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(ESPECTROFOTOMETRA UV-VIS)

PROF. MARLENE MORA


2013
MM 2013
La distancia entre dos picos (o dos valles) de una onda se
llama longitud de onda ( = lambda).

LONGITUD DE ONDA
MM 2013
UV
Violeta Azul Verde Amarillo Naranja Rojo
IR
4000 A Espectro Visible 7500 A

Ultravioleta Luz visible Infrarrojo
10
2
-10
4
~ 10
4
10
4
-10
7
Las longitudes de onda mas largas que las del rojo se les
conoce como infrarrojas y las mas cortas que el violeta,
ultravioletas.
MM 2013
Cuanto ms larga la longitud de onda de la luz visible
tanto ms rojo el color.
Asimismo las longitudes de onda corta estn en la zona
violeta del espectro.
MM 2012
La luz blanca est compuesta de ondas de diversas
frecuencias. Cuando un rayo de luz blanca pasa por un
prisma se separa en sus componentes de acuerdo a la
longitud de onda
MM 2012
Cmo se puede medir la radiacin que emiten o
absorben los cuerpos?.
Un aparato capaz de obtener el espectro de una
radiacin, es decir, de separar la radiacin en sus
componentes, se llama un espectroscopio.
Si el aparato es capaz de fotografiarla se llama un
espectrgrafo, y
Si es capaz de medirla diremos que se trata de un
espectrmetro.
Cuando es capaz de medir tambin la intensidad de la
radiacin, se llama espectrofotmetro.
MM 2012
MM 2012
MM 2012
COMPONENTES DE LOS INSTRUMENTOS ESPECTROSCPICOS
Los instrumentos usados para estudiar la absorcin o la emisin de la radiacin
electromagntica en funcin de la son conocidos como ESPECTROFOTMETROS y
constan de 5 elementos bsicos :
1. Fuente estable de energa radiante.
2. Dispositivo que asle una determinada regin del espectro.
3. Recipiente transparente a la radiacin para contener la muestra.
4. Detector de radiacin que convierte a la energa radiante en una seal de medida.
5. Indicador de seal : sistema de procesamiento y lectura de la seal
ESPECTROFOTOMETRO
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1 Fuente de luz
La misma ilumina la muestra. Debe
cumplir con las condiciones de
estabilidad, direccionabilidad,
distribucin de energa espectral
continua y larga vida. Las fuentes
empleadas son lmpara de tungsteno y
lmpara de arco de xenn.
MM 2012
FUENTES DE
RADIACIN Y
DETECTORES
En la Figura se
resumen los
diferentes
sistemas de
deteccin de la
seal as como las
fuentes usadas en
funcin de la
(regin espectral).
C
O
N
T
I
N
U
A
S
UV
Visible/IR
L

