Biologia Celular LIBRO

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLGICAS
DEPARTAMENTO ACADEMICO DE BIOLOGIA

AREA DE BIOLOGA Y GENETICA

TEXTO UNI VERSI TARI O PARA LA CARRERA
PROFESI ONAL DE BI OLOGI A

M. Cs. Ramn Gustavo Quispe Montoya

2 0 1 3

UNIVERSIDAD NACIONAL DE
SAN ANTONIO ABAD DEL
CUSCO
BI OLOG A CELULAR M. Cs. R.Gustavo Quispe Montoya
1
CONTENIDO

UNIDAD DIDACTICA N 01: ESTRUCTURA Y ORGANIZACIN MOLECULAR DE LAS CELULAS

CELULA 5
PROPIEDADES BASICAS DE LAS CELULAS 5
TIPOS FUNDAMENTALES DE CELULAS EN LA NATURALEZA 6
CELULA PROCARIOTICA 6
ESTRUCTURA GENERAL DE UNA CELULA BACTERIANA 7
ALGAS VERDE AZULES 12
MICOPLASMAS 13
RICKETTSIAS 13
VIRUS 14
VIROIDES 16
PRION 16
INTERFERON 17
CELULA EUCARITICA 18
ESTRUCTURA Y ORGANIZACIN 18
DIVERSIDAD MORFOLGICA DE LAS CELULAS EUCARIOTICAS 18
TAMAO CELULAR 19
VOLUMEN CELULAR 19
BASES MOLECULARES DE LAS CELULAS 20
ACIDOS NUCLEICOS 21
COMPOSICIN QUMICA 21
ESTRUCTURA DE LOS ACIDOS NUCLEICOS 22
ORGANIZACIN MOLECULAR DEL ADN: MODELO DE WATSON Y CRICK 24
NIVELES DE ORGANIZACIN MOLECULAR DEL ADN EN LA CELULA 26
REPLICACIN DEL ADN 27
ERRORES EN LA REPLICACIN 34
REPARACIN DEL ADN 36
ORGANIZACIN MOLECULAR DEL ARN 37
TRANSCRIPCION O SNTESIS Y PROCESAMIENTO DE ARN 37
ARN RIBOSMICO 38
ARN DE TRANSFERENCIA 38
ARN MENSAJERO 39
ENZIMAS CELULARES 42
ALTERACIN DE LA ACTIVIDAD DE LAS ENZIMAS MEDIANTE MODIFICACIN COVALENTE 44
SEPARACIN DE LAS VAS CATABLICA Y ANABLICA 45
MECANISMOS DE CONTROL DE LA EXPRESIN DE LOS GENES 47
TEORIA DEL OPERON 47
CONTROL DE LA BIOSNTESIS PROTEICA MEDIANTE AMP CCLICO 49
AMP CCLICO: SNTESIS Y DEGRADACIN 50
CA ++ - CALMODULINA: REGULACIN DE LAS FUNCIONES CELULARES 51

UNIDAD DIDACTICA N 02: MEMBRANA PLASMTICA: ORGANIZACIN Y FUNCIONAMIENTO
MEMBRANA PLASMATICA 52
FUNCIONES DE LA MEMBRANA PLASMATICA 52
ORGANIZACIN MOLECULAR DE LA MEMBRANA CELULAR 53
MODELO DEL MOSAICO FLUIDO: ARQUITECTURA Y ORGANIZACIN MOLECULAR 54
COMPOSICIN QUMICA LAS MEMBRANAS 54
LPIDOS DE LA MEMBRANA 55
PROTENAS DE LA MEMBRANA 57
DISTRIBUCIN DE LAS PROTENAS EN LA MEMBRANA PLASMATICA 57
CARBOHIDRATOS DE LA MEMBRANA 60
IMPORTANCIA DE LA FLUIDEZ DE LA MEMBRANA 61
ASIMETRA DE LOS LPIDOS DE LA MEMBRANA 62
NATURALEZA DINMICA DE LA MEMBRANA PLASMTICA 63
DIFUSIN DE LAS PROTENAS DE LA MEMBRANA LUEGO DE LA FUSIN CELULAR 63
RESTRICCIONES AL MOVIMIENTO DE LAS PROTENAS DE MEMBRANA 64
2
CONTROL DE LA MOVILIDAD DE LA MEMBRANA 64
DOMINIOS DE MEMBRANA Y POLARIDAD CELULAR 65
MEMBRANA PLASMTICA DE LOS ERITROCITOS 65
PROTENAS INTEGRALES DE LA MEMBRANA DEL ERITROCITO 66
EL ESQUELETO DE LA MEMBRANA DEL ERITROCITO 66
TRANSPORTE DE SUSTANCIAS A TRAVS DE MEMBRANAS CELULARES 67
DIFUSION DE SUSTANCIAS A TRAVS DE MEMBRANAS 68
PROTENAS TRANSPORTADORAS DE MEMBRANA: CLASES 65
DIFUSIN DE AGUA A TRAVS DE LAS MEMBRANAS 65
ACUAPORINAS 70
ESTRUCTURA DE LAS ACUAPORINAS 71
LAS ACUAGLICEROPORINAS 72
ACUAPORINAS EN VEGETALES 72
ELECTROLITOS EN LOS ESPACIOS EXTRA E INTRACELULARES:
DIFUSIN DE IONES A TRAVES DE LAS MEMBRANAS 72
DIFUSIN FACILITADA 74
TRANSPORTE DE GLUCOSA A TRAVES DE LA MEMBRANA PLASMATICA 75
TRANSPORTE DE GLUCOSA EN ENTEROCITOS 76
TRANSPORTE ACTIVO 77
ACOPLAMIENTO DEL TRASPORTE ACTIVO A LA HIDRLISIS DE ATP 78
DINAMICA DE LA BOMBA DE NA
+
Y K
+
78
OTRAS BOMBAS EN LA MEMBRANA CELULAR Y MEMBRANAS DE ORGANELOS CELULARES 75
BOMBA DE CA
++
EN LA MEMBRANA CELULAR 75
BOMBA DE PROTONES O H
+
80
BOMBA DE CL
-
EN LA MEMBRANA PLASMTICA 81
FIBROLISIS QUISTICA 81
TRANSPORTE EN MASA 82
CAPTACIN CELULAR DE PARTCULAS Y MACROMOLCULAS 83
FAGOCITOSIS 83
ENDOCITOSIS 83
LA ENDOCITOSIS A GRANEL 83
LA ENDOCITOSIS MEDIADA POR RECEPTORES 84
INTERNALIZACION DE MACROMOLECULAS, PARTICULAS Y RECICLAJE
DE RECEPTORES DE MEMBRANA: CURL 84
VESCULAS CUBIERTAS 86
VESCULAS DESNUDAS 86
EXOCITOSIS 86
INTERACCIONES ENTRE LAS CELULAS Y SU ENTORNO 87
EL ESPACIO EXTRACELULAR 87
GLUCOCALIZ 87
MATRIZ EXTRACELULAR (MEC) 88
COMPONENTES DE LA MATRIZ EXTRACELULAR ANIMAL 88
COLGENA 89
PROTEOGLICANOS 90
FIBRONECTINA, LAMININA Y OTRAS PROTENAS DE LA MEC 91
RELACIONES Y ADHERENCIA DE CLULAS A SUSTRATOS NO CELULARES 92
INTEGRINAS 92
FIJACIN DE CLULAS A SU SUSTRATO 94
ADHERENCIAS FOCALES Y HEMIDESMOSOMAS 94
ADHERENCIA DE CLULAS A OTRAS CLULAS 96
SELECTINAS 96
INMUNOGLOBULINAS E INTEGRINAS 97
CADHERINAS 98
FIJACIN DE UNA CLULA A OTRAS CLULAS 99
LAS UNIONES ADHERENTES 99
LOS DESMOSOMAS 100
PAPEL DE LOS RECEPTORES DE ADHERENCIA CELULAR EN LAS SEALES TRANSMEMBRANA 101
UNIONES HERMTICAS: SELLADO DEL ESPACIO EXTRACELULAR 101
UNIONES COMUNICANTES O NEXOS 102
3
PLASMODESMOSOMAS 104

UNIDAD DIDACTICA N 03: CITOPLASMA Y ORGANELOS CELULARES.
MATRIZ CITOPLASMTICA 104
CITOESQUELETO 105
MICROTUBULOS 106
ESTRUCTURA Y COMPOSICIN 106
PROTENAS RELACIONADAS CON MICROTBULOS 107
MICROTUBULOS COMO AGENTES DE MOTILIDAD INTRACELULAR 108
CINESINAS 108
DINEINAS CITOPLASMTICAS 109
CENTROS ORGANIZADORES DE MICROTBULOS 109
CENTROSOMAS 109
CORPSCULOS BASALES Y OTROS CENTROS ORGANIZADORES DE MICROTBULOS 110
FACTORES QUE INFLUYEN EN EL ENSAMBLADO Y DESENSAMBLADO 111
CILIOS Y FLAGELOS 112
ESTRUCTURA DE CILIOS Y FLAGELOS 112
FILAMENTOS INTERMEDIOS 113
ENSAMBLADO Y DESENSAMBLADO DE FILAMENTOS INTERMEDIOS 114
TIPOS Y FUNCIONES DE LOS FILAMENTOS INTERMEDIOS 114
MICROFILAMENTOS 115
ENSAMBLADO Y DESENSAMBLADO DE MICROFILAMENTOS 116
MIOSINA: MOLCULA MOTORA DE LOS FILAMENTOS DE ACTINA 116
MIOSINAS II 117
MIOSINA I 117
ORGANELOS CELULARES 117
RIBOSOMAS 117
BIOGNESIS DE LOS COMPONENTES DEL RIBOSOMA 118
ESTRUCTURA DE LOS RIBOSOMAS 118
BIOSNTESIS DE PROTEINAS 120
MITOCONDRIAS 124
ESTRUCTURA Y ULTRAESTRUCTURA 125
REPRODUCCION DE LAS MITOCONDRIAS 127
FUNCION MITOCONDRIAL 128
OXIDACIN MITOCONDRIAL 128
MITOCONDRIAS ESPECIALES 130
RETICULO ENDOPLASMATICO 131
MORFOLOGIA DEL RETICULO ENDOPLASMATICO 131
CLASES DE RETICULO ENDOPLASMATICO 132
RETICULO ENDOPLASMATICO RUGOSO (RER) 132
TEORA DE LA SEAL 132
RETICULO ENDOPLASMATICO LISO (REL) 133
MODIFICACIONES DEL RETICULO ENDOPLASMATICO 134
APARATO DE GOLGI 134
COMPOSICION DEL APARATO DE GOLGI 135
FUNCIONES DEL APARATO DE GOLGI 136
COMPARTIMENTACION DEL COMPLEJO DE GOLGI 137
ALGUNAS FUNCIONES ESPECIFICAS DEL APARATO DE GOLGI 138
LISOSOMAS 139
DIVERSIDAD FUNCIONAL DE LOS LISOSOMAS 140
DIGESTION INTRACELULAR 142
DIGESTION HETEROFAGICA 142
DIGESTION AUTOFAGICA 143
DIGESTION EXTRACELULAR 143
INTERVENCION EN PROCESOS PATOLOGICOS 143
ORIGEN DE LOS LISOSOMAS 144
PEROXISOMAS 145
FUNCIN 146
ORIGEN 148
VACUOLA VEGETAL 149
4
FUNCIONES 149
PLASTOS O PLASTIDIOS 151
CLOROPLASTOS 152
ESTRUCTURA DE LOS CLOROPLASTOS 153
FUNCIN DE LOS CLOROPLASTOS 154
FASE LUMINOSA 155
FASE OSCURA 155

UNIDAD ACADEMICA N 04: NCLEO CELULAR: ESTRUCTURA Y FUNCIONAMIENTO
NUCLEO INTERFASICO 156
ENVOLTURA NUCLEAR 157
POROS NUCLEARES 158
PASO DE MACROMOLCULAS A TRAVS DEL PORO NUCLEAR 159
ARQUITECTURA NUCLEAR 159
MONTAJE Y DESMONTAJE DE LA MEMBRANA NUCLEAR 160
CROMATINA CROMOSOMAS 161
TIPOS DE CROMATINA 164
CICLO CELULAR 164
CONTROL DEL CICLO CELULAR 167
ACTIVACION DE LA DIVISION CELULAR 168
FRENOS DE LA DIVISION CELULAR 169
LA FASE M SE PRODUCE CUANDO LA CICLINA MITOTICA ACTIVA A LA CDC2 169
MITOSIS 170
FASES DE LA MITOSIS 171
MUERTE CELULAR 173
NECROSIS 174
APOPTOSIS 174
ASPECTOS MORFOLGICOS 175
NUCLEOLO 177
COMPOSICIN QUMICA 177
CICLO NUCLEOLAR 178

5
UNIDAD DIDACTICA N 01: ESTRUCTURA Y ORGANIZACIN MOLECULAR DE LAS CELULAS

CELULA.
Las clulas y las estructuras que las forman, son demasiado pequeas para verlas, escucharlas o
tocarlas directamente. Existen alrededor de cinco millones de distintas especies de bacterias, hongos,
protozoarios, vegetales y animales, cuya morfologa, funcin y comportamiento son diferentes, sin
embargo, si estudiamos a los organismos vivientes a nivel celular y molecular, muestran un plan maestro
de organizacin nico, el campo de la biologa celular es precisamente el conocimiento de ese plan de
organizacin unificado que tienen las clulas de todas las formas de vida.
La clula es la forma ms sencilla de organizacin biolgica, considerada como la unidad fundamental
de la vida, es decir es unidad vital, morfolgica, estructural o anatmica, fisiolgica y gentica de todo
ser vivo. Se dice unidad vital ya que la clula es la forma de vida ms pequea y sencilla, con la que se
forman los organismos ya sean unicelulares o multicelulares. Unidad morfolgica ya que todas las clulas
son similares es decir estn formadas bsicamente por una envoltura externa, la membrana plasmtica,
una regin interna conocida como citoplasma y una regin dentro de esta con material gentico conocido
en algunos casos como regin nucleoide y en otros como ncleo.
Es unidad estructural o anatmica porque todos los seres vivos estn constituidos por clulas, es unidad
fisiolgica porque las clulas poseen todos los mecanismos bioqumicos necesarios para permanecer
vivas es decir la clula es capaz de realizar todas las actividades inherentes a los seres vivos. Es unidad
gentica porque todas las clulas derivan de otras clulas preexistentes es decir las clulas contienen
la informacin gentica del organismo en las secuencias de bases nitrogenadas de su ADN, el cual se
hereda de generacin en generacin.

PROPIEDADES BASICAS DE LAS CELULAS.
La vida es la propiedad fundamental de las clulas y ellas son las unidades ms pequeas que muestran
esta propiedad, entre otras propiedades fundamentales se tiene:
1. Las clulas poseen elevada complejidad y organizacin.
La complejidad es una propiedad evidente en las clulas ya que estas presentan un conjunto diverso de
partes segn el tipo celular, estas partes deben estar en posiciones apropiadas para sus interacciones y
por lo tanto lograr el funcionamiento celular, es decir que la clula tiene una elevada organizacin la que
se puede observar a diferentes niveles as se tiene la organizacin de sus tomos en molculas de
tamao pequeo, la organizacin de estas en polmeros gigantes (macromolculas), la organizacin de
diferentes tipos de macromolculas en complejos macromoleculares (supramolculas), que a su vez se
organizan en organelos subcelulares y finalmente en clulas.
2. Las clulas contienen su informacin gentica en los genes.
Los genes almacenan la informacin gentica, constituyen las plantillas para construir estructuras
celulares y contienen instrucciones para poner en marcha las actividades de la clula as como la
informacin para reproducirse asimismos. Los organismos se generan a partir de la informacin
codificada en un conjunto de genes, lo ms sorprendente es que esta vasta cantidad de informacin se
encuentra empacada en un conjunto de cromosomas que ocupan el espacio de un ncleo celular, miles de
veces ms pequeo que el punto sobre esta letra i.
3. Las clulas se Autoreproducen.
Las clulas tienen la capacidad de desarrollarse y dividirse en este proceso el contenido de una clula
madre se distribuyen entre dos clulas hijas, antes de la divisin el material gentico se duplica con
toda fidelidad y cada clula hija recibe una dotacin completa e igual de informacin gentica. En la
mayor parte de los casos las dos clulas hijas poseen aproximadamente el mismo volumen. Sin embargo
en algunos casos como ocurre durante la divisin del ovocito humano, una de las clulas puede retener
casi todo el citoplasma aunque reciba slo la mitad del material gentico.
4. Las clulas captan y consumen energa.
El desarrollo y la operacin de funciones complejas requieren el ingreso continuo de energa. Las clulas
toman las sustancias qumicas del ambiente en el que viven, transforman estas sustancias en otras que
les son tiles, liberan energa y eliminan sus productos de desecho. Toda la energa que requiere la vida
del planeta proviene del sol, la energa lumnica es captada por las clulas fotosintticas y convertida
por fotosntesis en energa qumica almacenada en carbohidratos. La energa atrapada en estas
6
molculas sirve para poner en marcha casi todas las actividades de los organismos sobre la tierra. A la
mayor parte de clulas animales la energa les llega empaquetada por lo general en forma de glucosa,
esta se descompone y su contenido energtico se almacena como ATP el que se emplea para poner en
marcha las mltiples actividades que requieren energa dentro de la clula. Basndose en el mecanismo
que utilizan las clulas y organismos para extraer energa podemos agruparlas en dos clases principales:
los Auttrofos que utilizan el proceso de la fotosntesis y los Hetertrofos que utilizan materia pre-
formada sintetizados por los organismos auttrofos.
5. Las clulas tienen la capacidad de metabolizar.
Las clulas efectan cientos de diferentes transformaciones qumicas, ninguna de las cuales ocurre a
una tasa significativa en el mundo inanimado. La suma total de las reacciones qumicas que ocurren
dentro de una clula representa el metabolismo celular.
6. Las clulas poseen movimiento.
Las clulas son sitios de actividad infatigable. Los materiales celulares son transportados de un sitio a
otro, algunas estructuras se sintetizan y descomponen con rapidez y en muchos casos toda la clula se
desplaza de un lugar a otro. Estas diferentes actividades dependen de cambios mecnicos dinmicos
que ocurren en el interior de la clula. La mayor parte iniciados por alteraciones en la forma de ciertas
protenas motoras.
7. Las clulas tienen capacidad para responder a los estimulos.
Es decir las clulas se irritan y exitan, la mayor parte de las clulas estan cubiertas con receptores
que interactuan con las sustancias del medio o matriz extracelular de manera muy especifica, as
poseen receptores a hormonas, factores de crecimiento, materiales extracelulares y tambin a
sustancias situadas en la superficie de otras clulas. Los receptores constituyen entradas a travs de
la cual los agentes externos pueden generar respuestas especficas. A veces las clulas responden a un
estimulo especifico alterando sus actividades metablicas, preparndose para la divisin celular,
desplazndose de un lugar a otro o incluso suicidndose.
8. Las clulas tienen capacidad de Autorregulacin.
En las clulas para mantener un estado complejo ordenado se requiere regulacin continua, dentro de
cada clula viva operan muchos mecanismos de control diferentes. La importancia de los mecanismos
reguladores es ms evidente cuando fallan. En la clula, las macromoleculas como protenas deben
actuar sin la ventaja de un control externo, as cada paso de un proceso debe ocurrir de manera
espontnea y en forma tal que el siguiente paso se inicie automticamente.

TIPOS FUNDAMENTALES DE CELULAS EN LA NATURALEZA
La vida en nuestro planeta se manifesta en millones de especies diferentes que poseen una morfologa
especial y propia, que contienen informacin gentica especifica. Podemos ordenar las especies en
grupos de organismos cada vez ms amplios generos, familias, ordenes hasta llegar al nivel de los reinos.
Si examinamos las formas vivientes a nivel celular identificamos dos tipos bsicos de clulas:
Procariotas y Eucariotas, que pueden distinguirse por su tamao y el tipo de sus estructuras internas u
organelos que contienen. Unicamente las moneras (bacterias y algas verde azules) son clulas
PROCARIOTICAS, mientras que todos los dems organismos: protistas, hongos, plantas y animales
constan estructuralmente de clulas EUCARIOTICAS ms complejas. La principal diferencia entre
ambos tipos celulares es que los procariotas no tienen envoltura nuclear. El cromosoma procarotico
ocupa un espacio dentro de la clula denominado nucleoide y se halla en contacto directo con el resto
del protoplasma. Las clulas eucarioticas poseen un ncleo verdadero con una complicada envoltura
nuclear, a travs de la cual tienen lugar los intercambios nucleocitoplasmaticos. Desde el punto de vista
evolutivo, se considera que los procariotas son antecesores de los eucariotas, los primeros aparecieron
hace tres mil millones de aos en tanto que los eucariotas aparecieron probablemente hace mil millones
de aos.

CELULA PROCARIOTICA
El termino PROCARIOTA proviene de los vocablos: Pro = anterior y Karion = ncleo (antes del ncleo o
clulas que no poseen ncleo). Son las clulas mas primitivas, las mas sencillas y de menor tamao que
las clulas eucarioticas, sus representantes forman parte del Reino Monera, llamado tambin Reino
7
PROCARIOTAE (desde el punto de vista celular), que incluyen a organismos unicelulares como las
Bacterias y las Algas verde azules.
Caractersticas generales de la clula procaritica.
1. Ausencia de envoltura nuclear.- Carecen de envoltura nuclear por lo tanto no tienen ncleo
definido, el material gentico (ADN) se encuentra en contacto con el citoplasma, localizado en la regin
nuclear o Nucleoide. La ausencia de envoltura nuclear quiz sea la diferencia fundamental entre
procaritas y eucaritas.
2. ADN sin proteccin proteinica.- El ADN de los organismos procariticos carecen de hstonas es
decir no esta asociado a protenas, se encuentra suspendido en el citoplasma, el ADN es de doble
cadena circular muy pequeo, el ADN en procaritas representa a un nico cromosoma.
3. Carecen de organelos citoplasmticos.- Las clulas procariticas no presentan organelos en su
citoplasma a exepcin de los ribosomas, los cuales tienen un dimetro aproximado de 25 nm, se
encuentran en forma libre o ligados a las molculas de ARNm en forma de polirribosomas.
4. Ausencia de estructuras membranosas.- El citoplasma no esta muy diferenciado porque carece de
estructuras membranosas que generen compartimientos. El pequeo tamao de las bacterias
probablemente se debe a la inexistencia de compartimientos separados por membranas.
Los procariotas, sin embargo pese a su simplicidad estructural, son seres complejos que realizan
funciones complejas y son diversificados desde un punto de vista bioqumico, lo que permite su
adaptacin a las ms variadas condiciones de vida.

ESTRUCTURA GENERAL DE UNA CELULA BACTERIANA.
La Escherichia coli es una de las bacterias ms estudiadas y utilizadas en trabajos de investigacin en
biologa molecular e ingeniera gentica, presenta la ventaja de su facil manipulacin in vitro y su facil
cultivo, en una solucin acuosa de glucosa y algunos iones inorgnicos a temperatura de 37 C duplica su
masa celular y se divide aproximadamente en 60 minutos y este tiempo puede ser reducido a 20 minutos
si se agrega al medio nucleotidos y aminocidos.

Las bacterias pueden encontrarse en forma individual o formando colonias, en general presentan
reproduccin asexual por fisin binaria o biparticin. Por su forma se clasifican en: cocos, bacilos,
espirilos y espiroquetas. Los cocos pueden ser de varios tipos: monococos, diplococos, estreptococos o
estafilococos. Presentan las siguientes estructuras:
CAPSULA
Es una estructura constituida por polisacridos de elevado peso molecular por lo que se le considera que
constituye un glicocaliz. Est formada por un material secretado por la propia bacteria que se adhiere a
su superficie. Su espesor puede ser muy grande o ser una simple capa muy delgada (microcapsula).
Aparentemente su funcin es prevenir la desecacin del organismo dentro de condiciones adversas, as
tambin se le atribuye funcin antignica. En algunos casos como en la cavidad oral es responsable de la
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adhesin a la superficie del diente, formando la placa dental, la cual es responsable del deterioro del
diente. Por ejemplo Estreptococcus mutans responsable de las caries dental.
PARED CELULAR
Su estructura es qumicamente diferente a las clulas eucariticas vegetales y hongos. Es una
estructura que proporciona fortaleza a la clula y es un componente estructural rgido que puede
soportar la presin osmtica causada por altas concentraciones de iones inorgnicos de las clulas. Sin
ella en condiciones normales del medio, las bacterias estallaran.
Composicin qumica: Est formada por peptidoglicano constituido por Mureina la cual esta formada por
2 molculas: el N acetilglucosamina (NAcGlu) y el cido N- acetilmurmico (NAcMur). A cada molcula
de cido NAcMur se le une un tetrapptido de 4 aminocidos (L-alanina; D-isoglutamina; L-lisina y D-
alanina). En algunas especies los residuos de L-lisina son reemplazados por el cido diaminopimlico,
aminocido que se encuentra en la naturaleza slo en las paredes de las clulas procariticas. Para
proporcionarle una rigidez adicional a stas molculas, puentes de aminocidos (pentaglicinas) pueden
atravesar y conectar los tetrapptidos unidos al cido NacMur.

Las bacterias pueden ser divididas por su pared en 2 grupos: Las bacterias Gram (+) y las bacterias
Gram (-), en base a su diferente coloracin frente a la tincin de Gram, debido a las diferencias que
presentan sus paredes celulares.
BACTERIAS GRAM (+):
Su pared celular es gruesa (20 a 80 nm) y contiene un 60 a 80 % de peptidoglicano, adems presentan
los cidos teicoicos que estn unidos al cido murmico de la capa de peptidoglicano. Los cidos
teicoicos se presentan en 2 formas: Ribitol cido teicoico y Glicerol cido teicoico.
Los cidos teicoicos son largos polmeros tanto de ribitol o glicerol unidos a traves de enlaces
fosfodiester. Presentan grupos hidroxilos que estn unidos a azucares o aminocidos. Debido a que los
cidos teicoicos son altamente antignicos, inducen en el husped a producir anticuerpos que reaccionan
con los cidos teicoicos, dado que ellos se extienden a lo largo de la capa de peptidoglicano, exponiendo
determinantes antignicos, usados en la determinacin serolgica de muchos grupos de bacterias Gram
(+). Son ejemplos de este grupo: Bacillus, Clostridium, Corynebacterium, Lactobacillus, Staphylococcus,
Streptococcus.
BACTERIAS GRAM (-):
Su pared es qumicamente ms compleja que la de las bacterias Gram (+). La pared Gram (-) contiene
menos peptidoglicano (10 a 20 %). Por fuera del peptidoglicano posee una segundo estructura
membranosa compuesta de protenas, fosfolpidos y lipopolisacridos, este ltimo es causante de la
toxicidad en animales y se le ha llamado endotoxina, la cual es causante de fiebre elevada, disminucin
de la presin arterial y puede ocasionar la muerte en las infecciones causadas por organismos gram
negativos.
El lipopolisacrido (LPS) est formado por dos componentes: Un disacrido de glucosamina al cual estn
unidos cidos grasos (denominados lpidos A) y una larga cadena de azucares y azucares fosforilados
unidos a la zona del lpido A. Se conoce que la toxicidad reside en el lpido A. Cabe indicar que las gram
(-) presentan porinas las que estn constituidas por 6 a 8 subunidades polipeptidicas que forman
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canales por los cuales difunden el soluto desde el espacio medio que lo rodea hasta el espacio
periplasmtico, son tambin protenas de reconocimiento cuando un fago infecta a la bacteria.
La membrana externa es considerablemente ms rgida que las membranas celulares normales y es
resistente a su disolucin por detergentes. Las bacterias Gram (-) adems contienen lipoprotenas que
estn unidas covalentemente a la capa de peptidoglicano (NAcMur) y a 3 cidos grasos embebidos en la
membrana externa, lo cual sirve para anclar esta membrana al peptidoglicano de la pared celular.
Los individuos infectados por bacterias Gram (-) producen anticuerpos contra las cadenas de azucares
del lipopolisacarido, lo cual sirve como un mecanismo de clasificacin serologica. El peptidoglicano de la
pared celular es sensible a enzimas, la mas comnmente usada es la lizozima, la cual hidroliza la unin
entre el NacGlu y el cido NAcMur, y provoca que la pared celular se rompa en muchos pedazos.
Son ejemplos de este grupo: Brucella, Enterobacter, Escherichia, Klebsiella, Neisseria, Pasteurella,
Salmonella, Shiguella, Vibrio y Yersinia.

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CARACTERISTICAS GRAM ( + ) GRAM ( - )

Tincin GRAM

Capa de peptidoglucano

Contenido en LPS

Contenido en lpidos y
lipoprotenas

Acidos teicoicos

Espacio
Periplasmtico

Membrana externa

Produccin de toxinas

Resistencia a la rotura fsica

Sensibilidad de la pared celular
a la lisozima

Retienen el cristal violeta y se
tien de morado

Gruesa (varias capas)

Virtualmente ninguna

Baja (lpidos unidos al
peptidoglucano)

Presente

Ausente

Ausente

Principalmente exotoxinas

Alta

Alta

Se decoloran y toman el color de
contraste safranina, tindose
de rosado

Delgada (una capa)

Alta

Alta (debido a la membrana
externa)

Ausente

Presente

Presente

Principalmente endotoxinas

Baja

Baja

MEMBRANA PLASMATICA.
Conformada por una capa bilpidica con protenas integrales, en ella abundan las cardiolipinas, cumple las
siguientes funciones:
1) En organismos aerbicos permite el transporte de electrones.
2) Contiene algunas de las enzimas necesarias para la sntesis y transporte del peptidoglicano, cidos
teicoicos y otros componentes de la membrana externa asimismo contiene enzimas que cumplen funcin
en el metabolismo de la respiracin celular.
3) Secreta enzimas hidrolticas extracelulares.
4) Permite la duplicacin del material gentico (ADN).
5) Controla el transporte de los compuestos que entran o salen de la clula es decir desde el espacio
periplasmtico hasta el citoplasma bacteriano y viceversa.
MESOSOMAS:
Son invaginaciones de la membrana citoplasmtica, que permiten incrementar la superficie de la
membrana y son tiles en la respiracin y el transporte.
CITOPLASMA:
Tiene naturaleza coloidal, presenta un 80 % de agua, adems contiene cidos nucleicos, protenas,
carbohidratos, lpidos, iones y compuestos de bajo peso molecular, presenta ribosomas y en algunos
casos endosporas.
CROMOSOMA BACTERIANO:
Es simple, est constituido por una molcula circular de doble cadena de ADN que representa al unico
cromosoma bacteriano, no est asociado a protenas histonicas como es el caso del ADN de las celulas
eucarioticas.
El ADN de las bacterias esta constituido tambin por regiones exon e intron, las regiones exon son
regiones activas que transcriben, codifican enzimas y protenas, las regiones intron son regiones
inactivas que no expresan, que no codifican. En las bacterias las regiones exon se encuentran en una
sola barra o tira continua por lo tanto durante la transcripcin se transcribe el ARNm constituyendo
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genes que directamente deben expresarse, sintetizando protenas y/o enzimas. Puede contener varios
genes activos especificos, por esta razon los ARNm, ARNt, ARNr no requieren de procesos de
modificacin posterior a la transcripcin.
PLASMIDO:
Llamado tambin episoma o plasmidio, son pequeos pedazos circulares de doble cadena de ADN que se
separan del cromosoma bacteriano. Pueden replicarse autnomamente y tienen la funcin de transmitir
resistencia a antibiticos al ser transferidos a otras bacterias a travs del proceso de conjugacin
bacteriana. Su tamao es de 2 a 5 Kb y admite hasta 8 a 9 Kb de ADN exgeno, E. coli presenta
diferentes plasmidos. Son utilizados en ingeniera gentica. El plasmido es un vector gentico que tiene
caractersticas especficas en las cuales se puede insertar o clonar un gen de un organismo superior.
Los plasmidos presentan un sitio de origen de replicacin, asimismo presentan marcadores es decir
genes resistentes a antibiticos, presentan secuencias palindromicas, sobre las cuales actan las
enzimas de restriccin. La E. coli presenta muchos plasmidos entre ellos tenemos al pBr 322.

RIBOSOMAS:
Son organelos no rodeados de membrana como partculas globulares de unos 200 a 250 A de dimetro,
en numero de unos 10 000 a 30 000 que se emplean en la sntesis de las protenas bacterianas, se
encuentran libres y en forma de poliribosomas. Estn constituidas por dos subunidades, las subunidades
se diferencian por su velocidad de sedimentacin (S = Coeficiente de velocidad de sedimentacin,
unidades Sverbeng), siendo de 30 S la menor y 50 S la mayor. La velocidad de sedimentacin de un
ribosoma es de 70 S. La subunidad menor tiene un peso molecular de 900,000 y esta constituida por
una molcula de ARN de peso molecular de 600,000 y 21 protenas diferentes. La subunidad mayor
tiene un peso molecular de 1600,000 y esta constituida por dos molculas de ARN y 34 protenas.
Actan en la sntesis de protenas y funcionan igual que en las clulas eucariotas, con la nica diferencia
que los polirribosomas estn libres en el citoplasma.

FLAGELOS:
Permite que muchas bacterias puedan nadar a travs del lquido, permitiendo que tengan movilidad
propia. El flagelo est formado por subunidades de una protena denominada flagelina por lo que su
composicin es diferente a la de las clulas eucariticas. El flagelo est anclado a las dos membranas
(bacteria gram negativa) a travs de 4 anillos. El flagelo se mueve por rotacin lo que provoca el
desplazamiento de la bacteria. La fuerza que provoca la rotacin aparenta ser el resultado del pasaje
de protones del exterior del citoplasma a travs del cuerpo basal del flagelo; la entrada de cada protn
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causa la rotacin del rotor en un grado determinado y se ha calculado que se requiere el flujo de 256
H+ por cada revolucin que da el flagelo.
Segn el nmero de flagelos las bacterias se clasifican en: monotricas, lofotricas, anfitricas y
peritricas.
FIMBRIAS Y PILIS:
Presentes en las bacterias gram negativas, son apndices mucho ms cortos y delgados que los flagelos.
Las fimbrias cumplen funciones de adherencia, mientras que los pili son apndices implicados en la
transferencia de ADN durante la conjugacin bacteriana. Los pili son menos numerosos (menos de 10)
que las fimbrias, pero son mucho ms largos que las fimbrias.
ENDOSPORAS:
Son producidas entre otras por 2 gneros de bacterias de importancia mdica como Bacillus y
Clostridium. Es una estructura pequea y altamente duradera formada dentro de la clula y capaz de
desarrollarse en un nuevo organismo. Debido a su gruesa pared es resistente al calor y a los agentes
qumicos, pues mientras las clulas vegetativas mueren a temperaturas de 60 a 70 C, las endosporas
pueden sobrevivir en agua hirviendo por ms de 1 hora.

ALGAS VERDE AZULES.
Llamadas tambin cianofceas, cianobacterias o bacterias azul verdosas, son las bacterias
fotosintticas mas evolucionadas, entre estas estn algunas comestibles como la llullucha o murmunta.
Adems de clorofila las cianobacterias poseen otros pigmentos denominados genricamente ficobilinas.
De estos la ficocianina (azul) y la ficoeritrina (roja) son los ms comunes y responsables de la variedad
de colores encontrados en las cianofceas. Su estructura es bsicamente la de una bacteria ya que
presentan vaina o envoltura gelatinosa (musilaginosa), pared celular celulosica, membrana plasmatica de
estructura lipoproteica, endoplasma con regin nucleoide es decir con material genetico de doble
cadena desnudo, ribosomas e inclusiones de fosfato, protenas y lpidos.
Llama la atencin su sistema fotosinttico, formado por sacos membranosos aplanados y concentricos (a
manera de laminillas) entre los cuales se encuentran granulos de 40 nm de dimetro, incorporados a la
pared externa de los sacos. Se sabe que esos grnulos los cianosomas, contienen ficocianina y
ficoeritrina, mientras que la estructura membranosa contiene clorofila y otros compuestos del sistema
fotosintetizador. La energia solar absorbida por la ficocianina y por la ficoeritrina es transferida hacia
las membranas que contienen clorofila, donde se realiza la fotosntesis. La ficocianina y la ficoeritrina
aumentan el espectro de utilizacin de la luz solar, en comparacin con la absorcin proporcionada por la
clorofila sola.
Como en las dems bacterias, la divisin celular ocurre por elongacin celular e invaginacin de la pared
celular pero la clula recien formada no se desprende debido a su cubierta musilaginosa que la mantiene
unida generndose organismos de vida colonial (pluricelulares) por ejemplo: Spirulina, Anabaena, Nostoc.
Las cianobacterias no presentan cilios ni flagelos.

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MICOPLASMAS
Llamados tambin molicutes o PPLO (derivado de Pleuro Pneumoniae Like Organisms) son las bacterias
ms pequeas estn entre los organismos vivos que poseen la masa ms pequea. Tienen un dimetro de
0,1 a 0,25 micrometros por lo tanto, su tamao corresponde al de algunos virus grandes. La importancia
biolgica de estos microorganismos radica en que su masa viviente es mil veces menor que el tamao
promedio de una bacteria y un milln de veces menor que el de una clula eucariota. Son organismos
globulares pueden presentar formas ovoidales, esfricas, vesiculares, se caracterizan por carecer de
pared celular, su estructura es muy sencilla, su citoplasma est separado del medio externo nicamente
por una membrana unitaria y en su medio interno slo existen una cadena de ADN (10 veces menor que
en comparacin con el de la mayora de las bacterias). Este ADN tambin se presenta bajo la forma de
nucleoide, conteniendo cerca de 500,000 pares de nucletidos, lo suficiente para codificar de 300 a
550 protenas. Contiene tambin ARNm, gran cantidad de ribosomas, algunas vacuolas, vescula y
grnulos. Sus funciones de nutricin son muy reducidas, conocindose nicamente procesos de sntesis
proteica y reacciones de oxidacin de glcidos. Adems, posee una cadena de citcromos con los que
pueden obtener ATP. Los dems elementos nutritivos debe obtenerlos a partir de las clulas a las que
parsita. Producen enfermedades infecciosas en diferentes animales y en el hombre son especialmente
conocidos los Micoplasma mycoides, causante de la pleuroneumona bovina, el Micoplasma pneumoniae,
causante de la neumona atpica en seres humanos y los causantes de afecciones renales, tambin en los
humanos (en la mujer puede causar afecciones al tero). Los micoplasmas tienen caractersticas de
herencia, mutacin y su reproduccin se efecta mediante una serie de biparticiones sencillas.

RICKETTSIAS
Gnero de bacterias con un tamao intermedio entre los virus y el resto de las bacterias. En general,
reciben el nombre de rickettsias los microorganismos que pertenecen a la familia Rickettsiaceae, que
incluye los gneros Rickettsia, Rochalimaea, Coxiella y Ehrlichia. Su nombre procede de su descubridor,
el patlogo estadounidense Howard Taylor Ricketts. Son bacterias Gram negativas e inmviles, con
forma de cocos (redondas) o de bacilos (alargadas). Como los virus, slo pueden vivir y multiplicarse en
el interior de las clulas. Estos microorganismos se han encontrado en muchas especies de mamferos y
causan diversas enfermedades en la especie humana. Una especie que infecta a animales domsticos,
como vacas y ovejas, puede ser transmitida a los seres humanos a travs de la ingestin de leche cruda
o por la inhalacin de las partculas suspendidas en el aire procedentes de la leche, orina, heces o
tejidos de los animales infectados. Hay numerosas especies de rickettsias que no causan enfermedades
a los mamferos aunque s las producen en insectos. Las rickettsias crecen en el laboratorio slo en
cultivos de clulas vivas. Las enfermedades producidas por rickettsias reciben el nombre general de
rickettsiosis e incluyen el tifus epidmico y endmico, la fiebre de las Montaas Rocosas, la fiebre
Tsutsugamushi o el tifus de la maleza, la fiebre de las trincheras, la fiebre Q y la rickettsiosis
pustulosa o vesicular. En general, las rickettsiosis comienzan de modo repentino y originan fiebre alta,
malestar general, postracin y, en casi todos los casos, un exantema caracterstico.
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VIRUS
Los virus son los agentes infecciosos ms pequeos que existen, que se encuentran en el lmite entre los
organismos vivos y la sustancia inerte, se les considera dentro de lo inerte porque cristalizan cuando
estn fuera de la clula (fase extracelular). Son muy sencillos estn constituidos por un cido nucleico,
una cpside proteica y en ocasiones una envoltura membranosa.
Los virus carecen de metabolismo es decir no se nutren, no excretan no se reproducen por si mismos.
Necesitan de una clula viva para reproducirse, estos son capaces de inyectar su material gentico al
interior celular haciendo que la clula sintetice enorme cantidades de virus (fase intracelular), por
tanto todos los virus son considerados parsitos obligados y pueden parasitar a animales, vegetales e
incluso procariontes (micoplasmas, bacterias y algas), pero un tipo de virus es muy especifico en cuanto
a las clulas que puede parasitar. Los virus estn constituidos por una sola clase de cido nucleico ADN
o ARN (nunca ambos), el cual puede ser de cadena simple o doble, lineal o circular. Aquellos que
contienen al ARN son llamados retrovirus a partir de este cido nucleico viral por accin de la enzima
transcriptasa reversa se sintetiza el ADN.
Los virus son tan pequeos que pueden pasar a travs de los filtros que atrapan bacterias pueden medir
desde 0.01 micrometros (10 milimicras) hasta 300 milimicras (20 300 nm), en algunos virus su tamao
no excede de los 2,500 A. No fue hasta la invencin del microscopio electrnico que los cientficos
pudieron ver los virus. Son demasiado pequeos para que se puedan ver con un microscopio de luz. A las
partculas vricas tambin se las denomina viriones.
Estructura.
A pesar de que los virus son muy diferentes unos de otros en forma y en tamao (algunos son de forma
cilndrica, otros esfricos, cuboides, polidricos, prismticos etc., es decir de simetra geomtrica
compleja) comparten muchas estructuras caractersticas. El cido nucleico se localiza en la parte
central de un virus, el ADN es siempre una sola molcula, el ARN puede existir como una molcula o en
varios fragmentos, con excepcin de los retrovirus que son diploides, los virus son haploides; es decir
contienen una sola copia de sus genes.
El cido nucleico esta rodeado por una cubierta proteinica llamada cpside juntos forman la
nucleocapside. La capsid esta constituido por la unin de protenas globulares que vienen a ser
subunidades denominadas capsmeros. Generalmente una cpside esta constituida por la repeticin de
un solo tipo de protenas o capsomeros. La unin de estas origina tres tipos de cpsides:
Icosaedrico, es una forma polidrica de 12 vrtices en donde los capsomeros se ordenan en 20 caras
triangulares y 30 aristas formando una figura simtrica un icosaedro con la definicin aproximada de
una esfera. Un ejemplo podra ser un picornavirus como el virus de la poliomielitis cuya cpside esta
compuesta por 32 capsomeros.
Helicoidal, es aquel en que los capsomeros adoptan una ordenacin en espiral hueco formando una
estructura tubular en cuyo interior se sita el cido nucleico, la hlice puede ser rgida o flexible por
ejemplo el virus de la rabia o el virus del mosaico del tabaco.
Complejo, este tipo de cpside lo poseen algunos virus especializados en parasitar bacterias por lo que
reciben el nombre de bacteriofagos. Esta cpside se puede delimitar en dos partes: Cabeza de tipo
icosaedrico y que contiene el cido nucleico y la Cola adoptada para la inyeccin del cido nucleico en el
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interior de la bacteria. En la base de la cola pueden existir enzimas y ATP que tiene la funcin de
destruir la pared bacteriana.

Un grupo de virus que infectan a animales como los que producen la rabia, la hepatitis, la gripe, la
viruela y el virus del sida poseen una nucleocapside dentro de una envoltura. La envoltura es una
membrana lipoprotenica compuesta de lpidos derivados de la membrana de la clula husped y protena
viral especifica. Adems a menudo se encuentran glucoprotenas en forma de proyecciones espiculares
en la superficie que se adhieren a receptores de la clula husped durante la entrada del virin a la
clula. Otra protena de la matriz media la interaccin entre las protenas de la cpside y la envoltura.
En general la presencia de una envoltura confiere inestabilidad al virus (sensibles al calor, detergentes,
solventes de lpidos). Las protenas superficiales del virus sean de la cpside o glucoprotenas de la
envoltura, son antignos importantes contra los que el husped monta su respuesta inmunitaria a los
virus.

Los virus son producidos en la clula husped por un proceso de agregacin macromolecular, lo cual
significa que sus componentes son sintetizados separadamente en diferentes lugares de esa clula y
luego reunidos de manera coordinada en otra parte de aquella. En los bacteriofagos, los fenmenos
intracelulares que se suceden son muy rpidos y comienzan con la rotura del nucleoide y la hidrlisis
enzimtica del ADN de la clula husped. Los nucleotidos resultantes son utilizados para sintetizar el
ADN del fago. Luego son sintetizados el ARN y las protenas estructurales del virus, y se necesitan
unos 7 minutos para empaquetar y armar los fagos maduros dentro de la bacteria. En clulas eucariotas
infectadas el proceso es ms complejo. Por ejemplo, el ADN de los adenovirus se replica en el ncleo de
la clula husped, las protenas virales se sintetizan en ribosomas citoslicos y luego las distintas
partculas virales se combinan entre si en el interior de la clula. Un tipo especial es el representado
por los virus tumorales, en los que la maduracin se produce por gemacin a partir de la membrana
celular. El virus completo contiene una nucleocpside que est cubierta por una envoltura derivada de la
membrana de la clula husped en la cual se han insertado glicoprotenas virales.

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VIROIDES
Partcula infecciosa diminuta que causa enfermedades en plantas superiores. Su tamao es diez veces
menor que el de los virus ms pequeos conocidos. Se diferencian de stos ltimos porque slo
contienen ARN, adems, los viroides carecen de cpside. La molcula de ARN no contiene genes que
codifican protenas, por lo que el viroide es totalmente dependiente de las funciones del hospedador
para su replicacin. Aunque los viroides se transmiten de una generacin de plantas a la siguiente a
travs de los aperos de labranza, no se conoce su modo de replicacin en el interior de las clulas,
aunque se cree que se replican en el interior del ncleo. Las plantas afectadas muestran un desarrollo
deficiente y decoloracin, y pueden llegar a morir. Por ejemplo el viroide que produce una enfermedad
en la papa, su molcula de ARN circular contiene 359 nucletidos y puede multiplicarse e infectar a
otros vegetales.

PRION
Agente infeccioso que no contiene cido nucleico, sino una forma anormal de glicoprotena, una protena
celular que normalmente se encuentra en el hospedador. De estructura ms elemental que los virus, los
priones causan enfermedades en los seres humanos y en los animales. Antes de la identificacin de los
priones, estas enfermedades, conocidas colectivamente como encefalopatas espongiformes
transmisibles (patologas que cursan con degeneracin del cerebro) estaban vinculadas slo por la
similitud de los sntomas; recientemente se ha demostrado que tienen una causa comn.
El camino que condujo al descubrimiento del prin comenz con las investigaciones de las encefalopatas
espongiformes transmisibles (EET). En 1967 la cientfica britnica Tikvah Alper y sus colegas del
Hospital Hammersmith en Londres, extrajeron tejido del cerebro de una oveja infectada con scrapie.
Intentaron tratar qumicamente el tejido para aislar un virus, bacteria u otro agente potencialmente
causante de la enfermedad. El tejido procesado fue entonces inyectado en una oveja sana para
comprobar si la enfermedad era transmisible. La oveja sana contrajo el scrapie, lo que indicaba que el
agente infeccioso estaba en el tejido del cerebro enfermo. Por tanto, este experimento mostr que el
agente infeccioso poda reproducirse en animales sanos causando la enfermedad. Alper expuso entonces
extractos de tejidos infectados con scrapie a radiaccin ultravioleta (un tratamiento que normalmente
destruye cidos nucleicos) encontrando que los extractos mantenan su capacidad de transmitir la
enfermedad. Al comienzo de la dcada de 1980, Stanley B. Prusiner, neurlogo y bioqumico
estadounidense que trabajaba en la Universidad de California en San Francisco, encontr que extractos
de tejidos similares a los utilizados por Alper no causaban enfermedad cuando se exponan a
tratamientos que destruan protenas. Prusiner concluy, en un estudio publicado en 1982, que los
agentes infecciosos responsables de las encefalopatas espongiformes transmisibles eran protenas.
Prusiner denomin a estas partculas proteicas infecciosas priones y sugiri que las protenas causaban
la enfermedad al replicarse en tejidos del sistema nervioso. En 1997 el bioqumico Stanley B. Prusiner
recibi el Premio Nobel de Fisiologa y Medicina por sus estudios sobre los priones, un trabajo
revolucionario y nuevo pero todava inacabado. La protena infecciosa o prin, identificada con las siglas
PrP
SC
es una forma anormal, con una configuracin distinta, de la protena prin (PrP
C
), componente
normal de las membranas neuronales de los mamferos. En los seres humanos la protena prin se
codifica por un gen (PrP) situado en el brazo corto del cromosoma 20. La funcin biolgica de la
protena normal no se conoce con exactitud, aunque s se han determinado las caractersticas de su
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estructura. La protena normal est compuesta por 253 aminocidos plegados en tres largas espirales
(semejantes al cable del telfono) conocidas como hlices alfa. La forma infecciosa de esta protena o
prin presenta exactamente la misma secuencia de aminocidos. No obstante, en lugar de plegarse en
forma de hlice lo hace mediante un plegamiento plano, semejante al de un acorden parcialmente
abierto. La forma patgena se caracteriza por su resistencia parcial a las proteasas; adems, es muy
resistente a las altas temperaturas y no produce ningn tipo de reaccin en el sistema inmunolgico.
No se sabe con exactitud cmo afecta el PrP
SC
al hospedador, pero puede replicarse transformando la
protena prin normal sintetizada por el hospedador en PrP anormal. Algunos cientficos creen que la
protena alterada causa enfermedad simplemente cuando contacta con la protena normal, obligando a
sta a cambiar su configuracin, pasando de un plegamiento en forma de hlice a una forma aplanada y
transformndola en una protena patgena. Las nuevas protenas pueden inducir el cambio de
configuracin en otras protenas normales iniciando as una reaccin en cadena.
La enfermedad de Creutzfeldt-Jakob (ECJ), el sndrome de Gerstmann-Strussler-Scheinker (GSS), el
kuru y el insomnio familiar fatal son enfermedades originadas por priones que afectan a los seres
humanos. Entre las enfermedades provocadas por priones que afectan a distintas especies animales se
pueden citar el scrapie (o escrapie) de ovejas y cabras; las encefalopatas espongiformes transmisibles
(EET) de visones, bovinos, felinos y antlopes; y la enfermedad del agotamiento crnico de mulas y
ciervos en cautiverio. El prin causante de la enfermedad puede adquirirse por procedencia externa o
por mutaciones del gen PrP (heredadas o espordicas). As, se ha observado la transmisin de la
enfermedad de Creutzfeldt-Jakob en trasplantes de crnea, inyecciones de hormona del crecimiento o
en injertos de duramadre, todos ellos procedentes de donantes afectados. Incluso la nueva variante de
ECJ se ha relacionado con la ingestin de carne contaminada. En otros casos la enfermedad puede
deberse a una mutacin espontnea del gen que codifica la protena prin (responsable de la ECJ
espordica) o a la herencia de un gen alterado; este ltimo caso se relaciona con algunas de estas
patologas que se transmiten por herencia familiar (la ECJ familiar, el sndrome de Gerstmann-
Strussler-Scheinker o el insomnio familiar fatal).

INTERFERON
Nombre genrico de un grupo de protenas antivirales producidas por los animales, entre ellos el ser
humano, en respuesta a las infecciones provocadas por virus. El virlogo britnico Alick Isaacs y su
colega suizo Jean Lindenmann fueron los primeros en identificar, en 1957, una de estas protenas, en
clulas de embriones de pollo. Se vio que interfera o impeda la infeccin de las clulas corporales por
los virus. La actividad antiviral no corresponde al interfern de forma directa, sino que se realiza a
travs de protenas que producen otras clulas al ser estimuladas por el interfern. Se han identificado
algunas de estas protenas, aunque no se conoce con exactitud su modo de accin. El interfern se
puede clasificar en tres grupos: el interfern (leucoctico), producido por los glbulos blancos; el
interfern (fibroblstico), producido por las clulas de la piel; y el interfern (inmunolgico),
producido por los linfocitos cuando son estimulados por los antgenos. Durante la dcada de 1960, los
mdicos intentaban tratar algunas enfermedades producidas por virus, sobre todo los resfriados
comunes, mediante la administracin de interfern, pero este enfoque no era prctico debido al
elevadsimo coste que supone extraer esta sustancia de glbulos blancos humanos (siempre en pequeas
cantidades). El siguiente paso consisti en intentar estimular al organismo para que produjera
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interfern: se empleaban inductores sintticos como los cidos nucleicos. Estos inductores cumplan su
funcin, pero pronto se desarrollaba tolerancia, y dejaban de ejercer su efecto. En 1980 se empez a
disponer de interfern en cantidades ms importantes gracias al desarrollo de las tcnicas de
ingeniera gentica, y al ao siguiente ya empezaron a realizarse ensayos clnicos para establecer los
niveles, las dosis y los efectos secundarios. Hasta la fecha, slo se ha avanzado en las pruebas con
algunos interferones del grupo alfa. Se revelan como un tratamiento prometedor frente a un gran
nmero de infecciones virales. Tambin son un tratamiento valioso en una de las formas de la esclerosis
mltiple, pero los resultados han sido variables frente a diversos tipos de cncer, leucemias y algunos
linfomas. Hasta cierto punto podran ser eficaces frente al melanoma maligno, el cncer de clulas
renales, la hepatitis C, ciertas verrugas, y una minora de los sarcomas de Kaposi relacionados con el
SIDA. Los efectos secundarios pueden ser leves o muy graves. Los interferones y no han sido an
suficientemente probados, pero podran demostrar ser ms eficaces que el interfern .

CELULA EUCARITICA
ESTRUCTURA Y ORGANIZACIN
La clula eucaritica es la que esta constituyendo a los organismos de los reinos: Protista, Fungi,
Vegetal y Animal, presentan estructura compleja por tanto cumplen funciones muy complejas, las
clulas complejas son las nicas que pueden formar tejidos. Son clulas con ncleo definido en cuyo
interior se halla la cromatina es decir que el ncleo constituye un compartimiento separado limitado por
la envoltura nuclear que asla el material gentico (ADN) de los componentes citoplasmticos.
La clula eucaritica presenta tres regiones: la membrana celular o plasmtica, el citoplasma y el ncleo,
la regin de mayor complejidad es el citoplasma el cual esta altamente diferenciado por que contiene
estructuras membranosas, encontrndose en el citoplasma la matriz citoplasmtica, las inclusiones, el
sistema de endomembranas y los organelos algunos de los cuales tienen membranas independientes
como mitocondrias, plastidios, lisosomas, peroxisomas, aparato de Golgi, vacuolas, retculo
endoplasmtico y otros que carecen de membranas como los ribosomas y centriolos. Adems en el
citoplasma se encuentra microfilamentos y microtubulos que forman el citoesqueleto.
Cabe indicar que las clulas vegetales y fngicas tienen una estructura externa sobre la membrana
llamada pared celular y en el caso de las clulas animales se encuentra el glucocaliz estas estructuras
tienen sobre todo funciones protectoras.
La presencia del ncleo caracteriza a la celula eucaritica este presenta un contenido denominado
cromatina que es un compuesto complejo constituido por ADN al que se asocia fuertemente las histonas
(protenas basicas), todo esto asemejndose a las cuentas de un collar. El ADN en eucariontes es lineal
representa a mltiples cromosomas combinados con protenas.

DIVERSIDAD MORFOLGICA DE LAS CELULAS EUCARIOTICAS
Las clulas de un organismo multicelular complejo tienen forma y estructura variables y se diferencian
de acuerdo con la funcin especfica de los distintos tejidos y rganos. Esta especializacin hace que
las clulas adquieran caractersticas singulares, aun cuando en todas ellas persiste un modelo de
organizacin comn. As por ejemplo algunas clulas como las amebas y los leucocitos cambian de forma
frecuentemente, los hepatocitos del hgado presentan formas polidricas hasta de 14 caras
(tetracaedros), el tejido muscular estriado presenta formas cilndricas (alargadas con extremos romos
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polinucleados), las clulas nerviosas presentan formas estrelladas (con ramificaciones, presentan
dendritas), los vulos y glbulos rojos presentan forma esfrica, las clulas del folculo tiroideo
(epitelio glandular) presenta formas cbicas, el tejido muscular liso presenta formas fusiformes, las
clulas del endotelio y de la mucosa bucal presentan clulas planas, los espermatozoides presentan
forma filiforme (con cabeza y cola).
Por consiguiente la forma de las clulas en los diversos organismos vara y esta depende de:
1. Las funciones que cumplen las clulas o de sus adaptaciones funcionales, es decir que las formas
celulares son tpicas en cada tipo de tejido y rgano porque cada uno de los rganos cumple funciones
diferentes.
2. La viscosidad del protoplasma.
3. La tensin superficial de la membrana plasmtica es decir la rigidez de la membrana plasmtica.
4. La presin fsica o fuerza mecnica que ejercen las clulas adyacentes al constituir un agregado de
clulas o tejido.
5. La presencia de microfilamentos, filamentos intermedios y microtubulos que se distribuyen o
disponen longitudinalmente, transversalmente, radialmente constituyendo al citoesqueleto que mantiene
la forma celular.

TAMAO CELULAR
Las dimensiones de las clulas eucarioticas puede variar en relacin con su complejidad, actividad y
funciones, desde las clulas de protozoarios hasta las clulas de estructuras ms complejas que
presentan los organismos superiores as por ejemplo:

Amoeba proteus 1mm
Clula eucaritica 10 30
Clula animal promedio 15
Eritrocito 7 8
Linfocito 10 12
Neuronas humanas 200
Neuronas de jirafa > 1 m
Fibra muscular 40 mm
Clula Vegetal promedio 40 (100 )
Tubos laticiferos de Euforbiceas varios metros
Excepciones huevos de aves, peces y reptiles, as :
Ovulo de gallina 3 cm
Ovulo de avestruz 8 16 cm
Huevo de pez 1 2 mm

La mayor parte de las clulas son microscpicas visibles slo al microscopio, asimismo las clulas
generalmente son translcidas por tanto requieren coloraciones para ser observadas.

VOLUMEN CELULAR
En general, el volumen de las clulas eucarioticas es bastante constante para un determinado tipo
celular y es independiente del tamao del rgano o del organismo del que forman parte por ejemplo las
clulas del rin o del hgado (hepatocitos) en un elefante, caballo y ratn tienen casi el mismo volumen
y tamao. La diferencia de la masa total del rgano depende de la cantidad de clulas (numero de
clulas) y no del volumen de stas. Por consiguiente el volumen celular es casi constante en los diversos
organismos a est caracterstica se le denomina la ley del volumen celular constante.

SEMEJANZAS ENTRE ORGANISMOS PROCARIOTICOS Y EUCARITICOS
A pesar de las diferencias entre procariotas y eucariotas hay semejanzas importantes en su
organizacin molecular y en sus funciones:
1) En su organizacin molecular.- Todos los organismos vivos utilizan el mismo codigo gentico. Es
decir que los procariontes y los eucariontes presentan su material gentico ADN debidamente
codificado en forma de codones o tripletes (triadas) y en esta forma codificada tambin se transcribe
20
al ARNm, el cual traduce el mensaje gentico a protenas tambin en forma codificada. Inclusive los
virus presentan su material gentico o genoma en forma codificada.
2) Funcin.- Todos los organismos vivos tienen una maquinaria similar para la sntesis de protenas. Es
decir tanto las clulas procarioticas y eucarioticas presentan ribosomas y toda la maquinaria
biosntetica similar para la sntesis de protenas.

TABLA 01: ORGANIZACIN CELULAR EN PROCARIOTAS Y EUCARIOTAS.
Clulas procariotas Clulas eucariotas
Envoltura nuclear Ausente Presente
ADN Desnudo Combinado con protenas
Cromosomas Unicos Multiples
Nuclolos Ausentes Presentes
Divisin Amitosis Mitosis o meiosis
Ribosomas 70 S (50 S + 30 S) 80 S (60 S + 40 S)
Endomembranas Ausentes Presentes
Mitocondrias Enzimas respiratorias y fotosintticas Presentes
en la membrana plasmtica
Cloroplastos Ausentes Presentes en clulas vegetales
Pared celular No celulosica Celulosica en clulas vegetales
Exocitosis y endocitosis Ausentes Presentes
Locomocin Fibrilla nica, flagelo Cilios y flagelos

BASES MOLECULARES DE LAS CELULAS: ACIDOS NUCLEICOS

Caractersticas
Los cidos nucleicos son macromolculas orgnicas que constituyen del 5 al 15 % del peso en seco de
todas las clulas, fueron descubiertos en 1868 por Miescher en glbulos blancos de secrecin
purulenta, luego aislados por primera vez del ncleo celular donde se descubri su carcter cido.
Biolgicamente son importantes en los seres vivos porque dirigen la sntesis de todas las protenas,
determinan la gran variabilidad individual dentro de una especie, constituyen la materia prima de la
evolucin y porque permiten transmitir caractersticas de una a otra generacin. Estn compuestos por:
carbono, hidrgeno, oxgeno, nitrogeno y fsforo en cual se encuentra en una cantidad constante (10 %
en peso). Los cidos nucleicos estn constituidos por una o dos cadenas de miles de unidades
estructurales llamadas nucletidos, por ello tienen elevado peso molecular. Segn sea la pentosa ribosa
o desoxiribosa que se encuentre en los cidos nucleicos se distinguen dos tipos: el cido
desoxiribonucleico (ADN) y el cido ribonucleico (ARN) respectivamente. El ADN constituye el depsito
fundamental de la informacin gentica. Esta informacin es copiada o transcripta en las molculas de
ARN, cuyas secuencias de nucletidos contienen el cdigo para las secuencias especificas de
aminocidos. Entonces se produce la sntesis de protenas, en un proceso llamado traduccin del ARN.
Esta serie de fenmenos ha recibido el nombre de Dogma central de la biologa molecular, que puede
resumirse de la siguiente manera.

En las clulas superiores el ADN se halla principalmente en el ncleo integrando los cromosomas. Una
pequea cantidad se encuentra en el citoplasma, dentro de las mitocondrias y los cloroplastos. El ARN
se localiza tanto en el ncleo, donde se forma, como en el citoplasma, donde tiene lugar la sntesis
proteica.

21
ACIDOS NUCLEICOS
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ACIDO DESOXIRIBONUCLEICO ACIDO RIBONUCLEICO
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Localizacin Principalmente en el ncleo Principalmente en el citoplasma
Tambin en mitocondrias y cloroplastos Tambin en nuclolo (ncleo)
Bases purinicas Adenina Adenina
Guanina Guanina
Bases pirimidicas Citosina Citosina
Timina Uracilo
Pentosas Desoxirribosa Ribosa
Papel en la clula Informacin gentica Sntesis de protenas
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COMPOSICIN QUMICA
La hidrlisis del ADN o del ARN genera:
Acido Fosfrico.- (H
3
PO
4
) El cido fosfrico utiliza dos de sus tres grupos cidos en las uniones 3, 5
dister. El grupo restante confiere al polinucletido sus propiedades cidas y permite que la molcula
forme uniones inicas con protenas bsicas llamadas histonas con las que forma un complejo
nucleoproteico denominado cromatina. Dicho grupo cido libre tambin hace que los cidos nucleicos
sean basfilos (se colorean con colorantes bsicos).

El cido fosforico es vital en la polimerizacin de nucletidos. En los cidos nucleicos se encuentra como
anin fosfato (PO
4
-3
). El fosfato puede encontrarse como monoster o dister.

Pentosas.- son de dos tipos: ribosa en el ARN y desoxiribosa en el ADN. La nica diferencia entre
estos dos azcares es que la desoxiribosa tiene un tomo menos de oxigeno, pues se forma por
desoxigenacin del grupo hidrxilo que est unido al carbono 2 (C
2
). Se puede utilizar una reaccin
citoqumica especfica para la desoxiribosa llamada reaccin de Feulgen para visualizar el ADN con el
microscopio ptico.

Bases Nitrogenadas.- Son biomolculas orgnicas de naturaleza aromtica heterocclica ya que sus
anillos estn constituidos de carbono y nitrgeno. Su carcter bsico se debe a los grupos amino (NH
2
).
Son de dos tipos:
Bases Puricas.- o purinas, son bases nitrogenadas derivadas de la purina. La purina es una base que a su
vez deriva de la pirimidina que se ha unido a un anillo de imidazol. Es decir son bases heterocclicas
constituidas por dos anillos y son la Adenina (A) y la Guanina (G).
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Bases Pirimidicas.- o pirimidinas, son bases nitrogenadas derivadas de la pirimidina constituidas por un
anillo heterocclico y son la Citosina (C), Timina (T) y el Uracilo (U).

La timina solo se encuentra en el ADN mientras que el uracilo solo se halla en el ARN. La diferencia de
las bases pirimidinicas permite usar timidina radiactiva como marcador especifico del ADN y uridina
radiactiva para el ARN.
ESTRUCTURA DE LOS ACIDOS NUCLEICOS
Nucleosidos.- Los nuclesidos se forman mediante la unin de una pentosa con una base nitrogenada,
establecindose un enlace N glucosdico entre el primer carbono (C
1
) de la pentosa y el primer
nitrgeno (N
1
) de la base nitrogenada si esta es una base pirimidica o el noveno nitrgeno (N
9
) si es una
base purica.

