PRODUCCION DE ENZIMA AMILASA MICROBIANA

MEDIANTE FERMENTACION EN SUSTRATO LQUIDO

FACULTAD DE INGENIERIA AGROINDUSTRIAL
UNIVERSIDAD PONTIFICIA BOLIVARIANA
CENTRO DE INVESTIGACIONES
MONTERIA CORDOBA
2008
1
A. INFORMACION GENERAL
Ttulo del proyecto Produccin de enzimas amilasa microbiana, mediante
fermentacin en estado lquido
Lder principal
responsable del
proyecto
Eder Durango Ballesteros
Miembros e integrantes lfonso Batista !im"nez
#bet$ %epeda !im"nez
&"ctor lberto Tobn 'uzm(n
)nidad acad"mica *acultad de #ngeniera groindustrial
Empresa donde
realizar( el proyecto
)ni+ersidad Pontificia Boli+ariana
*ec$a de inicio !unio de ,--.
*ec$a de finalizacin !unio de ,--/
%osto total del proyecto
0incluyendo descargas 1
pago de personal 234
5 ,64.,74,.6
Montos de contrapartida
0Entidad o dependencia
que cofinancia34
5 /48,94..6
Lnea de traba:o o (rea
del conocimiento en la
cual se inscribe el
proyecto4
Desarrollo de nuevos materiales y nuevas
aplicaciones
2
B. RESUMEN
El surgimiento de plantas de alco$ol carburante de primera generacin a partir de
almidn, en la regin %aribe, implica la transformacin de la materia prima por
procesos de $idrlisis mediante la accin de un comple:o de amilasas capaces de
degradarlo en azucares4 La implementacin de $idrlisis enzim(tica conlle+a
generar altos costos de produccin, factor que genera una problem(tica en las
empresas de este g"nero y a su +ez en buscar soluciones para dic$a tem(tica4
Este proyecto tiene el principio de desarrollar e implementar aplicaciones
microbiolgicas y biotecnolgicas para la produccin de un comple:o de amilasa
microbial a partir de fermentacin en un estado liquido, con el ob:eto de buscar
soluciones factibles en cuanto a la problem(tica planteada del proceso de
$idrlisis del almidn4
C. DESCRIPCION DEL PROYECTO:
1. Pl!"#$%#!"& '#l ()&*l#$:
La tendencia actual y las altas e;igencias ambientales $an impulsado el desarrollo
de nue+as t"cnicas agroindustriales4 ctualmente, en %olombia se plantea un
d"ficit general en torno a la agroindustria enzim(tica a causa de la carencia de
in+estigacin, infraestructura y poca moti+acin para desarrollar empresas que
basen sus fundamentos en el progreso de este campo de la biotecnologa4 <u
desarrollo, as como el de otras (reas de la biotecnologa, est( afectado por
problemas como la creciente brec$a cientfica y tecnolgica con respecto a los
pases industrializados4 <eg=n la firma internacional, F)&+" , S-ll%.!, analistas
dedicados al estudio de mercados mundiales, el comercio de enzimas esta
seccionado en distintos segmentos dependiendo la industria y la aplicabilidad de
estas4 <eg=n el estudio, para el a>o ,--? se gener cerca de 68, millones de
dlares solo en la industria alimenticia siendo el sector m(s inno+ador el de la
ingeniera gen"tica a partir de organismos modificados, @'M4 %on un 894?A, las
3
enzimas destinadas al procesamiento del almidn 0amilasas3 y los azucares
componen el sector mas amplio en la industria4
6
Esta crisis remarcada en el ficticio mercado enzim(tico colombiano afecta gran
di+ersidad de industrias incluso las que est(n en +a de desarrollo como las de
alco$ol carburante de primera generacin cuya materia prima para produccin es
el almidn, ya que para la transformacin de "sta se $ace necesario catalizar el
polisac(rido por medio de un comple:o de enzimas amilasas capaces de desdoblar
este compuestoB el uso de este comple:o representa el 6,A del +alor total de
produccin de alco$ol a base de esta materia prima4 En la costa %aribe el empleo
de estas enzimas esta concretamente en el #ngenio <icarare 0%odazzi2%esar3 y
en la planta piloto de %@CP@#%2T)C#PD en %rdoba, lo que les incrementa
el +alor por litro de producto dado la necesidad de importacin de este comple:o4
Las plantas de alco$ol carburante de primera generacin con base en almidn se
+en obligadas a importar comple:os de amilasas para la $idrlisis del polisac(rido,
lo que implica un aumento significati+o en los costos de produccin de las
compa>as por el $ec$o de incurrir en gastos de importacin, aranceles y dem(s
impuestos4 Las enzimas a escala industrial, son importadas de di+ersos pases de
Europa, !apn, Estados )nidos, %anad( y M";ico4
,
En conclusin, la creciente agroindustria de los biocombustibles de primera
generacin a partir de almidn $a establecido un $ec$o que e+idencia la
necesidad de producir comple:os de amilasas para reducir costos de operacin4
Por lo que se plantea esta in+estigacin para buscar alternati+as de produccin de
enzimas amilolticas y su aplicacin en las plantas de alco$ol carburante en base
de almidn4
1
Consultado en: < www.agrobio.org/bioboletines.php?id=3!. bolet"n 3 publicado en #unio de
$%% &en l"nea'( consultado el %) de *ebrero de $%%+.
$
%CCEC, !orgeB produccin y aplicacin de las enzimas industriales4 ,. de febrero de ,--?4 Ce+ista de
biotecnologa en el sector agropecuario y agroindustrial4 p 6-4
4
2. I$(/"& #+(#)'&
%on este proyecto se busca incorporar soluciones biotecnolgicas para establecer
un protocolo de produccin de un comple:o de enzimas amilasas para cat(lisis de
almidn4 Ba:o esta tem(tica se permitir( lograr a+ances en t"rminos de
in+estigacin en el (rea enzim(tica4
La profundidad de esta in+estigacin radica en buscar fuentes org(nicas capaces
de producir comple:os amilolticos para $idrlisis del almidn con el fin de me:orar
el desarrollo de este proceso4
0. M)/& "#1)%/& 2 #+"'& '#l )"#:
0.1 A!"#/#'#!"#+
Mundialmente, la produccin de enzimas esta desarroll(ndose aun m(s, ba:o el
principio de optimizar procesos y con+ertirlos en bioprocesos4 La aplicacin de
esta industria gira en torno a pases industrializados que tienen la capacidad de
in+estigar y producir a gran escala estas protenas, lo cual margina a pases
menos desarrollados a causa de carencia de recursos, infraestructura y desarrollo
en el campo biotecnolgico4 <in embargo, esta afirmacin no $a sido un
impedimento para que en di+ersos lugares del mundo se in+estigue en el (rea de
la enzimologa y el impacto que estas ocasionan en los procesos y reacciones
qumicas4
Enzimas amilasas son las mas estudiantes en este campo debido a su influencia
directa en la degradacin del almidn, uno de los productos alimentarios mas
e;plotados a ni+el mundial4
O*"#!/%1! '# $%l++ 34!5%/+ ()"%) '# Aspergillus +(., %+l'& '#
+#$%ll+ '# l#!"#6+
0
. Este proyecto se lle+o a cabo en Bogot( 2 %olombia y su
3
CASTRO C.; NAVAS C.; CARO O; PIEROS Y. Obtencin de amilasas fngicas a partir de Aspergillus
sp. aislado de semillas de lentejas. %onsultado en pagina oficial de )ni+ersidad !orge Tadeo Lozano, Bogot(
5
ob:eti+o fue aislar microorganismos productores de amilasas para producir
enzimas $idrolticas del almidn4 El agente productor detectado fue una cepa del
genero Aspergillus sp. Euien fue aislado de granos de lente:as4 Este
microorganismo fue lle+ado a medio de culti+o en agar FPD ba:o par(metros
especficos de incubacin4 Luego de 6. das se realizo cambio de sustrato a
sal+ado de trigo y se lle+o a cabo pruebas de Lugol, medicin de acti+idad
enzim(tica y e;traccin del comple:o enzim(tico4 Los resultados indican que las
amilasas presentes en el comple:o enzim(tico obtenido del culti+o de Aspergillus
sp4, sobre sal+ado de trigo, fueron acti+as en el desdoblamiento de la mol"cula de
almidn a p& G4- y temperatura de ?9H% demostrando su car(cter d"bilmente
(cido y su pro+eniencia mesfila4 El equi+alente de de;trosa como medida
cuantitati+a de la $idrlisis del polisac(rido fue de 74G, e+idenciando la capacidad
enzim(tica amiloltica del comple:o enzim(tico obtenido4 En este traba:o se
confirm teora antes mencionada y la capacidad de $ongos del g"nero
Aspergillus sp4, para la produccin de amilasas4
P)&'-//%1! '# $%l++ (&) $#'%& '# Aspergillus niger +-$#)5%'&+ #!
