatografa
de gases, GC) o un fluido supercrtico (cromatografa con fluido supercrtico). En la
cromatografa de gases se puede usar la expresin gas portador para la fase
mvil. En la cromatografa de elucin se usa tambin para la fase mvil la
expresin eluyente.


Analito
En qumica analtica un analito es el componente
(elemento, compuesto o ion) de inters analtico de una
muestra. Son especies qumicas cuya presencia o
concentracin se desea conocer. El analito es una
especie qumica que puede ser identificado y
cuantificado, es decir, determinar su cantidad y
concentracin en un proceso de medicin qumica,
constituye un tipo particular de mensurando en la
metrologa qumica.
La informacin analtica que se obtiene sobre el analito
en la muestra puede ser cualitativa (si el analito est
presente o no en una determinada concentracin en la muestra), cuantitativa (la
proporcin en la que se encuentra) y estructural.

Cromatografa analtica
Se emplea para determinar la
existencia y posiblemente
tambin la concentracin de un analito en
una muestra.
La cromatografa analtica puede
utilizarse como criterio de identificacin
para algunas
sustancias. Para ello se define una
propiedad de las sustancias que
se denomina rf o relacin de frente.

Fase enlazada
Es una fase estacionaria que se une de
forma covalente a las partculas de soporte
o a las paredes internas de la columna.

Cromatograma
Es el resultado grfico de la cromatografa. En
el caso de separacin ptima, los diferentes
picos o manchas del cromatograma se corresponden a los componentes de la mezcla separada.
Serie elutrpica
Es una lista de disolventes clasificados segn su poder de dilucin.
Una serie elutrpica es un listado de varios compuestos ordenados segn su
poder de elucin para un adsorbente dado. Tales series son tiles para determinar
los disolventes necesarios en la cromatografa de
una mezcla de compuestos qumicos. Normalmente tales series comienzan con
disolventes no-polares, como el n-hexano, y finalizan en disolventes polares
como metanol o agua. El orden de disolventes en una serie elutrpica depende a
la vez de la fase estacionaria as como del compuesto empleado para determinar
el orden.
Serie de Trappe Serie de Strain
menos polar menos polar
ter de petrleo

ciclo hexano

tetracloruro de
carbono

tricloroetano

tolueno

benceno

diclorometano

cloroformo

dietilter

acetato de etilo

acetona

n-propanol

etanol

metanol

agua

piridina
ter de petrleo

tetracloruro de carbono

ciclo hexano

disulfuro de carbono

dietilter

acetona

benceno

tolueno

steres orgnicos

1,2-dicloroetano

cloroformo

diclorometano


alcoholes
agua

piridina

cidos orgnicos

mezclas de cidos orgnicos con bases, agua, alcoholes o
piridina
ms polar ms polar

Tiempo de retencin
El tiempo de retencin (ti o tR) es el tiempo transcurrido
entre el instante en que se introduce la mezcla y el
instante en que se detecta la seal propia del
componente en su mxima intensidad. Los tiempos de
retencin no son reproducibles, ni siquiera en una
misma columna
cromatogrfica.

Muestra
Las muestras, constituyen una parte del objeto, es decir, son partes
representativas del objeto que han sido tomadas en el espacio y tiempo. Las
muestras deben contener el o las alcuotas de inters y entonces son las muestras
las que realmente se someten al proceso analtico.


Componentes de la muestra
Los constituyentes qumicamente puros de la muestra. Pueden no ser retenidos
por la fase estacionaria (es decir, no retardados), retenidos parcialmente (es
decir, eluidos a tiempos diferentes) o retenidos permanentemente. Se aceptan
tambin los trminos eluito y analito para un componente de la muestra.
Soluto
Trmino que se refiere a los
componentes de la muestra en la
cromatografa de reparto.
Se llama soluto a la sustancia
minoritaria (aunque existen
excepciones) en una disolucin, esta
sustancia se encuentra disuelta en un
determinado disolvente. En lenguaje
comn tambin se le conoce como la sustancia que se disuelve, por lo que se
puede encontrar en un estado de agregacin diferente al comienzo del proceso de
disolucin.
Disolvente
Trmino que en ocasiones se refiere a la fase estacionaria lquida en la
cromatografa de reparto.
Nota: En la cromatografa lquida, el trmino "disolvente" se ha usado a menudo
para la fase mvil. Este uso no se recomienda.
Zona o banda
Regin del lecho cromatogrfico donde se localizan uno o ms componentes de
la muestra. Se puede usar para ello tambin el trmino banda.
Lecho cromatogrfico
Se llama lecho cromatogrfico a las diferentes formas en que se puede encontrar
la fase estacionaria.
La expresin lecho cromatogrfico o sorbente se puede usar como trmino
general para designar las formas diferentes en que se use la fase estacionaria.