Nucletido.- Los nucletidos se forman unindose una molcula de cido fosfrico con un nuclesido a
travs del grupo hidroxilo (OH) del quinto carbono (C
5
) de la pentosa mediante enlace del tipo
fosfoester o ester fosfrico, se trata pues de un ester fosforico del nuclesido. Los nucletidos tienen
por ello un fuerte carcter cido debido al grupo fosfato que se ioniza.
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Adems de actuar como bloques en la edificacin de los cidos nucleicos, los nucletidos como por
ejemplo el ATP son utilizados para depositar y transferir energa qumica. Las dos uniones fosfato
terminales del ATP contienen gran cantidad de energa. Cuando se produce la hidrlisis en estas
uniones, la energa liberada puede ser usada por la clula para realizar sus actividades. La unin P de
alta energa permite que la clula acumule gran cantidad de ella en un espacio muy pequeo y que la
mantenga lista para usarla en el momento en que sea necesaria. Otros nucletidos como citosina
trifosfato (CTP), uridina trifosfato (UTP), guanosina trifosfato (GTP) y timidina trifosfato (TTP),
tienen tambin uniones de alta energa, pero la fuente original de energa es el ATP.

Una molcula de cido nucleico es un polmero lineal en el cual los monmeros son nucleotidos que estn
ligados por medio de uniones fosfodiester este es el enlace caracterstico de los cidos nucleicos.
Resulta de la reaccin entre el cido fosfrico de un nucletido con el grupo oxidrilo de la pentosa de
otro nucletido, en el proceso se libera una molcula de agua. El enlace se establece entre el carbono 3
y el carbono 5 de dos pentosas adyacentes. En consecuencia, el eje de un cido nucleico est formado
por pentosas y fosfatos y las bases nitrogenadas estn unidas a las pentosas del eje. El extremo de la
molcula que contiene la pentosa con el carbono 5 libre se llama extremo 5 y el que posee la pentosa
con el carbono 3 libre, extremo 3.

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Las bases heterocclicas absorben luz ultravioleta a 260 nm. En una clula fotografiada con esa longitud
de onda se ve que el nuclolo, la cromatina y las regiones del citoplasma que contienen ARN absorben
dicha luz intensamente. En efecto, la manera ms simple de determinar la concentracin de cido
nucleico en una solucin es medir la absorbancia a 260 nm.
El ADN se encuentra en los organismos vivos como molculas lineales de muy alto peso molecular. Por
ejemplo, la Escherichia coli tiene una sola molcula de ADN circular de 3400,000 pares de bases y una
longitud total de 1,4 mm. La cantidad de ADN en los organismos superiores puede ser varios cientos de
veces mayor, 1200 veces en el caso del hombre. As, el ADN completamente extendido de una clula
diploide humana puede tener una longitud total de 1,7 metros.
Toda la informacin gentica de un organismo vivo se encuentra acumulada en la secuencia lineal de las
cuatro bases del cido nucleico. La estructura primaria de todas las protenas (es decir, la cantidad y la
secuencia de sus 20 aminocidos) debe estar codificada por un alfabeto de cuatro letras (A, T, G, C).
Uno de los descubrimientos ms extraordinarios en biologa molecular fue la interpretacin de este
cdigo gentico. Un paso previo a ese descubrimiento que tuvo influencia directa en la dilucidacin de la
estructura del ADN fue el hallazgo de que, si bien la composicin de las bases variaba de una especi e a
otra, la cantidad de adenina es igual a la cantidad de timina (A = T) y la cantidad de citosina es igual a la
de guanina (C = G). En consecuencia, el nmero total de purinas es idntico al de pirimidinas (osea A + G
= C + T). No obstante, la relacin AT/GC vara considerablemente entre las especies (por ejemplo, en el
hombre la relacin es de 1,52 y en la Escherichia coli es de 0,93).

ORGANIZACIN MOLECULAR DEL ADN: MODELO DE WATSON Y CRICK
En 1953, sobre la base de los datos obtenidos por Wilkins y Franklin mediante difraccin de rayos X,
Watson y Crick propusieron un modelo para la estructura del ADN, el cual est formado por dos
cadenas de cidos nucleicos helicoidales con giro a la derecha, que estructuran una doble hlice
alrededor de un eje central imaginario. Las dos cadenas son antiparalelas, lo cual significa que sus
uniones 3, 5 fosfodister siguen direcciones opuestas, adems, las bases nitrogenadas estn situadas
en el interior de la hlice en un plano perpendicular al eje helicoidal. Ambas cadenas se hallan unidas
entre si por medio de puentes de hidrgeno, establecidos entre los pares de bases.

Puesto que entre dos pentosas de las cadenas opuestas existe una distancia fija, slo ciertos pares de
bases pueden darse dentro de la estructura, los nicos pares posibles son A T, T A, C - G y G C.
entre la adenina y la timina se forman dos puentes de hidrgeno y entre la citosina y la guanina tres, en
consecuencia, el par C G es ms estable que el par A T. Junto a los puentes de hidrgeno, tambin
las interacciones hidrofbicas entre las bases reviste importancia para mantener estabilizada la doble
estructura helicoidal. Las secuencias axiales de las bases a lo largo de las cadenas de polinucletidos
pueden variar considerablemente, pero ambas secuencias deben ser complementarias. Debido a esta
propiedad, al separarse una cadena de la otra durante la duplicacin del ADN, cada una sirve de molde
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para la sntesis de una nueva cadena complementaria. De este modo se generan dos molculas hijas de
ADN de doble cadena que tienen la misma constitucin molecular que la doble cadena progenitora.

Aun cuando la mayor parte del ADN contenido en una clula se presenta con su doble hlice girando
hacia la derecha (B ADN) que es la configuracin ms estable, tambin existen dobles hlices de ADN
con giro a la izquierda. Esta forma se denomina Z ADN, por la disposicin en zigzag del eje de
fosfatoribosa de la cadena. En est configuracin quedan expuestas partes diferentes de la molcula,
lo que puede tener consecuencias biolgicas. En efecto, esta configuracin alternativa sugiere que el
ADN es una molcula flexible, que puede adoptar formas diferentes. Se ha sugerido que las zonas de Z
ADN podran ser los sitios donde los carcingenos se unen al ADN y provocan en ste mutaciones.

Teniendo en cuenta que la estructura de doble hlice en el ADN es mantenida por interacciones dbiles
(puentes de hidrgeno entre las bases enfrentadas), es posible separar ambas cadenas por medio del
calor y otros tratamientos, como el pH alcalino. Este proceso se denomina desnaturalizacin del ADN.
Como la temperatura necesaria para romper el par C G es mayor que la requerida para romper el par A
T (con dos puentes de hidrgeno), la temperatura a la cual se separan las cadenas del ADN llamada
punto de fisin depende de la relacin CG/AT. Si el ADN desnaturalizado se enfra lentamente, las
cadenas complementarias se aparean en forma ordenada, y se restablece la conformacin original de la
molcula. Este proceso se denomina renaturalizacin o templado.
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NIVELES DE ORGANIZACIN MOLECULAR DEL ADN EN LA CELULA.
Las molculas de ADN se encuentran organizadas dentro de las clulas en estructuras muy compactas,
de manera que ocupan el volumen comparativamente pequeo del ncleo. El primer nivel de condensacin
del ADN se da por la interaccin del ADN con unas protenas bsicas llamadas histonas. En general, las
protenas de la cromatina se dividen en tres clases principales: a) histonas nucleosomales: H2A, H2B,
H3 y H4; b) histonas internucleosomales o H1 y c) protenas no histonicas. Las histonas tienen una gran
proporcin de residuos de aminocidos con carga positiva como arginina y lisina, lo que permite su
enlace electrosttico al ADN cargado negativamente. Las no histonas comprenden un nmero grande de
clases diferentes de protenas; sin embargo, en la cromatina se encuentran en menor proporcin que las
histonas. Estas protenas son importantes para regular la expresin gentica y para organizar a la
cromatina.

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Las histonas nucleosomales se organizan en una estructura octamrica que contiene dos copias de cada
histona. Este octmero forma un centro alrededor del cual el ADN se enrolla de manera toroidal (dos
vueltas (1.65 vueltas) de 146 pb) para generar unidades discretas conocidas como nucleosomas
(repeticin nucleosomal 185 200 pb). Los nucleosomas estan unidos entre s por puentes de 20 a 80 pb
(humano 38 53 pb), para formar lo que se conoce como collar de perlas o fibra de 10 nm. En un
segundo nivel de condensacin, la histona H1 (y otras protenas de tipo no histona) se enlaza al ADN que
une a cada nucleosoma, generando una estructura helicoidal de 30 nm de dimetro o solenoide. Cada
vuelta de un solenoide contiene seis nucleosomas con una molcula de H1 asociada a cada unidad
nucleosomal. Posteriormente, esta fibra se enrolla sobre si misma para formar una fibra ms gruesa de
cromatina, la que, a su vez, se organiza en asas (300 nm). Actualmente, aunque an se desconoce mucho
de la organizacin de la cromatina, se empieza a entender la organizacin de las fibras de solenoides y
de las asas, durante la interfase y la mitosis. Si los cromosomas metafasicos se tratan con
detergentes polianinicos, se desprende la mayoria de las protenas del ADN y se observa que la
cromatina se descondensa y forma asas enormes de aproximadamente 60 kb de ADN. Estas asas se
encuentran unidas a una estructura proteica o esqueleto cromosomal cuya principal protena es la
enzima topoisomerasa II. Las secuencias de ADN que se unen a este esqueleto o SAR, son
relativamente resistentes a enzimas que degradan al ADN o ADNasas. Algunas secuencias SAR de
Drosophila se unen de manera especfica a la topoisomerasa II, lo cual podria explicar el anclaje de las
asas de ADN al esqueleto cromosomal. Se ha propuesto tambien la presencia de un esqueleto proteico,
menos definido, parece ser importante para mantener la organizacin de los cromosomas dentro del
ncleo. Como en el caso de los cromosomas metafsicos, las fibras de ADN de la cromatina de la clula
en interfase parecen estar unidas a la matriz nuclear a travs de secuencias especficas o MAR.

En oposicin al concepto previo de un ADN prcticamente desnudo en las bacterias y a un ADN
recubriendo a las protenas en los eucariontes, actualmente se considera que el ADN en todas las
clulas se organiza como cromatina; es decir, como una estructura compacta y dinmica formada de
molculas de ADN, protena y ARN. Esta estructura compacta tiene, sin embargo, la plasticidad
suficiente para que se lleven a cabo las funciones esenciales del ADN: replicacin, reparacin,
recombinacin, transposicin y segregacin del genoma, as como para permitir la expresin regulada de
la informacin gentica.
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REPLICACIN DEL ADN
Al cabo de la divisin celular las clulas hijas heredan la misma informacin gentica contenida en la
clula progenitora. Como esa informacin se halla en el ADN, cada una de sus molculas debe generar
previamente dos molculas de ADN idnticas a la del ADN originario para ser repartidas de manera
equitativa entre las dos clulas hijas. Esta duplicacin, gracias a la cual el ADN se propaga en las clulas
de generacin en generacin, lleva el nombre de replicacin.
La vida de las clulas transita por dos etapas que se alternan cclicamente, conocidas con los nombres
de interfase y divisin celular. La interfase se subdivide en tres periodos, llamados Gl, S y G2. En la
fase S se produce la replicacin del ADN. La sntesis del ADN se produce en direccin 5' 3' y utiliza
como molde una cadena de ADN preexistente. Adems, enzimas llamadas ADN polimerasas, que agregan
los sucesivos nucletidos tambin de a uno por vez en el extremo 3' de la cadena en crecimiento. Las
ADN polimerasas catalizan las uniones fosfodister entre el grupo OH en el C3' de la desoxirribosa de
un nucletido y el grupo fosfato en el C5' del nucletido recin arribado.
En la sntesis del ADN no queda ningn segmento de este sin duplicar, la replicacin exige un numero
considerablemente mayor de enzimas que la transcripcin. En consecuencia, a partir de la doble hlice
de una molcula de ADN se originan dos molculas de ADN, dos dobles hlices, ambas compuestas por
una cadena heredada del ADN progenitor y una cadena recin sintetizada. Como al cabo de la divisin
mitotica cada clula hija recibe molculas de ADN cuyas dobles hlices estn integradas por una cadena
original (preexistente) y una cadena nueva (recin sintetizada), se dice que el mecanismo de replicacin
del ADN es semiconservador.

Replicacin semiconservadora del ADN.
Si para sintetizarse el ADN comenzara su replicacin por uno de los extremos del cromosoma y
avanzara uniformemente a lo largo de ste hasta concluir en el otro extremo, el proceso de sntesis
tardara en promedio unos 30 das. No obstante, la duracin de la fase S es decir, el tiempo que tarda
el ADN en replicarse es de unas 7 horas aproximadamente. La rapidez con que lo hace se debe a que
aparecen a lo largo del ADN mltiples orgenes de replicacin, entre 20 y 80 por cada lazo de cromatina
de 30 nm. Cada origen de replicacin se gesta al separarse localmente las dos cadenas del ADN, hecho
que se produce, como dijimos, en muchsimos puntos de la molcula a la vez. No obstante, no todos los
orgenes nacen simultneamente, ya que el momento de su aparicin depende de las caractersticas de
la cromatina en los distintos sectores del cromosoma.
En los orgenes de replicacin hay secuencias de ADN especiales formadas por cientos de nucletidos
diferentes en cada origen. Sin embargo, en medio de ellas todos los orgenes tienen en comn
secuencias conservadas de alrededor de una docena de nucletidos, denominadas SAR (por autonomous
replication sequence). Los pares de nucletidos correspondientes a esas secuencias especiales se
separan al ser inducidos por factores proteicos aun no caracterizados. Del mismo modo que los factores
reguladores de la transcripcin, estas protenas reconocen singularidades qumicas expuestas en el
surco mayor del ADN, es decir, en la superficie exterior de la doble hlice.
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Al abrirse la doble hlice se forma una estructura llamada burbuja de replicacin, cuyo tamao aumenta
a medida que avanza la separacin de las dos cadenas del ADN, fenmeno que se produce en forma
simultanea en los dos extremos de la burbuja. Se establece de esta manera, en cada uno de esos
extremos, una estructura con forma de Y llamada horquilla de replicacin, cuyos dos brazos
representan a las cadenas del ADN ya separadas y el tronco a la doble hlice en vas de separacin.

La replicacin es bidireccional (horquilla de replicacin).
As, cada burbuja tiene dos horquillas de replicacin que a partir de un punto de origen comn avanzan
en direcciones opuestas. Las horquillas desaparecen cuando se integran con sus similares de las
burbujas contiguas, al colisionar despus que culmina el acercamiento progresivo entre ellas. Respecto
de las horquillas que recorren el ltimo tramo de los telmeros en ambos extremos del cromosoma, se
extinguen cuando se produce la separacin del ltimo par de nucletidos. El tramo de ADN que se
sintetiza a partir de un origen de replicacin con sus dos horquillas recibe el nombre de replicn. En
consecuencia, la replicacin concluye cuando se conectan entre si los sucesivos replicones. La accin
cooperativa de miles de ellos es la que permita que el ADN se sintetice en un tiempo relativamente
breve para el ciclo de vida de la clula.

Esquema de dos replicones y los puntos donde se origina la replicacin.
Las dos cadenas del ADN son antiparalelas, esto crea una primera dificultad durante la sntesis, ya que
a nivel de cada horquilla de replicacin, conforme sus dos cadenas se separan, una presenta sus
nucletidos corriendo en direccin 5'-3' y la otra en direccin 3'-5', de modo que la primera, al ser
copiada, deber gestar una cadena hija que crezca en direccin 3'-5, algo que ninguna ADN polimerasa
puede hacer.
30
La clula resuelve esta situacin utilizando estrategias distintas en la construccin de las dos cadenas
nuevas. La cadena hija que adopta como molde a la cadena progenitora que corre en direccin 3'-5 se
construye, al crecer en direccin 5'-3' en forma continua mediante el agregado de nucletidos en su
extremo 3' a medida que avanza la horquilla de replicacin. En cambio, la otra cadena hija, cuyo molde
es la cadena del ADN progenitor que corre en direccin 5'-3', es sintetizada de un modo singular, ya
que para poder crecer en esa direccin debe sintetizarse en direccin opuesta al avance de la horquilla
de replicacin. El problema se supera haciendo que la sntesis sea discontinua, lo cual significa que la
nueva cadena se construye en pequeos tramos llamados fragmentos de Okazaki, los cuales se unen
entre si a medida que se generan.

Cada fragmento de Okazaki se sintetiza mediante la copia de un tramo de la cadena progenitora
relativamente alejado del ngulo de la horquilla, "por detrs" del ltimo fragmento de Okazaki
construido. As el tramo progenitor mas cercano a la horquilla permanece sin copiar, aunque a esa altura
la cadena continua ya fue copiada. Por tal motivo, a la cadena que se sintetiza en forma continua se la
conoce con el nombre de adelantada y a la discontinua se la llama retrasada.

Cadena adelantada y retrasada durante la replicacin.
La replicacin del ADN es un proceso bidireccional no slo porque se produce en dos direcciones
divergentes a partir de una misma burbuja de replicacin, sino tambin porque las cadenas de la doble
hlice son sintetizadas en direcciones opuestas. Adems es asimtrica, ya que, tomando como
referencia a una de las dos cadenas del ADN, de un lado de la burbuja la replicacin es continua,
mientras que en el otro lado es discontinua. La sntesis continua avanza en la misma direccin en que lo
hace la horquilla de replicacin, mientras que la discontinua lo hace en direccin contraria. En sntesis,
cada replicacin tiene cuatro reas generadoras de ADN, dos que crecen de manera continua (una en
cada cadena del ADN progenitor) y dos de manera discontinua (tambin una en cada cadena del ADN
progenitor, pero cruzadas con las primeras). Todos estos procesos tienen lugar en forma simultnea.
Ms aun, las enzimas que intervienen en su direccin se encuentran asociadas formando un complejo
multienzimatico que se comporta como una verdadera maquinaria de replicacin.
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Para iniciar la sntesis de una cadena complementaria de ADN, adems de una cadena de ADN molde, la
ADN polimerasa necesita un cebador, que consiste en una pequea pieza de ARN de unos 10 nucletidos
de largo. La formacin del cebador es catalizada por una ARN polimerasa especifica, la ARN primasa
que genera ARN cortos que quedan asociados al tramo de ADN que copian.
Formado el cebador, la sntesis del ADN prosigue si la ADN polimerasa dispone de suficientes
nucletidos, que pasan al ncleo bajo la forma de desoxiribonuclesidos trifosfato (dATP, dTTP, dCTP y
dGTP). Estos se agregan secuencialmente a la cadena en crecimiento de acuerdo con los nucletidos
presentes en la cadena de ADN que sirve de molde. La mayor parte de la energa requerida para los
procesos que tienen lugar durante la replicacin es tomada de los propios desoxiribonuclesidos
trifosfato, que se hidrolizan con liberacin de energa cuando se ligan entre si.
Al iniciarse la sntesis continua del ADN, en cada origen se forman, dada la naturaleza bidireccional de
la replicacin, dos cebadores orientados divergentemente, uno en cada cadena de la doble hlice.
Seguidamente, la ADN polimerasa , enzima que cataliza la sntesis de la cadena continua, agrega un
nucletido en el extremo 3 del cebador y luego hace lo propio con los sucesivos nucletidos en el
extremo 3 de la cadena en crecimiento, hasta llegar la horquilla al extremo del replicn.
Una caractersticas saliente de las ADN polimerasas es su tendencia a desprenderse del ADN. No
obstante, mientras hacen su trabajo permanecen unidas a este debido a que son sostenidas por un aro
proteico deslizante. El aro se une a la polimerasa y no al ADN, de ah que impida el desprendimiento de
la enzima pero no su deslizamiento. Esta formado por tres subunidades monomericas cada una integrada
por un par de dominios topolgicamente identicos que al combinarse componen el anillo. El aro se libera
de la ADN polimerasa apenas esta detiene su movimiento, cuando alcanza el extremo del replicn. Solo
entonces la enzima se desprende del ADN. La protena que compone el anillo se denomina PCNA (por
proliferating cell nuclear antigen).

Unin del aro de PCNA a la ADN polimerasa.
Una vez que la horquilla de replicacin arriba al extremo del replicn, la cadena continua recin formada
toma contacto con la cadena discontinua del replicn adyacente, que avanzaba en direccin contraria.
Entre ambas cadenas, otra enzima, la ADN ligasa, une el extremo 3 de la primera con el extreme 5 de
la segunda. Como es obvio, esto no puede ocurrir en los extremos de los telmeros, de ah que en ellos la
replicacin culmine de un modo distinto.
Entre tanto, donde se inici la sntesis de la cadena continua, el cebador es removido por una nucleasa
reparadora, y su lugar es reemplazado por una pieza de ADN equivalente, generada con ayuda de una
ADN polimerasa especial, la ADN polimerasa . Finalmente, esta pieza de ADN se conecta con el resto
de la cadena continua tambin mediante la ADN ligasa.
La cadena continua necesita un solo cebador, que se forma apenas aparece la horquilla al comienzo de la
replicacin. En cambio, la cadena discontinua requiere varios, uno para cada fragmento de Okazaki. La
ARN primasa que sintetiza tales cebadores se desliza junto a la ADN polimerasa responsable de la
sntesis discontinua del ADN, que es la ADN polimerasa . Esta enzima, tras agregar el nucletido
adecuado en el extremo 3 del cebador, coloca los sucesivos nucletidos en el extremo 3 del fragmento
de Okazaki en crecimiento, interrumpindose su labor cuando ese extremo colisiona con el cebador del
fragmento formado precedentemente. El cebador es eliminado por una nucleasa reparadora y su lugar
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lo ocupa una pieza de ADN equivalente, sintetizada por la ADN polimerasa . El proceso culmina al
actuar la ADN ligasa, que conecta el extremo 3 de esa pieza de ADN con el extremo 5 de la cadena
discontinua.
Los fragmentos de Okazaki alcanzan una longitud media de alrededor de 200 nucletidos. La ARN
primasa y la ADN polimerasa necesitan unos 4 segundos para construir el cebador y agregar esos 200
nucletidos. Una vez completada la sntesis de un fragmento, ambas enzimas se liberan de la doble
hlice y juntas retornan hacia el ngulo de la horquilla de replicacin, dejando atrs los 200 nucletidos
del fragmento que acaban de sintetizar mas otros tantos del ADN molde, los cuales se usaran para
copiar el prximo fragmento de Okazaki.
Como ocurre con la ADN polimerasa en movimiento, la ADN polimerasa no se desprende del ADN
debido a que se le asocia un aro de PCNA. Dada la pequeez de los fragmentos de Okazaki, la ADN
polimerasa se mantiene prendida al ADN por periodos muy breves.
Hemos visto que en los orgenes de replicacin cada una de las cadenas de la doble hlice da lugar a una
cadena que crece en forma continua y otra que lo hace en direccin contraria en forma discontinua.
Como resultado de la singular constitucin de la cadena discontinua, su extremo 3 es el extremo 3 del
primer fragmento de Okazaki sintetizado, y su extremo 5, el extremo 5 del ltimo fragmento
formado. Este fragmento, una vez eliminado su cebador, se liga por su extremo 5 al extremo 3 de la
cadena continua del replicn adyacente, que avanzaba en direccin contraria. Por su parte, el fragmento
formado en primer termino se liga por su extreme 3 al extremo 5 de la cadena continua del mismo
replicn, en el lugar en que se inici la sntesis de ambas en direcciones divergentes.
Como se sealo, el primer fragmento de Okazaki de la cadena discontinua se forma en el nacimiento de
la horquilla de replicacin tras haberse sintetizado un trecho de la cadena continua. Dado que el
desfase se prolonga hasta el fin de la replicacin, a la cadena discontinua se la llama tambin
retrasada. Como consecuencia de este retraso, la rama de la horquilla que sirve de molde para la
sntesis de la cadena discontinua muestra en forma permanente un tramo de ADN sin replicar,
comprendido entre el cebador del ultimo fragmento de Okazaki y el ngulo de la horquilla, este tramo
de ADN es cubierto por unas protenas llamadas SSB (por single-strand DNA binding), que tienen la
propiedad de asociarse en forma cooperativa con cadenas de ADN simples. La presencia de estas SSB
le confiere cierta rigidez al tramo en cuestin lo cual impide la formacin de apareamientos indeseables
entre bases complementarias de la propia cadena. No obstante, como las bases de los nucletidos
permanecen expuestas, ese tramo de ADN puede ser utilizado como molde para la construccin de un
nuevo fragmento de Okazaki. A medida que la ADN polimerasa agrega los sucesivos nucletidos en el
extremo 3 de este fragmento, las protenas SSB se van desprendiendo del ADN y vuelven a asociarse
al ADN simple que va quedando expuesto conforme avanza la horquilla de replicacin.
En los telmeros, la conclusin de la sntesis de la cadena discontinua tiene caractersticas particulares.
Una vez eliminado el ultimo cebador en la punta del telmero, la ADN polimerasa no puede construir la
pieza de ADN que lo reemplaza pues carece de un grupo 3 preexistente a partir del cual esa pieza
pueda crecer. Como consecuencia, en las sucesivas divisiones celulares, con cada salida del cebador se
pierde un tramo de ADN de igual tamao, lo que provoca el progresivo acortamiento del telmero.
Naturalmente, si las clulas no le pusieran lmite a este acortamiento, a partir de un momento
comenzaran a perder informacin gentica. Esto se evita porque peridicamente los tramos de ADN
perdidos son reconstruidos, lo cual depende de una singular secuencia de nucletidos presente en la
cadena 5-3 de los telmeros y de un complejo enzimtico llamado telomerasa, integrado por una
pequea pieza de ARN y varias protenas.

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La cadena 5-3 de los telmeros contiene, varias veces repetida, la secuencia de nucletidos GGGTTA,
que es la que se pierde una por vez en cada divisin celular. La reconstruccin del telmero comienza
cuando la telomerasa se une al extremo 3 de esa cadena, pero colocndose en el lado de la cadena 3 -5.
La cadena 5-3 crece en la direccin correcta merced a que tiene todo lo necesario para hacerlo: un
grupo 3 libre y una secuencia de nucletidos que le sirve de molde, cedida por el ARN de la telomerasa.
Obsrvese que de ese ARN queda expuesto el oligonucletido CCCAAU, complementario de la secuencia
GGGTTA correspondiente a la cadena 5- 3' del telmero. El proceso se reitera una y otra vez, hasta
que la cadena 5-3 recupera las perdidas de ADN experimentadas en las replicaciones anteriores. A
continuacin, la ADN polimerasa , partiendo del grupo 3 del ARN de la telomerasa en reemplazo del
cebador sintetiza el tramo telomrico faltante en la cadena 3 -5 (discontinua) usando como molde el
ADN de la cadena 5-3 recin sintetizado. Por ultimo, la ADN ligasa conecta el extremo 3 de ese tramo
con el extremo 5 de la cadena 3-5, y la telomerasa se libera. Debe sealarse que no existe un balance
exacto entre las perdidas telomricas y sus recuperaciones peridicas, de ah que el largo de los
telmeros sea diferente en los distintos cromosomas.

La separacin de las cadenas de la molcula de ADN es dirigida por una enzima especifica llamada
helicasa, la cual, situndose en la horquilla de replicacin por delante de la ADN polimerasa , se
encarga de eliminar los puentes de hidrogeno que unen las bases complementarias de las dos cadenas de
la doble hlice. Este proceso requiere energa, que es cedida por el ATP. A medida que avanza la
horquilla de replicacin, la helicasa deja tras de s tramos de las dos cadenas del ADN con sus
nucletidos expuestos. Recordemos que para dar lugar a la cadena discontinua, los nucletidos de la
cadena progenitora 5'>3' permanecen un tiempo sin replicar y deben combinarse con las protenas
SSB para evitar que se produzcan apareamientos entre ellos.
La helicasa no puede abrir la doble hlice del ADN como si abriera un cierre relmpago. La causa de esa
restriccin deriva de la naturaleza helicoidal del ADN, conforme las cadenas del ADN se separan a nivel
de la horquilla de replicacin, se va acumulando por delante de esta en la doble hlice no abierta todava
un enrollamiento cada vez mayor. Como es de suponer, por arriba de cierto nivel el enrollamiento hace
inviable la separacin de las cadenas por la helicasa. Por lo tanto, para que la enzima no sea frenada, es
necesario compensar ese superenrollamiento con un desenrollamiento equivalente, a fin de prevenir
excesivas tensiones torsionales en el segmento no replicado de la doble hlice.
El desenrollamiento es llevado a cabo por dos enzimas especficas la topoisomerasa I y la girasa (o
topoisomerasa II). Ambas, utilizando energa provista por el ATP, remueven cada una de las vueltas en
exceso mediante un mecanismo que se cumple en tres pasos. Comencemos por la topoisomerasa I:
primero corta una de las cadenas de la doble hlice; luego la cadena cortada gira una vuelta en torno de
su propio eje; finalmente los extremos cortados se vuelven a unir. La girasa, en cambio, en el primer
paso no corta una sino las dos cadenas del ADN, las cuales, luego de girar una vuelta alrededor del eje
de la doble hlice, restablecen sus uniones. As, ambas enzimas primero se comportan como nucleasas
(cortan al ADN a nivel de las uniones fosfodiester) y luego como ligasas (reconectan las piezas
cortadas, despus de haber rotado el ADN). La topoisomerasa I y la girasa se diferencian no solo
porque la primera corta una de las cadenas del ADN y la segunda corta las dos, sino adems por sus
34
efectos, ya que el desenrollamiento del ADN producido por la topoisomerasa I es de corto alcance y el
conseguido por la girasa abarca una extensin de ADN bastante mayor.
Por sus mecanismos de accin, la topoisomerasa I y la girasa no son responsables del desenrollamiento
de los distintos grados de compactacin de la cromatina causados por la asociacin del ADN con las
histonas, no hay dudas de que la compactacin del ADN afecta la replicacin, ya que la heterocromatina,
a diferencia de la eucromatina, se replica muy tardiamente en la fase S.
Las cadenas de la doble hlice progenitora, al separarse para su replicacin, se reparten por igual en
ambos cromosomas hijos. En cambio, no se sabe como se segregan las historias. Es posible que al cabo
de la replicacin sean heredadas totalmente por uno de los cromosomas hijos, caso en el cual el otro
cromosoma hijo debe proveerse de histonas sintetizadas recientemente. En su mayor parte las nuevas
histonas se sintetizan en la fase S y se incorporan al cromosoma apenas su ADN es formado.
Dado que las cadenas recin construidas permanecen con las cadenas moldes, quedan formadas dos
nuevas dobles hlices de ADN, por consiguiente al concluir la replicacin los cromosomas contienen una
doble dotacin de ADN y las molculas gemelas es decir, las cromtidas permanecen unidas por el
centrmero. Podemos decir que la replicacin del ADN constituye el prlogo de la divisin celular.

ERRORES EN LA REPLICACIN
El material gentico se halla en constante peligro de ser alterado no slo por la accin de diversos
agentes ambientales, sino tambin espontneamente, por ejemplo, como consecuencia de errores
durante la replicacin. Cuando las alteraciones del genoma involucran a uno o a unos pocos nucletidos se
denominan mutaciones gnicas. Otras veces las alteraciones son de tal magnitud que afectan al propio
cariotipo, motivo por el cual adquieren el nombre de aberraciones cromosmicas. Estas aberraciones
pueden ser estructurales o numricas. En las estructurales son afectadas partes extensas de uno de
los cromosomas, que pueden perderse (delecin) o sufrir una inversin, una duplicacin o una
translocacin. En las numricas, en cambio, el cariotipo exhibe un nmero mayor o menor de
cromosomas.
Las mutaciones gnicas ms comunes consisten en la sustitucin de un nucletido por otro, en la prdida
(delecin) de uno o varios nucletidos, o en la insercin (intercalacin) de uno o varios nucletidos en la
molcula de ADN. Cualquiera que sea el tipo de mutacin, genera un cambio en la informacin contenida
en el gen y lleva a la produccin de una protena distinta de la esperada o a su falta de produccin. Como
se sabe, el cambio de un nucletido en un gen da lugar a un codn diferente y, en consecuencia, a la
presencia en la protena de un aminocido que no corresponde (salvo que el nuevo codn sea sinnimo
y, por lo tanto, codifique al mismo aminocido). Muchas veces el cambio de un solo aminocido en una
molcula proteica produce alteraciones sustanciales en sus funciones, ya que al modificarse su
estructura primaria se alteran tambin sus estructuras secundaria y terciaria. La delecin o la
intercalacin de un nucletido en un gen modifican el "encuadre" de los codones en el ARNm desde el
sitio de la mutacin hasta el codn terminal. Ello suele traducirse en la produccin de una protena
aberrante o, ms comnmente, en la interrupcin de su sntesis, al aparecer un codn de terminacin
antes del lugar que corresponde.
Las mutaciones pueden producirse en las clulas somticas o en las germinativas. En el primer caso, si
bien pueden afectar el fenotipo de los individuos, no pasan a la descendencia. En cambio, cuando se
instauran en las clulas germinativas suelen transmitirse a la descendencia de generacin en generacin.
Para los individuos las mutaciones suelen ser perjudiciales. En efecto, cuando corresponden a protenas
involucradas en la morfognesis, las mutaciones se traducen en malformaciones congnitas anatmicas.
Otras veces las protenas modificadas dan lugar a alteraciones funcionales o a trastornos metablicos
(como ejemplos de las primeras pueden mencionarse las hemoglobinopatas, en las que la presencia en la
hemoglobina de un solo aminocido inadecuado suele generar graves disfunciones sanguneas). En los
trastornos metablicos se alteran enzimas que participan en distintos procesos metablicos de la
clula. Las mutaciones tambin pueden afectar a genes imprescindibles para la supervivencia de las
clulas o a genes involucrados en el control de la multiplicacin celular; en el ltimo caso suele
descontrolarse la proliferacin de las clulas, con la consiguiente aparicin de cuadros cancergenos.
Consideradas desde el punto de vista biolgico general, las mutaciones gnicas tienen un lado positivo,
ya que al acumularse en el genoma forjan a veces las condiciones para la creacin de individuos mejor
adaptados al medio ambiente, base de la evolucin de las especies.
35
La mayor parte de las mutaciones gnicas que afectan a las clulas se producen espontneamente
durante la replicacin del ADN. Ello se debe a que mientras se sintetizan las cadenas hijas suelen
insertarse nucletidos incorrectos, o nucletidos de menos o de ms. La clula ha desarrollado
mecanismos especiales para corregir tales errores y as lograr la mayor fidelidad posible en la
duplicacin del ADN. Esos mecanismos eliminan el 99,9% de los errores producidos durante la
replicacin, de modo que, de los numerossimos nucletidos incorrectamente insertados cada vez que se
copian los millones de pares de nucletidos en el genoma humano, en promedio persisten errados slo
tres.
Existen otras clases de mutaciones gnicas espontneas, no vinculadas con la replicacin del ADN. Una
de ellas producida como consecuencia de un proceso llamado desaminacin deriva de la facilidad que
tienen la bases de algunos nucletidos para perder sus grupos amino. Cuando la citosina se desamina se
convierte en uracilo, que se aparea con la adenina y no con la guanina. Si la clula no corrigiera el error,
reemplazando el uracilo por una citosina, en la prxima replicacin, al asumir la cadena hija alterada el
rol de cadena progenitora, hara que se inserte una adenina en lugar de una guanina, lo cual consolidara
la mutacin. Algo anlogo ocurre tambin espontneamente, cuando se desamina la adenina, que al
convertirse en hipoxantina se aparea con la citosina en vez de la timina.

Otra clase de mutacin gnica espontnea llamada apurnizacin se produce cuando una purina se
desprende de su desoxirribosa, de modo que el nucletido afectado pierde su base. Como consecuencia,
queda en el gen un punto llamado sitio AP (por "apurnico"), sin informacin a pesar de no haberse
cortado el ADN.

Existen tres grupos de agentes ambientales que al actuar sobre las clulas inducen la aparicin de
mutaciones: 1) los qumicos, que son los ms difundidos; 2) las radiaciones ionizantes, por ejemplo, la
radiacin ultravioleta de la luz solar, los rayos y los rayos X, y 3) ciertos virus capaces de introducir
piezas de ADN forneo en los genes.
Algunos de estos agentes incrementan la aparicin de las mutaciones que se dan espontneamente
(sustituciones de bases, deleciones, intercalaciones, desaminaciones, apurinizaciones), mientras que
otros generan en el ADN otras clases de cambios. As, tanto los rayos como los rayos X producen
roturas en el ADN. Por su lado, la luz ultravioleta desencadena la formacin, en una de las cadenas de la
doble hlice, de varios tipos de dmeros entre pirimidinas adyacentes, de los cuales los mas comunes
son los dimeros de timina; la unin covalente entre dos timinas vecinas distorsiona su apareamiento con
las adeninas de la cadena opuesta, lo cual, al interferir la replicacin normal del ADN conduce a la
aparicin de mutaciones.
36

Formacin de dmeros de timina por accin de la luz ultravioleta.
REPARACIN DEL ADN
Para cada tipo de alteracin del ADN existe un mecanismo de reparacin particular, dirigido por un
conjunto de enzimas especficas. En la mayora de los casos se basan en la informacin gentica
complementaria existente entre las dos cadenas del ADN, de modo que si una de ellas sufre alguna
alteracin (mutacin), puede ser reparada a partir de la informacin normal contenida en la otra cadena.
Como en todo proceso biolgico, los mecanismos reparadores de errores en el ADN pueden fallar, de ah
la aparicin de mutaciones gnicas.
Durante la replicacin del ADN, para que un nucletido pueda ser agregado en el extremo 3 de la
cadena hija en crecimiento, es imprescindible que el nucletido incorporado precedentemente sea el
adecuado, ya que si la ADN polimerasa inserta en forma accidental un nucletido incorrecto, "percibe"
el error y no agrega nuevos nucletidos, lo cual detiene transitoriamente el crecimiento de la cadena. El
error es resuelto por la propia enzima mediante el ejercicio de una propiedad adicional que posee,
conocida como "lectura de pruebas". As, la ADN polimerasa, ante la presencia de un nucletido
incorrectamente insertado, retrocede y lo elimina, utilizando la actividad exonucleoltica 3 -5 de una de
sus subunidades. Luego, una vez eliminado el nucletido, la sntesis del ADN progresa normalmente.
Como vemos, durante la replicacin la ADN polimerasa controla y resuelve los errores que ella misma
comete.

Sin embargo, dada la importancia de la integridad del ADN, si fallara esta "lectura de pruebas" se pone
en marcha un segundo sistema de reparacin, que se cumple en tres pasos. Primeramente, el o los
nucletido errneos son removidos por una nucleasa reparadora la misma que remueve a los cebadores
en la sntesis continua y discontinua del ADN, para lo cual la nucleasa corta las uniones fosfodiester
donde se ligan los nucletidos correctos con los incorrectos. A continuacin, el espacio que queda vaci
es llenado por los nucletidos adecuados mediante una reaccin conducida por la ADN polimerasa . El
proceso se completa cuando la ADN ligasa conecta el extremo 3 del nuevo ADN con el extremo 5 del
ADN cortado. Debe existir alguna seal que le permita a la nucleasa reparadora distinguir en cual de las
dos cadenas del ADN se encuentra el nucletido incorrecto. En los procariotas, tal reconocimiento se
37
basara en una diferencia transitoria en la metilacin de ciertas adeninas de las dos cadenas, ya que
transcurre un tiempo entre la sntesis de la cadena hija y esa metilacin y los errores seran reparados
durante ese periodo.
Fuera de la replicacin, la aparicin en el ADN de uracilos en lugar de citosinas como consecuencia de
desaminaciones espontneas desencadena un mecanismo de reparacin distinto, que utiliza una ADN
glicosilasa especifica. Esta reconoce y corta la conexin qumica entre la base errnea y la
desoxirribosa ligada a ella, de modo que deja al nucletido sin su base. En forma similar, otra ADN
glicosilasa especifica remueve las hipoxantinas surgidas al desaminarse las adeninas. Cada desoxiribosa
sin base o sitio AP (en ese caso, por "apurnico" o por "apirimidnico") es reconocida, y por lo tanto
removida, por dos enzimas que actan en forma sucesiva. En primer termino interviene una AP
endonucleasa, que corta el extremo 5 del sitio AP. Luego lo hace una fosfodiesterasa que al cortar el
extremo 3 de ese sitio remueve la desoxirribosa del ADN. A continuacin, la ADN polimerasa coloca
el nucletido correcto en el lugar vacio y la ADN ligasa pone fin a la reparacin. Los sitios AP apurnicos
que se producen al perderse alguna purina en forma directa son reconocidos y reparados por las mismas
enzimas correctoras de los sitios AP surgidos tras las desaminaciones.
La mayor parte de las mutaciones inducidas por agentes ambientales son reparadas por los mismos
mecanismos que se utilizan en la correccin de las mutaciones espontneas. En cambio, los dimeros de
timina generados, por la luz ultravioleta son removidos por un sistema de enzimas especiales que
hidrolizan simultneamente dos uniones fosfodiester, una a cada lado de la lesin. As, luego de
reconocer la distorsin provocada por la presencia del dimero, sendas nucleasas cortan en la cadena
afectada la quinta y la vigesimocuarta unin fosfodiester, contadas a partir del dimero en direccin 3 y
5, respectivamente. A continuacin, el segmento de 29 nucteotidos que obviamente incluye al dimero es
separado de la cadena normal por la ADN helicasa que al cortar los puentes de H entre los nucletidos
de ambas cadenas libera a ese segmento del ADN. La reparacin se completa cuando el lugar vaci es
rellenado con la ayuda de una ADN polimerasa, y el extremo 5 del nuevo ADN es ligado por la ADN
ligasa.

ORGANIZACIN MOLECULAR DEL ARN
El ARN esta constituido por ribonucletidos (4 diferentes nucleotidos de ribosa) los mismos que se
repiten en toda la secuencia polinucleotidica, estos nucleotidos estas unidos entre si mediante enlaces
fosfodiester en sentido 5 3 al igual que en el ADN. El ARN es sintetizado dentro del ncleo a partir
de una sola de las cadenas del ADN. Las molculas del ARN se diferencian del ADN en tres aspectos
fundamentales:
1. Los nucleotidos del ARN estan formados por la pentosa ribosa en lugar de la desoxirribosa del ADN.
2. El ARN presenta la base nitrogenada uracilo en lugar de la timina del ADN.
3. Las molculas del ARN son de una sola cadena de polinucleotidos.
La nica cadena que constituye al ARN con frecuencia presenta regiones donde hay bases nitrogenadas
complementarias, en las cuales se establecen uniones de hidrgeno entre pares de adenina uracilo y
guanina citosina como consecuencia de esto llegan a conformar estructuras bicatenarias semejantes al
ADN, existen plegamientos donde el apareamiento de las bases se lleva a cabo en forma tautomerica.
Las estructuras secundarias y terciarias del ARN consisten en que la cadena al plegarse sobre s misma
constituye las asas, loops o brazos y asimismo conforman plegamientos o estructura de hojas plagadas.
TRANSCRIPCION O SNTESIS Y PROCESAMIENTO DE ARN.
Las clulas eucariotas poseen tres enzimas transcriptoras distintas, cada una encarga de la sntesis de
diferentes grupos de ARN. La ARN polimerisa I sintetiza ARN ribosmico grande; la ARN polimerisa II
sintetiza ARN mensajero y la mayor parte de los ARN nucleares pequeos; y la ARN polimerisa III
sintetiza ARN de bajo peso molecular, incluyendo varios ARN de transferencia y el ARN ribosmico 5S.
No se han encontrado procariotes con ARN polimerisas mltiples.
Los tres principales tipos de ARN, se derivan de molculas de un precursor de ARN considerablemente
mucho mayor que el producto ARN maduro. La molcula de ARN inicialmente sintetizada, de longitud
equivalente a la longitud completa del ADN transcrito, se denomina transcrito primario, o pre-ARN. El
segmento de ADN correspondiente sobre el cual se transcribe el transcrito primario se denomine
unidad de transcripcin. Tpicamente, los transcritos primarios tienen existencia fugaz y son
38
procesados para formar ARN funcional ms pequeo mediante una serie de reacciones de
procesamiento.

ARN RIBOSMICO (ARN
r
)
Las clulas eucariotas contienen millones de ribosomas, cada uno con varias molculas de ARNr junto
con docenas de protenas ribosmicas. En realidad, ms de 80% del ARN de una clula consta de ARN
ribosmico. Para suministrar a la clula un nmero tan grande de transcritos, las secuencias de ADN
que codifican ARNr normalmente se repiten cientos de veces. Este ADN ribosmico, de ordinario se
agrupa en una o unas pocas regiones del genoma. En la clula en interfase, los racimos de ADN
ribosmico se agrupan como parte de una o ms estructuras nucleares de forma irregular denominadas
nuclolos, que funcionan como estructuras productoras de ribosomas. Por consiguiente, las regiones del
cromosoma que contienen ADN ribosmico se denominan organizadores nucleolares.
Los ribosomas eucariotas tienen cuatro ARN ribosmicos distintos, tres en la subunidad grande y uno
en la subunidad pequea. En el hombre la subunidad grande contiene una molcula ARN 28S, una 5.8S y
una 5S, en tanto que la subunidad pequea contiene una molcula ARN 18S. Tres de estos ARNr (28S,
18S y 5.8S) se derivan de un solo transcrito primario (denominado pre-ARN). El ARNr 5S se sintetiza a
partir de un precursor ARN separado fuera del nuclolo.
El ARN 45S es precursor de las molculas 28S, l8S y 5.8S. La longitud combinada de los tres ARNr
maduros es de aproximadamente 7000 nucletidos, poco ms de la mitad del transcrito primario. Est
ARN precursor a su vez sufre procesos de modificacin post-transcripcional ya que paulatinamente se
va produciendo los recortes de las regiones intron las mismas que son extirpadas por lo tanto el ARN
45S se transforma en ARN 32S y ARN 20S a su vez el ARN 32S se transforma en 28S y 5.8S, en
tanto que el ARN 20S se transforma en 18S.
El nuclolo no slo es sitio de procesamiento de ARNr, sino tambin de ensamblado de las dos
subunidades ribosmicas, tiene estructura simple y carece de un componente membranoso, la parte
central fibrilar del nuclolo consiste en transcriptos de ADN ribosmico y ARNr nacientes. Los
grnulos que rodean este centro constan de subunidades ribosmicas en varias etapas de maduracin, lo
que indica que son los sitios de sntesis de ARN.

El ARNr 5S, de 120 nucletidos de largo aproximadamente, forma parte de la subunidad ribosmica
mayor conjuntamente que 28S y 5.8S. En clulas eucariotas, los genes ARNr 5S estn totalmente
separados de los genes que codifican los otros ARNr y se localizan fuera del nuclolo en una regin
39
especifica del ncleo. La ARN polimerasa III transcribe los genes ARNr 5S. Luego de su sntesis, el
ARNr 5S se transporta al nuclolo para unirse a los otros componentes que participan en el ensamblado
de subunidades ribosmicas. La funcin del ARNr es la de participar en la sntesis de protenas cuando
la subunidad mayor (28S, 5.8S y 5S + RNP) y la subunidad menor (18S + RNP) de los ribosomas se
encuentran en el citoplasma celular constituyendo los poliribosomas o polisomas.

ARN DE TRANSFERENCIA (ARN
t
).
Se estima que las clulas eucariotas tienen aproximadamente 60 especies diferentes de ARN de
transferencia, cada una codificada por una secuencia de ADN repetida varias veces dentro del genoma.
El grado de repeticin vara con el organismo. El ARN de transferencia se sintetiza a partir de genes
localizados dentro de pequeos grupos dispersos alrededor del genoma es decir se transcribe en el
ncleo a partir de una solo cadena de ADN. Un solo grupo tpicamente contiene mltiples copias de
diferentes genes de ARNt e inversamente, la secuencia de ADN que codifica un ARNt de ordinario se
encuentra en ms de un grupo. La ARN polimerasa III transcribe los ARNt, el transcrito primario de
una molcula de ARN de transferencia o pre-ARNt es mayor que el producto final, est pre-ARNt
sufre modificaciones post-transcripcionales diferentes para luego convertirse en ARNt maduro.

Las modificaciones post-transcripcionales consisten en los cortes de las regiones intron en el cual
participan las endonucleasas y exonucleasas, seccionandose los fragmentos sobre ambos extremos 5 y
3 del ARNt precursor (y un fragmento interior en algunos casos) de manera que los ARNt maduros
queden con 90 nucleotidos. El ARN de transferencia o de transporte presenta estructura secundaria,
semejante a la hoja de un trebol, la sntesis del ARNt se inicia del extremo 5 a su vez plegndose y
formando la primera asa o brazo denominado D por contener dihidroxiuridina, la asa central viene
hacer el brazo del anticodn el cual en el extremo de dicho brazo presenta 3 bases complementarias a
los codones del ARNm. El anticodn tiene como funcin reconocer los codones del ARNm durante la
sntesis de protenas, luego se forma el tercer brazo T porque presenta una pseudotimina y
pseudouridina, terminando en el extremo 3 a la que se denomina brazo o tallo aceptor porque a este se
enlazan aminocidos activados. Este extremo tiene siempre la secuencia CCA, los tres nucletidos se
aaden por medio de enzimas luego de procesar el ARNt, por ltimo presenta un brazo pequeo
pentanucleotidico. La funcin del ARNt es la de transportar los aminocidos activados hasta los
poliribosomas durante la sntesis de protenas.

ARN MENSAJERO (ARN
m
).
El ARNm se sintetiza como parte de molculas mucho mayores de ARN nuclear heterogneo (ARNnh) es
decir es precursor de los ARNm citoplasmticos, este ARN slo se encuentra en el ncleo, presenta un
peso molecular elevado en conjunto, corresponde a ARN con diversas secuencias de nucletidos
(heterogneos). Por lo tanto aunque el ARNm y sus precursores ARN nucleares heterogneos slo
constituye un pequeo porcentaje del ARN total, en la mayor parte de las clulas eucariotas significa,
en todo momento, un elevado porcentaje del ARN sintetizado en dichas clulas. El ARNnh es
sumamente inestable (por su rpido procesamiento en el ncleo); el ARNm es relativamente inestable
(debido a su descomposicin en el citoplasma); los ARNr y ARNt son relativamente estables, y por lo
tanto se acumulan gradualmente y as llegan a ser la especie predominante dentro de la clula.
40

La ARN polimerasa II sintetiza a todos los ARNm precursores con ayuda de algunas protenas
auxiliares denominadas factores generales de transcripcin, el promotor de la polimerasa II se sita en
el lado 5 de la unidad de transcripcin. En la mayor parte de los genes estudiados, presenta una porcin
denominada elemento promotor central. Esta regin contiene una secuencia de bases idntica a otra del
oligonucletido 5-TATAAA- 3, tambin conocida como compartimiento TATA. El compartimiento TATA
del ADN es el sitio donde se ensambla un complejo preinicial que contiene los factores generales de
transcripcin y la polimerasa. De igual manera que el segmento Pribnow de los procariotas, al cual se
parece, el segmento TATA determina el sitio preciso donde se inicia la transcripcin.

Los ARN mensajeros contienen una secuencia continua de nucletidos que codifica un polipptido
especfico; se encuentran en el citoplasma y estn fijos a ribosomas o tienen capacidad para unirse a
ellos para ser traducidos, los ARNm eucariotas presentan modificaciones especiales en sus extremos
terminales 5 y 3 no observadas en los mensajeros procariotas. El extremo 5 de un ARNm eucariota
tiene un casquete de guanosina metilada en tanto que el extremo 3 tiene una cadena de 50 a 250
residuos de adenosina que forman un apndice poli(A).
El anlisis de la transcripcin del genoma revel que la secuencia principal 5 no es complementaria de
una secuencia repetida y, ms an, ni siquiera es complementaria de un tramo continuo de nucletidos en
la plantilla de ADN. En vez de eso, la secuencia principal se transcribe a partir de segmentos de ADN
distintos y separados. Las regiones de ADN situadas entre estos bloques son conocidas como
secuencias interpuestas y estn ausentes en el ARNm correspondiente. Se demostr que la presencia
de genes con secuencias interpuestas, llamados genes cortados, es mas la regla que la excepcin. Las
partes de un gen cortado que contribuyen a un producto ARN maduro se denominan exones. En tanto
que las partes que corresponden a las secuencias interpuestas se denominan intrones. Entonces en el
transcrito primario estan presentes los segmentos correspondientes a los intrones. Esta explicacin
41
tambin suministra una razn acerca del tamao mucho mayor de las molculas de ARNhn en
comparacin con las molculas de ARNm que finalmente producen. Estudios subsecuentes han revelado
que los intrones de un gen promedian 4 a 10 veces la longitud de los exones, y por esta razn las
molculas del ARNnh en condiciones tpicas son mucho mas largas que las de ARNm. La formacin del
ARNm ocurre por supresin de la secuencia interna de ribonucletidos a partir de un pre - ARNm
mucho ms grande.
La ARN polimerasa II ensambla un transcripto primario complementario del ADN de toda la unidad de
transcripcin, a continuacin este transcripto se procesa en el ncleo para formar ARNm maduro que se
transporta al citoplasma. Los transcriptos de ARN se asocian a diferentes protenas huspedes y a
numerosas particulas distintas mientras an se encuentran en proceso de sntesis. Estas partculas
constan de protenas y ribonucleoprotenas, e incluyen los agentes encargados de convertir el
transcrito primario en el mensajero maduro. Los primeros pasos de este proceso de conversin incluyen
la adicin en el extremo 5 del ARN de un casquete o capuchon de metilguanosina (Guanidil 7 metil
trifosfato). Las modificaciones enzimticas en el extremo 5 del transcrito primario ocurren con gran
rapidez, mientras la molcula de ARN todava se encuentra en las etapas iniciales de sntesis. Adems
de la metilacin de los nucletidos terminales del precursor ARNm, varios residuos de nucletidos
internos tambin pueden ser metilados o no serlo. Se cree que el casquete de metilguanosina tiene
varias funciones: evita que el extremo 5 del ARNm sea digerido por nucleasas, ayuda a transportar
ARNm hacia fuera del ncleo y desempea un papel importante para iniciar la traduccin del ARNm.
El extremo 3 de un ARNm contiene una cadena de residuos de adenosina que forman un apndice poli
(A). Este apndice invariablemente se encuentra a unos 15 nucleotidos hacia abajo de una secuencia
AAUAAA que sirve como sitio de reconocimiento para una nucleasa que desdobla el pre ARNm situado
justamente hacia abajo de este sitio, una enzima llamada polimerasa poli (A) aade las adenosinas que
componen el apendice poli (A), este participa en la estabilizacin del ARNm dentro del citoplasma
protegindolo del desdoblamiento prematuro. Puesto que un porcentaje considerable del ARNm carece
de apndice poli(A) (incluyendo los que codifican histonas), la presencia de esta modificacin no es
requisito para la sntesis, procesamiento, transporte o traduccin de un ARNm eucariota.
Las partes de un transcrito primario que corresponden a secuencias de ADN interpuestas (intrones) se
eliminan mediante un proceso complejo conocido como empalme del ARN. Para empalmar un ARN se
debe introducir una pausa en la cadena a nivel de los bordes 5y 3(o sitios de desdoblamiento) de cada
intron y los exones situados a ambos lados de los sitios de empalme deben unirse mediante enlaces
covalentes (ligados). Es imperativo que el proceso de empalme ocurra con absoluta precisin, puesto que
la presencia o ausencia de un solo nucletido anormal en cualquiera de las uniones de empalme cambia el
cuadro de lectura del mensaje y causa errores de traduccin.
Conforme las molculas grandes de ARNnh se transcriben, cada intrn se asocia a un complejo
macromolecular llamado espliceosoma.

El pre ARNm de clulas animales no se puede empalmar por si mismo, sino que requiere mltiples ARNnp
42
nucleares y sus protenas relacionadas. Las protenas ejerceran un papel complementario, por ejemplo,
mantener la estructura tridimensional apropiada de los ARNnp para transportar a los ARNm
empalmados a la envoltura nuclear y actuar como sitios de interaccin con factores reguladores. Puesto
que la mayor parte de los genes contienen algunas secuencias interpuestas, las reacciones de
empalmado mostradas deben ocurrir repetidas veces sobre un solo transcrito primario para eliminar
todos los intrones del pre ARNm, las pruebas sugieren que los intrones se eliminaran en un orden
preferido generando intermediarios especficos de procesamiento cuyo tamao varia entre el del
transcripto primario y el ARNm maduro.
La funcin del ARNm es la de recibir el mensaje de la informacin gentica (caracteres hereditarios)
contenida en el ADN, dicha transcripcin ocurre en forma codificada, en forma de codones o tripletes,
dicho ARNm emerge del ncleo para traducir el mensaje recepcionado al lenguaje de protenas.

ENZIMAS CELULARES
Las enzimas son protenas globulares que actan como biocatalizadores, es decir, son sustancias que
aceleran la velocidad de las reacciones qumicas en los seres vivos sin modificarse. El sustrato es toda
molcula sobre la que acta una enzima, la energa necesaria para transformar un sustrato en producto
se denomina Energa de Activacin, el tiempo que demora en transformarse un sustrato en producto se
denomina Tiempo de Reaccin. Las enzimas disminuyen la energa de activacin y el tiempo de reaccin
por consiguiente aceleran la velocidad de las reacciones qumicas.

Las enzimas (E) son protenas que tienen uno o ms lugares denominados sitios activos, a los cuales se
une el sustrato (S). El sustrato es modificado qumicamente y convertido en uno o ms productos (P).
Como esta reaccin es generalmente reversible puede ser expresada de la siguiente manera:

E + S (E S) E + P

Donde (E S) es un complejo enzima-sustrato intermediario. Las enzimas aceleran la reaccin hasta que
se alcanza un equilibrio y pueden ser tan eficientes como para que la velocidad de la reaccin sea de un
milln (10
6
) a un trilln (10
12
) de veces ms rpida que en ausencia del catalizador. Todava ms notable
es que esto se logra a temperaturas y pH sumamente bajos presentes en la clula.
Muchas de las enzimas son protenas conjugadas o sea, contienen elementos no proteicos denominados
cofactores, que pueden ser inorgnicos (metales) u orgnicos (coenzimas). Los cofactores participan de
manera importante en la funcin de la enzima y casi siempre cumplen tareas para las cuales los
aminocidos son inadecuados.
Una caracterstica muy importante de la actividad enzimtica es su especificidad, de manera que cada
enzima particular acta slo sobre un determinado sustrato. Las enzimas suelen ser tan especficas que
son incapaces de actuar sobre sustancias estrechamente relacionadas, por ejemplo sobre un
estereoismero de la misma molcula. Ademas como todo verdadero catalizador, las enzimas muestran
las siguientes propiedades:
43
a) Gran capacidad cataltica, lo que hace que esten presentes en pequeas cantidades es decir las
cantidades infinitesimales son suficientes para la transformacin de una sustancia reactante en
producto.
b) No sufren alteraciones irreversibles en el curso de la reaccin y por lo tanto cada molcula de
enzima puede participar en muchas reacciones individuales, lo que significa que puede ser utilizada una
y otra vez (reutilizacin de la enzima).
c) Presentan sensibilidad, es decir debido a su naturaleza proteica las enzimas estn sujetas a la
desnaturalizacin y prdida de su actividad cataltica.
d) No tienen efecto sobre la termodinmica de la reaccin, es decir no determinan si una reaccin es
termodinmicamente favorable (exergnica) o desvaforable (endergnica) y tampoco determinan cul
es la relacin en el equilibrio entre productos y reactantes.
Las enzimas son mediadoras del metabolismo encargadas prcticamente de toda reaccin que ocurra en
una clula. Sin enzimas, las reacciones metablicas procederan tan lentamente que serian
imperceptibles; en ausencia de enzimas, la vida seria imposible. En este sentido el Metabolismo es el
conjunto de reacciones bioqumicas que ocurren dentro de una clula, el cual incluye gran diversidad de
conversiones moleculares. Estas reacciones se pueden agrupar en vias metablicas que contienen una
secuencia de reacciones qumicas, en las cuales cada reaccin es catalizada por una enzima especfica.
Las enzimas que constituyen una va metablica de ordinario se confinan a una porcin especfica de la
clula, como las mitocondrias y el citoplasma. Cada vez hay ms pruebas que sugieren que las enzimas de
una va metablica estn fsicamente unidas entre si, caracteristica que permite entregar el producto
de una enzima directamente como sustrato al sitio activo de la siguiente enzima en la secuencia de
reacciones.
Los compuestos formados en cada paso a lo largo de la va son intermediarios metablicos (o
metabolitos) que en ltimo trmino conducen a la formacin de un producto final. Los productos finales
son molculas con un papel particular en la clula, como un aminocido que puede incorporarse a un
polipptido, o un azcar que se puede consumir por su contenido energtico. Las vas metablicas de una
clula estn interconectadas en diferentes puntos, de modo que un compuesto generado en una va se
puede repartir en varias direcciones segn las necesidades de la clula en ese momento.
Las vas metablicas se pueden dividir en dos tipos muy amplios:
Vas catablicas, que conducen a la descomposicin de molculas complejas para formar productos ms
simples. Estas Vas tienen dos funciones: poner a disponibilidad la materia prima a partir de la cual se
pueden sintetizar otras molculas y suministrar la energa qumica requerida para muchas actividades
de la clula. La energa liberada por las vas catablicas se almacena transitoriamente en dos formas:
como fosfatos de alta energa (sobre todo ATP) y como electrones de alta energa (en particular en el
NADPH).
Vas anablicas, que conducen a la sntesis de compuestos ms complejos. Las vas anablicas requieren
energa y utilizan la energa qumica almacenada que se libera en vas catablicas exergnicas.
Las vas para la degradacin de los diversos componentes de las macromolculas varin segn el
compuesto particular que debe catabolizarse. Sin embargo, finalmente todas estas molculas se
convierten en una variedad de pequeos compuestos que se metabolizan de manera similar. As, aunque
las sustancias empiezan como macromolculas con estructuras muy diferentes a travs de las vas
catablicas, se convierten en los mismos metabolitos de bajo peso molecular. Por esta razn, se dice
que las vas catablicas son convergentes.
Ambas vas, catablica y anablica, incluyen reacciones clave en las cuales se transfieren electrones de
un reactante al otro. Las reacciones que implican cambios en el estado electrnico de los reactantes se
denominan reacciones de oxidorreduccin (o redox). Los cambios de este tipo se acompaan de
ganancia o prdida de electrones, cuando un tomo pierde uno o ms electrones se dice que se oxida,
cuando un tomo gana uno o ms electrones se dice que se reduce. La oxidacin de un reactante debe
acompaarse de la reduccin simultnea de algn otro reactante, y viceversa.
La sustancia que pierde electrones durante una reaccin de oxidorreduccin, o sea, la que se oxida, se
denomina agente reductor, y la sustancia que gana electrones, o sea, la que se reduce, se denomina
agente oxidante.
44

La oxidacin y la reduccin de sustratos orgnicos durante el metabolismo celular implica tomos de
carbono enlazados en forma covalente a otros tomos. En un enlace C H, el tomo de carbono tira con
mayor fuerza de los electrones, por lo que se puede decir que el tomo de carbono se encuentra en
estado reducido. Por lo contrario, si un tomo de carbono est enlazado a un tomo ms electronegativo
como en los enlaces C O o C N, los electrones son empujados con mayor fuerza para separarse del
tomo de carbono, que por lo tanto se encuentra en estado oxidado. Puesto que el carbono tiene cuatro
electrones en su capa ms externa que puede compartir con otros tomos, puede existir en varios
estados de oxidacin que van desde el estado completamente reducido en un metano (CH
4
) hasta un
estado completamente oxidado en el dixido de carbono (CO
2
). El estado de oxidacin relativo de una
molcula orgnica por lo general se puede determinar contando el nmero de tomos de hidrgeno en
comparacin con los tomos de oxgeno y de nitrgeno por cada tomo de carbono. El estado de
oxidacin de los tomos de carbono en una molcula orgnica constituye una medida del contenido de
energa libre de la molcula. El grado de reduccin de un compuesto tambin se mide a partir de su
capacidad para efectuar trabajo qumico dentro de la clula. Cuanto mayor sea el nmero de tomos de
hidrgeno que se puedan separar de una molcula combustible, mayor ser la cantidad de ATP que
finalmente se forma. As, por ejemplo los carbohidratos son ricos en energa qumica debido a que
contienen hileras de unidades de H C OH. Como nico componente, tanto del almidn como del
glucgeno, la glucosa es una molcula clave en el metabolismo energtico tanto de plantas como de
animales. La energa que se libera por oxidacin completa de la glucosa es muy grande siendo esta de
686 Kcal / mol.

C
6
H
12
O
6
+ 6 O
2
6 CO
2
+ 6 H
2
O

En comparacin, la energa libre requerida para formar ATP a partir de ADP es relativamente pequea
siendo esta de 7.3 Kcal / mol.