/-l"%.&+ '# 5-+ '# l.'& '# '&+ #$()#++ l%$#!")%+
7
4 El ob:eto de este
proyecto fue de analizar la produccin de enzimas amilasas por cepas de
Aspergillus niger en aguas de la+ado de industrias cer+eceras y c(rnicas para
determinar la capacidad de produccin de proteasas, amilasa y de depuracin de
medio donde crecen4 La metodologa aplicada se baso en la creacin de un medio
de culti+o de aguas de la+ado con aplicacin de nutrientes que me:oren la
adaptacin del agente4 <e implement pruebas de azucares, ni+eles de nitrgeno
y fosforo y demanda qumica de o;igeno 0DE@34 <e analizaron los par(metros de
produccin de enzima, p&, temperatura y concentracin de iones4 Los resultaron
indican que los ni+eles de amilasa y proteasa obtenidos son marcadamente
1 %olombia4 III4utadeo4edu4co4 *ec$a de consultaJ-, de marzo de ,--.4

<L< &, MabelB C@DC#')EK C, MariluB PECEK '4, ManuelB PECEK C, Cenato4 Amylase production by
Aspergillus niger in submerged cultivation on two wastes from food industries. -G de marzo de ,--G4 !ournal
of *ood Engineering4
6
dependientes de la concentracin inicial de almidn en el medio de culti+o4 Las
fuentes de nitrgeno 0peptona, amino(cidos y e;tracto de le+adura3 fueron
totalmente influyentes en la produccin de enzimas4 El p& ptimo encontrado fue
de 84/G en las amilasas y la temperatura fue de G-H%4
P)&'-//%1! '# $%l++ '# l#.'-)+ 3l&/-l!"#+
8
4 Este proyecto desarrollado
en PaList(n se destino en la consecucin de seis especies de le+aduras
productoras de amilasas4 Para analizar sus ni+eles de produccin ba:o el medio de
culti+o agar almidn y como fuente de carbono se agrego e;tracto de le+adura,
almidn y una muestra se suplemento con amilasa sali+al4 El medio estu+o
contenido de los nutrientes ideales para el crecimiento y adaptacin del
microorganismo incubado a una temperatura de ,GH%4, se realizaron pruebas de
produccin de enzima, degradacin de sustrato, turbidimetra y +elocidad de
crecimiento4 Del la metodologa e:ecutada se aislaron ? cepas de le+adura
correctamente4 El me:or resultado se obtu+o en la cepa que traba: con sali+a
$umana, produciendo ,. )Mml, la cual present una estabilidad en el rango de ,G2
7-H%4 Los ni+eles de las dem(s cepas fueron muy inferiores al registrado
anteriormente4
D#"#)5#!"# /&! 3&)$-l/%1! #!9%$:"%/ '# $%l+ &*"#!%' '# Aspergillus
niger. U! #+"-'%& /&$()"%.& #! '#"#)5#!"#+ /&$#)/%l#+
;
. El proyecto
manifiesta una problem(tica de la necesidad de compuestos naturales y eficaces
para la industria de detergentes4 El presente articulo describe la produccin,
purificacin y parcial caracterizacin de un comple:o de amilasa producido por A.
niger y uso potencial en formulacin de detergentes. <e dise>o un culti+o con
distintos microorganismos a la espera de conocer el agente que me:or resultados
otorgar( en cuanto a produccin de amilasa se refiere4 <e traba:o con medio PM
,
D&N#, #ra:B EMT#K#, 'iti 4 Production of " Amylase by Flocculant Yeast. Paistan !ournal of "iological
#ciences. $%%&
-
M#T#D#EC#, <ydneiB <@)K, nneB <%&CDO, ugusto, &EDD#D', Marilene4 Enzymatic detergent
formulation containing amylase from Aspergillus nigerJ comparati+e study Iit$ commercial detergent
formulations4 Bioresource tec$nology4 6/ de agosto de ,--G4
7
usando residuos industriales de protena de soy y almidn como fuente de
carbono adem(s de minerales4 <e realizaron ensayos analticos con pruebas de
DD<, iodometra y control de los par(metros de p& y temperatura4 El extracto
obtenido del complejo enzimtico fue comparado en tres formulaciones
comerciales de detergentes para determinar su actividad de limpieza en
equipos de hospitales, ciruga y endoscopia. Los resultados indicaron
que el microorganismos con mejor performance en la produccin de
amilasa fue el Aspergillus niger con una produccin de !." #$ml en medio
sumergido y una actividad excelente de degradacin de en el rango de
%&'%%() y un p* de +.&.
0.2E!9%$ $%l+: A//%1! 2 /l+%3%//%1!
Las amilasas son enzimas las cuales $idrolizan mol"culas de almidn dando como
productos de;trinas y polmeros compuestos progresi+amente por unidades de
glucosa
7
Esta familia de enzimas $idrolticas esta compuesta por a protenas
catalticasJ alfa2amilasa, beta2amilasaB glucoamilasaB isoamilasa4 <e encuentran
ampliamente distribuidas en te:idos +egetales, donde :uegan un rol muy
importante en la degradacin del almidn en la germinacin de las semillasB en
te:idos animales, cumpliendo una misin digesti+aB y en di+ersas especies de
microorganismos como $ongos y bacterias
8
4
%omo bien es conocido las cadenas de almidn est(n compuestas por dos
grandes sub2cadenas, amilosa y amilopectina4 La alfa2amilasa se caracteriza por
atacar los enlaces 6,82alfa2glicosdicos en el centro de la cadena de los
.
<'&EC M4B !N#D M4B C&MD <4)B LE''E C4L4B A t'ermostable a(amylase from a moderately
t'ermop'ilic "acillus subtilis strain for starc' processing4 ,/ de marzo de ,--74 !ournal of *ood Enginnering4
P /G-
+
TC#PT&# Palla+iB LE''#@, LeilaB MD<*ELD, !o$annaB )LBC#%&2&@*MDD, CenateB Oayast$a, r+ind4
ap'a( amylase of mung bean )vigna radiata* correlation of bioc'emical properties and terciary structureby
'omology modelling. ,? de mayo de ,--94 P$ytoc$emistry4 p4 67,?4
8
polisac(ridos, por lo que se la conoce como endoamilasa, produciendo glucosa,
maltosa y oligosac(ridos4
La enzima alfa2amilasa en su accionar degrada la amilosa en maltosa y
peque>os compuestos de glucosa4 <in embargo, esta enzima solo es capaz de
degradar parcialmente la amilopectina y el glucgeno debido a que no es capaz de
desdoblar los enlaces glicosidicos627 encontrados en los puntos de ramificacin
de la cadena del polisac(rido4 Por otro lado, La beta2amilasa, presente en plantas
y bacterias, tambi"n cumple la funcin de degradar los enlaces 6,82a2glucosdicos
pero comienza su accin por el e;tremo libre no reductor del almidn, liberando
maltosa al igual que la enzima alfa2amilasa4 La $idrlisis se detiene en los puntos
de ramificacin de la amilopectina y el residuo se conoce como de;trina lmite4 La
pululanasa o isoamilasa, tambi"n perteneciente a la esta familia, $idroliza los
enlaces 6,72alfa2glicosdicos quitando las ramas de la amilopectina o las de;trinas4
<i e;iste un acompa>amiento general del comple:o de las amilasas se puede
lograr efecti+a una degradacin total del almidn4
9
En cuanto a la nomenclatura de las enzimas de la familia amilasa, mundialmente
se reconoce a la comisin enzimologica 0E4%43 quien es el encargado de identificar
a todas y cada una de las enzimas e;istentes4 Este instituto reconoce la enzima
alfa2milasa como E4%4 ?4,46464 <u nombre sistem(tico es alfa26,82glucan282
glucano$idrolasa4 @tros nombres comunes en el comercio y el (mbito cientfico
son glucogenasa y endoamilasa4 Estas se caracterizan en lle+ar a cabo la reaccin
de endo$idrlisis que se sit=a de los enlaces 6,82alfa2D2glucosidicos en
polisac(ridos que contienen ? o m(s enlaces 6,82alfa2D2glucosidicos4 Los grupos
reducidos son liberados en una configuracin alfa4 Este termino alfa, esta
relacionado con la configuracin anom"rica inicial de los grupos de azucares
liberados
10
4
)
%CC#LL@ Leonor4 Microbiologa grcola4 ,--?4)ni+ersidad Dacional de <alta4 ISBN <8=><081>1;>8
1%
#)BMB, Enzyme Domenclature4 Pen lneaQ4 R$ttpJMMIII4c$em4qmul4ac4uLMiubmbMenzymeME%?M,M6M,4$tmlS4
Pconsultado el 6- de febrero de ,--.Q
9
T2amilasa bacteriana 0E% ?4,464634 La T2amilasa $idroliza el enlace glucosdicos
interno dando lugar a productos de ba:o peso molecular, solubles y menos
+iscosos, cuya ruptura est( limitada por la presencia de los enlaces glucosdicos
a2627 en los puntos de ramificacin de la mol"cula del almidn nati+o
0amilopectina34 Los productos de $idrlisis tienen configuracin a en la glucosa del
e;tremo reductor4 <e piensa que la enzima act=a por la accin combinada de los
grupos carbo;ilo e $istidina del centro acti+o4 Las a2amilasas obtenidas de "acillus
subtilis +ar amyioli+,tedaciens tienen un ion calcio fuertemente ligado por
mol"cula, que es necesario para la acti+idad deU enzima y que lo estabiliza en gran
medida frente aU calentamiento4 <e utiliza como enzima soluble en tratamientos de
dos $oras a .G V% y p& G,G29 como una alternati+a a la utili zacin de (cido
clor$drico que produce e;cesi+os compuestos coloreados y la formacin de
productos de re+ersin4 Debido a que los almidones de patata y de cereales
cerosos no pueden tratarse por gelatinizacin, se les somete a un proceso en dos
etapas, en el que se a>ade una segunda dosis de enzima y se contin=a et
tratamiento $asta lograr el contenido deseado de glucosa
66
4
La enzima Beta2amilasa es reconocida en la comisin enzimolgica como E4%4
?4,464,4, su nombre sistem(tico corresponde al de 6,82alfa2D2glucan
malto$idrolasa4 <u funcin es actuar en la reaccin de $idrlisis de los enlaces
alfa26,82glucosidicos del almidn con in+ersin en la configuracin del carbono 6
pas(ndolo de la configuracin alfa a la betaB as como de remo+er las unidades de
maltosa continuas presentes en los terminales no2reductores de la cadena
polisac(rida4 Los grupos sulfi$idrilos son esenciales para la acti+idad, por lo que la
11
W#<EMD, lan4 Manual de biotecnologa de las enzimas4 Editorial cribia, Karagoza 2 Espa>a4 6/.G4
p4?6/
10
enzima se inacti+a por o;idacin, por los metales pesados y sus sales4
12
4 <u
producto es beta2maltosa4
Beta2amilasa $a sido descrita como una protena abundante la cual se puede
encontrar en grandes cantidades tanto en te:idos de almacenamiento de almidn y
rganos de plantas
13
4 Muc$os %ereales contienen tambi"n la enzima beta2amilasa
y alfa2amilasa aunque esta ultima en concentraciones menores, tan solo ocupa
apro;imadamente ?-A de contenido total de protenas sintetizadas durante la
germinacin4 Estas dos amilasas pueden ser distinguidas una de otra, mediante el
punto de inacti+acin que presentan a un p& determinado4 La enzima alfa2amilasa
es inacti+ada a un p& en el rango de 84. 2 G4-4 Mientras que a este mismo rango la
beta2amilasa es estable4 La enzima E4%4 ?4,464,4, es inacti+ada en un p& alrededor
de 74-294-, y en caso reciproco las alfa2amilasa son estables ba:o estas
condiciones
14
4
@tra enzima perteneciente a esta peculiar familia es la 'lucoamilasa tambi"n
reconocida como amiloglucosidasa4 En la nomenclatura internacional esta
identificada como E4%4?4,464?4, y su nombre sistem(tico es 6,82alfa2D2glucano
gluco$idrolasa4 <u funcin es actuar en la reaccin de $idrlisis en cadenas de
polisac(ridos operando en los enlaces 6,82alfa2D2glucosa que est(n de manera
residual despu"s de $aberse e;puesto la cadena a la accin de alfa y beta
amilasa
15
4 El principal producto final de la accin de la glucoamilasa sobre el
1$
%CCEC, !orgeB produccin y aplicacin de las enzimas industriales4 ,. de febrero de ,--?4 Ce+ista de
biotecnologa en el sector agropecuario y agroindustrial4 p 664
6?
