TECNICAS DE ESTUDIO DE LAS CELULAS.

Cuando hablamos de tcnicas de estudio de las clulas estamos hablando de la citologa y la forma en que estudiamos esto.
Citologa: Parte de la biologa que estudia la clula y sus funciones.
Dentro de estas tcnicas existen 3 que son las ms importantes y que tienen mayor importancia en este estudio de las clulas hacindose indispensables
para cualquier tipo de estudio hoy en da.
!stas 3 tcnicas de estudio son las siguientes:
". #icroscopia:
$ #icroscopia %ptica.
$ #icroscopia electr%nica.
&. 'raccionamiento Celular o Di(isi%n Celular.
3. Citoqumica.
#icroscopia:
Consiste en el uso bsicamente de microscopios estos son de & tipos los %pticos )microscopia %ptica* y los electr%nicos )microscopia electr%nica*. +a
microscopia como tal consiste en el aumento del ob,eto a obser(ar dado que el o,o humano tiene un poder de resoluci%n de -" mm )"-- m* y las clulas
tienen tama.os inferiores.
Definiciones de conceptos y caractersticas de sus formas de uso:
#icroscopio:
/n microscopio es cualquiera de los distintos tipos de instrumentos que se utili0an para obtener una imagen aumentada de ob,etos min1sculos o detalles
muy peque.os de los mismos estos son usados para cualquier tipo de cosas que deseemos (er mas detalladamente que nuestros o,os no sean capa0 de
obser(ar con detenci%n o que simplemente no podamos (er.
!xisten & tipos de microscopios con diferentes funciones adems de tener diferente formas de empleo:
". #icroscopio 2ptico )microscopia %ptica*: /tili0a lu0 (isible y lentes %pticas para aumentar la imagen. 3u poder de resoluci%n puede llegar a -& m con lo
que un ob,eto puede ser ampliado un mximo de "4-- (eces. Permite la obser(aci%n de clulas (i(as.
!ste es el microscopio ms usado que se sir(e de la lu0 (isible para crear una imagen aumentada del ob,eto. !l microscopio %ptico ms simple es la lente
con(exa doble con una distancia focal corta. !stas lentes pueden aumentar un ob,eto hasta "4 (eces. Por lo general se utili0an microscopios compuestos
que disponen de (arias lentes con las que se consiguen aumentos mayores. 5lgunos microscopios %pticos pueden aumentar un ob,eto por encima de las
&.--- (eces.
!l microscopio compuesto consiste en dos sistemas de lentes el ob,eti(o y el ocular montados en extremos opuestos de un tubo cerrado. !l ob,eti(o est
compuesto de (arias lentes que crean una imagen real aumentada del ob,eto que es examinado. +as lentes de los microscopios estn puestas de forma
que el ob,eto que se desee examinar se encuentre en el punto focal del ocular. Cuando se mira a tra(s del ocular se (e una imagen (irtual aumentada de
la imagen real. !l aumento total del microscopio depende de las longitudes focales de los dos sistemas de lentes.
!l equipamiento adicional de un microscopio optico consta de un arma0%n con un soporte que sostiene el material examinado y de un mecanismo que
permite acercar y ale,ar el tubo para enfocar la muestra.
+os especmenes o muestras que se examinan con un microscopio son transparentes y se obser(an con una lu0 que los atra(iesa y se suelen colocar
sobre un rectngulo fino de (idrio. !l soporte tiene un orificio por el que pasa la lu0. 6a,o el soporte se encuentra un espe,o que refle,a la lu0 para que
atra(iese el espcimen. !l microscopio puede contar con una fuente de lu0 elctrica que dirige la lu0 a tra(s de la muestra.
+a fotomicrografa que consiste en fotografiar ob,etos a tra(s de un microscopio utili0a una cmara montada por encima del ocular del microscopio. +a
cmara suele carecer de ob,eti(o ya que el microscopio act1a como tal.
#icroscopios %pticos especiales:
7ay di(ersos microscopios %pticos para funciones especiales. /no de ellos es el microscopio estereosc%pico que no es sino un par de microscopios de
ba,a potencia colocados de forma que con(ergen en el espcimen. !stos instrumentos producen una imagen tridimensional.