ADP + Pi ATP + H
2
O

De estas cifras es evidente que la oxidacin completa de una molcula de glucosa para formar CO
2
y
H
2
O puede liberar bastante energa para formar ATP en gran cantidad. En las condiciones presentes
en la mayor parte de las clulas se pueden formar hasta 36 molculas de ATP por molcula de glucosa
oxidada.
C
6
H
12
0
6

I Glucolisis

Acido piruvico

Organismos anaerobios Organismos aerobios

Acido lctico (bacterias) II Matriz mitocondrial

Etanol (levaduras) Acetil CoA

45

Ciclo de Krebs

III Fosforilacin Oxidativa

Alteracin de la actividad de las enzimas mediante modificacin covalente.
A mediados del decenio de 1950, Edmond Fischer y Edwin Krebs, de la universidad de Washington,
estudiaron la fosforilasa, una enzima presente en clulas musculares que descompone el glucgeno en
subunidades de glucosa. La enzima puede existir en sus formas activa e inactiva. Fischer y Krebs
prepararon un extracto crudo de clulas musculares y observaron que las molculas de enzima inactiva
del extracto podan convertirse en activas simplemente aadiendo ATP al tubo de ensayo. Un anlisis
posterior revel una segunda enzima en el extracto, la enzima convertidora, como ellos la llamaron,
que transfiere un grupo fosfato del ATP a uno de los 841 aminocidos que constituyen la molcula de la
fosforilasa. La presencia del grupo fosfato altera la forma del sitio activo en la molcula de la enzima e
incrementa su actividad catalitica. Una investigacin subsecuente demostr que la modificacin
covalente de las enzimas, por la adicin de fosfatos, es un mecanismo general para activar (o inactivar)
enzimas.

Las enzimas que transfieren grupos fosfatos a otras protenas se denominan proteincinasas y
participan en la regulacin de actividades tan diversas como la accin de hormonas, la divisin celular y
la expresin de genes. Hay dos tipos bsicamente diferentes de proteincinasas: un tipo aade grupos
fosfato a residuos especificos de tirosina en una protena de sustrato, el otro tipo aade fosfatos a
residuos especificos de serina o treonina en el sustrato. Las enzimas al estar fosforiladas tienen
actividad enzimatica mucho ms reactivas que otras no fosforiladas, la actividad de algunas
proteincinasas se estimulan por el AMPciclico a su vez el AMPciclico es regulado por hormonas que
actuan sobre receptores de membrana.

Proteina + ATP Protena fosforilada + ADP

Separacin de las vas catablica y anablica.
46
Un breve examen de la va anablica que conduce a la formacin de glucosa (gluconeogenesis) ilustra
algunos aspectos importantes acerca de las vas sintticas. Cmo se puede sintetizar glucosa a partir
de piruvato en una clula que normalmente oxida glucosa como su principal fuente de energa qumica?.
El primer punto importante es: aunque las enzimas pueden catalizar una reaccin en ambas direcciones,
la formacin de glucosa no puede iniciarse simplemente invirtiendo las reacciones de la glucli sis. La va
glucoltica contiene tres reacciones termodinmicamente irreversibles. Si se comparan las vas para
degradar la glucosa (gluclisis) con la va para sintetizarla (gluconeogenesis), se observa que algunas
reacciones son idnticas aunque ocurran en direcciones opuestas, en tanto que otras son muy
diferentes. Empleando enzimas diferentes para catalizar distintas reacciones clave en dos vas
opuestas, la clula puede asi, resolver los problemas termodinmicos y de regulacin inherentes a su
capacidad para elaborar y degradar a las molculas mismas.

ENZIMAS EN LAS ESTRUCTURAS CELULARES Y FUNCIONES QUE CUMPLEN

ESTRUCTURA ENZIMA FUNCION
1. MEMBRANA PLASMATICA Permeasas
Translocasas

Bombas (ATPasas)

Bombas que no son ATPasas

Adenil ciclasa (superficie interna de
membrana)
Acetil colinesterasa (superficie
externa de la membrana)
Bombas de glucosa (transportadores
de glucosa)
Transporte de macromolculas desde
el espacio extra al intra celular o
viceversa.
Transporte de iones con aporte de
energa proveniente del ATP.
Transporte de iones o electrolitos
con ayuda o impulso de otros iones.

Sintetiza AMPc a partir de ATP.

Receptora de los neurotransmisores.

Transportar a la glucosa.
2. CITOPLASMA Glucoliticas
Aminoacil sintetasa

Glucogeno sintetasa

Glucogeno fosforilasa
Participan en la gluclisis.
Activacin de los Aminocidos para la
sntesis de protenas.
Sntesis de glucgeno a partir de
monmeros de glucosa.
Glucogenolisis.
ORGANELOS
3. PEROXISOMAS

Oxidasas flavinicas
Peroxidasas
Uratoxidasas
Catalaza

Sntesis de peroxido de hidrgeno

En la va catablica del H2O2.
4. GLIOXISOMAS
(vegetales)
Muchas enzimas algunas del ciclo de
Krebs
Ciclo del Glioxilato (degradacin de
lpidos para transformarse en
carbohidratos).
5. RIBOSOMAS
(Sub unidad mayor)
Peptidiltransferasa Catalizan el enlace peptdico del
Aminocido entrante localizado en el
sitio A con el aminocido de la cadena
polipeptidica localizado en el sitio P.
6. RETICULO
ENDOPLASMATICO LISO
Lipasa

Sntesis de lpidos, triglicridos,
fosfolipidos, hormonas esteroideas.
7. APARATO DE GOLGI Glucosiltransferasas
Manosidasas
Glucosilacin de lpidos y protenas.
Degradan a las manosas de las colas
oligosacaridas de las glucoprotenas y
glucolipidos.
8. MEMBRANA EXTERNA DE
MITOCONDRIAS
Muchas enzimas. Oxidacin de lpidos en
carbohidratos
9. MATRIZ MITOCONDRIAL Aconitasa, fumarasa, citrato
sintetasa, etc.
Ciclo de Krebs.
10. CRESTAS
MITOCONDRIALES
Carnitina
ATPasa
Citocromos
Fosforilacin oxidativa.
47
11. NUCLEO ADN polimerasas
ARN polimerasas
Endonucleasas
ADN asas
ARN asas
ADN ligasas
Topoisomerasas
Replicacin del ADN.
Transcripcin de los ARNs.
Reparacin del ADN.
Hidrlisis de ADNs.
Hidrlisis de ARNs.
Union de fragmentos de ADN.
Desenrrollamiento de las cadenas del
ADN.

MECANISMOS DE CONTROL DE LA EXPRESIN DE LOS GENES.
Las clulas no estn constantemente sintetizando todos los tipos de protenas sobre las cuales tienen
informacin. Si as fuera se producira un caos metablico. Es evidente, que debe existir un sistema de
regulacin. Como la cantidad de protenas sintetizadas depende directamente de la cantidad de ARNm
presente en el citoplasma y como la vida media de ste es muy corta (minutos), la cantidad de ARNm
sintetizado es la que regula los niveles enzimticos en el medio.
El descubrimiento de cmo se controla la sntesis de ARNm se inici a partir del llamado efecto
glucosa observado por Jacques Monod en 1947. Si a un medio de cultivo bacteriano con Escherichia
coli y lactosa se aade glucosa, el nivel de la enzima - galactosidasa disminuye sensiblemente. Ello es
lgico, puesto que para conseguir glucosa ya no es preciso desdoblar la lactosa en glucosa y galactosa,
reaccin que cataliza la - galactosidasa. Las enzimas aparecen slo cuando son necesarias y luego son
degradadas.
Posteriormente, durante los aos cincuenta, Francois Jacob y Jacques Monod, trabajando con E. coli,
descubrieron que las enzimas reprimidas en el experimento anterior eran tres: la - galactosidasa, la
- galactsido-permeasa y la - galactsido-transacetilasa. Todas ellas estn relacionadas con el
metabolismo de la lactosa. De este hecho se concluy que el sustrato (glucosa) no slo reprima una
enzima, sino todo el conjunto de enzimas que intervienen en una misma va metablica.
TEORIA DEL OPERON
La teora del opern es un modelo que explica como se efecta el control de la biosntesis proteica. En
las bacterias, los genes que contienen la informacin para ensamblar las enzimas de una va metablica
se agrupan en el cromosoma en un complejo funcional denominado opern. Todos los genes del opern
son coordinados mediante un mecanismo de control descrito por primera vez en 1961 por F. Jacob y J.
Monod, del instituto Pasteur de Paris. Un opern bacteriano tpico consta de genes estructurales, una
regin promotora, una regin operadora y genes reguladores.

Organizacin de un opern bacteriano

Opern de Escherichia coli

Los genes estructurales son los que codifican las protenas estructurales y las protenas enzimticas.
Los genes estructurales de un opern de ordinario se situan adyacentes entre s y una ARN polimerasa
se desplaza de un gen estructural al siguiente, transcribiendo todos los genes a un solo ARNm. Este
ARNm gigante se traduce despus en polipptidos distintos que se convierten en las diferentes enzimas
de la va metablica. Por consiguiente, al ponerse en marcha un gen activa a todos los productores de
enzimas de un opern.
48
La zona promotor es el sitio activo donde la ARN polimerasa se une al ADN antes de iniciar la
transcripcin.
La ARN polimerasa en organismos eucariotas tiene estructura compleja, constituida por 9 a 10
subunidades proteinicas, en procariotas existe una sola enzima, la ARN polimerasa ADN dependiente,
enzima simple tetramerica, constituida por 4 subunidades polipeptidicas que conforman el ncleo de la
enzima a la cual se une otra sub unidad denominada factor sigma cuya funcin es reconocer al promotor.

El promotor presenta 2 sub regiones:
Sub regin Priobnow box.- que contiene 6 nucletidos y se encuentra antes del punto donde se inicia la
transcripcin.
Sub regin de Concenso.- que esta constituida por 35 nucletidos y est sub regin tambin se
encuentra antes del punto de inicio de transcripcin.

La zona operador se sita entre el promotor y el primer gen estructural donde sirve como sitio de
enlace para una protena, denominada represor. El represor es un ejemplo de protena reguladora de un
gen capaz de reconocer una secuencia especfica de pares de bases dentro del ADN y enlazarse a dicha
secuencia con afinidad elevada. Las protenas enlazasas al ADN, como los represores bacterianos,
desempean un papel predominante para determinar si un segmento particular del genoma es
transcripcionalmente activo o silencioso.
Los genes reguladores son los que codifican las protenas cuya misin es controlar la actividad de los
genes estructurales, estas protenas se denominan represores.
La clave para la expresin del opern estriba en el represor. Cuando el represor se enlaza al operador el
promotor queda protegido de la polimerasa y la transcripcin de los genes estructurales se interrumpe.
Si el represor puede enlazarse o no al operador depende de la forma de dicho represor, la cual a su vez,
depende de la presencia o ausencia de un compuesto clave en la va metablica (como lactosa, histidina o
triptofano). La concentracin de esta sustancia metablica clave determina si el opern es activo o
inactivo en cualquier momento dado.
La interaccin entre estos diferentes elementos se puede evidenciar con el opern lac, el grupo de
genes que regula la produccin de las enzimas necesarias para metabolizar lactosa en las clulas
bacterianas. Este opern funciona segn la denominada induccin enzimtica, ya que existen unas
molculas denominadas inductores, que en este caso son las molculas de lactosa que induce la
transcripcin de genes estructurales. Cuando la lactosa entra a la clula se une al represor, cambiando
la conformacin del represor e incapacitndolo para fijarlo al ADN del operador. En este estado, los
genes estructurales se transcriben, se sintetizan las enzimas y las molculas de lactosa se consumen.
As, en un opern inducible, como el opern lac, la protena represora es capaz de enlazarse al ADN slo
en ausencia del inductor. Conforme disminuye la concentracin de lactosa en el medio, el disacrido se
separa de su sitio de enlace sobre la molcula represora. La liberacin de lactosa permite al represor
enlazarse al operador, lo que fsicamente bloquea a la ARN polimerasa y le impide alcanzar a los genes
estructurales, interrumpiendo la transcripcin efectuada por el opern.
49

Opern lac en estado normal.

Opern lac en presencia de lactosa.
Existen otros operones que funcionan segn la denominada represin enzimtica (opern represible).
Por ejemplo el opern his de E. coli responsable de la sntesis de histidina. Si al medio se aade
histidina, desaparecen todas las enzimas necesarias para dicha sntesis. Este tipo de regulacin tambin
se denomina represin por producto final. En ella el represor en estado normal es inactivo es decir el
represor no puede enlazarse por si mismo al operador del ADN, pero si aparece otra molcula
especifica denominada correpresor, en este caso histidina, el represor se vuelve activo y el complejo
represor correpresor se fija sobre la zona promotor y reprime la sntesis enzimtica.

CONTROL DE LA BIOSNTESIS PROTEICA MEDIANTE AMP CCLICO.
Adems del control de la biosntesis debido al opern, se han descrito otros tipos de regulacin. Entre
ellos cabe citar la regulacin por el AMP cclico (AMPc).
El nucletido AMP cclico impide, por ejemplo, la actuacin del represor en el opern lac. Para actuar
necesita el concurso de una protena, denominada proteina activadora del gen catablico (CAP). El
complejo CAP-AMPc tiene una gran afinidad por una zona que hay en el promotor, cerca del gen
regulador del opern y a la izquierda del lugar donde se sita la ARN polimerasa. Parece ser que acta
aumentando la afinidad entre el ADN y la ARN polimerasa (la presencia de la CAP enlazada provoca un
cambio en la conformacin del ADN). Segn se descubri durante una de las primeras investigaciones
del fenmeno denominado efecto glucosa, cuando se suministra esta sustancia a las clulas bacterianas
y tambin algunos otros tipos de sustratos, como lactosa o galactosa, las clulas metabolizan la glucosa
e ignoran los otros compuestos. La glucosa en el medio acta para suprimir la produccin de diferentes
enzimas catablicas necesarias para descomponer estos otros sustratos. Se ha comprobado que el nivel
del AMP cclico disminuye en el ncleo cuando es utilizado en la membrana para realizar el transporte
activo es decir transporte con consumo de ATP de la glucosa y tambin por excrecin celular. Estos dos
mecanismos, al disminuir el nivel del AMP cclico en el ncleo, ejercen un control sobre el ritmo de la
biosntesis proteica. Puede establecerse as una relacin entre la glucosa que entra en la clula y la
cantidad de enzimas necesarias para metabolizar la lactosa.

Control mediante AMP cclico.
50

Control positivo: Se dice que un sistema est bajo control positivo cuando el producto del gen
regulador activa la expresin de los genes, acta como un activador.
Control negativo: se dice que un sistema est bajo control negativo cuando el producto del gen
regulador reprime o impide la expresin de los genes, acta como un represor.

AMP cclico: Sntesis y Degradacin.
El AMP cclico tiene estructura cerrada, se encuentra en forma libre en el citoplasma de organismos
procarioticos y eucariticos en forma de AMPc 3- 5. Se sintetiza a partir del ATP sobre el que acta
la adenil ciclasa interviniendo como cofactor el Mg++ provocando la hidrlisis de los dos ltimos grupos
fosfato del ATP que se liberan.

La adenil ciclasa se encuentra en la superficie interna de la membrana plasmatica donde se activa
cuando se presentan hormonas en la superficie externa de la membrana plasmatica y dichas hormonas
son reconocidas por sus receptores formando complejos receptor hormona, sitio donde la adenil
ciclasa se activa y acta sobre el ATP que se encuentra en el citosol y a partir del cual se forma el
AMPc, por lo tanto este recibe el mensaje de la hormona (primer mensajero) y por esta razn al AMPc
se le denomina segundo mensajero porque es el que transporta el mensaje hasta el ncleo.

51
Cuando se produce la estimulacin de hormonas a nivel de superficie externa de la membrana celular, se
produce un incremento en la concentracin del AMPc en el citosol, pero cuando la hormona deja de
actuar con el receptor de membrana, los niveles de concentracin de AMPc se encuentran en reposo.
Degradacin del AMP cclico.
Se produce a partir de las enzimas fosfodiesterasas que la transforman en 5 AMP, las
fosfodiesterasas estn unidas al protoplasma como a la membrana interna, algunas fosfodiesterasas
pueden ser reguladas por otros sistemas de hormonas o segundos mensajeros que no actan mediante
AMP cclico.
Funciones del AMP cclico.
El AMPc regula el metabolismo de los carbohidratos, es decir participa en la glucogenolisis, en el hgado
la presencia de adrenalina y glucagn induce a la glucogenolisis, ambas hormonas por su accin
receptora con las protenas de membrana estimulan a la adenil ciclasa para elevar la concentracin de
AMPc dicho aumento produce o causa la degradacin del glucogeno, pero el AMPc previamente modifica
el metabolismo de algunas protenas actuando sobre las proteinoquinasas fosforiladas.
Las sntesis de glucogeno es afectada por el AMPc en este caso la glucogeno sintetasa participa en la
glucogenesis pero la glucogeno sintetasa fosforilada es inactiva para sintetizar glucogeno por
consiguiente el AMPc eleva la degradacin de glucogeno y se activa la sntesis en el hgado. Este es el
mecanismo molecular por el cual la adrenalina que se segrega en momentos de estrs, euforia,
depresin, etc. eleva los niveles de glucosa en la sangre y debido a ello se produce la diabetes emotiva.
Un aumento de AMPc interviene en la sntesis de esteroides en la corteza suprarenal el AMPc esta
involucrado en estados patolgicos de la toxina de Vibrio cholerae la que estimula a la adenil ciclasa en
el intestino produciendo gran perdida de agua, sales, iones y electrolitos lo que conduce a las diarreas
que causan la muerte.
Tambin se ha determinado que las clulas cancerigenas presentan bajos niveles de AMPc y en cultivos
in vitro de clulas cancerigenas al agregarles AMPc dichas clulas se recuperan en algunas de sus
estructuras.
El AMPc 2 3 generalmente se encuentra en procariontes, es importante porque regula el metabolismo
de carbohidraos, mientras el AMPc 5 3 se encuentra en eucariontes.

Ca ++ - CALMODULINA: REGULACIN DE LAS FUNCIONES CELULARES.
El complejo Ca++ - calmodulina est acoplado al sistema AMPc y una de las funciones del complejo Ca++ -
calmodulina es regular el metabolismo de los carbohidratos en las clulas, tambin regula el
metabolismo de los nucletidos cclicos en el citoplasma celular. El Ca ++ es un ion indispensable en las
clulas de todos los organismos puesto qu cumple diversas funciones entre estas intervienen en la
contraccin muscular por ende en el corazn y su funcionamiento, interviene en conferirle mayor
permeabilidad a la membrana plasmtica luego acta dentro del movimiento de las clulas, asimismo
interviene en los procesos de endocitosis qu realiza la clula, en la coagulacin de la sangre, durante la
divisin celular, etc.
La concentracin de Ca ++ en el citoplasma de las clulas animales es de 10
-7
molar. A esta concentracin
las clulas animales cumplen normalmente sus funciones, mientras qu en los espacios extracelulares, la
concentracin de Ca++ es de 10
5
molar.

La CALMODULINA, es una protena abundante que se encuentra en el citoplasma de todas las clulas
en general. La calmodulina presenta cuatro sitios especficos donde se fija el Ca++ es decir la funcin
que cumple la calmodulina en el citoplasma celular es:
Fijar el Ca++ que ingresa a la clula durante esta fijacin la calmodulina sufre cambios de conformacin,
mostrando regiones hidrofbicas, dichas regiones son suceptibles a que se adhieran drogas como
52
TRIFLUORO PERACINA que inhibe la accin de la calmodulina, asimismo ests regiones se pueden usar
para fijar otras protenas aceptoras como las CALCINEDINAS que fueron descritas recientemente
dentro de la biologa.

UNIDAD DIDACTICA N 02: MEMBRANA PLASMTICA: ORGANIZACIN Y
FUNCIONAMIENTO

MEMBRANA PLASMATICA.
La clula tiene una composicin diferente a la del medio que la rodea. Por ejemplo, el contenido inico
de nuestras clulas es muy diferente del que tiene el plasma o el fluido de las matrices extracelulares.
Esta diferencia es mantenida durante toda la vida de la clula, en general con un importante gasto de
energa, por una delgada membrana superficial: la membrana plasmtica o celular, que regula el
intercambio de iones y molculas entre la clula y el medio extracelular. Esta membrana es tan delgada
que no puede ser observada con el microscopio ptico, hasta el advenimiento del microscopio
electrnico, los cientficos no pudieron apreciar adecuadamente la complejidad de la organizacin
celular, entre cuyos componentes se incluye a la membrana plasmtica y a un elaborado sistema de
membranas internas que desempean una multitud de tareas especializadas. Todas estas membranas
poseen una composicin qumica y una arquitectura molecular similares, pero no idnticas.

La membrana plasmatica es una barrera de permeabilidad altamente selectiva entre el interior y el
exterior de la clula lo qu permite que el espacio intracelular o citoplasma se mantenga en condiciones
homeostaticas, asimismo la membrana plasmatica impide el libre intercambio de un lugar a otro pero
tambin proporciona el medio para comunicarse de un espacio con otro. La membrana celular garantiza
que las sustancias apropiadas penetren al citoplasma, desde el espacio extracelular y las sustancias
inapropiadas salgan de la clula consiguientemente la membrana plasmatica acta como una barrera
selectiva permeable, la permeabilidad selectiva depende de la presencia de canales, bombas selectivas
qu a travs de estas se mantienen las concentraciones adecuadas de iones, molculas especificas
dentro de la clula, mientras qu los residuos son liberados, expulsadas por las clulas, la barrera
sensible viene a ser la membrana plasmatica qu permite qu la clula reaccione ante su ambiente.

FUNCIONES DE LA MEMBRANA PLASMATICA
Cumple muchas funciones entre estas:
1.- MECANISMOS DE TRANSPORTE.- Se refiere al transporte de los diversos solutos que ingresan
del exterior al interior de la clula o viseversa, entre estos mecanismos de transporte tenemos:
- Transporte o difusin simple
- Transporte facilitado
- Transporte activo
- Transporte en masa
2.- RESPUESTAS A SEALES EXTERNAS.- La membrana celular cumple funciones importantes en
la respuesta de la clula a los estmulos externos, proceso que se conoce con el nombre de transduccin
de seales, la membrana celular posee receptores especficos de membrana (protenas especificas) qu
se sitan en la parte externa de la membrana, se comunica con otras macromolculas denominados
ligandos formando complejos receptor ligando que se encuentran en el medio externo, los ligandos son
53
las hormonas, factores de crecimiento y neurotransmisores estas se unen a los receptores de
membrana pero no pueden atravesar la membrana plasmatica por tanto la interaccin de ligando con el
receptor, provoca que la membrana genere una nueva seal que estimula o inhibe las actividades de la
clula ejemplo: las seales generadas en la membrana puede indicar a la clula qu elaboren mas
glucgeno o se prepare para la divisin celular o libere Ca++ de sus reservas internas o posiblemente
induce a que las clulas se suiciden.

3.- INTERACCIN CELULAR.
Situada en la frontera de la clula viviente, la membrana plasmatica media las interacciones qu ocurren
entre clulas de un organismo multicelular, la membrana tambin permite a las clulas, reconocerce
entre si, adherirse cuando es apropiado e intercambiar materiales e informacin cuando las clulas lo
requieren.

Organizacin molecular de la membrana celular.
En 1855 Naegeli denomin membrana plasmtica a una pelcula invisible que envolva a las clulas y
seria la responsable de los fenmenos osmticos que observo en clulas vivas. Como las molculas
liposolubles penetran con facilidad a travs de la membrana plasmtica, en 1902 Overton sostuvo que la
membrana plasmtica estara compuesta probablemente por una delgada capa de lpidos, cuyo espesor
seria muy inferior al lmite de resolucin del microscopio ptico. En 1925, Corter y Grendell propusieron
la existencia de una bicapa fosfolipdica al observar que la cantidad de fosfolpidos de la membrana de
los eritrocitos era suficiente para formar una doble capa de molculas sobre toda la superficie celular.
Estas teoras tambin fueron alentadas por mediciones elctricas que indicaron una alta impedancia a
nivel de la membrana plasmtica, y por la dificultad que tienen los iones para penetrar una capa lipdica.
Asimismo, se obtuvo informacin indirecta sobre la estructura molecular de la membrana, indicativa de
que tambin existiran protenas en ella, a partir del estudio de la tensin superficial de diferentes
clulas. Esta es mucho mas baja que a nivel de una interfase agua-aceite pura, y es comparable a la
obtenida cuando se agrega una pequea cantidad de protena a un sistema lpido-agua.
Para explicar estas propiedades, en 1935 Danielli y Davson postularon que la membrana plasmtica
contena una bicapa lipdica con protenas formando capas continuas sobre ambas superficies. Esta
modelo, aunque incorrecto, pareci confirmarse inicialmente mediante el estudio de sistemas lipdicos
artificiales, y aos mas tarde por la observacin con el microscopio electrnico, que mostr por primera
vez que todas las clulas estn rodeadas por una membrana plasmtica de 6 a 10 nm de espesor. La
estructura se repite en todas las membranas biolgicas y esta constituida por una capa central clara de
aproximadamente 3,5 nm, flanqueada a ambos lados por dos capas densas de unos 2 nm.

Sobre la base de estas observaciones, en 1959 Robertson propuso el modelo que l denomin unidad de
membrana, interpretando la imagen microscpica segn el modelo de Danielli-Davson, por lo cual se
pens que las lneas densas corresponderan a las supuestas capas proteicas continuas que se crea que
estaban adosadas a los lpidos de la bicapa central. Ahora sabemos que esas lneas densas resultan
principalmente del deposito de osmio (utilizado como fijador y colorante electrnico) sobre los
extremos polares de los fosfolpidos. A principio de la dcada del sesenta, el mtodo de la congelacin-
fractura y replica utilizado en microscopia electrnica hizo accesible el estudio morfolgico del interior
de la membrana y llevo a una interpretacin completamente diferente de su estructura. Ya que
evidenci la existencia de numerosos glbulos proteicos dentro del plano de la membrana.
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Modelo del Mosaico fluido: Arquitectura y organizacin molecular.
En 1972, Singer y Nicholson propusieron el Modelo del Mosaico Fluido, que ha sido firmemente
reconocido como la estructura bsica de la totalidad de las membranas, segn el modelo la membrana
est constituida por una doble capa de fosfolpidos, en la cual hay protenas asociadas; las que se
encuentran insertadas en la bicapa se llaman integrales o intrnsecas y las que se ubican en la superficie
externa o interna de la membrana plasmatica se llaman perifericas o extrnsecas. Esto da a la
membrana plasmatica el aspecto de un mosaico.

Las protenas especializadas cumplen con la mayor parte de las funciones especficas de las membranas,
pero la unidad estructural fundamental de toda la membrana biolgica es la bicapa lipdica, a la que
debe su integridad. Tanto los lpidos como las protenas presentan considerables desplazamientos en el
plano estructural de la membrana lo que determina su propiedad clave de fluidez. Una de las
caractersticas importantes de la organizacin molecular de las membranas es la asimetra de todos sus
componentes qumicos, lo que significa que en ambas mitades de la bicapa los componentes se
distribuyen de manera dispar, esta asimetra es an ms evidente por el hecho de que las cadenas de
oligosacaridos hacen su presencia solo hacia la superficie extraceluar de la membrana plasmtica, o
hacia el interior del compartimiento de cisternas, vacuolas o vesculas en el caso de las membranas
internas.

Composicin qumica las membranas.
Para estudiar la composicin molecular de la membrana celular, el primer paso consiste en su
aislamiento del resto del citoplasma en la forma ms pura que sea posible. Luego, la membrana aislada
se puede estudiar por mtodos bioqumicos y biofsicos. Se han empleado diferentes mtodos para
aislar membranas plasmticas de una gran variedad de clulas, aunque estas preparaciones suelen estar
contaminadas con membranas de organoides citoplasmticos. Por esta razn una buena parte de los
estudios sobre membranas fueron efectuados con las de los eritrocitos, ya que este tipo celular, al
carecer de organoides brinda membranas plasmticas con alto grado de pureza.
Todas las membranas biolgicas, independientemente de su origen, estn constituidas por lpidos y por
protenas. La mayor parte de ellas tambin poseen carbohidratos unidos a las protenas y a los lpidos.
Las proporciones en que estn presentes estos tres componentes en los diversos tipos de membranas
varan enormemente. Los carbohidratos en general representan menos del 10% del total de la masa de
la membrana, y aun pueden estar ausentes, como en las membranas mitocondriales internas. En lo que
atae a la relacin lpidos/protenas, en ciertas membranas cerca de las tres cuartas partes del peso
estn compuestas por estas ltimas, mientras que en la mielina, que esta formada por las membranas
plasmticas superpuestas de clulas neurogliales, casi el 80% son lpidos. En la membrana del eritrocito
humano las protenas constituyen el 52% de su masa, los lpidos el 40% y los hidratos de carbono el 8%.
Estos ltimos estn representados por oligosacridos unidos a protenas y a lpidos con los que forman
glucoprotenas y glucolpidos, respectivamente.

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Lpidos de la membrana
La composicin lipdica vara ampliamente entre las diversas clases de membranas. Los principales son
los fosfolpidos, de diferentes tipos, aunque la mayor parte de las membranas posee tambin colesterol,
especialmente en el caso de la membrana plasmtica, donde puede representar una cuarta parte o mas
del total lipidico.
Fosfolpidos. Son molculas anfipticas. Anfiptico es un termino de origen griego que significa doble
sensibilidad, y este caso se aplica al doble carcter que presentan estas molculas, por un lado
hidroflicas (polares o afines al agua) y por el otro hidrofbicas (no polares o que repelen el agua).
Poseen una denominada cabeza polar y dos cadenas hidrofbicas hidrocarbonadas, generalmente
representadas por dos cidos grasos de longitud variable. Debido a la naturaleza anfiptica de los
fosfolpidos, en un medio acuoso estos tienden espontneamente a agruparse formando micelas o
bicapas similares a las celulares.

En los fosfolpidos, el glicerol esta conectado por un grupo fosfato con una de varias molculas
hidroflicas pequeas (los grupos polares) y con dos cidos grasos virtualmente en todos los casos.
Estos ltimos poseen un nmero par de tomos de carbono que varia comnmente entre los 16 y los 22,
la viscosidad de la bicapa ser mayor cuantas mas largas sean las cadenas hidrocarbonadas. Otro factor
importante que afecta la fluidez es la existencia de dobles ligaduras en las cadenas, ya que los carbonos
no saturados imparten una desviacin a la cadena que impide que las molculas se adosen estrechamente
y aumenten su viscosidad. Por lo general, en los fosfolpidos de las membranas uno de los cidos grasos
es saturado y el otro no lo es.
La principal diferencia entre los distintos fosfolpidos depende del grupo polar o cabeza hidroflica. Los
ms comunes son la etanolamina, la colina y la serina, que forman parte de la cefalina, la lecitina y la
fosfatidilserina, respectivamente. La esfingomielina posee colina, pero su alcohol no es el glicerol sino la
esfingosina (un aminoalcohol).

A pH neutro los grupos polares de los fosfolpidos no poseen carga elctrica, con la excepcin principal
de la fosfatidilserina, que tiene carga negativa. Otros fosfolpidos menos abundantes, como los
fosfoinostoles, la cardiolipina, el fosfatidilglicerol y los sulfolipidos, tambin poseen carga negativa, y
en su conjunto se denominan fosfolpidos cidos, a diferencia de los fosfolpidos neutros o no cargados
que son la mayor parte. Otros aun ms raros pueden poseer carga positiva.
Los diferentes tipos de grupos polares y de cidos grasos constituyentes determinan la existencia de
ms de cien tipos diferentes de fosfolpidos en las membranas. Estos no se distribuyen por igual entre
ambas hojas de la bicapa, ya que la fosfatidiletanolamina y los fosfolpidos cidos (cargados
negativamente) tienden a ubicarse en la hoja de las membranas en contacto con el citosol, con un
intercambio de lpidos prcticamente nulo a travs de ambas hojas.
La presencia de estos lpidos cargados en el lado citoslico es de fundamental importancia para
comprender los fenmenos de fusion de membranas que ocurren, por ejemplo, en los procesos de
exocitosis y endocitosis. Como veremos mas adelante, el cation calcio desempea un papel fundamental
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en estos procesos, y provoca entre otros fenmenos que estos fosfolpidos cargados negativamente se
separen de los demas y se agrupen en regiones en fase de gel, mientras que el resto de la membrana
queda muy fluida, enriquecida de fosfolpidos neutros y positivos.
Colesterol. La mayor parte de las membranas biolgicas de los eucariotas posee colesterol como
componente importante. En particular, la membrana plasmtica animal tiene tantas molculas de
colesterol como de fosfolpidos, entre las cuales se intercalan. En la mayor parte de los procariotas el
colesterol esta ausente, y el bajo contenido de este esteroide en las membranas mitocondriales (de
alrededor del 4%) tal vez refleje el origen procaritico postulado para las mitocondrias.

Este esteroide anfiptico posee una pequea cabeza polar (el oxidrilo del carbono 3) dirigida hacia la
superficie acuosa, mientras que el resto de la molcula es hidrofbico y permanece confinado en el
interior de la bicapa. El anillo esteroideo interacta con la porcin inicial de las cadenas de los cidos
grasos, a los que inmoviliza parcialmente. Esto produce dos importantes efectos: por un lado se
incrementa la impermeabilidad de la bicapa a las molculas hidroflicas, y por otro decrece la
flexibilidad y fluidez de la membrana a la temperatura central del organismo de 37C. Pero ante
eventuales disminuciones de la temperatura, la presencia de colesterol previene la transicin de fase de
cristal lquido a gel, como ocurrira si la bicapa fuera enteramente fosfolipdica. En resumen, el
colesterol aumenta la impermeabilidad de la capa bilipdica, aumenta su viscosidad a 37C y mantiene la
fluidez ante una disminucin de la temperatura.

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Protenas de la membrana.
Segn el tipo de clula y el organelo particular del interior de dicha clula, una membrana puede
contener desde una docena hasta ms de 50 protenas diferentes. Las protenas representan el
componente funcional fundamental de las membranas biolgicas. Desempean un importante papel no
slo en la estructura de la membrana, sino tambin en su permeabilidad, ya sea como canales o como
transportadores. Entre las protenas de membrana tambin se encuentran gran nmero de enzimas, de
receptores para diversas seales, para la adhesin celular y para una variedad de funciones
especificas. Cada clase de membrana, segn su localizacin en la clula y el tipo celular, posee una
dotacin proteica especfica. As, la membrana plasmtica de una neurona, de un fibroblasto o de un
eritrocito ostentan sustanciales diferencias. An ms marcadas son las diferencias entre el
componente proteico de las membranas plasmticas y el de las membranas internas, como por ejemplo
las mitocondriales o las de los discos fotorreceptores de la retina.

Distribucin de las protenas en la membrana plasmatica.
Las protenas no se disponen al azar dentro de la membrana, sino que cada una se localiza y orienta en
una posicin particular respecto de la bicapa de lpidos. Es digno de notar que todas las protenas de la
membrana se sitan asimtricamente de modo que las propiedades de la porcin externa de la
membrana son muy diferentes a las de la porcin interna. Como resultado de esta "lateralidad" de la
membrana, las protenas de partes de la membrana que interactan con otras clulas o con ligandos
extracelulares, como hormonas o factores de crecimiento, se enfrentan al exterior, en tanto que las
protenas de las partes de la membrana que interactan con molculas citoplsmicas, como protenas G
o proteincinasas, enfrentan el interior de la clula. Las protenas de la membrana se pueden agrupar en
tres tipos distintos segn la intimidad de su relacin con la bicapa de lpidos, estos grupos son:

Protenas integrales o intrnsecas.
Las protenas integrales son en su mayora transmembranosas, vale decir que parte de su molcula
permanece confinada en el espesor de la bicapa lipdica, con dos dominios que se proyectan por lo
general hacia ambas superficies. Casi invariablemente, las protenas transmembranosas son
glucoprotenas.
En algunos casos las protenas integrales no son transmembranosas, pero estn unidas de forma
covalente a los lpidos de membrana del lado citoslico o del extracelular, en especial al glucosil
fosfatidil inositol o a grupos isoprenoides. Las protenas integrales, que representan ms del 70 % del
total, permanecen tenazmente ancladas a la bicapa tanto durante su vida en la clula como cuando se
intenta aislarlas para su estudio; para obtenerlas se requieren tratamientos enrgicos como la aplica-
cin de detergentes o solventes orgnicos que destruyen la integridad de la membrana.

En ocasiones, la accin de algunas fosfolipasas celulares puede desprender de sus enlaces lipdicos a
ciertas protenas integrales no transmembranosas, las que podran as quedar libres en el citosol. Este
hecho llev a algunos investigadores a considerar como protenas intrnsecas solamente a las
transmembranosas, pese a existir numerosos ejemplos (como el caso de la protena ras) de anclajes
sumamente estables.
Para comprender mejor el modo en que las protenas transmembranosas se mantienen insertadas en el
espesor de la membrana, se debe recordar que como resultado del plegamiento proteico, en las
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protenas extrnsecas (que son hidrosolubles) los aminocidos hidroflicos quedan expuestos a la
superficie de la molcula, en contacto con el medio acuoso extracelular o con el del citosol, mientras
que los hidrofbicos permanecen ocultos en el interior del plegamiento. En las protenas transmem-
branosas, por el contrario, los aminocidos hidrofbicos estn ms expuestos en la superficie de la
molcula, por lo que deben permanecer en el interior de la bicapa fosfolipdica, donde las interacciones
hidrofbicas con los cidos grasos los mantienen en su sitio, mientras que slo las partes hidroflicas
asoman al medio acuoso de ambas superficies de la membrana.

Por poseer dominios hidrofbicos e hidroflicos se considera que estas protenas son molculas
anfipticas. Existen protenas transmembranosas de paso nico y de paso mltiple; en este ltimo caso
la cadena polipeptdica cruza la bicapa varias veces. Adems, las protenas transmembranosas pueden
desarrollar enlaces inicos con las cabezas polares de los fosfolpidos y quizs ambos mecanismos
contribuyan a la estabilidad de su posicin.
Las protenas integrales se pueden clasificar de la siguiente manera:
1. Protenas monotpicas integradas a la bicapa de lipidos y expuestas en una sola superficie de la
membrana. Estas protenas son raras, si en realidad existen. Se cree que el citocromo b
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una protena
de las membranas citoplsmicas, es una protena monotpica, pero no hay acuerdo unnime.

2. Protenas bitpicas que poseen un segmento dentro de la membrana y por lo tanto la atraviesan una
sola vez y estn expuestas en ambos lados de la membrana. Esta clase incluye gran variedad de
receptores de la membrana plasmtica que enlazan diferentes ligandos en su superficie externa (por
ejm., un factor de crecimiento, un pptido hormona o un antigeno) y transmiten un mensaje a travs de
la membrana hacia el citoplasma por medio del segmento que atraviesa dicha membrana.

3. Protenas politpicas que poseen ms de un segmento dentro de la membrana y por lo tanto se
entrelazan avanzando y retrocediendo a lo largo de la membrana. Esta clase incluye las protenas que
forman canales para el paso de iones y solutos a travs de la membrana plasmtica y tambin protenas
con otras funciones (por ejm., el receptor para la partcula seal del receptor del retculo
endoplsmico, el receptor adrenrgico que se enlaza a la epinefrina, el pigmento fotosensible de los
bastoncillos de la retina, y los polipptidos M y L del centro de reaccin fotosinttica de las bacterias.
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Protenas perifricas o extrnsecas.
Estas no penetran en el interior hidrofbico de la bicapa lipdica (no son transmembranosas) y se
asocian con la membrana mediante interacciones dbiles, del tipo de las uniones inicas u otras (enlaces
electrostticos), tanto con las protenas integrales como con las cabezas hidroflicas de los
fosfolpidos, del lado citoslico o del extracelular. Cumplen con sus funciones en la membrana o cerca
de sta, y algunas pueden disociarse de la membrana en ciertas condiciones de la actividad celular. Esto
se refleja en que para su aislamiento bioqumico son fcilmente separables con procedimientos suaves,
como soluciones salinas concentradas, pH elevado o agentes quelantes de cationes bivalentes.
Las protenas perifricas de ordinario se solubilizan mediante extraccin con soluciones acuosas salinas
concentradas o pH alcalino. En realidad, la distincin entre protenas integrales y perifricas es
incierta, porque muchas protenas de membrana contienen varios polipptidos, algunos de los cuales
penetran en la bicapa de lpidos y otros permanecen en la periferia.

Las protenas perifricas mejor estudiadas (principalmente de la familia espectrina) se localizan en la
superficie interna de la membrana plasmtica. Estas protenas forman una red fibrilar que acta como
"esqueleto" flexible para suministrar apoyo mecnico a la membrana cuando se producen cambios
rpidos en la morfologa celular y tambin para fijar las protenas integrales de la membrana. Otras
protenas perifricas sobre la superficie interna de la membrana funcionan como enzimas o factores
transmisores de seales a travs de la membrana. La superficie extracelular de la membrana plasmtica
tambin puede contener protenas perifricas, pero estas protenas estn menos bien definidas.

Protenas de membrana ancladas a lpidos.
Se distinguen dos tipos de protenas de membrana ancladas a lpidos, segn los tipos de anclaje al lpido
y la superficie de la membrana sobre la cual estn expuestos. Varias protenas presentes en la cara
externa de la membrana plasmtica se enlazan a sta mediante un oligosacrido corto unido a una
molcula de glucofosfatidilinositol (GFI) integrada a la hoja externa de la bicapa de lpidos, la presencia
de estas protenas ancladas al GFI fue descubierta cuando se demostr que ciertas protenas de la
membrana podan liberarse mediante una fosfolipasa que reconoca y rompa especficamente a los
fosfolpidos que contienen inositol.

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Otro grupo de protenas presentes en el lado citoplsmico de la membrana plasmtica se encuentra
anclado a la membrana mediante largas cadenas de hidrocarburos integradas a la hoja interna de la
bicapa de lpidos. Al menos dos protenas relacionadas en esta forma con la membrana plasmtica (Src y
Ras) han sido implicadas en la transformacin de clulas normales a estados malignos.

Asimetra de las protenas. Cada tipo de protena de membrana posee una determinada orientacin en
dicha estructura. Esta asimetra otorga caractersticas diferentes a ambas superficies de las membra-
nas. El caso ms evidente tal vez lo constituyan las glucoprotenas; en la inmensa mayora de stas, los
oligosacridos estn orientados hacia el medio extracelular (o hacia su equivalente topolgico, que como
ya vimos lo constituye el interior del sistema de endomembranas). Existen unas pocas excepciones,
como ciertas glucoprotenas de los complejos de poros nucleares, cuyos glcidos se proyectan hacia la
superficie citoslica.
Es importante tener en cuenta que las protenas, si bien pueden rotar sobre su eje y moverse la-
teralmente, no cambian de posicin dentro de la bicapa, vale decir que no pueden volverse de modo que
el dominio externo pueda pasar a ser citoslico, y viceversa.
En las membranas plasmticas se han descrito decenas de enzimas, para cada una de ellas su sitio activo
reside constantemente en una determinada cara de la membrana. Por ejemplo, en la cara extracelular
se halla la actividad de acetilcolinesterasa, la disacaridasa en los enterocitos, y los sitios de unin al
potasio y al digitlico para el caso de la bomba de sodio-potasio. En la superficie membranosa citoslica
se puede encontrar el dominio ATPsico de la bomba de sodio-potasio, la adenilato ciclasa y la actividad
quinsica de los receptores transmembranosos, entre otros muchos ejemplos.
Para el caso de las protenas de las membranas internas, tales como la glucosa 6-fosfatasa del retculo
endoplasmtico, la ATP sintetasa de la mitocondria o la bomba protnica de los endosomas, la
orientacin asimtrica tambin es un requerimiento absoluto.

Carbohidratos de la membrana.
Los hidratos de carbono de las membranas biolgicas se presentan en forma de oligosacridos, o menos
frecuentemente de monosacridos, unidos en forma covalente a lpidos (glucolpidos) o a protenas
(glucoprotenas) de membrana. En ambas molculas el compuesto hidrocarbonado es semejante o
idntico.
Otros componentes glucdicos de las membranas celulares son los glucosaminoglucanos (GAGs) unidos a
las protenas (proteoglucanos). Los GAGs son polmeros lineales de subunidades de disacridos, de los
cuales uno por lo menos es un aminosacrido. Los distintos disacridos determinan la existencia de
diversos tipos de GAGs, algunos de los cuales son cidos o sulfatados.
Contribuyendo significativamente a la asimetra de las membranas, los glcidos se ubican casi en forma
exclusiva en la hoja superficial de la membrana plasmtica y en su equivalente topolgico, que es la
monocapa interior del sistema de endomembranas. La abundancia de glucolpidos es, con todo, mucho
mayor en la membrana plasmtica que en los componentes endomembranosos, y lo mismo puede decirse
para las glucoprotenas. Los proteoglucanos son casi exclusivos de las membranas plasmticas.

La mayor parte de los glucolpidos de las clulas animales, o glucoesfingolpidos, poseen dos cadenas
hidrofbicas; una de cido graso y la otra de esfingosina. Como en el caso de la esfingomielina, la
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molcula resultante se denomina ceramida. Esta permanece confinada en el interior hidrofbico de la
hoja externa de la bicapa y hacia el exterior hidroflico se ubica un componente glucdico variable,
unido covalentemente a la esfingosina. Tanto la ceramida como los carbohidratos presentan gran
variedad estructural, en especial estos ltimos. En las cerebrsidos, que son los glucolpidos ms sim-
ples, el glcido puede ser un solo monosacrido como la glucosa o la galactosa, pero en forma ca-
racterstica los glucolpidos poseen una enorme variedad de oligosacridos que difieren en longitud,
ramificaciones, clases de monosacridos y tipos de uniones entre stos. En el caso de los glanglisidos,
que son los glucolpidos ms complejos, uno de los componentes constantes de los oligosacridos que se
proyectan hacia el espacio extracelular es el cido silico o N-acetilneuramnico (NANA), lo que imparte
a la cubierta celular de la que forman parte una carga negativa que tiende a atraer cationes del medio
hacia la superficie de la membrana.

Fluidez de la membrana.
El estado fsico de los lpidos de una membrana puede describirse por su fluidez (o viscosidad). Igual
que muchas otras sustancias, los lpidos pueden existir en fase slida cristalina o en fase liquida de
viscosidad variable, segn la temperatura. Por ejemplo, consideremos una sencilla bicapa artificial
hecha de fosfatidilcolina y fosfatidiletanolamina cuyos cidos grasos son principalmente insaturados. Si
la temperatura de la bicapa se mantiene relativamente alta (por ejm. 37C), el lpido existe en estado
relativamente fluido, semejante al lquido, A esta temperatura, la bicapa de lpido se describe mejor
como un cristal lquido bidimensional. Igual que en un cristal, las molculas an mantienen una
orientacin especifica; en este caso, los ejes longitudinales de las molculas permanecen prcticamente
paralelos entre s, pero los fosfolpidos individuales son capaces de girar o desplazarse lateralmente en
el plano de la bicapa. Si la temperatura disminuye lentamente, se alcanza un punto donde ocurre un
cambio distintivo en la naturaleza de la bicapa. El lpido pasa de su estado normal semejante a lquido a
un gel cristalino congelado" donde el movimiento de los fosfolpidos est muy restringido. La
temperatura a la cual ocurre este cambio se denomina temperatura de transicin.
La temperatura de transicin de una bicapa particular depende de los lpidos particulares que la
constituyen. El determinante de mayor importancia es el grado de insaturacin de las cadenas cidas
acilo de los fosfolpidos, o sea, el contenido en dobles enlaces (especficamente enlaces cis). La
temperatura de transicin y la fluidez son determinadas por la capacidad de la molcula para
compactarse. Aunque los cidos grasos saturados tienen forma de barras rectas y los cidos grasos cis
insaturados presentan incurvaciones en la cadena donde se localizan los dobles enlaces, los fosfolpidos
con cadenas saturadas pueden compactarse ms firmemente que los que contienen cadenas insaturadas.
Cuanto mayor sea el grado de insaturacin de los cidos grasos de la bicapa, menor ser la temperatura
necesaria para que la bicapa pase al estado de gel.
El lmite dentro del cual los diferentes lpidos cambian de fase es muy amplio. Por ejemplo, se pueden
sintetizar varias fosfatidilcolinas y emplearlas para formar bicapas cuya temperatura de transicin
vara desde temperaturas menores de 0C hasta mayores de 60C. Las molculas de colesterol
alineadas con las cadenas lpidas acilo de los fosfolpidos de la bicapa afectan la fluidez de la membrana
al alterar la manera de comportarse de las cadenas de hidrocarburos. Como resultado, el colesterol
tiende a evitar temperaturas de transicin brusca, y tambin puede incrementar la estabilidad y
disminuir la permeabilidad de la membrana.

Importancia de la fluidez de la membrana.
Qu papel representa el estado fsico de la bicapa de lpidos en las propiedades biolgicas de la
membrana? Al parecer, la fluidez de la membrana corresponde a un compromiso perfecto entre
estructura rgida ordenada sin posibilidad de movimientos y lquido no viscoso totalmente fluido en el
cual los componentes de la membrana no pueden mantener una orientacin determinada y carecen de
oportunidad para organizarse y suministrar apoyo mecnico. La fluidez es importante porque permiten
que ocurran interacciones dentro de la membrana. Por ejemplo, gracias a la fluidez de la membrana
algunas protenas se ensamblan en un sitio particular de la membrana y forman estructuras
especializadas como uniones intercelulares, compuestos que captan luz y sinapsis. La transferencia de
seales a travs de la membrana plasmtica requiere de la interaccin de receptores transmembrana
que se unen a ligandos sobre la superficie externa de la membrana y estimulan enzimas situadas en la
62
superficie interna de la misma. Debido a la fluidez de la membrana, las molculas que interactan
pueden reunirse, efectuar la accin necesaria y separarse. La fluidez tambin tiene relacin con el
ensamblado de la membrana. Las membranas solo se originan a partir de las membranas preexistentes y
crecen mediante un proceso que aade componentes lipdicos y protenas a la matriz lquida de una hoja
membranosa.
Muchos de los procesos celulares ms bsicos, incluyendo movimiento celular, crecimiento de la clula y
divisin de la misma, formacin de uniones intercelulares, secrecin y endocitosis, depende de los
componentes de la membrana y tal vez no seran posibles si la membrana fuera una estructura rgida no
fluida.

ASIMETRA DE LOS LPIDOS DE LA MEMBRANA
La bicapa de lpidos consta de dos hojas distintas y no hay razn para suponer que la composicin de los
lpidos en ambas mitades deba ser idntica. De hecho hay numerosas pruebas que indican que los lpidos
de la membrana plasmtica se distribuyen en un patrn muy asimtrico. Una serie de experimentos que
han conducido a esta conclusin tiene la ventaja de que las enzimas que digieren lpidos no penetran la
membrana plasmtica y, por consiguiente, solo digieren los lpidos que residen a la hoja externa de la
bicapa. Si se somete a un eritrocito humano a la accin de una fosfolipasa que hidroliza fosfogliceridos,
casi 70 % de la fosfatidilcolina de la membrana se libera en el medio, pero slo se libera 20 % de la
fosfatidiletanolamina de la membrana y menos de 10 % de la fosfatidilserina de dicha membrana.
Estos datos indican que, en comparacin con la hoja interna, la capa externa posee una concentracin
desproporcionadamente alta de fosfatidilcolina (y de esfingomielina) y una baja concentracin de
fosfatidiletanolamina y de fosfatidilserina. De esto se deduce que la bicapa de lpidos puede imaginarse
como estructura compuesta de dos monocapas independientes, ms o menos estables, con diferentes
propiedades fsicas y qumicas.

Dada la asimetra de los fosfolpidos, surge la pregunta hasta que grado hay intercambio de
fosfolpidos a travs de la bicapa? Mediciones de diferentes tipos de fosfolpidos marcados indican que
la vida media de una molcula de fosfolpidos que permanece fija dentro de una capa, en oposicin a la
que se mueve a travs de la otra capa, se mide en horas o das. En contraste, un fosfolpido puede
desplazarse lateralmente dentro de la misma capa con bastante facilidad. Se estima que un fosfolpido
puede difundir de un extremo al otro de una bacteria en uno o dos segundos. Por lo tanto, de todos los
posibles movimientos que puede efectuar un fosfolpido, el paso desde un lado al otro de la membrana
es el ms restringido.

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Este dato no es sorprendente, pues para que eso ocurra, el grupo de la cabeza hidrfila del lpido
tendra que pasar a travs de la capa hidrfoba interna de la membrana, lo cual es termodinmicamente
desfavorable. Sin embargo, hay clulas que contienen enzimas, llamadas Flipasas, que mueven
activamente ciertos fosfolpidos desde una capa de la membrana hasta la otra. Estas enzimas pueden
participar en el establecimiento de la asimetra de los lpidos y tambin revertir la velocidad de los
lentos movimientos pasivos que ocurren a travs de la membrana.

NATURALEZA DINMICA DE LA MEMBRANA PLASMTICA
A partir del anlisis previo se deduce que la bicapa de lpidos puede existir en un estado relativamente
fluido. La movilidad de las molculas individuales de lpidos dentro de la membrana de la bicapa
plasmtica puede observarse directamente uniendo partculas doradas a las cabezas polares de los
lpidos y siguiendo el movimiento de dichas partculas con el microscopio. Puesto que los lpidos
constituyen la matriz en la cual estn embebidas las protenas integrales de las membranas, el estado
fsico de estos lpidos tambin es un importante factor determinante de la movilidad de dichas
protenas integrales. La demostracin de que las protenas integrales puedan moverse dentro de la
membrana plasmtica fue una de las piedras angulares para formular el modelo de mosaico fluido. Las
propiedades dinmicas de las protenas de la membrana se revelan de diferentes maneras.

DIFUSIN DE LAS PROTENAS DE LA MEMBRANA LUEGO DE LA FUSIN CELULAR
La fusin celular es una tcnica para unir dos clulas de diferentes tipos o clula de dos especies
distintas y producir una clula con un citoplasma comn y una sola membrana plasmtica continua. La
fusin se logra haciendo pegajosa la superficie externa de las clulas, de modo que sus membranas
plasmticas se adhieran entre s. La fusin celular se puede inducir aadiendo ciertos virus inactivados
que se une a la superficie de la membrana o agregando el compuesto polietilenoglicol. La fusin de las
clulas ha desempeado un importante papel en biologa celular y en la actualidad es parte de la tcnica
para preparar anticuerpos especficos.
En los primeros experimentos para demostrar que las protenas de la membrana tenan capacidad de
movimiento en el plano de la membrana se emple la fusin celular, y fueron publicados en 1970 por L.D.
Frye y Michael Edidin, de la Universidad Johns Hopkins. En estos experimentos se fusionaron clulas de
ratn y de humanos, y luego se observo la localizacin de protenas especficas de la membrana
plasmtica una vez que las dos membranas se volvieron continuas. Para seguir la distribucin de las
protenas de la membrana, de ratn o humanos, en diferentes momentos despus de la fusin se
prepararon anticuerpos contra uno u otro tipo de protenas y se unieron mediante enlaces covalentes a
colorantes fluorescentes. Los anticuerpos contra protenas de ratn formaron complejos con un
colorante que produce fluorescencia verde y los anticuerpos contra protenas humanas con uno que
produce fluorescencia roja. Cuando se aadieron los anticuerpos a las clulas fusionadas se enlazaron a
las protenas humanas o de ratn y pudo determinarse su localizacin bajo microscopio de
fluorescencia.
En el momento de la fusin, la membrana plasmtica poda considerarse mitad humana y mitad ratn; o
sea, las dos protenas permanecieron separadas en su propio hemisferio. Despus de la fusin,
conforme transcurri el tiempo, se observ que las protenas de la membrana se desplazan lateralmente
dentro de la misma hacia el hemisferio opuesto. Unos 40 minutos despus, las protenas de cada especie
estaban distribuidas uniformemente alrededor de toda la membrana celular hbrida. Cuando se efecta
el mismo experimento a temperatura ms baja, la viscosidad de la bicapa de lpidos aumenta y la
movilidad de las protenas de la membrana disminuye.
64

Restricciones al movimiento de las protenas de membrana.
La fusin celular mostr por primera vez las caractersticas dinmicas de las protenas integradas a la
membrana, pero hay otras tcnicas ms adecuadas para medir la extensin y velocidad de los
movimientos de las protenas. Las tcnicas empleadas comnmente son recuperacin de la fluorescencia
despus de fotoblanqueamiento (RFDF) y seguimiento de particula nica (SPU). La rapidez de difusin
de las protenas dentro de una membrana depende de varios factores, incluyendo viscosidad de la
matriz lipida a travs de la cual debe desplazarse la protena; cuanto ms fluida la bicapa, mayor la
movilidad. Otro factor es la masa de la protena; a mayor peso molecular de la protena menor ser la
velocidad de difusin.
Si la movilidad de la protena dependiera estrictamente de estos parmetros fsicos: viscosidad del
lipido y tamao de la particula, podra esperarse que las protenas se desplazaran con coeficientes de
difusin cercanos a 10
9
cm/segundo (en comparacin con casi 10
8
cm/segundo para las molculas de
lpidos ms pequeas y ms moviles de la bicapa). Sin embargo, cuando se estudian los movimientos de
las protenas en una membrana natural mediante tcnicas RFDF y otras, de ordinario se observa que se
mueven con mayor lentitud que la pronosticada antes. Los coeficientes de difusin tipicos para las
protenas de la membrana varian de 10
10
a 10
12
cm/segundo, segn la especie de protena y la
membrana. En realidad, cierto porcentaje de las molculas de la protena parecen estar completamente
inmviles e incapaces de difusin alguna.

Control de la movilidad de la membrana.
Es evidente que las protenas de la membrana no son totalmente libres para moverse al azar en el mar
lpido, sino que estn sujetas a influencias restrictivas que inhiben su movilidad. Algo de la restriccin
puede ser resultado de interacciones en la propia membrana. Por ejemplo, muchas protenas integrales
existen como complejos oligomricos, cuyo peso molecular puede ser muy grande, y en consecuencia su
coeficiente de difusin pequeo. Otras veces, las protenas integrales se unen a materiales presentes
en la superficie interna o la externa de la membrana. Las membranas plasmticas de muchas clulas
poseen una cadena fibrilar o esqueleto de protenas perifricas situado en su superficie interna.
Cierta proporcin de las protenas integrales de la membrana parecen estar fijas e inmovilizadas en el
esqueleto de la membrana. An si las protenas integrales no estuviesen firmemente ancladas, las
protenas perifricas de la membrana pueden formar vallas alrededor de ciertas partes de la membrana
y establecer dominios que restringen la distancia que puede recorrer una protena.
Al seguir la movilidad de protenas individuales se observa la presencia de estas barreras. Los dominios
de membrana pueden mantener combinaciones especficas de protenas en estrecha proximidad, lo
suficiente para facilitar su interaccin.
La movilidad de las protenas integrales tambin puede ser restringida por materiales presentes en la
superficie externa de la membrana. Esto se demuestra con mayor claridad en experimentos con clulas
que poseen genes que codifican protenas de membrana alteradas. Por ejemplo, si mediante
manipulaciones se introduce a la clula un gen que codifica un polipptido transmembrana que carece de
la porcin que normalmente se proyecta fuera de la membrana, la velocidad de difusin lateral de la
protena mutante puede ser mucho mayor que su contraparte normal. Este resultado sugiere que el
movimiento de una protena transmembrana a travs de la bicapa puede ser ms lento por la presencia
de materiales extracelulares que se enredan en la porcin ms externa de la protena.

65
Dominios de membrana y polaridad celular.
Incluso entre membranas que se caracterizan por difusin lateral extensa, hay muchos ejemplos en los
cuales se mantiene una organizacin o disposicin particular de las protenas de membrana. Las
diferencias topogrficas son particularmente evidentes en clulas de tejidos organizados, donde las
diferentes superficies celulares tienen funciones distintas. Por ejemplo, las clulas epiteliales que
revisten la pared intestinal o constituyen los microscpicos tbulos del rin son clulas muy
polarizadas cuyas diferentes superficies efectan distintas funciones. As, la membrana plasmtica
apical, que absorbe selectivamente sustancias de la luz del tbulo, posee enzimas diferentes en
comparacin con la membrana plasmtica de la superficie lateral, que interacta con clulas epiteliales
vecinas o de la superficie basal que se adhiere a un sustrato extracelular subyacente (membrana basal)
y cuya funcin es intercambiar sustancias con el torrente sanguneo.

En otros ejemplos, los receptores para neurotransmisores se concentran en regiones de la membrana
plasmtica localizadas entre las sinapsis y los receptores para lipoprotenas de baja densidad se
concentran en placas de la membrana plasmtica especializa para facilitar su penetracin al interior.
De los diferentes tipos de clulas de mamfero, los espermatozoides tienen la estructura ms
altamente diferenciada. Un espermatozoide maduro se puede dividir en cabeza, cuerpo o pieza central
y cola, cada uno con su propia funcin especializada. Aunque dividido en varias partes distintas, el
espermatozoide est cubierto por una membrana plasmtica continua que, segn han revelado
numerosas tcnicas, consta de un mosaico de diferentes tipos de dominios localizados. Por ejemplo,
cuando el espermatozoide es tratado con varios anticuerpos especficos, cada anticuerpo se combina
con la superficie de la clula en un patrn topogrfico nico que refleja la distribucin nica del
antigeno particular en la membrana plasmtica.

MEMBRANA PLASMTICA DE LOS ERITROCITOS.
De los diferentes tipos de membrana, la membrana plasmtica del eritrocito humano es la ms
estudiada y mejor comprendida. Hay varias razones para la popularidad de esta membrana. Las clulas
son poco costosas y rpidamente disponibles en cantidades enormes a partir de sangre completa. Ya se
encuentran aisladas como clulas nicas y no es necesario disociarlas de un tejido complejo. Las clulas
son extremadamente simples en comparacin con otros tipos, carecen por completo de membrana
nuclear y citoplasmticas, que inevitablemente contaminan las membranas plasmticas preparadas a
partir de otras clulas. Adems, se puede obtener la membrana plasmtica purificada intacta del
eritrocito colocando simplemente las clulas en soluciones salina diluida (hipotnica). Las clulas
responden a este choque osmtico captando agua e hinchndose, fenmeno denominado hemlisis.
Conforme aumenta la superficie celular, su contenido, compuesto casi en su totalidad por hemoglobina
disuelta, fluye hacia fuera de la clula y deja un fantasma de la membrana plasmtica intacta.
Una vez aislada la membrana del eritrocito se pueden solubilizar y separar (fraccionar) las protenas
para tener una mejor idea de su diversidad dentro de la membrana. El fraccionamiento de las protenas
de membrana se efecta mejor empleando electroforesis en gel de poliacrilamina en presencia del
66
detergente inico dodecilsulfato de sodio (DSS). El DSS mantiene soluble la protena integral y adems
aade gran nmero de cargas negativas a las protenas con las que se une, aunque el nmero de
molculas DSS por unidad de peso de protenas tiende a ser relativamente constante, las molculas se
separan segn su propio peso molecular. Las protenas de mayor tamao se desplazan ms lentamente a
travs del tamiz molecular del gel. Cuando se aplica la tcnica DSS-EGPA, las principales protenas de la
membrana del eritrocito se separan en casi una docena de bandas.
Un examen ms detenido de la membrana plasmtica del eritrocito ilustrar los tipos de funciones que
pueden desempear estas protenas. Entre ellas se encuentran varias enzimas (incluyendo
gliceraldehido 3-fosfato deshidrogenasa, una enzima necesaria para producir energa durante la
gluclisis), protenas de transporte (para iones, aminocidos y azcares) y protenas esquelticas (por
ejemplo: espectrina). Las diferentes protenas de la membrana plasmtica del eritrocito se pueden
correlacionar con el papel de estas clulas en el transporte de oxgeno y de dixido de carbono y con la
resistencia fsica que estas clulas encuentran durante su circulacin a travs del cuerpo.

Protenas integrales de la membrana del eritrocito
La membrana contiene dos protenas integrales principales, ambas son protenas que rodean a la
membrana y que contienen carbohidratos, denominadas banda 3 y glucoforina A. La banda 3 que ocurre
como dimero compuesto de dos subunidades idnticas, rodea a la membrana cuando menos una docena
de veces y contiene una cantidad relativamente pequea de carbohidratos (6 a 8% del peso de la
molcula). La banda 3 desempea una funcin en el movimiento de aniones. Conforme la sangre circula a
travs de los tejidos, el dixido de carbono se disuelve en el lquido del torrente sanguneo (plasma) y
luego se disocia segn la reaccin.

H
2
O +CO
2
H
2
CO
3
HCO
3
-
+ H
-

Los iones bicarbonato (HCO
3
-
) penetran a los eritrocitos intercambindose por iones cloro, los cuales
salen de la clula. En los pulmones, donde se libera dixido de carbono, ocurre la reaccin inversa y los
iones bicarbonato abandonan el eritrocito intercambindose por iones cloro. El movimiento recproco de
HCO
3
-
y Cl
-
ocurre a travs de un canal situado en el centro de cada dimero de la banda 3.
La glucoforina A fue la primera protena de membrana en la que se determin la secuencia de
aminocidos. A diferencia de la banda 3, la glucoforina A rodea la membrana slo una vez y contienen
una porcin muy amplia de carbohidratos que consta de 16 cadenas de oligosacridos que en conjunto
constituyen casi 60% del peso de la molcula. Se cree que la funcin primaria de las glucoforinas se
deriva del gran nmero de cargas negativas que se originan en los extremos de sus cadenas de
carbohidratos. Debido a estas cargas, los eritrocitos se repelen entre s, evitando la formacin de
grumos conforme los eritrocitos circulan a travs de los vasos de menor calibre. Es digno de mencionar
que las personas que carecen de las glucoforinas A y B en sus eritrocitos no muestran efectos
patolgicos por su ausencia, peor las protenas de la banda 3 estn ms intensamente glucosiladas, lo
que al parecer compensa la ausencia de cargas negativas necesarias para evitar la interaccin de clula
a clula.