@L#NE#C !oao CB N#E#C dairB K%K)O B4 PriscilaB %@CDED)D<# BeatrizB M#DCD# !anaXYna 4B
P)C'TT@ EduardoB L!@L@ *ranco4 "eta(amylase e-pression and starc' degradation during banana
ripening4 6- de no+iembre de ,--G4 Post$a+erst Biology and Tec$nology4 p 86
14
@L)<D!@ 4 #saacB D'%&# 4 Edit$B #&)@M @4 *lorence4 .omparative studies on a(amylases from
malted mai/e )0ea mays*1millet )2leusine coracana* and #org'um )#org'um4 G de mayo de ,--74
%arbo$yfrates Polymers4 P 9,4
1,
#)BMB, Enzyme Domenclature4 Pen lneaQ4 R$ttpJMMIII4c$em4qmul4ac4uLMiubmbMenzymeME%?M,M6M,4$tmlS4
Pconsultado el 6- de febrero de ,--.Q
11
almidn es glucosa, lo que la diferencia claramente de la alfa y beta amilasas4 La
enzima tambi"n produce peque>as cantidades de oligosac(ridos4 La sacarificacin
del almidn puede alcanzar $asta /7A de de;trosa4 La accin de la enzima causa
in+ersin de la configuracin, produciendo beta2glucosa4 Las glucoamilasas son
inacti+as sobre almidn nati+o4 <u acti+idad es m(;ima entre p& 8 y G4G, y
temperatura alrededor de GG27G -%4 La rata de reaccin cae r(pidamente a
medida que disminuye el tama>o de la mol"cula de sustrato, siendo m(;ima sobre
almidones pre+iamente sometidos a licuefaccin
16
4
miloglucosidasa 0E% ?4,464?34 Las amiloglucosidasas 0glucoamilasa, a2amilasa o
a2628 gluco$idrolasa3 catalizan la etapa de $idrlisis de los enlaces T2628 del
almidn y los oligosac(ridos, liberando mol"culas de Z2glucosa a partir del
e;tremo no reductor de la cadena4 Los enlaces ramificados T2628 tambi"n se
$idrolizan, pero muc$o mas lentamente, form(ndose un :arabe de glucosa, un
contenido de glucosa del /G al /9 A en peso y de un ?- a un G A de oligosac(2
ridos grandes4 El enzima es capaz de $idrolizar tambi"n, aunque lentamente, los
enlaces a262?4 La glucosa formada se utiliza como :arabe o se cristaliza para
obtener glucosa pura slida4 La amiloglucosidasa se usa a gran escala en la in2
dustria de procesado del almidn en tanques discontinuos a GG27- V% y p& de 8,G
y con perodos de incubacin de 8.2/, $oras, para transformar las de;trinas
formadas por la a2amilasa en glucosa4 El calcio la estabiliza frente a la desna2
turalizacin por el calor o los (lcalis, y la $idrlisis puede lle+arse a cabo f(cil 2
mente a>adiendo el enzima soluble al almidn una +ez que la a2amilasa $a rea2
lizado del 6G al ?- A de la $idrlisis posible
69
4
)na +enta:a particular en el uso de enzimas en lugar de &%l para la $idrlisis del
almidn es que puede utilizarse una materia prima menos pura, ya que las
1-
%CCEC, !orgeB produccin y aplicacin de las enzimas industriales4 ,. de febrero de ,--?4 Ce+ista de
biotecnologa en el sector agropecuario y agroindustrial4 p 66
69
W#<EMD, lan4 Manual de biotecnologa de las enzimas4 Editorial cribia, Karagoza 2 Espa>a4 6/.G4 p4?,-
12
protenas contaminantes no se $idrolizan $asta amino(cidos, que podran dar
lugar a reacciones de pardeamiento4 Despu"s de la sacarificacin con
amiloglucosidasa, el :arabe resultante se filtra para eliminar protenas y grasas y
se purifica con columnas de carbn acti+o seguido de otras con resinas de
intercambio inico4
La glucoamilasa es un enzima e;tracelular producido por di+ersas especies de
Aspergillus o 3'i/opus. La amilogluosidasa de 3'i/opus puede separarse en
isoenzimas con propiedades seme:antes a los isoenzimas de A. niger. El enzima
es una glicoprotena que contiene ma>osa, glucosa, galactosa y (cido urnico, y
tiene un p& ptimo de 8,?28,G4 )na de sus des+enta:as es su relati+a falta de
acti+idad frente a los enlaces T2627, lo que $ace necesario el uso de grandes dosis
o de grandes perodos de incubacin para lograr el grado de $idrlisis deseado4
Por tanto, se $a propuesto el uso combinado de amiloglucosidasa y la enzima
desramificante pululanasa, logrando aumentos del contenido de de;trosa del 6 al ,
A, a pesar de lle+ar a cabo la reaccin a p& G,G27,-, en el que la amiloglucosidasa
es menos acti+a
6.
4
El resto de la cadena del polisac(rido es atacado por la enzima isoamilasa o
pululasa, reconocida oficialmente como E4%4 ?4,4647.4 Participa en la reaccin de
$idrlisis de polisac(ridos especficamente en los enlaces 6,72alfa2D2glucosidicosB
su nombre sistem(tico es glucgeno alfa26,72glucoano$idrolasa4 <u actuar es
directamente sobre la amilopectina, glucgeno y de;trinas, pero es incapaz de
$idrolizar el pululano y las alfa2de;trinas limite4 <u misin en participar en la
reaccin de $idrlisis de ramificacin que contengan enlaces 6,72alfa2glucosidicos
por lo que tambi"n se le conoce como enzimas desramificadora4 <u nombre
sistem(tico es glucgeno 6,72alfa2D2glucano$idrolasa
19
4 El =nico producto de
1+
W#<EMD, lan4 Manual de biotecnologa de las enzimas4 Editorial cribia, Karagoza 2 Espa>a4 6/.G4
p4?,-
1)
#)BMB, Enzyme Domenclature4 Pen lneaQ4 R$ttpJMMIII4c$em4qmul4ac4uLMiubmbMenzymeME%?M,M6M,4$tmlS4
Pconsultado el 6- de febrero de ,--.Q
13
reaccin es maltosa4 La temperatura ptima est( alrededor de 8G -% y el p& entre
8 y G
0.0 U+&+ 2 (l%//%1! '# l+ #!9%$+
Las enzimas +uel+en los procesos eficientes y menos costosos, en muc$os casos,
a que tienen un alto grado de especificidad y adaptabilidad 0sua+es condiciones de
traba:o34 dem(s, lograr m(s material procesado con el mismo equipo y menos
consumo de energa tambi"n a$orra costos4 l utilizar enzimas en la industria
alimentaria nos ofrece la +enta:a deJ
Ceducir +iscosidad 0$idrlisis34
Me:orar e;tracciones 0degradacin de pectina34
&acer biocon+ersiones 0glucosa a fructosa34
%ausar separaciones 0separacin del suero en queso34
<ustitucin de ingredientes y coadyu+antes en procesos4
$orro con procesos m(s eficientes obteniendo menos subproductos
indeseados y mayor capacidad de planta con un incremento de rendimiento de
producto4
'ananciaJ me:ora propiedades deseables obteniendo un producto =nico
0:arabe de alta concentracin de fructosa34
20
Las enzimas amilasas por su capacidad $idroltica $an tenido gran significancia en
las =ltimas d"cadas en di+ersas industrias que $an +isto una me:or manera de
optimizar sus procesos aplicando t"cnicas biotecnolgica e;tensi+as basadas en
enzimas4 #ndustrias como la panadera, repostera, alimentaria, te;tilera,
cer+ecera, papel, azucarera entre muc$as m(s $an +isto en estas protenas una
gran oportunidad de comercio4 Las amilasas ocupan cerca de un ,GA en el
mercado enzim(tico llegando a sustituir completamente procesos de $idrolisis
$%
M)DD@ L#MEDTC#@4 plicacin de las enzimas en la produccin industrial4 %onsultado enJ
$ttpJMMIII4alimentariaonline4comMapadminMimgMuploadMM--,[enzimas8W<*4pdf4 PconsultadoJ6- de febrero
de ,--.Q
14
qumica en la industria del almidn4 Esto se debe a una caracterstica esencial
dentro de esta familia de protenas4 La termoestabilidad de esta enzima,
industrialmente, $a $ec$o que las amilasas tengan gran aplicabilidad en di+ersos
procesos4
21

3.4 P)&/#+&+ %!'-+")%l#+ ?-# (l%/! #!9%$+
22
0.7.1 I!'-+")% '#l l$%'1! 2 '#l 94/). Dependiendo de las enzimas
utilizadas, a partir del almidn se pueden obtener :arabes de diferente composicin
y propiedades fsicas4 Los :arabes se utilizan en una +ariedad de alimentos tales
como gaseosas, dulces, productos $orneados, $elados, salsas, alimentos para
beb"s, frutas enlatadas, conser+as4 &ay tres etapas b(sicas en la con+ersin
enzim(tica del almidnJ licuefaccin, sacarificacin e isomerizacin4
0.7.2 P)&'-/"&+ L:/"#&+. La aplicacin de enzimas en el procesamiento de
lec$e est( bien establecida, por el uso del cua:o 0quimosina3 en la produccin de
queso, que tal +ez representa el empleo m(s antiguo de enzimas en alimentos4
@tras enzimas que participan en la produccin de quesos son las lipasas
presentes en la lec$e, las cuales $idrolizan el componente graso, proporcionando
cambios caractersticos en el sabor4 Para algunos quesos se pueden aumentar las
lipasas naturales, a>adiendo enzima e;tra4 Por otra parte, tambi"n se recomienda
agregar enzimas e;genas de tipo proteoltico para acelerar el proceso de
maduracin de algunos quesos4
0.7.0 M&l%!#)&+ 2 P!'#)@. El uso de enzimas en estas industrias se debe
principalmente a la deficiencia en el trigo y en la $arina, de las enzimas
naturalmente presentes4 El contenido de a amilasa de la $arina depende de las
condiciones de crecimiento y de cosec$a4 En climas $=medos la tendencia ser( a
$1
<'&EC M4B !N#D M4B C&MD <4)B LE''E C4L4B A t'ermostable a(amylase from a moderately
t'ermop'ilic "acillus subtilis strain for starc' processing4 ,/ de marzo de ,--74 !ournal of *ood Enginnering4
P /G-4
$$
%CCEC, !orgeB produccin y aplicacin de las enzimas industriales4 ,. de febrero de ,--?4 Ce+ista de
biotecnologa en el sector agropecuario y agroindustrial4 p 6?