m
p
a
r
a

d
e

D
e
u
t
e
r
i
o
Arco de Xenn
L

m
p
a
r
a

d
e

W
o
l
f
r
a
m
i
o
1.- FUENTES DE RADIACIN
1.- FUENTES DE RADIACIN
Su misin es la generacin de un haz de radiacin con suficiente potencia de salida y
estabilidad para que se detecte y se mida con facilidad.
Pueden ser CONTINUAS , que emiten radiacin que varia su intensidad en un amplio y
DISCONTINUAS O DE LNEAS, que emiten un nmero limitado de lneas o bandas de
radiacin, cada una de las cuales abarca un limitado .
FUENTES USADAS EN ESPECTROSCOPA
FUENTE (nm) TIPO DE ESPECTROSCOPIA
CONTINUAS
Lmpara de Xenn 250-600 Fluorescencia molecular y Raman
Lmpara de
Hidrogeno/Deuterio
160-380 Absorcin molecular (UV)
Lmpara de Wolframio 350-2200 Absorcin molecular (Visible/IR cercano)
Lmpara de
Wolframio/Halgeno
240-2500
Absorcin molecular (UV/Visible/IR
cercano)
Lmpara de Nicrom 750-20000 Absorcin molecular (IR)
Lmpara de Nernst 400-20000 Absorcin molecular (IR)
Fuente Globar 1200-40000 Absorcin molecular (IR)
DE LINEAS
Lmpara de Ctodo hueco UV-Visible Absorcin y fluorescencia atmica
Lmpara de descarga sin
electrodos
UV-Visible Absorcin y fluorescencia atmica
Lmpara de vapor
metlico
UV-Visible
Absorcin atmica, Fluorescencia molecular
y Raman
Lmpara LASER UV-Visible-IR
Absorcin molecular , Fluorescencia
molecular y Raman
2.- Monocromador
Para obtener luz monocromtica, constitudo por las rendijas
de entrada y salida, colimadores y el elemento de dispersin.
El monocromador asla las radiaciones de longitud de onda
deseada que inciden o se reflejan desde el conjunto.
3.- Fotodetectores
En los instrumentos modernos se encuentra una serie de 16
fotodetectores para percibir la seal en forma simultnea en
16 longitudes de onda, cubriendo el espectro visible. Esto
reduce el tiempo de medida, y minimiza las partes mvils del
equipo.
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MONOCROMADORES
Dispersan la radiacin separando espacialmente las distintas de la luz policromtica
proporcionando bandas de anchura pequea. Varan de forma continua y en un amplio y al
mismo tiempo aslan una pequea banda de la luz policromtica.
COMPONENTES:
1. Rendija de entrada
2. Lente colimadora o espejo cncavo que produce un haz paralelo de radiacin
3. Elemento que dispersa la radiacin en sus longitudes de onda individuales: prisma o red
4. Elemento de enfoque de salida
5. Rendija de salida
C
O
M
P
O
N
E
N
T
E
S
Y