El esqueleto de la membrana del eritrocito
Las protenas perifricas de la membrana del eritrocito se localizan en su superficie interna y
constituyen el esqueleto fibrilar de la membrana que acta para mantener la forma del eritrocito y
restringir el movimiento de las protenas integrales de la membrana. El principal componente del
esqueleto es la espectrina, una protena fibrosa flexible de casi 100 nm de longitud compuesta de dos
subunidades: una y una enrolladas una sobre otra. En su estado nativo dentro de la membrana, dos
molculas (cuatro subunidades) de espectrina se encuentran enlazadas cabeza con cabeza para formar
un filamento de 200 nm. La espectrina se fija a la superficie interna de la membrana por medio de
enlaces no covalentes a otra protena perifrica. La anquirina que a su vez se unen por enlaces no
covalentes a la porcin citoplasmtica de una molcula de la banda 3, las porciones correspondientes a
la cola de las molculas espectrina se unen entre s en disposicin pentagonal o hexagonal mediante una
batera de protenas, incluyendo las protenas actina y tropomiosina, que en condiciones tpicas
participan en actividades contrctiles. Numerosas enfermedades genticas caracterizadas por
67
eritrocitos frgiles de forma anormal se atribuyen a mutaciones que alteran la estructura y funcin de
la anquirina o de la espectrina.

Cuando se retiran las protenas perifricas de los fantasmas de eritrocitos, las membranas se
fragmentan y forman vesculas pequeas, lo que indica que la red interna de protenas es necesario para
mantener la integridad de la membrana. Los eritrocitos son clulas circulantes que sufren considerable
presin al atravesar los microscpicos capilares cuyo dimetro es mucho menor que el de los propios
eritrocitos. Para atravesar estas vas tan estrechas, y tener que hacerlo todos los das, el eritrocito
debe ser muy deformable, durable y capaz de resistir fuerzas de corte que tienden a desintegrarlo. Se
piensa que la red de espectrina y actina confiere a la clula la resistencia, rigidez y plegabilidad
necesarias para efectuar la funcin que se le demanda. Cuando se descubri por primera vez el
esqueleto de la membrana del eritrocito se pens que era una estructura nica adecuada para la forma
y necesidades mecnicas nicas de este tipo de clula. Sin embargo, conforme se examinaron otras
clulas se observaron esqueletos de membrana de tipo similar que contenan miembros de la familia de
la espectrina y la anquirina, lo que indica, que el esqueleto interno de la membrana es una estructura
ampliamente distribuida.

TRANSPORTE DE SUSTANCIAS A TRAVS DE MEMBRANAS CELULARES.
Puesto que el contenido de una clula est rodeado en toda su extensin por la membrana plasmtica,
toda comunicacin entre la clula y el medio extracelular debe ser a travs de esta estructura. En
cierto sentido, la membrana plasmtica tiene doble responsabilidad. Por un lado, debe retener los
materiales disueltos dentro de la clula, de modo que no salgan de la misma por simple escurrimiento
hacia el medio; por otra parte, debe permitir el intercambio necesario de materiales hacia adentro y
hacia fuera de las clulas. La bicapa de lpidos de la membrana es ideal para prevenir la prdida de
solutos polares con carga elctrica de una clula, pero deben tenerse algunas precauciones en relacin
con el ingreso de nutrientes y la salida de productos de lpidos relativamente impermeables. La
membrana plasmtica es una barrera con permeabilidad selectiva; es decir, no es igualmente permeable
a todo tipo de solutos. Esta selectividad permite que la concentracin de sustancias dentro de las
clulas sea notablemente diferente de su concentracin en el exterior, condicin necesaria para la vida
de la clula.
Para entender la naturaleza selectivamente permeable de la membrana plasmtica es necesario
considerar como atraviesan esta estructura las molculas individuales. Bsicamente hay dos medios
para dicho movimiento por difusin pasiva o por algn tipo de transporte activo acoplado a energa.
Ambos tipos de movimiento pueden producir flujo neto de un ion o compuesto particular. El trmino
flujo neto indica que el movimiento de la sustancia al interior de la clula (flujo interno) y hacia fuera
de la misma (flujo externo) no est en equilibrio, sino que ms bien uno excede al otro.
68
Se conocen varios procesos mediante los cuales se desplazan sustancias a travs de las membranas:
difusin simple a travs de la bicapa de lpidos; difusin simple a travs de un canal acuoso revestido de
protenas; difusin facilitada, y transporte activo.

DIFUSION DE SUSTANCIAS A TRAVS DE MEMBRANAS
Un no electrlito debe satisfacer dos condiciones para difundir al interior de una clula a travs de la
membrana plasmtica. La sustancia debe estar presente en concentraciones ms elevadas fuera de la
clula y la membrana debe ser permeable a la sustancia. Una membrana puede ser permeable a un soluto
determinado:
1) Porque el soluto pasa directamente a travs de la bicapa de lpidos.
2) Porque dicho soluto es capaz de atravesar un poro acuoso situado en el espesor de la membrana que
impide el contacto del soluto con las molculas lpidas de la bicapa.
Consideramos primero la ruta en la cual una sustancia se disuelve en la bicapa de lpidos para atravesar
la membrana. El anlisis de esta ruta obliga a considerar la polaridad de un soluto.
Una medida simple de la polaridad de una sustancia es su coeficiente de particin, o sea la porcin
entre su solubilidad en aceite y su solubilidad en agua. El coeficiente de particin para un compuesto se
mide disolviendo la sustancia en aceite y en agua por separado, mezclando luego los dos solventes
inmiscibles con la sustancia disuelta agitndola, lo que permite que se separen en dos fases y se mida la
concentracin del soluto en cada fase. El coeficiente de participacin es la concentracin en aceite
dividida entre la concentracin en agua. Es evidente que a mayor liposolubilidad la penetracin es ms
rpida. A finales del siglo XIX, observaciones de este tipo suministraron el primer indicio de que la
frontera externa de la clula poda contener una capa de lpidos.
Otro factor que determina la velocidad de penetracin, de un compuesto a travs de una membrana es
su tamao. Las molculas de menor tamao tienden a penetrar en la bicapa de lpidos de una membrana
con mayor rapidez en comparacin con las molculas ms grandes. Molculas sin carga y muy pequeas
penetran rpidamente a travs de las membranas celulares. Por consiguiente, las membranas son muy
penetrables a molculas inorgnicas pequeas, como O
2
, CO
2
, NO y H
2
O, que parecen deslizarse entre
fosfolpidos adyacentes.
En contraste, molculas polares ms grandes, como azcares, aminocidos e intermediarios
fosforilados, muestran poca penetrabilidad en la membrana. Por consiguiente, la bicapa de lpidos de la
membrana plasmtica suministra una eficaz barrera que evita la difusin de estos metabolitos
esenciales hacia el exterior de la clula. Puesto que algunas de estas molculas (por ejemplo azcares y
aminocidos) deben entrar a las clulas procedentes del torrente sanguneo, al parecer no lo hacen por
69
simple difusin. En vez de eso deben disponer de mecanismos especiales para penetrar a travs de la
membrana plasmtica. Estos mecanismos permiten a una clula controlar el movimiento de sustancias a
travs de la barrera situada en su superficie.

PROTENAS TRANSPORTADORAS DE MEMBRANA: CLASES
Estas son las que participan en los mecanismos de transporte difusin de las molculas grandes,
solutos y de los electrolitos. Analizando los procesos de la difusin de diversos solutos a travs de la
membrana se puede afirmar que la membrana celular permite el paso de sustancias liposolubles y
molculas polares pequeas sin carga por difusin simple, pero no todas pasan a travs de la capa
bilipidica, agua, azucares, cidos entre otras, estas sern transportadas a travs de protenas de
membranas a las que se conocen con el nombre de protenas de transporte de un determinado
compuesto aunque algunas lo hacen en grupos moleculares muy comunes, la protena de transporte segn
el mecanismo que utiliza para cumplir su funcin se dividen en 3 grupos:
1. protenas uniporte
2. protenas simporte
3. protenas antiporte

Proteinas uniporte.- Son aquellas proteinas que permiten el paso de una sustancia de uno al otro
lado de la membrana y tambin se les conoce como protenas de transporte sencillo.

Proteinas Simporte.- Son aquellas protenas que utilizan sistemas de cotransporte
unidimensional, estas protenas para transportar un soluto simultneamente y secuencialmente
cotransportan otro soluto en el mismo sentido.

Proteina antiporte.- Utilizan tambin protenas de cotransporte bidimensional de intercambio,
vale decir que para transportar un soluto en un sentido debern transportar simultanea o
secuencialmente otro soluto pero en sentido opuesto.

DIFUSIN DE AGUA A TRAVS DE LAS MEMBRANAS.
Las molculas de agua se desplazan con mucha mayor rapidez a travs de una membrana celular que los
iones y pequeos solutos polares comnmente presentes en las clulas, los cuales son casi
impenetrables. Debido a esta diferencia de penetrabilidad del agua en comparacin con solutos se dice
que las membranas son semipermeables. El agua se mueve rpidamente a travs de una membrana
semipermeable desde una regin de baja concentracin hasta otra de alta de concentracin de soluto.
70
Este proceso se denomina smosis y puede demostrarse fcilmente colocando la clula en una solucin
con una concentracin de soluto diferente de la presente en el interior de la propia clula.
Cuando una membrana semipermeable separa dos compartimientos con concentracin diferente de un
soluto, se dice que el compartimiento de concentracin ms alta es hipertnica (o hiperosmtico) en
relacin con el compartimiento de concentracin ms baja de soluto que se describe como hipotnico (o
hiposmtico). Si se coloca una clula en una solucin hipotnica, la clula gana agua con rapidez por
smosis y se hincha. A la inversa, una clula colocada en una solucin hipertnica rpidamente pierde
agua por smosis y se encoge. A partir de estas sencillas observaciones es evidente que el control del
volumen celular depende sobretodo de la relacin entre concentracin de solutos en el interior de la
clula en comparacin con la concentracin en el medio extracelular. La mayor parte de las clulas
mantienen un volumen apropiado al desplazar iones hacia adentro y afuera de la clula hasta que la
concentracin interna del soluto (incluyendo una concentracin elevada de protenas disueltas) sea igual
a la concentracin del soluto externo. En estas condiciones, los lquidos interno y externo son isotnicos
(isosmticos) y no hay movimiento neto de agua hacia adentro o afuera de la clula.
La smosis en un factor importante para numerosas funciones del cuerpo. Por ejemplo, el tubo digestivo
secreta varios litros de lquido que se reabsorbe osmticamente en las clulas que revisten el intestino.
Si este proceso de reabsorcin no ocurre, como en el caso de la diarrea intensa, se corre el riesgo de
una rpida deshidratacin. Las plantas aprovechan la smosis de diferentes maneras. Cuando una clula
vegetal permanece en una solucin hipotnica, gana agua y se hinchan, igual que una clula animal. La
clula animal finalmente estalla en el medio hipotnico, pero la clula vegetal, que posee una pared
celular externa rgida, alcanza un volumen mximo y en vez de estallar genera presin interna
(turgencia) aplicada contra la pared que le rodea. Si la clula vegetal se coloca en un medio hipertnico
su volumen disminuye conforme la membrana plasmtica tira de la pared celular que le rodea, proceso
conocido como plasmlisis. La presin desarollada gracias al fenmeno de la turgencia suministra apoyo
a las plantas no leosas y a ciertas partes de las plantas leosas, como las hojas. La prdida de agua por
smosis hace que las plantas pierdan turgencias y se marchiten.

ACUAPORINAS.
El agua es una molcula suficientemente pequea como para poder atravesar la bicapa lipdica de las
membranas celulares, infiltrndose entre las cadenas desordenadas de los cidos grasos. Hasta no
hace mucho tiempo ste era el nico mecanismo conocido de pasaje de agua a travs de las membranas
biolgicas. Era conocido que el agua posea una elevada permeabilidad en la mayora de las membranas
biolgicas y las atravesaba en respuesta a mnimas diferencias osmticas que permitan que los lquidos
intra y extracelular mantuvieran la isotonicidad, necesaria para la homeostasis intracelular. Sin
embargo, los mecanismos que posibilitaban este hecho indiscutible eran motivo de controversia. El agua
puede atravesar la membrana por difusin simple o a travs de poros acuosos, aunque por muchos aos
se asumi que dicho transporte ocurra slo por medio del primer mecanismo. Debido a la baja
solubilidad del agua en la fase lipdica de la membrana, este proceso requiere una elevada energa de
activacin (Ea>10 kcal/mol), lo cual origin que se planteara la existencia de otros mecanismos que
aceleraran esta difusin en algunas circunstancias.

En 2003, Peter Agre, investigador de la Universidad Johns Hopkins (Baltimore, USA), recibi el Premio
Nobel de Qumica por haber identificado una protena que permite el pasaje selectivo de agua a travs
de la membrana celular, a la cual denomin acuaporina. Durante la tarea de purificar el antgeno Rh de
71
eritrocitos humanos, los anlisis sealaban la presencia de una impureza de caractersticas similares a
las halladas en clulas tubulares renales. Guiado por el conocimiento que ambos tipos celulares son muy
permeables al agua, la impureza fue investigada y result ser una protena tetramrica de 28 kD que
opera como canal selectivo para el trnsito de agua. La hiptesis fue confirmada al inyectar material
gentico de eritrocitos a un ovocito de anfibio (clula impermeable al agua), la cual adquiri la capacidad
de permitir el pasaje de molculas de agua. Posteriormente a su clonacin y secuenciacin, fue sugerido
el nombre de acuaporina1 (AQP1) para esta protena, el cual fue adoptado oficialmente por la Human
Genome Organization en 1997. Luego se describieron varias protenas del mismo tipo, las cuales han
recibido el mismo nombre seguido de un nmero secuencial en relacin con la cronologa de su
descubrimiento. En mamferos, hasta el momento se han descrito once tipos de AQP (0 al 10), las cuales
comparten similitudes estructurales y se relacionan con una diversidad de enfermedades en diversos
sistemas.
Estructura de las acuaporinas.
Las AQP son protenas transmembranosas que delimitan un canal de 2 nm de largo por 0,3 nm de ancho,
por lo cual solamente puede ser atravesado por molculas de agua. Los iones, incluso el in hidrxido y
los protones, no pueden pasar a travs de este canal, cuyo dimetro de aproximadamente 0,28 nm, es
sensiblemente menor al tamao de cualquier ion hidratado. Se calcula que las AQP son capaces de
transportar 3 mil millones de molculas de agua por segundo. As, una porcin de membrana de 10 cm
2

filtrara un litro de agua en unos 7 segundos. El canal es hidrofbico, por lo cual las molculas de agua
formaran una fila estableciendo puentes de hidrgeno con aminocidos polares especficos dispuestos a
lo largo del camino de permeabilidad. En el centro del canal, el dimetro es ligeramente mayor al de una
molcula de agua. Aunque la longitud de esta restriccin es slo la de un aminocido, ello bastara para
bloquear el paso de iones y otros solutos ms grandes, ya que no existe la estructura necesaria para
despojarlos de sus capas de hidratacin. La barrera para el paso de protones est constituida por un
fuerte dipolo formado por dos segmentos proteicos que contienen la secuencia asparaginaprolina
alanina (NPA), que reorienta las molculas de agua disrrumpiendo las interacciones entre una molcula y
la siguiente, lo cual elimina la posibilidad del transporte simultneo de protones. Las dos asparaginas del
triplete NPA contienen residuos polares para la formacin de puentes de hidrgeno y producen una
reorientacin transitoria del dipolo de la molcula de agua. As, las molculas de agua que penetran en el
poro disponen sus oxgenos hacia abajo, pero al interactuar con ambas asparaginas giran y continan su
paso con el oxgeno mirando hacia arriba. En la zona ms estrecha del canal existe una cistena cuyo
grupo sulfhidrilo determina la sensibilidad a los iones mercurio. Todas las AQP presentan una similitud
estructural bastante notable, tienen sus segmentos amino terminal y carboxilo terminal intracelulares,
estn conformadas por dos mitades muy semejantes entre s, unidas por el loop C, exhiben 6 segmentos
transmembrana y los loop B y E son esenciales para la permeabilidad al agua del canal, es decir, son
vitales en la formacin del poro. Todas son tetramricas, aunque algunas pueden formar oligmeros ms
pequeos, como AQP4. Se ha demostrado que la AQP1 bovina, al igual que la humana, tambin responde
a una estructura homotetramrica. Las AQP son reguladas por diversos factores intracelulares, entre
los cuales son fundamentales el pH y la fosforilacin, principalmente mediada por proteinquinasaA. La
mayora son inhibibles por compuestos mercuriales, aunque el Hg puede activar algunas AQP. Su
permeabilidad al agua es alta, del orden de 310
9
molculas/segundo y su energa de activacin es baja,
requiriendo unas 5 kcal/mol o menos. Entre los factores que regulan la cintica de apertura cierre de
las AQP, se conoce que AQP0 se activa a pH cido y se inactiva por iones de calcio; AQP3 se inactiva a
pH bajo y AQP6, localizada en las vesculas citoslicas de las clulas intercaladas de los tbulos
colectores, se activa a pH bajo. En clulas eucariotas, adems del pH, muchas AQP son reguladas por
fosforilacin, osmolaridad o unin con otras molculas. La selectividad al paso del agua es muy alta en
las AQP; la estructura del poro acuoso impide que el agua protonada (H3O+) sea capaz de atravesar la
barrera formada por el residuo Arg195, el cual est conservado en todos los miembros de la familia y
ocupa una posicin preponderante en el poro. Existe una segunda barrera al paso de protones, formada
por un fuerte dipolo en el centro del poro, formado por dos segmentos que contienen la secuencia NPA,
la cual reorienta las molculas de agua al pasar, evitando las interacciones entre una molcula y la
siguiente, lo cual elimina la posibilidad del transporte de protones simultneamente. La presencia de un
residuo alternativo a His180, como Gly, est asociada con un mayor dimetro del poro, como sucede en
las acuagliceroporinas, lo cual permite el paso de glicerol y otros solutos.
72

Las acuagliceroporinas
De las once AQP conocidas, cuatro de ellas (AQP3, AQP7, AQP9 y AQP10) forman la subfamilia de las
acuagliceroporinas, que son permeables tambin a glicerol, urea y otros solutos de tamao reducido. La
selectividad de las acuagliceroporinas no depende slo del dimetro del poro. En algunas, como AQP3, la
permeabilidad al glicerol es mucho mayor que a la de urea, cuya molcula es de menor tamao. En
AQP10, los aminocidos dotados de carga elctrica de los dos segmentos alfahlice que conforman el
paso del canal, se orientan con sus polos positivos hacia el centro del poro. Esto genera un importante
campo electrosttico positivo que repele protones y otros cationes, mientras que admite el paso de
solutos neutros. La acuagliceroporina AQP3 se expresa en rin, piel y ojo, AQP7 en el tejido adiposo
(donde transporta el glicerol generado tras la degradacin metablica de los triglicridos) y AQP9 se
expresa en los hepatocitos (incorpora glicerol al hgado, donde se convierte en glucosa). La expresin
heptica de AQP9 aumenta marcadamente por el ayuno y en la diabetes mellitus no controlada.
Recientemente se ha establecido una vinculacin entre las acuagliceroporinas y el control del peso
corporal y la adiposidad. En 2005 se comprob que al eliminar la acuagliceroporina especfica del tejido
adiposo (AQP7), el glicerol no puede salir de la clula grasa y se va acumulando en el interior,
produciendo hipertrofia del adipocito y contribuyendo al desarrollo de obesidad.
Acuaporinas en vegetales
Durante los ltimos aos se han caracterizado AQP en ms de 30 especies vegetales, incluyendo mono y
dicotiledneas. Como en los animales, presentan una estructura tetramrica y cada monmero posee un
poro funcional individual; algunas son inhibibles por mercuriales. Su gran abundancia en plantas,
comparada con las de los animales, sugiere varias posibilidades. Una de ellas es que las AQP en plantas
se puedan encontrar distribuidas en membranas de los diferentes compartimentos celulares
(mitocondria, cloroplasto, peroxisoma, retculo endoplsmico, Golgi y diferentes tipos de vacuolas y
vesculas). La presencia de AQP en los diferentes compartimentos pudiera ser el mecanismo que las
clulas utilizan para regular los cambios en el potencial osmtico que sufren durante los diferentes
tipos de estrs a los que las plantas se ven continuamente sometidas. Una segunda posibilidad sera que
la expresin de algunas AQP puede depender, ya sea del estado de desarrollo de la planta, o de las
condiciones ambientales a las que est expuesta.

ELECTROLITOS EN LOS ESPACIOS EXTRA E INTRACELULARES: DIFUSIN DE IONES A
TRAVES DE LAS MEMBRANAS.
La bicapa de lpidos que forma el centro de las membranas biolgicas es muy permeable a sustancias con
carga elctrica, incluyendo iones pequeos como Na
-
, K
-
, Ca
2-
y Cl
-
. Incluso el movimiento (conductancia)
de estos iones a travs de las membranas desempean un papel crtico en mltiples actividades
celulares, que comprenden generacin y propagacin de impulsos nerviosos, secrecin de sustancias
hacia el espacio extracelular, contraccin muscular, regulacin del volumen celular y abertura de los
poros de los estomas situados en las hojas de las plantas.
En la actualidad, los bilogos han identificado un sorprendente nmero de canales inicos, cada uno
formado por protenas integrales de la membrana que rodean un poro acuoso. La mayor parte de los
canales inicos son sumamente selectivos y solo permiten el paso de un tipo particular de ion. Igual que
en la difusin de otros tipos de solutos a travs de membranas, la difusin de iones por un canal
siempre es cuesta abajo, o sea, desde un estado de mayor energa a otro de menor energa. Los
canales inicos son bidireccionales, permiten el paso de iones en ambas direcciones y el flujo neto del
ion depende del gradiente electroqumico.
Comparando la secuencia de aminocidos en las protenas que forman diferentes tipos de canales
inicos en organismos tan diversos como bacterias, plantas y animales, se observa que todos los canales
73
inicos pertenecen a un pequeo nmero de superfamilias gigantes. Aunque los miembros de una
superfamilia dada pueden mostrar selectividad muy diferente para cada ion, todas muestran bastante
similitud en la secuencia de aminocidos y estructura total al indicar que provienen de una sola protena
que existi hace miles de millones de aos.
La mayor parte de estos canales inicos que se han identificado pueden tener conformacin abierta o
cerrada, se dice que estos canales son las compuertas. El cambio de conformacin cerrada a abierta, o
sea, la abertura de la compuerta, puede ser inducida por varios factores, que dependen del canal en
particular. Se han identificado dos categoras principales.
1. Canales operados por voltaje cuyo estado de conformacin depende de la diferencia de carga
inica en ambos lados de la membrana.
2. Canales operados por sustancia qumicas cuyo estado de conformacin depende del enlace con
una sustancia particular.
Algunos canales operados qumicamente se abren (o cierran) luego del enlace de un ligando a la
superficie externa del canal, otros se abren (o cierran) luego que un ligando se enlaza a la superficie
interna del canal. Por ejemplo, los neurotransmisores como acetilcolina actan sobre la superficie
exterior de ciertos canales catinicos, en tanto que los nucletidos cclicos como AMPc actan sobre la
superficie interna de ciertos canales inicos para calcio.

Aunque los bilogos todava deben cristalizar la protena de un canal inico y por difraccin de rayos X
obtener la imagen de su disposicin tridimensional en la membrana, ya es mucho lo que se sabe acerca
de la estructura de estas molculas. El siguiente anlisis se centrar en los canales que median el paso
del ion potasio. Se han aislados genes que codifican diferentes canales para K
-
y se ha investigado la
anatoma molecular de sus protenas. La mayor parte de estas protenas poseen la estructura bsica
bidimensional. Los dominios N-terminal y C-terminal se sitan en el lado citoplasmtico de la membrana,
en tanto que la porcin media del polipptido contienen seis segmentos que rodean la membrana.
Un canal de K
-
nico consta de cuatro polipptidos homlogos (subunidades) dispuestos simtricamente
alrededor de un poro central conductor de iones. Por lo contrario los canales para Na
-
y Ca
2-
de la misma
superfamilia constan de un solo polipptido gigante con cuatro dominios hidrfilos separados, cada uno
con seis segmentos que rodean la membrana.
Los canales de potasio pueden existir en conformacin abierta o cerrada, segn el voltaje a travs de la
membrana. Alterando sistemticamente la secuencia de aminocidos de la protena mediante
mutagnesis dirigida a un sitio, Richard Aldrich y sus colegas, de la Universidad Stanford obtuvieron
pruebas de que el canal se cierra por medio de una esfera atada a una cadena. Los 19 aminocidos que
forman la porcin N-terminal del polipptido actan como esfera oscilante que puede cerrar la boca
del canal y bloquear el paso de iones. Se cree que una hlice S4 transmembrana que contiene 7 residuos
aminocidos con carga positiva situados cada tercer residuo a lo largo de la cadena del polipptido
regula la abertura y cierre del canal. Se ha determinado que esta porcin de la protena acta como
sensor de voltaje. Los cambios de carga inica a travs de la membrana alteran las interacciones de los
residuos cargados positivamente situados en la hlice S4 con residuos con carga negativa situados
sobre hlices vecinas, lo que provoca cambios de conformacin en el polipptido que conducen a liberar
la esfera y abrir la boca del poro. Una vez abierto el poro pueden pasar a travs del canal ms de un
milln de iones potasio por segundo. Debido a este gran flujo inico, la abertura de un nmero
74
relativamente pequeo de canales K
-
puede tener un impacto significativo sobre las propiedades
elctricas de la membrana.

Algunos estudios indican que el canal K
-
mide alrededor de 3 A (0.3 nm) de dimetro en su punto ms
estrecho, justo el calibre suficiente para permitir el paso de un solo ion potasio luego de despojarse de
la capa de agua que lo rodea. Se cree que cada canal tiene cuando menos tres sitios capaces de
enlazarse selectivamente a un ion potasio. Estos sitios tal vez se localicen en el segmento H5 del
polipptido, que puede formar parte de la pared del poro hidrfilo. La repulsin electrosttica entre
varios iones K
+
sumamente prximos proporciona el mecanismo para impulsar los iones a travs del poro
con tal rapidez.
Una sola clula puede poseer varios canales K
+
diferentes que se abren y cierran en respuesta a
diversos voltajes. Adems, el voltaje requerido para abrir o cerrar un canal K
+
particular puede variar
segn si la protena del canal est fosforilada o no, lo que a su vez es regulados por hormonas y otros
factores. Es evidente que la funcin del canal inico se encuentra bajo control de un complicado
conjunto de diversos agentes reguladores. Nuestra mejor comprensin de la estructura tridimensional
de un canal inico se ha logrado por anlisis con microscopio electrnico de alta resolucin del receptor
nicotnico para acelticolina, un canal operado por ligando.

DIFUSIN FACILITADA
La difusin facilitada se encuentra dentro de los mecanismos de transporte pasivo, la difusin de una
sustancia a traves de una membrana siempre ocurre desde una regin de mayor concentracin a otra de
menor concentracin en el otro lado de la membrana, (pero las sustancias no siempre difunden a travs
de la bicapa de lpidos o de un canal abierto). En este caso la sustancia que debe difundir primero se
une selectivamente a una proteina que atraviesa la membrana, denominada facilitador del transporte,
encargada de facilitar el proceso de difusin. Se cree que el enlace del soluto a un facilitador de
transporte sobre un lado de la membrana desencadena un cambio de conformacin en la protena que
expone al soluto en la otra superficie de la membrana a partir de la cual puede difundir cuesta abajo
siguiendo su gradiente de concentracin. La difusin facilitada como se denomina a este proceso, se
asemeja en gran parte a una reaccin catalizada por enzimas, igual que las enzimas los facilitadores de
transporte son especificos para las molculas que transportan, adems muestran cintica de tipo
75
saturacin. A diferencia de los canales inicos que pueden conducir millones de iones por segundo, la
mayor parte de los facilitadores de transporte slo pueden desplazar a travs de la membrana cientos
o miles de molculas de solutos por segundo. La actividad de la difusin facilitada puede regularse para
satisfacer las necesidades de la clula en determinado momento, es particularmente importante para
mediar la entrada y la salida de solutos polares como azcares y aminocidos que no pueden penetrar la
bicapa de lpidos. Debido a que los facilitadores de transporte operan pasivamente, o sea, sin acoplarse
a un sistema capaz de liberar energa, pueden mediar el movimiento en forma satisfactoria en ambas
direcciones (utilizan la energa almacenada en gradientes inicos). La direccin del flujo neto depende
slo de la concentracin relativa de la sustancia en ambos lados de la membrana.
Las proteinas o permeasas que intervienen en el transporte facilitado se les denomina como
translocasas porque clsicamente se pensaba que estas por la superficie externa de la membrana se
unian al soluto para transformarse formando un complejo que se intercambia dentro de la capa
bilipidica realizando una translocacin verdadera es decir invirtiendo su cara donde se encontraba la
union permeasa soluto, de manera que se aperturaba su compuerta hacia el citosol dejando en libertad
al soluto y luego libre la permeasa realizando otro movimiento de translocacin verdadera para volver a
localizarse hacia la superficie externa como originalmente se encontraba, pues estos movimientos
vendran hacer movimientos de flip flop los cuales termodinmicamente no estan permitidos.
Los mecanismos modernos de translocacin que se aceptan en la actualidad involucran protenas
integradas a la membrana formadas o constituidas por varias unidades polipeptidicas que presentan
caras de unin para el soluto o tambin que estas protenas integrales esten interactuando con
protenas perifericas de la superficie externa y estas son las que presentan las caras de unin para el
soluto.
A su vez en ambos casos la unin del soluto en las caras de unin constituyen o forman el complejo
proteasa-soluto dando lugar a cambios de conformacin que permiten que la cara de unin con el soluto
se habra hacia el citosol de esta manera libera al soluto hacia el citoplasma. Existen 2 estadios de
conformacin de las protenas en la membrana plasmatica, es decir estados de conformacin en que se
encuentran las protenas transportadoras, entre estos estados tenemos:
1.- En el que los centros de unin para el soluto estan descubiertos hacia el espacio extracelular y en los
que se unira el soluto, a este estado se denomina estado PONG de las proteinas.
2.- En el estado PING de las protenas, cuando los centros unidos al soluto quedan descubiertos o
expuestos hacia el lado interno o hacia el citosol, de manera que las protenas se invierten del estado
Ping Pong o viceversa.

TRANSPORTE DE GLUCOSA A TRAVES DE LA MEMBRANA PLASMATICA.
La glucosa es la principal fuente de energa directa para el cuerpo y la mayor parte de las clulas
contienen una protena de membrana que facilita la difusin de glucosa desde la corriente sangunea al
interior de la clula.
El gradiente favorable para la difusin continua de glucosa hacia el interior de las clulas se mantiene
por fosforilacin del azcar luego que penetra al citoplasma, por lo que desciende la concentracin
intracelular de glucosa. Los seres humanos y otros mamferos estudiados tienen cuando menos cinco
protenas relacionadas que actan como facilitadoras del transporte de glucosa (estas variantes
genticas se refieren como isoformas). Las isoformas denominadas GLUT1 GLUT5 se diferencian por
los tejidos en los cuales se localizan y tambin por su cintica y caractersticas reguladoras.

76

La insulina, hormona producida por las clulas endocrinas del pncreas, desempean un papel clave para
mantener una concentracin apropiada de azucar en la sangre. Una de las principales acciones de la
insulina es favorecer la captacin de glucosa proveniente de la sangre por las clulas musculares, en
cuyo interior se almacena como glucgeno o se emplea directamente como combustible para la actividad
muscular y por las clulas adiposas donde la glucosa se convierte en grasa. Los msculos cardiaco y
esqueltico y las clulas adiposas comparten una isoforma comn de protena facilitadora del
transporte de glucosa, en especial GLUT4. Si la concentracin de insulina es baja, estas clulas
contienen relativamente pocos transportadores de glucosa en su superficie. Por lo contrario, dichos
transportadores se encuentran en la membrana de las vesculas citoplasmticas. Cuando la
concentracin de insulina se eleva, esta hormona acta sobre clulas especficas para estimular la
translocacin de las vesculas desde el citoplasma hasta la superficie celular. Como resultado, los
transportadores se incorporan a la membrana plasmtica donde pueden actuar para eliminar glucosa de
la sangre.
TRANSPORTE DE GLUCOSA EN ENTEROCITOS.
El establecimiento de gradientes de concentracin, como los de Na
+
, K
+
, H
+
, constituye un medio para
almacenar energa en las clulas. La clula emplea de varias maneras la energa potencial almacenada en
gradientes inicos para efectuar trabajo, incluyendo transporte de otros solutos.
Consideremos las funciones del intestino, en su luz, las enzimas desdoblan polisacridos de peso
molecular elevado para producir azcares ms simples, los cuales deben desplazarse a travs de todo el
espesor de las clulas epiteliales (enterocitos) que revisten al intestino y alcanzar la corriente
sangunea. El movimiento de glucosa a travs de la membrana plasmtica apical (membrana de las clulas
epiteliales frente a la luz del intestino) contra un gradiente de concentracin ocurre mediante
cotransporte con iones sodio. La concentracin de Na
+
se mantiene muy baja dentro de las clulas por
accin del sistema de transporte activo primario (ATPasa de Na
+
- K
+
), localizado en la membrana
plasmtica basal y lateral que bombea iones sodio fuera de la clula contra un gradiente de
concentracin. La tendencia de los iones sodio para difundir hacia adentro a travs de la membrana
plasmtica apical siguiendo su gradiente de concentracin es controlada por las clulas epiteliales que
dirigen el cotransporte de molculas de glucosa hacia adentro de la clula contra un gradiente de
concentracin. (Se dice que las molculas de glucosa son impulsadas por un sistema de transporte activo
secundario).
En este caso, la protena de transporte se enlaza tanto al sodio como a la glucosa en la superficie
externa de la membrana plasmtica apical (estado pong). La union de glucosa y Na
+
en la bomba de
glucosa hace que ocurra cambios de conformacin de la permeasa, por el cual las caras unidas con los
solutos glucosa-Na queden expuestas o abiertas hacia el citosol. Dichos cambios de conformacin
consisten en la apertura de un canal para liberar al Na y a la glucosa hacia el citosol. Cuando el ion sodio
se libera en la clula dentro de una solucin de menor concentracin, la conformacin de la protena
aparentemente cambia, de modo que pierde su afinidad por la molcula de glucosa, la cual entonces es
liberada dentro de la clula (estado ping). Una vez adentro, las molculas de glucosa difunden por toda
la clula y se desplazan a travs de la membrana basal mediante difusin facilitada.
77
El transporte de glucosa al interior de las clulas epiteliales del intestino (y al interior de las clulas
que revisten los tbulos del rin mediante un sistema similar) es un ejemplo de protenas simporte, en
el cual las dos especies transportadas (Na
+
y glucosa) se mueven en la misma direccin. En bacterias
tanto los carbohidratos, azucares simples, aminocidos son transportados tambien mediante transporte
facilitado pero impulsado por el in H
+
.

TRANSPORTE ACTIVO.
En condiciones tpicas, la concentracin interna de K
+
en las clulas de mamferos es de casi 100 mM, en
tanto que fuera de la clula slo es de unos 5 mM. En consecuencia hay un gradiente de concentracin
de K
+
muy pronunciado a travs de la membrana plasmtica que favorece la difusin de K
+
hacia afuera
de la clula, Los iones sodio tambin se distribuyen de manera muy desigual a travs de la membrana
plasmtica, pero el gradiente se establece en sentido opuesto: la concentracin de Na
+
es de casi 150
mM en el lado externo de la clula de l0 a 20 mM en el lado interno de la membrana pl asmtica. La
diferencia de concentracin para Ca
+2
todava es mayor la concentracin tipica de 10
-7
mM en el
citoplasma es 1000 a 10000 veces menor que la concentracin en el exterior de la clula. La capacidad
de una clula para generar estos pronunciados gradientes de concentracin a travs de su membrana
plasmtica no puede depender de difusin simple o facilitada. Estos gradientes se generan ms bien
por el Transporte activo.

Igual que la difusin facilitada, el transporte activo depende de protenas integradas a las membranas
capaces de unirse selectivamente a un soluto particular y desplazar dicha sustancia a travs de la
78
membrana impulsada por cambios en la conformacin de la protena. Sin embargo, a diferencia de la
difusin facilitada, el movimiento de un soluto contra un gradiente requiere acoplar el ingreso de
energa. En consecuencia, el movimiento endrgnico de iones o de otros solutos a travs de la
membrana contra un gradiente de concentracin debe acoplarse a un proceso orgnico, como hidrlisis
de ATP, absorcin de luz, transporte de electrones o flujo de otras sustancias a favor de un gradiente.

ACOPLAMIENTO DEL TRASPORTE ACTIVO A LA HIDRLISIS DE ATP
En 1957, el fisilogo dans Jeans Skou descubri una enzima que hidroliza ATP en las clulas nerviosas
del cangrejo que solo era activa en presencia de iones sodio, potasio y tambin Mg
2+
, que acta como
cofactor Skou propuso y estuvo en lo correcto, que esta enzima encargada de la hidrlisis de ATP era
la misma protena que actuaba en el transporte activo de iones, la enzima se denomin ATPasa Na
+
K
+
o
bomba sodio y potasio.
Los investigadores interesados en descubrir las propiedades de la ATPasa Na
+
-K
+
pronto volvieron su
atencin a los fantasmas de eritrocitos utilizando este sistema se observ que el transporte activo solo
ocurre cuando hay iones potasio fuera de la clula y iones sodio dentro de la misma. Tambin debe
haber ATP disponible dentro del fantasma restablecido; si el ATP se aplica externamente la bomba no
puede operar. De igual manera se determin que la ouabaina un inhibidor de transporte activo de
cationes ampliamente estudiado, slo era eficaz cuando se aplicaba de forma externa sobre los
fantasmas recuperados, la ouabaina es un esteroide cardiotnico con estructura similar a los glicsidos
digitalicos un esteroide obtenido de la digital empleado durante ms de 20 aos como tratamiento para
la insuficiencia cardiaca congestiva. La digital aumenta la fuerza de contraccin del corazn inhibiendo
la bomba de Na
+
-K
+
que desencadena una serie de acontecimientos que incrementan la disponibilidad de
Ca
2+
dentro de las clulas del msculo cardiaco. En aos recientes se han acumulado pruebas de que las
clulas normalmente contienen tipos similares de compuestos denominados endouabainas.
DINAMICA DE LA BOMBA DE Na
+
y K
+
.
Los experimentos con fantasmas de eritrocitos ilustran claramente la naturaleza asimtrica de la
bomba de sodio y potasio. Esta asimetra es una de las caractersticas ms importantes de todos los
sistemas de transporte activo. A diferencia del movimiento mediado por protenas en los sistemas de
difusin facilitada, que pueden transportar la sustancia igualmente bien en ambas direcciones, los siste-
mas de transporte activo se acoplan a una fuente de energa de tal manera que slo pueden impulsar el
movimiento de iones en una sola direccin. Numerosos estudios indican que la proporcin de Na
+
- K
+
bombeada por la ATPasa Na
+
-K
+
no es de 1:1, sino de 3:2. En otras palabras, por cada ATP hidrolizado
se bombean tres iones sodio afuera y slo dos iones potasio adentro de la clula. Debido a esta
proporcin de bombeo, la ATPasa Na
+
-K
+
es electrgena lo que significa que contribuye directamente a
separar cargas elctricas a travs de la membrana.
La ATPasa Na
+
- K
+
es un tetrmero que consta de dos tipos de subunidades, una subunidad alfa de
mayor tamao encargada de la actividad de transporte y una subunidad beta ms pequea que al
parecer funciona sobre todo en la maduracin y ensamblado de la bomba dentro de la membrana. Ambas
subunidades atraviesan la membrana; la subunidad alfa contiene 8 a 10 segmentos transmembrana
semejantes, en tanto que la subunidad beta solo contiene uno.
La APTasa Na
+
-K
+
es un ejemplo de bomba tipo P para iones. La "P" significa fosforilacin e indica que
durante el ciclo de bombeo la hidrlisis de ATP transfiere un grupo fosfato a uno de los aminocidos de
la protena de transporte, lo que a su vez provoca un cambio de conformacin esencial dentro de la
protena. Los cambios de conformacin son necesarios para modificar la afinidad de la protena por los
dos cationes que transporta. Consideremos la situacin que confronta la protena. Debe captar iones
sodio o potasio en una regin donde estn presentes en concentracin baja, lo que significa que la
protena debe poseer una afinidad relativamente alta por estos iones. A continuacin la protena debe
liberar los iones en el otro lado de la membrana frente a una concentracin mucho mayor de iones Para
esto, la afinidad de la protena por dicho ion debe disminuir. Por lo tanto, la afinidad para los iones debe
ser diferente en ambos lados de la membrana, lo cual puede explicarse mejor mediante un cambio en la
forma de la molcula de la protena.
Cuando la protena se une a tres iones Na
+
en el lado interno de la clula, sufre la fosforilacin y cambia
de la conformacin E1 a la conformacin E2. En se momento, los sitios de enlace quedan expuestos al
compartimiento extracelular y la protena pierde su afinidad por los iones Na
+
que entonces se liberan
79
fuera de la clula. Una vez liberados los tres iones de sodio, la protena capta dos iones potasio, se
desfosforla y regresa a su conformacin original. En ese estado, el sitio de enlace se abre en la
superficie interna de la membrana y su afinidad por iones K
+
disminuye liberando estos iones dentro de
la clula, entonces el ciclo puede repetirse. La importancia de la bomba de sodio y potasio es evidente si
consideramos que consume alrededor de un tercio de la energa producida por la mayor parte de las
clulas animales y 2 tercios de la energa producida por las clulas nerviosas.

OTRAS BOMBAS EN LA MEMBRANA CELULAR Y MEMBRANAS DE ORGANELOS CELULARES
Bomba de Ca
++
en la Membrana Celular
El calcio se encuentra en menor concentracin en el espacio intracelular por tanto existen estados
funcionales en la clula que requieren mas Ca
+
producindose para estos procesos la difusin pasiva por
lo tanto se produce un aumento de Ca
+
en el medio intracelular. Consiguientemente el Ca
+
que ha
incrementado su concentracin debe ser expulsado de la clula para lo cual se activa las bombas de
calcio que se encuentra en la membrana plasmtica; se han determinado 2 tipos de bombas de Ca
+
en las
membranas biolgicas.
1) Bomba de Ca
++
ATPasa (Bomba ATPASA de Ca
+
): Es una bomba de tipo P (protena intermedia
fosforilada), la bomba de calcio de la membrana plasmtica es una protena de 138KDa que cataliza la
hidrlisis de una molcula de ATP. La energa liberada por dicha reaccin es acoplada al transporte de
calcio a travs de la membrana en contra de su potencial electroqumico, de manera que gracias a la
actividad de esta protena la concentracin de calcio es 10000 veces menor que en el interior celular.
La bomba de Ca
++
-ATPasa de la membrana plasmtica es estimulada por calmodulina (CaM), su modulador
proteico natural, fosfolpidos acdicos y cidos grasos poli-insaturados de cadena larga.

Tambin puede ser estimulada mediante fosforilacin por la proteinquinasa A y por la proteinquinasa C.
En algunas clulas, como los eritrocitos, la bomba de calcio est localizada en la membrana celular y su
funcin es transportar Ca
++
fuera de la clula. Sin embargo, en las clulas musculares, la bomba Ca
++
-
ATPasa se encuentra en la membrana del retculo sarcoplsmico. La bomba transporta el Ca
++
desde el
80
citosol hacia el interior del orgnelo, que concentra y almacena el calcio. La salida del Ca
++
del retculo
sarcoplsmico al citosol muscular origina la contraccin de la clula y se requiere una rpida eliminacin
de este calcio hacia fuera del citoplasma, ya sea al espacio extracelular o a la luz del Retculo
Endoplasmatico.
2) Bomba de Ca
+
estimulado por Na
+
: Es un sistema de protena Antiporte, sodio - calcio, llamado
tambin intercambiador Na
+
/Ca
+
es una protena transmembranosa que cotransporta Ca
2+
y Na
+
de una
manera bidireccional en respuesta a un cambio en el gradiente electroqumico de concentracin para el
Na
+
. En el modo directo, esta protena bombea Ca
+
intracelular hacia fuera de la clula con una
estequiometra de 3 Na
+
por 1 de Ca
2+
generando con ello una corriente entrante, sin embargo la
velocidad y direccin del flujo de Ca
2+
dependen de los respectivos gradientes de concentracin para
ambos iones, as como tambin del potencial de la membrana. El intercambiador Na
+
/Ca
2+
es un
mecanismo de contra transporte electrognico y reversible con un papel bien establecido en la
homeostasis del Ca
2+
en gran variedad de clulas, incluyendo aquellas de msculo esqueltico. En su
modo directo, transporta Ca
2+
contra su gradiente electroqumico transmembranal, haciendo uso del
gradiente electroqumico para el Na
+
.

BOMBA DE PROTONES O H
+

Existen varias clases, existen algunos de ellos asociadas a las membranas plasmticas y otras a
organelos membranosos, como lisososomas, endosomas y vacuolas de clulas vegetales y de eucariotas
inferiores. En el interior de los endolisosomas determina una concentracin de iones hidrgeno que lleva
el pH a valores inferiores a 5.

Las clulas vegetales dependen sobre todo del transporte de H por medio de una bomba tipo P situada
en la membrana plasmtica. Esta bomba de protones desempea en las plantas un papel clave en el
transporte secundario de solutos, en el control de pH del citosol y tal vez en la regulacin del
crecimiento celular mediante acidificacin de la pared de las clulas vegetales.
A diferencia las bombas tipo V, utilizan la energia del ATP sin formar una protena intermedia
fosforilada. Las bombas tipo V transportan activamente iones hidrgeno a travs de las paredes
vegetales.
81
Las ATPasas de clases F de los procariotas, cloroplastos y mitocondrias tambin son bombas
proteinicas, (pero en el caso de las mitocondrias suelen funcionar en reverso sintetizando ATP).

BOMBA DE Cl
-
EN LA MEMBRANA PLASMTICA.
La bomba de Cloro es una protena que se encuentra en la membrana plasmtica es una ATPasa es decir
funciona con gasto de energa proveniente de la clula. Esta bomba esta considerada como una protena
compleja que esta constituida por varios polipptidos que vienen a ser los transportadores de Cl
-
.
Igual que otros transportadores de esta sper familia esta protena compleja contiene dos dominios
situados entre la bicapa de lpidos, cada una con seis segmentos que atravesan la membrana y dos
dominios que unen nucletidos (DUN) proyectados al interior del citoplasma. A diferencia de otros
miembros de la sper familia, la protena implicada en la fibrosis quistica incluye un dominio regulador
(R) que contienen varios residuos de serina que pueden ser fosforilados por una proteincinasa
(denominada PKA) activada por un AMP cclico segundo mensajero.

Esta protena recibi el nombre de regulador de conductancia transmembrana de fibrosis quistica
(RTFQ), termino ambiguo que refleja el hecho de que los investigadores aun no estn seguros de su
verdadera funcin, si es un canal de cloro (a diferencia de otros miembros de la sper familia que son
transportadores activos) o una protena que regula de alguna manera la conductancia del cloro a travs
de otros canales de membrana. El problema se resolvi solo despus de purificar la protena,
incorporarla a bicapas de lpidos artificiales y demostrar que acta como canal de cloro regulado por
AMP cclico. Para abrir la compuerta aparentemente se requieren dos hechos independientes: la
fosforilacin del dominio R dependiente de AMP cclico y el enlace de ATP al dominio de enlace con el
nucletido. La razn para este doble control sobre la conductancia del Cl
-
, todava es incierta.

FIBROLISIS QUISTICA
Una de cada 25 personas, en promedio, descendiente de ancestros del norte de Europa posee una copia
del gen causante de la fibrosis qustica. En otras palabras, estas personas son heterocigotos en ese
locus gentico. Puesto que no presentan sntomas del gen mutante, la mayor parte de los heterocigotos
desconocen que son portadores (a menos que su ADN se someta a los procedimientos recientes de
seleccin). En consecuencia, alrededor de uno de cada 2500 lactantes de esa poblacin caucsica son
homocigotos recesivos en este locus y nacen con fibrosis qustica.
La fibrosis quistica es una enfermedad por secrecin anormal de lquido. Aunque varios rganos estn
afectados, incluyendo intestino, pncreas, glndulas sudorparas y el conducto reproductor, de
ordinario en el sistema respiratorio es donde se observan los efectos ms grades. Las vctimas de
fibrosis quistica, producen moco viscoso, resistente, muy difcil de expulsar de las vas respiratorias.
Como resultado, estos individuos sufren infeccin pulmonar crnica que progresivamente daa la funcin
respiratoria.
82
En 1984 se demostr que las clulas cultivadas procedentes de pacientes con fibrosis quistica muestran
flujo externo anormalmente bajo de iones cloro lo que sugiere que el defecto puede residir en un gen
que codifica un canal un transportador de iones. Puesto que el movimiento de agua hacia afuera de las
clulas epiteliales por smosis est directamente afectado por el movimiento de sales, no es
sorprendente que una reduccin del flujo externo de cloro conduzca a un incremento de la con-
centracin y por lo tanto de la viscosidad de las secreciones corporales.
En 1989 se aisl el gen de la fibrosis quistica. Por primera vez, las vctimas de esta enfermedad vieron
un rayo de luz al final de un largo y oscuro tnel: surgi la esperanza de encontrar una cura para su
incapacitante enfermedad. Una vez determinada la secuencia del gen de la fibrosis quistica y la
secuencia de aminocidos del correspondiente polipptido se comprob que el polipptido era un
transportador ABC.

En aos recientes los investigadores aislaron alrededor de 200, mutaciones diferentes que ocasionan
fibrosis qutica y se estudi el efecto de cada una de estas alteraciones sobre la estructura y funcin
de la protena. Como resultado, ahora se sabe ms acerca de las bases moleculares de la enfermedad
que de las bases fisiolgicas de la patologa acompaante en tejidos y rganos. En Estados Unidos, 70%
de los alelos causantes de fibrosis qustica contienen la misma alteracin gentica (designada AF508), y
todos ellos carecen de tres pares de bases de ADN que codifican una fenilalanina en la posicin 508
dentro de uno de los dominios de unin a nucletidos del polipptido RTFQ. Investigaciones frecuentes
han revelado que los polipptidos RTFQ que carecen de este aminocido particular no pueden pro-
cesarse normalmente dentro de las membranas del retculo endoplsmico el complejo Golgi y en realidad
nunca alcanzan la superficie de las clulas epiteliales. En consecuencia, los pacientes con fibrosis
quistica homocigotos para el alelo AF508 carecen por completo del canal de cloro RTFQ y padecen una
forma grave de la enfermedad otros pacientes con fibrosis qustica con formas menos graves poseen
alelos mutantes que codifican una RTFQ capaz de alcanzar la superficie de las clulas, pero slo pueden
mediar una reducida conductancia al cloro. Las formas ms leves se caracterizan por infertilidad, con
dao escaso o ausente a rganos mayores.
A partir del aislamiento del gen causante de fibrosis qustica, la meta de los investigadores ha sido
desarrollar una cura mediante genoterapia, o sea, sustituir el gen defectuoso por un gen normal. La
fibrosis qustica es buen candidato para genoterapia debido a que los peores sntomas de la enfermedad
son causados en clulas que revisten las vas respiratorias y, por lo tanto, son accesibles a sustancias
susceptibles de administrar por inhalacin en aerosol. Hasta ahora los ensayos clnicos iniciados utilizan
dos diferentes sistemas de administracin. En un grupo de anlisis, el gen normal RPFQ se incorpor al
ADN de un adenovirus defectuoso, un tipo de virus que normalmente produce infeccin en vas respi-
ratorias superiores. A continuacin se permite que las partculas del virus recombinante infecten clula
de las vas respiratorias y enven el gen normal a clula generalmente deficientes. En otros ensayos, el
ADN que codifica al gen RTFQ normal se introduce a liposomas. Cuando se introducen en pulmones vas
respiratorias, los liposomas se fusionan con membranas plasmticas de clulas epiteliales y liberan su
contenido de ADN en el interior del citoplasma. Hasta ahora, ambos mtodos han tenido xito para
corregir transitoriamente el defecto gentico en las clulas de vas respiratorias. Quiz los liposomos
tengan ventaja sobre los virus como sistema de administracin por la menor probabilidad de estimular
una respuesta inmunolgica destructiva dentro del paciente luego de tratamientos repetidos.

TRANSPORTE EN MASA
Ocurre con particulas grandes que no pueden difundir la membrana plasmtica por ningun mecanismo de
transporte antes mencionado por consiguiente el transporte en masa utiliza otro mecanismo llamado
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endocitosis en el cual se forma una vesicula endocitada mediante la membrana plasmtica y en cuyo
interior contiene macromoleculas.
CAPTACIN CELULAR DE PARTCULAS Y MACROMOLCULAS.
Para satisfacer la necesidad de las clulas de captar materiales demasiado grandes, evolucionaron
mecanismos que captan materiales del medio extracelular dentro de vesculas derivadas de pliegues, o
invaginaciones, de la membrana plasmtica. La captacin de materiales extracelulares en vesculas
citoplsmicas se dividen en dos categoras separadas, fagocitosis y endocitosis, que ocurren por
mecanismos diferentes. La fagocitosis es la captacin de partculas materiales y la endocitosis es la
captacin de lquidos, solutos disueltos y macromolculas suspendidas. Las vesculas formadas por la
fagocitosis son tpicamente casi 10 veces ms grandes (1 a 2 micras de dimetro) en comparacin con
las formadas por endocitosis (0.1 a 0.2 micras de dimetro).
FAGOCITOSIS
La fagocitosis (clulas que comen) es ejecutada extensamente por unos pocos tipos de clulas
especializadas en captar partculas materiales del ambiente y entregarlas al lisosoma. Los organismos
hetertrofos unicelulares, como amebas y ciliados, se mantienen vivos atrapando partculas nutrientes y
organismos ms pequeos, y aprisionndolos en pliegues de la membrana plasmtica. Los pliegues se
fusionan para formar fagosoma que se desprende de la membrana plasmtica. El fagosoma se fusiona
con un lisosoma y as el material se digiere en el interior de la clula.
En casi todos los animales evolutivamente desarrollados, la fagocitosis es un mecanismo protector y no
una manera de alimentarse. Los mamferos poseen varias clulas fagocitarias, incluyendo macrfagos y
neutrfilos, cuya funcin es vagar por la sangre y los tejidos fagocitando organismos invasores, clulas
daadas, eritrocitos envejecidos y desperdicios. La actividad contrctil de microfilamentos
subyacentes a la membrana plasmtica que contiene actina controla el engullimiento de partculas
materiales por fagocitosis.

La fagocitosis la realizan clulas excepcionales como son los leucositos o globulos blancos, macrfagos
que se caracterizan por que dichas clulas ingieren un material slido de gran tamao denominado
antgenos como por ejemplo: bacteria, virus, esporas de hongos por esta razn el nombre
Phagein=comer. El fagosoma es transportado hasta los lisosomas para que las hidrolasas cidas acten
sobre este material slido. En cambio la pinocitosis consiste en la ingestin de partculas pequeas en
molculas de H
2
O, es decir se incorpora lquido, por esta razn la pinocitosis deriva de la palabra
Phagein=beber. La pinocitosis lo realizan las clulas en general de organismos inferiores, mientras en
organismos superiores la pinocitosis toma el nombre de endocitosis.
ENDOCITOSIS
La endocitosis se puede dividir de manera muy general en dos categoras:
La endocitosis a granel o endocitosis sin mediacin de receptores de membrana, consiste en la
captacin de lquidos extracelulares que la superficie de la membrana no reconoce. Cualquier molcula,
grande o pequea, incluida en el lquido tambin penetra a la clula. Esta endocitosis se puede visualizar
aadiendo sustancias al medio de cultivo, como el colorante amarillo luciferina o la enzima peroxidasa de
rbano silvestre, que son captadas por las clulas de manera inespecfica. La endocitosis a granel puede
ocurrir de manera continua en muchos tipos de clulas y su funcin primaria puede centrarse en la
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recuperacin de membrana plasmtica luego de periodos de secrecin o durante el ingreso de lquido
extracelular.
En este tipo de endocitosis las partculas a ser incorporadas primeramente deben absorberse a nivel de
superficie externa en el glucocaliz de la membrana celular que va a endocitar puesto que una de las
funciones del glucocaliz es la adhesividad, por lo tanto la endocitosis presenta 2 fases.
1.-Fijacin: Consiste en la concentracin de partculas, de macromolculas que van a ser endocitadas,
dicha concentracin se realiza en un sitio especfico de la membrana celular.
2.- Ingestin: Consiste en que las partculas o macromolculas van a ser incorporadas dentro de la
clula a travs de la formacin de una vescula endocitada.

Los procesos moleculares en la endocitosis o pinocitosis no ocurren en cualquier lugar de la membrana
plasmtica, la concentracin de macromolculas o partculas pequeas se produce en sitios especficos
de la membrana donde existe una foceta o depresin ligera de la membrana, a su vez esta foceta por la
superficie interna de la membrana esta cubierta por una cesta de clatrina (protena perifrica de
superficie interna) la misma que interacta con microfilamentos de actina y miosina, realizan
movimientos de traccin en la profundidad del citosol ocasionando que se incremente dicha depresin,
invaginandose hacia el citoplasma celular y constituyendo una vescula endocitada que contienen a las
macromolculas, a dicha vescula tambin se le denomina endosoma hasta que dicho endosoma se desliga
de la membrana y la misma que ser transportada hasta los lisosomas primarios.
Por otra parte para que ocurran estos movimientos de traccin de actina y miosina y se produzca la
foceta, la clula requiere mayor concentracin de calcio en el citosol as mismo ATP, para lo cual se
produce la apertura de canales de calcio, a nivel de membrana plasmtica por los que difunde
pasivamente el calcio del espacio extra al intracelular.

La endocitosis mediada por receptores (EMR) consiste en la captacin de macromolculas
extracelulares especficas (ligandos) luego de unirse a receptores en la superficie exterior de la
membrana plasmtica.
Internalizacion de macromoleculas, particulas y reciclaje de receptores de membrana: CURL
La endocitosis mediada por receptores proporciona un medio para la captacin selectiva y eficiente de
macromolculas que pueden estar presentes en concentraciones relativamente bajas dentro del lquido
extracelular. Las clulas poseen receptores para captar muchos tipos diferentes de sustancias,
incluyendo hormonas, factores de crecimiento, enzimas y protenas plasmticas. Los ligandos que entran
a la clula por medio de EMR se unen a los receptores que se agrupan en regiones especializadas de la
membrana plasmtica, conocidos como fosillas revestidas. Algunos receptores se agrupan en las fosillas
revestidas en concentracin equivalente a 100 veces la del resto de la membrana plasmtica. Las
fosillas revestidas se reconocen en el microscopio electrnico como sitios donde la superficie est
indentada y la membrana plasmtica cubierta en su cara citoplasmtica por una capa de material velludo
electrnicamente denso constituida por la protena clatrina, la misma protena que participa en la
formacin de vesculas revestidas de clatrina en la red trans de Goldi. Una fosilla revestida sobre la
membrana plasmtica se invagina al interior del citoplasma y forma una vescula que adelgaza su tallo
para liberarse de la membrana plasmtica que la cubre. Al examinar la estructura del recubrimiento y
de las molculas que las componen se puede tener un mejor conocimiento del proceso de formacin de
las vesculas revestidas.
La construccin geomtrica de la cubierta se deriva de la estructura de sus bloques de construccin de
clatrina. Cada molcula de clatrina se compone de tres cadenas pesadas y tres cadenas ligeras reunidas
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para formar un ensamblado de tres extremidades denominados trisquelion. Un trisquelion constituye un
mdulo notablemente adaptable con el cual una clula puede construir rejillas poligonales. Durante la
invaginacin, el enrejado relativamente plano de la fosilla revestida se incurva rodeando la vescula en
formacin.

Una rejilla compuesta de trisqueliones es una estructura muy adecuada para sufrir el tipo de
redisposicin estructural requerida para transformar una rejilla plana en una estructura en forma de
caja. En realidad, los trisqueliones purificados de clatrina se auto ensamblan para formar cajas vacas
similares a las enredaderas en una vescula revestida.
Igual que las vesculas revestidas de clatrina formadas por gemacin de la Red Trans de Golgi (RTG),
las vesculas revestidas formadas durante la endocitosis tambin contienen una capa de complejos
adaptadores situada entre la rejilla de clatrina y la superficie de la membrana vesicular que enfrenta el
citoplasma. Lo mismo que en las vesiculas revestidas de la RTG, los adaptadores son los que
especficamente se unen a los receptores de la membrana plasmtica. Se cree que la unin ocurre entre
adaptadores y seales especficas de endocitosis localizadas en las colas citoplasmticas de los
receptores que deben llevarse al interior. Estos enlaces aseguran que los receptores (y sus ligndos
enlazados) queden incluidos dentro de la vescula revestida en formacin y no permanezcan en la
membrana plasmtica. Las molculas de adaptina empleadas en la membrana plasmtica para formar
vesculas revestidas de las incorporadas en las vesculas revestidas formadas por gemacin partir de la
red trans de Golgi.
Al minuto de su formacin, la vescula endocitica revestida pierde su cubierta de clatrina y se convierte
en una vescula de superficie lisa que de ordinario se fusiona con un endosoma temprano. En la mayor
parte de los casos, el pH bajo del compartimiento endosomico temprano provoca la liberacin del
ligando de su receptor. Se cree que la mayor parte de los receptores no enlazados se concentran en una
porcin de la membrana que los separa del endosoma y retorna los receptores a la membrana plasmtica
donde pueden participar en otro turno de endocitosis. En algunos casos, igual que con la captacin del
factor de crecimiento epidrmico (FCE), tanto el receptor como el ligando pueden transportarse al
lisosoma para su desdoblamiento. En estos sistemas, la endocitosis sirve como medio para regular el
nmero de molculas del receptor localizadas en la superficie de la clula.
La vescula revestida (y la vescula no revestida que se origina de ella) se puede imaginar como un
sistema de entrega que transporta un ligando especfico desde el espacio extracelular a un sitio
particular dentro de la clula. En la mayor parte de los casos, el ligando finalmente se entrega a un
lisosoma para procesamiento metablico adicional. Los mamferos recin nacidos dependen de la leche
de su madre, que les suministra anticuerpos contra posibles patgenos. Estos anticuerpos se captan en
el conducto digestivo donde se enlazan a receptores localizados en fosillas revestidas situadas en la
superficie apical del epitelio intestinal. En vez de ser transportados a un endosoma, las vesculas
revestidas que contienen anticuerpos se transportan a travs de todo la longitud de la clula epitelial,
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donde se fusionan con la membrana plasmtica basal y liberan los anticuerpos en el torrente sanguneo
del lactante.

VESCULAS CUBIERTAS:
Son las vesculas que estas cubiertas por una cesta de clatrina, dichas vesculas cubiertas son
transportadas a sitios definidos del citoplasma celular es decir estas vesculas interactuan con
filamentos de actina y miosina y estos los movilizan a lugares definidos. Existen vesculas cubiertas que
permiten la interaccion de organelos membranosos citoplasmticos de manera que las vesculas
cubiertas formadas por endocitosis seran transportadas hasta las areas lisosomicas. La clatrina es una
protena de la superficie interna que esta constituida por polipptidos hexagonales, pentagonales que
forman cubiertas de una vescula endocitada. La clatrina no es una protena de reconocimiento por esta
razn las vesculas cubiertas que se desplazan a lugares definidos paulatinamente pierden su clatrina.
VESCULAS DESNUDAS: Son aquellas que carecen de clatrina y dichas vesculas desnudas no tienen
lugares fijos de llegada es decir estas vesculas de dirigen a sitios no definidos en la clula, estas
vesculas son transportadas por microtubulos y se dirigen indistintamente al inters de la clula.

EXOCITOSIS
El transito vesicular no est confinado al interior de la clula, se extiende hacia la membrana
plasmtica y desde ella. Es justificado considerar en este punto la secrecion celular en relacion con el
retculo endoplasmatico y el aparato de Golgi, porque estos organelos intervienen directamente en la
sntesis, transporte y liberacin de las macromoleculas que seran excretadas por la celula. La secrecion
no esta limitada a las celulas animales, puesto que las vegetales secretan polisacaridos y proteinas para
fabricar la pared celular. Las protenas de fabricacin reciente, los lpidos y los carbohidratos se envian
desde el retculo endoplasmtico, por el aparato de Golgi, hasta la superficie celular por medio de
vesculas de transporte que se fusionan con la membrana plasmtica. Las celulas que participan en la
secrecion regulada tipicamente contienen un gran nmero de vesculas secretorias, estas se originan de
vesculas recubiertas de clatrina que sufren gemacion en la Red Trans de Golgi. Conforme las vesculas
se desplazan a la superficie apical de la celula, el contenido de las vesculas se concentra cada vez ms a
medida que el agua sale de las vesculas hacia el citoplasma.

Para que una vescula secretoria descargue su contenido es necesario que la membrana de la vescula y
la membrana plasmtica suprayacente entre en contacto y en seguida se fundan, generando asi una
abertura a traves de la cual se puede liberar el contenido de la vescula, este proceso de fusion de
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membranas y descarga del contenido, se denominado exocitosis que requiere iones de calcio y la
produccin de ATP. Las etapas de la exocitosis son un proceso todava no bien comprendido, el contacto
entre la membrana de una vescula secretoria y la membrana plasmtica es mediado por algunas de las
llamadas proteinas de fusion situadas en la superficie y dentro de la membrana. La funcin aparente
de estas proteinas es establecer contactos a corta distancia entre membranas especficas destinadas a
interactuar y fusionarse. Se cree que el contacto entre las membranas puede causar la formacin de un
pequeo poro de fusion revestido de proteina, que rapidamente se dilata para formar una abertura
para descargar. Cualquiera que sea el mecanismo de fusion de la membrana, cuando una vescula
citoplasmtica se fusiona con la membrana plasmtica, la superficie interna de la membrana vesicular
entra a formar parte de la superficie externa de la membrana plasmtica, en tanto que la superficie
externa de la membrana vesicular formara parte de la superficie interna de la membrana plasmtica.
Cada molcula que viaja a lo largo de esta va pasa a travs de una secuencia fija de compartimientos
delimitados por membranas y con frecuencia sufre modificaciones qumicas durante su marcha. La
endocitosis y la exositosis son mecanismos acoplados por lo tanto existen leyes fundamentales en la
vida de la clula como los mecanismos acoplados es decir si por un lado de la membrana ocurre la
endocitosis donde la clula pierde membrana, con la exocitosis gana membrana restituyndola.