15
tener alta acti+idad de a amilasa debido a germinacin de los granos, en tanto que
en climas secos el ni+el de a amilasa ser( ba:o debido a escasa germinacin4 Esto
conlle+a a grandes diferencias en el contenido de amilasa de diferentes lotes de
$arina4
3.4.4 T)!+3&)$/%1! '#l l$%'1!.
20
Los procesos encaminados a la produccin
de edulcorantes est(n basados en la degradacin del almidn y $an sido
empleados durante muc$os a>os, aunque originalmente se lle+aba a cabo
mediante $idrlisis catalizada por (cidos4 Durante el curso del desarrollo y la
e;pansin de la transformacin industrial del almidn, se $a producido un cambio
de la cat(lisis acida por el uso de enzimas4 La ele+ada especificidad de estas
reacciones enzim(ticas, acopladas con la gran acti+idad de las preparaciones
disponibles, $a permitido directamente el que pueda ser incrementada y adem(s
la formacin de deri+ados indeseables se $a minimizado4
De todas las aplicaciones a escala industrial, la m(s afortunada es la produccin
de :arabe de maz con fructosa ele+ada 0&*%<34 El propsito de este proceso es
obtener un material de poder edulcorante seme:ante a la sacarosa a partir de una
materia prima de ba:o precio 0almidn de maz34 Esta con+ersin requiere el uso
secuencial de tres enzimas4 En primer lugar, el almidn 0un polmero de la D2
glucosa3 se degrada parcialmente, empleando alfa2amilasa microbial4 Este
material es degradado posteriormente para rendir una solucin donde el
carbo$idrato presente est( en forma de D2glucosa en una concentracin del /82/7
A4 La glucosa tiene algunas aplicaciones en las industrias de alimentacin y
farmac"uticas, pero su uso est( restringido debido a su solubilidad limitada a
concentraciones ele+adas y a su ba:o poder edulcorante comparado al de la
sacarosa4 Por estas razones, la glucosa total obtenida se transforma en una
$3
/0C1203 4eter( 5677813 9ohn. :ecnologia de las en;imas. 1ditorial 0cribia3 <arago;a=1spa>a.
1))%. p.111
16
mezcla de glucosa y fructosa mediante el empleo de la enzima glucosa
ismerasasa4
3.4.5 P)&'-/"&)+ '# A-5&+ '# F)-"+.
24
Las primeras enzimas empleadas en
las industrias de :ugos de frutas fueron las enzimas p"cticas para la clarificacin
del :ugo de manzana4 ctualmente las enzimas p"cticas se usan en el
procesamiento de muc$as otras frutas, :unto con amilasas y celulasas4 Durante el
procesamiento de los :ugos cuando se desintegran los te:idos +egetales, parte de
la pectina, que es un componente estructural de las frutas, pasa a la solucin,
parte se satura con el :ugo y parte permanece en las paredes celulares4 Las
enzimas p"cticas se usan para facilitar el prensado, la e;traccin del :ugo y la
clarificacin ayudando a la separacin del precipitado floculante4
0.7.; F#)$#!"/%1! Al/&B1l%/
28
El almidn pro+eniente de maz, patatas,
cebada, yuca y otras fuentes debe someterse a un tratamiento pre+io con
$idrolasas, con ob:eto de producir su licuacin y sacarificacin, antes de $acerlo
fermentar mediante le+aduras u otros organismos para obtener alco$ol utilizable4
Estas enzimas son T y Z amilasas y amiloglucosidasas, que pueden agregarse en
forma de malta 0cebada germinada3, aunque este proceso es caro4 La malla no
slo contiene T y Z amilasas sino tambi"n enzimas que degradan los enlaces T262
7 de las de;trinas limite4 Cecientemente se $an a>adido enzimas bacterianas para
suplementar las enzimas endgenas asociadas con el almidn4 Por e:emplo, en
los procesos discontinuos americanos para la produccin de alco$ol para bebidas,
la adicin de a2amilasa bacteriana durante la coccin para $idrolizar parcialmente
el almidn gelatinizado representa una +enta:a, puesto que reduce la +iscosidad
de la mezcla facilitando su agitacin y mezclado4 Posteriormente, la mezcla se
enfra y despu"s se a>ade a2amilasa bacteriana para continuar la $idrlisis, que se
$
%CCEC, !orgeB produccin y aplicacin de las enzimas industriales4 ,. de febrero de ,--?4 Ce+ista de
biotecnologa en el sector agropecuario y agroindustrial4 p 68
$,
W#<EMD, !o$n4 Manual de biotecnologa de las enzimas4 Editorial acribia, Karagoza 1 Espa>a4 6/.G4 p4
??G4
17
completa mediante la adicin de amiloglucosidasa4 Despu"s se inoculan en la
mezcla le+aduras, de forma que contin=e la sacarificacin y fermentacin
simult(neamente $asta el agotamiento de la de;trosa, y se destila el alco$ol4 La
produccin comercial de alco$ol industrial, destinado a usarse como carburante en
motores de combustin interna se $a incrementado r(pidamente en las =ltimas
d"cadas, particularmente en Brasil, que lo obtiene de la fermentacin de Ua ca>a
de az=car o de la yuca4 Tambi"n se $a propuesto el empleo de c"lulas
inmo+ilizadas4 <e $a obtenido etanol a partir de melazas de ca>a diluidas, no
est"riles, durante medio a>o4
3.4.7 I!'-+")% C#).#/#). La cebada se utiliza tradicionalmente para la
fabricacin de bebidas alco$licas como la cer+eza4 En su produccin se deben
considerar dos operaciones distintasJ la maltera y la cer+ecera4 La preparacin
de la malta se logra por germinacin de la cebada, durante la cual se incrementa
el contenido de alfa2amilasa4 Las enzimas alfa y beta amilasas naturalmente
presentes en el grano act=an sobre el almidn produciendo de;trinas y maltosa,
que sir+en como sustratos para la fermentacin posterior4 La sacarosa es
$idrolizada por al enzima in+ertasa la cual queda di+ida en una mol"cula de
glucosa y una mol"cula de fructosa, ambas podran ser asimiladas de forma
glucolitica4 Tambi"n las enzimas cumplen la funcin de transportar la maltosa y la
maltotriosa a las c"lulas de las le+aduras para posteriormente ser con+ertidas en
glucosa por la maltasa
26
4
@tra aplicacin patentada recientemente en industrias inglesas consiste en el uso
de la enzima T2acetolactato descarbo;ilasa, aislada de 2nterobacter aerogenes4
Esta protena es capaza de desintegrar o eliminar el T2acetolactato y T2
aceto$idro;ibutirato de la cer+eza reci"n fermentada en ,8 $oras a 6- V% para de
este modo conseguir ni+eles de Diacetilo y ,,?2Pentanodiona por deba:o de los
$-
%MPBELL <ara$ L4B T$e continuous breIering of beer Pen lneaQ dsiponible en III4re+ista+irtualpro4com4
consultado -G de no+iembre de ,--94
18
umbrales permitidos para productos de este tipo4 <e consigue con ello grandes
a$orros4
27
&ay muc$as enzimas disponibles comercialmente para el proceso cer+ecero, pero
todas ellas caen en tres categorasJ proteasas, amilasas y glucanasas4 La accin
de estas enzimas durante las primeras etapas consiste en me:orar la licuefaccin
del almidn, regular el contenido de az=car y nitrgeno, me:orar la e;traccin,
facilitar la filtracin y controlar la turbidez4 En la filtracin del mosto reduccin de
las gomas y de la +iscosidad4 En la ebullicin, control de la turbidez, eliminacin