T
I
P
O
S

D
E

M
O
N
O
C
R
O
M
A
D
O
R
E
S
TEMA 3.- COMPONENTES DE LOS INSTRUMENTOS ESPECTROSCPICOS
TEMA 3.- COMPONENTES DE LOS INSTRUMENTOS ESPECTROSCPICOS
MATERIALES
DE LOS
COMPONENTES
OPTICOS
En la Figura se
muestran que tipo
de material se
emplea en funcin
de la (regin
espectral) para
cubetas , ventanas,
lentes, prismas y
selectores de .
celda de 5uL
La muestra se coloca en una cubeta* de
forma prismtica
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RECIPIENTES PARALAS MUESTRAS
Todos los mtodos espectroscpicos , excepto los atmicos emplean un recipiente que
contenga a la muestra.
Reciben el nombre de celda o cubeta y se fabrican de :
plstico o vidrio (para la regin Visible)
slice fundido (cuarzo) (para la regin Visible y UV por debajo de 350 nm e IR hasta
3000 nm )
vidrio de silicato para medidas entre 375 y 2000 nm (V e IR)
NaCl para la regin del IR
La longitud mas comn en la trayectoria de las cubetas para Visible y UV, suele ser de 1 cm,
aunque las puede haber menores o mayores.
Hay cubetas acopladas a los sistemas de medidas continuas (FIA o HPLC), a travs de las
cuales pasa el flujo de muestra.
TEMA 3.- COMPONENTES DE LOS INSTRUMENTOS ESPECTROSCPICOS
RECIPIENTES PARALAS MUESTRAS
TEMA 3.- COMPONENTES DE LOS INSTRUMENTOS ESPECTROSCPICOS
Cubeta: disolucin de medida
Refrigerante: bao termosttico ,
Peltier cooler
Portacubetas
Se asume que el tubo, celda o cubeta en la cual
se vierte la solucin a leer no debe desviar la
trayectoria de la luz como requisito para el
cumplimiento de la ley de Beer
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Como el cuarzo aparte de ser muy transparente presenta un
comportamiento constante ante la variacin de la longitud de
onda es comn que las celdas del espectrofotmetro o
colormetro sean de este material .
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RELACIN ENTRE ABSORBANCIA Y CONCENTRACIN: LEY DE BEER
Ley de Lambert-Beer: muestra cmo la absorbancia es
directamente proporcional a la longitud b de la trayectoria a travs de
la solucin y a la concentracin c del analito o especie absorbente.
c b a A c b A
a: cte de proporcionalidad llamada absortividad. (unidades Lcm
-1
g
-1
, si c=g/L)
b: longitud del camino que recorre la radiacin a travs del medio absorbente.
c: concentracin expresada en g/L (mg/L, ...) Cuando en la ecuacin la
concentracin viene expresada en mol/L, la cte de proporcionalidad se denomina
absortividad molar y se representa por (unidades Lcm
-1
mol
-1
. )
-Disoluciones que contienen ms de una clase de especies
absorbentes:
A = A
1
+ A
2
+ .... + A
n
Como A = b c
A =
1
b c
1
+
2
b c
2
+ . +
n
b c
n
Siendo 1, 2, , n los componentes absorbentes.
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Luz incidente (I
0
) Luz absorbida Luz emergente (I)
Longitud del medio
absorbente o ancho de la
celda
I
0
c = concentracin.
(nmero de partculas por
cm3)
a = absortividad
Cuando un rayo de luz monocromtica con una intensidad I
0
pasa a travs de una solucin, parte de la luz es absorbida
resultando que la luz emergente I es menor que I
0
b
a
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TRANSMITANCIA
Transmitancia: fraccin de
radiacin incidente transmitida
por la disolucin.
O
T
P
P
T
ABSORBANCIA
La absorbancia de una disolucin aumenta a medida que
aumenta la atenuacin del haz.
T
O
P
P
T A log log
P
T
potencia del haz de radiacin transmitida.
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Cada compuesto (de complejo a simple) presenta un espectro de
absorcin caracterstico
Las longitudes de onda con mayor absorcin (picos) correspondern
de forma general a aquellas con las que se leer la muestra para
determinar su concentracin
La relacin entre la absorbancia por una sustancia a una l
determinada y su concentracin es directamente proporcional es decir:
a mayor concentracin mayor proporcin de luz absorbida.
Absorbancia
Conc.
l
Absorbancia
l
Absorbancia
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As, el espectro de absorcin de la clorofila es:
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8.4.- LIMITACIONES DE APLICABILIDAD DE LA LEY DE BEER
A) Limitaciones reales de la ley
B) Limitaciones Qumicas
C) Limitaciones Instrumentales
La proporcionalidad directa entre absorbancia y
concentracin cuando b es cte presenta desviaciones:
La atenuacin de una radiacin es cuantitativamente
proporcional a ala concentracin de la especie absorbente
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8.4.- LIMITACIONES DE APLICABILIDAD DE LA LEY DE BEER
A) Limitaciones reales de la ley
-Disoluciones de concentracin elevada (c > 0.01 M) dan malos
resultados.
-La absortividad a y la absortividad molar dependen del ndice de
refraccin de la muestra.
B) Limitaciones Qumicas
Se produce cuando el analito se disocia, asocia o reacciona con el
disolvente para dar productos que presentan propiedades de
absorcin diferentes de las del analito.
HIn H
+
+ In
-
Color 1 Color 2
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8.4.- LIMITACIONES DE APLICABILIDAD DE LA LEY DE BEER
C) Limitaciones Instrumentales
El cumplimiento estricto de la Ley de Beer slo se observa para
radiaciones monocromticas (radiacin formada por una sola
longitud de onda) y stas en la prctica no se consiguen, ya que
con los dispositivos disponibles (filtros, monocromadores) se