Cromatografiar
Separar por cromatografa.

Efluente
Es la fase mvil que atraviesa la columna
Eluir
Proceso en el que la fase mvil se desplaza a lo largo de la fase estacionaria
transportando los componentes a separar.
Aplicar la cromatografa de elucin. El proceso de elucin se puede detener
mientras todos los componentes de la muestra estn an en el lecho
cromatogrfico, o continuarse hasta que lo hayan abandonado.
Nota: Se prefiere el trmino "Eluir" a "Desarrollar", trmino usado en
nomenclaturas anteriores de cromatografa plana.
Elucin
Proceso de extraer un soluto de la fase estacionaria.

Eluyente
La fase mvil una vez que se extrae de la columna. El fluido que entra por la
columna se llama eluyente.
La polaridad de los eluyentes es clave para obtener una buena separacin.



Ejemplos:
Metanol
2-propanol
Tetrahidrofurano
Acetona
Acetonitrilo
Dioxano


ter metil butlico

Ejemplos
Pentano
Hexano
Heptano
Triclorotrifluorometano
Tolueno
Cloroformo
Diclorometano

Elucin en gradiente
Procedimiento en el que la composicin de la fase mvil cambia, de forma
continua o en etapas, a lo largo del proceso de elucin.
Eluato
Eluyente polares: Rompen ms eficazmente las uniones de los compuestos
con la fase estacionaria. Arrastran ms rpidamente a los compuestos.

Eluyente no polares: No rompen las uniones de los compuestos con la fase
estacionaria. Arrastran muy lentamente a los
compuestos.

Se llama eluato al fluido que sale por el extremo de la columna.

Absorcin
Es la retencin de una especie qumica por parte de una masa y depende de la
tendencia que tiene esta a formar mezclas complejas o a reaccionar
qumicamente con la misma.

Absorcin es la operacin unitaria que consiste en la separacin de uno o ms
componentes de una mezcla gaseosa con la ayuda de un solvente lquido con el,
cual forma solucin (un solutoA, o varios solutos, se absorben de la fase gaseosa
y pasan a la lquida). Este proceso implica una difusin molecular turbulenta o una
transferencia de masa del soluto A a travs del gas B, que no se difunde y est en
reposo, hacia un lquido C, tambin en reposo. Un ejemplo es la absorcin de
amonaco A del aire B por medio de agua lquida C.

Al proceso inverso de la absorcin se le llama empobrecimiento o desabsorcin;
cuando el gas es aire puro y el lquido es agua pura, el proceso se llama
deshumidificacin, la deshumidificacin significa extraccin de vapor de agua del
aire.

En la cromatografa se da pues a medida que la fase mvil pasa a travs de la
fase estacionaria, se va produciendo una absorcin selectiva; aquellos
componentes de la fase mvil que muestren mayor afinidad de absorcin con la
fase estacionaria quedaran retenenidos en las capas superiores de la columna y
aquellos que muestren menor afinidad absorbern ms debajo de la columna.


Adsorcin
La adsorcin es la retencin, adhesin o concentracin en la superficie de un
slido de sustancias disueltas o dispersas en un fluido.
Los agentes de adsorcin atrapan tomos, iones o molculas y los llevan a la
superficie de un material.
Es la retencin de una especie qumica en los sitios activos de la superficie de un
slido, quedando limitado el fenmeno a la superficie que separa las fases o
superficie interfacial, esta retencin superficial puede ser fsica o qumica.
La adsorcin es un proceso por el cual tomos, iones o molculas son atrapadas
o retenidas.
Adsorcin qumica. El adsorbato forma enlaces fuertes en los centros activos del
adsorbente.