final del almidn4 En esta etapa se inacti+an las enzimas4 Durante la fermentacin
y maduracin la adicin de enzimas sir+e para controlar la turbidez4
0.7.8 P)&/#+$%#!"& '# C)!#. Las enzimas importantes para ablandar carne
son proteasas de origen +egetal o de microorganismos 0"acillus subtilis y
Aspergillus ory/ae34 Las enzimas se inyectan antes del sacrificio al animal o se
trata la carne con las enzimas antes de cocerla, con lo que se logra un franco
ablandamiento sin pro+ocar una protelisis importante4
3.4.9 I!'-+")%+ '# G)++ 2 A/#%"#+.
28
El uso de enzimas en las industrias de
aceites y grasas es muy ba:o, aunque se encuentran disponibles enzimas que
pueden resol+er algunos problemas, por e:emplo minimizar los subproductos
indeseables4 Las enzimas tambi"n se pueden usar para producir aceites y grasas
no+edosas4 Lipasas especficas, pueden seleccionar los (cidos grasos de algunas
posiciones del triglic"rido, para incorporar determinados (cidos grasos, sin
cambiar los de otras posiciones4 De tal manera que es posible modificar por
interesterificacin el contenido de (cidos grasos, o por transesterificacin lograr el
reordenamiento de algunos de ellos4 Por e:emplo la mantequilla de cacao se
$.
%<T\E,*4]4B DMM, <444 Los tanques cilindro42conicos y el tiempo de guarda de la cer+zeza4 #ndustria
cer+ecera4 Pen lineaQ4 Disponible en III4re+ista+irtualpro4com4 %onsultado el 9 de agosto de ,--94
$+
%CCEC, !orgeB produccin y aplicacin de las enzimas industriales4 ,. de febrero de ,--?4 Ce+ista de
biotecnologa en el sector agropecuario y agroindustrial4 p 68
19
requiere en la produccin de c$ocolate y con frecuencia la disponibilidad y el costo
fluct=an ampliamente4 <in embargo, aceites como el de palma son baratos y se
encuentra buen abastecimiento4 Lo que se plantea es modificar el aceite de palma
por reaccin con (cido este(rico mediante interesterificacin enzim(tica4 La grasa
resultante tiene propiedades similares a la mantequilla de cacao4
0.8P)&'-//%1! 2 +-+")"&
F-#!"#+ '# #!9%$+. Las c"lulas microbianas son la fuente usual de enzimas
para uso industrial e;cepto para algunos enzimas pro+enientes de animales y
plantas utilizados tradicionalmente como las proteasas de la papana, ficina y
bromelaina, que se utilizan para el ablandamiento de la carne, y la quimosina,
empleada en la manufactura del queso4 La inmensa mayora de los enzimas
microbianos se producen a partir de apro;imadamente ,G organismos, incluyendo
una docena de $ongos, pero se $a calculado que slo apro;imadamente el , ^o
de los microorganismos e;istentes en el mundo $an sido estudiados como fuente
de enzimas
,/
4
Tradicionalmente se $an obtenido pocas enzimas de origen animal 0lipasa
pancre(tica y tripsina3 debido a que "stas pueden ser reemplazadas por otras
similares deri+adas de microorganismos4 <in embargo, los sustitutos microbianos,
aunque catalticamente eficaces, presentan sutiles diferencias en sus propiedades
que pueden ser cruciales en el proceso de su aplicacin4 Los recientes a+ances en
este campo $an permitido la adaptacin de las t"cnicas del DD recombinante
para posibilitar que ciertos genes de mamferos sean clonados en las bacterias o
le+aduras idneas, facilitando as la produccin de enzimas originariamente de
animales por medio de la tecnologa con+encional de la fermentacin4
$)
W#<EMD, lan4 Manual de biotecnologa de las enzimas4 Editorial cribia, Karagoza 2 Espa>a4 6/.G4
p4,.6
20
Las plantas tambi"n $an sido fuente tradicional de un cierto n=mero de enzimas4
partir del l(te; producido por la papaya, $iguera, pi>a y, en menor grado, otras
especies se $a aislado sobre todo, cistein2proteinasas4 Estas plantas tienen la
+enta:a de que su l(te; es f(cil de obtener, principalmente a partir de los frutos y
utilizando mano de obra no cualificada4
Las enzimas microbianas son m(s =tiles que los deri+ados de las plantas o
animales por la gran +ariedad de acti+idades catalticas de que disponen, y porque
usualmente pueden obtenerse en cantidades abundantes, baratos, de forma
regular y de calidad uniforme, ocasionalmente mediante culti+o de superficie o
usualmente mediante t"cnicas de fermentacin aerbica de culti+os profundos,
t"cnica muy utilizada en la produccin de antibiticos4 dem(s los enzimas
microbianos son en general m(s estables que los $omlogos de las plantas o
animales, y su proceso de produccin es m(s f(cil y seguro que el seguido con
plantas y animales4 La manipulacin gen"tica y ambiental para incrementar el
rendimiento, o la acti+idad enzim(tica de las c"lulas $aciendo a "ste de inter"s
constituti+o
?-
4 Estas t"cnicas son especialmente importantes en el caso de la
acti+idad o estabilidad del enzima que sea la etapa limitante en con+ersiones
multienzimas, cuando $aya que eliminar los controles de regulacin normales en
la sntesis de la enzima deseada, cuando se desea reducir o eliminar la in$ibicin
por el substrato o el producto, mecanismo este =ltimo para pre+enir la
sobreproduccin del producto de una +a metablica, o para obtener algunas otras
caractersticas fa+orables
?6
4
'eneralmente el ob:eti+o es ma;imizar la +elocidad de formacin del enzi ma y la
concentracin de enzima en las c"lulas o en el caldo de fermentacin para
minimizar los costos de produccin de la enzima4 El ideal es combinar de forma
3%
/0C1203 4eter( 5677813 9ohn( :ecnolog"a de las en;imas. 1ditorial acribia3 <arago;a ?
1spa>a. 1))%. p.1-.
31
@A21B0C3 0lan( Banual de biotecnolog"a de las en;imas. 1ditorial acribia3 <arago;a ? 1spa>a.
p.$+1
21
ptima la cepa seleccionada de microorganismo, las condiciones de recuperacin
y fermentacin y el equipo m(s apropiado en buenas condiciones de traba:o4
)sualmente, las c"lulas crecen sumergidas, en fermentadores bien agitados y
aireados, aunque un n=mero significati+o de enzimas importantes industrialmente
se obtienen en fermentadores slidos o semislidos, entre los que se incluyen la
lactasa, la a2amilasa y una proteasa de A. ory/ae1 la pectinasa, una proteasa de
A. niger1 la a2amilasa de 3'i/opus1 y el cua:o de 4ucor pusi5us
&$
.
Las plantas superiores no son generalmente fuentes satisfactorias de enzimas
para usos clnicos e industriales, y acumulan productos de desec$o en las
+acuolas4 Estos compuestos son frecuentemente in$ibidores enzim(ticos yMo to2
;inas, particularmente cuando se o;idan al contacto con el aire4 Estos desec$os,
muc$os de los cuales son fenoles, se liberan al romperse la c"lula, contaminando
y frecuentemente inacti+ando cualquier enzima e;trado4
Las $idrolasas son ampliamente utilizadas en los procesos industriales4 Dentro de
ellas podemos encontrar las enzimas alfa2amilasa, beta2amilasa como las m(s
comunes para las sntesis del almidn produciendo productos de ba:o peso
mol"cula4 Estas enzimas son producidas, especialmente alfa2amilasa, por gran
di+ersidad de microorganismos, Producen amilasas muc$os $ongos del suelo as
como bacterias de los g"neros "acillus1 Pseudomonas1 #treptomyces entre otras4
El principal genero que esta siendo tratado para la produccin de dic$a enzima es
el bacillus. Las especies registradas como productoras de enzima en este genero
son el "acillus lic'eniformis1 "acillus stearot'ermop'ilus1 y "acillus
amyloli+uefacien quienes son aplicados en procesos industriales para alimentos,
te;tiles, fermentacin, papelera entre otros
??
4
3$
@A21B0C3 9ohn. Banual de biotecnologia de las en;imas. 1ditorial acribia3 <arago;a ? 1spa>a.
