Cuando nos hablan de un biorreactor, por lo general
pensamos en un tanque agitado, de metal con varios
medidores. Sin embargo, no son los nicos tipos. NBS (New Brunswick Scientific)-- Mayor proveedor de biorreactores en forma de tanque, de diferentes tamaos. Reactor Bioflow 3 -- NBS 5L El primer reactor que se tuvo en el Tec y se mont. Fcil de utilizar. Como es de vidrio, se puede ver al interior. No se le pueden controlar muchas cosas, pero se pueden controlar las ms importantes: pH, oxgeno disuelto, temperatura y nivel de agitacin. Tiene bombas para poder alimentar o remover sustancias. Modelos de biorreactores comerciales: Reactor BioPro -- NBS 75L Versin escalada del reactor Bioflow. Es mucho ms complejo, se puede controlar lo mismo que en el Bioflow, pero es mucho ms preciso. Por ejemplo, tiene medidores de flujo, pero tambin controladores de flujo. Se pueden administrar 4 gases (incluso ms, pero la configuracin bsica es con 4 gases). Se puede controlar por ejemplo el CO2, que puede servir para controlar pH. En procesos relacionados con bacterias, por lo general se usan cidos o bases para regular el pH. Cuando se cultivan clulas de mamfero, se puede inyectar CO2 para regular el pH, que es un mtodo ms sofisticado. Debido al metabolismo de las clulas de mamfero, el pH tiende a subir (es decir, se vuelve ms bsico). Por lo tanto se puede inyectar CO2 para que se convierta en cido carbnico y bajar el pH hasta llegar al set- point. Tiene todas las caractersticas de un biorreactor. Es decir, es un recipiente donde puede ocurrir una reaccin biolgica. Muchos de los cultivos que se hacen de forma rutinaria en cajas petri son cultivos slidos. Por lo tanto la agitacin de la caja es importante slo durante la inoculacin. Pero cuando se cultivan clulas de mamfero se utiliza medio lquido. Sin embargo, a pesar de que se utiliza medio lquido, no se incuba agitando. Se han hecho pruebas en el laboratorio y para algunos cultivos, se ha logrado mejorar el crecimiento de las clulas gracias a incubar la caja petri con una ligera agitacin. Caja petri como biorreactor: En algunos lugares del mundo se ha comenzado a analizar la posibilidad de producir sustancias de alto valor en ganados bovinos. Esto ya se hace. En Argentina, se est contemplando la posibilidad de producir eritropoyetina en leche de vaca. Este tipo de reactores son procesos de alto inters desde el punto de vista regulatorio. Como ingenieros de procesos, se debe de tener mucho cuidado con el problema de la contaminacin y calidad. Los gobiernos tienen organismos regulatorios que se encargan de asegurarse que existan ciertos estndares de calidad; en EE. UU. es la FDA, en Mxico es la COFEPRIS (Comisin Federal para Control de Riesgos Sanitarios). Considerando el hecho de produccin de una sustancia como la nitropoyetina, en la actualidad se produce con plantas estrictamente regulados para evitar contaminacin. Sin embargo, al utilizar animales relativamente "sucios" existen preocupaciones en este sentido. La forma de produccin se da en establos. Al cambiar el concepto de biorreactor, se puede cambiar incluso la forma de regular el proceso. Antes los reguladores estaban acostumbrados a llegar a una planta y ver tanques. Ahora, al hacer regulaciones para este tipo de biorreactores se deber conocer las condiciones de ordea, el registro de pesos, etc. Otro ejemplo an ms sorprendente es el caso de un cientfico mexicano que est tratando de producir protenas de alto valor en orina de conejo. Hay muchas cuestiones que considerar, por ejemplo, que el medio de la orina es desnaturalizante para muchas protenas. Animales como biorreactores: Eritropoyetina-- una de sus funciones es mejorar el sistema hematopoytico, por lo tanto incrementan la cantidad de clulas rojas (eritrocitos) en la sangre. Tiene muchas aplicaciones mdicas, por ejemplo, para tratar anemia crnica. Es una protena simple de bajo peso molecular. COFEPRIS -- regula todo lo que entra a un ser humano, es decir alimentos pero sobre todo frmacos. Cambios en el proceso de regulacin: Antes se meda el producto final y se verificaba que cumpliera con ciertos estndares. En la actualidad, la FDA ahora est cambiando. Ahora se le da mucha importancia a que la empresa conozca bien su proceso de fabricacin. Es decir, ahora se est haciendo mucho ms nfasis en el proceso de fabricacin y no nada ms en los ltimos pasos. Antes al hablar de una planta de procesos se pensaba en una fbrica con tanques agitados. Sin embargo, ahora se est considerando utilizar plantas vegetales como