Adsorbente
Un adsorbente es un slido que tiene la capacidad de retener sobre su superficie
un componente presente en corrientes lquidas o gaseosas. Se caracterizan por
una alta superficie especfica y por su inercia qumica frente al medio en el que se
van a utilizar.
Ejemplos:
Almidn
Talco
Carbonato de calcio (CaCO
3
)
Estereato de Zinc
Caoln (Al
2
Si
2
O
5
(OH)
4
)
Carbn activado
Trisilicato de magnesio (2MgO
3SiO
2
H
2
O)
Silica gel

Absorbente
Sustancia que tiene un alto poder de absorcin.
Que atrae o retiene lquidos.
Ejemplos:
Benceno
Acetona
Cloroformo
ter de petrleo
Hexano
Isobutanol
Pentano
Xileno
Cromatografa en fase inversa
Se llama as a la cromatografa con una fase estacionaria no polar u una fase
mvil polar.
Cromatografa en fase normal
Cromatografa con una fase estacionaria polar y una fase mvil no polar.
Revelador/Revelado
En el revelado qumico, la funcin principal del agente revelador es transformar en
plata metlica los granos del halgeno de plata que se encuentran en suspensin
en la gelatina del material sensible, que anteriormente ha sido descompuesto
parcialmente por su exposicin a la luz. Esta transformacin se logra mediante un
proceso de reduccin qumica que comprende el paso de electrones de la solucin
a los granos del halgeno de plata, es decir, el bromuro de plata ms un electrn,
produce plata metlica ms un ion de bromuro. Los electrones necesarios se
obtienen de agentes reductores orgnicos del tipo del poli fenol (hidroquinona),
aminotenol (metol) o poliamina (para-fenilenodiamina). En las soluciones de
revelado qumico aparecen otros productos, como pueden ser el sulfito, el
carbonato, el bromuro, para lograr una accin de retardo, efectuar una accin
antivelo o regular el contraste.
El revelador es un compuesto que ha de reaccionar con los compuestos analizar
de forma que se obtenga una mancha coloreada a simple vista.
Los reveladores ms usados son:
cido fosfomolibdico (para compuestos fcilmente oxidables)
yodo (para compuestos aromticos e insaturados)
ninhidrina (para aminocidos, aminas y aminoazucares)
permanganato potsico (compuestos insaturados o fcilmente oxidables)


















Origen
Lugar fsico donde se coloca la muestra al principio.

Soporte
El material slido inerte que en la cromatografa de reparto sirve para sostener la
fase estacionaria lquida en su sitio.
Sorbente
Cualquier fase estacionaria.
Fluido supercrtico
Un fluido supercrtico (FSC) es cualquier sustancia que se encuentre en
condiciones de presin y temperatura superiores a su punto crtico que se
comporta como un hbrido entre un lquido y un gas, es decir, puede
difundir como un gas (efusin), y disolver sustancias como un lquido
(disolvente). Los FSC se caracterizan por el amplio rango de densidades que
pueden adoptar. Por encima de las condiciones crticas, pequeos cambios en la
presin y la temperatura producen grandes cambios en la densidad.
En un diagrama de fases clsico, las curvas
de fusin, sublimacin y vaporizacin muestran las zonas de coexistencia de dos
fases. Tan solo hay un punto de coexistencia de tres fases, el llamado punto
triple (PT). El cambio de fase se asocia a un cambio brusco
de entalpa y densidad. Pero por encima del punto crtico (PC) este cambio no se
produce, por tanto, podramos definir este punto como aquel por encima del cual
no se produce licuefaccin al presurizar, ni gasificacin al calentar; y por ende un
fluido supercrtico es aquel que se encuentra por encima de dicho punto.


