(1) TIPOSMEDIOS DE CULTIVO

El medio de cultivo es una solucin que cuenta con los nutrientes necesarios
para recuperar, multiplicar, aislar e identificar microorganismos bajo condiciones
favorables de temperatura y pH.

CASIFCACION

Se pueden realizar distintas clasificaciones atendiendo a su estado fsico,
composicin, el uso al que se destinan


Segn su estado fsico segn su composicin













Segn al uso al que se
destinen
Se dividen en slidos,
semislidos y lquidos:
Se dividen en empricos,
sintticos y semisintticos;
Enriquecidos, diferenciales
o aislamiento, selectivos e
inhibidores, transporte y
mantenimiento, uso general,
para filtros de membrana.
Solidos: De 12 a 15 gramos
de agar por litro.
Semislidos: entre 2,5 a 4
gramos del agente
solidificante
Lquidos: no presentan
agente solidificante.

Empricos, en su composicin
aparecen sustancias
orgnicas
Sintticos, en su composicin
aparecen sustancias
qumicas definidas
Semisintticos, en su
composicin aparecen
molculas de naturales
hidrolizadas

Principalmente la sangre ya
que es un medio simple con
nutrientes enriquecedores.
Continua
Se utiliza para el aislamiento rpido de Bacteroides sp.
Contiene 75 g/ml de Kanamicina, que inhibe a la mayora
de los bacilos aerobios, facultativos y anaerobios
excepto Bacteroides, y 7,5 g/ml de Vancomicina, que
inhibe a la mayora de los microorganismos 12
Gram positivos.
Medios de cultivo de uso comn en laboratorio
Agar sangre.



Agar chocolate



Agar mcconkey

Caldo tioglicolato


Agar schaedler

Agar kana-vanco



Agar BBE


Agar salmonella-shigella

Continuacin
El AS al 5% con base de Tripticasa-Soja es un medio de uso
general que permite el crecimiento tanto de microorganismos
exigentes como no exigentes, que incluyen bacterias
aerobias y anaerobias, aunque no es medio de eleccin para
anaerobios.
Este medio utiliza la misma base que el Agar Sangre.
Antiguamente se aadan los hemates a la base fundida y
se elevaba la temperatura para lisarlos parcialmente y que
soltasen a los medios sus componentes. Esto daba al medio
su habitual color pardo chocolate.
El agar Mcconkey II es una medio selectivo y diferencial para
la deteccin de organismos coliformes y patgenos entricos.
Es el caldo de enriquecimiento ms utilizado en
Microbiologa. Contiene 0,075 % de Agar para evitar que las
corrientes de conveccin transporten el oxgeno de la
superficie a toda la masa del caldo.
Schaedler + 5% sangre de cordero es un medio reductor
est particularmente adaptado al cultivo de los grmenes
El medio BBE es un medio selectivo para el aislamiento e
identificacin presuntiva de bacterias del grupo Bacteroides
fragilis. Fue presentado en 1978 por Livingston y sus
colaboradores.
Agar altamente selectivo que se utiliza para el
aislamiento de Salmonella y de alguna especies de
Shigella.
Continua

Agar klieger


Agar saboreuad

Agar mueller-hinton



Agar thayer-martin



Agar cled










Continuacin
Se recomienda para la identificacin de bacilos entricos
gramnegativos. Se basa en la fermentacin de dextrosa y
lactosa y en la produccin de cido sulfhdrico (H2S).
Es un medio diferencial, recomendado para el cultivo y
crecimiento de hongos.
Especfico para la realizacin de antibiogramas, existen
dos variantes, Agar Mueller-Hinton/Sangre y Agar
Mueller-Hinton/Chocolate, estas variaciones se realizan
para obtener la sensibilidad antimicrobiana de ciertos
microrganismo, St. Pneumoniae y Haemophilus spp.
Respectivamente.
Es un medio empleado para el crecimiento de Neisseria
spp, de muestras que contengan flora acompaante
(bacterias y hongos).
Utilizado como medio diferencial para el aislamiento,
enumeracin e identificacin de microorganismos en
orina.
(2)Obtencin de cultivos puros

Es posible tratar el medio de cultivo para eliminar otro tipo de bacterias diferentes
de las que se desean aislar, antes de sembrar en las placas.