1)+,. p.$+$
33
K@E O, Maria4 .oproduction of Alfa( amylase and beta(galatosidase by bacillus subtitulis in comple- organic
substrates4,- de diciembre de ,--G4 Bioresource Tec$nology44p 6G-4
22
Tambi"n otros g"neros $an sido reportados en proyectos de in+estigacin4 La
especie Aspergillus produce una amplia +ariedad de enzimas e;tracelulares entre
las cuales adem(s de estar las amilasas se puede identificar las proteasas4
Aspergillus ri/'opus esta identificado como un gran productor de enzimas
?8
4
La induccin de amilasa tipo alfa requiere un sustrato que contenga enlaces alfa2
6,8 glucosdicos, adem(s de maltosa, de;trina y almidn4 La 'lucosa, as como es
el producto final de la $idrolisis, tiene la posibilidad de reprimir la sntesis de
enzima como un mecanismo conocido como represin catabolitica4 <in embargo,
se $a encontrado que algunos microorganismos en distintos sustratos que tienen
como fuente de carbono a los carbo$idratos no inducen la produccin de
amilasas
?G
4 Este $ec$o contrasta con los registrados en artculos de in+estigacin
y compa>as dedicadas a la produccin de enzimas donde la fuente de produccin
de las protenas son microorganismos4
La produccin industrial $a desarrollado t"cnicas de apro+ec$amiento de recursos
o residuos de produccin de di+ersas industrias con el ob:eto de adquirir enzimas
utilizando sustratos de ba:o costo, as como los desec$os agrcolas4 En a>os
recientes, se $a presentado un incremento en el esfuerzo y la aplicacin eficiente
del bagazo de ca>a de az=car como medio de produccin4 Este es un subproducto
agroindustrial de e;tensa cadenas celulsicas4 Esta es una importante fuente de
carbono que $a sido empleada en los =ltimos a>os para la produccin de enzimas
y a su +es la fermentacin de azucares para la elaboracin de etanol4 <e $a
3
<L< &, MabelB C@DC#')EK C, MariluB PECEK '4, ManuelB PECEK C, Cenato4 Amylase production by
Aspergillus niger in submerged cultivation on two wastes from food industries. -G de marzo de ,--G4 !ournal
of *ood Engineering4 p /84
3,
D&< Ely, WLDEMC#D Mirela M.6 .ontrol of amylase production and growt' c'aracteristics of
Aspergillus oc'raceus 4 re+ista latinoamericana de microbiologia4 Nol _64 Enero de ,--,4 p4G
23
identificado que el microorganismo optimo para reproducirse en este medio y
sintetizar alfa2amilasa es el "acillus subtilis
&7
4
Los medios de culti+o $an facilitado para los microorganismos el desarrollo de
enzimas con propiedades fsico2qumicas muy deseables4 La produccin de alfa2
amilasa puede darse en medio sumergido o en estado solido o por procedimientos
de fermentacin4 La concentracin de metabolitos para el crecimiento de los
agentes microbiales es importante4 #nfluye directamente la composicin del medio
as como las fuentes de carbono, de nitrgeno y el contenido de sales
inorg(nicas
37
4
En cuanto a t"rminos de aplicabilidad industrial, es necesario estudiar la
produccin de enzimas y analizar el factor de termoestabilidad, ya que se $a
demostrado que la temperatura esta ligada directamente a la +elocidad de
reaccin de la enzima, menor +iscosidad en el sustrato y disminucin de la
contaminacin microbiana4 Los microorganismos apropiados para la produccin de
enzimas deben tener ciertas propiedades como rapidez de crecimiento,
adaptacin a nutrientes relati+amente baratos y sin necesidad de inductores4
dem(s, se debe obtener un alto rendimiento de enzima, de forma que sea f(cil
aislarlo, purificarlo y concentrarlo sin que se produzca la formacin concomitante
de metabolitos t;icos o inmunog"nicos
?.
4
Tambi"n puede ser una estrategia =til la de seleccionar cepas que $iperproduzcan
enzimas a partir de organismos gen"ticamente modificados @M' que no tengan
3-
C!'@PLD 'obinat$, OC#<&DD %$andrara:B a(Amylase production from catabolite derepressed
"acillus subtilis 8..9%& utili/ing sugarcane bagasse 'ydrolysate -6 de :unio de ,--94 Bioresource
Tec$onology4 p4,
37
D!EOC#*2DO&M@)%&E <4B '&EC#B#2@)LM# KB MEC#&# K4 BEDDM@)D L44Application of a
statistical design to t'e optimi/ation of culture medium for a(amylase production by Aspergillus niger A:..
97;%; grown on orange waste poIer4 66 de marzo de ,--G4 !ournal of *ood Engineering4 p 6/6
3+
@A21B0C3 0lan( Banual de biotecnolog"a de las en;imas. 1ditorial 0cribia 2.0. <arago;a=
1spa>a. 1)+,. 4.$.1
24
necesidad de inductores debido a que sus centros represores est(n inacti+os, a
que tienen una ba:a represin por los catabolitos, a que sufren retroin$ibicin o a
que tienen enzimas relati+amente resistentes a la in$ibicin por el producto final4
De $ec$o, a pesar de los enormes a+ances obtenidos recientemente en el campo
de la ingeniera gen"tica, las t"cnicas cl(sicas de seleccin de enzimas son
toda+a muy producti+as, particularmente cuando se estudian ambientes nue+os
yMo e;ticos, para buscar c"lulas microbianas que desarrollen enzimas con
propiedades e;epcionales4 Entre ellos destacan los enzimas clorantes obtenidos a
partir de microorganismos marinos, y un enzima que produce un nue+o az=car, la
isomatulosa, de forma muy producti+a a partir de una bacteria patgena del
ruibarbo4 Muy recientemente se $an $ec$o descubrimientos m(s e;cepcionales si
cabe, por e:emplo, los microorganismos que crecen a unos $<% H% en fuentes
+olc(nicas en aguas marinas profundas que poseen enzimas e;tremadamente
estables al calor, o un microorganismo del intestino de un gusano que perfora la
madera, que es capaz de degradar la celulosa y de fi:ar el nitrgeno
?/
4
En resumen, la mayora de los enzimas empleados com=nmente en la industria
son de origen microbiano y se producen por fermentacin sumergida aerobia
con+encional, que permite un mayor control de las condiciones de crecimiento que
la fermentacin en estado slido4 <e sabe muc$o acerca de la seleccin de cepas
de organismos y condiciones de culti+o, aunque menos sobre la regulacin de la
sntesis, degradacin y secrecin de la enzima por el organismo productor4 Estas
enzimas son con frecuencia e;tracelulares, lo que facilita su aislamiento y
purificacin4
7. O*6#"%.&+
3)
@A21B0C3 0lan( Banual de biotecnolog"a de las en;imas. 1ditorial 0cribia 2.0. <arago;a=
1spa>a. 1)+,. 4.$.$
25
7.1G#!#)l
@btener amilasa microbiana por fermentacin lquido para aplicacin en procesos
agroindustriales de alco$ol carburante a base de almidones4
7.2E+(#/@3%/&+
#dentificar microorganismos productores de enzimas amilasa mediante t"cnicas
de aislamiento microbiolgicas
Determinar la cin"tica del crecimiento de los microorganismos aislados
mediante fermentacin en estado lquido4
%omparar la acti+idad del comple:o enzim(tico obtenido con respecto a la
acti+idad de una enzima comercial <TC'ED --64
8. M#"&'&l&5@ P)&(-#+":
8.1 A%+l$%#!"& # %'#!"%3%//%1! '# l&+ $%/)&&)5!%+$&+
Los microorganismos ser(n obtenidos de c$ips de yuca e;puestos a la intemperie
a contaminacin ambiental, por un tiempo de entre 6- a 6G das4 Para ello se
realizaran c$ip con grosores comprendido entre 6 y 6G mm4 F se dispondr(n en
bande:as4 )na +ez obtenido el o los microorganismos que est"n e:erciendo un
proceso degradati+o de los c$ips, se pasaran a una solucin con 6-A de $arina
de yuca, con agitacin constante a 6,- rpm, durante G das, al cabo del cual se
realizaran pruebas de azucares reductores, para determinar el o los
microorganismos con mayor capacidad de degradacin, y se sembraran en medio
solido de FP<, para su purificacin e identificacin4
26
5.2.1 M#'%& S1l%'& '# YPS 0Feast Peptone <oluble starc$3 4
40
4 De acuerdo con
distintos microorganismos presentes en la solucin de yuca, se aislar(n cada uno
de ellos de manera independiente y se colocaran en ca:as de petri esterilizadas
sobre las que se ser+ir( medio microbiolgico FP<4 Para descartar contaminacin
ambiental, se sembraran , blancos con 6 ml de agua destilada est"ril sobre medio
el mismo culti+o4
8.2.2 M#'%& () 3#)$#!"/%1!. <e preparan 9-- ml, en un erlenmeyer de 6
Litro, de medio de culti+o FP< lquido4 %onteniendo en 0gMl3J -4G de e;tracto de
le+aduraB O&,P@8, 6-B 0D&83,<@8, 6-4GB Mg<@8 9&,@, -4?B %a%l,, -4GB *e<@8
9&,@, -4-6?B Mn<@8 9&,@, -4--8B Kn<@8 &,@, -4--8, %o%l 7&,@, -4--79 y
$arina de yuca al 6 6-A como fuente de carbono, se Esterilizar(n a 66-V% durante
6G minutos y se colocar(n en agitacin orbital a 6,- r4p4m por un periodo de G
das4
El medio de culti+o para fomentacin ser( inoculado con un comple:o de dos
microorganismos aislados, utilizando G ml de solucin del comple:o microbial4
5.2.3 Cuantificacin de Biomasa del complejo
41
. <e $ar( determinacin por el
m"todo de peso seco y el m"todo de protenas.
Peso Seco. <e tomaran una muestra de ? ml cada ? $oras durante G das4
Las muestra de lle+aran $asta peso seco constante en una estufa a 6-G
grados4
%
B) ,E44 64 D@, <44 !ME<, D4 B4B CaI starc$ degrading amylase production by mi;ed culture of
Aspergillus niger and #acc'aromyces cerevisae groIn on sorg$um pomace4 EnJ African Journal of
Biotechnology. Vol. 4 (8), pp. 785-790, August 2005.
1
DEC2E680 <oe3 8A0DE4E68E6=DFGA0DAD12 Baria. Co=production o* a=amylase and b=
galactosidase by 7acillus subtilis in compleH organic substrates. 7ioresource :echnology. $% de
diciembre de $%%,. p. 1,$
27
Determinacin de protenas
42
. <e tomara ? ml de medio cada ? $oras4 El
proceso se lle+ar( a cabo realizando c$oque t"rmico y centrifugado de las
muestras durante 6- minutos a G--- rpm4 El sobrenadante obtenido se le
determinara protenas totales por el m"todo de Biuret4 Las muestras se
leer(n a una longitud de onda de GG- nm4 Los datos obtenidos se
compararan con una cur+a patrn de B<, para determinar la
concentracin de protenas presentes en la muestra4
8.2.7 edicin de producto
8?