En trminos generales y cientficos, un fluido supercrtico posee propiedades entre
las de un gas y de un lquido...
Ejemplos de FSC:
Solvente
Dixido de carbono (CO
2
)
Agua (H
2
O)
Metano (CH
4
)
Etano (C
2
H
6
)
Propano (C
3
H
8
)
Etileno (C
2
H
4
)
Propileno (C
3
H
6
)
Metanol (CH
3
OH)
Etanol (C
2
H
5
OH)
Acetona (C
3
H
6
O)




Capilaridad

La capilaridad es una propiedad de los lquidos que
depende de su tensin superficial la cual, a su vez,
depende de la cohesin o fuerza intermolecular del
lquido y que le confiere la capacidad de subir o bajar
por un tubo capilar.
Cuando un lquido sube por un tubo capilar, es
debido a que la fuerza intermolecular o cohesin
intermolecular entre sus molculas es menor que
la adhesin del lquido con el material del tubo; es
decir, es un lquido que moja. El lquido sigue
subiendo hasta que la tensin superficial es
equilibrada por el peso del lquido que llena el tubo.
ste es el caso del agua, y esta propiedad es la que
regula parcialmente su ascenso dentro de las plantas,
sin gastar energa para vencer la gravedad.
Sin embargo, cuando la cohesin entre las molculas de un lquido es ms
potente que la adhesin al capilar, como el caso del mercurio, la tensin superficial
hace que el lquido descienda a un nivel inferior y su superficie es convexa.

Tiempo muerto
Es el tiempo necesario para que la especie no retenida alcance el detector; el es
tiempo de migracin de la especie no retenida; es el tiempo necesario para que,
por trmino medio, una molcula de la fase mvil pase a travs de la columna.
De manera semejante la velocidad lineal promedio u del movimiento de las
molculas de la fase mvil

Constante de distribucin
En general, los equilibrios de distribucin implicados en cromatografa se
describen por ecuaciones sencillas que suponen la transferencia de una analito
entre las fases estacionaria y la mvil. As para el soluto A, se puede escribir.

La constante de equilibrio K para que este proceso se denomina constante de
distribucin, la razn de distribucin y mide la distribucin del analito entre la fase
estacionaria y la fase mvil. Se define como:


Donde Cs es la concentracin molar de soluto en la fase estacionaria y CM es la
concentracin molar en la fase mvil.



Factor de retencin/ capacidad
Es un parmetro que describe la velocidad de migracin de los solutos (analitos)
en la columna. Para una especie A, el factor de capacidad KA, se define:

Donde KA es el coeficiente de distribucin de la especie A, VS es le volumen de la
fase mvil. Cuando el factor de capacidad para una especie es mucho menor que
la unidad la elucin tiene lugar tan rpidamente que es difcil determinar con
exactitud los tiempos de retencin, estos son demasiado cortos , en cambio
cuando el factor de retencin es del orden del 20 o 30 o tal vez mayor, los
tiempos.
Tiempo de retencin
Rf = Relacin de frentes o tambin conocido como factor de retencin.

El valor de Rf depende del tipo de solvente empleado, del soporte utilizado y otros
factores ms.

Conocer este valor permite saber que tan rpido se mueve el soluto que se analiza
respecto al sistema cromatogrfico.
La relacin de las distancias recorridas por el compuesto y por el disolvente,
desde el punto de origen del cromatograma, se conoce como Rf (rate factor), el
cual posee un valor constante para cada compuesto en condiciones determinadas.
Estas condiciones pueden ser el tipo de absorbente utilizado, el tamao de la
cubeta, la temperatura, el disolvente, etc. Es poco factible reproducir exactamente
las condiciones experimentales, as que se suele comparar una muestra con otra,
eluyendo ambas dentro de la misma placa. As, para poder calcular el Rf, se sigue
la siguiente frmula:





La distancia que recorre el compuesto se suele medir desde el centro de la
mancha, por lo cual se suelen hacer unas marcas en la placa, si dichas manchas
son extremadamente grandes, el valor del Rf ser errneo. As realizamos unas
marcas en la placa donde depositaremos con ayuda de una pipeta un mnimo de
muestra.
Rf = Distancia recorrida por el compuesto / Distancia recorrida por el
disolvente
Cuanto ms polar sea el compuesto, ms retenido estar en el absorbente, y por
tanto ir ms lento y el Rf ser tambin menor. Por otra parte, los compuestos
poco polares, se consiguen desplazar a ms distancia desde el origen. La
polaridad del disolvente influye en el valor del Rf, por lo que deberemos tenerlo en
cuenta. As, para un mismo tipo de compuesto, un aumento de la polaridad del
disolvente har aumentar su desplazamiento en la placa y por lo tanto tambin
aumentar su Rf.
Para elegir un eluyente, se recomienda elegir un disolvente en el que los
componentes que formen la mezcla presenten un Rf de entorno a un 0.3 un 0.5.
Para encontrar el eluyente ideal, es necesario probar con diferentes disolventes
con distintas polaridades o con mezclas de varios de ellos. En estos casos,
debemos cambiar a disolventes ms o menos polares.
En el caso de compuestos poco polares, los cuales se desplazan del origen con
bastante facilidad, se utiliza un disolvente apolar, generalmente el hexano. Cuando
se trata de compuestos con una polaridad media, es aconsejable usar mezclas de
hexano/ acetato de etilo en diferentes proporciones segn la polaridad. Los
productos ms polares de todos, los cuales quedan muy retenidos en el
absorbente, necesitan un disolvente ms polar como pueden ser el metanol o
distintas mezclas de cloruro de metileno/metanol en diferentes proporciones.














CONCEPTOS BASICOS
La resultante de las fuerzas:
Cuando el disolvente avanza sobre las manchas de las sustancias, comienzan a
actuar dos tipos de fuerzas opuestas: unas que arrastran y otras que retardan.Las
fuerzas propulsoras actan apartando las sustancias de su punto de origen y
desplazndolas en direccin del flujo de origen. Las fuerzas retardantes tratan de
impedir el movimiento de las sustancias, llevndolas fuera del disolvente que fluye
y hacia atrs en el papel. La distancia recorrida por cada sustancia a partir del
origen, en un tiempo dado, es la resultante de estas dos clases de fuerzas.






Fuerzas propulsoras
Cuando se realiza un cromatograma en papel, las fuerzas propulsoras ms
importantes son: el flujo de disolvente y la solubilidad de cada sustancia en el
disolvente.
Flujo del disolvente:
Si la sustancia cromatografiada fuera completa e instantneamente soluble en el
disolvente que avanza, por ejemplo agua y azcar, y no actuaran fuerzas de
retardo la sustancia ascender desde el origen hasta donde llega el diluyente. En
cambio si la sustancia fuera completamente insoluble en el disolvente en
movimiento no se movera del origen. La corriente del disolvente es la misma para
todas las sustancias de la mancha, as pues, si el disolvente fuese capaz de
disolver instantnea y completamente todas las sustancias, estas avanzaran
juntas hasta el final de la trayectoria del disolvente y terminaramos donde
empezamos con todas las sustancias juntas.
Solubilidad:
Una fuerza diferencial es, en efecto, la solubilidad. Pocas son las sustancias que
ofrecen la misma solubilidad en cualquier disolvente. La particular solubilidad de
una sustancia en la corriente del disolvente es una fuerza propulsora que tiende a
desplazarla, manteniendola en movimiento a lo largo del papel.

Fuerzas
Retardantes
Hay tambin dos fuerzas
retardantes principales: la
adsorcin y el reparto.
Adsorcin:
La celulosa de la que esta
hecho el papel de filtro,
posee propiedades
adsorbentes. Las sustancias
depositadas en el papel, en
cromatografa, pueden ser
ms o menos adsorbidas en
el papel.

La adsorcin es otra de las fuerzas diferenciales, esto significa que unas
sustancias son adsorbidas ms que otras y, por consiguiente, la liberacin de las
sustancias de las manchas variar de una sustancia a otra. Esto contribuye de
nuevo a la separacin. Mientras que se va realizando el cromatograma, las
sustancias mas fuertemente adsorbidas se van quedando atrs, mientras que las
adsorbidas con menos fuerza avanzan hacia el frente.