$ !l microscopio de lu0 ultra(ioleta utili0a el rango ultra(ioleta del espectro luminoso en lugar del rango (isible bien para aumentar la resoluci%n con una
longitud de onda menor o para me,orar el detalle absorbiendo selecti(amente distintas longitudes de onda de la banda ultra(ioleta. Dado queel (idrio no
transmite las longitudes de onda ms cortas de la lu0 ultra(ioleta. 5dems dado que la radiaci%n ultra(ioleta es in(isible la imagen se muestra con
fosforescencia en fotografa o con un escner electr%nico. !l microscopio de lu0 ultra(ioleta se utili0a en la in(estigaci%n cientfica.
$ !l microscopio petrogrfico se utili0a para identificar y estimar cuantitati(amente los componentes minerales de las rocas gneas y las rocas
metam%rficas. Cuenta con un prisma de 8icol u otro tipo de dispositi(o para polari0ar la lu0 que pasa a tra(s del espcimen examinado. 9tro prisma 8icol
o anali0ador determina la polari0aci%n de la lu0 que ha pasado a tra(s del espcimen. !l microscopio tiene un soporte giratorio que indica el cambio de
polari0aci%n acusado por el espcimen.
$ !l microscopio en campo oscuro utili0a una lu0 muy intensa en forma de un cono hueco concentrado sobre el espcimen. !l campo de (isi%n del ob,eti(o
se encuentra en la 0ona hueca del cono de lu0 y s%lo recoge la lu0 que se refle,a en el ob,eto. Por ello las porciones claras del espcimen aparecen como
un fondo oscuro y los ob,etos min1sculos que se estn anali0ando aparecen como una lu0 brillante sobre el fondo. !sta forma de iluminaci%n se utili0a para
anali0ar elementos biol%gicos transparentes y sin manchas in(isibles con iluminaci%n normal.
$ !l microscopio de fase ilumina el espcimen con un cono hueco de lu0 como en el microscopio en campo oscuro. 3in embargo en el microscopio de fase
el cono de lu0 es ms estrecho y entra en el campo de (isi%n del ob,eti(o que contiene un dispositi(o en forma de anillo que reduce la intensidad de la lu0 y
pro(oca un cambio de fase de un cuarto de la longitud de onda. !ste tipo de microscopio es muy 1til a la hora de examinar te,idos (i(os por lo que se utili0a
con frecuencia en biologa y medicina.
$ !ntre los microscopios a(an0ados se encuentran el microscopio de campo cercano con el que pueden (erse detalles algo menores a la longitud de onda
de la lu0. 3e hace pasar un ha0 de lu0 a tra(s de un orificio diminuto y se proyecta a tra(s del espcimen a una distancia equi(alente a la mitad del
dimetro del orificio formando una imagen completa.
&. #icroscopio electr%nico )microscopia electr%nica*:
/tili0a haces de electrones y lentes electromagnticas consiguiendo un poder de resoluci%n de "-- : )": ; "-$"-m* ampliando un ob,eto hasta &4-.---
(eces que mediante tratamiento %ptico % digital puede llegar hasta el mill%n de aumentos.
+a potencia amplificadora de un microscopio %ptico est limitada por la longitud de onda de la lu0 (isible. !l microscopio electr%nico utili0a electrones para
iluminar un ob,eto. Dado que los electrones tienen una longitud de onda mucho menor que la de la lu0 pueden mostrar estructuras mucho ms peque.as.
+a longitud de onda ms corta de la lu0 (isible es de alrededor de <.--- ngstroms )" ngstrom es ----------" metros*. +a longitud de onda de los
electrones que se utili0an en los microscopios electr%nicos es de alrededor de -4 ngstroms.