. <e tomar(n ? ml del medio de culti+o, cada ?
$oras durante G das y se realizar( prueba de azucares reductores con ?,G acido
dinitrosaliclico, las lecturas se $ar(n a G8- nm, para glucosa y a G,- nm para
maltosa, los datos obtenidos se comparan con cur+as patrones de glucosa y
maltosa respecti+amente4
8.2.8 edicin de sustrato
44
. <e tomaran ? ml de muestra de la fermentacin
cada ? $oras, a las cuales se le se agregan del reacti+o yoduro2yodato y se
realizaran lecturas de absorbancia a una longitud de onda de 7,- nm4 Los datos
se compararan con la cur+a est(ndar preparada con $arina de yuca para
determinar la concentracin presente de sustrato en la muestra4
8.2.; Cur!a '# Cl%*)/%1! () ()&"#@!. <e $ar(n determinaciones de
protenas partiendo de una protena conocida 0lb=mina del suero Bo+ino o B<
de <igma34 Para ello se preparara una solucin est(ndar de B< al -,G A y se
diluir(n como se muestra en la Tabla ?4
$
251@081 2atish D.( 40CDA: 0niruddha 7. 5ydrolysis o* soluble starch using 7acillus
licheni*ormis a=amylase immobili;ed on superporous C18710D2. $+ de *ebrero de $%%.. p. ))+
3
02/51G B.3 90I0AD B. A thermostable a-amylase from a moderately thermophilic Bacillus
subtilis strain for starch processing. 9ornal E* Jood 1ngineering. $) de mar;o de $%%-. p.),1

C51GGF 5.B.( 5E220AC :owhid( 0C@0G B.C. Extracellular Glucoamylase from the Isolate Aspergillus
fumigates. 4aKistan 9ournal o* 7iological 2ciences. $%%. p. 1)+).
28
Tabla ?4 Diluciones para la construccin de la cur+a de calibracin para Biuret4

<e mezcla bien, y se de:a reposar por ?- minutos, para leer en el a una `4 a GG-
nm
8.2.= C-). '# Cl%*)/%1! () Ml"&+ 2 Gl-/&+. <e establecer( una cur+a
con D2Maltosa y otra con D2glucosa, para con+ertir las lecturas de absorbancia de
las muestras de fermentacin a unidades de acti+idad enzim(tica de la amilasa,
es decir, la liberacin de un micromoles de az=car reductor, calculado como
maltosa o glucosa por minuto ba:o las condiciones del ensayo 0+er Tabla 834
Tabla 84 Diluciones para la construccin de la cur+a de calibracin para Maltosa4
Tubos
<olucin 0ml3
6 , ? 8 G 7
DD< 64- 64- 64- 64- 64- 64-
<olucin Est(ndar Maltosa o 'lucosa al -,GA ,4G ,4- 64G 64- -4G -4-
&,@ 74G 94- 94G .4- .4G /4-
las solucin de D2maltosa y D2glucosa se les adicionara DD< y se pondr(n en
agua $ir+iendo por G minutos, se de:a reposar, y se le agrega agua $asta
completar 6- ml seg=n la tabla, las lecturas se realizaran a ` a G,- nm para
maltosa y a G8- nm para glucosa
El comple:o enzim(ticos obtenido en cada muestra en los diferentes das, se
leer(n a la misma longitud de onda que las cur+as de calibracin4 Para ello se
realizaran ? repeticiones para cada muestra, tanto para determinar maltosas,
glucosas y protenas4
29
Tubos
<olucin 0ml3
6 , ? 8 G 7
Biuret .4- .4- .4- .4- .4- .4-
<olucin Est(ndar B< ,4- 647 64, -4. -48 -4-
&,@ -4- -48 -4. 64, 647 ,4-
8.2.8 C%!C"%/ '#l /&$(l#6& #!9%$:"%/&. El comportamiento enzim(tico del
comple:o obtenido por la fermentacin lquida se comparara con el comple:o
comercial de amilasa 0stargen --63, determinando los factores que afectan la
accin cataltica del comple:o de amilasas, analiz(ndolos ba:o un modelo
superficie de respuesta, con dise>o compuesto centralJ ,^? b principal, de
acuerdo con los ni+eles y factores mostrados en la tabla G4 Los datos obtenidos se
analizaran con el softIare estadstico <tatgrap$ics +ersin G46
Tabla G4 *actores y ni+eles para e+aluar la acti+idad enzim(tica
F/"&)#+ U!%''#+
N%.#l#+
I!3#)%&) S-(#)%&)
Dosis ml de caldo enzim(ticoMg de pulpa base seca -4G 64-
p& dimensional 8 G4G
Temperatura H% ?-4- G-
;. R#+-l"'&+ E+(#)'&+
La base del estudio, an(lisis, desarrollo y aplicacin de este proyecto es producir
un comple:o de enzimas amilasas a partir de $ongos, con el ob:eto de determinar
la aplicabilidad de dic$as protenas en los procesos agroindustriales del
departamento4 Este comple:o ser+ir( como base para la planeacin de muc$os
procedimientos industriales como la $idrlisis del almidn, el cual presenta
ele+ados costos en las empresas del departamento de %rdoba, especialmente
plantas de biocarburantes4
=. E+")"#5% C&$-!%//%1!:
30
Los resultados de este proyecto ser(n editados mediante formatos de informes o
traba:os de in+estigacin en re+istas y ponencias en encuentros de in+estigacion4
dem(s,
8. E+")"#5%+ /&! #l $#'%&
tra+"s de conferencias, foros yMo ponencias institucionales internas yMo e;ternas,
es un medio apto para la promulgacin del ob:eto, m"todo, resultados y alcance
del estudio de este proyecto4 Ba:o este concepto, se desea di+ulgar el propsito de
lle+ar a cabo este proyecto y a su +ez demostrar la realidad de los efectos que
traera consigo aplicarlo en escala industrial4
<. C)&!&5)$ '# /"%.%''#+
T%#$(&
A/"%.%''
M#+#+
1 2 0 7 8 ; = 8 < 10 11 12
Cecopilacin de bibliografa
Ta:ado de c$ips de yuca y seleccin
de lugar para contaminacin
microbial
islamiento e #dentificacin de
microorganismos
Preparacin de los medios de
culti+o solido y liquido
Muestreo y an(lisis del medio
Estudio de la cin"tica
%omparacin de cin"tica con
<TC'ED --6
#nterpretacin de los resultados
Publicacin de informe final
31
10. B%*l%&5)3@
B), E44 64 D@, <44 !ME<, D4 B4B CaI starc$ degrading amylase
production by mi;ed culture of Aspergillus niger and #acc'aromyces cerevisae
groIn on sorg$um pomace4 EnJ frican !ournal of Biotec$nology4 Nol4 8 0.3,
pp4 9.G29/-, ugust ,--G
<'&EC M4B !N#D M4B C&MD <4)B LE''E C4L4B A t'ermostable a(
amylase from a moderately t'ermop'ilic "acillus subtilis strain for starc'
processing4 ,/ de marzo de ,--74 !ournal of *ood Engineering4
%MPBELL <ara$ L4B T$e continuous breIering of beer Pen lneaQ dsiponible
en III4re+ista+irtualpro4com4 consultado -G de no+iembre de ,--94
%CCEC, !orgeB produccin y aplicacin de las enzimas industriales4 ,. de
febrero de ,--?4 Ce+ista de biotecnologa en el sector agropecuario y
agroindustrial4
%<T\E,*4]4B DMM, <44 Los tanques cilindro2cnicos y el tiempo de
guarda de la cer+eza4 #ndustria cer+ecera4 Pen lineaQ4 Disponible en
III4re+ista+irtualpro4com4 %onsultado el 9 de agosto de ,--94
%<TC@ %4B DN< %4B %C@ @B P#\EC@< F4 Obtencin de amilasas
fngicas a partir de Aspergillus sp. aislado de semillas de lentejas. %onsultado
en pagina oficial de )ni+ersidad !orge Tadeo Lozano, Bogot( 1 %olombia4
III4utadeo4edu4co4 *ec$a de consultaJ-, de marzo de ,--.4
%&ECCF &4M4B &@<<#D, ToI$idB DWC M4D4 2-tracellular =lucoamylase
from t'e >solate Aspergillus fumigates. PaListan !ournal of Biological <ciences4
,--84 p4 6/./
D!EOC#*2DO&M@)%&E <4B '&EC#B#2@)LM# KB MEC#&# K4
BEDDM@)D L4 pplication of a statistical design to t$e optimization of
culture medium for a2amylase production by spergillus niger T%% 678-8
groIn on orange Iaste poIer4 66 de marzo de ,--G4 !ournal of *ood
Engineering4
32
D&N#, #ra:B EMT#K#, 'iti 4 Production of " Amylase by Flocculant Yeast.