Constante Rf
El ltimo punto alcanzado por el disolvente en su avance se denomina frente del
disolvente. Puede usarse como punto de referencia para expresar las distancias
relativas recorridas por las diferentes sustancias en un cromatograma. El smbolo
utilizado para designar esta distancia relativa es Rf y se define mediante:
distancia recorrida por el compuesto desde el origen
Rf = __________________________________________________________
Distancia del origen al frente del disolvente



Como el denominador es siempre mayor que
el numerador en Rf debera ser un decimal.
Por razones de conveniencia se suele
expresar como un porcentaje. Asi un Rf de
50 indicara que el compuesto avanzo la
mitad de la distancia del frente del
disolvente.



5.-Qu es un cromatografo?
Cromatgrafo
Es el equipo que permite una separacin sofisticada. Por ejemplo, un cromatgrafo de gases o un
cromatgrafo de lquidos
.

6.- PRACTICA DE CROMATOGRAFA EN PAPEL
Prctica No. 1
MATERIAL
Una tira de papel poroso. Se puede utilizar el papel de filtro de una cafetera
o incluso recortar el extremo (sin tinta) de una hoja de peridico.
Rotuladores o bolgrafos de distintos colores.
Un vaso
Un poco de alcohol


PRODECIMIENTO
Recorta una tira del papel poroso que tenga unos 4 cm de ancho y que
sea un poco mas larga que la altura del vaso.
Enrolla un extremo en un bolgrafo (puedes ayudarte de cinta adhesiva)
de tal manera que el otro extremo llegue al fondo del vaso. (ver dibujo).
Dibuja una mancha con un rotulador negro en el extremo libre de la tira, a
unos 2 cm del borde. Procura que sea intensa y que no ocupe mucho. (ver
dibujo).
Echa en el fondo del vaso alcohol, hasta una altura de 1
cm aproximadamente.
Sita la tira dentro del vaso de tal manera que el extremo quede sumergido
en el alcohol pero la mancha que has hecho sobre ella quede fuera de l.
Puedes tapar el vaso para evitar que el alcohol se evapore.
Observa lo que ocurre: a medida que el alcohol va ascendiendo a lo largo
de la tira, arrastra consigo los diversos pigmentos que contiene la mancha
de tinta. Como no todos son arrastrados con la misma velocidad, al cabo de
un rato se ven franjas de colores.
Repite la experiencia utilizando diferentes tintas.




Prctica No. 2

PROCEDIMIENTO
1. Cortar una tira de papel de filtro
2. A unos 4 o 5 centmetros del final de la tira dibujar con lpiz una lnea
horizontal
3. Tambin con lpiz, dibujar pequeos crculos suficientemente separados
entre s (3 a 4 cm) y escribir a un lado con qu tinta los vamos a pintar.
4. Escribir en la parte superior del papel el disolvente en el que vamos a meter
el papel de filtro
5. Pintar los crculos con las tintas correspondientes
6. Repetir con el resto del papel de filtro, para usar las mismas tintas en
distintos disolventes
7. Llenar tarros largos de conservas -muy limpios- (o vasos de tubo, pueden
ser de plstico desechables) con los disolventes (agua destilada -de
planchar-, alcohol, o una disolucin de alcohol 50% en volumen). Es
importante que slo hayan 2 o 3 cm de altura de disolvente.
8. Poner los papeles de filtro en los tarros: el papel no debe tocar las paredes
ni el fondo del tarro. La parte inferior del papel debe estar sumergida en el
disolvente. Sin embargo, los crculos que hemos pintado deben estar por
encima del disolvente: es muy importante que no queden sumergidos.
9. Observar cmo la fase mvil (el disolvente) sube por capilaridad,
arrastrando los distintos componentes de las tintas.




Parar la cromatografa antes de que el
disolvente alcance el otro extremo del
papel (a 2 cm aprox. del final del tarro),
sacando los papeles de los tarros, y
ponindolos a secar.




En ciencia es muy importante analizar
los resultados de las investigaciones, y
sacar alguna conclusin de ellas. As que lo ms importante viene ahora: debis
analizar los resultados.
Qu tintas estn formadas por una nica sustancia colorante?
Cules son mezclas de sustancias? Hay tintas que tengan la misma
sustancia?
Hay tintas que no sean solubles en alguno de los disolventes que has
usado?