=odos los microscopios electr%nicos cuentan con (arios elementos bsicos. Disponen de un ca.%n de electrones que emite los electrones que chocan
contra el espcimen creando una imagen aumentada. 3e utili0an lentes magnticas para crear campos que dirigen y enfocan el ha0 de electrones. !l
sistema de (aco es una parte rele(ante del microscopio electr%nico. +os electrones pueden ser des(iados por las molculas del aire de forma que tiene
que hacerse un (aco casi total en el interior de un microscopio de estas caractersticas. Por 1ltimo todos los microscopios electr%nicos cuentan con un
sistema que registra o muestra la imagen que producen los electrones.
=ipos de #icroscopios !lectronicos:
7ay dos tipos bsicos de microscopios electr%nicos:
$ !l microscopio electr%nico de transmisi%n )=!#*: Dirige el ha0 de electrones hacia el ob,eto que se desea aumentar. /na parte de los electrones rebotan
o son absorbidos por el ob,eto y otros lo atra(iesan formando una imagen aumentada del espcimen. Para utili0ar un =!# debe cortarse la muestra en
capas finas no mayores de un par de miles de ngstroms. 3e coloca una placa fotogrfica o una pantalla fluorescente detrs del ob,eto para registrar la
imagen aumentada. +os microscopios electr%nicos de transmisi%n pueden aumentar un ob,eto hasta un mill%n de (eces.
$ !l microscopio electr%nico de barrido )3!#*: Crea una imagen ampliada de la superficie de un ob,eto. 8o es necesario cortar el ob,eto en capas para
obser(arlo sino que puede colocarse en el microscopio con muy pocos preparati(os. !l 3!# explora la superficie de la imagen punto por punto.
3u funcionamiento se basa en recorrer la muestra con un ha0 muy concentrado de electrones de forma parecida al barrido de un ha0 de electrones por la
pantalla de una tele(isi%n. +os electrones del ha0 pueden dispersarse de la muestra o pro(ocar la aparici%n de electrones secundarios. +os electrones
perdidos y los secundarios son recogidos y contados por un dispositi(o electr%nico situado a los lados del espcimen. Cada punto ledo de la muestra
corresponde a un pxel en un monitor de tele(isi%n.
Cuanto mayor sea el n1mero de electrones contados por el dispositi(o mayor ser el brillo del pxel en la pantalla. 5 medida que el ha0 de electrones barre
la muestra se presenta toda la imagen de la misma en el monitor. +os microscopios electr%nicos de barrido pueden ampliar los ob,etos "--.--- (eces o
ms. !ste tipo de microscopio es muy 1til porque al contrario que los =!# o los microscopios %pticos produce imgenes tridimensionales realistas de la
superficie del ob,eto.
#icroscopio electr%nico de barrido.
!l microscopio electr%nico de barrido est situado a la i0quierda del operador y las imgenes computeri0adas de la muestra se (en en la pantalla de la
derecha. 5unque un microscopio electr%nico de transmisi%n puede resol(er ob,etos ms peque.os que uno de barrido este 1ltimo genera imgenes ms
1tiles para conocer la estructura tridimensional de ob,etos min1sculos.
$ #icroscopio electr%nico de barrido y transmisi%n )3=!#*: Combina los elementos de un 3!# y un
=!# y puede mostrar los tomos indi(iduales de un ob,eto. !l microanali0ador de sonda de electrones un microscopio electr%nico que cuenta con un
anali0ador de espectro de rayos > puede anali0ar los rayos > de alta energa que produce el ob,eto al ser bombardeado con electrones. Dado que la
identidad de los diferentes tomos y molculas de un material se puede conocer utili0ando sus emisiones de rayos > los anali0adores de sonda de
electrones no s%lo proporcionan una imagen ampliada de la muestra como hace un microscopio electr%nico sino que suministra tambin informaci%n sobre
la composici%n qumica del material.
'raccionamiento Celular:
Consiste en la rotura de las clulas mediante un proceso osm%tico ultrasonidos lisis en0imtica % de manera mecnica y posteriormente una
centrifugaci%n que concentrar en di(ersas fases a los distintos orgnulos seg1n su tama.o con lo que se obtendrn separadamente permitiendo ms
fcilmente su estudio. =ambien se le denomina a esto D?@?C?98 C!+/+5A.