parte del proceso, es decir, hacen las funciones de un biorreactor. Por ejemplo, en un sitio de incubacin en la Universidad de Texas A&M, existe un profesor que modifica genticamente caas de azcar para producir protenas de alto valor. En ese caso especfico, el profesor disea especficamente la caa dependiendo de las necesidades de lo que se desea producir. La propiedad intelectual se vende y luego se puede comercializar. Ya se han producido tambin vacunas en plantas. El Dr. Cardinaux fue uno de los pioneros de esto. Trabajando para Dupont, el logr producir una vacuna que se puede expresar en plantas. Es importante desmitificar algunas creencias sobre este tipo de produccin. Al usar plantas como biorreactores para producir vacunas, no quiere decir que se va a producir una vacuna que se pueda "comer" en un pltano. Ms bien, se trata de sintetizar la vacuna en la planta y luego se extrae. Esto se hace con el propsito de reducir costos, ya que todava es muy caro producir este tipo de vacunas en clulas de mamfero. A pesar de que se ha intentado hacer que la misma planta sirva como una vacuna, existen dos problemas principales: la dosis y que la protena resista el tracto digestivo. As que para utilizarlo como vacuna, es muy poco probable que se logre producir una vacuna que se pueda "ingerir". Sin embargo, s se tiene contemplado modificar plantas comestibles con el propsito de utilizarlos como suplementos alimenticios, como el caso del Golden Rice. En el Tec, existe una profesora que est tratando de hacer algo similar con el cido flico y el frijol. Plantas como biorreactores: Cuba: En Cuba ya se aprob un anticuerpo para uso teraputico producido en planta. Las clulas tienen una gran cantidad de procesos muy complejos que se pueden aprovechar para utilizarlos como biorreactor. La clula como biorreactor: En la industria cervecera, se descubri que las levaduras envejecen. Al reproducirse por gemacin, las clulas de la levadura se queda con una cicatriz. Una manera fcil de saber que tan vieja es una levadura conocer la cantidad de cicatrices. Ese cambio en la membrana celular hace que cambien caractersticas macroscpicas de la clula, por El fenmeno de la floculacin en la industria cervecera es muy complejo. En algunos casos, las levaduras al envejecer, no sedimentan sino que flotan. Sin embargo, como retirar las clulas que flotan es ms complicado que retirar las clulas que sedimentan, Ejemplos de Biorreactores mi rcol es, 27 de enero de 2010 06:08 p.m. Biorreactores y Biorreaccin Page 1 Se puede analizar cada clula como un biorreactor. En los tanques agitados, tenemos miles de millones de clulas trabajando en conjunto para realizar una biorreaccin. Para complicar el proceso, en muchos tipos de tanques no se usan clulas de una sola especie, e incluso si se usan clulas de la misma especie pueden existir diferencias entre ellas. Toda esa distribucin biolgica en un reactor heterogneo, requiere un anlisis ingenieril difcil y complejo pero interesante. La mayora de las veces que se haga modelacin, se harn suposiciones muy radicales para simplificar este proceso. Tanques agitados: Las clulas tienen una gran cantidad de procesos muy complejos que se pueden aprovechar para utilizarlos como biorreactor. La clula como biorreactor: En la industria cervecera, se descubri que las levaduras envejecen. Al reproducirse por gemacin, las clulas de la levadura se queda con una cicatriz. Una manera fcil de saber que tan vieja es una levadura conocer la cantidad de cicatrices. Ese cambio en la membrana celular hace que cambien caractersticas macroscpicas de la clula, por ejemplo, cambia la densidad, las clulas ms viejas tienen una mayor densidad y sedimentan ms. Como las levaduras ms viejas no producen tan bien, lo que se hace es que se modifica la temperatura para que las levaduras ms viejas sedimenten y se puedan retirar del proceso. Se debe de ser consiente que la biotecnologa se tiene que modificar de acuerdo a las necesidades de la clula que se puede manejar. El proceso biotecnolgico por lo general se centra en transformar un sustrato en un producto de inters. El sustrato casi siempre se presenta como solucin y no suspensin, porque muchos organismos no siempre pueden asimilar el sustrato como suspensin. Retomando el ejemplo de la industria cervecera, el sustrato son las azcares fermentables, y el producto incluye compuestos como etanol, CO2, etc. Sin embargo existen otros subproductos, como la biomasa. El proceso de produccin de protenas dentro de las clulas es muy complejo. Principalmente