obtienen una banda de longitudes de onda ms o menos
simtrica entorno a la deseada.
Otra desviacin: Presencia de radiacin parsita o dispersa.
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MM 2012
8.6.- ESPECIES ABSORBENTES
A) Absorcin por compuestos orgnicos
Dos tipos de e
-
son responsables de que las molculas absorban radiacin
UV-Vis:
- e
-
compartidos que participan directamente en la formacin de enlaces y
que estn asociados a ms de un tomo.
- e
-
externos no compartidos, localizados preferentemente entorno a
tomos como O, S, N y halgenos.(e situados en orbitales no enlazantes
n)
l a la que absorbe una molcula depende de la fuerza con que
retiene a sus distintos e
-
.
Enlaces sencillos C-C o C-H: l de la regin del UV de vaco (l<180 nm)
Enlaces dobles o triples: l de la regin del UV
Compuestos orgnicos que contienen S, Br y I: absorben en la regin UV
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ESPECIES ABSORBENTES
A) Absorcin por compuestos orgnicos con grupos cromforos
n orbitales no enlazantes presentes en compuestos con heteroatomos de O, S y
halgenos.
MM 2012
MM 2012
8.7.- APLICACIONES
CARACTERSTICAS DE LOS MTODOS ESPECTROFOTOMTRICOS
- Amplia aplicabilidad.
- Elevada sensibilidad: los lmites deteccin 10
-4
a 10
-5
M.
- Selectividad de moderada a alta.
- Buena exactitud: errores de concentracin 1-5% o incluso menores.
- Facilidad y comodidad en las medidas espectrofotomtricas.
- Se prestan a una fcil automatizacin.
CAMPO DE APLICACIN
- Especies absorbentes: compuestos orgnicos que contengan grupos
cromforos y especies inorgnicas como son los metales de transicin.
- Especies no absorbentes: los analitos reaccionan con un reactivo
para producir un compuesto absorbente.
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8.7.- APLICACIONES
APLICACIONES MEDIOAMBIENTALES
MM 2012
MM 2012
MM 2012
Existen en la actualidad
diversos tipos de aparatos con
los mismos principios los hay
mecnicos y digitales; unos
miden solo la luz visible, otros
son ms precisos y miden
tambin luz U.V. , Infrarroja, de
absorcin atmica (AA),
flurescencia de rayos-X de
emisin de plasma (ICP),,
multipropsitos (para medir
directamente la solucin con
suspensin, muestras slidas y
biolgicas), acoplado a
masas,etc..
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Diferentes tipos de espectrofotmetros
MCI
MCI
MCI
Para medir Luz Visible
Para medir Luz Visible y U.V.
Para medir Luz Visible y U.V.
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Spectronic 20 D Spectrnic 20
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Aplicaciones Estndar con Espectrofotmetro UV Mini
Modo fotomtrico para longitud de onda fija
Con el modo fotomtrico, Ud. puede medir la absorbancia o la transmitancia en la
longitud de onda fija. Anlisis cuantitativo fijo usando el mtodo Factor-K puede
tambin ser usado. Resultados son automticamente impresos o son mandados a la
puerta RS-232C. Con varios posicionadores de celda opcionales o con configuracin
sipper/auto-muestra, medidas continuas de muestras tambin es posible.
Modo espectro para barrido de longitud de onda
Con ese modo estndar, Ud. puede lograr espectro UV-Visible completo de
muestras de 190nm a 1100nm. Barrido repetido le permite a Ud. medir
automticamente cualquier cambio espectral en todo el rango. Tambin disponible
en la configuracin estndar, la funcin de procesamiento de datos espectral como
plotar grfico y deteccin de picos / valles.
Modo cuantificacin para anlisis de longitud simple
Este modo le permite a Ud. preparar curva de calibracin para determinaciones
fciles de concentraciones de muestras desconocidas. Estn disponibles modos de
uno, dos o tres longitudes de onda. Mtodos cuantitativos posibles de seleccionar
incluyendo factor-K, curva de calibracin de un punto o multi-puntos . Ajuste de
primero, segundo o tercero orden tambin son posibles de seleccionar.
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El TU1800/1800S es el ms popular espectofotmetro de P-General. Su
ptica adopta el sistema de medicin SPLIT-BEAN con un detector formado
por dos fotodiodos de estado slido de alta sensibilidad.
Las operaciones del instrumento estan controladas a travs de un microchip
interno en conjunto con una pantalla de cristal lquido (LCD) y un teclado
Soft-Touch con salida para impresora. Su compartimiento es para 8 celdas y
adems posee una fuente de luz accesible.
El TU1800/1800S efecta mediciones fotomtricas, mediciones espectrales y
cuantitativas, es fcilmente operable con caracterstiCAS sobresalientes,
Escaneo de longitudes de onda automtico entre 1100-200 nm., chequea
automticamente la linea de base.
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Las muestras no deben tener burbujas, encontrarse
turbias o con precipitados.
El volumen de la muestra en la cubeta, no debe ser
excesivo para evitar que se desborde, en caso de
que sucediera, se debe limpiar con un pao limpio
o papel absorbente suave, para evitar rayarla.
La cubeta se sujeta por los lados opacos.
La cantidad a adicionar es, mximo, hasta partes
de la cubeta
No se deben derramar lquidos, sobre todo
solventes, cidos o lcalis; dentro del contenedor
de la cubeta, se puede daar parte del mecanismo
Se debe mantener, el espectrofotmetro, limpio y
libre de humedad
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