+a di(isi%n Celular:
+a di(isi%n celular es el proceso por el cual el material celular se di(ide entre dos nue(as clulas hi,as.
!n los organismos unicelulares esto aumenta el n1mero de indi(iduos de la poblaci%n. !n las plantas y organismos multicelulares es el procedimiento en
(irtud del cual crece el organismo partiendo de una sola clula y tambin son reempla0ados y reparados los te,idos estropeados.
+as clulas en di(isi%n pasan a tra(s de una secuencia regular de crecimiento y di(isi%n conocida como ciclo celular. !l ciclo consiste en una fase B"
durante la cual las molculas y estructuras citoplasmticas aumentanC una fase 3 durante la cual los cromosomas se duplicanC una fase B& durante la cual
comien0a la condensaci%n de los cromosomas y el ensambla,e de las estructuras especiales requeridas para la mitosis y la citocinesisC la mitosis durante la
cual los cromosomas duplicados son distribuidos entre dos n1cleos hi,osC y la citocinesis durante la cual el citoplasma se di(ide separando a la clula
materna en dos clulas hi,as. +as tres primeras fases del ciclo celular se conocen colecti(amente como interfase. +a regulaci%n del ciclo celular ocurre
tardamente en la fase B" y puede implicar la interacci%n de di(ersos factores.
+as fases de la mitosis son con(encionalmente cuatro: Profase metafase anafase y telofase. De ellas la profase es la ms larga. 3i una di(isi%n mit%tica
ocurre en die0 minutos por lo menos D minutos se tarda la clula en Profase. !n la Profase los centrolos se separan. !ntre los pares de centrolos
formndose a medida que estos se separan estn los microt1bulos que se transforman en las fibras polares del huso. Para el final de la Profase los
cromosomas estn completamente condensados y no estn separados del citoplasma.
Durante la metafase temprana los pares de cromtidas se mue(en dentro del huso aparentemente conducidos por las fibras del huso como si fueran
atrados por un polo y luego por el otro. 'inalmente los pares de cromtidas se disponen en el plano medial de la clula. !sto se.ala el final de la metafase.
5l comien0o de la anafase la etapa ms rpida de la mitosis los centr%meros se separan simultneamente en todos los pares de cromtidas. +uego se
separan las cromtidas de cada par y cada
cromtida se transforma en un cromosoma separado siendo ambas cromtidas atradas aparentemente hacia polos opuestos por las fibras del cinetocoro.
5l iniciarse la telofase los cromosomas alcan0an los polos opuestos y el huso comien0a a dispersarse.
+uego se forman sendas en(olturas nucleares que se (uel(en a formar alrededor de los dos con,untos de cromosomas que una (e0 ms se (uel(en
difusos. !n cada n1cleo reaparecen los nucle%los.
Citoqumica:
#ediante las reacciones coloreadas las en0imticas % de inmunofluorescencia se a(erigua la composici%n bioqumica de las estructuras celulares su
locali0aci%n y su funcionamiento.
+as Aeacciones !n0imticas:
$ son especficas y controladas
$ dependen de factores como: temperatura p7 y la presencia de sales
$ son difciles de (er a simple (ista
?nminofluorescencia:
+a inmunofluorescencia es una tcnica de laboratorio y su exactitud puede (ariar dependiendo del anticuerpo especfico que se est in(estigando y del
laboratorio que la est aplicando. 3e corta una porci%n congelada del hgado de un rat%n )u otras substancias* y se coloca en una laminilla portaob,eto de
un microscopio luego una peque.a cantidad de suero sanguneo de la persona )parte lquida de la sangre que contiene los anticuerpos* se coloca sobre la
sustancia y se la(a. /n medio de contraste )fluorescena* que se ha enla0ado qumicamente a los anticuerpos anti$humanos del cone,o se aplica y se la(a.
'inalmente el anticuerpo del cone,o enla0ado a la fluorescena y algunos anticuerpos humanos se enla0an permitiendo que los grupos de medios de
contraste sean (isibles ba,o el microscopio )prueba positi(a*.