INTERACCIONES ENTRE LAS CELULAS Y SU ENTORNO
Aunque la frontera entre una clula viviente y su entorno no viviente es la membrana plasmtica, los
materiales presentes por fuera de dicha membrana desempean un papel muy importante en la vida de
la clula. En organismos multicelulares, la mayor parte de las clulas se organizan en tejidos cuyas
clulas componentes mantienen una relacin predecible entre s y con los materiales extracelulares
situados entre las clulas. An clulas sin relacin fija dentro de un tejido slido, como los leucocitos
de la sangre que viaja por todo el cuerpo, deben interactuar de manera muy especfica con otras clulas
y los materiales extracelulares con los cuales se ponen en contacto. Estas interacciones regulan
actividades tan diversas como migracin celular, crecimiento y diferenciacin de la clula y organizacin
tridimensional de los tejidos y rganos que aparecen durante el desarrollo embrionario.
EL ESPACIO EXTRACELULAR
Glucocaliz.|
Desplazndose hacia fuera de la membrana plasmtica se pueden examinar los elementos extracelulares
que rodean los diferentes tipos de clulas, casi todas las protenas integrales de membrana y tambin
los lpidos, poseen cadenas cortas de azcares proyectadas hacia afuera de la membrana plasmtica.
Estos carbohidratos forman parte de una capa ntimamente aplicadas sobre la superficie exterior de la
membrana plasmtica denominada glucocliz (o cubierta celular). Adems de los carbohidratos de la
membrana, el glucocliz por lo general contiene otros materiales extracelulares secretados por la clula
hacia el espacio externo, donde permanecen ntimamente relacionados con la superficie celular. Este
material extracelular es muy prominente en algunos tipos de clulas, como las epiteliales que revisten
el conducto digestivo de los mamferos. Adems de desempear un papel clave en las interacciones
clula-clula y clula-sustrato, el glucocliz puede suministrar proteccin mecnica a la clula y servir
como barrera contra las partculas que llegan hasta la membrana plasmtica.
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Matriz Extracelular (MEC).
Muchos tipos de clula contienen una matriz extracelular, red organizada de materiales extracelulares
que se halla ms lejos de la vecindad inmediata de la membrana plasmtica. A veces, la matriz
extracelular consta de una mezcla amorfa mal definida de protenas y polisacridos, como se puede
observar en el espacio extracelular del tejido conectivo laxo, o puede tomar la forma de una estructura
distinta cuyo contorno puede observarse con el microscopio de luz. La MEC es algo ms que un material
pasivo protector inerte; puede desempear un papel clave en la morfologa y actividades de la clula.
Una de las matrices extracelulares mejor definida es la membrana basal (o lmina basal), capa
engrosada de unos 50 a 200 nm que rodea las clulas musculares y adiposas y que cubren la superficie
basal de tejidos epiteliales, como la piel, el revestimiento interno de los conductos digestivo y
respiratorio, y de los vasos sanguneos. Se piensa que la membrana basal puede participar en el
mantenimiento de la polaridad de las clulas epiteliales; en definir la va de migracin celular; en
separar tejidos adyacentes, ayudando as a compartamentalizar un rgano en desarrollo, y en actuar
como barrera al paso de las macromolculas. En esta ltima funcin, la membrana basal desempea un
papel importante al evitar que las protenas salgan de la sangre cuando fluyen a travs de los poros de
las paredes capilares. Esto tiene particular importancia en el rin, donde la sangre se filtra a travs
de la doble membrana basal que separan los capilares del glomrulo de las paredes del tbulo renal. La
membrana basal tambin sirve como barrera contra la invasin por clulas cancerosas errantes.

Las matrices extracelulares ms extensas se observan en tejidos conectivos como cartlago, hueso,
tendones y el estroma de la crnea. En estos tejidos, las clulas que secretan la MEC solo equivalen a
una fraccin del volumen tisular. La matriz extracelular, ms bien que las propias clulas es la que
confiere a estos tejidos sus propiedades identificables: dureza para la matriz sea, resistencia y
flexibilidad para la matriz del cartlago, resistencia a la tensin para la matriz del tendn y
transparencia para la matriz del estroma corneal.

Componentes de la matriz extracelular animal.
Aunque la matriz extracelular puede adoptar diferentes formas en diferentes tejidos y organismos, los
materiales que constituyen la MEC pertenecen a un nmero relativamente pequeos de familias
moleculares; cada una de dichas familias pueden contener varias molculas relacionadas. Iniciaremos
aqu con una de las molculas ms importantes y ubicuas de la MEC, la glucoproteina colgena.
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Colgena
Las colgenas son una familia de glucoproteinas fibrosas que forman parte exclusivamente de matrices
extracelulares a las que confieren sus propiedades funcionales. Se observan en todo el reino animal y
son notables por su alta resistencia a la tensin, que puede medirse como resistencia a fuerzas de
traccin. Las colgenas constituyen la protena simple mas abundantes en el cuerpo humano (mas de
25% de toda la protena), hecho que refleja la importancia y amplia distribucin de las matrices
extracelulares.
La colgena se produce principalmente en los fibroblastos, clulas presentes en diferentes tipos de
tejidos conectivos y en clulas epiteliales. Hasta ahora se han identificado ms de 15 tipos distintos de
colgena. Cada tipo de colgena se restringe a un sitio particular dentro del cuerpo, pero a menudo hay
dos o ms diferentes tipos reunidos en la misma MEC. Aunque hay grandes diferencias entre los
miembros de la familia de la colgena, todos comparten ciertas caractersticas estructurales
importantes. Toda molcula de colgena es un trmero que consta de tres cadenas de polipptidos
denominadas cadenas . Algunos tipos de molculas de colgena contienen tres cadenas idnticas, en
tanto que otros son heterotrimeros que contienen dos o tres cadenas diferentes. Por ejemplo, una
molcula de colgena tipo I consta de dos cadenas 1 y una cadena 2. Cuando menos en una parte de su
longitud, las tres cadenas de polipptidos que forman una molcula de colgena se enredan sobre s
misma formando una triple hlice caracterstica.
Numerosas colgenas, incluyendo los tipos I, II, III, se describen como colgenas fibrilares debido a
que se ensamblan en fibrillas semejantes a cables, que a su vez se ensamblan a fibras ms gruesas, de
ordinario lo bastante grande para observarlas con el microscopio de luz. Las molculas individuales de
colgena no se alinean al mismo nivel en una fibrilla, sino que se escalonan ms o menos a la altura de la
cuarta parte de la longitud de sus vecinas. Esta disposicin escalonada en las molculas componentes
incrementa la resistencia mecnica del complejo y produce los patrones de banda caractersticos de las
fibrillas de colgeno. Las fibrillas aumentan todava ms su resistencia mediante uniones covalentes
transversales formadas entre glicina e hidroxilisina de molculas adyacentes de colgena. Cuando se
rompe estos enlaces intermoleculares cruzados, como a veces ocurre en animales que ingieren -
aminopropionitrilo, una sustancia txica presente en semillas de chcharos dulces, el tejido conectivo
puede debilitarse mucho.

Entre los diferentes componentes de la MEC, las molculas de colgena proporcionan al armazn
insoluble que determina muchas de las propiedades mecnicas de la matriz. En realidad, las propiedades
de un tejido particular con frecuencia se pueden correlacionar con la organizacin tridimensional de sus
molculas de colgeno. Por ejemplo, los tendones, que conectan los msculos a los huesos, deben resistir
tremendas fuerzas de traccin durante los momentos de la contraccin muscular. Los tendones
contienen una MEC en que las fibras de colgeno se alinean paralelas al eje mayor del tendn, y por lo
tanto paralelas a la direccin de las fuerzas de traccin. La crnea tambin es un tejido notable; debe
servir como capa protectora durable en la superficie del globo ocular, pero tambin ser transparente
para permitir el paso de la luz a travs del cristalino en direccin a la retina. La gruesa capa media de la
crnea es el estroma, que contiene fibrillas de colgeno relativamente cortas organizadas en distintas
capas. La estructura en capas del estroma es similar a la corteza de un rbol; las fibrillas de cada capa
son paralelas a las otras fibrillas de la misma capa, pero perpendiculares a las fibrillas de las capas
situadas en ambos lados.
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Esta estructura parecida a la corteza de un rbol suministra resistencia a este delicado tejido, en
tanto que la uniformidad de tamao y la disposicin de las fibras favorecen la transparencia del tejido.

No todas las colgenas forman fibrillas. Una de las colgenas no fibrilares es el tipo IV, cuya
distribucin se restringe a las membranas basales. Las membranas basales son lminas de apoyo muy
delgadas y las molculas de colgena tipo IV se organizan formando una red aplanada que sirve como
estructura para el depsito de otros materiales extracelulares. A diferencia de la colgena I, que
consta de una triple hlice larga ininterrumpida, los trmeros de la colgena IV contiene segmentos no
helicoidales interpuestos a lo largo de la molcula y de los dominios globulares en cada extremo. Los
segmentos no helicoidales confieren a la molcula flexibilidad, en tanto que los extremos globulares
sirven como sitios de interaccin entre molculas que dan al complejo su carcter tipo reticular

Proteoglicanos
Adems de la colgena, las matrices extracelulares tpicamente contienen una gran cantidad de un tipo
distintivo de complejo proteinicopolisacrido denominado proteoglicano. Un proteoglicano consta de una
molcula protenica central a la cual se unen cadenas de glucosaminglicanos (GAG). Cada cadena de
glucosaminglicano se compone de un disacrido repetitivo; o sea, posee una estructura A-B-A-B-A,
donde A y B representan dos azcares diferentes. Los GAG son muy cidos debido a la presencia de
grupos sulfato y carboxilo unidos a los anillos de los azcares.
El papel del colgeno y de los proteoglicanos en la estructura y funcin de la matriz extracelular se
puede ilustrar en el tejido cartilaginoso. El cartlago consta principalmente de una matriz extracelular
secretada por condrocitos vivientes que quedan aprisionados en sus propias secreciones. Las molculas
de colgena forman fibrillas distintas, en tanto que los proteoglicanos constituyen un material amorfo a
su alrededor que llena el espacio extracelular. Los proteoglicanos de la matriz cartilaginosa estn
ensamblados en un complejo gigantesco por la unin de las protenas centrales a una molcula de cido
hialurnico, un GAG no sulfatado.

Debido a las cargas negativas generadas sobre los GAG, los proteoglicanos pueden enlazarse a
numerosos cationes, que a su vez arrastran abundantes molculas de agua. Como resultado, los
proteoglicanos forman un gel poderoso hidratado que acta como material de empaque para resistir
91
fuerzas de compresin (aplastamiento). Esta propiedad complementa a las de molculas adyacentes de
colgena que resisten fuerzas de traccin, y suministran un bastidor de apoyo para los proteoglicanos.
En conjunto, colgenas y proteoglicanos suministran al cartlago, y a otras matrices extracelulares,
fuerza y resistencia a la deformacin (se puede obtener una sensacin de las propiedades mecnicas
del cartlago comprimindose una oreja o el puente de la nariz). La matriz extracelular del hueso
tambin se compone de colgena y proteoglicanos, pero se endurece por impregnacin de sales de
fosfato de calcio.
Una familia de proteoglicanos, los heparan sulfato proteoglicanos (HSPG), adems de ser el principal
componente de la MEC, tambin desempea algunas funciones en la superficie celular. Los miembros de
esta familia incluyen sindecanos, betaglicanos y el CD44. La protena central de estos proteoglicanos
rodea la membrana plasmtica, en tanto que los GAG se unen al dominio extracelular de la protena. Se
cree que el dominio citoplasmtico de la protena central interacta con el citoesqueleto, y que el
dominio extracelular (particularmente el GAG unido a este extremo de la protena) interacta con
varias protenas de la MEC. Adems al fijar las clulas de la MEC, el dominio extracelular del HSPG
puede enlazarse a una gran variedad de molculas difusibles, incluyendo enzimas y factores de
crecimiento.
El HSPG es uno de los diferentes tipos de macromolculas que forman un puente entre los medios
externo e interno de la clula. Como tal, esta molcula se encuentra en posicin ideal para transmitir
seales a travs de la membrana plasmtica. Dichas seales pueden influir en muchos aspectos de la
conducta de la clula, incluyendo cambios en la morfologa celular, motilidad, adherencia, crecimiento y
diferenciacin de la clula.

Fibronectina, laminina y otras protenas de la MEC.
El trmino matriz implica una estructura formado por una red de elementos que interactan. Este
trmino es muy adecuado para la matriz extracelular, que adems de colgena y proteoglicanos
contienen varias protenas que interactan entre s con mucha precisin y de manera definida.
La fibronectina es una de las protenas extracelulares mejor estudiadas y revela muchas de las
caractersticas observadas en la mayor parte de los componentes de otras matrices. Por ejemplo, la
fibronectina, igual que otras protenas de la MEC, contiene una cantidad de dominios distintos, cada uno
con funciones particulares. Cada cadena de polipptido que forma una molcula de fibronectina
contiene:
1. Sitios de enlace para otros componentes de la MEC, incluyendo colgenas y glucosaminoglicanos
especficos, que ayudan a unir estas diversas molculas en una red estable interconectada.
2. Sitios de enlace para receptores situados sobre toda la superficie de la clula, que sirve para
mantener una unin estable entre la MEC y la clula.
Desde hace mucho tiempo se emplea fibronectina en la MEC es muy evidente cuando los tejidos
participan en actividades dinmicas, como las observadas durante el desarrollo embrionario. El
desarrollo se caracteriza por oleadas de migracin celular que obligan a las clulas a seguir diferentes
rutas de una a otra parte del embrin. Muchos estudios indican que las fibrillas con fibronectina a
menudo se sitan en las vas que las clulas prefieren para desplazarse. Por ejemplo, las clulas de la
cresta neural, que se desplazan afuera del sistema nervioso en desarrollo hacia el interior de casi todas
las partes del embrin, atraviesan vas ricas en fibronectina. Estos movimientos celulares pueden
92
inhibirse si se inyectan anticuerpos al embrin, que se enlazan a sitios de reconocimiento de las
molculas de fibronectina y los bloquean. La importancia de la fibronectina en el desplazamiento de la
cresta neural puede demostrarse fcilmente in vitro. No es sorprendente que los ratones que carecen
de un gen funcional para fibronectina sean incapaces de sobrevivir despus de las primeras etapas del
desarrollo embrionario.

Otra glucoprotena de la MEC es la laminina, cuyos polipptidos, igual que los de fibronectina contienen
dominios distintos con sitios de enlaces especficos. Adems de enlazarse fuertemente a los receptores
de la superficie celular, la laminina se puede enlazar a otras molculas de laminina, a heparansulfato
proteoglicanos y a colgena tipo IV, un componente ubicuo de las membranas basales. Se cree que la
laminina y las molculas de colgena del tipo IV se entrelazan con una armazn porosa.
Adems de su papel estructural, la laminina puede actuar en la capacidad reguladora e influir en el
potencial de crecimiento y diferenciacin de la clula. La laminina ha sido mejor estudiada en relacin
con su papel como gua del trayecto de los axones conforme crecen fuera del sistema nervioso central
durante el desarrollo embrionario. La laminina esta presente a lo largo de muchas de estas vas en el
embrin, y cuando aparece sobre la superficie de un cultivo de neurablastos promueve activamente el
desarrollo del axn.
Entre otras protenas de la MEC se incluyen tenascina, entactina y trombospondina. La tenascina es
una glucoprotena oligomrica grande que se observa principalmente sobre la superficie de las clulas
embrionarias y varias clulas tumorales. A diferencia de la fibronectica, que promueve la adherencia
celular, la tenascina parece que acta principalmente como componente antiadherente. Sin embargo, los
ratones que se desarrollan sin copias de genes funcionales para tenascina no parecen mostrar efectos
patolgicos por la ausencia de la protena. La entactina, componente de la membrana basal donde se
enlaza la laminina, puede desempear un papel importante en la adherencia y penetracin del embrin
primitivo de mamfero en el revestimiento del tero durante la implantacin. Una gran variedad de
clulas secretan trombospondina en la MEC, y es particularmente en la matriz que rodea el
revestimiento de vasos sanguneos maduros en donde la trombospondina parece inhibir la neoformacin
de vasos sanguneos (angeognesis).
La combinacin nica de los diferentes componentes de la MEC contribuye a las caractersticas
especficas de cada tipo de tejido. La mayor parte de los componentes de la MEC son grandes
macromolculas compuestas de subunidades con estructura modular y poseen sitios de enlace entre s.
Por consiguiente, las interacciones entre los materiales de la MEC pueden ser muy complejas. Incluso
algunas molculas pueden poseer sitios de enlace con actividades opuestas, por ejemplo, un sitio que
promueve la adherencia celular y otro que la inhibe. En estos, la organizacin supramolecular de los
diferentes componentes puede determinar en ltimo trmino el efecto sobre la conducta de la clula,
efecto dinmico que puede cambiar de un momento a otro.

RELACIONES Y ADHERENCIA DE CLULAS A SUSTRATOS NO CELULARES
Ciertos componentes de la MEC, incluyendo fibronectina, laminina y colgeno, tienen capacidad para
enlazarse a receptores situados sobre la superficie de la clula. El grupo ms importante de receptores
que fijan la clula a su microambiente extracelular son las integrinas.
Integrinas
Las integrinas son una superfamilia de protenas integrales de membrana compuestas de cadenas de
polipptidos que abrazan toda la membrana, una cadena y una cadena unidades mediante enlaces no
covalentes. Cuando menos se han identificado 15 diferentes subunidades y ocho diferentes
subunidades . Tericamente, pueden existir ms de 100 pares posibles de subunidades y en forma
93
de heterodmeros, aunque el verdadero nmero est bastante restringido. En la superficie de la clula
solo se han identificado unas 20 integrinas diferentes, cada una con distribucin tisular especfica
predecible.
Ambas subunidades de integrina, y , poseen una gran porcin extracelular donde se encuentran los
sitios de enlace para ligandos especficos; un segmento corto, nico, que rodea a la membrana, y un
pequeo dominio citoplasmtico (40 a 50 aminocidos de largo) que contiene sitios de enlace para
componentes del citoesqueleto. Por lo tanto, las integrinas tienen capacidad para enlazarse a sustancias
en ambos lados de la membrana plasmtica. De hecho, el nombre integrina concuerda con el concepto
de que estas protenas pueden transmitir seales entre los compartimientos extracelular e intracelular
como una manera de integrar sucesos externos e interno.
En el cuadro 1 se presenta una lista de las integrinas conocidas y de los ligandos claves que se unen a
ellas. Puesto que las clulas individuales pueden expresar varias integrinas diferentes en su superficie
dichas clulas tienen capacidad de enlazarse a distintos componentes extracelulares. En muchos casos,
una combinacin de integrinas que reconocen diferentes dominios de un ligando extracelular puede ser
la que determine el efecto de la MEC sobre la conducta de la clula. Por ejemplo, las clulas situadas en
la capa inferior de la epidermis contienen las integrinas
2
1
,
3
1
y
5
1
, las cuales pueden ayudar a unir
estas clulas a componentes de la membrana basal subyacente. La liberacin de estas clulas de la
membrana basal, requerida para que se desplacen hacia la superficie de la piel, se correlaciona con la
prdida de expresin de las tres integrinas.

CUADRO 1: Clasificacin de los receptores de integrina segn el reconocimiento de las secuencias RGD
____________________________________________________________________________
RGD reconocidas RGD no reconocidas
_________________________________ ____________________________________
Receptor de integrina Ligandos clave Receptor de integrina Ligandos clave
____________________________________________________________________________

1
Fibronectina
1
1
Colgena
1
Fibronectina
2
1
Colgena
Laminina
1
Fibronectina
3
1
Colgena
Laminina
2
Leishmania
4
1
Fibronectina
MACV
Fibringeno
6
1
Laminina
11b
3
Fibronectina
Factor Von Willebrand
Vitronectina
Fibringeno
1
2
ICAM-1
3
Fibronectina ICAM-2
Factor Von Willebrand
Vitronectina
5
Vitronectina
M
2
Fibringeno
ICAM-1
b
Fibronectina
____________________________________________________________________________
La mayor parte de las protenas extracelulares que se enlazan a las integrinas lo hacen debido a que
contienen la secuencia de aminocidos arginina-glicina-cido asprtico (o en la nomenclatura abreviada
de aminocidos RGD). Esta secuencia de tripptidos se presenta en los sitios de enlace a la clula de
fibronectina, laminina y colgena, y de otras protenas extracelulares.
Como ya se mencion, muchas clulas se adhieren firmemente a un plato de cultivo recubierto con
fibronectina. Si las clulas se aaden en presencia de un pptido sinttico que contiene la secuencia
RGD, la clula ya no puede unirse al plato de cultivo; el pptido sinttico tiene capacidad para competir
con xito con las secuencias RGD de las molculas de fibronectina por los sitios de enlace sobre las
94
integrinas de la superficie celular. Se estima que casi la mitad de todas las integrinas contienen sitio de
enlace de RGD. Por consiguiente, las protenas extracelulares especficas son capaces de enlazarse a
varios miembros diferentes de la familia de las integrinas y viceversa. Dada esta redundancia y el
hecho de que la afinidad de las integrinas por sus ligandos puede variar segn condiciones locales, el
tema de las interacciones integrina-ligando es complicado y todava no comprendido en su totalidad. El
enlace de todo los ligandos a las integrinas, sea por secuencias RGD y otras secuencias, requiere la
presencia de iones bivalentes, ya sea Mg
2
o Ca
2
.
El descubrimiento de la importancia de la secuencia RGD en la actividad de la integrina plante la
posibilidad de nuevos tratamientos para padecimientos que afectan la superficie celular. La formacin
de un cogulo sanguneo (trombo) en un vaso no daado puede interrumpir el flujo de sangre a travs de
rganos vitales y es una de las principales causas de ataque al corazn y accidente vascular cerebral.
Uno de los primeros pasos en la formacin de un cogulo sanguneo es la agregacin de plaquetas,
fragmentos celulares no nucleados que circulan en la sangre. La agregacin de plaquetas requiere la
interaccin de una integrina especfica de plaquetas con protenas solubles de la sangre que contengan
RGD, como el fibrongeno y el factor de Von Willebrand, que actan como uniones para mantener juntas
a las plaquetas. Experimentos con animales indican que pptidos sintticos provistos de RGD pueden
inhibir la coagulacin de la sangre y son agentes antitrombticos eficaces en el ser humano. Es
evidente que estos agentes deben administrarse con sumo cuidado puesto que pueden interferir con
muchos otros procesos mediados por integrinas. Esto puede ilustrarse con una familia de toxinas
presentes en el veneno de ciertas serpientes que contienen protenas con secuencias RGD. Estas
toxinas actan al impedir el enlace a integrinas (por esa razn se les denomina desintegrinas).

Adems de su papel en el enlace a materiales extracelulares y la transmisin de seales a travs de la
membrana plasmtica, las integrinas tambin participan en la formacin de dos tipos de estructuras
adherentes especializadas: las adherencias focales y los hemidesmosomas.

Fijacin de clulas a su sustrato
Adherencias focales y hemidesmosomas:
Es mucho ms fcil estudiar la interaccin de las clulas con la parte inferior de un plato de cultivo que
con una matriz extracelular de un animal. Por consiguiente, gran parte de nuestro conocimiento en esta
rea se obtuvo del estudio de clulas que se adhieren in vitro a diferentes sustratos. Al principio, la
clula tiene forma esfrica, como generalmente ocurre en clulas suspendidas en medios acuosos. Una
vez que la clula entra en contacto con el sustrato enva hacia afuera prolongaciones que forman
uniones cada vez ms estables. Con el tiempo, las clulas se aplanan y extienden sobre s mismas hacia
afuera del sustrato. La expansin se acompaa de un cambio espectacular en la organizacin del
citoesqueleto, tal vez mediada por un mecanismo de seales transmembrana que comunica el citoplasma
con el medio externo.
95

Cuando los fibroblastos o las clulas epiteliales se propagan hacia la superficie inferior de un plato de
cultivo, la parte de debajo de la clula no se comprime uniformemente contra el sustrato. En vez de
ello, la membrana celular entra en estrecho contacto (casi 10 nm) con la superficie del plato slo en
sitios discretos, dispersos, llamados contactos focales. En la regin de contacto focal, la membrana
plasmtica contiene grupos de integrinas (con mayor frecuencia
5
1
) que conectan el material
extracelular que reviste el plato de cultivo con el sistema de microfilamentos del citoesqueleto que
contiene actina. La presencia de contactos focales guarda relacin inversa con el movimiento de la
clula sobre el sustrato; cuanto mayor sea el nmero de contactos focales, menos movible ser la clula.

Los contactos focales son estructuras adherentes caractersticas de clulas cultivadas adheridas a la
superficie del plato de cultivo. En el interior del cuerpo se observan uniones firmes entre clulas y la
matriz celular a nivel de la superficie basal de las clulas epiteliales, donde se unen a la membrana basal
subyacente mediante una estructura adherente especializada denominada hemidesmosoma. Los
hemidesmosomas consisten en una placa densa situada en la superficie interna de la membrana
plasmtica con filamentos que corren al interior del citoplasma. A diferencia de los filamentos de los
contactos focales, que contienen actina, los filamentos del hemidesmosoma son ms gruesos y contienen
queratina. Los filamentos que contienen queratina se clasifican como filamentos intermedios, que
sirven principalmente para funciones de apoyo; se distinguen de los microfilamentos ms delgados que
contienen actina y cuya funcin es contrctil. Los filamentos de queratina del contacto focal se unen a
la matriz extracelular mediante integrinas que rodean a la membrana, incluyendo
6
4
.

96
La importancia de los hemidesmosomas se puede apreciar en una rara enfermedad, el pnfigo bulloso,
en el cual se producen anticuerpos que se enlazan a una protena presente en estas estructuras
adherentes. Las enfermedades causadas por anticuerpos dirigidos contra nuestros propios tejidos se
denominan enfermedades autoinmunitarias y son causa de una gran variedad de padecimientos. En casos
de pnfigo bulloso, los anticuerpos se enlazan a una protena antgeno penfigoide bulloso, localizada en
las placas de los hemidesmosomas. Esto causa que la capa inferior de la epidermis se separe de la
membrana basal subyacente y por lo tanto de la capa de tejido conectivo de la dermis. El paso del
lquido al espacio situado debajo de la epidermis provoca graves ampollas en la piel.

Adherencia de clulas a otras clulas
El examen de un delgado corte transversal que pase por los principales rganos revela una compleja
arquitectura que implica diversos tipos de clulas. La formacin de estos complicados patrones
celulares tridimensionales dentro de los rganos en desarrollo sin duda depende principalmente de
interacciones de tipo selectivo entre clulas similares y no similares. Las pruebas indican que las clulas
pueden reconocer las superficies de otras clulas porque saben con cuales deben interactuar y a
cuales deben ignorar.
Es muy difcil estudiar las interacciones de adherencia que ocurren en las partes microscpicas de
rganos minsculos conforme se desarrollan en el embrin. Los primeros intentos para aprender algo
acerca de cmo las clulas se reconocen y adhieren entre si se llevaron a cabo al eliminar un rgano en
desarrollo de un embrin, disociando el tejido para formar una suspensin de clulas nicas y
determinando la capacidad de las clulas para reagruparse en cultivo. En experimentos donde se
disociaron y mezclaron clulas de dos rganos diferentes en desarrollo, inicialmente se aglutinaron para
formar una masa mixta. Sin embargo, con el tiempo, las clulas se desplazaron dentro del agregado y se
autoclasificaron, de modo que cada clula solo se adhiere a clulas de su mismo tipo.
Un mtodo experimental diferente, tambin demuestra que las clulas de preferencia tienden a
adherirse a otras clulas de su mismo tipo. En este estudio, clulas en suspensin marcadas con
istopos radiactivos se aadieron a un plato de cultivo cuya superficie estaba cubierta por una
monocapa de clulas, y se permiti que las clulas marcadas se asentaran sobre la monocapa durante
cierto tiempo; a continuacin se lav el plato para liberarlo de clulas no adheridas y se midi la
radiactividad producida por las clulas adheridas al plato. En experimentos de este tipo, generalmente
se observa que el nmero de clulas marcadas adheridas al plato es mucho mayor si las clulas inmviles
de la monocapa son del mismo tipo que las clulas en suspensin comparadas con clulas de diferente
tipo.
Poco se saba sobre la naturaleza de las molculas que median la adherencia entre clulas hasta el
desarrollo de tcnicas para purificar protenas integrales de membrana y, ms recientemente,
aislamiento y clonacin de los genes que codifican estas protenas. Hasta ahora se ha demostrado que
cuatro distintas familias de protenas de membrana median la adherencia de una clula a otra: 1)
selectinas; 2) ciertos miembros de la superfamilia de inmunoglobulinas (IgSF); 3) ciertos miembros de
la superfamilia de las integrinas, y 4) cadherinas.

Selectinas
Durante el decenio de 1960 se descubri que los linfocitos eliminados de ganglios linfticos perifricos,
marcados con istopos radiactivos e inyectados de nuevo al cuerpo, retornaban a sus sitios de origen,
fenmeno denominado regreso a casa de los linfocitos. Posteriormente se observ que el regreso a
casa poda estudiarse in vitro al permitir que los linfocitos se adhieran a cortes congelados de tejido
linfoide. En estas condiciones experimentales los linfocitos se adhieren selectivamente al revestimiento
endotelial de las vnulas (las venas ms pequeas) de los ganglios linfticos perifricos. La unin de
linfocitos a vnulas poda impedirse con anticuerpos que se enlazan a una glucoprotena especfica sobre
la superficie del linfocito. Este receptor de linfocitos se denomin LEU-CAM I y posteriormente
selectina-L.
97

Las selectinas son una familia de glucoprotenas integrales de membrana que reconocen disposiciones
especficas de grupos carbohidratos proyectados de la superficie de otras clulas y se unen a ellos. El
nombre de este tipo de receptor de la superficie celular se deriva de la palabra lectina, trmino que
describe un compuesto capaz de enlazarse a grupos carbohidrato especficos. Las selectinas poseen un
pequeo dominio citoplsmico, un dominio simple que rodea a la membrana, y un gran segmento
extracelular que consta de algunos dominios separados, incluyendo el ms externo que acta como
lectina. Se conocen tres selectinas: selectina E, que se expresa en las clulas endoteliales; selectina P,
expresada sobre plaquetas y clulas endoteliales, y selectina L, que se expresa en todo tipo de
leucocitos. Estas tres selectinas reconocen un grupo similar de cuatro azcares presente en los
extremos de ciertas cadenas de carbohidratos de glucoprotenas o glucolpidos. El enlace de selectinas
a sus ligandos carbohidrato depende de calcio. Como grupo, las selectinas median interacciones
transitorias entre leucocitos circulantes y la pared vascular en sitios donde hay inflamacin y
coagulacin.

Inmunoglobulinas e integrinas
Una de las piedras angulares en el conocimiento de la respuesta inmunolgica fue el descubrimiento, en
los aos 1960, de la estructura molecular de los anticuerpos de origen sanguneo (IgG). Se observ que
las molculas de anticuerpos constan de una cadena de polipptidos compuesta de varios dominios
similares. Cada dominio Ig, como se llam, se compone de 70 a 110 aminocidos organizados en una
estructura firmemente plegada. Con el tiempo, fue evidente que los dominios de tipo Ig se encuentran
en gran variedad de protenas que en conjunto constituyen la superfamilia de las inmunoglobulinas, o
IgSF. La mayor parte de los miembros de las IgSF son protenas integrales de membrana presentes en
la superficie de los linfocitos que participan en diferentes etapas de la funcin inmunolgica. Algunas de
estas protenas integrales median la adherencia clula-clula independiente de calcio. En realidad, el
descubrimiento de dominios semejantes a Ig en molculas que participan en la adherencia celular en los
invertebrados, animales que carecen de un sistema inmunolgico tpico, sugiere que originalmente las
protenas similares a Ig evolucionaron a partir de mediadores de la adherencia celular y solo en forma
secundaria adquirieron funciones como efectores del sistema inmunolgico de los vertebrados.
98

La mayor parte de las molculas IgSF de adherencia celular median interacciones especficas de
linfocitos con clulas por ej., macrfagos, otros linfocitos y clulas blanco requeridas para la respuesta
inmunolgica. Sin embargo, algunos miembros IgSF, como molculas de adherencia a clulas neurales
(MACN) median la adherencia entre clulas no inmunolgicas, incluyendo clulas nerviosas y musculares
embrionarias. A partir del modelo de la molcula MACN, es evidente que igual que fibronectina y
muchas otras protenas implicadas en la adherencia celular, las molculas IgSF para la adherencia de
clulas poseen una estructura modular constituida por dominios individuales compartidos con otras
protenas. Las molculas de adherencia a clulas neurales participan en diferentes etapas del desarrollo
del sistema nervioso, incluyendo agregacin de clulas migrantes de la cresta neural para formar
agregados que posteriormente se desarrollan como ganglios simpticos, interaccin estrecha entre
clulas nerviosas y clulas de sostn que las rodean, y en la formacin de contactos sinpticos entre
clulas nerviosas y sus clulas especficas. Por ejemplo, si se inyectan anticuerpos contra MACN en un
embrin de pollo en desarrollo, se puede interrumpir cada uno de estos procesos.
Diferentes tipos de protenas sirven como ligandos para las molculas IgSF de la superficie celular. Una
protena IgSF sobre una clula puede enlazarse a la misma protena IgSF o a una diferente sobre otra
clula, por ejemplo, una molcula MACN sobre una clula puede enlazarse al mismo tipo de MACN sobre
otra clula, la mayor parte de las integrinas facilitan la adherencia de clulas con su sustrato, pero unas
pocas integrinas median la adherencia de una clula con otra al enlazarse a protena IgSF en clulas
opuestas. Por ejemplo, la integrina
4
1
en la superficie de los leucocitos se une a la molcula de
adherencia a clulas vasculares (MACV), una protena IgSF de la superficie de clulas endoteliales.

Cadherinas
Las cadherinas son una familia de cuando menos 12 glucoprotenas relacionadas que median la
adherencia celular dependiente de Ca
2+
. Los miembros de la familia de las cadherinas se pueden
distinguir entre s por el tipo de clulas en las cuales se presentan; los miembros mejor estudiados son:
cadherina E (epitelial), cadherina N (neural) y cadherina P (placentaria). Estas cadherinas contienen un
segmento extracelular relativamente grande que consta de 4 dominios, un segmento nico
transmembrana y un dominio citoplsmico nico.

Las cadherinas se unen a clulas similares entre s y de manera preferencial a la misma cadherina
presente en la superficie de la clula vecina. Esta propiedad de autoasociacin se puede demostrar en
99
clulas manipuladas por ingeniera gentica para que expresen una variedad de las diferentes
cadherinas y luego mezclar las clulas en diferentes combinaciones. Cuando se efecta este
experimento, las clulas que expresan una especie de cadherina se adhieren preferencialmente a otras
clulas que expresan la misma cadherina. La capacidad de las cadherinas para mediar la adherencia de
clulas semejantes puede explicar los resultados de los primeros estudios, en el cual las clulas de
agregados mixtos se clasificaron para formar agrupamientos de clulas de tipo similar. En realidad,
las cadherinas pueden ser el factor aislado ms importante para mantener las clulas reunidas en
tejidos firmemente cohesivos.
El desarrollo embrionario se caracteriza por cambios en la expresin del gen, en la forma de la clula,
en la motilidad celular, en la adherencia de clulas, y as sucesivamente. Las cadherinas desempean un
papel clave en algunos de estos cambios. Por ejemplo, durante el desarrollo embrionario algunos sucesos
morfogenticos implican cambiar un grupo de clulas de la mesnquima (clulas laxas principalmente no
adhesivas) a un epitelio (capa celular organizada fuertemente adherente), o viceversa. Esta transicin
mesnquima-epitelio se ilustra por el movimiento de clulas mesodrmicas durante la etapa de
gastrulacin. En condiciones tpicas las clulas se separan de una capa cohesiva en la superficie de la
gstrula primitiva y vagan en regiones interiores como clulas mesenquimatosas. Despus de algn
tiempo, muchas de estas mismas clulas adquieren propiedades adherentes y se ensamblan en un
epitelio como los somitas formados a lo largo de la lnea media dorsal del embrin. A continuacin, en
una etapa posterior, las clulas de ciertas partes del somita pierden su adhesividad y comienzan una vez
ms a vagar como mesnquima en las extremidades en desarrollo para formar msculo o cartlago, o
debajo de la epidermis en desarrollo para formar tejidos drmicos. La agregacin de clulas en un
epitelio, como los somitas, se correlaciona con la aparicin de cadherina N sobre la superficie de las
clulas, una propiedad que debe promover la adhesividad mutua entre las clulas. En contraste, la
dispersin de clulas a partir de un epitelio se correlaciona con la desaparicin de cadherina N (y la
posible aparicin de integrinas que median la adherencia ente una clula y su matriz extracelular).

Fijacin de una clula a otras clulas.
Uniones adherentes y desmosomas:
Las clulas de ciertos tejidos, particularmente epitelios y msculo cardaco, son notoriamente difciles
de separar debido a que se mantienen firmemente unidas ente s por uniones adherentes especializadas.
Hay dos tipos principales de uniones adherentes: uniones adherentes y desmosomas. Adems de estas
uniones, las clulas epiteliales a menudo contienen otros tipos de uniones clula a clula localizadas a lo
largo de su superficie lateral cerca de la luz apical. Considerada en conjunto, esta especie de superficie
especializada se denomina complejo de unin intercelular.

Las uniones adherentes (o zonula adherens) se observan en varios sitios del cuerpo. Son
particularmente comunes en epitelios como el que reviste el intestino, donde adoptan la forma de un
cinturn que rodea a cada clula cerca de su superficie apical, enlazndola a sus vecinas. Las
membranas plasmticas de una unin adherente estn separadas por un espacio de 20 a 35 nm, sitio
donde se concentran molculas de cadherinas. Estas clulas al parecer se mantienen juntas por uniones
dependientes de calcio formadas entre los dominios extracelulares de molculas de cadherina que
100
sirven de puente entre las brechas de clulas vecinas. El dominio citoplasmtico de las molculas de
cadherina de las uniones adherentes se une mediante miembros de una familia de protenas
citoplasmtica, denominadas cateninas, con filamentos de actina del citoesqueleto. Por lo tanto, igual
que las integrinas de contacto focal, las cadherinas de la unin adherente conectan el ambiente externo
con el citoesqueleto intracelular.

Los desmosomas (o maculae adherens) son uniones adherentes discoides observadas en varios tejidos,
pero ms notablemente en epitelios, donde se presentan en situacin basal respecto de las situaciones
adherentes. Las membranas plasmticas de un desmosoma estn separadas por 20 a 35 nm. La regin
entre las clulas (desmoglea) esta llena con el material ligeramente teido que se cree acta como
pegamento de colgena viscosa. Las placas citoplasmticas densas sobre la superficie interna de la
membrana plasmtica sirve como sitios de fijacin para filamentos intermedios en asa (no
microfilamentos, como en las uniones adherentes) que se extienden al interior del citoplasma. Estos
filamentos intermedios abrazan toda amplitud de la clula interconectando la superficie de los
desmosomas situados sobre lados opuestos de la clula. Las desmosomas son particularmente
abundantes en tejidos sujetos a esfuerzo mecnico, como la piel y el cuello uterino. La red de
filamentos intermedios semeja una cuerda y suministra continuidad estructural y resistencia tensil a
toda la capa de clulas.
Las membranas plasmticas de un desmosoma contiene varios miembros de la familia de la cadherinas
(desmogleinas y desmocolinas) que se cree conectan el material extracelular situado entre membranas
plasmticas en aposicin con los filamentos intermedios de las placas citoplsmicas. La importancia de
las cadherinas para mantener la integridad estructural de un epitelio se ilustra por una enfermedad
autoinmunitaria (el pnfigo vulgar), en la cual se produce anticuerpos contra una de las desmogleinas,
llamados antgeno del pnfigo vulgar. La enfermedad se caracteriza por prdida de la adherencia de
clula a clula en la epidermis y la presencia de grandes ampollas sobre la piel.
101

Papel de los receptores de adherencia celular en las seales transmembrana.
El esquema muestra cada uno de los cuatro tipos de molculas de adherencia celular y sus interacciones
con los materiales extracelular y citoplsmico. Uno de los papeles de las protenas integrales de
membrana es transmitir informacin a travs de la membrana plasmtica, proceso conocido como
transmembrana.
Por ejemplo, integrina y cadherinas pueden transmitir informacin entre el medio extracelular y el
citoplasma por su capacidad para formar enlaces con el citoesqueleto. Reunin de una integrina con su
ligando puede inducir varias respuestas dentro de una clula, incluyendo cambios de pH citoplasmtico,
concentracin de Ca
2+
, fosforilacin de protenas y expresin de genes. Estos cambios, a su vez, puede
alterar el potencial de crecimiento celular, la actividad migratoria o el estado de diferenciacin. La
importancia de dichos receptores se puede ilustrar al desarrollar clulas epiteliales de glndula
mamaria en ausencia de glucoprotenas extracelulares, como fibronectina y laminina. Estas clulas
muestran un aspecto aplanado, indiferenciado y producen leche con muy poca protena. Cuando se aade
laminina al cultivo esta protena se une a las integrinas situadas en la superficie de las clulas, estimula
una transformacin de las clulas para diferenciarlas en clulas mamarias e induce un incremento 50
veces mayor en la produccin de protenas de la leche.
Inversamente, los cambios en el citoplasma pueden generan seales transferibles al exterior a travs
de la membrana plasmtica. Las demostraciones de seales de adentro hacia fuera provienen de
estudios efectuado con integrinas cuya conformacin puede cambiar segn el estado fisiolgico de las
clulas. Por ejemplo, las plaquetas de la sangre circulante normalmente no se unen a molculas de
fibringeno en la sangre. Sin embargo, cuando se activan en un sitio de lesin vascular, las integrinas
3
situadas en la superficie de las plaquetas sufren un cambio de conformacin que aumenta su
afinidad a fibringeno. El enlace de fibringeno a integrinas activadas provoca agregacin de plaquetas
y taponamiento de la herida. La formacin de placas de colesterol en la pared de una arteria tambin
puede activar plaquetas y conducir a la formacin de un cogulo sanguneo capaz de obstruir una artera
coronaria y provocar ataque al corazn.

Uniones hermticas: Sellado del espacio extracelular.
Desde hace varios decenios los bilogos saben que cuando se colocan ciertos tipos de epitelio como piel
de rana o pared de la vejiga urinaria, entre dos compartimientos que contiene diferentes
concentraciones de soluto, la difusin de iones o soluto de un compartimiento al otro a travs del
epitelio es muy escasa. Dada la impermeabilidad de las membranas plasmticas no es sorprendente que
los solutos no pueden difundir libremente a travs de las clulas de una capa epitelial, pero por qu
estas sustancias no pueden atravesar los espacios situados entre las clulas? La razn se demostr en
la poca de 1960 a 1970, cuando se describieron contactos especializados denominados uniones
hermticas, formadas entre clulas epiteliales vecinas.
102
Estas uniones ocurren en el extremo ms alejado del borde apical de los complejos de unin entre
clulas epiteliales adyacentes. Se cree que los puntos de contacto celular representan sitios donde las
protenas integrales de dos membranas adyacentes se encuentran en el espacio extracelular.
Recientemente se purific la protena integral de las uniones hermticas y se les denomino ocludina.

El anlisis de fracturas por congelacin, que permite observar la cara interna de la membrana, muestra
que las membranas plasmticas de la unin hermtica contienen fibras interconectadas que corren
paralelas entre s y con la superficie apical del epitelio. Las fibras (o surcos en la cara opuesta de la
membrana fracturada) corresponden a hileras de protenas integrales de membrana alineadas. Las
hileras de protenas de membrana forman una banda continua que rodea por completo la clula como un
empaque, haciendo contacto por todos lados con las clulas vecinas. En consecuencia, las uniones
hermticas son uniones ocluyentes; o sea, forman una barrera continua de impermeabilidad que sella el
espacio extracelular sobre uno de los lados del epitelio en relacin con el otro lado. Las uniones
hermticas con gran nmero de fibras tienden a establecer un mejor sellado en comparacin con las
uniones de fibras escasas. La capacidad de las uniones hermticas para impedir el paso de molculas
entre las clulas se puede demostrar sumergiendo un pedazo de tejido en un material electrnicamente
denso, como el metal pesado lantano. Cuando se examina posteriormente el tejido en el microscopio
electrnico, se observan que el lantano penetra entre las clulas pero slo hasta los bordes superior e
inferior de las uniones hermticas.
Las uniones hermticas que unen las clulas endoteliales de los capilares cerebrales forman la barrera
hematoenceflica, que impide el paso de sustancias de la corriente sangunea al interior del tejido
cerebral. La barrera hematoenceflica protege al cerebro de la penetracin de solutos indeseados,
pero tambin evita el acceso de muchos frmacos al sistema nervioso central. Por consiguiente, uno de
los objetivos de la industria farmacutica es desarrollar tcnicas para abrir las uniones hermticas
del cerebro y permitir el paso de agentes teraputicos de peso molecular elevado.
Es digno de mencionar que algunos iones pequeos e incluso molculas de agua no pueden penetrar
ciertas uniones hermticas, pero en cambio las clulas del sistema inmunolgico capaces de penetrar a
los tejidos inflamados pueden atravesar capas epiteliales a travs de estas uniones. Se cree que estas
clulas envan una sealan que abre la unin, permitindoles el paso. Puesto que durante el paso de los
leucocitos no disminuye la resistencia elctrica de la capa epitelial, se cree que las uniones hermticas
deben abrirse alrededor de los leucocitos y mantener estrecho contacto con las clulas inmunolgicas
que las atraviesan.

Uniones comunicantes o Nexos.
Llamados tambien uniones de abertura, uniones con espacio o con hendidura, son sitios entre clulas
animales especializadas para la comunicacin intercelular esencial para la coordinacin de actividades;
ademas, durante el desarrollo son necesarias para la propagacin de seales que controlen el
crecimiento y diferenciacin. Las micrografas electrnicas revelan que estas uniones comunicantes son
sitios donde las membranas plasmticas de clulas adyacentes se ponen en estrecho contacto entre s
(a una distancia aproximada de 3 nm), pero no entran en contacto directo. En vez de ello, la abertura
entre las clulas es atravesada por fibras sumamente finas que en realidad son caeras moleculares
que pasan a travs de membranas plasmticas adyacentes y se abren en el citoplasma de clulas
103
vecinas. Las uniones comunicantes unen clulas de casi todos los tejidos de mamferos; las principales
excepciones son el msculo esqueltico y la mayor parte del tejido nervioso.

En comparacin con otras uniones intercelulares, las uniones con hendidura o nexos muestran una
composicin molecular simple; consisten casi en su totalidad en una protena integral de membrana
denominada conexina. Las conexinas se agrupan en la membrana plasmtica para formar un complejo de
mltiples subunidades denominado conexn, que rodea completamente la membrana. Cada conexn se
compone de seis subunidades de conexina dispuesta alrededor de un agujero o anillo central de
aproximadamente 1.5 nm de dimetro que corresponde al canal hidrofilico. Los conexones poseen un
dimetro de unos 8 nm, son ensamblados en algn punto desde que se sintetizan los polipptidos
conexina en el retculo endoplasmatico rugoso, pero antes de llegar a la membrana plasmtica.
Las conexinas son miembros de una familia multigenica cuando menos se ha aislado una docena de
conexina procedentes de diferentes tejidos y tambin se han clonado sus genes algunas clulas
sintetizan ms de un tipo de conexina pero todava no se ha demostrado de manera concluyente si un
solo conexon puede contener ms de un tipo de subunidad de conexina.
Durante la formacin de las uniones con hendidura, los conexones de membranas plasmtica de clulas
opuestas se unen entre s a travs de interacciones de dominios extracelulares de las subunidades de
protena. Una vez alineados, los conexones de clulas adyacentes forman canales completos que
conectan el citoplasma de una clula con el citoplasma de una vecina. A veces los conexones se agrupan
en regiones especificas formando placas de uniones comunicantes que se visualizan mejor en las replicas
de fracturas por congelacin.
Las uniones con hendidura son sitos de comunicacin entre el citoplasma de clulas adyacentes. La
existencia de comunicacin intercelular por unin de abertura (CIUA) se manifiesta por el paso de
corrientes inicas o de colorantes debajo peso molecular, como fluorescena, desde una clula a sus
vecinas. Las uniones comunicantes de mamferos permiten la libre difusin de molculas con peso
molecular aproximado a mil daltons o menos. En contraste con los canales inicos altamente selectivos
que conectan una clula con el medio externo, los canales de las uniones comunicantes son notablemente
no selectivos: si la molcula es bastante pequea pasa a travs de la caera.
Las uniones con hendirura desempean un papel importante en el paso de corrientes inicas de una
clula a sus vecinas, como se ilustra por ondas de excitacin que viajan a travs de los msculos
cardiaco y liso. Una de las manifestaciones de la interaccion celular es el acoplamiento electrico, las
celulas estan elctricamente acopladas es decir tienen regiones de baja resistencia por las cuales fluye
con bastante libertad una corriente electrica transportada por iones. El acoplamiento electrico
depende de las uniones con hendidura o nexos. La contraccin del corazn de mamfero puede ser
estimulada por un impulso elctrico generado en una pequea regin de tejido muscular especializado
llamado ndulo sinoauricular, que acta como marcapaso del corazn. Los impulsos se propagan con
rapidez a travs de las clulas que constituyen la pared del corazn, pasando de cada clula muscular
cardiaca al interior de clulas vecinas por medio de uniones con hendidura que conectan las clulas. De
104
igual manera, el flujo de corriente a travs de las uniones con hendidura que conectan las clulas de
msculo liso en la pared del esfago o del intestino genera ondas peristlticas coordinadas que se
desplazan lentamente en direccin caudal al lado de la pared.
El hecho de que las uniones comunicantes pueden reunir gran nmero de clulas en ntimo contacto
citoplasmtico constituye en realidad un compartimiento gigantesco relacionados con molculas de
tamao suficientemente pequeo para pasar a travs de los canales de comunicacin. Seria de esperar
que esta condicin tuviese consecuencias fisiolgicas muy importantes, ya que algunas molculas
reguladoras sumamente activas, como el AMP cclico y otros segundos mensajes, son lo bastante
pequeas para atravesar los canales de las uniones comunicantes. Por consiguiente se puede concluir que
las uniones comunicantes integran las actividades de clulas individuales de los tejidos en una unin
funcional capaz de responder de manera simultnea aunque sea una parte de las clulas se expongan al
estmulo directo. Las uniones con hendidura tambin permiten la cooperacin metablica entre las
clulas porque comparten metabolitos clave, como ATP, azucares fosfato, aminocidos, nucleotidos,
vitaminas, iones y muchas coenzimas lo bastante pequea para atravesar los conductos intracelulares.
Plasmodesmosomas
Las plantas carecen de uniones especializadas como las observadas en tejidos animales, pero la mayor
parte de clulas vegetales se conectan entre s por medio de plasmodesmosomas. Los
plasmodesmosomas son conductos citoplasmticos cilndricos, de 30 a 60 nm de dimetro extendido
entre clulas adyacentes a travs de la pared celular interpuesta. Los plasmodesmosomas estn
revestidos de una membrana plasmtica y de ordinario contiene una varilla central densa, el
desmotbulo, derivado de retculo endoplasmtico liso de las dos clulas en contacto. Igual que las
uniones de abertura entre clulas animales, los plasmodesmosomas sirven como sitios de comunicacin
intercelular que une a las clulas de un tejido vegetal para formar una unidad metablica.

La va de paso entre clulas vegetales adyacentes presumiblemente se limita al estrecho espacio entre
la superficie externa del desmotbulo y la superficie interna de la membrana plasmtica. Estudios
acerca del movimiento de colorantes inyectados desde una clula al interior de sus vecinas sugiere, que
igual que las uniones de abertura, los plasmodesmosomas normalmente son impermeables a molculas
mayores de unos 1000 daltons. Sin embargo, infecciones por virus, como el virus del mosaico del tabaco,
incrementan la permeabilidad de los plasmodesmosomas. Como resultado, las partculas virales intactas
a sus cidos nucleicos pueden pasar entre las clulas, propagando la infeccin a travs de la planta.

UNIDAD DIDACTICA N 03: CITOPLASMA Y ORGANELOS CELULARES.
MATRIZ CITOPLASMTICA
La matriz citoplasmtica o citoplasma fundamental de la clula eucaritica contiene el mismo tipo de
componente que una bacteria es decir, molculas de ARN protenas celulares, enzimas, etc. Las clulas
superiores poseen, adems nuevos componentes que sugirieron por el proceso evolutivo representados
principalmente por los elementos citoesqueleticos y por las membranas intracelulares. Estas ltimas
comprenden el sistema vascular o endomembranoso y los organoides formados por membranas pero que
no se consideran parte de aquel, como mitocondrias cloroplastos o peroxisomas. En consecuencia, en la
clula eucaritica aparecen diversos comportamientos y subcompartimientos.
En trminos de dicha compartimentacin se pueden reconocer en el citoplasma dos territorios
principales: por un lado el interior del sistema de organoides y estructuras membranosas, y por el otro
el exterior de este, representando por la matriz citoplasmtica o citosol verdadero medio interno de la
105
clula que rellena todos los espacios. El citosol es especialmente notable en las clulas poco
diferenciadas ya que estas poseen un desarrollo relativamente escaso de endomembranas.
Las propiedades coloidales de la clula, como las transformaciones bsicas del sol o las modificaciones
de la viscosidad, dependen fundamentalmente de la matriz citoplasmtica amorfa.

En el citosol se produce la mayor parte de las funciones citoplasmticas, en el se encuentran numerosas
macromolculas, enzimas, ribosomas, la trama del citoesqueleto y un numero variable de cuerpos de
inclusin o inclusiones citoplasmticas que son estructuras inconstantes (deposito de glucgeno, gticas
lipdicas o cristales) no rodeadas por membranas.
Al realizar el procedimiento de fraccionamiento celular una vez separadas las fracciones nucleares
mitocondrial y microsomal se obtiene la fraccin sobrenadante soluble o citosol que es la que contiene
las protenas y las enzimas solubles del citoplasma. En sentido estricto, entonces citosol es el trmino
bioqumico o de fraccionamiento celular que designa al componente citoplasmtico amorfo denominado
matriz citoplasmtica.
La matriz citoplasmtica contiene agua, iones, metablicos de bajo peso molecular y macromolculas.
Entre estas ultimas se encuentran gran cantidad de protenas, por lo general del 20 al 25% de las
protenas totales de la clula pertenecen a la matriz citoplasmtica, aunque en algunos tipos celulares
llegan el 50%. Entre ellas se encuentra las enzimas de mltiples reacciones metablicas como las de las
gluclisis anaerobia, las de las sntesis de protenas que incluye la totalidad del ARN mensajero, los
ARN solubles y los factores y enzimas relacionados con este proceso.

CITOESQUELETO.
El esqueleto de un animal es un conocido sistema de rganos que consta de elemento endurecido que
apoyan a los tejidos blandos del cuerpo y desempean un papel clave en la mediacin de los movimientos
corporales. Las clulas tambin tienen un sistema esqueltico el citoesqueleto con funciones anlogas.

El citoesqueleto se compone de tres estructuras filamentosas bien definidas: microtubulos,
microfilamentos y filamentos intermedios, que en conjunto forman una compleja red interactiva. Los
microtubulos son estructuras cilndricas huecas cuya pared se compone de subunidades formados a
partir de la protena tubulina. Los microfilamentos son estructuras finas, slidas, compuestas de actina
y miosina. Se cree que los filamentos intermedios son fibras semejantes a acuerdas compuestas de
varias protenas con estructuras similares.
106

Los elementos que constituyen el citoesqueleto funcionan en algunas actividades interrelacionadas:
Como bastidor que suministra apoyo estructural que ayuda a mantener la forma de las clulas por
ejemplo, los enterocitos de mamfero mantiene su forma discoidal gracias al citoesqueleto de
espectrina y actina situada sobre la superficie interna de las membranas plasmtica de dichas
clulas.
Como armazn interno encargado de mantener la posicin de diferentes organelos en el interior de
la clula. Esta funcin particularmente evidente en clulas epiteliales polarizadas, donde los
organelos se disponen siguiendo un patrn definido a lo largo de un eje que va del extremo apical y
al eje basal de la clula.
Como parte de un mecanismo necesario para el movimiento de los materiales y organelos dentro de
las clulas, ejemplos de esta funcin incluye el moviendo de las vesculas de transporte de retculo
endoplasmtico al complejo de Golgi, la invaginacion de la membrana plasmtica durante la formacin
de la vesculas fagocitaras; la separacin de los cromosomas durante la mitosis, y el moviendo de
vesculas que contiene neurotransmisores a lo largo de clulas nerviosas desde el sitio donde se
sintetizan en el cuerpo celular hasta el sitio donde se utilizan en el extremo terminal de la clula.
Como elementos generadores de fuerzas encargados del movimiento de clulas de un sitio a otro.
Los organismos unicelulares de ordinario ejecutan locomocin celular arrastrndose sobre la
superficie de un sustrato slida o impulsndose por si mismos a travs de su ambiente acuoso con
ayuda de estructuras locomotrices especializadas (cilios y flagelos) que sobresalen de la superficie
celular. Los animales multicelulares contienen clulas capaces de amplios desplazamientos, estos
diferentes tipos de motilidad celular dependen de los elementos citoesqueleticos.
Como sitios para fijar ARN mensajeros y facilitar su traduccin a polipptidos. Cuando las clulas
se extraen con detergentes no ionicos, que dejan relativamente intacto el citoesqueleto, gran parte
del mecanismo de traduccin de la clula permanece en el citoesqueleto.
Como traductor de seales adems de la funcin mecnica mencionada antes, el citoesqueleto que
con frecuencia entra en contacto con la superficie interna de la membrana plasmtica, desempea
un papel clave en la transmisin de seales del ambiente extracelular al interior de la clula.
Debemos recordar que aunque los componentes del citoesqueleto en las microfotogrfias parecen
estructuras estticas e inmutables, en realidad son dinmicas capaces de reorganizarse con rapidez
espectacular. Adems, gran parte de las funciones del citoesqueleto requieren muchas protenas
accesorias que no forman parte de los propios filamentos.

MICROTUBULOS
Estructura y composicin
Como su nombre indica, los microtbulos son estructuras cilndricas huecas que ocurren en casi toda
clula eucariota observada con microscopio electrnico. Los microtbulos son elementos con diversas
107
disposiciones en estructuras adems del citoesqueleto, las cuales incluyen el uso mittico de las clulas
en divisin y el ncleo central de cilios y flagelos. Los microtbulos tienen dimetro externo de 24 nm,
una pared cuyo espesor es de unos 5 nm y longitud que puede extenderse a todo lo largo a ancho de una
clula. Un examn ultra estructural cuidadoso de los microtbulos muestra que su par es un polmero
compuesto de subunidades globulares. Cada subunidad globular consta de una sola molcula de la
protena tubulina. Las subunidades se disponen en hileras longitudinales llamadas protofilamentos,
alineados paralelamente al eje mayor del tbulo. En un corte transversal se nota que los microtbulos
casi siempre contienen 13 subunidades que rodean la circunferencia de la pared.
Aunque la pared del microtbulos parece estar formada por subunidades globulares, el ensamble de los
microtbulos ocurre por incorporacin de bloques de construccin dimericos cada uno de estos bloques
es una unidad que consta de dos molculas ensambladas de tubulina, una -tubulina y una -tubulina,
cada unidad contiene dos componentes (un heterodimero) por lo que el protofilamento integro presenta
una estructura asimtrica -tubulina y una -tubulina en un extremo y de una -tubulina y -tubulina en
el otro por lo que todos los protofilamentos de un microtbulos tienen la misma polaridad.

Cuando un polmero se forma de componentes asimtricos todos orientados en la misma direccin
(cabeza con cola) a lo largo del eje ( ) entonces el polmero en si es una estructura polarizada con
un extremo que contiene molculas -tubulina, distinguible del otro extremo que contiene molculas -
tubulina un extremo del microtbulo se conoce como extremo mas y el otro como extremo menos. La
polaridad estructural de microtbulos es un factor importante en el ensamblado de estas estructuras y
de su capacidad para participar en actividades mecnicas dirigidas.

Protenas relacionadas con microtbulos
Los microtbulos pueden formarse in Vitro a partir de preparaciones purificadas de tubulina pero los
microtbulos obtenidos de clulas ordinarias contiene protenas adicionales denominadas protenas
relacionadas con microtbulos (PRM) la mayor parte de las PRM que se han identificado solo se observa
en el tejido cerebral pero una de estas protenas denominada PRM 4 es de amplia distribucin.
Con el microscopio se puede observar que algunas PRM tienen una porcin globular o cabeza que se fija
al lado del microtbulo y una porcin filamentosa o cola que se extiende hacia fuera de la superficie del
microtbulo. Las PRM pueden interconectar microtubulos para formar ases visibles como puentes
transversales que conectan a los microtbulos entre si, otras PRM a veces incrementan las estabilidad
de los microtbulos alteran su rigidez o influyen en la velocidad de ensamblado. La actividad de las
diferentes PRM es controlada por adicin y eliminacin de grupos fosfato por proteinsinasas en un
residuo particular de aminocidos.

Funcin:
Los microtbulos desempean diferentes tareas:
1. Sirve como esqueleto o armazn que proporciona apoyo estructural y ayuda a mantener la posicin
de los organelos citoplasmticos.
108
2. Forman parte del mecanismo que desplaza materiales y organelos de una parte a otra de la clula.
3. Son elementos mviles de cilios y flagelos.
4. Son componentes primarios de los mecanismos encargados de la mitosis y la meiosis.

Protenas relacionadas con microtubulos
PROTEINAS PESO MOLECULAR
(KD)
FUENTE
PRMIA 350 Tejido nervioso
PRMIB 325 Tejido nervioso
Vesiquina 295 Tejido nervioso
PRM2A, PRM2B 270 Tejido nervioso
PRM4 200 Ampliamente distribuido
PRM3 180 Ampliamente distribuido
Dinamina 100 Tejido nervioso
PRM2C 70 Tejido nervioso
Tau 50-65

Tejido nervioso

Los microtbulos son lo bastante rgidos para resistir fuerzas de comprensin o de traccin sobre la
fibra. Esta propiedad permite a los microtbulos suministrar apoyo mecnico de manera no muy
diferente o como las vigas de acero apoyan un alto edificio de oficinas. Por ejemplo los microtbulos
evitan que las contracciones del citoplasma deformen las clulas. La distribucin de los microtbulos
citoplsmicos en una clula por lo general define la morfologa de la misma.
Tambin se cree que los microtbulos participan en el mantenimiento de la organizacin interna de la
clula. El tratamiento de la clula con frmacos fragmentador de microtbulos puede afectar
gravemente la ubicacin de los orgnelos membranosos, en particular del complejo de Golgi, este
complejo casi siempre se localiza cerca del centro de la clula justo fuera del ncleo. El tratamiento de
la clula con nocodazol o colchicina puede dispersar los elementos de Golgi hacia las regiones
perifricas de la clula, cuando se elimina el frmaco y los microtbulos vuelven a ensamblarse las
membranas de Golgi regresan al centro de la clula.