Tcnica de enriquecimiento de cultivo.

Para mejorar las posibilidades de aislamiento de algunos tipos fisiolgicos poco
frecuentes de bacterias, los procedimientos de la siembra en placa debern
estar precedidos del desarrol lo de las bacterias en un culti vo de
enri quecimiento.
El principio de esto es procurar un ambiente de cultivos diseado que pueda
favorecer el desarrollo de cierto tipo concreto de bacterias que necesitaremos pero que no
sea adecuada para los dems.
Los medios de enri quecimiento se usan generalmente cuando un tipo de
bacteria que queremos aislar se encuentra en muy pequeas cantidades y
se desarrolla con mayor lentitud que muchas de las otras especies presentes en el
inoculo.

Mantenimiento y preservacin de cultivos puros

La mayora de los laboratorios de bacteriologa cuentan con una gran variedad de
este tipo de cultivos, que frecuentemente se denominan coleccin de cultivos tipo.
Estos cultivos se emplean para probar agentes micro teraputico y potencialmente
efectivo, as como cultivos de referencia para estudios taxonmicos., como
agentes de ensayo para antibiticos y vitaminas, y como cultivos de referencia que citan
en las patentes de las compaas.
A fin de desarrollar condiciones propias para la preservacin de bacterias se ha
realizado un considerable nmero de investigaciones. Es esencial que el mtodo
de preservacin y mantenimiento conserve todas las caractersticas como fueron
en el momento de la preservacin. Algunas tcnicas son las siguientes:
Resiembra peridica a medios frescos.-
Los culti vos de bacterias se pueden mantener en tubos de medio en los
que han sido culti vados mediante pasos peridicos a medios frescos.

Preservacin de cultivos con una capa de aceite mineral.-
Muchas bacterias se preservan bien cubriendo el agar en el que van creciendo
con aceite mineral estril. Para cultivos de agar inclinado el aceite deber cubrir ms o
menos 1.5 cm del agar inclinado.

Preservacin de cul ti vos por secado rpido en congelacin.-
Este procedimiento es el ms eficaz, muchas especies preservadas por esta
tcnica han permanecido viables e invariables por ms de 20 aos.
En est epr ocedi mi ent o l as cl ul as se secan r pi dament e, mi ent r a
s son congel adas, mediante las si guientes etapas: la suspensin de
clulas se pone en pequeos f r ascos que se sumer gen en una
mezcl a de hi el o seco y al cohol ( - 78 C) l os frascos se conectan
inmediatamente a una lnea de alto vaci y una vez que termino el secado
cada frasco se sella bajo condiciones de vaci.

Procedimiento para lograr un medio de cultivo puro
(Caso a partir de una poblacin mixta)

1. La muestra debe diseminarse de manera tal que los diferentes microorganismos
queden lo suficientemente separados sobre la superficie de un medio de cultivo
slido, de manera que luego dela incubacin ellos formen colonias visibles
aisladas.
Este proceso se conoce como aislamiento.
En esta placa tendremos diferentes tipos de colonias correspondientes a los
diferentes microrganismos presentes en la poblacin original.