ocurre en el retculo endoplsmico, gracias a las ribosomas. La complejidad va ms all de lo que se ve en biologa celular bsica. Por ejemplo, al momento de producir protenas, existen chaperonas que van dando la forma particular de la protena para que la protena pueda ejercer de forma correcta sus funciones. Tambin, muchas protenas se deben de glicosilar. Es importante recalcar que dentro de este mismo proceso de fabricacin de protenas dentro de las clulas, el ambiente es muy heterogneo. Se producen protenas muy distintas con distintos requerimientos. El fenmeno de la floculacin en la industria cervecera es muy complejo. En algunos casos, las levaduras al envejecer, no sedimentan sino que flotan. Sin embargo, como retirar las clulas que flotan es ms complicado que retirar las clulas que sedimentan, por lo tanto no se utilizan tanto en la industria cervecera moderna. El proceso de la floculacin no depende nada ms de las cicatrices, tambin hay otros factores que afectan. Yx/s -- Yield, x por lo general se usa para designar biomasa y s cantidad de sustrato. En procesos anaerbicos por lo general se produce menos biomasa que en los procesos aerbicos. Si se quisiera producir levadura como biomasa, en lugar de cerveza, se tiende a establecer un proceso aerbico en lugar de anaerbico. Esto resulta en un Yx/s mayor. Esta produccin de biomasa se puede hacer con el propsito de vender la levadura para produccin de pan. Este ejemplo sirve para ver como manipulando condiciones del proceso, se pueden producir dos productos de alto valor con el mismo organismo. Esto sin siquiera hablar de ingeniera gentica. Hasta ahora se habla nicamente de cultivar clulas. Sin embargo, si se desea crecer un tejido dentro de un biorreactor es mucho ms complicado porque las clulas deben tener una jerarqua y una forma especfica. Hay grupos de investigacin que se han dedicado a investigar este tipo de posibilidades. Algunos utilizan andamiaje con una sustancia biocompatible. Para este proceso, es importante estudiar los fenmenos de transporte para asegurar que dentro de la figura tridimensional del tejido se hagan llegar los nutrientes necesarios para que las clulas del tejido puedan proliferar. Ingeniera y cultivo de tejidos en biorreactores: Los medios de cultivo de clulas de mamfero, por lo general son rosas porque se utiliza un marcador de pH de fenolftalena. La cantidad de CO2 est incrementando y existe mucha presin para capturar es CO2. Las microalgas son 10 veces ms eficientes que las plantas para capturar CO2. En un principio no parece ser muy difcil crecer microalgas porque requieren nicamente CO2 como fuente de carbono, de hecho es comn ver crecimiento de microalgas en muchos lugares, incluso charcos. El problema no es tanto hacer llegar el CO2 a las microalgas, sino ms bien hacer llegar la luz a todas las microalgas para que hagan fotosntesis. En un principio el material del reactor no puede ser vidrio debido a la dimensin de los biorreactores que se pretende manejar. Por lo tanto se deben de usar plsticos. Tambin, el tamao de los reactores hacen que se complique la llegada de luz a muchas partes de la microalga. Entonces el problema aqu es el escalamiento. Hacer este tipo de reactores en el laboratorio no es difcil, sin embargo, conforme aumenta el tamao se complica la situacin. Fotobiorreactores para cultivo de microalgas: El medio de cultivo para clulas de mamfero es muy caro. Sin embargo, en la actualidad muchos de los frmacos que intentan producir en la actualidad, se utilizan clulas de mamfero. Al momento de escalar el proceso, se requiere de mucho anlisis para conocer las condiciones ptimas del proceso a la escala que se desea. Este proceso de escalamiento de condiciones se conoce como screening. Para prevenir estos problemas y no gastar tanto, se ha tenido la tendencia de reducir los reactores en tamao. Applikon tiene un microbiorreactor comercial. El diseo de estos microbiorreactores consiste en una mquina con varios tubos que tiene una membrana en la parte de abajo por donde se inyectan los gases que se requieren para llevar a cabo el proceso. Estos microbiorreactores son tiles para medir condiciones que pueden ser tiles para el proceso de screening. As en una sola corrida se pueden modificar muchas condiciones sin gastar mucho material ni invertir mucho dinero. Microrreactor para cultivo de clulas de mamfero: Applikon-- Es competencia de NBS. Hace ms investigacin y por lo general tiene productos ms novedosos. Es holandesa. Biorreactores y Biorreaccin Page 2