Microtubulos como agentes de motilidad intracelular
Las clulas vivientes muestran intensa actividad conforme las macromolculas y los organelos se
desplazan dirigindose de un sitio a otro, con el microscopio de luz se puede apreciar este ir y venir
de partculas materiales dentro de una clula viviente pero el proceso subyacente rara vez resulta fcil
de estudiar por la falta de un citoesqueleto altamente ordenado en la mayor parte de los tipos de clula
por ejemplo, se sabe que el transporte de vescula de un compartimiento de la membrana a otro
depende de la presencia de microtubulos, porque la interrupcin de estos elementos citoesqueleticos
con frecuencia detiene el movimiento. Se han aislado dos tipos de protenas motoras encargadas de los
movimientos de materiales citoplasmticos.
Cinesinas
En 1985 se asilo unas protenas motoras del axon gigante de calamar implicada en el desplazamiento de
vesculas membranosas y otros organelos desde el cuerpo celular hacia las terminales sinpticas. A esta
protena se le dio el nombre de cinesina, es una protena grande compuesta de varios dominios distintos
incluyendo un par de cabezas globulares que actuando como motores generadores de fuerza y una cola
en forma de abanico que se enlaza a la carga que debe arrastrar. La cinesina no es ms que un miembro
de una superfamilia cada vez ms extensas de protenas parecidas a cinesina, las cabezas o dominio
motor de las protenas parecidas a cinesinas tienen una secuencia semejante que refleja la similitud de
su papel en el desplazamiento a lo largo de los microtbulos, en tanto que las colas tienen secuencias
diversas, lo que indica la variedad de cargas que estas protenas pueden arrastrar.
Las rutas seguidas por las vesculas citoplasmticas son definidas principalmente por microtbulos. La
cinesina tiene una participacin muy importante como agente generador de las fuerzas que impulsan el
movimiento de estas vesculas. La cinesina tambin se relaciona con el movimiento de vesculas
109
derivadas del RE, endosmas, lisosomas y grnulos secretorios, en la mayor parte de las clulas los
microtbulos se organizan con sus extremos positivos situados fuera del centro de la clula, de modo
que la cinesina tiende a desplazar vesculas y organelos hacia afuera en direccin a la membrana
plasmtica de la clula.
Dineinas citoplasmticas
La primera protena motora relacin con los microtbulos se descubri en 1963 como causante del
movimiento en cilios y flagelos. A esta protena se le denomino dineina, de inmediato se sospech la
existencia de la forma citoplasmtica pero transcurrieron ms de 20 aos antes de purificar y
caracterizar una protena semejante a dineina en el tejido cerebral de mamferos. Pronto se
identificaron protenas relacionadas en gran variedad de clulas no nerviosas e igual que la cinesina en
la actualidad se cree que la dineina citoplasmtica, como se le denomino, es una protena motora ubicua
en clulas eucariotas.
La dineina citoplsmica es una protena enorme (peso molecular mayor de un milln de daltons)
compuesta de cadenas de polipptidos. La molcula contiene dos grandes cabezas globulares que actan
como motores generadores de fuerza. Ensayos de motilidad in Vitro indican que, en contraste con la
cinesina, la dineina citoplasmtica se mueve a lo largo del microtbulo hacia el extremo menos del
polmero. Las pruebas sugieren cuando menos 2 papeles para la dineina citoplasmtica:
1. Agente generador de fuerza para el movimiento de cromosomas durante la mitosis.
2. Motor dirigido al extremo menos del microtbulo para mover vesculas y orgnelos membranosos a
travs del citoplasma.
Se cree que en clulas nerviosas la dineina citoplasmtica participa en el movimiento retrogrado de
orgnelos citoplasmticos, sea, desplazamiento hacia el cuerpo celular de la neurona. En la clula
fibroblastica la dineina citoplasmtica quizs arrastre orgnelos, incluyendo vesculas de Golgi,
ribosomas y endosomas, hacia el centro de la clula. Segn este punto de vista, tal vez demasiado
simplista la cinesina y la dineina citoplasmtica sirvan para mover materiales similares en direcciones
opuestas sobre la misma red de vas.

Centros organizadores de microtbulos
La funcin de un microtbulo dentro de una clula viviente depende de su localizacin y su orientacin;
por esto es importante entender porque un microtbulo se forma en un sitio y no en otro. La formacin
de microtbulos a partir de los dmeros y -tubulina, ocurre en dos fases distintas; una ms lenta de
nucleacin, en la cual inicialmente se forma una pequea porcin de los microtbulos y una fase ms
rpida de alargamiento. La nucleacin de los microtbulos in Vitro ocurre junto con otras estructuras
especializadas que debido a su papel en la formacin de los microtbulos se denominan centros
organizadores de microtbulos (COMT).

Centrosomas
En clulas animales, los microtbulos del citoesqueleto de ordinario se forman junto con el centrosoma
estructura compleja que contiene dos centrolos en forma de barril rodeado por un material
peristrional electrnicamente denso y amorfo. Los centrolos son estructuras cilndricas de casi 0.2 nm
de dimetro y generalmente casi el doble de largo. Con muy pocas excepciones los centrolos contiene 9
fibrillas regularmente espaciadas, en seccin transversal cada una aparece como una banda de tres
microtbulos designados tbulos A, B y C conectados al centro del orgnelos mediante un rayo radial.
110
Solo el tbulo A esta completo, cada banda de tres microtbulos se inclina en ngulo con la superficie
de la estructura, dando a los centrolos un aspecto caracterstico de rehilete. Los centrolos casi
siempre se encuentran en pares, con los miembros de la pareja situados en ngulo recto entre s.
Tpicamente el centrosoma se sita cerca del centro de la clula justo por fuera del ncleo. El examen
cuidadoso de cortes efectuados a travs de la regin de centrosoma muestra que es sitio donde
convergen numerosos microtbulos.

Corpsculos basales y otros centros organizadores de microtbulos
Los centrosomas no son los nicos COMT en la clulas, por ejemplo, los microtbulos que forman las
fibras de un cilio o de un flagelo se originan de una estructura denominada corpsculo basal, residente
en la base de la estructura en fase de prolongacin. Los corpsculos bsales tienen estructura idntica
a la de un centrolo y de hecho los corpsculos bsales y los centrolos pueden originarse entre s.
El flagelo de un espermatozoide, por ejemplo se forma a partir de un corpsculo basal derivado de un
centrolo que fue parte del uso meiotico del espermatozoito del cual se origin el espermatozoide.

Propiedades dinmicas de los microtbulos
Aunque los microtbulos morfolgicamente parecen muy similares, cualquiera que sea su localizacin
dentro de la clula, hay diferencias notables e inestabilidad de estos polmeros. Los microtbulos del
uso mittico o del citoesqueleto son sumamente lbiles, sea, susceptibles de destruccin. Los
microtbulos de neuronas maduras son mucho menos lbiles, en tanto que los de cilios y flagelos son
muy estables.
Las clulas vivientes pueden someterse a gran variedad de tratamientos que provocan desensamblado
de los microtbulos citoesqueleticos sin interferir con la mayor parte de las otras estructuras
celulares. Estos tratamientos incluyen temperaturas fras, presin hidrulica, concentracin elevada de
Ca
2
y ejemplo de varias sustancias qumicas, incluyendo colchicina, vinblastina, vincristina, nocodasol y
podofilotoxina. El frmaco taxol interrumpe las actividades dinmicas de los microtbulos por un
mecanismo muy diferente; se enlaza al polmero del microtbulo y evita su desensamblado.
111
La labilidad de los microtbulos refleja que son polmeros originados por asociaciones no covalentes de
los bloques dimericos de construccin. Los tratamientos mencionados antes destruyen causando su
despolimerizacin. Esta facilidad para despolimerizarse revela el potencial de los microtbulos del
citoesqueleto de una clula viviente para sufrir cambios dinmicos en su estado de organizacin
estructural. Los microtbulos del citoesqueleto en general estn sujetos a despolimerizacin y
repolimerizacin conforme cambian las necesidades de la clula de un momento a otro. Este ciclo de
desensamblado y reensamblado puede observarse fcilmente en clulas cultivadas.

Factores que influyen en el ensamblado y desensamblado
Los primeros estudios in Vitro establecieron que se requiere GTP para el ensamblado de microtbulos.
El ensamblado de los dmeros de tubulina requiere la unin de una molcula de GTP a la subunidad -
tubulina. No se necesita la hidrlisis de ATP para la verdadera incorporacin del dmero al extremo de
un microtbulo, ms bien el GTP se hidroliza a GDP poco despus que el dmero se incorpora al
microtbulo y entonces el GDP permanece enlazado al polmero ensamblado. Cuando un dmero de un
microtbulo se libera durante el desensamblado y entra a la reserva soluble, el GDP intercambiable es
sustituido por un GTP, este intercambio de nucletidos recarga el dmero y le permite servir una y
otra vez como bloque de construccin para n microtbulos.

El ensamblado de un microtbulo requiere la hidrlisis de GTP y por lo tanto no es una actividad celular
sin costo Por qu evoluciono una vida de polimerizacin tan costosa? la respuesta ms probable es que
permite a una clula controlar la velocidad de reacciones opuestas, ensamblado y desensamblado, de
manera independiente. Un dmero que se va aadiendo a un microtbulo se encuentra enlazado a GTP,
en tanto que el dmero que se libera del microtbulo se halla unido al GDP. Estos dos tipos de
subunidades poseen conformacin diferente y por lo tanto distinta afinidad para otras subunidades del
microtbulo. Los dmeros de tubulina y GTP muestran mayor afinidad entre s que los dmeros de
tubulina y GDP, como resultado sera de esperar que la presencia de tubulina y GTP en el extremo de un
protofilamento favoreciera la fijacin de otra tubulina y GTP en tanto que la presencia de un dmero de
tubulina y GDP en esa posicin favorecera su liberacin del microtbulo. Recordemos que la hidrlisis
112
de GTP se retrasa un poco respecto de la incorporacin de la subunidad, por lo tanto durante momentos
de rpido crecimiento de microtbulos, los dmeros de tubulina se aaden con mayor rapidez que la
hidrlisis de su GTP. La presencia de una cubierta de dmeros de tubulina y GTP de alta afinidad en los
extremos de los protofilamentos debe favorecer la adiccin de ms subunidades y el crecimiento de
microtbulos. En contraste cuando la velocidad de hidrlisis de GTP conserva el paso con la tasa de la
adiccin de subunidades, se favorece el encogimiento del polmero en vez de su crecimiento. El
acortamiento de los microtbulos puede ocurrir con notable rapidez, lo que permite a una clula
desensamblar su citoesqueleto microtubular a gran velocidad y anticiparse a un cambio en actividad
biolgica.

Cilios y flagelos
Quien quiera que observe una gota de agua del estanque con un microscopio e intente evitar que un
protozoario se aleje nadando del campo del microscopio, apreciara la actividad de cilios y flagelos.
Cilios y flagelos son estructuras mviles en forma de pelos proyectados desde la superficie de gran
variedad de clulas eucariotas. Tambin las bacterias poseen estructuras conocidas como flagelos pero
los flagelos de los procariotas son simples filamentos sin relacin evolutiva con su contraparte de
clulas eucariotas.
Cilios y flagelos son dos versiones de la misma estructura que pueden distinguirse mejor por su patrn
de movimiento. Un Cilio por lo general debe de compararse con un remo cuando la clula se mueve en
direccin perpendicular al propio cilio. Durante su latido de potencia el cilio se mantiene en estado
rgido, conforme empuja contra el medio que lo rodea. En su latido de recuperacin el cilio se toma
flexible y ofrece poca resistencia al medio. Los cilios tienden a presentarse en gran nmero sobre la
superficie de una clula y de ordinario su actividad est coordinada en organismos multicelulares, los
cilios se utilizan para desplazar lquido, partculas materiales a travs de diferentes conductos por
ejemplo en el hombre el epitelio ciliado que reviste el conducto respiratorio impulsa hacia afuera de los
pulmones el moco y los desperdicios atrapados.

En condiciones tpicas, los flagelos son ms largos que los cilios y se presentan en menor nmero sobre
la superficie de una clula, a diferencia de los cilios el latido de los flagelos es ondulatorio con varias
ondas presentes a cada momento a lo largo de cada flagelo. El latido de un flagelo genera una fuerza
que impulsa hacia adelante o arrastra una clula en direccin paralela en direccin longitudinal del
flagelo. En organismos multicelulares los flagelos se presentar principalmente en la cola del
espermatozoide donde su movimiento impulsa a la clula productiva hacia la superficie del ovulo.

Estructura de cilios y flagelos.
Una microfotografa electrnica de la seccin transversal de un cilio o de un flagelo es una de las
imgenes ms familiares en biologa celular. Toda la extensin del cilio o del flagelo est cubierta por
una membrana que se contina con la membrana plasmtica de la clula. El centro del cilio denominado
axonema consta de 9 microtbulos perifricos doble. Todos los microtbulos del axonema tienen la
113
misma polaridad: su extremo ms se encuentra en la punta de la prolongacin y su extremo menos en la
base. Cada doblete perifrico consta de un microtbulo completo. La estructura bsica del axonema
fue descrita por primera vez en 1954 por Don Fawcetr y Ketth Porter, de la universidad de Harvard.
Conforme la resolucin del microscopio electrnico aumentaba, algunos elementos menos evidentes se
hicieron visibles. Se observaron tbulos centrales incluidos dentro de prolongaciones que forman la
parte central, conectada a los tbulos A de los dobletes perifricos mediante un conjunto de rayos
radiales. Los dobletes se conectan entre s por un puente nter doblete compuesto de una protena
elstica, la nexina. De particular importancia fue la observacin de que un par de brazos, un brazo
externo y un brazo interno se proyectan desde el tbulo A en direccin antergrada (cuando se observa
el cilio desde la base hacia la punta). Un corte longitudinal, sea una seccin del axonema paralela a su
eje longitudinal, revela la naturaleza continua de los microtbulos y la naturaleza discontinua de los
otros elementos: los rayos radiales por ejemplo ocurren tpicamente en grupos de tres repetidos
cuando mucho a 96nm.

Filamentos intermedios
Durante muchos aos el microscopio electrnico revelo la presencia de gran nmero de clulas con
filamentos slidos no ramificados de superficie lisa y un dimetro de 10 nm intermedio entre los
microtbulos y los microfilamentos. Dadas las dimensiones relativas de estas estructuras se les
denomino filamentos intermedios (FI). Los filamentos intermedios se ramifican a travs del Citoplasma
de gran variedad de clulas animales y con frecuencia muestran un patrn espacial semejante a
microtbulos con los cuales pueden conectarse, hasta ahora, los filamentos intermedios solo se han
identificado con certeza en clulas animales.
A diferencia de microfilamentos y microtbulos, los FI son un grupo de estructuras qumicas
heterogneas codificadas en el ser humano cuando menos por 60 genes diferentes. Con base en su
distribucin en los tejidos, tambin segn criterios bioqumicos, genticos e inmunolgicos, las
subunidades del polipptido de los FI se pueden dividir en 6 clases principales. La mayor parte de los
polipptidos, si es que todos, comparten disposicin similar de dominios que les permite formar
filamentos muy parecidos. Los ms notable es que cada polipptido, contiene un dominio central alfa -
helicoidal en forma de barra de longitud similar y secuencia homologa de aminocidos. Este dominio
posee a cada lado dominios globulares de tamao y secuencia variable. Dos de estos polipptidos
interactan espontneamente conforme sus barras alfa-helicoidales se entrelazan en una bobina
enrollada para formar un dmero parecido a una cuerda de 45 nm de longitud aproximadamente. Los dos
polipptidos se alinean paralelos entre s con la misma orientacin, por lo que el dmero presenta
polaridad con un extremo definido por el C Terminal de los polipptidos y el extremo opuesto por el N
Terminal.
114

Ensamblado y desensamblado de filamentos intermedios.
A diferencia de los microtbulos y microfilamentos que se ensamblan siguiendo una sola va, los
filamentos intermedios al parecer puede formarse en varias vas encargadas de sintetizar filamentos
de espesor y numero de subunidades variables. Adems el ensamblado de los FI no se acompaa de
nucletidos. Se cree que la unidad bsica de ensamblado es un tetrmero formado por los dmeros que
permanecen alienados lado a lado en disposicin escalonada con sus extremos N y C terminales
apuntando en direccin opuesta (antiparalela), puesto que los dmeros apuntan en direccin opuesta, el
tetrmero carece de polaridad. Los tetrmeros se renen en ambos lados y ambos extremos para
forman intermediarios mal descritos que se ensamblan para formar el filamento final, como bloques de
construccin tetramericos carecen de polaridad, lo mismo ocurre con el filamento ensamblado, otra
caracterstica que distingue a los filamentos intermedios de otros elementos citoesqueleticos.

Tipos y funciones de los filamentos intermedios
Los filamentos intermedios observados en clulas epiteliales (incluyendo clulas epidrmicas,
hepatocitos, y clulas acinares pancreticas) se componen de 2 tipos de queratina. Tipo 1 acida y tipo 2
neutra y bsica. Se han identificado unos 15 miembros de cada tipo de queratina. Los filamentos
intermedios queratinizados siempre constan de heterodimeros que contienen un miembro de cada tipo
de polipptido de queratina. Los filamentos de queratina de las clulas epiteliales forman una elaborada
red semejante a una canasta que rodea al ncleo y se ramifica a travs del citoplasma. Muchos
filamentos terminan en placas citoplsmicas de los desmosomas y hemidesmosomas que fijan estas
clulas y a la membrana basal subyacente.
Adems de microtbulos y microfilamentos, el citoplasma de las neuronas se encuentra lleno de haces
de filamentos intermedios laxamente empacados cuyos ejes largos se orientan en forma paralela al
axn de la clula nerviosa, a estos filamentos intermedios o neurofilamentos como se les denomina se
componen de por lo menos 3 tipos distintos de protenas (NF-L, NF-H y NF-M, todas del grupo tipo 4)
que se copolimerizan para forman el filamento intacto, esta red de neurofilamentos tal vez constituya
el principal componente del armazn estructural que apoya a los largos axones de una extensa neurona
mielinizada.
Los intentos para demostrar las funciones de los diferentes tipos de filamentos intermedios no siempre
han sido satisfactorios. En algunos de los primeros estudios, se inyectaron anticuerpos contra protenas
de filamentos intermedios en clulas cultivadas provocando una desorganizacin espectacular de la
115
disposicin normal de los FI sin causar incapacidad fisiolgica o alguna evidencia de las clulas tratadas.
Esta observacin, junto con el hecho de que los filamentos intermedios al parecer estn ausentes en
clulas vegetales, protistas y algunas clulas animales, sugiere que los filamentos intermedios no
participan en procesos esenciales, como la mitosis y la citocinesis. En vez de ello se concluy que los FI
proporcionan estabilidad mecnica a las clulas y realizan funciones especiales en tejidos especficos.
Los recientes esfuerzos para conocer la funcin de los filamentos intermedios se apoyan en salones
manipulados con ingeniera gentica que producen polmeros FI alterados a mayores cantidades que lo
normal. Aunque estos estudios no aclaran, necesariamente el papel preciso de los filamentos
intermedios, ilustran la importancia de estas estructuras para la vialidad de las clulas.

Microfilamentos
Las clulas muestran motilidad notable, por ejemplo la cresta neural de las clulas de un vertebrado
sale del sistema nervioso en desarrollo y atraviesa toda la amplitud del embrin formando productos
tan diversos como las clulas pigmentadas de la piel y el cartlago de las mandbulas. De manera similar,
legiones de leucocitos patrullan los tejidos del cuerpo en busca de desperdicios y microorganismos.
Algunas partes de las clulas muestran igual motilidad en el borde de una herida, amplias prolongaciones
de las clulas epiteliales actan como dispositivos mviles que ayudan a empujar la capa de clulas sobre
la regin daada y sellar la herida. De manera similar, el borde delantero de un axn enva
prolongaciones microscpicas que reconocen el sustrato y guan a la clula hacia un objetivo sinptico.
Todos estos diferentes ejemplos de movilidad comparten cuando menos un elemento comn: dependen
de la presencia de microfilamentos, que es el tercer tipo en importancia de elementos citoesqueleticos.
Los microfilamentos miden cerca de 5 a 7 nm de dimetro y se componen de la protena actina. En 1990
se dio un gran paso en la investigacin del citoesqueleto, cuando Kenneth Colmes y sus colegas del Max
Planck instituto de Alemania, determinaron la estructura tridimensional de la actina del msculo de
conejo a nivel de resolucin atmica mediante cristalografa de rayos X. Cada molcula de actina tiene
la forma de un cacahuate con dos dominios separados por una hendidura profunda y conectados entre s
por una corta seccin o bisagra del eje longitudinal.
En presencia de ATP, estas subunidades de actina o actina G se polimerizan siguiendo un patrn de
cabeza y cola para formar un filamento flexible compuesto de 2 cadenas de molculas de actina
entrelazadas en una doble hlice. Los trminos filamentos de actina, microfilamento y actina F son
todos sinnimos para este tipo de filamento de doble cadena. Puesto que cada subunidad de actina tiene
polaridad y todas las subunidades del filamento de actina apuntan en la misma direccin, el
microfilamento entero tambin tiene polaridad, segn el tipo de clulas y la actividad en la que
participan los filamentos de actina, se pueden organizar en disposiciones altamente ordenadas redes
laxamente definidas o haces apretados.
La actina se identific desde hace ms de 50 aos como una de las principales protenas contrctiles de
la clula muscular. Desde entonces la actina se identifica como una protena principal en casi todos los
tipos de clulas eucariotas observadas. Las especies vegtales y animales evolutivamente elevadas
poseen algunos genes que codifican actina que en conjunto forman una familia de polipptidos
estrechamente relacionados cuyos miembros se especializan en diferentes tipos de motilidad.

La estructura de la actina se ha conservado notablemente en todo el curso de la evolucin, por ejemplo
la presencia de aminocidos de las molculas de actina de clulas de levadura y del msculo esqueltico
de conejo son 88% idnticas. En realidad los filamentos de actina de diversas fuentes pueden
copolimentarse para formar filamentos hbridos.
116

La identificacin de filamentos de actina en determinada clula se puede lograr utilizando una prueba
citoqumica basada en que los filamentos actina, cualquiera que sea su origen, interactan de manera
muy especfica con la protena miosina. Para facilitar la interaccin se fragmenta miosina purificada con
una enzima proteoltica en dos o tres partes una de las cuales (fragmento de meromiosina pesada
(MMP) o su subfragmento S1 ms pequeo) se enlaza a las molculas de actina a todo lo largo del
microfilamento. Adems de identificar los filamentos que contienen actina, la MMP o los fragmentos S1
se enlazan de modo que revelan la polaridad del filamento. El extremo de microfilamento al cual se fijan
los fragmentos de miosina tiene aspecto puntiagudo, y el otro externo presenta pas.
Ensamblado y desensamblado de microfilamentos
Los monmeros de actina deben enlazarse en un nucletido de adenosina por lo regular ATP, antes de
polimerizarse. El papel de ATP en el ensamblado de la actina es similar al del GTP en el ensamblado de
microtbulos. El ATP relacionado con monmeros de actina se hidroliza a ADP en algn momento luego
de su incorporacin al filamento de actina en crecimiento. Por consiguiente, cuando las clulas estn
ensamblando filamentos de actina a gran velocidad, el extremo del filamento contiene un casquete de
subunidades actina- ATP que impide el desensamblado del filamento y favorece su ensamblado continuo.
En el tubo de ensayo es fcil lograr la polimerizacin y despolimerizacin de filamentos de actina, por lo
que las condiciones que favorecen el ensamblado y desensamblado de microfilamentos es un proceso
bien comprendido.

Miosina: molcula motora de los filamentos de actina
Anteriormente se examin la estructura y acciones de dos motores moleculares: cinesina y dineina, que
operan sobre vas en los microtbulos. Hasta ahora todos los motores conocidos que operan junto con
los filamentos de actina son miembros de la superfamilia miosina. Inversamente, la nica funcin
conocida de la miosina es actuar como sistema generador de fuerza en presencia de actina. Todas las
miosinas estudiadas se mueven hacia el extremo ms de los microfilamentos. Falta por determinar si las
clulas contienen o no motores moleculares que se muevan hacia el extremo menos del microfilamento.

117
La miosina se aisl por primera vez del tejido muscular esqueltico de mamferos y posteriormente de
gran variedad de clulas eucariotas, incluyendo protozoarios vegetales evolutivamente elevados, clulas
no musculares de animales y tejido muscular cardiaco y liso de vertebrados. Las miosinas por lo general
se dividen en dos clases: la miosina convencional (tipo II) y la no convencional (tipo I), ambos tipos de
miosina se presentan juntas en muchas clulas eucariotas. Las molculas de tipo II son las mejores
conocidas de los dos tipos.

Miosinas II
Las protenas de tipo miosina II generan fuerzas en diferentes tipos de tejido muscular y tambin en
varias actividades no musculares incluyendo divisin de una clula en dos mediante citocinesis. Cada
molcula de miosina II consta de seis cadenas de polipptido (un par de cadenas pesadas y dos pares de
cadenas ligeras) organizadas para producir una protena altamente asimtrica. Cada molcula contiene
una larga cola en forma de varilla fija a un extremo de dos cabezas bulbosas globulares. La cola est
formada por el entrelazamiento de secciones alfa-helicoidales de las dos cadenas pesadas para formar
una espiral alfa-helicoidal enrollada. La diseccin de la molcula de miosina mediante procedimientos
leves de digestin proteoltica produce varios fragmentos. Los dos sitios susceptibles a proteasas en la
cola son porciones no helicoidales de la cadena pesada que se cree actan como bisagras flexibles que
ayudan en las funciones motoras en la molcula.

Miosina I
En 1973, Thomas Pollard y Edward Korn, de los Nacional Institutes of Health (NIH), de Estados
Unidos, describieron una protena similar a miosina extrada del protozoario Acanthamoeba. A
diferencia de las miosinas convencionales esta miosina ms pequea slo tiene una cabeza y es incapaz
de formar filamentos por polimerizacin in vitro. Desde entonces se aislaron en varios tipos de clulas
otras miosinas de una sola cabeza y dominios de cola muy variables que se agruparon para formar la
miosina clase I. Las protenas de la miosina I consta de una sola cadena pesada y una o ms cadenas
ligeras. Igual que las miosinas II la miosina I puede generar in vitro un movimiento dependiente de ATP
a lo largo de filamentos de actina. El mejor conocimiento de la funcin de las miosinas clase I proviene
de estudios efectuados en clulas manipuladas por ingeniera gentica del moho del fango
Dictyostelium, cuyo nico gen misiona II se pude borrar o suprimir funcionalmente. Las clulas tratadas
de esta manera solo expresa miosina I, pero tienen capacidad de locomocin y fagocitosis normales, sin
embargo, estas clulas no pueden dividirse, puesto que la separacin del citoplasma en dos partes
(citocinesis) depende de manera estricta de miosina II.
Los anticuerpos fluorescentes contra miosina I tienden a localizarse cerca de la membrana plasmtica,
lo que apoya la hiptesis de que estas molculas de miosina de una sola cabeza generan fuerzas a nivel
de la superficie de la clula. La miosina I tambin se encuentra asociada a orgnelos membranosos y se
cree que es la protena motora que desplaza vesculas citoplsmicas a lo largo de vas constituidas por
microfilamentos.

ORGANELOS CELULARES
RIBOSOMAS
El proceso de sntesis de protenas, conocido tambin como traduccin de la informacin gentica, se
lleva a cabo en las clulas de los organismos en una maquinaria biolgica universal muy compleja, llamada
118
en su conjunto aparato traductor. Este proceso involucra una serie de reacciones que permiten la
decodificacin de la informacin gentica contenida en las molculas de los transcritos o ARN
mensajero (ARNm), correspondientes a cada protena que va a ser sintetizada. Participan en este
proceso enzimas, cofactores proteicos y no proteicos, molculas de ARN de transferencia, los
transcritos y los RIBOSOMAS estos ltimos constituyen la parte central del aparato traductor. Los
mecanismos necesarios para ordenar a los ARN de transferencia (ARNt) a lo largo del ARNm son algo
complicados. Requieren de los ribosomas, cuya primera tarea es localizar el codn de iniciacin en el
extremo 5 del ARNm y acomodarlo de modo tal que el encuadre para la lectura de los siguientes
tripletes sea el adecuado. Luego el ribosoma se desliza hacia el extremo 3 del ARNm, traduciendo esos
tripletes en aminocidos, los cuales uno por vez son trados por los respectivos ARNt. Las reacciones
que ligan a los aminocidos entre s (uniones peptdicas) tienen lugar tambin en el ribosoma. Cuando el
ribosoma arriba al codn de terminacin (en el extremo 3 del ARNm) cesa la sntesis proteica y la
protena es liberada. Como puede apreciarse, en las clulas los ribosomas constituyen las fbricas de
las protenas.

Biognesis de los componentes del ribosoma.
Una clula tpica contiene millones de ribosomas en su citoplasma. En un eucarionte, las subunidades
ribosmicas se forman en el nuclolo dentro del ncleo por la asociacin de ARN ribosmico (ARNr)
recin transcriptos con las protenas ribosmicas, que han sido transportadas hacia el ncleo despus
de su sntesis en el citoplasma. Una observacin importante confirmo la relacin del nuclolo con la
sntesis de ribosomas. Por consiguiente, el nuclolo ms que un orgnulo puede considerarse una
estructura temporal, expresin morfolgica de la transcripcin del ARNr. Su presencia y actividad van
estrechamente unidas a la necesidad de ribosomas en la clula y por tanto, a la fabricacin de
protenas.
Los genomas procariticos o eucariticos contienen copias mltiples de genes de ARNr. La combinacin
de un gran nmero de copias y promotores fuertes para los genes de ARNr es lo que le permite a las
clulas mantener niveles elevados de ribosomas. En los eucariontes, estos genes estn en el nuclolo
formando racimos, y es ah en donde se efecta el procesamiento del ARNr y el ensamblaje de las
protenas ribosomales para generar a las subunidades ribosmicas las cuales son luego exportadas al
citoplasma para tomar parte en la sntesis de protenas. La formacin de los ARNr maduros se produce
por procesamiento de los transcritos primarios de elevado peso molecular. Los genes que codifican para
los ARNr son colinealmente transcritos dando lugar a molculas de pre-ARNr las cuales son procesadas
para dar origen a las distintas molculas maduras de ARNr.
A diferencia de los genes para los ARNr los que codifican para las protenas ribosomales se encuentran
en unas muy pocas copias en el genoma. Por tanto, los mecanismos que regulan su expresin son tambin
diferentes. La coordinacin de la sntesis de las molculas de protenas ribosomales entre si se logra a
travs de regulacin tanto a nivel transcripcional como postranscripcional. En eucariontes la sntesis de
las protenas ribosomales tambin se regula a nivel traduccional. Los ARNm que codifican para las
protenas ribosomales (pre ARNm) de eucariontes contienen una secuencia peculiar de nucletidos ricos
en pirimidinas en la zona 5 no traducible de sus mensajes.
119

Estructura de los ribosomas
Cada ribosoma est compuesto por dos subunidades identificadas con las siglas 40S y 60S. Estos
nmeros hacen referencia a sus coeficientes de sedimentacin, es decir, a las velocidades con que las
subunidades sedimentan al ser ultracentrifugadas (la subunidad 60S, por la accin de la fuerza
centrfuga, migra ms rpidamente haca el fondo del tubo). Las subunidades 40S y 6OS, juntan formas
la unidad 80S, es decir un ribosoma completo. Cada subunidad ribosmica se halla integrada por una o
ms molculas de ARNr, ms un determinado nmero de protenas. As, la subunidad 40S contiene el
ARNr 18S ms 33 protenas, mientras que la subunidad 60 S se integran con los ARNr 28S, 5,8S y 5S
ms 50 protenas. Dado que las 83 protenas ribosmicas son construidas a partir de sus respectivos
ARNm, puede decirse que en la formacin del ribosoma intervienen 85 genes (83 corresponden a las
protenas, uno al ARNr 45S y otro al ARNr 5S)

El ensamblaje de las protenas ribosmicas con los ARNr tiene lugar en el nuclolo, de modo que estas
protenas sintetizadas en los ribosomas citoslicos deben primero ingresar en el ncleo y luego, como
integrantes de las subunidades ribosmicas, volver al citoplasma. Las protenas de la subunidad menor
se denominan S1, S2, S33 (S por small) y las de la subunidad mayor L1, L2..., L50 (L por large).
Cada ARNr exhibe varias asas a lo largo de su molcula debido al aparcamiento de determinadas
secuencias complementarias de nucletidos existentes en la propia molcula. Por consiguiente en
algunos tramos de los ARNr se forman dobles hlices semejantes a los del ADN. Estos apareamientos
tienen por funcin establecer la configuracin tridimensional de los ARNr, al permitir que sus partes
puedan combinarse adecuadamente con las protenas ribosmicas.

En la subunidad 40S la disposicin de algunas protenas da lugar a la formacin de dos reas especiales,
una al lado de la otra, denominadas sitio P (por peptidil) y sitio A por (aminoacil). Adems en la
subunidad mayor se da la formacin de un tnel por el cual saldra la cadena polipeptdica a medida que
se sintetiza.
Las unidades ribosmicas se reparten el trabajo llevado a cabo por los ribosomas. As, la subunidad
menor coloca a dos ARNt consecutivos cerca del ARNm para su mutua ligazn, mientras que la
subunidad mayor cataliza las uniones peptdicas y asiste a los factores que actan en los distintos pasos
de la sntesis proteica. Es posible que la funcin cataltica de la subunidad mayor est en manos de
algunos de sus ARNr y no de sus protenas.
Cada ARNm suele traducirse no por uno sino por varios ribosomas a la vez, los cuales se deslizan por su
molcula siguiendo la direccin 5 3, en fila india, separados unos de otros por una distancia de
120
alrededor de 30 codones. Tales asociaciones que son claramente detectables en las imgenes ultra
microscpicas, se denomina polirribosomas.
Los ribosomas pueden encontrarse libres en el citosol o asociados a las membranas del retculo
endoplasmtico. En el primer caso elaboran protenas destinadas al ncleo (por ejemplo, histonas,
protenas ribosmicas, factores de transcripcin, etc.), a las mitocondrias, a los peroxisomas o al
propio citosol. En el segundo caso, las protenas son volcadas en el interior del retculo endoplasmtico o
retenidas en su membrana y pueden permanecer en este orgnelos o ser transportadas por medio de
vesculas de transporte al complejo de Golgi, desde donde pasaran a los lisosomas; a la membrana
plasmtica o bien sern secretadas al exterior.

BIOSNTESIS DE PROTEINAS.
La expresin de la informacin gentica es el proceso de interpretacin de la informacin gentica
contenida en el ADN, cuya expresin se manifiesta en forma de polipptidos a travs de una serie de
mecanismos complejos a nivel intracelular. Desde el punto de vista bioqumico, es un proceso anablico
en el que a partir de aminocidos se construyen grandes macromolculas llamadas protenas. La sntesis
de protenas, etapa final de la expresin gnica, es un proceso importante porque estas son molculas
indispensables para la vida. Las protenas se encuentran constituyendo el coloide celular, el
citoesqueleto, los orgnelos citoplasmticos, las membranas celulares y la sustancia intercelular.
Existen protenas conocidas como enzimas que son importantes como aceleradores de las reacciones
qumicas a nivel celular, cualquier alteracin en su sntesis involucra problemas fisiolgicos que conllevan
a la muerte celular, o alguna insuficiencia en el ser vivo.
La sntesis de las protenas puede dividirse en tres etapas, llamadas de iniciacin, de elongacin y de
terminacin.
La etapa de iniciacin es regulada por la presencia de ciertas protenas denominadas factores de
iniciacin (IF), que dan lugar a dos hechos separados pero concurrentes, uno en el extremo 5 del ARNm
y otro a nivel de la subunidad menor del ribosoma. El primero involucra al cap y a una secuencia de
nucletidos aledaa, localizada entre el cap y el codn de iniciacin. Estas estructuras son reconocidas
por el factor IF4, con el cual se ligan. En el segundo, el metionil-ARNt, junto a un GTP, se une a la
subunidad menor del ribosoma, participando en esta reaccin el factor IF2.
Logrados ambos acondicionamientos, interviene el factor IF3, que adosa el extremo 5 del ARNm a una
de las caras de la subunidad menor del ribosoma. Esta subunidad, tras deslizarse por el ARNm unos
cuantos nucletidos, ayuda al anticodn UAC del metionil-ARNt a localizar el codn AUG de iniciacin.
El metionil ARNt se detiene luego de producirse un correcto encuadre entre los tripletes
complementarios del codn y el anticodn.
121

Como consecuencia, el codn de iniciacin queda acomodado en el sitio P de la subunidad menor y el
segundo codn del ARNm queda invariablemente ubicado en el sitio A de dicha subunidad, al lado del
sitio P. La etapa de iniciacin culmina al combinarse la subunidad mayor del ribosoma con la menor para
formar un ribosoma completo. Entre las citadas subunidades quedan encerrados los dos primeros
codones del ARNm, el AUG de iniciacin unido al metionil-ARNt en el sitio P y el segundo codn en el
sitio A.
La etapa de elongacin comienza al acercarse otro aminoacil-ARNt ste compatible con el segundo
codn del ARNm, con el cual se une al sitio A. Al quedar ambos aminoacil-ARNt cerca, el aminocido
situado en el sitio P (una metonina), al tiempo que se desacopla del metionil-ARNt, se liga mediante una
unin peptdica al aminocido ubicado en el sitio A. Se forma de este modo un dipeptidil-ARNt, que
permanece ubicado en el sitio A. Su permanencia en ese sitio es breve, entre tanto, fuera del ribosoma,
esperando para ingresar, se encuentra el tercer codn del ARNm, al que se le ligar el correspondiente
aminoacil ARNt. Esta reaccin es mediada por un factor de elongacin llamado EFl y consume energa,
que es aportada por una molcula de GTP. De inmediato el ARNm se desplaza en direccin de su
extremo 5, por un proceso llamado translocacin. Lo hace mediante el factor de elongacin EF2, que
consume la energa aportada por otro GTP. El corrimiento del ARNm hace que el codn de iniciacin sea
desalojado del sitio P y por consiguiente del ribosoma, el segundo codn se mude del sitio A al sitio P y
el tercer codn ingrese al sitio A vacante. Lgicamente, el corrimiento de los codones desplaza tambin
a los respectivos ARNt, por lo que el ARNt sale del ribosoma no tarda en desprenderse del codn de
iniciacin, el dipeptidil-ARNt pasa al sitio P y el tercer aminoacil ARNt se acomoda en el sitio A.

El paso siguiente comprende la formacin de una nueva unin peptdica, esta vez entre el dipptido
previo desacoplamiento del dipeptidil ARNt y el aminocido del tercer aminoacil ARNt. Tal unin da
122
lugar a un tripeptidil-ARNt, que permanece en el sitio P hasta la prxima translocacin de ARNm. Los
procesos arriba citados se repiten en forma consecutiva codn tras codn, formndose en el cuarto
paso un tetrapeptdil-ARNt y luego peptidil-ARNt cada vez ms largos, que se translocan del sitio A al P
conforme se suceden las uniones peptdicas. Se calcula que en promedio se agregan a la cadena
peptdica unos 5 aminocidos por segundo.
Debido a que con cada translocacin se corren tres nucletidos del ARNm, el extremo 5 de ste se
aleja progresivamente del ribosoma y su extremo 3 se acerca a l en igual medida. Cuando el extremo
5 del ARNm se ha alejado unos 90 nucletidos del ribosoma, en torno del codn de iniciacin se
establece un nuevo ribosoma, y con l se da el inicio de la sntesis de una nueva cadena proteica. Esto se
repite una y otra vez, de modo tal que cuando el primer ribosoma formado se halla en las cercanas del
extremo 3 del ARNm, toda la molcula del ARNm, cada 90 nucletidos (30 codones), se encuentra
asociada con ribosomas. Este complejo cuyo largo depende de la longitud del ARNm, recibe como vimos
el nombre de poliribosoma.
La sntesis de la protena culmina cuando el ribosoma es alcanzado por el codn de terminacin del
ARNm (UAA, UGA UAG, indistintamente), lo cual deja al sitio A vaco, sin el esperado aminoacil-ARNt,
aunque pronto es ocupado por un factor de terminacin (TF). Ante la ausencia del aminoacil-ARNt el
polipptido del peptidil-ARNt, situado en el sitio P se despliega del ARNt y se une, para formar su
carboxilo libre, a una molcula del H
2
O. Ello hace que el polipptido, la protena se independice del
ARNm y entonces se libere del ribosoma. Las subunidades 40S y 60S de ste se separan y pasan al
citosol, donde integran un fondo comn que abastece de subunidades ribosmicas al sistema para
continuar formando ribosomas y con ello nuevas cadenas proteicas, en el extremo 5 del mismo ARNm o
de otro que se est traduciendo.

Como vemos, el nmero de ribosomas en el poliribosoma, es decir, el nmero de lugares en los que tiene
lugar la sntesis proteica, se mantiene relativamente constante, ya que a medida que unos ribosomas se
retiran del extremo 3 del ARNm, otros se ensamblan en su extremo 5. Esta sntesis continuada de una
protena a partir de un mismo ARNm, por el trabajo simultneo de varios ribosomas es interrumpida, en
el momento que corresponde, por la accin de factores reguladores.
Varias veces hemos dicho que la traduccin del ARNm se produce en direccin 5 - 3 y que el
aminocido determinado por el codn de iniciacin, en el extremo 5 del ARNm, es una metionina,
portadora, como es lgico, del grupo amino libre de la cadena proteica en formacin. Esta metionina
usualmente es removida, por lo que el segundo aminocido pasa a la primera posicin. En el extremo
opuesto de la protena se encuentra el aminocido que lleva el grupo carboxlico libre de la cadena
proteica, determinado por el triplete previo al codn de terminacin, en el extremo 3 del ARNm. Surge
de estos datos que en las uniones peptdicas que tienen lugar en el ribosoma, el grupo carboxlo es
seguido por la cadena peptdica en crecimiento (ubicada en el sitio P) y el grupo amino por el aminocido
del aminoacil-ARNt (ingresado al sitio A)
Las uniones peptdicas, as como las restantes reacciones qumicas producidas durante las tres etapas
de la sntesis proteica, son catalizadas por la actividad enzimtica de algunos componentes de la
123
subunidad ribosmica mayor, estimndose que son los propios ARNr, y no protenas ribosmica; los que
ejercen esa actividad.

Tericamente, una clula posee los recursos necesarios para sintetizar unas 10.000 protenas distintas.
Emanadas de los ribosomas, tales protenas pueden permanecer en el citosol o tener como destino el
ncleo, las mitocondrias, los peroxisomas o el retculo endoplasmtico. Por ejemplo, las histonas y otras
protenas nucleares deben cruzar los poros nucleares para ingresar en el ncleo; Las enzimas del ciclo
de Krebs deben atravesar las dos membranas de la mitocondria para llegar a la matriz mitocondrial; la
catalasa debe pasar a travs de la membrana del peroxisomas para arribar a su matriz etc.
Respecto de las protenas destinadas al retculo endoplasmatico, para que puedan ser colocadas en la
membrana o en el interior del organoide los ribosomas deben establecer una ntima relacin con l, lo
que da lugar al retculo endoplasmtico rugoso.
Un trfico tan selectivo obliga a las protenas surgidas de los ribosomas excepto las que permanecern
en el citosol a portar alguna seal que las conduzca a los organoides adecuados y estos deben poseer un
receptor especfico que reconozca esa seal. La seal de la protena consiste en una secuencia de unos
pocos aminocidos, denominada pptido seal. De acuerdo con el organelo al cual se dirige y la clase de
protena, sta puede tener un solo pptido seal, unas veces situado en el extremo de su molcula y
otras en medio de ella, o varios de esos ppticos distribuidos a lo largo de la protena.
Como es obvio la presencia de los ppticos sealan derivan de la existencia en los genes y por ende en
los ARNm de secuencias de nucletidos diseadas para tal fin. Apenas las protenas emergen de los
ribosomas, sus tomos tienden a establecer las combinaciones qumicas que dan lugar a la formacin de
las estructuras secundarias y terciarias que las caracterizan. Este proceso se ve facilitado o es
impedido por ciertas protenas citoslicas llamadas chaperonas, de las cuales existen varias familias,
por ejemplo la hsp60, la hsp70 y la hsp90 por heat shock protein (protenas de choque trmico).
Un tema mdico vinculado con la actividad de los ribosomas
El conocimiento del proceso de sntesis de protenas permite en la actualidad, entre otras cosas,
combatir las infecciones bacterianas, se han descubierto muchos antibiticos que bloquean la sntesis
de protenas en las bacterias ocasionando su muerte. Tambin permite entender la expresin de
enfermedades hereditarias.
Al ser invadidas por bacterias, las clulas eucariotas de ciertos organismos inferiores elaboran
sustancias llamadas antibiticos para defenderse de la infeccin. Comnmente los antibiticos logran
sus objetivos interfiriendo la sntesis proteica en los ribosomas de las bacterias, lo que provoca su
muerte. Por ejemplo, afecta el inicio de la traduccin y distorsiona la fidelidad de sta conforme la
cadena proteica se alarga.
La eritromicina impide la translocacin del ARNm. La tetraciclina no permite que los aminoacil- ARNt se
coloquen en el sitio A, la puromicina usurpa el sitio A del ribosoma, de modo que la cadena peptdica se
liga al antibitico en lugar de hacerlo con el correspondiente aminoacil ARNt, y ello interrumpe su
crecimiento. El cloranfenicol directamente impide que se produzcan las uniones peptdicas.
La medicina ha trasladado estos efectos a otros escenarios biolgicos, particularmente el organismo
humano. As, cuando determinadas bacterias lo infectan, stas pueden ser destruidas mediante la
administracin adecuada de antibiticos.
124

Debe advertirse que la puromisina afecta tambin a los ribosomas de las clulas eucariotas de manera
que su uso farmacolgico es muy restringido. Por su parte, eritromicina, la tetraciclina y el
cloranfenicol, si bien interfieren levemente la sntesis proteica en los ribosomas eucariotas citoslicos,
afectan ms a los ribosomas de las mitocondrias, lo cual refleja el origen procaritico de estos
orgnelos.
MITOCONDRIAS
Las mitocondrias son organelos a los que podemos definir como estructuras granulares filamentosas que
se encuentran en el citoplasma de clulas eucariticas. Estos organelos tienen una alta organizacin
estructural, una composicin qumica muy compleja y un gran acumulo de enzimas o coenzimas
responsables de la transformacin de la materia, transformacin que produce la energa necesaria para
las mltiples funciones celulares. Desde el punto de vista funcional, las mitocondrias son organelos
transductores de energa porque es a nivel de ellas donde se va a transformar al conjunto de
metabolitos celulares que provienen de glcidos, lpidos y protenas para poder extraer la energa
almacenada en sus enlaces de Carbono e Hidrogeno y cederla al ADP para sintetizar gran cantidad de
molculas de ATP. En 1,894 ALTMANN las describi por primera vez dndoles el nombre de
BIOBLASTOS, en 1,897 BENDA les dio el nombre de MITOCONDRIAS, en 1,900 MICHAELIS usa
por primera vez el Verde de Janus, un colorante vital para colorear estos organelos. En 1,934 BENSLEY
y HOERR consiguen aislar por primera vez mitocondrias hepticas, lo cual hizo posible el estudio
directo por mtodos bioqumicos para poder interpretar las funciones que cumplen estos organelos en la
clula. En 1,948 HOGEBOOM con el auxilio de tcnicas como la centrifugacin diferencial y el
conocimiento de la cintica enzimtica establece que estos organelos son los responsables de la
RESPIRACION CELULAR.
En aos recientes, con el auxilio de la microscopia electrnica es posible conocer en detalle su
ultraestructura y se tiene la certeza que las mitocondrias constituyen el mayor ejemplo de
integracin estructural y funcional de toda la clula. Esta alta organizacin entre estructura y
funcin se debe a la capacidad que tiene de transformar la materia en energa, propiedad que tal vez
no est presente en otros organelos.
Presenta un ADN especfico (similar en estructura al ADN bacteriano) propio de estos organelos,
igualmente se han aislado ribosomas especficos de 50 S, de menor densidad en comparacin a los
ribosomas del citoplasma que son de 80 S. Se he encontrado ARN y se ha demostrado que el ADN tiene
a capacidad de sintetizar ARN ribosmico y ARN de transferencia; por lo tanto, las mitocondrias se
comportaran como organelos semiautnomos, con capacidad de sintetizar gran parte de sus propias
protenas.
Estos organelos pueden ser observados en clulas cultivadas in Vitro, sobre todo si son observadas en
un campo oscuro, con el uso de la microscopia de contraste de fases. El examn vital se facilita
mediante la coloracin con solucin diluida de Verde De Janus, con la cual, las mitocondrias toman el
color azul verdoso. Esta coloracin se debe a enzimas propias de la mitocondria llamadas OXIDASAS
que mantienen al colorante vital en su forma oxidada (coloreada), mientras que el resto del citoplasma
celular, que se encuentra en forma reducida, reduce al colorante y lo transforma en su leucobase que es
125
incolora. Las mitocondrias pueden ser separadas del resto de las estructuras celulares por medio de
centrifugacin diferencial ya que debido a su gran densidad se van hasta el fondo del tubo, si se hace
un anlisis de ellas, se observa que mantienen su forma y estructura.

Al definir a estos organelos hemos dicho que pueden ser granulares o filamentosos; pero existe una
gran variedad de formas que dependen del estado funcional y tipo de clula que se estudie. La forma
tambin va a depender del tipo de colorante, del pH de los fijadores que se empleen y de la presin
osmtica del medio. Esto quiere decir que la morfologa mitocondrial est sujeta a la influencia de
muchas variables, sin embargo podemos aducir que generalmente son de forma granular, circular o
filamentosa y que adems las hay en forma de Y, coma, L, arrionada, etc.

El tamao tambin vara de acuerdo a la clula que se estudie. Lo que vara mas es la longitud, pues
el dimetro es casi constante. Como promedio, podemos decir que el dimetro vara de 0.5 a 1 micra
y la longitud de 3 a 7 micras. Si quisiramos sealar los dos rangos extremos, podramos decir que
las ms pequeas llegan a medir 3 micras de longitud y las ms grandes 40.
En general el nmero vara de acuerdo al tipo celular y al estado funcional. Existen algunas
levaduras donde la mitocondria es nica pero extremadamente grande y muy ramificada dando la
apariencia de ser ms de una. En un hgado normal se pueden encontrar de 1,000 a 1,600 mitocon-
drias por hepatocito. En algunos ovocitos pueden encontrarse hasta 300,000 mitocondrias, y en una
Ameba hasta 50,000.
El nmero de mitocondrias est en relacin al grado de actividad oxidativa de la clula, esto quiere
decir que, en clulas que cumplen gran funcin metablica existe una gran cantidad de mitocondrias,
no as en clulas que van a transformar poca cantidad de materia. En los tejidos vegetales hay poca
cantidad de mitocondrias, porque son organismos auttrofos, y los cloroplastos son quienes estn
encargados de la transformacin de la materia.
Es un hecho constante que en tejidos cancerosos el nmero de mitocondrias por clula disminuye,
esto puede ser consecuencia del aumento de la gluclisis anaerbica (va glicoltica) y la disminucin
de la respiracin celular que se lleva a cabo en las mitocondrias. En el msculo, despus de la admi-
nistracin repetida de hormona tiroidea (tiroxina), hay un aumento en el nmero de mitocondrias. Lo
mismo sucede en el hipertiroidismo humano.
La distribucin es irregular, las mitocondrias se acumulan preferentemente alrededor del ncleo en el
citoplasma perifrico. Por regla general, se van a disponer en el lugar de la clula donde se requiere
mayor energa. Adems, la distribucin depende de los movimientos citoplasmticos y de la estructura
macromolecular del retculo endoplasmtico y del sistema vacuolar. Durante la mitosis, las
126
mitocondrias se agrupan cerca del huso y otorgan la cantidad suficiente de energa para que se
realicen los movimientos anafasicos de los cromosomas, desde la zona central hasta los polos. Al
dividirse la clula, las mitocondrias se distribuyen en cantidad aproximadamente igual entre las
clulas hijas.

ESTRUCTURA Y ULTRAESTRUCTURA.
Dentro de la mitocondria podemos establecer claramente dos tipos de compartimientos:
a. Compartimiento interno:
Est limitado por la membrana interna y ocupado por la matriz mitocondrial. Es llamado lado M de la
mitocondria.
b. Compartimiento externo:
Es el espacio comprendido o encerrado entre la membrana externa y la membrana interna.
MATRIZ MITOCONDRIAL.
La matriz es un gel denso con alta concentracin de protenas solubles y pequeas molculas, dentro de
la matriz mitocondrial hay pequeos ribosomas y un ADN circular. A veces pueden observarse algunos
grnulos densos que pueden ser de origen lipdico o pueden ser grnulos de vitelo de naturaleza
proteica. Otras veces se encuentran protenas asociadas a Fe que originan la llamada FERRITINA y
grandes cantidades de un complejo de fosfato de calcio, conocido con el nombre de
HIDROXIAPATITA.
MEMBRANAS EXTERNA E INTERNA.
Son de estructura trilaminar y de naturaleza qumica lipoproteca, semejante a la unidad de membrana,
sin embargo, entre ellas se pueden establecer diferencias en cuanto a estructura, composicin qumica
y funcin. La diferencia ms saltante es que la membrana externa es ms rica en lpidos y es lisa,
mientras que la interna es ms rica en protenas y en su superficie interna presenta las partculas
fundamentales.
PARTCULAS FUNDAMENTALES.
Tambin llamadas partculas F1, estn presentes en la membrana interna de la mitocondria. Se
calcula que puede haber de 10
4
a 10
5
partculas por mitocondria, cada una de las cuales presenta
una ATPasa especial que es la responsable del acoplamiento de la Cadena Respiratoria con la
sntesis

de ATP.
CRESTAS MITOCONDRIALES.
Son invaginaciones de la membrana interna a manera de dedos de guante. Su forma, nmero y
disposicin vara segn el tipo celular y al estado funcional de la clula. Las crestas mitocondriales
llenan casi todo el espacio de la matriz, aunque pueden existir zonas de la mitocondria que carezcan
de estas estructuras. Generalmente estas crestas se encuentran orientadas transversalmente,
aunque puedan estar en forma longitudinal, circular y hasta tubular, como es el caso de las crestas
mitocondriales de los parameciums.

COMPOSICION QUMICA.
127
Si queremos representar la concentracin porcentual de los distintos componentes qumicos presentes
en la mitocondria, podemos decir que en ella se va a encontrar:
Agua 66 %
Protenas 22 %
Lpidos 11 %
Iones metlicos y nucletidos 1 %
Protenas.
Entre estas se van a encontrar protenas estructurales y protenas solubles, que seran enzimas
solubles que generalmente se localizan en la matriz mitocondrial. Luego tenemos un conjunto de
protenas insolubles que corresponden a la cadena respiratoria, adems de los citocromos, que son
protenas ricas en Fe y a veces en Cu.
Lpidos.
Dentro de los lpidos vamos a tener a los fosfolpidos y dentro de estos a las lecitinas y ceflicas.
En algunos casos, se ha encontrado tambin colesterol , que es un lpido esteroideo.
Nucletidos.
De preferencia ADP, ATP, FAD y NAD.
Iones metlicos.
Como sodio, potasio, calcio, magnesio y algunas veces fsforo conjugado con macromolculas.

Gracias a la distribucin especfica de las protenas en las distintas membranas de la mitocondria
es que pueden transformar la materia en energa. Para poder averiguar la compartimentalizacin de
las protenas es necesario separar ambas membranas mitocondriales y los compartimientos que
ellas limitan, mediante la centrifugacin en gradiente de densidad. La membrana externa puede
separarse produciendo una hinchazn que primero rompe y luego contrae la membrana interna y la
matriz. En uno de los procedimientos empleados con mayor frecuencia, se utiliza dos detergentes,
la digitonina y el Lubrol WX. Al separar la membrana externa mediante

el uso de digitonina se
obtienen intactos los denominados MITOPLASTOS, que son unidades constituidas por la membrana
interna envolviendo a la matriz y su contenido. Luego, este mitoplasto es tratado con Lubrol WX,
utilizando un mayor gradiente de densidad para separar la membrana interna de la matriz.
Separadas la membrana externa, la membrana interna y la matriz mitocondrial, ya es posible hacer
un anlisis ms detallado de los componentes qumicos de cada una de las membranas y los
compartimientos que estas limitan. Hay ciertas enzimas que son indicadores especficos y
exclusivos de cada una de las partes de la mitocondria.

REPRODUCCION DE LAS MITOCONDRIAS
Hay hechos que permiten afirmar que las mitocondrias se reproducen: ya sea para sustituir a
mitocondrias viejas que terminan siendo degradadas en citolisosomas, ya sea para responder al aumento
de las necesidades metablicas de la clula, o bien previamente a la mitosis.
La prueba ms evidente de que las nuevas mitocondrias se forman a partir de otras mitocondrias la
proporcion el experimento de Lucke en 1963. Tras suministrar colina radiactiva al hongo Neurospora
durante un cierto tiempo, observ que sus mitocondrias quedaban marcadas. Despus de suprimir la
colina radiactiva y suministrar otra sin marcar, apreci que, en las siguientes generaciones celulares, la
radiactividad se reparta entre las mitocondrias de forma que la cantidad de radiactividad encontrada
en cada mitocondria era aproximadamente la mitad que en la divisin precedente. Si no hubiera habido
una reproduccin de las mitocondrias, toda la colina marcada hubiera permanecido en las primeras
mitocondrias y no aparecera en las mitocondrias formadas tras retirar la colina marcada.
La divisin de las mitocondrias, segn las imgenes observadas al microscopio electrnico pueden ser
realizadas por tres mecanismos.
Biparticin. Si se somete a una rata durante 6 semanas a una dieta con carencia de riboflavina
(vitamina B
6
) se forman mitocondrias gigantes. Al dar de nuevo riboflavina se dividen por
biparticin.
Estrangulacin. Si se somete a una rata durante 9 das a carencia de cobre, se producen
mitocondrias gigantes. Al dar de nuevo cobre se dividen por estrangulamiento.
128
Gemacin. Se forman pequeas yemas mitocondriales que se separan posteriormente. Esta teora es
difcil de probar, pues el contorno a veces muy irregular de las mitocondrias hace que parezcan
yemas lo que, en realidad, es parte de la forma normal de la mitocondria.

Se ha sugerido que, en su inicio, las mitocondrias eran organismos procariotas que formaron simbiosis
con organismos eucariotas anaerobios y que luego continuaron reproducindose conjuntamente,
convirtindose en un componente ms de la clula. Esta teora se apoya en los siguientes hechos:
El ADN mitocondrial es semejante al de las bacterias.
Los ribosomas mitocondriales son similares a los ribosomas de clulas procariotas.
El cloranfenicol inhibe la sntesis de protenas bacterianas y tambin la de protenas mitocondriales
por los ribosomas de la mitocondria, pero no la del resto de las protenas del citoplasma de las
clulas eucariotas.
Tanto las bacterias aerobias como las mitocondrias contienen en sus membranas enzimas de la
fosforilacin oxidativa: hay tambin unidades proyectantes en el mesosoma bacteriano, que de este
modo guarda cierto parecido con las crestas mitocondriales.
Las mitocondrias de clulas eucariotas muy diferentes (como hongos y mamferos) contienen en su
membrana protenas con caractersticas inmunolgicas comunes.
En su composicin, la membrana mitocondrial externa es ms parecida al retculo endoplasmtico,
mientras que la interna es ms parecida a la membrana plasmtica de clulas procariotas.

FUNCION MITOCONDRIAL
Oxidacin mitocondrial
Sin las mitocondrias, las clulas dependeran de la gluclisis anaerobia, que degrada glucosa a piruvato,
para obtener todo su ATP (en los vegetales se obtiene tambin ATP en los cloroplastos). Pero en la
gluclisis se libera slo una pequea fraccin de la energa liberada por la oxidacin total de los
azcares (dos molculas de ATP por cada molcula de glucosa). En la mitocondria, el metabolismo de los
azcares y cidos grasos se completa mediante su oxidacin total a CO
2
y H
2
O liberndose 36 molculas
de ATP por cada una de glucosa.
La oxidacin de los cidos grasos constituye el ciclo de la -oxidacin. Los cidos grasos penetran en la
matriz mitocondrial, donde forman molculas de acetil-coenzima A, y pasan y dan tantas vueltas en el
ciclo como pares de carbono contienen. En cada vuelta se libera una molcula de acetil-CoA, con dos
carbonos menos, el cual puede sufrir entonces una nueva -oxidacin. De este modo se repite
sucesivamente el ciclo oxidativo hasta que los cidos grasos de nmero par de carbonos se convierten
as por completo en molculas de acetato activado. El acetil-CoA producido, as como los NADH y FADH
originados en la oxidacin, son utilizados en el ciclo de Krebs.
La oxidacin de los glcidos se realiza en el ciclo de Krebs. El piruvato, procedente de la gluclisis
anaerobia de la glucosa y otros azcares relacionados (proceso que tiene lugar en el citosol), es
transportado dentro de la mitocondria, donde el complejo enzimtico piruvato deshidrogenasa lo
transforma en acetil-coenzima A, el cual entra en el ciclo de Krebs de la matriz mitocondrial,
oxidndose a CO
2
y generando NADH
+
+ H
+
y FADH para la cadena respiratoria.
129

Tanto el NADH como el FADH ceden los electrones, que son conducidos por la cadena transportadora
de electrones, separndose de los protones, hasta que se renen de nuevo con stos y el O
2
para
formar agua. Esta cadena comprende numerosos componentes que cada da van siendo mejor
identificados: una flavoprotena Fe-S, ubiquinona y la cadena de citocromos. Los citocromos b - c
forman un complejo (280 kDa) en forma de dmero que contienen al menos ocho polipptidos diferentes.
Cada monmero tiene dos grupos hierro (Con Fe) y una protena Fe-S, acepta electrones de la
ubiquinona y los transfiere al citocromo c. Este transporta los electrones al complejo de la citocromo
oxidasa, que forma un complejo (200 kDa), tambin dimrico, que contiene los citocromos a y a
3
con dos
grupos hemo y un grupo con los protones y con el O
2
para formar H
2
O consumindose alrededor del
90% del O
2
utilizado por la clula. Existen agentes inhibidores de este transporte: la unin de los
electrones a la flavoprotena Fe-S es inhibida por la rotenona; el funcionamiento del complejo de
citocromos b-c es inhibido por la antimicina A y el complejo de la citocromo-oxidasa es bloqueado por el
cianuro y por la azida.

La transferencia de electrones por la cadena respiratoria est acoplada a la sntesis de ATP a partir de
ADP + Pi este proceso de fosforilacin dependiente del transporte electrnico se le denomina
fosforilacin oxidativa. Se han formulado varias teoras para explicar este acoplamiento (formacin de
un intermediario qumico activado, acoplamiento por cambio en la configuracin. etc.), pero la teora que
lo explica mejor es la hiptesis quimiosmotica de Mitchell (1961). La transferencia de electrones
bombeara protones desde la matriz mitocondrial al espacio intermembrana, produciendo un gradiente
de concentracin (una unidad de pH) y elctrico (0,16 V), debido a la impermeabilidad de la membrana
mitocondrial interna a los protones. La energa obtenida en los procesos oxidativos se almacena as en
forma de un gradiente electroqumico de protones, que ser utilizado en la fosforilacin y en otros
130
procesos que requieren energa (transporte de material a travs de la membrana). La fosforilacin se
lleva a cabo por la ATP sintetasa mitocondrial, que opera de modo inverso a las bombas estudiadas en la
membrana plasmtica. A travs de la ATP sintetasa fluyen protones hacia la matriz mitocondrial a favor
de gradiente electroqumico, y ese paso activa la reaccin ADP + Pi ATP + H
2
O.

Esta hiptesis explica cmo la fosforilacin depende del gradiente: agentes como el 2,4-dinitrofenol,
que disipan el gradiente, desacoplan el transporte electrnico de la sntesis de ATP. Este
desacoplamiento entre la cadena y la fosforilacin ocurre de una manera natural en las mitocondrias de
grasa parda durante el despertar de la hibernacin. La membrana interna de estas mitocondrias
contiene una protena de transporte de 32 kDa, llamada termogenina, que permite el flujo de H
+
hacia el
interior, a favor de la gradiente electroqumica, sin activar la ATP sintetasa. Por ello, estas clulas
pueden oxidar sus reservas de grasa a gran velocidad, produciendo ms calor que ATP y actuando as
como calefactores que reaniman a los animales hibernantes, o protegen del fro al recin nacido.
El rendimiento en ATP sintetizado vara segn la procedencia de los electrones utilizados por la cadena
respiratoria. Se consigue formar 2.5 moles de ATP por cada mol de NADH y 1.5 moles de ATP por cada
mol de FADH. La intensidad de funcionamiento de la cadena transportadora de electrones depende de
varios factores; entre ellos el nivel de ADP. A ms ADP, ms rpido es el transporte de electrones. Si
una clula consume mucho ATP, como resultado sube el nivel de ADP y, por tanto, se acelera el
transporte de electrones con el consiguiente consumo de oxgeno y la produccin de ATP. Algunos
agentes como la oligomicina desacoplan la fosforilacin de la cadena (no se produce ATP).
Por centrifugacin diferencial pueden obtenerse las mitocondrias, romperse sus membranas por
tumefaccin y separar stas de la matriz y entre s (la externa de la interna). El anlisis de las tres
fracciones obtenidas permite conocer la localizacin de los diversos componentes mitocondriales que
intervienen en las funciones anteriormente expuestas. En la membrana externa est la enzima
monoamino oxidasa, en la matriz los componentes del ciclo de Krebs, y en la membrana interna los
componentes de la cadena transportadora de electrones y de la fosforilacin oxidativa, y diversas
permeasas.
Al separarse las unidades proyectantes de las membranas internas mediante tratamiento por rotura
con perlas de vidrio y centrifugacin posterior, se observ que las unidades proyectantes realizan la
funcin ATPasa (aunque ya no sean sensibles a la oligomicina), pero no el transporte de electrones. Por
el contrario, las membranas sin unidades proyectantes realizan el transporte de electrones pero no la
fosforilacin oxidativa. Si se unen de nuevo unidades proyectantes y membranas, reaparece la
fosforilacin, el transporte y la inhibicin por la oligomicina. Esto quiere decir que las unidades
proyectantes contienen la ATP sintetasa y que las membranas contienen la cadena. La inhibicin por la
oligomicina depende de un factor de acoplamiento, fcilmente, reconstituible. Es el tallo de las unidades
proyectantes (F
0
) que se separa de las esferas durante su extraccin. Cada unidad de fosforilacin
ocupa unos 20 x 20 nm de la membrana interna, mitocondrial. Dichas unidades se disponen en forma de
mosaico (irregularmente distribuidas por la membrana interna) tanto en direccin transversal como
131
lateral. En una mitocondria de hgado hay unas 15 000 unidades de fosforilacin en el msculo volador
de insecto, unas 100 000.