2. Luego de tener las colonias aisladas, stas deben transferirse con el filamento
A un tubo que contenga agar nutritivo estril para cultivar esa colonia aislada;
Este procedimiento se conoce como trasplante.
Para garantizar la pureza del cultivo obtenido, es conveniente, a partir de cada tipo
de colonia aislada, repetir el proceso de aislamiento antes descrito. Se considerar
Que se ha obtenido un cultivo puro, cuando al realizar este proceso, todas las
colonias obtenidas presenten las mismas caractersticas.
El medio de cultivo utilizado en el proceso de aislamiento depender, entre otros
factores, de los requerimientos nutricionales de los microorganismos que se
espera aislar y de la presencia de microorganismos que, por sus caractersticas
y/o por la cantidad en que se encuentren en la muestra, dificulten la obtencin del
microorganismo objeto del aislamiento. En este ltimo caso, se deben utilizar
medios de enriquecimiento y medios selectivos que inhiban el desarrollo de
grmenes contaminantes.
La temperatura y otras condiciones de incubacin, variarn segn los
microorganismos, usualmente la temperatura ptima de los microorganismos
patgenos para el hombre oscila entre 30 y 40C. Cuando el microorganismo que
se intenta aislar es anaerbico, deben tomarse las precauciones necesarias a fin
de eliminar la presencia de oxgeno en el ambiente donde se desarrollar el
mismo.






























(3)Diferentes tcnicas de tincin para bacterias levaduras y hongos










.
Los siguientes mtodos de tincin, ofrecen las siguientes ventajas en la ID de los
microorganismos:
a) proporcionar contraste entre el movimiento y el medio que le rodea, permitiendo
llevar a cabo la diferenciacin entre los distintos tipos morfolgicos.
b) Permitir el estudio de estructuras propias de la clula bacteriana y mictica.

Tincin de Gram Modificacin de Reed

Identificacin de bacterias y levaduras y se divide en Gram positiva (+) y negativa
(-)
Caractersticas:
Levaduras se tien como Gram + por las caras de su pared celular.
No tiene utilidad taxonmica, tales como: espiroquetas, mico plasmas,
micobactarias, clamidias y riquetsias.

Coloracin de Microorganismos:
Cristal violeta (c. Primario) y agregar bicarbonato de sodio (catalizador)
(15s) y lavar.
Yodo (decolorante) (15s) y lavar con agua corriente.
Fucsina bsica (colorante de contraste) (15s) y lavar.
Secar el frotis por presin con una toalla de papel secante.





Tincin de Ziehl-Neelsen

Identificacin:

Microrganismos designados cidos o alcohol resistentes, una vez teidos
retienen el colorante Ziehl-Neelsen y no son decolorados por la accin de
cidos.
La resistencia est determinada por la composicin de la pared celular.

Coloracin:
La penetracin de fucsina fenicada (colorante 1) se facilita debido a que
sta se encuentra disuelta en fenol y a que se aplica en presencia de calor.
Una vez que penetra a la clula bacteriana, se combina con los
componentes de la pared celular volvindola hidrofbica.
Al aplicar una mezcla de alcohol cido (decolorante) sta no solubiliza los
lpidos de la pared de las bacterias ac-alcohol resistentes y por lo tanto no
decoloran.
Bacterias no c-alcohol resistentes son decoloradas fcilmente, por lo que
se vuelven a teir al aplicar azul de metileno (colorante de contraste).
Bacterias ac-alcohol resistentes .- color rojo
Bacterias no ac- alcohol resistentes.- color azul.

Tincin de Scheffer y Fulton

Identificacin

Espora bacteriana.- es una estructura altamente deshidratada y rgida que
es formada por algunos gneros bacterianos.

Coloracin:

En una preparacin teida con la tcnica de Gram las esporas aparecen
como cuerpos refringentes sin teir.
Para teirlas es necesario aplicar calor para forzar la entrada del verde de
malaquita (colorante 1) y una vez que ste ha penetrado, lavar la
preparacin y agregar safrina (colorante de contraste).
Clulas vegetativas se tien de rojo
La espora permanece teida de verde.

Tincin Negativa de Tinta China

Identificacin:

Cpsulas bacterianas y micticas no pueden observarse en frotis teidos
con tcnicas usuales porque son incapaces de retener el colorante y por
qu los procesos de fijacin al calor y lavado las disuelven.