Paistan !ournal of "iological #ciences. $%%&
#)BMB, Enzyme Domenclature4 Pen lneaQ4
R$ttpJMMIII4c$em4qmul4ac4uLMiubmbMenzymeME%?M,M6M,4$tmlS4 Pconsultado el
6- de febrero de ,--.Q
M#<OEN#%& *4B %oc$ran, B4B Lunday, D4 Euantitati+e nalysis of mylase
Enzyme Oinetics4 %onsultado en R $ttpJMMIII4tamu2
commerce4eduMfacultyMfmisLe+ic$MS4 ?consultadoJ-6 de marzo de ,--.Q4
M#T#D#EC#, <ydneiB <@)K, nneB <%&CDO, ugusto, &EDD#D', Marilene4
Enzymatic detergent formulation containing amylase from Aspergillus nigerJ
comparati+e study Iit$ commercial detergent formulations4 Bioresource
tec$nology4 6/ de agosto de ,--G4
M)DD@ L#MEDTC#@. Aplicacin de las en/imas en la produccin
industrial. %onsultado enJ
$ttpJMMIII4alimentariaonline4comMapadminMimgMuploadMM--,[enzimas8W<*4
pdf. ?consultadoJ6- de febrero de ,--.Q
@L#NE#C !oao CB N#E#C dairB K%K)O B4 PriscilaB %@CDED)D<# BeatrizB
M#DCD# !anaYna 4B P)C'TT@ EduardoB L!@L@ *ranco4 "eta(amylase
e-pression and starc' degradation during banana ripening4 6- de no+iembre
de ,--G4 Post$a+erst Biology and Tec$nology
@L)<D!@ 4 #saacB D'%&# 4 Edit$B #&)@M @4 *lorence4 .omparative
studies on a(amylases from malted mai/e )0ea mays*1millet )2leusine
coracana* and #org'um )#org'um4 G de mayo de ,--74 %arbo$yfrates
Polymers
C!'@PLD 'obinat$, OC#<&DD %$andrara:B a(Amylase production
from catabolite derepressed "acillus subtilis 8..9%& utili/ing sugarcane
bagasse 'ydrolysate -6 de :unio de ,--94 Bioresource Tec$onology4
CM%&DDCD <umitraB PTEL nil, MD&ND Oesa+anB %&DDCD
<and$ya4 Alp'a Amylase from a Fungal .ulture =rown on Oil .aes and >ts
Properties. Brazilian arc$i+es of biology and tec$onology4 !unio de ,--84
<L< &, MabelB C@DC#')EK C, MariluB PECEK '4, ManuelB PECEK C,
Cenato4 Amylase production by Aspergillus niger in submerged cultivation on
33
two wastes from food industries. -G de marzo de ,--G4 !ournal of *ood
Engineering4
<&EWLE <atis$ D4B PDD#T nirudd$a B4 &ydrolysis of soluble starc$ using
Bacillus lic$eniformis a2amylase immobilized on superporous %ELBED<4 ,.
de febrero de ,--9
TC#PT&# Palla+iB LE''#@, LeilaB MD<*ELD, !o$annaB )LBC#%&2
&@*MDD, CenateB Oayast$a, r+ind4 lp$a2 amylase of mung bean 0+igna
radiata3 correlation of bioc$emical properties and terciary structureby
$omology modelling4 ,? de mayo de ,--94 P$ytoc$emistry
W#<EMD, lanB Manual de biotecnologa de las enzimas4 Editorial cribia
<44 Karagoza2 Espa>a4 6/.G4
K@E O, Maria4 .oproduction of Alfa( amylase and beta(galatosidase by
bacillus subtitulis in comple- organic substrates4,- de diciembre de ,--G4
Bioresource Tec$nology
11. "suarios Directos e #ndirectos
Entre los interesados en los resultados de este proyecto se encuentranJ
Plantas de alco$ol carburante
'rupos y centros de in+estigaciones
12. Posi$les Pares %!aluadores
N&$*)#+ 2
A(#ll%'&+
C)5& I!+"%"-/%1! T#lC3&!&
34
D. P)#+-(-#+"&
Tabla 1. PRESUPUESTO GLOBAL DE LA PROPUESTA POR FUENTES DE FINANCIACION
RUBROS
FUENTES
TOTAL F/-l"' '# I!5#!%#)@
A5)&%!'-+")%l
P")&/%!'&)
PEC<@DL 5 6,4?/.48-- 5 6,4?/.48--
EE)#P@ 5 648.-4--- 5 ?-4.784-8- 5 ?,4?884-8-
MTEC#LE< 5 ,48G?4.86 5 ,48G?4.86
N#!E<
B#BL#@'C*# c
<@*TWCE
P)BL#%%#@DE<c
<ECN#%#@< TE%D#%@<
%@D<TC)%%#@DE<
MDTED#M#EDT@
DM#D#<TC%#@D
@TC@<c
TOTAL D 7=.1<;.281
Tabla 2. PRESUPUESTO GLOBAL DE LA PROPUESTA POR VIGENCIAS
RUBROS AEO 1 AEO 2 AEO 0 TOTAL
PEC<@DL 5 6,4?/.48-- 5 6,4?/.48--
EE)#P@ 5 ?,4?884-8- 5 ?,4?884-8-
MTEC#LE<
5 ,48G?4.86 5 ,48G?4.86
N#!E<
B#BL#@'C*#
<@*TWCE
P)BL#%%#@DE<
<ECN#%#@< TE%D#%@<
%@D<TC)%%#@DE<
MDTED#M#EDT@
DM#D#<TC%#@D
@TC@<
TOTAL D 7=.1<;.281
35
Tabla 3. DESCRIPCION DE LOS GASTOS DE PERSONAL

P)"%/%(!"#
N&$*)#
FORMACION FUNCION
DEDICACION
FORAS
DEDICACION
N&. MESES
RECURSOSG#! (#+&+ /&l&$*%!&+H
TOTAL
FUENTE 1
Eder Durango
Ballesteros
Ms%4 Biotecnologa #n+estigador Principal 84 6, *ac4de #ng4 groindustrial 5 8477G47--
lfonso Bautista
!im"nez
Ms%4 Microbiologa %oin+estigador ,4 G *ac4 de #ng4 groindustrial 5 /9,4---
#bet$ %epeda !im"nez
Esp, #ng4 De
alimentos4
%oin+estigador ,4 G *ac4 de #ng4 groindustrial 5 /9,4---
&"ctor Tobn 'uzm(n #ng4 groindustrial u;iliar 74 6, *ac4 de #ng4 groindustrial 5 G49..4.--
TOTAL D 12.0<8.700
Tabla 4. DESCRIPCION DE LOS EQUIPOS QUE PLANEA ADQUIRIR
EQUIPO AUSTIFICACION
RECURSOS
TOTAL
P")&/%!'&)
Planc$a de calentamiento marca sc$ott 2 modelo slL,2 con
placa en cer(mica
Preparacin de muestras y pruebas de an(lisis
]
5 7,-4---
Termmetro digital %ensar temperatura de las muestras ] 5 .7?4-8-
Espectrofotmetro n(lisis y determinacin de compuestos en muestra ] 5 ,G4---4---
De+era2congelador de / pies %onser+acin de muestras ] 5 9--4---
%ronometro digital4 %assio modelo $s2? %ontrol de tiempo en las pruebas ] 5 .64---
gitador magnetico &omogenizacin y preparacin de medios ] 5 ,46--4---
Cefractmetro digital port(til Medicin de alco$ol ] 5 64G--4---
TOTAL D 00.8;7.070
Tabla 5. DESCRIPCION DE LOS EQUIPOS QUE PLANEA UTILIZAR
EQUIPO AUSTIFICACION
UNIDADGESH A LA
CUAL PERTENECE
EL EQUIPO
F&)+ '#
+%5!/%1! l
()&2#/"&
Vl&)
B&)
Vl&) "&"l
gitador orbital gitacin de los medios de culti+o Lab4 De biotecnologa . 5 .--4---
%entrfuga eba,- <eparacin de slidos Lab4 De biotecnologa , 5 ,.-4---
p&metro Medicin de p$ de las muestras y soluciones Lab4 De biotecnologa 6 5 6G-4---
Balanza analitica Pesa:e de reacti+os para soluciones Lab4 De biotecnologa , 5 ,G-4---
TOTAL D 1.780.000
Tabla . DESCRIPCIONDE LOS !ATERIALES A UTILIZAR
36
MATERIAL AUSTIFICACION
RECURSOS
TOTAL
U!%''#+
A/'C$%/+
P")&/%!'&)
Erlenmeyer ,G- ml Cecipiente para culti+os 5 ,4/--,-- 5 ,4/--,--
Erlenmeyer 7-- ml Cecipiente para culti+os 5 84-7-,-- 5 84-7-,--
Erlenmeyer 6--- ml Cecipiente para culti+os 5 ?8.,-- 5 ?8.,--
Transferpipetas de 6-- a 6--- %ontrol de muestras tomadas 5 ,4?,-,-- 5 ,4?,-,--
glucosa an$idra 0G--g3
Preparacin de est(ndares para cur+as
de calibracin
5 ?./497- 5 ?./497-
maltosa 06--g3
Preparacin de est(ndares para cur+as
de calibracin
5 6,64.-- 5 6,64.--
B< 0G--'3
Preparacin de est(ndares para cur+as
de calibracin
5 6?749.9 5 6?749.9
agar pda
Multiplicacin y aislamiento de
microorganismos
5 ,-748.- 5 ,-748.-
e;tracto de le+adura 0G--g3 <uplemento para el medio de culti+o 5 ,6G4779 5 ,6G4779
sulfato acido de potasio0,G-g3 <uplemento para el medio de culti+o 5 ,9G4G-- 5 ,9G4G--
sulfato de magnesio $epta$idratado0G--g3 <uplemento para el medio de culti+o 5 ?6?4,-- 5 ?6?4,--
sulfato de manganeso tetra$idratado06--g3 <uplemento para el medio de culti+o 5 G?4G,, 5 G?4G,,
sulfato de zinc mono$idratado0G--g3 <uplemento para el medio de culti+o 5 ,774.-- 5 ,774.--
sulfato de $ierro $epta$idratado0G--g3 <uplemento para el medio de culti+o 5 ,?,4--- 5 ,?,4---
cloruro de cobalto $e;a$idratado06,Gg3 <uplemento para el medio de culti+o 5 68?4?97 5 68?4?97
sulfato de amonio06Lg3 <uplemento para el medio de culti+o 5 ./4?,- 5 ./4?,-
TOTAL D 2.780.871
37