MITOCONDRIAS ESPECIALES
Los protozoos contienen mitocondrias ordinarias y otras especializadas, los cinetoplastos, propios de
algunos flagelados, se trata de mitocondrias similares, con crestas y tamao variable, que se sitan
junto al corpsculo basal del flagelo. Presentan pocas crestas, muchas fibrillas de ADN y
prolongaciones mitocondriales. En Leishmania donovani, cuando se encuentra en la forma parsita, el
cinetoplasto es pequeo y con pocos crestas la matriz incluye un material fibrilar (posiblemente ADN).
En su forma no parsita, el cinetoplasto tiene muchas crestas y es grande. Si a flagelados del gnero
Trypanosoma se les quita el cinetoplasmo mientras estn presentes en la sangre de vertebrados, estos
protozoos pueden reproducirse; pero no se pueden traspasar a los insectos.
En la parte intermedia de los espermatozoides de gasterpodos, la mitocondrias tiene una estructura
aberrante, en la que se observan tres compartimientos: glucognico, matricial y cristalino. El tercero es
el ms grande y la estructura cristalina resulta de la transformacin de las crestas. La gluclisis se
realiza en los dos primeros compartimentos, mientras que la fosforilacin oxidativa tiene lugar en la
porcin cristalina.

RETICULO ENDOPLASMATICO
El retculo endoplasmtico (RE) es un sistema de membranas que ocupa gran parte del espacio
citoplasmtico y se extiende desde el borde interno de la membrana plasmtica hasta la envoltura
nuclear, a travs de l puede haber comunicacin entre el entorno celular y el ncleo. El RE se puede
dilatar y cuando eso sucede sirve para acumular sustancias. Esta red de membranas no es pasiva, ya que
adems de cumplir un rol estructural va a tener un rol fisiolgico fundamental. La existencia de este
sistema ya se vislumbraba en el siglo pasado, pero en esa poca no se contaba con suficientes tcnicas
para poder probar este hecho. En 1889, Platner utilizando colorantes bsicos para colorear clulas de
pncreas, observa unas regiones filamentosas que se coloreaban fuertemente, al cabo de cierto tiempo,
ya no encontraban esos filamentos teidos, pasaba otro rato y volvan a aparecer. De acuerdo a esto,
Platner dedujo que en el citoplasma deba de haber una regin muy importante donde hay una gran
actividad, ya que se tien en un momento, desaparece y as sucesivamente. El aseguraba que en esta
estructura se estaba elaborando algo que despus se transformaba, a esta estructura le dio el nombre
de Ergastoplasma (Ergasto = elaborar, transformar). Esta es la primera referencia en cuanto a la
existencia de este sistema endomembranoso. En 1945, Porter con ayuda del microscopio electrnico
demuestra que efectivamente existan filamentos dispuestos a manera de red que van desde la
envoltura nuclear hasta el lmite con la membrana plasmtica, a esta red le da el nombre de Retculo
Endoplasmtico. Este sistema de endomembranas separa compartimientos porque tiene un espacio
luminal que debe tener una composicin diferente a la composicin del citoplasma.
132

MORFOLOGIA DEL RETICULO ENDOPLASMATICO.
El R.E. puede adoptar tres formas:
1. Cisterna:
De 50 nm de fondo, a manera de bolsas. Esta forma generalmente se encuentra asociada a ribosomas
que se ubican en la superficie externa de su membrana.
2. Vesculas:
De 50 a 500 nm de dimetro. Algunas presentan ribosomas y otras no. Las vesiculas no tienen
comunicacin entre ellas y sirven pare llevar en su interior algunas sustancias.
3. Tbulos:
De 50 a 100 nm de dimetro. Estos tbulos se anastomosan, es decir, se unen entre dos de ellos.
Generalmente se encuentran asociados a ribosomas.
Estas tres formas las podemos encontrar en una misma clula, o a veces, por la especializacin de la
clula, vamos a encontrar que predomina solamente una o dos formas del RE.

CLASES DE RETICULO ENDOPLASMATICO.
Topogrficamente, podemos dividir al retculo en dos tipos:
1. Retculo Endoplasmtico Rugoso (RER)
2. Retculo Endoplasmtico Liso (REL)
Esto est referido exclusivamente a la presencia o ausencia de ribosomas en la superficie externa de la
membrana. El RE tiene 3.80 m/cm
3
, de los que 2.41 corresponden a R.E.R. y 1.39 a R.E.L. lo que se quiere
demostrar con esto es que, en relacin a otros organelos, la mayor cantidad de membrana corresponde
al retculo endoplasmtico. El predominio de RER o REL en la clula depende de la funcin que esta
cumple.
RETICULO ENDOPLASMATICO RUGOSO (RER)
Este es el retculo que tiene RIBOSOMAS adheridos a su superficie y es el que Platner vio en sus
experimentos, pues lo que se estaba tiendo era el cido ribonucleico (ARN), que es parte de los
ribosomas. Como este retculo tiene ribosomas adheridos a su superficie, cumple la funcin de ser
el soporte fsico para la sntesis de protenas. Adems, en su interior se van a acumular las
protenas sintetizadas. Dentro de la clula hay protenas que se forman para el bien interno de ella y
protenas que tienen que salir fuera de ella, estas ltimas son las PROTEINAS DE EXPORTACION, a
cuya sntesis est ligado al RER.
133

Teora de la Seal.
Esta hiptesis explica como las protenas que son sintetizadas por los ribosomas en la membrana
del RE son introducidos al lumen de este. La hiptesis de seal fue formulada en el ao de 1976 ms
o menos. Recordemos que la membrana biolgica es un mosaico fluido constituido por una bicapa de
fosfolpidos, con protenas incluidas en ella, estas protenas fluyen en la membrana y pueden juntarse o
separarse de acuerdo al estado fisiolgico de la clula. En la membrana del retculo existen protenas
llamadas RECEPTORAS DEL RIBOSOMA a RIBOFORINAS. Cuando llega una seal para que
empiece la sntesis de protenas, los ribosomas que estn libres, fuera del RE, comienzan a
ordenarse, de tal manera que el ARN mensajero se pueda unir a ellas. El ARN mensajero es una
secuencia de bases nitrogenadas que contiene la informacin para la sntesis de protenas, en forma
de codones. Est demostrado que la cadena polipeptdica crece a travs de un surco o tnel de la
subunidad mayor del ribosoma. Al inicio del ARN mensajero (ARNm) hay codones con informacin para
que se comience a formar el pptido de seal, este pptido ubica a las riboforinas y hace que se aproxi-
men unas a otras, formando una especie de tnel entre ellas. En estas riboforinas se asienta la
subunidad mayor del ribosoma, cuyo surco o tnel se comunica directamente con el tnel formado por
las riboforinas. Al unirse el ribosoma al retculo, el pptido de seal penetra hacia el lumen reticular
por el tnel, luego es separado de la cadena por la accin de una peptidasa de seal, que es una
enzima ubicada en la membrana de mosaico fluido del RE. Por otro lado, el polipptido sigue
creciendo hasta encontrar en el ARN mensajero un codn que le indique la terminacin de la
sntesis, esta seal tambin indica a las riboforinas que se desplacen en sentido contrario,
alejndose entre s. El ribosoma se despega y el pptido formado queda en el lumen del RE.

RETICULO ENDOPLASMATICO LISO (REL)

FUNCIONES:
134
Aparte de participar en procesos de transportes y almacenamiento de algunas sustancias, el REL tiene
otras funciones.
GLUCOGENOLISIS.
Proceso que consiste en degradar glucgeno hasta transformarlo en glucosa. El glucgeno est asociado
a la superficie externa del R.E.L. Cuando se pone en ayunas a un animal, estos grnulos comienzan a
disminuir. Lo que indica que han sido utilizados por los organismos. El R.E.L. puede cumplir esta
funcin porque posee una enzima que quita el fsforo a la glucosa-6-fosfato, dejndola como
glucosa libre, para que pase al torrente sanguneo.
SINTESIS DE LPIDOS.
En el R.E.L. encontramos toda la estructura capaz de unir cidos grasos a glicerol y formar lpidos.
Las gotas de grasa se asocian al R.E.L. para sintetizar lpidos, los lpidos se sintetizan a este nivel y
caen al interior del retculo.
SINTESIS DE ESTEROIDES Y SUS HORMONAS.
En el R.E.L. se sintetizan esteroides como el COLESTEROL, a partir del cual se forman los
estrgenos hormonas de tipo esteroideo formadas tambin en este retculo. Las clulas de Leydig
(que encontramos en testculos de mamferos) estn repletas de R.E. L., porque all se sintetiza la
testosterona, que es una hormona esteroidea. En las clulas de la cpsula suprarrenal encontramos
abundante R.E.L., porque estas tambin sinteti zan hormonas de tipo esteroideo. A nivel de las
clulas del ovario tambin encontramos abundante R.E.L.
DETOXIFICACION.
La gran mayora de sustancias qumicas, muchos frmacos y hormonas de tipo esteroide, a veces
compuestos aromticos se descomponen a nivel heptico en el R.E.L. por ejemplo en el caso del
colantreno (sustancia que aparece en los sitios negreados de la carne asada en parrilla), hasta hace
algunos aos estaba catalogado como cancergeno, cuando se profundiz ms en el asunto se
descubri que este no es el verdadero cancergeno sino que cuando se ingiere en cantidades
elevadas el R.E.L. lo transforma en un compuesto que se llama 5,6 epxido, que es el verdadero
cancergeno. La funcin que cumple el R.E.L., de quitar la toxicidad a lo que l considera toxico se llama
DETOXIFICACION. En la membrana del R.E.L. existen unas protenas Llamadas CITOCROMOS,
cuya funcin es transportar electrones (oxidacin y reduccin), hay un citocromo llamado B5 que
parece estar ntimamente relacionada a la sntesis de lpidos y hormonas esteroideas. El citocromo
P450 interviene en la detoxificacin, su nombre de Pigmento 450 se debe a que estas protenas
coloreadas absorben una cantidad de luz de una longitud de onda determi nada, hacindose visibles,
en este caso a 4,500 A o 450 nanmetros.
GLUCOSILACION.
El R.E.R. tiene ribosomas a cuyo nivel se sintetizan protenas que caen al interior del retculo, as
tambin existe R.E. asociado a la sntesis de lpidos, por lo que en su interior vamos a encontrar
lpidos. Existe un mecanismo por el cual a estas protenas y lpidos se les adicionan otras molculas,
principalmente carbohidratos, para obtener glicoprotenas o glucolpidos respectivamente. Este
mecanismo se llama GLICOSILACION. Parece ser que la glucosilacin empieza a nivel del R.E.
porque se ha demostrado la presencia de Glucosiltransferasa enzima encargada de transferir
molculas de carbohidratos a lpidos o protenas. Pareciera ser que en algunos casos las protenas
se estn formando y simultneamente se estn glicosilando, esto parece que empieza en el R.E. pero
es otra la molcula encargada de completar este proceso.

MODIFICACIONES DEL RETICULO ENDOPLASMATICO
El R.E. es capaz de modificarse y formar una estructura definida, entre las modifi caciones que
sufre tenemos:
ENVOLTURA NUCLEAR.
Es una estructura compleja que se basa en una vescula de retculo endoplasmtico extendida alrededor
del material hereditario nuclear (cromatina). Como tal vescula, la envoltura aparece conformada por
dos membranas: la membrana nuclear externa y la membrana nuclear interna, es una doble unidad de
membrana porosa que delimita al ncleo propio de las clulas eucariotas. La membrana en contacto con
el citosol es la que se continua con la membrana del retculo endoplasmtico rugoso (RER), que al igual
que este est asociada con ribosomas.
135
RETICULO SARCOPLASMATICO.
Protegiendo a los microfilamentos, existe un R.E. que abarca todo el espacio del sarcmero
formando canales que desembocan en un tbulo mayor. Esto tambin es R.E.L., pero como es
caracterstico y exclusivo de las clulas musculares toma el nombre de RETICULO
SARCOPLASMATICO. Este R.E. a travs de la lnea Z del sarcmero forma una gran tubera que
contacta con la membrana plasmtica de la clula en donde est asociado a una neurona, de tal
manera que la seal de contraccin la recibe este R.E.L. ante esta seal, el Retculo sarcoplasmtico
libera calcio y cuando cesa la seal, el calcio vuelve al retculo sarcoplasmtico y el msculo se
relaja.

CUERPO MIELOIDE.
Es una modificacin del R.E.L que se encuentra en la retina de los ojos de muchos vertebrados.
Pareciera que la manera como se disponen las porciones del R.E.L., formando un doble cono, sirve de
alguna forma para tratar de controlar y distribuir los pigmentos que dan color a los ojos.

APARATO DE GOLGI
Este orgnulo fue descubierto en 1898 por Camilo Golgi, patlogo de la Universidad de Pava, quien lo
describi como un aparato reticular interno mediante la aplicacin de tcnicas de impregnacin con
dicromato de osmio y de rubidio para teir neuronas de purkinje del cerebelo de la lechuza. Su
existencia fue confirmada posteriormente por Cajal, tanto en neuronas teidas con mtodos de
impregnacin argntica, como en clulas mucosecretoras de la lmina epitelial del intestino. La
confirmacin definitiva la proporcionaron los estudios al microscopio electrnico realizados en 1950 por
Sistrand, Dahon y Flix, estos estudios demostraron que este sistema es un organelo membranoso de
la clula, al que se denomin aparato o complejo de Golgi.
La localizacin del aparato de Golgi en las clulas secretoras es entre el ncleo y el pice por el que se
vierte la secrecin. En las clulas musculares, el complejo de Golgi aparece en ambos polos del ncleo,
que es alargado, lo mismo ocurre en condroblastos. En las clulas plasmticas que son muy basfilas y
con el ncleo excntrico, todo el citoplasma aparece teido por los colorantes bsicos (hematoxilina,
pironina) a excepcin de una zona situada junto al ncleo, que corresponde al aparato de Golgi. Como
esta zona aparece sin teir, se denomin zona Golgi negativa. En las clulas vegetales meristemticas el
complejo de Golgi muestra un notable desarrollo ocupando extensas reas del citoplasma, algo
semejante ocurre en diversos tipos celulares de muchos invertebrados con un complejo de Golgi muy
desarrollado.
El aparato de Golgi consta de varias unidades, probablemente conectadas entre s, denominadas
dictiosomas, estos son un conjunto de sculos apilados, separados entre s entre 20 y 30 nm, en cuya
periferia hay vesculas de diversos tamaos. La cara ms prxima al ncleo celular, o cara proximal, se
denomina cara externa o cara Cis o tambin cara de formacin, es de forma convexa y presenta muchas
fenestraciones, su periferie se resuelve en tbulos y vesculas, los tbulos conectan con otros
dictiosomas. Las vesculas provienen del retculo endoplasmtico, principalmente del rugoso, les
transfiere su contenido; por eso se llaman vesculas de transicin. Es posible que esas vesculas
correspondan tambin a tbulos seccionados que conecten el retculo endoplasmtico rugoso y el
complejo de Golgi, as se deduce de las imgenes observadas con el microscopio de alta resolucin y de
la reconstruccin de estudios realizados en cortes seriados. Las restantes cisternas son cada vez
136
menos fenestradas y contienen menos tbulos y vesculas. La cara ms prxima a la membrana
plasmtica, o cara distal, se denomina cara interna o cara Trans, o tambin cara de maduracin. La luz
de las cisternas es ms amplia que en las de la cara Cis (va aumentando progresivamente), y de su
superficie emigran grandes vesculas denominadas vacuolas de condensacin, grnulos de secrecin o de
cimgeno.
La estructura de la membrana del complejo de Golgi es trilaminar, de menor espesor que la plasmtica,
y similar a la estructura de la mayora de las membranas citoplasmticas. En algunos casos, se ha
descrito que el espesor de las membranas del aparato de Golgi va aumentando desde la cara Cis a la
Trans; de modo que las vesculas de secrecin que abandonan el complejo de Golgi para unirse a la
membrana plasmtica tienen ya el mismo espesor que esta.

COMPOSICION DEL APARATO DE GOLGI
Si se hace la centrifugacin habitual del homogeneizado celular, todo el retculo endoplasmtico (liso y
rugoso) y el complejo de Golgi aparecen como vesculas. Si se hace centrifugacin diferencial a
continuacin, se pueden separar las vesculas lisas de las rugosas. Esto sirve para estudiar el complejo
de Golgi en clulas con escaso retculo endoplasmtico liso, pues, en estas clulas, la mayora de las
vesculas que se encuentren corresponden al complejo de Golgi. En clulas con abundante retculo
endoplasmtico liso se puede hacer una homogeneizacin suave, con lo que los dictiosomas se conservan
enteros y se pueden aislar por centrifugacin diferencial. El estudio bioqumico de los dictiosomas
muestra que la composicin de su membrana es intermedia entre la de la membrana plasmtica y la del
retculo endoplasmtico rugoso, pues hay un 65% de protenas y un 35% de lpidos. La composicin de
los lpidos del complejo de Golgi es intermedia entre la que se observa en la membrana plasmtica y la
encontrada en el retculo endoplasmtico rugo. As, en el complejo de Golgi hay ms esfingomielina y
colesterol que en el retculo endoplasmtico rugoso y menos que en la membrana plasmtica.
Como en las otras membranas, tambin hay asimetra en la distribucin de los fosfolpidos en ambas
hemimembranas del complejo de Golgi. La lamela exoplasmtica (E o luminal) es ms rica en
fosfatidicolina y esfingomielina. La lmela protoplasmtica (P o exterior a la luz) es ms rica en
fosfatidiletanolamina y fosfatidilserina. Esta asimetra coincide con la del retculo endoplasmtico
rugoso, pero en proporciones diferentes.
En las membranas del complejo de Golgi hay hidrolasas y peroxidasas que no son especficas. Las
enzimas ms destacables son varios tipos de glicosil - transferasas (intervienen en la glicosilacin o
unin de oligosacridos a protenas) y sulfo - transferasas (que transfieren grupos sulfato a las
protenas hidrocarbonadas).

FUNCIONES DEL APARATO DE GOLGI.
Participacin del Aparato de Golgi en la secrecin proteica.
137
Desde el descubrimiento del aparato de Golgi, las observaciones morfolgicas hacan pensar que estaba
implicado en la secrecin proteica. Ya en 1914 Cajal vio gotitas de moco sobre la regin del aparato de
Golgi de las clulas caliciformes del intestino y sugiri que este orgnulo podra ser la fabrica
intracelular que lo sintetizar. Si se observa al microscopio electrnico el aparato de Golgi de la clula
caliciforme, se aprecia que los sculos de la cara Cis estn aplastados casi vacos, mientras que los de la
cara Trans estn hinchados y llenos de moco, de esta cara se desprenden grandes vesculas llenas de
moco que llegan hasta la membrana plasmtica apical y se liberan. Algo semejante ocurre en otras
clulas que segregan protenas.
La participacin del aparato de Golgi en la secrecin proteica se investig mediante radio autografa,
marcando con tritio el aminocido leucina. En 1961, Leblond realiz estos experimentos con pncreas y
encontr que las protenas sintetizadas se localizaban en el retculo endoplasmtico rugoso a los 3
minutos, a los 20 minutos en el aparato de Golgi, a los 90 minutos en los grnulos de secrecin y a los
120 minutos se liberaban de la clula. A partir de entonces se fue comprobando que el mismo camino se
sigue en muchos otros tipos de clulas secretoras de protenas glicosiladas.

Modificaciones en los carbohidratos unidos a protenas
En las clulas, las glucoprotenas y proteoglicanos pueden teirse con un color magenta mediante la
tcnica del PAS. As se ve que en las clulas caliciformes se tie no, slo el moco, sino tambin el
complejo de Golgi. Si se utilizan algunos compuestos de plata en lugar del PAS, se forman depsitos de
plata que se observan en negro (tinciones de Golgi y Cajal) y que tambin pueden verse al microscopio
electrnico. Estas observaciones indican la presencia de abundantes carbohidratos en el complejo de
Golgi.
La incorporacin de carbohidratos en el complejo de Golgi se estudi tambin utilizando radiografa,
marcando radiactivamente los diferentes azucares o sus derivados. Aunque en los primeros estudios
autogrficos, Neutra y Leblond (1966) encontraron que la glucosa tritiada se incorporaba directamente
en el complejo de Golgi, nuevas pruebas radiogrficas modificaron esta hiptesis. Actualmente se
utilizan tambin lectinas como marcadores de los azcares. La manosa se incorpora exclusivamente en
el retculo endoplasmtico rugoso. La N-acetil-glucosamina, se incorpora tanto en el retculo
endoplasmtico rugoso como en el complejo de Golgi. La galactosa y el cido silico (N-acetil-
neuraminico) se incorporan exclusivamente en el complejo de Golgi, de modo que, aunque el primer paso
de la glicosilacin tiene lugar en el retculo endoplasmtico rugoso, las diferencias entre las estructuras
de los oligosacridos en las protenas maduras se deben a modificaciones posteriores producidas
durante su paso a travs del complejo de Golgi. De una parte se producen modificaciones en los
oligosacridos unidos a N, dando lugar a tres tipos diferentes (ricos en manosa, complejos e hbridos) y
a las enzimas lisosmicas. Adems, a las protenas se aaden oligosacridos de otro tipo (oligosacridos
138
unidos a O). Algunas clulas, como las que sintetizan la matriz de los tejidos conectivos (conjuntivo,
cartlago, hueso), forman protenas, denominadas proteoglicanos, que van unidas a numerosas y largas
cadenas de carbohidratos. Estas cadenas de carbohidratos (glicosaminoglicanos) son tambin aadidas
en el complejo de Golgi.
Maduracin de las protenas
Las protenas del complejo de Golgi que llegan a la cara Trans deben sufrir un proceso de maduracin,
que se inicia en esta cara pero que prosigue durante la emigracin de las vesculas hasta la membrana
plasmtica. La maduracin de las protenas requiere:
Hidrlisis. Generalmente ocurre en los pares de aminocidos Lys-Arg, Lys-Lys, Arg-Arg y Arg-Lys.
Algunos polipptidos, como hormonas y neurotransmisores, son sintetizados en su forma inactiva, como
precursores. Despus en la cara Trans del complejo de Golgi, son procesados mediante enzimas
hidroliticas que eliminan partes del polipptido incluyendo pptidos seal, conduciendo a la liberacin de
la forma madura o activa. Adems, algunos polipptidos que van a ser segregados son tan cortos que no
han podido ser sintetizados eficientemente, sino como molculas ms largas y que luego han sido
cortadas por hidrlisis, es el caso de las encefalinas, que constan de tan slo cinco aminocidos.
Condensacin. Las protenas llegan a la cara trans como soluciones diluidas. Con el tiempo estas
soluciones se concentran (algunas hasta 200 veces), dando lugar a las vesculas con contenido ms denso
(grnulos de cimgeno), tambin denominados vesculas de condensacin. La condensacin tiene lugar
por la acidificacin de la luz de las vesculas mediante una bomba de H
+
dependiente de ATP.

COMPARTIMENTACION DEL COMPLEJO DE GOLGI
Desde los estudios de Rothman (1981) se ha establecido que el complejo de Golgi consta de tres
compartimientos superpuestos, los cuales se pueden separar por centrifugacin diferencial, pudindose
medir su actividad enzimtica. Cada compartimiento comprende ms de una cisterna y son los
siguientes:
Compartimiento Cis. En l ocurre la fijacin de los grupos fosfato a las manosas en las enzimas
lisosmicas. Este marcador evita que estas enzimas sufran nuevos cambios al pasar por los otros
compartimientos en su camino al exterior del complejo de Golgi.
Compartimiento intermedio. En l se rompen las manosas (por manosidasas I y II) y se aade N-
acetil-glucosamina (por las N-acetil-glucosamina transferasas I y II)
Compartimiento Trans. En l ocurre la adicin de galactosa y cido silico por las transferasas
correspondientes. La liberacin de cualquier tipo de vesculas (como enzimas lisosomicas,
oligosacridos ricos en manosa, complejos unidos a oxgeno, etc.) ocurre siempre desde este
compartimiento.
Algunos autores distinguen dos zonas ms: la red Cis que corresponde a las vesculas de transicin
entre el retculo endoplasmtico rugoso y el complejo de Golgi: y la red Trans, que corresponde a las
vesculas que se desprenden de la cara Trans del complejo de Golgi. En esta red Trans se clasifican las
protenas para su destino: por ejemplo, hacia lisosomas o haca la membrana plasmtica.
139

Al principio se pens que las cisternas del complejo de Golgi se iban desplazando desde el
compartimiento Cis al Trans, alejndose del ncleo. Sin embargo, hoy da se hace difcil pensar que los
tres compartimentos puedan estar transformndose uno en otro, ya que no se puede admitir que una
cisterna Cis acabe en Trans, pues los procesos biolgicos y las enzimas correspondientes difieren de un
compartimiento a otro. Lo que probablemente ocurre es el paso de la protena de un compartimiento a
otro por vesiculacin: vesculas no recubiertas por clatrina que geman en un compartimiento y saltan a
fusionarte al siguiente, sin posibilidad de retroceso, de esta manera se renueva de paso la membrana.
Existe tambin un retorno de membrana desde el compartimiento Cis del complejo de Golgi hacia el
retculo endoplasmtico rugoso. La administracin de la droga brefeldina A bloquea la fusin de las
vesculas que pasan desde el retculo endoplasmtico al compartimiento Cis del complejo de Golgi. Tras
un tratamiento largo con esta droga, el complejo de Golgi se disgrega y las protenas que estaban
almacenadas en l retornan hacia el retculo endoplasmtico. Este retorno puede ser bloqueado por
agentes inhibidores de microtbulos, los cuales no bloquean la fusin de las vesculas que pasan desde el
retculo endoplasmtico al compartimiento Cis del complejo de Golgi, o las que pasan de ste al
compartimiento intermedio o de ste al Trans. As, parece que slo el retorno de membrana requiere
microtbulos.
ALGUNAS FUNCIONES ESPECFICAS DEL APARATO DE GOLGI
La secrecin celular de proteoglicanos y glucoprotenas y la formacin de lisosomas no incluyen todas
las funciones del complejo de Golgi. Probablemente, el complejo de Golgi sea el principal director del
transporte macromolecular en el interior de la clula. Muchos tipos de molculas diferentes pasan a
travs de alguna porcin del complejo de Golgi en algn momento de su maduracin. Entre estas
molculas, como hemos visto, se encuentran las protenas, glicoprotenas y proteoglicanos segregados
por la clula. Adems estn las glucoprotenas y glucolpidos de la membrana plasmtica, de modo que el
complejo de Golgi no solo interviene en la renovacin de la membrana plasmtica mediante el proceso de
exocitosis (aportando la membrana de las vesculas de secrecin), sino que tambin participa en la
formacin de glicocaliz y de la pared celular vegetal.
Un caso particular de estructuras formadas por el complejo de Golgi son el acrosoma de los
espermatozoides y el nematocisto de los cnidoblastos de los cnidarios, ambas estructuras contienen
componentes del tipo glicoprotenas.
Aunque no hay pruebas evidentes, se ha sugerido que el complejo de Golgi interviene tambin en
relacin con compuestos lipdicos y derivados. As parece que las lipoprotenas y hasta la bilis en
hepatocitos pasan por el complejo de Golgi. Lo mismo ocurre con los quilomcrones del intestino
(producidos en los enterocitos), con la sntesis lipdica en glndulas sebceas y sudorparas, y con la
esteroidognesis en las clulas de Leydig. Lo que se ignora an es si, en estos casos, el complejo de
140
Golgi sirve nicamente de embalaje para el transporte, o si realiza algn papel qumico importante en la
liberacin de esas sustancias. La extrusin fuera de la clula de los lpidos unidos a protenas ocurre
con vesculas procedentes del complejo de Golgi, sin embargo, la liberacin de las hormonas esteroideas
a la sangre no se realiza a travs de vesculas de exocitosis procedentes del complejo de Golgi.

LISOSOMAS
En 1951, Cristian De Duve se dedicaba a estudiar mitocondrias y buscaba obtenerlas juntas para
demostrar la existencia de una enzima mitocondrial, que era la citocromo oxidasa, pero cuando
separaba la fraccin de mitocondrias por centrifugacin diferencial, encontraba que all apareca un
contaminante, una enzima que es la Fosfatasa cida y esta no tena nada que ver con las
mitocondrias. Pone nuevamente la fraccin mitocondrial a la centrfuga y encuentra una fraccin de
mitocondrias donde no haba actividad de fosfatasa cida, la que se haba concentrado en la otra
fraccin. Cuando lleva esta segunda porcin al microscopio electrnico observa que la fosfatasa
cida solo estaba en el interior de vesculas. Cambia entonces el rumbo de sus investigaciones, deja
a las mitocondrias y empieza a estudiar esta fraccin que contena fosfatasa cida. Adems de
fosfatasa cida, De Duve encuentra que all haba otras enzimas, Como proteasas, nucleasas,
fosfatasas, glucosidasas, etc. Como en este organelo se encontraban enzimas que hidrolizaban los 4
componentes orgnicos de mayor importancia en la vida, De Duve le acua el nombre de LISOSOMA
= cuerpo que descompone algo.

La funcin del lisosoma est relacionada con la digestin celular, las enzimas que contiene este
lisosoma son llamadas tambin HIDROLASAS ACIDAS debido a que trabajan con PH de 5. Desde
1951 en que De Duve describe a estas organelos, se han descrito ms de 50 enzimas hidroliticas
asociadas a vesculas lisosomales, lo que no quiere decir que todas las vesculas tengan las 50
enzimas, pero la enzima que nunca falta en un lisosoma, y por lo cual se le reconoce como tal, es la
Fosfatasa cida.
Un lisosoma es como una bomba nuclear en la clula pues tiene todo lo que hidroliza, si algo
desestabiliza su membrana, todo su contenido sale al exterior y la clula se termina en un instante.
Por tanto, la envoltura que rodea a los lisosomas tiene propiedades fundamentales:
Es una membrana que no se altera con un PH 7. Es una membrana estabilizada, si se desestabiliza y
se rompe, capaz de provocar la muerte de la clula. Adems las enzimas que contienen estn en
forma paracristalina lo que hace que permanezcan inactivas hasta que algo induzca a alguna a trabajar.

DIVERSIDAD FUNCIONAL DE LOS LISOSOMAS.
Normalmente se denominan lisosomas primarios aquellos que contienen slo enzimas y que an no han
participado en procesos digestivos generalmente son muy pequeos (unos 0.5 nm de dimetro) y
corresponden a las vesculas que contienen hidrolasas cidas emanadas de la cara Trans del complejo de
Golgi, muestran un contenido homogneo denso. Por el contrario, aquellos que contienen materiales en
141
digestin en su interior (todos los restantes) se incluyen en la expresin lisosomas secundarios,
muestran un contenido heterogneo.
La mayora de las clulas animales superiores se nutren por difusin a travs de la membrana y
transporte activo. Sin embargo, algunos materiales que deben penetrar en ciertos protozoos (amebas) o
clulas animales (leucocitos) son demasiado voluminosos para poder atravesar la membrana plasmtica y
son introducidos por endocitosis (fagocitosis o pinocitosis). En vertebrados superiores, esto ocurre en
los enterocitos, tbulos proximales renales, epiddimo, leucocitos y macrfagos. En protozoos, y en el
intestino de muchos invertebrados y de algunos vertebrados (como los ciprnidos, que no segregan
pepsina), la tripsina pancretica no es suficiente para hidrolizar completamente las protenas y stas
son ingeridas por endocitosis. En mamferos esto slo ocurre en recin nacidos as se captan los
anticuerpos de la leche materna, que pasarn luego a la sangre. En estos casos actan los lisosomas, que
intervienen en la degradacin de estas protenas.
El proceso se inicia con la formacin de una vescula de endocitosis. Si se trata de sustancias no visibles
al microscopio, es una vescula de pinocitosis, tambin denominada endosoma que, al adentrarse en el
citoplasma, entra a formar parte de una red de tbulos y vesculas, conocida como compartimiento
endosomal perifrico, externo o temprano. A medida que este compartimiento se adentra an ms en la
clula, disminuye el pH en su interior, y pasa a denominarse compartimiento endosomal perinuclear
interno o tardo. Algunos investigadores piensan que se trata de dos compartimentos diferentes; es
decir, que no estn en continuidad, y que el trnsito del temprano a tardo se realiza mediante trfico
de vesculas, como ocurre en el paso de un compartimiento a otro del complejo de Golgi. Ms en
profundidad, el compartimiento endosomal tardo se transforma en el compartimiento endolisosomal,
que es ya verdaderamente un compartimiento lisosmico (contiene hidrolasas cidas), pues en l vierten
sus enzimas los lisosomas primarios, emanados del complejo de Golgi, para proceder a la degradacin de
las sustancias incorporadas por endocitosis sin que las enzimas digestivas salgan al hialoplasma. Lo
mismo ocurre en la fagocitosis de bacterias u otros microorganismos por los leucocitos
polimorfonucleares y macrfagos. Las vacuolas de endocitosis (denominadas fagosomas en este caso) se
unen a lisosomas procedentes del compartimiento endolisosomal, formndose un fagolisosoma (lisosoma
secundario).

En ambos casos, completada la digestin, las molculas resultantes difunden al hialoplasma. Quedan los
residuos que, o bien son exositados por unin de la membrana del lisosoma a la plasmtica y liberacin
del contenido al exterior o bien se acumulan en el lisosoma y permanecen all por el resto de la vida de
la clula, formando los denominados cuerpos residuales o telolisosomas. Los grnulos de lipofuscina que
se observan en clulas con larga vida, como las del hgado, miocardio y neuronas, por ejemplo, son una
muestra de esta segunda posibilidad. Es posible que estas vacuolas participen varias veces en el proceso
de digestin. As se ha demostrado suministrando a una clula ferritina y varias horas despus oro
coloidal y viendo que se acumulan los dos materiales en el mismo cuerpo residual.
Los leucocitos polimorfonucleares estn provistos de numerosos lisosomas, que son visibles incluso al
microscopio de luz como granulaciones denominadas grnulos azurfilos. Estos lisosomas se unen a la
vacuola que encierra las bacterias fagocitadas y las digieren. Ante una infeccin considerable, los
142
fagolisosomas formados pueden acumular tal cantidad de bacterias en su interior que su membrana se
rompe liberando las enzimas, que terminan con el leucocito, originando as el pus.
Se ha visto que de un lisosoma pueden formarse varios menores o fusionarse unos con otros, como
ocurre en los macrfagos. En este proceso intervienen microfilamentos, pero la membrana lisosmica
siempre se mantiene inalterada, de modo que se evite la salida de enzimas al hialoplasma.
Parece que, en algunos casos, los lisosomas pueden verter sus enzimas al exterior y destruir sustancias
externas a la clula. Tal es el caso del tracto digestivo de moluscos, en el que los lisosomas liberan sus
enzimas a la superficie epitelial para digerir externamente las partculas. Algo semejante ocurre con el
acrosoma, un lisosoma especializado que se encuentra en el extremo de la cabeza del espermatozoide.
Cuando ste entra en contacto con las cubiertas del vulo, del acrosoma se liberan enzimas hidrolticas,
como proteasas, hialuronidasa, glucosidasas, fosfatasas, acilsulfatasas y fosfolipasas, que destruyen las
cubiertas del vulo para que la membrana del acrosoma se fusione con la membrana plasmtica del vulo.

Es probable que la destruccin de la matriz sea efectuada por los osteoclastos sea causada por
enzimas lisosmicas liberadas al exterior, destruccin que es seguida de endocitosis para la
degradacin final de algunas de las sustancias liberadas de la matriz. Lo mismo ocurre en la digestin de
la matriz cartilaginosa por los condroblastos.
Los lisosomas no slo degradan sustancias procedentes del exterior de la clula (heterolisosomas)
tambin pueden englobar y digerir organelos (mitocondrias, membranas citoplasmticas, etc.) y
porciones de citoplasma de la propia clula en grandes vacuolas digestivas denominadas vacuolas de
autofagia, autolisosomas o citolisosomas para explicar la formacin de una vacuola de gran tamao,
algunos piensan que no basta con suponer la fusin de muchos lisosomas y que el retculo endoplasmtico
liso proporcionara esa membrana envolviendo los orgnulos sobrantes. Estas vacuolas digestivas se
forman, por ejemplo, en condiciones de ayuno, en las que la clula debe nutrirse a sus expensas, pero
tambin en circunstancias fisiolgicas normales, como son los procesos de destruccin de organelos
sobrantes. Adems de organelos hay protenas citoslicas que deben entrar en los lisosomas para su
destruccin. Estas protenas estn marcadas por ciertas secuencias de aminocidos como la secuencia
Lys-Phe-Glu-Arg-Gln denominada secuencia KFERQ si se utiliza el cdigo de una letra con el que pueden
designarse ms abreviadamente los nombres de los aminocidos. Es posible que, mediante estas
secuencias, esas protenas citoslicas se unan a los organelos viejos que van a ser lisados. Tambin es
posible que esas protenas citoslicas entren directamente en los lisosomas porque las secuencias que
las marcan sean reconocidas por receptores de la membrana del lisosoma y se incorporen a ste
atravesando su membrana por la accin de mecanismos de bombeo especiales. El contenido de estos
lisosomas puede aparecer en la forma de figuras de mielina, que reflejan el alto contenido lipdico de
los materiales en degradacin. Esta destruccin de organelos es controlada, pero los lisosomas podran
destruir la clula entera si se rompen sus membranas, como hemos visto que ocurre en los leucocitos
ante una grave infeccin. Roturas de este tipo tienen lugar tras la muerte (degeneracin post morten).
Antes se pensaba que los citolisosomas eran responsables de la eliminacin de aquellas clulas que
deben tener una vida corta y dejar paso a otras. Tal es el caso de las clulas sanguneas, epiteliales.
etc. Hoy en da se acepta que este proceso forma parte de la denominada muerte celular programada
(apoptosis). Los citolisosomas o Autofagosoma (vacuolas autofgicas) tambin intervienen en el
mecanismo de regulacin de la secrecin englobando grnulos de secrecin, antes de que sea
segregados, y digirindolos.
143
En muchas clulas de diferentes organismos se han encontrado con el microscopio electrnico
estructuras constituidas por una membrana y que en su interior contienen numerosas vesculas, por lo
que se les denomina cuerpos, multivesiculares. Se ven con frecuencia en clulas endoteliales, pero
tambin se han observado en clulas sanguneas, enterocitos, ovocitos, miocardio, etc. Aunque hubo
ciertas dudas en el pasado sobre su naturaleza, tras ponerse de manifiesto que posee actividad
fosfatasa cida, se les consider inequvocamente como lisosomas.
Se han dado tres interpretaciones acerca del origen y significado de los cuerpos multivesiculares.
Se trata de vesculas de pinocitosis que penetran en un lisosoma primario, en cuyo caso habra que
suponer que las vesculas de pinocitosis se uniran primero a la superficie del lisosoma y
posteriormente se invaginaran.
Pueden ser varios lisosomas primarios, cada uno delimitado por su propia membrana, pero el
conjunto quedara rodeado por una membrana comn.
Una tercera interpretacin es que un lisosoma primario incorpora molculas pequeas del citoplasma
a su interior (microautofagia) por un proceso semejante a la pinocitosis.
DIGESTION INTRACELULAR.
Puede ser heterofagica o autofagica:
DIGESTION HETEROFAGICA:
Esta funcin es realizada por un tipo de poblacin celular de los organismos pluricelulares,
denominados en forma genrica MACROFAGOS. Estn agrupados dentro del llamado Sistema
Endotelial, veamos algunos casos de digestin heterofagica:
1. Defensa del organismo.
Todo cuerpo extrao, como bacterias y virus, que ingresan al organismo son englobados por los
macrfagos por endocitosis para ser destruidos a nivel de los lisosomas. Sin embargo, existen algunas
bacterias, como los de la TBC, de la difteria o la brucella, que estn envueltas en una pared tan rgida
que las enzimas lisosomales son incapaces de destruirlas, y entonces ese fagoli sosoma se convierte un
caldo de cultivo ideal para que la bacteria comience a reproducirse y en un vehculo que esparce la
bacteria y/o sus toxinas por toda la economa debido a que los macrfagos viajan por todo el
organismo.
2.- Inmunidad pasiva.
En mamferos como cerdos y caballos existe un tipo especial de macrfagos, llamados enterocitos que
engloban la lactosa contenida en la leche, pasan as de la madre a las cras, con lo que estas adquieren
cierto tipo de inmunidad. En el hombre, las sustancias inmunolgicas son pasadas a travs de la placenta
de tal manera que en el feto, desde muy pequeo, ya hay una actividad heterofagica de los enterocitos
y por lo tanto un tipo de inmunidad pasiva.
3. Reabsorcin de protenas.
Por ejemplo, las protenas circulantes en los glbulos rojos, los que son destruidos al cumplir su vida
media, quedando sus protenas libres en el plasma sanguneo. Estas protenas son englobadas por
macrfagos que luego las degradan. Otro tipo de reabsorcin de protenas sucede a nivel renal, el
rin est formado por una serie de tbulos constituidos por epitelio con gran capacidad de
reabsorcin, pero algunas protenas pequeas se escapan de la filtracin y absorcin y viajan por el
interior de dichos tbulos, los macrfagos que all existen son los que se encargan de coger y
degradar esas protenas que se escaparon.
4. Produccin de hormonas.
La tiroglobulina que se haba formado en el Aparato de Golgi se almacena en la matriz del folculo
tiroideo. El coloide se llena por un proceso de secrecin celular, que es un tipo de exocitosis. Para que
la tiroxina se cargue de yodo tiene que participar la tiroglobulina. Cuando se elevan los niveles de
TSH (hormona estimulante de la tiroides), se comienza a formar una vescula pinocitica, ingresando
con ella a la clula un poco de tiroglobulina del coloide tiroideo. Despus se observa que los lisosomas
acuden y comienzan a degradar la tiroglobulina, que se transforma en T3 y T4, estas formas activas
de la hormona tiroidea llegan al otro polo de la clula y por exocitosis salen al exterior, cayendo al
torrente sanguneo.
5. Crinofagia.

Ocurre por ejemplo en las clulas que producen Prolactina, hormona hipofisiaria que estimula la
secrecin de leche materna. La prolactina se activa a nivel de los lisosomas, de donde sale para llegar
144
hasta las glndulas mamarias, dando la seal para que secreten leche. Se han hecho experimentos en
los cuales se retira la cra de ratas que recin las han tenido y que presentan niveles de prolactina
bastante elevados, en estas ratas se observa que las vesculas cargadas de prolactina no salen de las
clulas que la han producida, por lo que no se secretan, a los 4 das se observa que las vesculas
conteniendo prolactina se han fusionado a lisosomas, encontrndose la hormona en proceso de
degradacin. Este proceso heterofgico se denomina Crinofagia.

DIGESTION AUTOFAGICA.
Es el fenmeno referido a la digestin del propio contenido celular. Ocurre en forma normal en el
caso de clulas sometidas a una serie de factores adversos. Por ejemplo, en un corte citolgico de
cualquier tejido de una rata que haya estado en ayunas se observa porciones de citoplasma o mitocon-
drias en el R.E., lo que indica que la clula responde al ayuno tratando de mantener su integridad aun a
costa de digerir pedazos de su propia estructura. La autofagia tambin se produce como un proceso
de remodelacin fisiolgica. Por ejemplo, durante el desarrollo embrionario existen clulas que tienen
una determinada posicin, luego otra y finalmente desaparecen al haber cumplido su rol fisiolgico, su
desaparicin se produce gracias a que lisosomas nacidos del R.E. las digieren, es decir, hay una
autodigestin de carcter programado. De manera similar, existen clulas que tienen que morir antes
que el individuo adquiera la posicin bpeda, lo cual se realiza tambin por autofagia. Tambin hay
autofagia como respuesta patolgica, por ejemplo en los casos de tratamiento peridico con rayos X, lo
que permite observar una multiplicacin de vacuolas autofagicas en los tejidos irradiados.

DIGESTION EXTRACELULAR.
En los huesos existen dos tipos de clulas: los osteoblastos y los osteoclastos, estos ltimos derivados
de los primeros. A medida que se crece, los osteoblastos van siendo remodelados, los lisosomas
primarios de los osteoclastos se fusionan a su membrana plasmtica y vierten su contenido, estas
enzimas destruyen al hueso para darle forma.

INTERVENCION EN PROCESOS PATOLOGICOS
Los lisosomas tienen tambin gran importancia en los procesos patolgicos. Las clulas que se ven
forzadas a englobar grandes cantidades de sustancias extraas tendern a acumular estos materiales
en sus lisosomas con el consiguiente detrimento de su vitalidad. Los sustitutivos del plasma, como
dextrano o polixinilo, producen este resultado. En la silicosis ocurre lo mismo con la slice. En el caso de
anomalas genticas, como la deficiencia de enzimas degradantes del glucgeno, ste se acumula en los
lisosomas (que carecen de estas enzimas por el defecto mencionado) llegando a producir la muerte
(glucognesis de Pompe). Otra enfermedad congnita lisosmica es la enfermedad de Fabry, debida a la
ausencia de la enzima lisosmica galactosidasa alfa, requerida para el catabolismo de esfingolpidos. Hay
productos qumicos que actan sobre la membrana de los lisosomas, algunos existen ordinariamente en
el organismo y es muy posible que regulen procesos de autofagia. La vitamina A y algunas hormonas son
agentes labilizantes de la membrana de los lisosomas y actan sobre todo en las clulas del tejido
conjuntivo, provocando que la membrana del lisosoma se rompa fcilmente y libere las hidrolasas. Por el
145
contrario, la cortisona e hidrocortisona son estabilizantes de la membrana lisosmica, a esto parece
deberse su conocido efecto antiinflamatorio.
En la enfermedad conocida como gota se producen cristales de urato en el lquido sinovial de las
articulaciones. Los leucocitos neutrfilos (polimorfonucleares) fagocitan estos cristales que rompen la
membrana del lisosoma. As se digieren los neutrfilos y se vierten hidrolasas a los tejidos (lquido
sinovial) provocando una reaccin inflamatoria.
El sndrome de Hurler se produce por la falta de fucosidasa, acompandose de retardo mental
marcado, el sndrome de Tay Sachs se debe a la falta de exosaminidasa, se acompaa de retardo mental
y malformaciones corporales. Se presentan de 14 a 15 sndromes asociados a la falta de enzimas
lisosomales.

ORIGEN DE LOS LISOSOMAS.
Las enzimas lisosmicas son glucoprotenas con oligosacridos unidos a N que muestran el rasgo poco
habitual, pero comn a todas ellas, de poseer un residuo de manosa fosforilada. Estas enzimas se
sintetizan en el retculo endoplasmtico rugoso y pasan al compartimiento Cis del complejo de Golgi,
donde pierden alguno de los residuos de manosa incorporados en el retculo endoplasmtico rugoso, y las
dos manosas terminales incorporan un radical fosfato que sirve de marcador. La superficie luminal de la
cara Trans del complejo de Golgi posee receptores para esta manosa fosforilada, con lo que las enzimas
lisosmicas quedan fijadas a esta membrana. Desde esta cara Trans del complejo de Golgi, las enzimas
lisosmicas se emiten en vesculas con cubierta de clatrina constituyendo los lisosomas primarios.
Estas vesculas pierden pronto la cubierta de clatrina y pueden fusionarse con otros lisosomas
primarios ya existentes o incorporarse al compartimiento endolisosomal, fusionndose con los lisosomas
secundarios que actan en ese compartimiento. Para que las vesculas con enzimas lisosmicas alcancen
el compartimiento endolisosomal, no basta con el marcador manosa-fosfato de estas enzimas y el
receptor de la membrana del Golgi para este marcador, hace falta tambin que las membranas del
compartimiento endolisosomal presenten en su superficie receptores para las vesculas que transportan
las enzimas lisosmicas. Al producirse la fusin, las hidrolasas pierden el marcador de manosa-fosfato,
lo que puede ayudar a retener estas enzimas en el lisosoma, evitando que sean cogidas de nuevo por
membranas con receptores durante el reciclaje de membranas.
146

Para estudiar las interrelaciones entre los marcadores manosa-fosfato, sus receptores en las
membranas de la cara Trans del complejo de Golgi, y los receptores de las membranas del
compartimiento endolisosomal para las vesculas que son transportadas hacia l, se ha experimentado
aadiendo enzimas lisosmicas con su marcador manosa-fosfato al medio de cultivo. Las clulas
normales, que tambin tienen receptor para este marcador en la membrana plasmtica, incorporan por
endocitosis estas enzimas, las cuales, ya en el citoplasma, se dirigen al compartimiento endolisosomal,
con el que se fusionan gracias a los receptores de este compartimiento para las vesculas lisosmicas.
Es decir, la membrana plasmtica se comporta como la de la cara Trans del complejo de Golgi, de la cual
proviene.
Sin embargo, en clulas cuyas enzimas lisosmicas carecen del marcador manosa-fosfato por una
enfermedad congnita, las enzimas sintetizadas por el complejo de Golgi son segregadas directamente
al espacio extracelular en vez de alcanzar el compartimiento endolisosomal. Esto ocurre porque el
complejo de Golgi, aunque posee los receptores adecuados, no reconoce estas enzimas como lisosmicas
al carecer de marcador y las dirige por defecto hacia la superficie celular. Las enzimas lisosmicas
carentes de marcador y suministradas en el medio no penetran en estas clulas. En aquellas clulas
cuyas enzimas lisosmicas poseen el marcador manosa-fosfato pero el complejo de Golgi no posee los
receptores para este marcador, las enzimas lisosmicas sintetizadas por la propia clula son tambin
liberadas directamente al exterior porque el complejo de Golgi, que carece de los receptores
adecuados, no empaqueta las enzimas con destino al compartimiento endolisosomal y, por defecto,
tambin eligen la ruta de la secrecin constitutiva. Del mismo modo, las enzimas lisosmicas con
marcador vertidas en el medio no entran en la clula, pues su membrana plasmtica carece de
receptores para estas enzimas. Finalmente, en las clulas que, aun teniendo receptores para el
marcador lisosmico en la membrana plasmtica y en el complejo de Golgi, no tienen receptores para las
vesculas lisosmicas en las membranas del compartimiento endolisosomal, se observa que las enzimas
vertidas en el medio entran en la clula, pero no permanecen en ella y vuelven a salir. Tambin
abandonan la clula las enzimas lisosmicas sintetizadas por el complejo de Golgi.

PEROXISOMAS
Los peroxisomas, junto con las mitocondrias, son organelos celulares que desempean un papel
primordial en la utilizacin del oxgeno. Morfolgicamente son parecidos a los lisosomas, es decir son
partculas esfricas, limitadas por una membrana, de un dimetro variable entre 0.3 y 1.5 m y con un
contenido enzimtico especifico. Sin embargo, difieren mucho funcionalmente de los lisosomas, pues las
enzimas que contienen no son hdrolasas acidas, sino enzimas que intervienen en el metabolismo del
H
2
O
2
y colaboran con las mitocondrias y cloroplastos en algunas funciones.
Los peroxisomas se observaron por primera vez en el rin y el hgado de roedores, hacia 1950, cuando
comenzaron los estudios de la clula con el microscopio electrnico, y se les denomin microcuerpos. En
el hgado se distribuyen irregularmente, a diferencia de los lisosomas, que ocupan una posicin
pericanalicular. Posteriormente, los peroxisomas se fueron localizando en muchos tipos celulares de
vertebrados, protozoos, levaduras y en algunos tipos celulares de vegetales superiores, como en tejidos
verdes que realizan la fotorrespiracin y en el endosperma, que contiene abundante grasa y constituye
147
una reserva alimenticia para el desarrollo del embrin tras la germinacin de la semilla. Con el tiempo se
han observado en casi todos los tipos celulares (excepto eritrocitos), hasta el punto que se consideran
un organelo habitual de las clulas; si bien no siempre se pueden identificar por su aspecto morfolgico,
siendo adems necesarias tcnicas especiales para ponerlos de manifiesto. As, en enterocitos son muy
abundantes, pero pasan desapercibidos por su pequeo tamao (alrededor de 0.2 m) y la ausencia de
cristales.
Vistos con el microscopio electrnico los peroxisomas presentan un contenido granular fino y pueden
ser identificados por tcnicas citoqumicas especficas. Una de las ms empleadas es la adicin de
diaminobenzidina y H
2
O
2
, que reaccionan con la intervencin de una de las enzimas del peroxisoma, la
catalasa. Como resultado de la oxidacin de la diaminobenzidina, se produce un precipitado en los
peroxisomas que es visible incluso al microscopio ptico. En el interior de algunos peroxisomas pueden
observarse estructuras cristalinas que generalmente corresponden a la enzima oxidasa de urato. La
estructura de estos nucleoides cristalinos vara segn el tipo celular; en general, los nucleoides
aparecen formados por estructuras en forma de tbulos, unos de 10 y otros de 4.5 nm de dimetro,
formando distintos tipos de redes. Los peroxisomas se aslan inicialmente en la misma fraccin celular
que los lisosomas pero, como son ms pesados que stos, al volver a centrifugar en gradiente de
sacarosa, los peroxisomas quedan ms al fondo que los lisosomas, pudiendo ser as separados de stos.

FUNCIN
Actividad enzimtica
Los peroxisomas se denominan as porque contienen enzimas que utilizan el oxgeno molecular para
eliminar tomos de hidrgeno de sustratos especficos, a travs de una reaccin oxidativa que produce
H
2
O
2
. La reaccin global sera: RH
2
+ O
2
=> R + H
2
O
2
, siendo RH
2
el sustrato oxidable (aminocidos,
cetocidos alfa, cido rico, alantona, acil-CoA, enoil-CoA, cido gliclico, cido glioxlico, etc.).
Las enzimas que catalizan esta reaccin son: la oxidasa de aminocidos, la oxidasa de hidroxicidos alfa
y la oxidasa de urato, denominadas de acuerdo con el sustrato.
El H
2
O
2
resultado de la reaccin es un producto altamente txico que es eliminado por otra enzima del
peroxisoma, la catalasa, bien directamente, segn la reaccin: 2 H
2
O
2
=> 2H
2
O + O
2
, o utilizando este
H
2
O
2
para oxidar diversas sustancias, como alcoholes, fenoles, cido frmico, formaldehdo y
acetaldehdo, segn la reaccin: H
2
O
2
+ R'H
2
=> R' + 2H
2
O, siendo R'H
2
una de las sustancias
mencionadas.
En los peroxisomas del rion e hgado se han localizado estas cuatro enzimas. La ms abundante es la
catalasa, que constituye el 40 % de la protena total de los peroxisomas del hgado. No obstante, estas
cuatro enzimas no aparecen siempre en los peroxisomas de todos los tejidos, pero al menos la catalasa y
oxidasa de hidroxicidos alfa estn siempre presentes. A diferencia de las oxidaciones respiratorias
mitocondriales, que consumen tambin oxgeno, las que se desarrollan en los peroxisomas no estn
acopladas a la fosforilacin del ADP en ATP.
Mediante su dotacin enzimtica, variable de unos tejidos a otros, los peroxisomas pueden intervenir en
diversas vas metablicas, que difieren segn los organismos y el tipo de tejido. Las funciones
especficas mejor conocidas son: el catabolismo de las purinas, el metabolismo de los lpidos y el
metabolismo del cido gliclico.
148
Catabolismo de las purinas
Los cidos nucledos viejos son degradados en sus constituyentes por nucleasas especficas: primero en
nucletidos y, despus, en bases pricas y pirimidnicas. Estas bases, o bien son reutilizadas para la sn-
tesis de nuevos cidos nucleicos, o bien son degradadas. En la degradacin de las bases pricas (adenina
y guanina) intervienen diversas enzimas peroxismicas. El H
2
O
2
que se libera con estas oxidaciones es
descompuesto por la catalasa. En muchas aves y algunos mamferos, incluidos los primates y el hombre,
el producto final de la degradacin es el cido rico. En otros mamferos, tortugas y moluscos, el cido
rico es degradado a alantona que, en algunos peces telesteos, contina su degradacin hasta cido
alantoico. En muchos peces, anfibios e invertebrados marinos el cido alantoico es degradado a cido
glioxlico y urea. Esta ltima puede ser finalmente degradada a amonaco.

Metabolismo de los lpidos
En hgado de rata, en el protozoo Tetrahymena y en las semillas de ricino, se ha comprobado que los
peroxisomas intervienen en el metabolismo de los lpidos mediante los siguientes procesos, aunque no
todos ellos ocurren en todos los organismos.
oxidacin de los cidos grasos
Se piensa que aproximadamente un 25 % de los cidos grasos se degradan en peroxisomas y el resto en
mitocondrias. En ambos orgnulos este proceso de degradacin se denomina oxidacin y conduce a la
formacin de acetil-CoA. La diferencia reside en que, mientras que en las mitocondrias la primera
reaccin oxidativa es catalizada por una deshidrogenasa, en los peroxisomas esta oxidacin la realiza
una oxidasa flavinica. La oxidacin del acil-CoA por el oxgeno molecular forma H
2
O
2
, que es
descompuesta por la catalasa. Los acetil-CoA formados pasarn a diferentes rutas (biosntesis de
azcares, ciclo de Krebs).
Conversin de grasa en carbohidratos: ciclo del glioxilato
El acetil-CoA producido en la degradacin de cidos grasos puede seguir una ruta melablica importante
en algunos rganos vegetales. Esta va metablica se ha estudiado con profundidad en la semilla de
ricino, en la cual, en el momento de la germinacin, la grasa de endosperma se convierte en glcidos. Las
molculas de acetil-CoA producidas en la degradacin de los cidos grasos en el peroxisoma se utilizan
para producir cido succnico, en el proceso conocido como ciclo del glioxilato. De ah el nombre de
glioxisomas dado a los peroxisomas de estas semillas que contienen las enzimas que intervienen en ese
ciclo y que son sintetizadas en el momento de la germinacin o poco antes. El cido succnico producido
en este ciclo abandona los peroxisomas y penetra en las mitocondrias, en cuya matriz es oxidado por las
enzimas del ciclo de Krebs a cido oxalacetico, que abandona las mitocondrias y se convierte en glucosa
en el hialoplasma. Peroxisomas que realizan una funcin similar se han demostrado no slo en vegetales,
sino tambin en algunos flagelados, como Englena, que utilizan los cidos grasos de cadena corta como
fuente de carbohidratos.
149

Metabolismo del cido gliclico
En rganos verdes de vegetales, en los que se verifica el proceso de fotorrespiracin, en abundancia de
luz y oxgeno y baja tensin de CO
2
se produce cido gliclico, que es un subproducto metablico de los
cloroplastos producido por fijacin de O
2
en la ribulosa-1-5-difosfato. El cido gliclico entra en los
peroxisomas y es oxidado a cido glioxlico, que se convierte en glicina, que pasa de los peroxisomas a
las mitocondrias donde se transforma en serina y CO
2
.

Otras funciones
Las reacciones oxidativas de los peroxisomas son muy importantes en el hgado y rion, cuyos
peroxisomas detoxifican gran cantidad de molculas txicas que entran en la circulacin, como, por
ejemplo, el etanol. Casi la mitad del etanol ingerido por el organismo es oxidado a acetaldehdo en los
peroxisomas del hgado.

ORIGEN
Se ha observado una relacin entre los peroxisomas y el retculo endoplasmtico rugoso. Es muy
frecuente que los peroxisomas aparezcan en la proximidad del retculo endoplasmtico rugoso; incluso
se han publicado imgenes de microscopa electrnica que muestran inequvocamente conexiones entre
las membranas del retculo endoplasmtico rugoso y las de vesculas que contienen la estructura
cristalina caracterstica de algunos peroxisomas. De ah que se piense que los peroxisomas pueden
originarse como una gemacin del retculo endoplasmtico rugoso desprovista de ribosomas y en la que
se almacenaran las enzimas peroxismicas. Sin embargo, est suficientemente demostrado que las
enzimas peroxismicas no se sintetizan en el retculo endoplasmtico rugoso, sino en los ribosomas
libres.
Estas protenas estn provistas de un peptido seal aminoterminal, de al menos tres aminocidos, que es
reconocido por receptores especficos de la membrana del peroxisoma. Estos receptores se
150
sintetizaran por el retculo endoplasmtico rugoso, al originar la membrana del peroxisoma, quedaran
alojados en el lado citoslico de dicha membrana y reconoceran las enzimas peroxismicas
permitindolas entrar. Como las mitocondrias y cloroplastos, los peroxisomas pueden realizar fisin
previo crecimiento. Segn estudios radioautogrficos, la vida media del peroxisoma es de 4.5 das, y se
destruyen por autofagia.

VACUOLA VEGETAL
En las clulas vegetales meristemticas existen numerosas vesculas y vacuolas de pequeo tamao
(provacuolas), que slo se aprecian bien con el microscopio electrnico. Al crecer estas clulas, las
provacuolas adquieren mayor tamao y se fusionan hasta formar una gran vacuola central, que en
algunas clulas, como las parenquimticas, llega a ocupar ms del 90 % del volumen celular.
La vacuola se halla limitada por una membrana citoplasmtica, que se denomina tonoplasto, con
estructura trilaminar, de menor espesor que la membrana plasmtica; es decir, como las membranas
citoplasmticas, aunque en algunos casos se ha descrito que su espesor es igual al de la membrana
plasmtica. Mediante criofractura se observa una imagen similar a la de la membrana plasmtica, el
examen de cortes al microscopio electrnico muestra que la hemimembrana interna es ms gruesa que
la externa, al igual que ocurre en la membrana plasmtica. En la vacuola hay un jugo vacuolar de
apariencia amorfa incluso con microscopa electrnica; pero a veces tambin pueden observarse
estructuras de mayor tamao, cristalinas o no, segn los productos que almacene la vacuola, y que
guardan relacin con su funcin.

Funciones
La vacuola lleva a cabo funciones fisiolgicas importantes, que podemos resumir en las siguientes:
Facilitar el intercambio con el medio externo
Como el intercambio de sustancias del interior de la clula con el medio externo slo puede realizarse a
travs de la membrana plasmtica, cuando las clulas animales desean aumentar dicho intercambio,
cambian de forma aumentando la relacin superficie/volumen, como ocurre, por ejemplo en las
microvellosidades. En las clulas vegetales, la gruesa pared celular no permite esa modificacin, y el
problema se resuelve gracias a la vacuola. Si sta no existiera, la clula tendra todo el citoplasma y
organelos ocupando el mismo volumen que ahora tiene, pero con una superficie de dimensiones mucho
ms reducidas. Al aparecer la vacuola, el volumen del citoplasma no aumenta, pero se extiende ocupando
una fina capa entre la pared celular y la vacuola. De esta manera, la clula vegetal se hace grande y
desarrolla una gran superficie de membrana plasmtica en relacin con el pequeo volumen que ocupa el
citoplasma, si no incluimos en este volumen el que ocupa la vacuola. Esa misma disposicin aumenta la
eficacia de los cloroplastos, evitando en gran medida que se hagan sombra unos a otros.
Turgencia celular
La vacuola se encuentra a una gran presin osmtica debido a la alta concentracin de azcares y sales
que contiene. Su membrana presenta particularidades especiales de permeabilidad y transporte. Esto
hace que la clula se mantenga turgente, pues el agua tiende a penetrar en la vacuola para equilibrar la
presin osmtica. El citoplasma queda as apretado contra la pared celular.
151
La presin de turgencia de una vacuola puede sufrir cambios controlados como respuesta a
fluctuaciones ambientales. La presin se incrementa al aumentar la concentracin de solutos, bien en el
hialoplasma (mediante la importacin de solutos desde el espacio extracelular a travs de la membrana
plasmtica), o bien directamente en la propia vacuola (mediante la sntesis de estos solutos por
hidrlisis de sustancias almacenadas). Cuando estos mecanismos actan en sentido inverso causan la
disminucin de la presin. El control de la presin de turgencia est regulado por receptores de la
membrana plasmtica que responden a los cambios de presin induciendo un bombeo de K
+
hacia el
citoplasma (para contrarrestar la disminucin de la presin) o la difusin de K
+
hacia el exterior a favor
de gradiente (para contrarrestar el aumento de presin).
La presin de turgencia vara ampliamente de unas plantas a otras: desde 0,5 hasta 50 atmsferas. En
plantas de hbitat salino se requiere una alta concentracin de solutos para aumentar la turgencia. Un
mecanismo rpido para aumentar la presin sera la incorporacin de K
+
; sin embargo, altas
concentraciones de este ion no seran viables y, por eso, estas plantas acumulan solutos orgnicos en las
vacuolas que pueden alcanzar concentraciones de hasta 0.5 M sin daar el metabolismo. Entre estos
solutos estn los polifosfatos, compuestos polihidroxlicos como el glicerol y el manitol, aminocidos
como la prolina, o derivados N-metilados de aminocidos como la glicinbetana.
La vacuola regula tambin las concentraciones de determinados iones y el pH del hialoplasma, que
alcanzan valores diferentes a los encontrados en la vacuola. La concentracin de Na
+
dentro de la
vacuola es entre 4 y 5 veces mayor que en el hialoplasma, debido a una bomba de Na
+
presente en el
tonoplasto. Cuando desciende el pH del medio, la vacuola bombea iones H
+
hacia su interior para ejercer
un efecto tampn.
Los cambios en la turgencia pueden generar alteraciones en la forma celular si la pared es plstica,
como ocurre en los estomas. Durante el da los estomas estn abiertos y la luz activa bombas de K
+
de la
membrana plasmtica para mantener alta la presin de turgencia. Por la noche se invierte el proceso y
se cierran los estomas. Cambios similares son los responsables de movimientos de la hoja de Mimosa
pudica, del cierre de las trampas en las hojas de ciertas plantas carnvoras y de los movimientos de
partes florales en la polinizacin de algunas plantas.
Digestin celular
En el interior de la vacuola hay enzimas lisosmicas. De este modo, la vacuola se comporta como
fagosoma y citolisosoma.
Acumulacin de sustancias de reserva y subproductos del metabolismo
En la vacuola hay agua y determinadas sustancias que pueden estar disueltas, floculentes o cristalinas.
Entre estas sustancias estn:
Aniones y cationes, como: Cl
-
, SO
2-
4
PO
3-
4
, Na
+
, K
+
, Ca
++
y Mg
++
.
Hidratos de carbono:
- Monosacridos: Los ms abundantes son las hexosas, como la glucosa (en uvas), fructosa (en
melocotones), galactosa, manosa y sorbosa.
- Disacridos: Como sacarosa y maltosa (que se forma por el desdoblamiento de polisacridos,
especialmente del almidn).
- Polisacridos: No cuentan ni el almidn (que est en los plastidios), ni la celulosa (que est en la
pared celular). El ms abundante es la inulina, que por hidrlisis da fructosa. El glucgeno slo es
frecuente en hifas de hongos y algunos lquenes.
Aminocidos: Son eslabones en la elaboracin de materias proteicas que tambin se almacenan en
las vacuolas. El ms difundido es la asparagina. En menor cantidad existen leucina, tirosina y cido
glutmico.
Polipptidos y protenas: Incluyen:
- Enzimas: Como la amilasa (que degrada el almidn en dextrina y luego en maltosa), y diversas
lipasas y proteasas. Muchos vegetales contienen en las vacuolas protenas que inhiben las enzimas
que digieren protenas en animales herbvoros (como el factor inhihidor 1), constituyendo una
defensa contra su voracidad. Son muy abundantes en las hojas de solanceas. Pueden observarse
con el microscopio electrnico en cortes como partculas floculentas.
- Granos de aleurona: Son reservas proteicas que llenan las vacuolas y son visibles incluso al
microscopio ptico. Forman granos regulares (cristaloides proteicos) o irregulares. En el ricino,
sobre el cristaloide hay grnulos irregulares que forman el globoide. Se encuentran en gran
152
proporcin en el endosperma de semillas y pueden estar en las vacuolas de estas clulas durante
aos hasta que, al germinar la semilla, se hidrolizan las protenas sirviendo de alimento al embrin.
Alcaloides y glucsidos: Se consideran productos de degradacin de la actividad metablica del
citoplasma celular y se almacenan en la vacuola.
Pigmentos antocinicos: De naturaleza glucosdica. Dan color rojo a corolas, hojas, algunos rganos
caulinares y subterrneos.
Pigmentos flavnicos: Parecidos a los anteriores. Se encuentran en ptalos y dan color amarillo
combinados con xantofila.
Taninos: Dan precipitados azules o negros en presencia de sales frricas. Con dicromato potsico
dan precipitados pardos. Se encuentran unidos a materias proteicas a las que vuelven insolubles e
imputrescibles; de ah su utilidad para teir pieles. Se encuentran en el parnquima, al que dan un
color pardo. Derivan del cido glico o elgico en combinacin con glucsidos. Se consideran un
producto de excrecin de la planta.
cidos orgnicos y sus sales: Presentes en el parnquima de la hoja, fruto y rizomas. Los ms
frecuentes son los cidos ctrico, mlico, tartrico y oxlico. Son muy abundantes en las plantas
suculentas. El cido oxlico forma cristales en presencia de Ca
++
(oxalato clcico). Si cristaliza con
una molcula de agua, los cristales son monoclnicos. Se observan como agujas muy finas, se
encuentran en bulbos de liliceas y en las hojas de Aloe sp., y se denominan rafidios. Pero si
cristalizan con tres molculas de agua, los cristales son del sistema rmbico. Frecuentemente estos
cristales forman bipirmides sobre cuyas caras se depositan pirmides. El conjunto forma una drusa
o macla, frecuente en todas las partes de la planta. Algunos de estos compuestos tienen una funcin
claramente metablica. Las plantas suculentas abren sus estomas por la noche, cuando la
concentracin de CO
2
ambiental es menor que durante el da, y el CO
2
es incorporado en cido mlico
que se almacena en las vacuolas. Durante el da, cuando hay energa luminosa, el cido mlico es
transformado en azcares mientras se mantienen los estomas cerrados.