Coloracin:

Preparando un montaje hmedo que contenga junto con las bacterias y
levaduras algunas partculas de carbn en suspensin (tinta china).
Las partculas de carbn en rpido movimiento rebotan con la estructura
capsular sin llegar a tocar nunca la clula bacteriana.
Se puede apreciar un efecto como de halo alrededor del organismo el cual
constituye la cpsula.

Tincin Negativa de Maneval Modificado

Identificacin:
Clulas bacterianas.

Coloracin:

Gota de Maneval A (rojo Congo)
Con un asa microbiolgica tomar una muestra de cultivo, colocarla sobre la
gota y mezclarla con sta haciendo movimientos giratorios con el asa.
Extender la suspensin de manera que quede una pelcula delgada.
Dejar secar a temperatura ambiente.
Cubrir la preparacin con Maneval B (fucsina cida) y dejar actuar durante
1minuto.
Lavar suavemente con agua y secar el frotis con toalla de papel.
Observar al microscopio. Las cpsulas se observan como halos incoloros,
el espacio intercelular de un color oscuro y las clulas bacterianas de color
rojo.

Tincin Lacto fenol Azul de Algodn
Identificacin:

Mtodo utilizado rutinariamente para la realizacin de preparaciones
microscpicas de hongos filamentosos.

Componentes de la tincin:

c/u de los constituyentes del colorante lacto fenol azul de algodn cumple
una funcin determinada.
El fenol utilizado sirve como funguicida.
La glicerina permite tener una preparacin semipermanente.
El azul de algodn tie el exterior de la pared de los hongos.
El ac alcohol lctico acta como agente aclarante.

(4)Normatividad vigente para el manejo adecuado de los RPBI

La NOM-087-ECOL-SSA1-2002 sobre el manejo de RPBI contiene los siguientes
conceptos:
El ser humano y sus excretas, secreciones, etc., son los mismos en
cualquier sitio donde ste los genere (hogar, centro de trabajo, hospitales,
etc.). Esto significa que las excretas, orina, flujo menstrual, etc. de un
paciente son idnticos estando en su casa o en el hospital, y por lo tanto
no hay porque darles un manejo diferente al que se les daran en casa.

Para que un residuo sea considerado RPBI debe de contener agentes
biolgicos infecciosos. La norma seala como agente biolgico-infeccioso
cualquier organismo que sea capaz de producir enfermedad. Para ello se
requiere que el microorganismo tenga capacidad de producir dao, est en
una concentracin suficiente, en un ambiente propicio, tenga una va de
entrada y estar en contacto con una persona susceptible

Por lo tanto los desechos (paales, toallas femeninas, condones, etc.) que
provengan de pacientes que no sean sospechosos de alguna enfermedad
infectocontagiosa, como pacientes traumatizados, mujeres en trabajo de
parto, o enfermedades crnico degenerativas, no deben de ser
considerados RPBI.

La cantidad de sangre o fluido corporal en el material de curacin es
determinante para poder ser considerado como peligroso, por lo tanto slo
los materiales de curacin que estn empapados, saturados o
goteando alguno de estos fluidos (lquido sinovial, pericrdico,
cefalorraqudeo, sangre, etc.)deben de ser considerados RPBI.

El conocimiento de estos conceptos por parte del personal de salud evitar
percepciones equivocadas y permitir una clasificacin adecuada de la basura
generada en los centros de atencin mdica, lo cual optimizar los recursos
disponibles.
El principal riesgo de contagio de enfermedades transmitidas por sangre (hepatitis
B, C o VIH) para el personal de salud, lo constituye los residuos punzocortantes
(agujas, lancetas, bistures, etc.), por lo tanto se debe de tener especial cuidado
en el manejo de estos desechos.

Con los cambios efectuados en la NOM-087-ECOL-SSA1-2002 sobre el manejo
de RPBI no considera RPBI los siguientes:

Torundas y gasas con sangre seca o manchada de sangre.

Material de vidrio utilizado en laboratorio (matraces, pipetas, cajas de Petri).


Muestras de orina y excremento para anlisis de laboratorio.

Tejidos, partes del cuerpo en formol.

Para el manejo de los RPBI

El manejo de los RPBI segn la norma oficial mexicana 087 se divide en 6
pasos:

Paso 1.Identificacin de los residuos

Paso 2.Envasado de los residuos generados

Paso 3.Almacenamiento temporal

Pas 4.Recoleccin y transporte externo

Paso 5.Tratamiento

Paso 6.Disposicin final

























(5) Manejo, recoleccin, almacenamiento y tratamiento de los RPBI

PASO 1

IDENTIFICACIN DE LOS RESIDUOS

Los desechos deben de ser identificados inmediatamente despus del
procedimiento que los gener, en el sitio donde se originaron y por el personal que
los gener esta prctica evita la reclasificacin de los desechos, disminuyendo los
riesgos para el personal encargado de la recoleccin de los residuos. Para su
correcta identificacin y posterior
Envasado, la separacin de los residuos se debe de realizar de acuerdo a su
estado fsico (lquido o slido) y su tipo.


PAS 2

ENVASADO DE LOS RESIDUOS GENERADOS

Una vez que los residuos han sido identificados y separados de acuerdo al tipo y
estado fsico, estos debern ser envasados de acuerdo a la tabla siguiente.
La razn para usar diferentes recipientes para diferentes RPBI es porque distintos
residuos tienen diferentes procesos en su disposicin final:




PAS 3

ALMACENAMIENTO TEMPORAL

Para evitar que los RPBI se mezclen con la basura comn, se debe de
preestablecer un sitio para el temporal de los RPBI. Los RPBI debern
almacenarse en contenedores con tapa y permanecer cerrados todo el tiempo. No
debe de haber residuos tirados en los alrededores de los contenedores.
Es importante que el rea de almacenamiento est claramente sealizada y los
contenedores claramente identificados segn el tipo de residuo que contenga. La
norma establece los tiempos mximos de almacenamiento, de acuerdo al tipo de
unidad mdica:

- Hospitales con 1 a 5 camas: 30 das.
- Hospitales con 6 a 60 camas: 15 das.
- Hospitales con ms de 60 camas: 7 das.
PASO 4

RECOLECCIN Y TRANSPORTE EXTERNO

Para disminuir riesgos, el personal encargado de la recoleccin de los residuos
slidos dentro del hospital debe de estar capacitado en su manejo y conocer
ampliamente los riesgos que implica su trabajo.

Qu debe saber el personal que recolecta los residuos?

1. Los distintos tipos de residuos que se generan en el hospital (basura
municipal, RPBI, residuos qumicos peligrosos, residuos de reactivos
qumicos y medicamentos caducos).

2. Conocer los diferentes envases para cada tipo de residuo.


3. El manejo para cada tipo de residuo.

4. El equipo de proteccin que debe usar.


5. El procedimiento para su recoleccin.







PAS 5

TRATAMIENTO

Las instituciones de salud, pueden realizar el tratamiento final de los residuos
dentro de la misma unidad mdica. La forma ms limpia y barata es utilizando un
autoclave, excepto para
Punzocortantes y partes de cuerpo. Para lograr la desinfeccin se colocan las
bolsas rojas resistentes al calor hmedo y bien cerradas, en el autoclave a 121
centgrados con 15 libras de Presin durante 30 minutos, en este caso las cajas
de Petri desechables y otros dispositivos de plstico utilizados en el laboratorio
quedan irreconocibles 2.


PAS 6

DISPOSICIN FINAL

Los RPBI que hayan sido tratados podrn disponerse en los camiones
recolectores de basura comn, mientras que los RPBI sin tratamiento debern
enviarse a empresas recolectoras autorizadas.