La mayora de las vacuolas se forman por la fusin de mltiples vesculas membranosas. El organelo no
posee una forma definida, su estructura vara segn las necesidades de la clula. Desde hace mucho
tiempo se ha considerado que las vacuolas se forman del retculo endoplasmtico. Cuando se evidenci
que eran muy parecidas a los lisosomas de las clulas animales se lleg a la conclusin de que las
vacuolas de por lo menos algunas clulas vegetales tenan un origen similar al de los lisosomas animales.
La formacin de los lisosomas est asociado a una regin del citoplasma muy especializada llamada
GERL, formado por el complejo de Golgi, el retculo endoplasmtico y los lisosomas. Esta asociacin de
membranas se ha encontrado tambin en algunas clulas vegetales, por lo que el origen de las vacuolas
podra ser el mismo que el de los lisosomas animales.

PLASTOS O PLASTIDIOS
Son organelos exclusivos de clulas vegetales y estn relacionados con procesos metablicos
primordiales, pues son capaces de sintetizar y almacenar sustancias. Se encuentran en la mayora de las
clulas vegetales superiores e inferiores, en el curso de la evolucin, tanto en las plantas superiores
como en los vegetales terrestres, se ha impuesto la forma lenticular en los plastos, con un dimetro que
oscila de 4 a 8 micras. Hay diversos tipos de plastidios, pero todos tienen en comn la existencia de una
doble membrana. Pueden clasificarse segn su aspecto y funcin en:
Indiferenciados, que pueden ser:
153
- Proplastos: se cree que son el origen de todos los dems.
- Etioplastos: provienen de proplastos que, en vez de diferenciarse en presencia de la luz para dar
cloroplastos, se diferencian en la oscuridad dando lugar a etioplastos.
Diferenciados, se clasifican en:
- Cromatoforos fotosintticamente activos, que son los de los cloroplastos verdes, los feoplastos
(pardos) y los rodoplastos (rojos).
- Cromatforos fotosintticamente inactivos, conocidos como cromoplastos y son generalmente rojos
y amarillos.
- Leucoplastos: son incoloros y fotosintticamente inactivos; estn especializados en el almacenaje de
sustancias y existen varios subtipos, segn cul sea la sustancia almacenada:
Amiloplastos (almidn).
Oleoplastos (aceites).
Proteinoplastos (protenas).
Los plastidios no slo realizan fotosntesis y almacenamiento; tambin se utilizan para el metabolismo
intermedio, pues producen la mayor parte de la energa y poder reductor, en forma de ATP y NADPH,
necesarios para las reacciones biosinteticas de la planta. La sntesis de bases pricas y pirimidinicas,
as como de muchos aminocidos y de todos los cidos grasos de la planta, tiene lugar en los plastidios.
Los plastos se encuentran limitadas del resto del citoplasma por dos membranas estructuralmente
distintas. A menudo estn coloreadas por pigmentos de carcter liposoluble. Todos los plastidios en su
fase juvenil, denominados en esa fase protoplastidios, contienen hasta un 3% de su peso en seco de
ADN, en estado adulto tienen un 1%.
Los plastos se multiplican por biparticin. El ADN de los plastidios se presenta como una molcula
gigante circular, que tiene de 120.000 a 200.000 pares de bases, los protoplastos crecen junto con las
clulas meristemticas. Los protoplastos se desarrollan en el interior, mediante la formacin de
repliegues en su membrana interior, adquiriendo gran superficie, en esta superficie interna, los
pigmentos fotosintetizadores se sitan de forma ordenada. En la oscuridad los protoplastos de los
vegetales se pueden transformar en estruturas cristalinas llamadas etioplastos, que por el efecto de la
luz, pueden a su vez transformarse en cloroplastos. Los plastos que estn daados o que son seniles
presentan a menudo en su interior gotas de lpidos, conocidas con el nombre de plastoglbulos.
En la reproduccin sexual de los organismos, los plastidios se transmiten mediante los gametos, en
muchos casos a travs del gameto femenino. El ADN de los plastos es especfico y se denomina ADN-
plastidial, difiere del ADN-nuclear por la relacin entre las bases y grosor, es un filamento doble que se
replica por una ADN-plastidial-polimerasa especfica, y tambin existe una ARN-plastidial-polimerasa
especfica para la transcripcin. Una parte de las proteinas del plasto se sintetiza a partir del ADN-
plastidial de 40 nm de longitud, y otra parte del ADN-nuclear. Los genes de los plastos forman el
plastoma, mientras que el conjunto de plastos de una clula se llama plastidoma. Los ribosomas de los
plastos son ms pequeos que los del citoplasma, con una velocidad de sedimentacin de 70 s. Estos
ribosomas plastidiales son parecidos a los de los procariontes, y sensibles como ellos a determinados
antibiticos, como el cloroanfenicol o la limcomicina.

CLOROPLASTOS
Los cloroplastos son los organelos que realizan la fotosntesis mediante el pigmento clorofila que poseen
en gran cantidad, en algunos casos la clorofila puede quedar acompaada de otros pigmentos, como por
ejemplo en las algas pardas (feoficeas), existen feoplastos donde la clorofila est enmascarada por
carotenoides pardos, como la fucoxantina, en las algas rojas (rodoficeas), hay rodoplastos donde la
clorofila est enmascarada por carotenoides de color rojizo, como la ficoeritrina-roja y la ficocianina-
azul. Son muy abundantes en las clulas vegetales superiores diferenciadas, en las que se observan
situados en la periferia, alrededor de la gran vacuola central, su nmero es muy variado de unos lugares
a otros de la planta, y tambin depende del tejido o tipo celular en el que se encuentran. En el
parnquima cloroflico o asimilador son muy abundantes, contndose hasta 30 a 40 cloroplastos por
clula, y su posicin vara dentro de sta en relacin con la luz. Con luz tenue, los cloroplastos se
disponen paralelamente a la cara de la clula donde incide la luz, buscando la mxima absorcin de luz.
Por el contrario, con luz intensa, los cloroplastos emigran disponindose junto a las paredes celulares y
orientadas paralelamente a la luz incidente.
154
En los vegetales inferiores los cloroplastos muestran formas muy variables: adquieren forma espiral en
Spirogyra, estrellada en Zygnema, en herradura en Chlamydomonas. y semicilndrica en Ulothrix.
Estructura de los cloroplastos.
Los cloroplastos poseen una estructura con forma de disco, el dimetro oscila entre 1 a 3 micras, y un
espesor de 1 a 2 micras. Cada cloroplasto se encuentra separado del hialoplasma por 2 membranas
concntricas de 60 de espesor, la membrana interna y la externa del cloroplasto. En el interior de
esta envuelta se encuentra el estroma, y en el estroma se disponen un conjunto de estructuras
aplanadas y alargadas llamadas tilacoides o lamelas. La pared de los tilacoides se forma por una
membrana de 70 de espesor, y as se puede distinguir una zona intermembranosa entre las dos
envueltas del cloroplasto y el interior del tilacoide, espacio intralamelar o lculo. Las membranas de los
tilacoides se asientan segn el eje principal del plasto, dando dos tipos de estructuras, una formada por
discos aplastados de 0.3 a 0.6 micras de dimetro, que se apilan unas sobre otras, originando los grana,
entonces se dice que estn formadas por los tilacoides de los grana; y el otro conjunto de estructuras,
estn limitando cavidades que se encuentran en el estroma de forma variable, y se conocen como los
tilacoides del estroma. Los grana se distinguen en las clulas vivas como zonas ms verdes dentro del
cloroplasto al verlo al microscopio.

En una clula, en cada cloroplasto suele haber de 40 a 60 granas, cada uno de los cuales est formado
aproximadamente por 10 tilacoides, la zona donde se unen los tilacoides y los grana se denomina zona de
transicin. La zona de los cloroplastos representa una superficie de 500 veces la de la membrana
externa de la envoltura. Los espacios intermembranosos y los intratilacoidales poseen un contenido ms
claro que el estroma, en el estroma hay una sustancia fundamental finamente granular, adems de
plastoglbulos que tienen un dimetro de 500 a 3000 , granos de almidn, fibrillas de ADN-plastidial,
que se agrupan en nucleoides de 30 a 40 de tamao, y plastorribosomas que tienen 170 de
dimetro.
Estructura de la envuelta
Las membranas de la envuelta de los plastos contienen un 60% de lpidos y un 40% de proteinas. Los
lpidos son talactolpidos, fosfolpidos y sulfolpidos en proporcin decreciente, tambin pueden
contener una pequea proporcin de pigmentos carotenoides, pero no clorofila. Las cadenas
polipeptdicas son diferentes de las de los tilacoides, entre estas proteinas estn la galactosil-
transferasa, que son enzimas que catalizan la sntesis de los glucoplpidos de las membranas, adems de
ser transportadores que controlan el paso de molculas entre el estroma y el hialoplasma.
Membranas de los tilacoides
Los microtbulos de los tilacoides se componen de un 38% de lpidos, un 12% de pigmentos y un 50% de
proteinas. Los lpidos son semejantes a los de la membrana de la envuelta, pero en proporciones
distintas. Los pigmentos son la clorofila, con un 10%, y los carotenoides, con un 2% de la masa total de
155
las membranas. Ambas son solubles en los solventes de los lpidos. Las clorofilas son complejos
porfirina-magnesio, estas molculas poseen un polo hidrfobo, que corresponde a un alcohol, el fitol, y
un polo hidrfilo que corresponde al ncleo tetrapirrlico. En los vegetales superiores, en las
membranas de los tilacoides existen dos tipos de clorofila, que difieren por el grupo situado en el
ncleo de la porfirina, en la clorofila 'a', hay un grupo metilo y en la clorofila 'b', un grupo formilo.
Existen tambin carotenoides, que son sobre todo carotenos y xantofilas. Los carotenos son largas
molculas hidrfobas, formadas por unidades de isopreno, cuyos extremos constituyen anillos de
cromatidios. Las xantofilas son derivados oxigenados de los carotenos. Las proteinas son de tres tipos:
las asociadas a las clorofilas, forman complejos proteina-clorofila; las constituyentes de la cadena
fotosinttica de transporte de electrones; y ATP-asas responsables de la fosforilacin.
Funcin de los cloroplastos.
La funcin principal del cloroplasto es realizar la fotosntesis. sta es un proceso anablico y
autotrfico primordial, del que depende la vida sobre la Tierra. Consiste en la conversin por los
organismos fotosintticos de la energa luminosa procedente del Sol en energa elctrica y despus en
energa qumica. Esta energa ser utilizada para formar materia orgnica propia o biomasa (glcidos) a
partir de molculas inorgnicas, como agua, CO
2
y sales minerales. El O
2
molecular, resultante de la
ruptura de molculas de agua que intervienen en el proceso, se desprende como producto de desecho.
La materia orgnica y el oxgeno que fabrican las plantas, son elementos que utilizan los otros seres
vivos como fuente de energa y materia.
La fotosntesis se puede representar mediante una ecuacin global:

En esta ecuacin el compuesto resultante (CH
2
O) representa a un monosacrido, por ejemplo, la glucosa.
La reaccin o ecuacin global de la fotosntesis en realidad, se lleva a cabo en dos etapas o fases distintas:
Fase luminosa: tiene lugar en presencia de luz. Durante esta fase tienen lugar dos procesos muy
importantes: la fotlisis del agua por la que se obtiene poder reductor en forma de coenzimas
reducidas (NADPH), y la fotosfosforilacin que produce ATP. El producto de desecho de esta fase es el
oxgeno molecular.
Fase oscura: no requiere la presencia de luz. Se produce la reduccin de la materia inorgnica a materia
orgnica gracias al poder reductor y al ATP obtenidos en la fase anterior.
Para comprender los acontecimientos que tiene lugar durante la fotosntesis es necesario conocer la
localizacin de los diferentes procesos en los cloroplastos. La ubicacin de los complejos moleculares
implicados en la fase luminosa es a nivel de la membrana tilacoidal y stos son: los fotosistemas, la
cadena de transporte de electrones y la ATP sintetasa. En el estroma tiene lugar la fase oscura de la
fotosntesis, es decir, se desarrolla el ciclo de Calvin.

156
Fase Luminosa.
Las reacciones de la fase luminosa de la fotosntesis se desarrollan de la siguiente manera:
Absorcin o captacin de la luz solar: es llevada a cabo por los pigmentos fotosintticos. stos son las
clorofilas y los carotenoides. Estos pigmentos junto a protenas especficas se encuentran agrupados
formando los llamados fotosistemas, que aparecen ubicados en las membranas tilacoidales de los
cloroplastos. La clorofila constituye el centro de reaccin del fotosistema y los dems pigmentos y
protenas el complejo denominada antena.
Transporte o flujo electrnico fotosinttico: Al chocar los fotones con el fotosistema son arrancados
electrones de la molcula. Estos electrones arrancados del centro de reaccin cargados con la energa
del fotn, son transportados por un conjunto de protenas transportadoras, situadas en la membrana
tilacoidal, hasta la coenzima NADP
+
, que se reduce a NADPH. En la cadena de transporte de electrones
funcionan intercalados dos fotosistemas:
- Fotositema I (FSI): Capaz de absorber luz de longitud <700 nm. Su centro de reaccin se denomina
P700 porque su mximo de absorcin se encuentra a 700 nm
- Fotosistema II (FSII): Capaz de absorber luz de longitud <680 nm. Su centro de reaccin se
denomina P680 porque su mximo de absorcin se encuentra a 680 nm.
Fotofosforilacin: es la formacin de ATP debida a la luz.
Para que tenga lugar la fase oscura de la fotosntesis se necesita NADPH y ATP. Segn la hiptesis
quimiosmtica de Mitchell, la energa liberada en el transporte de electrones se utiliza para bombear
protones, en contra de un gradiente, desde el estroma al espacio intratilacoidal. Estos protones
regresan al estroma a favor de la gradiente a travs del complejo enzimtico denominado ATP-asa, que
utilizar la energa liberada en el transporte para fosforilar el ADP y transformarlo en ATP.

Fase Oscura.
La fase oscura de la fotosntesis o ruta de asimilacin del CO
2
tiene lugar en la matriz o estroma de los
cloroplastos, tanto la energa en forma de ATP como el NADPH que se obtuvo en la fase fotoqumica se
usa para sintetizar materia orgnica por medio de sustancias inorgnicas. La fuente de carbono
empleada es el dixido de carbono, mientras que como fuente de nitrgeno se utilizan los nitratos y
nitritos, y como fuente de azufre, los sulfatos. Esta fase se llama oscura, ya que suele ser realizada en
la oscuridad de la noche.

157
Sntesis de compuestos de carbono: descubierta por el bioqumico norteamericano Melvin Calvin en los
aos 50, utilizando la tcnica de marcaje con istopos radiactivos, por lo que tambin se conoce con la
denominacin de Ciclo de Calvin, se produce mediante un proceso de carcter cclico en el que se pueden
distinguir varios pasos o fases.
En primer lugar se produce la fijacin del dixido de carbono o fase carboxilativa. En el estroma del
cloroplasto, el dixido de carbono atmosfrico se une a la pentosa ribulosa-1,5-bisfosfato, gracias a la
enzima RuBisCO (ribulosa 1,5 difosfato carboxilasa/oxidasa), y origina un compuesto inestable de seis
carbonos, que se descompone en dos molculas de cido-3-fosfoglicrico. Se trata de molculas
constituidas por tres tomos de carbono, por lo que las plantas que siguen esta va metablica se llaman
C3. Si bien, muchas especies vegetales tropicales que crecen en zonas desrticas, modifican el ciclo de
tal manera que el primer producto fotosinttico no es una molcula de tres tomos de carbono, sino de
cuatro (un cido dicarboxlico), constituyndose un mtodo alternativo denominado va de la C4, al igual
que este tipo de plantas.
Con posterioridad se produce la reduccin del dixido de carbono fijado o fase reductiva. Por medio
del consumo de ATP y del NADPH obtenidos en la fase luminosa, el cido 3-fosfoglicrico se reduce a
gliceraldehdo 3-fosfato. ste puede seguir dos vas, consistiendo la primera de ellas en regenerar la
ribulosa 1-5-difosfato (la mayor parte del producto se invierte en esto) o bien, servir para realizar otro
tipo de biosntesis: el que se queda en el estroma del cloroplasto comienza la sntesis de aminocidos,
cidos grasos y almidn. El que pasa al citosol origina la glucosa y la fructosa, que al combinarse generan
la sacarosa (azcar caracterstico de la savia) mediante un proceso parecido a la gluclisis en sentido
inverso.
La regeneracin de la ribulosa-1,5-difosfato o fase regenerativa/sintetica, se lleva a cabo a partir
del gliceraldehdo 3-fosfato, por medio de un proceso complejo donde se suceden compuestos de
cuatro, cinco y siete carbonos, semejante a ciclo de las pentosas fosfato en sentido inverso (en el ciclo
de Calvin, por cada molcula de dixido de carbono que se incorpora se requieren dos de NADPH y tres
de ATP).

UNIDAD ACADEMICA N 04: NCLEO CELULAR: ESTRUCTURA Y FUNCIONAMIENTO

NUCLEO INTERFASICO
La presencia del ncleo es una de las caractersticas que distingue a las clulas eucariotas. El ncleo
ocupa alrededor del 10% del volumen total de la clula y en l se halla confinado el ADN. Est
delimitado por la envoltura nuclear, compuesta por dos membranas concntricas una interna y otra
externa que se continan con el sistema de membranas del retculo endoplasmtico. Ambas membranas
aparecen perforadas por poros, a travs de los cuales el interior del ncleo se comunica con el citosol.
La envoltura nuclear se halla reforzada por dos armazones de filamentos intermedios, uno adosado a su
superficie interna la lmina interior y otro situado sobre la cara citoslica de la membrana externa. En
el compartimiento nuclear se localizan:
1. Cuarenta y seis cromosomas, cada uno formado por una larga molcula de ADN combinada con varas
protenas, particularmente con las protenas bsicas llamadas histonas.
2. Los distintos tipos de ARN (ARNm, ARNt, ARNr), que se sintetizan en el ncleo al ser transcriptos
los secretos del ADN correspondientes a sus genes. Las molculas de ARN salen hacia el citosol por
los poros de la envoltura nuclear. Debe sealarse que antes de abandonar el ncleo los ARN
experimentan una serie de cambios por ejemplo, cortes y empalmes en sus molculas conocidos
como procesamientos del ARN. Respecto de los ARNr, se transcriben en sectores particulares de
ciertos cromosomas. El ADN de estos sectores y el ARNr recin sintetizado componen una
estructura nuclear visible con el microscopio ptico, llamada nuclolo.
3. Diversas protenas, entre otras la ADN polimerasa, las ARN polimerasas, la protenas ribosmicas,
las que regulan la actividad de los genes, las que participan en el procesamiento del ARN, etc.
Todas estas protenas incluidas las histonas de los cromosomas son fabricadas en el citosol e
ingresan en el ncleo a travs de los poros de la envoltura nuclear.
4. Los elementos mencionados en los puntos anteriores se hallan dispersos en la matriz nuclear
(nucleoplasma), cuya composicin es prcticamente desconocida. Los motivos por los cuales las
molculas de ADN han sido confinadas en un compartimiento citoplasmticos, seran: 1) proteger al
158
ADN de posibles colisiones generadas durante los desplazamientos de las protenas motoras
asociadas a los microtbulos y a los filamentos de actina, esenciales para transportar a los
elementos citoplasmticos; 2) poder completar el procesamiento de los ARNm antes que se inicie la
sntesis proteica, ya que sta debe producirse a partir de ARNm plenamente formados.

ENVOLTURA NUCLEAR
Hemos dicho que la envoltura nuclear est compuesta por dos membranas concntricas. Estas, se unen a
un nivel de los poros, los cuales se hallan distribuidos ms o menos regularmente por toda la superficie
de la envoltura. La membrana externa de la envoltura nuclear se contina con la membrana del retculo
endoplasmtico. Ms an, comnmente su cara citoslica aparece asociada a un gran nmero de
ribosomas, y el espacio entre la membrana externa y la membrana interna conocido con el nombre de
espacio perinuclear se contina con la luz del retculo endoplasmtico. As como muchas protenas
elaboradas en los ribosoma asociados al retculo endoplasmtico se vuelcan en el interior de este ltimo,
las elaboradas en los ribosomas de la envoltura nuclear se vuelcan en el espacio perinuclear.

La membrana nuclear interna se halla sostenida por la lmina nuclear, que es un delgado enrejado de
filamentos intermedios dispuestos en las ms variadas direcciones. La lmina nuclear, cuyo espesor es
variable pero normalmente de 10 a 20 nm, se halla interrumpida slo a la altura de los poros. Sus
filamentos intermedios, compuestos por protenas llamadas lminas, al ensamblarse forman una
estructura bidimensional, a diferencia de los filamentos intermedios de queratina, desmina, vimentina,
etc., que en el citosol dan lugar a estructuras tridimensionales. Algunas protenas transmembranosas
presentes en la bicapa lipdica de la membrana nuclear interna sirven como puntos de anclaje para los
filamentos laminares. La lmina nuclear establece la forma generalmente esfrica de la envoltura
nuclear, y le otorga cierta rigidez. Como ocurre con la envoltura nuclear, la lmina nuclear se desarma al
comenzar la mitosis y se vuelve a armar en las dos clulas hijas cuando sta concluye, con la
consiguiente reparacin de la envoltura.

159

POROS NUCLEARES.
Los 3.000 a 4.000 poros presentes en la envoltura celulares son mucho ms que simples perforaciones
en las que la membrana interna se contina con la membrana externa. En efecto, en ellos un conjunto de
protenas forma una estructura llamada complejo del poro, que est integrada por los siguientes
componentes:
1. La pared del complejo, con forma de cilindro hueco abierto en sus dos extremos, est compuesta por
ocho columnas proteicas que atraviesan la envoltura nuclear de lado a lado. En conjunto, los extremos
citoslicos de dichas columnas componen un anillo a nivel de la membrana externa. Un anillo similar se
forma en el lado del poro que da al interior del ncleo, a nivel de la membrana interna. Debe sealarse
que los filamentos intermedios de la lmina nuclear se hallan ligados al complejo del poro por medio
del anillo interno y le confieren rigidez.
2. Protenas transmembranosas amarran las columnas proteicas a la bicapa lipdica de la envoltura
nuclear. As, por uno de sus extremos cada una de esas protenas se adhiere a la columna, su dominio
central atraviesa la bicapa y el extremo opuesto queda libre en la luz del espacio perinuclear.
3. El complejo muestra adems una serie de rayos que nacen en la cara interior de las columnas y se
proyectan hacia el centro del poro, por lo que reducen su dimetro real.
4. Finalmente, de los anillos externo e interno nacen fibrillas que se proyectan hacia el citosol y el
interior del ncleo, respectivamente. Las fibrillas que dan hacia el ncleo se unen por sus extremos, lo
cual genera una estructura con aspecto de jaula.

160
El dimetro total del complejo del poro es de unos 100 nm y su espesor de alrededor de 30 nm. Sin
embargo, sus distintos componentes convierten al poro en un canal cilndrico de apenas 9 nm de
dimetro, ubicado en el centro del complejo. A travs de l pasan iones y molculas de pequeo y gran
tamao, ya sea desde el ncleo hacia el citosol o en direccin opuesta. Los iones y las molculas
pequeas son transferidos en forma pasiva, sin gasto de energa. En cambio, las macromolculas por
ejemplo las protenas para poder pasar deben antes inducir la dilatacin del poro. La energa requerida
para que tenga lugar este singular transporte activo es tomado del ATP. Como vemos, el complejo del
poro se comporta como un diafragma, que se abre o cierra de acuerdo con las dimensiones de las
molculas que deben atravesarlo.
Paso de macromolculas a travs del poro nuclear.
La entrada de protenas al ncleo se realiza por un mecanismo que autoriza el pasaje slo de las
adecuadas. En efecto, las protenas destinadas al ncleo producidas en ribosomas que se hallan libres en
el citosol emanan de stos con un pptido seal una secuencia especfica de unos pocos aminocidos que
es reconocido por algn componente en el lado citoslico del complejo del poro, probablemente las
fibrillas nacidas en su anillo externo. El pptido seal conduce a las protenas hacia el centro del
complejo, al que atraviesan previo agrandamiento del poro, que de 9 nm pasa a tener 25 nm de dimetro.
As es el pptido seal el que define la apertura del diafragma, lo cual, como vimos, es un proceso que
requiere energa. A diferencia de las protenas que ingresan en las mitocondrias y los peroxisomas, las
destinadas al ncleo se pliegan apenas surgen de los ribosomas y en ese estado atraviesan los poros de
la envoltura nuclear. Ms an, ya plegadas, estas protenas deben ligarse a otros residentes en el
citosol, llamadas nucleoporinas o importinas, que las conducen a la superficie de la envoltura nuclear y
las ayudan a atravesar el poro.

Algunas protenas por ejemplo, las reguladoras de la actividad de los genes, debido a que tienen que ser
producidas con cierta antelacin, una vez emanadas de los ribosomas son retenidas en el citosol hasta la
llegada de las seales que les ordenen ingresar al ncleo. La retencin tiene lugar al unrseles protenas
chaperonas de la familia HSP90 (Protenas de choque trmico). Precisamente, dichas seales provocan
la separacin de las chaperonas, tras lo cual las protenas pueden ingresar al ncleo.
As como las protenas elaboradas en el citosol dependen de su pptido seal para ingresar en el ncleo,
las que deben regresar, lo mismo que las molculas de ARN sintetizadas en el ncleo, tambin dependen
de seales especficas para atravesar los poros de la envoltura nuclear y salir hacia el citosol. Por
ejemplo, los ARNm pueden abandonar el ncleo si han completado su procesamiento, mientras que los
ARNr pueden hacerlo luego de ensamblarse con determinadas protenas.

ARQUITECTURA NUCLEAR
En las clulas en interfase, existe una capa de protenas, la lamina nuclear, que reviste la superficie
interna de la membrana nuclear formando una capa variable de 10 100 nm de grosor (normalmente de
10 20 nm), que conecta la membrana interna con la cromatina despus de extraer las protenas de la
membrana y la cromatina con detergentes inicos, la lamina parece una red de grupos octogonales de
161
filamentos de 10 nm de dimetro. Las laminas purificadas estan compuestas por 3 protenas extrnsecas
de membrana, las lminas A, B y C, que en conjunto forman una red fibrosa. Las laminas A y C son
idnticas, excepto por la presencia de 133 aminocidos adicionales en el extremo carboxlico de la
lamina A.
Las laminas son muy homologas en secuencia y estructura a las protenas de los filamentos intermedios.
Las lminas aisladas tienen colas con aspecto de varilla de 52 nm de longitud y cabezas globulares, la
formacin de los largos filamentos de lminas como de las protenas de los filamentos intermedios, esta
mediada por interacciones entre las cabezas globulares, no se conoce la estructura exacta de estos
filamentos.
La lamina B parece tener un papel especializado en la unin a la membrana, solo la lamina B se une con
gran afinidad a membranas nucleares de las que se han eliminado las laminas. Las membranas nucleares
internas contienen un receptor para la lamina B de PM 58000, que se une especficamente a la lamina B,
las laminas A y C se unen a la lamina B y hacen de mediadoras de las interacciones entre la lamina y la
cromatina. En clulas en interfase, las tres laminas estan localizadas en la superficie interna de la
membrana nuclear.

MONTAJE Y DESMONTAJE DE LA MEMBRANA NUCLEAR
En el estadio de profase de la mitosis en eucariotas superiores, las observaciones al microscopio ptico,
sugieren que la membrana nuclear desaparece a medida que la cromatina se condensa en cromosomas
mitticos. En el microscopio electrnico sin embargo, muestra como la membrana nuclear se fragmenta
en pequeas vesculas. La lamina B permanece asociada a estas vesculas, las laminas A y C son
despolimerizadas en pequeos oligomeros y difundidas por toda la clula.
El desmontaje de la lamina se correlaciona con la fosforilacin de las laminas, efectivamente la mayor
parte de investigadores creen que la fosforilacin de las laminas por la enzima quinasa acciona el
desmontaje.

162
El primer proceso observado en la mitosis es la fosforilacin y despolimerizacion de las lminas que es
seguido por la desintegracin de la membrana nuclear en pequeas vesculas y la condensacin de los
cromosomas. Durante la mitosis en clulas animales en cultivo, el trafico vesicular de la membrana
nuclear se funden alrededor de la cromatina dispersa, simultneamente, las laminas se repolimerizan
sobre la membrana nuclear interna y aparentemente forman un puente entre la cromatina y la
membrana. En la profase de la mitosis, el factor promotor de la mitosis desencadena la
despolimerizacin de las lminas por una fosforilacin transitoria de grupos -NH
2
de serinas especficas
en estos polipptidos. Este desembalaje causa la disgregacin y desaparicin de la envoltura nuclear,
que se fragmenta en vesculas, a las que quedan asociados los fragmentos de lmina B durante la
mitosis. Las lminas A y C son solubles y se distribuyen por el citoplasma.
Al final de la mitosis (anafase-telofase), la desfosforilacin de las lminas provoca su repolimerizacin
en la superficie de los cromosomas, permitiendo que la envoltura nuclear se forme de nuevo. Unindose
las vesculas de la ex-envoltura nuclear a la lmina y fusionarse estas entre s para formar una
envoltura alrededor de cada cromosoma o grupo de cromosomas. Las envolturas se fusionan para formar
la envoltura nuclear definitiva.
En embriones de ranas y algunas clulas, la reconstruccin de la estructura nuclear tienen dos fases
inicialmente se forman membranas nucleares alrededor de los cromosomas individuales y luego se
fusionan conjuntamente para formar un nico ncleo interfsico.

CROMATINA - CROMOSOMAS
Cada cromosoma est constituido por una largusima molcula de ADN, asociada a diversas protenas.
Segn de qu cromosoma se trate, tal molcula puede contener entre 50 y 250 millones de pares de
bases. Las protenas asociadas al ADN se clasifican en dos grandes categoras. Unas se conocen con el
nombre de histonas. Las otras, que integran un grupo heterogneo formado por diversas clases de
polipptidos, se denominan no histnicas. El complejo formado por ADN, histonas y protenas no
histonicas se llama cromatina. La cromatina, entonces, es el material de que estn compuestos los
cromosomas.

163

La organizacin de la cromatina no es uniforme a lo largo de la estructura del cromosoma. De hecho, se
pueden distinguir una serie de elementos diferenciados: los centrmeros (o constricciones primarias),
los telmeros (o extremos cromosmicos), las regiones organizadoras del nuclolo (NORs segn la
abreviatura en ingls) y los crommeros, todos ellos caracterizados por contener secuencias
especficas de ADN.
Centrmeros
Es la constriccin primaria que, utilizando tinciones tradicionales, aparece menos teida que el resto del
cromosoma. Es la zona por la que el cromosoma interacciona con las fibras del huso acromtico desde
profase hasta anafase, tanto en mitosis como en meiosis, y es responsable de realizar y regular los
movimientos cromosmicos que tienen lugar durante estas fases. Las estructuras centromricas que
interaccionan con las fibras del huso se denominan cinetocoros. Adems, el centrmero contribuye a la
nucleacin de la cohesin de las cromtidas hermanas. En la estructura del centrmero intervienen
tanto el ADN centromrico, que consta fundamentalmente de heterocromatina constitutiva, como
protenas centromricas.
Telmeros
La palabra telmero procede del griego telos, "final" y meros, "parte". Los telmeros son los extremos
de los cromosomas. Son regiones de ADN no codificante, altamente repetitivas, cuya funcin principal
es la estabilidad estructural de los cromosomas en las clulas eucariotas, la divisin celular y el tiempo
de vida de las estirpes celulares. Adems estn involucradas en enfermedades tan importantes como el
cncer. Los telmeros fueron descubiertos por Hermann Joseph Muller durante la dcada de los aos
30. Desde entonces, se ha avanzado mucho en el conocimiento de los telmeros, gracias a las tcnicas
de la gentica molecular.
Regiones organizadoras del nuclolo
Adems de las constricciones primarias, en algunos cromosomas se puede distinguir otro tipo de
"adelgazamiento" denominada constriccin secundaria, las que se hallan relacionadas normalmente con la
presencia de las secuencias de ADN ribosmico. Tales regiones se denominan "regiones organizadoras
del nuclolo" (o, sencillamente, "NORs" por el acrnimo en ingls para nucleolus organizer regions). Las
secuencias de ADN ribosmico quedan englobadas dentro del nuclolo, que permanece adosado a las
NORs durante buena parte del ciclo celular. Los cromosomas con NOR en muchos casos presentan un
segmento que une a esta regin con el telmero, el cual se denomina satlite o trabante.
164
Crommeros
Los crommeros son "engrosamientos" o regiones ms compactadas de la eucromatina, que se
distribuyen de manera ms o menos uniforme a lo largo de los cromosomas y se pueden visualizar
durante las fases de la mitosis o de la meiosis de menor condensacin de la cromatina (profase). Su
naturaleza molecular sigue siendo controvertida, pero podran ser consecuencia de un cierto grado de
compartimentalizacin en la distribucin de las secuencias de ADN y en la organizacin de los
cromosomas. Desde hace varios aos, el grupo de Giorgio Bernardi en Italia, sostiene que hay una
distribucin compartimentalizada de secuencias relativamente grandes de ADN (llamadas "iscoras") en
el genoma de los vertebrados de sangre caliente, de modo tal que cada iscora tiene un contenido en
bases (porcentaje de C+G) relativamente homogneo pero diferente al de las dems. Despus de
publicado el primer borrador del "Proyecto Genoma Humano", parece confirmarse la existencia de cinco
iscoras en el genoma de los humanos, dos de ellas ricas en A y T, y tres ricas en G y C. La distribucin
alternante de ambos tipos de iscoras podra ser la explicacin molecular de la existencia de
crommeros.

La enorme longitud de los cromosomas exige que la replicacin se inicie en muchsimos puntos del ADN a
la vez, a fin de que su sntesis se logre en un tiempo adecuado. Cada uno de esos puntos se denomina
origen de replicacin, y en ellos el ADN exhibe secuencias de nucletidos especiales. Ms an, todos los
orgenes de replicacin tienen en comn secuencias conservadas de alrededor de una docena de pares
de nucletidos llamadas ARS (por autonomous replication sequence).
Por otro lado, la capacidad o incapacidad funcional del ADN, es decir, su aptitud o incompetencia para
generar molculas de ARN, depende de la secuencia de sus nucletidos. As en algunos sectores el ADN
exhibe secuencias de nucletidos funcionalmente aptas para transcribir (genes), mientras en otros
presenta secuencias aparentemente prescindibles.
En las molculas de ADN se halla depositada la informacin gentica de la clula. Dado que todas las
clulas poseen conjuntos virtualmente idnticos de tales molculas, puede decirse que en ellas se
encuentran la informacin gentica que rige el destino de todo organismo, desde la que modula los
acontecimientos biolgicos que tienen que ver con su desarrollo embriolgico hasta la que gobierna su
crecimiento, diferenciacin y funciones, incluida su predisposicin o inmunidad a determinadas
enfermedades.
La totalidad de la informacin gentica depositada en las molculas de ADN lleva el nombre de genoma.
El 75% del ADN se halla representado por secuencias singulares (copias nicas) de nucletidos y
secuencias que se hallan una o pocas veces repetidas. En este sector del ADN se encuentran la
secuencias de nucletidos funcionalmente activas, es decir, los genes. Estos representan una pequea
parte del ADN alrededor del 13% de ese 75%, lo que equivale al 10% de todo el genoma. Precisamente,
uno de los mayores desafos para los bilogos moleculares es descifrar las funciones del ADN ajeno a
los genes.
El 25% restante del ADN se halla representado por secuencias de nucletidos altamente repetidas. Sus
funciones se desconocen, aunque no se descarta que desempeen algn papel en el mantenimiento de la
estructura de los cromosomas.
Las clulas humanas somticas poseen 46 cromosomas.
Es decir, 46 molculas de ADN, divididos en 22 pares de autosomas ms un par de cromosomas
sexuales. Los dos miembros del par sexual son idnticos entre s en la mujer, pero distintos en el varn.
En forma preliminar, puede decirse que en cada clula existen dos juegos virtualmente idnticos de 23
165
cromosomas, uno aportado por el espermatozoide y otro por el ovocito en el momento de la fecundacin.
De all que se define a las clulas somticas como diploides, y a los espermatozoides y ovocitos como
clulas haploides.
Los ADN de los 46 cromosomas contienen en conjunto unos 6 x 10
9
pares de nucletidos. Por lo tanto,
en promedio, una molcula de ADN de un cromosoma humano, si estuviera completamente extendida,
medira unos 4 cm de largo. Lgicamente, 46 molculas de tamaa longitud, de hallarse extendidas, no
podran estar contenidas en el ncleo celular, no slo por el espacio que demandaran sino por los
enredos que se produciran, lo que afectara su normal funcionamiento y hasta su propia integridad. La
clula ha resuelto el problema de espacio haciendo que la molcula de ADN se enrolle sobre s misma,
debe advertirse que el grado de enrollamiento vara de acuerdo con el momento del ciclo en que se halla
la clula, ya que es mnimo durante la interfase (cuando la sntesis de ARN es alta) y mximo cuando la
clula se apresta a dividirse. As; en las clulas vivas los cromosomas se muestran como estructuras
altamente variables.

TIPOS DE CROMATINA.
En algunos sectores la cromatina experimenta un grado de enrollamiento an mayor. Durante la
interfase, la cromatina as compactada recibe el nombre de heterocromatina, y se reserva el de
eucromatina para la menos condensada.
Existe una relacin directa entre el grado de enrollamiento y la actividad transcripcional del ADN. As,
la cromatina menos compactada es la que posee el ADN transcripcionalmente activo, es decir, el ADN
en el que estn sintetizando molculas de ARN. En el conjunto de clulas este ADN abarca alrededor
del 10% del genoma. En cambio, el ADN correspondiente a la cromatina ms condensada es inactivo
desde el punto de vista transcripcional. A esta categora pertenece toda la heterocromatina y un vasto
sector de la eucromatina, aquel cuyo nivel de enrollamiento se halla en un punto intermedio entre la
eucromatina transcripcionalmente activa y la heterocromatina. Las regiones eucromticas experimentan
ciclos de contraccin y extensin.
La heterocromatina puede ser constitutiva o facultativa.
Durante la interfase, recibe el nombre de heterocromatica constitutiva altamente condensada que se
halla de manera constante en todos los tipos de organismos, es decir, como un componente estable del
genoma, no convertible en eucromatina. A esta categora pertenece la mayor parte de la cromatina que
forma los brazos cortos de los cromosomas acrocntricos y la cromatina de los sectores cromosmicos
que poseen ADN satlite (como la de los centrmeros, la de una parte del brazo largo del cromosoma Y,
etc.).
En cambio, se le da el nombre de heterocromatina facultativa a la que se detecta en los cromosomas en
localizaciones que varan de acuerdo con el tipo celular, de manera tal que sectores de cromatina que
aparecen como heterocromatina en un tipo celular, en otros se presentan como eucromatina. Tambin el
cuerpo de Barr (es decir, el cromosoma X compactado en las clulas de la mujer) corresponde a esta
clase de heterocromatina.

CICLO CELULAR
Las clulas van modificando su estructura a medida que se van diferenciando y especializando y para
referirnos a una determinada clula debemos saber entre otras cosas: el tipo de tejido que constituye,
el nivel metablico y el estado citolgico de desarrollo en el que se encuentra.
Por ejemplo, si una clula pertenece a un tejido proliferativo, que es aquel tejido constituido por clulas
en continua divisin, cada una de sus clulas se encontrar dividindose en dos, por lo tanto el contenido
166
de materiales celulares tambin se reparte. Si consideramos que las clulas hijas tambin se dividen
inmediatamente, el contenido de material celular declinara, pero esto no sucede as ya que las clulas,
entre dos divisiones secuenciales, pasan por una FASE DE INTERFASE, la antiguamente llamada Fase
de Reposo, perodo en el cual los materiales celulares se duplican, especialmente el ADN que es el
material de la herencia. Al conjunto del perodo de interfase y Perodo de Divisin Celular secuenciales
en una clula se le llama CICLO CELULAR.
Las clulas se reproducen para hacer posible el crecimiento corporal y para reemplazar a las clulas que
desaparecen por envejecimiento o por muerte programada, tambin lo hacen durante ciertas
situaciones patolgicas, como la reparacin de heridas. Para poder reproducirse la clula duplica
primero el contenido de su ncleo y de su citoplasma y luego se divide en dos. La multiplicacin celular
aparece a penas se inicia la vida embrionaria, con la segmentacin de la clula huevo. Dado el enorme
volumen del citoplasma de esta clula en relacin con el tamao del ncleo, durante las rpidas
divisiones de segmentacin solo se duplican sus materiales nucleares, en tanto que los citoplasmticos
se reparten entre las sucesivas clulas hijas hasta lograrse el reestablecimiento en el blastocisto de la
relacin ncleo citoplasmtica caracterstica de las clulas somticas.
En el perodo de divisin celular el componente que principalmente se divide es ADN, pues la clula
necesita dividir el material gentico entre sus clulas hijas, por lo tanto el Perodo de Interfase hay un
perodo de tiempo en el cual se recupera el contenido normal del ADN.
Realizando experimentos con Timidina Tritiada, para ver cmo este compuesto se incorporaba al ncleo,
ya que su incorporacin indicara sntesis y replicacin de ADN, se observo que la Timidina Tritiada se
incorporaba al ncleo solo en una fraccin intermedia del Perodo de Interfase; concluyndose que se
era el perodo de sntesis y replicacin de ADN por lo cual se llamo PERIODO DE SINTESIS o
PERIODO S.
La determinacin del Perodo S, nos marca dos perodos de tiempos adicionales:
Uno que se extiende desde la finalizacin de la divisin celular hasta el inicio de la sntesis y
replicacin del ADN o Perodo S al cual se le llama PERIODO G
1
(GAP
1
).
Otro lapso de tiempo que va desde la finalizacin del Perodo S hasta el inicio de otra divisin
celular el cual se llama Perodo G
2
(GAP
2
).
Existen clulas que escapan a este ciclo celular, clulas que en un primer momento permanecen en
perodo de tiempo ms o menos grande en G1, en cuyo caso se dicen que se encuentran en el llamado
PERIODO G
0
. A partir de este estado especial es que en una clula pueden desarrollarse los procesos
de DIFERENCIACION CELULAR. Por ejemplo, de esta manera puede formarse una Neurona, en cuyo
caso ya es imposible volver al ciclo celular. Tenemos otros casos de tipos celulares que an conservan la
capacidad de volver al ciclo celular, estas son las clulas de tejidos capaces de regenerarse como el
tejido adiposo, tejido seo, etc., pero como requisito indispensable estas clulas deben de sufrir un
proceso previo de desdiferenciacin.

El comportamiento del material gentico dentro del ciclo celular, est regido por seales especficas.
Existen un FACTOR INDUCTOR o INICIADOR, que dara la seal a la clula para que el ADN inicie su
replicacin en un determinado momento del ciclo celular. Asimismo al inicio de una divisin existe, el
167
llamado FACTOR DE CONDENSACION, que induce a la condensacin de la Cromatina para construir
los Cromosomas.
Se han realizado experimentos utilizando fusin de clulas, por ejemplo, si una de ellas se encuentra
normalmente en Prometafase o Profase con su cromatina condensada, el Factor inductor es capaz de
incidir sobre el otro ncleo, de tal manera que a pesar de que ese otro ncleo, puede o no haber
replicado el material gentico, sufre un proceso de Condensacin de su Cromatina. El contenido de ADN
dentro de la clula y de la sntesis de protenas y ARN vara de acuerdo al perodo del ciclo en que se
encuentra sta. Veamos ahora cul es la secuencia de estos cambios. El contenido de ADN de una clula,
es generalmente medido en Picogramos, siendo el promedio de dos picogramos por ncleo celular.
Nosotros lo vamos a representar, para generalizar en trminos de ADN como 1C, 2C, 3C, 4C, donde C es
el contenido de ADN por ncleo celular.
Partamos de un ncleo que tiene 2C de ADN que se encuentra en el perodo G

1,
lo que significa
que es un ncleo que viene de una divisin celular, por lo tanto el contenido de ADN est
disminuido a la mitad.

Durante el perodo S se duplica el material gentico, ya sabemos que la duplicacin del ADN
trae como consecuencia que ese ncleo a medida que transcurre el Perodo S, recupera el
contenido celular de 4C, es decir el doble del contenido de la clula proveniente de la Mitosis.

Por lo tanto, aquellas clulas que se encuentran en G
1,
tienen la mitad del contenido del ADN de las que
estan en G
2.
As podemos fcilmente reconocer en un tejido, cuales clulas estn en G
2
y cuales en G
1
con slo analizar el contenido de ADN de cada clula.

Por otro lado veamos lo que ocurre con el ARN y las protenas durante el ciclo celular.
En el caso de la sntesis del ARN, la curva de sntesis tiene un ligero incremento en el perodo G
1,
llega a su pico ms alto durante el perodo S y declina en el G
2
para caer casi hasta cero durante la
Mitosis, al final de la cual vuelve a los valores de G
1
para reiniciarse una curva similar.
En cuanto a la sntesis de protenas, tiene una curva casi paralela a la del ARN con un ligero
desplazamiento hacia la derecha, porque para que haya sntesis de protenas debe haber
previamente sntesis de ARN. En el perodo G
2
existe un aumento se debe a la sntesis de protenas
necesarias para la reproduccin celular. En el perodo de Mitosis decae la cantidad de protenas.
El aumento de ARN y protenas a lo largo de los perodos G
1
y S, se debe a que una clula que parte de
G
1
es una clula de volumen reducido porque proviene de una divisin celular, pero a medida que van
transcurriendo estas fases el volumen citoplasmtico y nuclear va aumentando hasta que llega a la Fase
de divisin celular donde nuevamente se reparten los materiales celulares. Estos cambios que se operan
en el ncleo no son slo citolgicos, como la aparicin de los cromosomas por condensacin y luego un
perodo ms o menos largo de interfase en donde aparentemente no ocurre nada, son tambin cambios
Bioqumicos, pues en la interfase ocurre la mayor actividad metablica y es el ncleo el que la dirige,
este metabolismo comienza a disminuir a medida que la clula se acerca a la divisin celular.
As pues durante la divisin celular, la clula se concentra; se dedica casi exclusivamente a este proceso
de divisin celular y disminuye todo el resto del metabolismo, tanto de la sntesis de ARN como de
168
protenas en general. Esto tiene su origen en el cambio de conformacin que se opera en el interior de
la estructura del material de la herencia, es decir de la estructura de la cromatina, ya que los
cromosomas condensados no sintetizan ARN.
Para que haya sntesis de ARN, por lo tanto para que se inicie la sntesis de protenas, los cromosoma
tiene que estar ms o menos extendidos; las zonas cromatnicas que se encuentran ms o menos
condensadas sern aquellas zonas que no estn transcribiendo por lo tanto sus genes no se expresan ni
dirigen la sntesis de ninguna protena. Los grados de condensacin de la cromatina nos indican cuales
porciones de molcula de ADN estan trabajando y cuales no.

CONTROL DEL CICLO CELULAR
Las clulas poseen mecanismos especiales tanto para coordinar los procesos de sntesis en el ncleo y
en el citoplasma como para marcar el comienzo y la conclusin de las distintas fases del ciclo celular. La
regulacin del ciclo celular ocurre de diferentes formas, algunas se dividen rpidamente, otras como las
clulas nerviosas pierden la capacidad de dividirse una vez que llegan a la madurez. Algunas, como las
clulas hepticas, conservan, aunque no la utilizan, su capacidad de divisin. Las clulas del hgado se
dividen si se remueve parte del hgado y su divisin continua hasta que el hgado retorna a su tamao
normal. Factores ambientales tales como cambios en la temperatura y el pH, disminucin de los niveles
de nutrientes llevan a la disminucin de la velocidad de divisin celular.
Reloj molecular
Todas las clulas eucariotas tienen un reloj molecular que determina cuando debe dividirse. Basados
en las investigaciones realizadas en huevos de anfibios los investigadores imaginaron la existencia de un
reloj central bioqumico u oscilador que instruye a los ncleos acerca de las funciones a cumplir para
controlar las fases de la divisin.
El reloj, formado por un conjunto de protenas nucleares que interaccionan entre si, integra los
mensajes provenientes de las cascadas estimuladoras e inhibidoras y, si prevalece la cascada
estimuladora, pone en marcha el programa de divisin celular.
Poco antes de finalizar la fase G1 cuya duracin vara bastante entre los distintos tipos celulares existe
un momento de trancision en el que la clula debe tomar (o no) la decisin de dividirse, este punto se
denomina punto R o restriccin. En el control de la divisin celular intervienen dos tipos de molculas.
CICLINAS.- Las ciclinas cuyo nombre se debe que en el curso de cada ciclo celular alternan un periodo
de sntesis creciente seguido por otro de rpida degradacin. Existen varias clases de ciclinas que se
diferencian entre si porque sus concentraciones suben y bajan en diferentes momentos del ciclo
celular. Las principales corresponden a dos grandes grupos:
Ciclinas G1
Ciclinas Mitticas
QUINASAS.- (CDK) Dependientes de las ciclinas: actan cuando son activadas por las ciclinas
fosforilando molculas cruciales para la divisin celular. En los seres superiores se identificaron dos
principales:
Cdc2 (cell divisin cicle)
Cdk2 ( quinasa dependiente de la ciclina)
No obstante la existencia en el genoma de una numerosa familia de genes relacionadas con estas
quinasas sugiere que junto a la Cdk2 y a la Cdc2, podra intervenir varias mas en la regulacin de los
distintos pasos del ciclo celular.
En los vertebrados el franqueo del punto R esta regulado por los factores de crecimiento que se unen a
los receptores de la superficie celular. Esto produce una cascada de reacciones destinadas a activar
quinasas mitognicas que migran al ncleo y fosforilan las protenas. Estas ltimas, que controlan los
genes de protenas (valga la redundancia), implicadas en la divisin celular (ciclinas) desencadenndola
en la mitosis.
Esquema de los sucesos a nivel del punto R
La llave del punto R de la fase G1 (momento en el cual la clula decide si debe o no avanzar en la
prosecucin del ciclo) es un conmutador molecular que pasa de apagado a encendido. A medida que
sube el nivel de las ciclinas, las mismas se combinan con quinasas dependientes de ciclinas (es decir
enzimas fosforilantes cuya actividad depende de los niveles de ciclinas). Las quinasas activas
transfieren fosfatos del ATP a la protena pRB (el freno del ciclo celular). Si la pRB no esta
169
fosforilada secuestra (es decir permanece unida) otras protenas claves para la prosecucin del ciclo:
los factores de transcripcin que actan sobre los genes. Los genes estimulados producen protenas
necesarias para que avance el ciclo celular.
Estimulos externos
Las clulas normales se reproducen en respuesta a una cascada de seales que les envan los factores
de crecimiento externo y detienen su divisin en respuesta a factores inhibidores que obviamente
actan tambin por medio de una cascada de seales.
ACTIVACION DE LA DIVISION CELULAR
Tomada la decisin de dividirse, la clula deja atrs la fase G1 e ingresa en fase S, es decir, comienza a
replicar su ADN. Ello se debe a que una ciclina G1 activa la quinasa Cdk2, la cual inicia una cadena de
fosforilaciones en sucesivas protenas intermediarias, que culminan con la activacin de alguna de las
molculas responsables de la replicacin del ADN, por ejemplo las ADN polimerasas.
La ciclina G1 aumenta su concentracin a partir del punto R, la Cdk2 se activa solo cuando la ciclina G1
alcanza determinado umbral de concentracin y este es un requisito indispensable para que las dos
protenas puedan unirse. Mas aun a partir de ese momento ambas molculas unidas componen un
complejo proteico denominado factor promotor de replicacin (FPR). Dado que en un punto de la fase S
la concentracin de ciclina comienza a declinar, cuando regresa al umbral anteriormente citado se
separa de la Cdk2, por lo cual el FPR desaparece. Debe subrayarse que de las dos molculas la ciclina es
la nica cuya concentracin varia, ya que comienza a sintetizarse a partir del control G1, sigue
hacindolo en concentraciones cada vez mas elevadas durante gran parte de la fase S hasta que en un
punto de esta ultima inicia su declinacin para desaparecer por completo en el curso de la fase G2. En
cambio los niveles de la Cdk2 se mantienen constantes a lo largo de todo el ciclo celular. En una fase S
normal, el ADN se replica solamente una vez, ya que si as no lo hiciese las clulas hijas tendran un
numero anormal de cromosomas. En consecuencia deben existir mecanismos para impedir la aparicin de
nuevas duplicaciones a partir del ADN ya replicado.
Superada la fase G2 se activa el inicio de la mitosis. Al final de la G2 aumenta la concentracin de
ciclina mittica y al alcanzar una determinada concentracin se une a la Cdc2 componiendo el factor
promotor de maduracion o factor promotor de mitosis (FPM) que se encarga de fosforilar protenas con
funciones esenciales durante la mitosis. Cuando todos los cinetocoros sean ligados a las fibras del uso
se desactiva este complejo.
La pausa impuesta por la G2 le provee a la clula un lapso durante el cual actan determinados
mecanismos de seguridad para controlar antes que la clula se divida si las molculas de ADN han
completado su replicacin y, en los casos que corresponda, si fueran separadas. Adems; en la fase G2
debe completarse la duplicacin de los componentes citoplasmticos.

170
FRENOS DE LA DIVISION CELULAR
Un importante regulador del ciclo celular lo constituye una protena denominada p53, la cual por un lado
ejerce un control de tipo negativo frenando la divisin a nivel de G1, antes de punto R. Esta protena es
sintetizada por la propia clula en respuesta a la aparicin de alteraciones del ADN, se origina en el gen
p53 perteneciente a la categora de genes supresores de tumores.
La p53 hace que se exprese otros genes de protenas reguladoras como los p21 y p16 que bloquean la
actividad de la Cdk2. Las clulas al no replicar su ADN se estabilizan en la fase G1. Si el ADN replicado
tiene un dao peligroso para las clulas hijas, la protena p53 se encarga de la muerte celular o
apoptosis (muerte celular programada).
Resulta interesante sealar que aquellos frmacos anticancergenos que actan alterando, de alguna
manera, la replicacin correcta del ADN requiere para su completa efectividad una p53 funcionante.
Pueden si esto se cumple desencadenar la apoptosis de las clulas cancerosas alteradas por el frmaco.
Existe otras importantes protenas reguladoras de la proliferacin celular una de ellas es la Rb (por el
tumor de retina denominado retinoblastoma) deriva del gen Rb, que tambin es otro inhibidor de Cdk, la
protena p21 acta a lo largo de todo el ciclo celular.
La p21 esta bajo el control de la denominada: protena supresora de tumores, la hoy famosa p53, que
entre sus mltiples efectos pueden mencionarse:
Control de la integridad del ADN.
Detencin del crecimiento celular (duplicacin celular) o senescencia.
Puesta en marcha del suicidio celular o apoptosis cuando existe dao en el ADN o los sistemas de
control se desregulan.
Supresor de tumores.
Por otra parte diversas protenas reprimen el ciclo al actuar como inhibidores. Ciertas protenas p15 y
p16 bloquean la actividad del complejo Cdk ciclina recuerde que esta quinasa en su forma activa a la
pRB, e impiden que el ciclo progrese de G1 a S.

LA FASE M SE PRODUCE CUANDO LA CICLINA MITOTICA ACTIVA A LA CDC2
Superados tales controles, comienza la fase M el mecanismo que desencadena la mitosis es similar al
que inicia la fase S, aunque con distintos protagonistas. Ahora intervienen la cdc2 y una ciclina mittica
que comienza a sintetizar a partir de la fase G2 (antes que desaparezca la ciclina G1). Cuando la ciclina
alcanza un determinado umbral de concentracin, se une a la cdc2 fosforila directamente o a travs de
molculas intermediarias a diversas protenas que cumplen funciones esenciales en la consumacin de la
mitosis, por ejemplo, algunas protenas asociadas a los filamentos de actina, y a los microtubulos del
citoesqueleto, las laminas de la lamina nuclear, la histona H1, etc.
Veamos las consecuencias de la fosforilacin de estas protenas:
Se desintegra el armazn de filamentos de actina, de modo que la clula pierde contacto con sus
vecinas (o con la matriz extra celular) y se vuelve esfrica. Mas tarde, otros filamentos de actina
participan en la citocinesis.
Se desarman los microtubulos interfasicos, pero otros se nuclean para dar lugar a las fibras del
huso mittico.
Se desintegra la lamina nuclear y con ella la envoltura del ncleo.
Se modifica la forma como la histona H1 se asocia al ADN, lo que lleva al enrollamiento y
compactacin de los cromosomas.

171
MITOSIS
La mitosis (del griego mitos, hebra) es un proceso que ocurre en el ncleo de las clulas eucariticas,
consistente en el reparto equitativo del material hereditario (ADN) caracterstico. Normalmente
concluye con la formacin de dos ncleos separados (cariocinesis), seguido de la particin del citoplasma
(citocinesis), para formar dos clulas hijas. La mitosis completa, que produce clulas genticamente
idnticas, es el fundamento del crecimiento, de la reparacin tisular y de la reproduccin asexual. La
mitosis es el tipo de divisin del ncleo celular por el cual se conservan los organelos y la informacin
gentica contenida en sus cromosomas, que pasa de esta manera a las clulas hijas resultantes de la
mitosis. La mitosis es igualmente un verdadero proceso de multiplicacin celular que participa en el
desarrollo, el crecimiento y la regeneracin del organismo. Este proceso tiene lugar por medio de una
serie de operaciones sucesivas que se desarrollan de una manera continua.

El resultado esencial de la mitosis es la continuidad de la informacin hereditaria de la clula madre en
cada una de las dos clulas hijas. El genoma se compone de una determinada cantidad de genes
organizados en cromosomas, hebras de ADN muy enrolladas que contienen la informacin gentica vital
para la clula y el organismo. Dado que cada clula debe contener completa la informacin gentica
propia de su especie, la clula madre debe hacer una copia de cada cromosoma antes de la mitosis, de
forma que las dos clulas hijas reciban completa la informacin. Esto ocurre durante la fase S de la
interfase, el perodo que alterna con la mitosis en el ciclo celular y en el que la clula entre otras cosas
se prepara para dividirse. Tras la duplicacin del ADN, cada cromosoma consistir en dos copias
idnticas de la misma hebra de ADN, llamadas cromtidas hermanas, unidas entre s por una regin del
cromosoma llamada centrmero. Cada cromtida hermana no se considera en esa situacin un
cromosoma en s mismo, sino parte de un cromosoma que provisionalmente consta de dos cromtidas. En
animales y plantas, pero no siempre en hongos o protistas, la envoltura nuclear que separa el ADN del
citoplasma se desintegra, desapareciendo la frontera que separaba el contenido nuclear del citoplasma.
Los cromosomas se ordenan en el plano ecuatorial de la clula, perpendicular a un eje definido por un
huso acromtico. ste es una estructura citoesqueltica compleja, de forma ahusada, constituido por
fibras que son filamentos de microtbulos. Las fibras del huso dirigen el reparto de las cromtidas
hermanas, una vez producida su separacin, hacia los extremos del huso. Por convenio cientfico, a
partir de este momento cada cromtida hermana s se considera un cromosoma completo, y empezamos
a hablar de cromosomas hermanos para referirnos a las estructuras idnticas que hasta ese momento
llambamos cromtidas. Como la clula se alarga, las fibras del huso tiran por el centrmero a los
cromosomas hermanos dirigindolos cada uno a uno de los polos de la clula. En las mitosis ms comunes,
llamadas abiertas, la envoltura nuclear se deshace al principio de la mitosis y se forman dos envolturas
nuevas sobre los dos grupos cromosmicos al acabar. En las mitosis cerradas, que ocurren por ejemplo
en levaduras, todo el reparto ocurre dentro del ncleo, que finalmente se estrangula para formar dos
ncleos separados.
Se llama cariocinesis a la formacin de los dos ncleos con que concluye habitualmente la mitosis. Es
posible, y ocurre en ciertos casos, que el reparto mittico se produzca sin cariocinesis (endomitosis)
dando lugar a un ncleo con el material hereditario duplicado (doble nmero de cromosomas).
La mitosis se completa casi siempre con la llamada citocinesis o divisin del citoplasma. En las clulas
animales la citocinesis se realiza por estrangulacin: la clula se va estrechando por el centro hasta que
al final se separa en dos. En las clulas de las plantas se realiza por tabicacin, es decir, las clulas
hijas construyen una nueva regin de pared celular que dividir la una de la otra dejando puentes de
citoplasma (plasmodesmos). Al final, la clula madre se parte por la mitad, dando lugar a dos clulas
hijas, cada una con una copia equivalente y completa del genoma original.
172
FASES DE LA MITOSIS
La divisin de las clulas eucariticas es parte de un ciclo vital continuo, el ciclo celular, la mitosis es
una fase relativamente corta de este ciclo en comparacin con la duracin de la interfase.

PROFASE
Es la fase ms larga de la mitosis. Se produce en ella la condensacin del material gentico (ADN, que
en interfase existe en forma de cromatina), para formar unas estructuras altamente organizadas, los
cromosomas. Como el material gentico se ha duplicado previamente durante la fase S, los cromosomas
replicados estn formados por dos cromtidas, unidas a travs del centrmero por molculas de
cohesinas. Uno de los hechos ms tempranos de la profase en las clulas animales es la duplicacin del
centrosoma; los dos centrosomas hijos (cada uno con dos centriolos) migran entonces hacia extremos
opuestos de la clula. Los centrosomas actan como centros organizadores de microtbulos,
controlando la formacin de unas estructuras fibrosas, los microtbulos, mediante la polimerizacin de
tubulina soluble. De esta forma, el huso de una clula mittica tiene dos polos que emanan microtbulos.
En la profase tarda desaparece el nuclolo y se desorganiza la envoltura nuclear.
PROMETAFASE
La membrana nuclear se divide o fragmenta y los microtbulos invaden el espacio nuclear. Esto se
denomina mitosis abierta, y ocurre en una pequea parte de los organismos multicelulares. Los hongos y
algunos protistas, como las algas o las tricomonas, realizan una variacin denominada mitosis cerrada, en
la que el huso se forma dentro del ncleo o sus microtbulos pueden penetrar a travs de la membrana
nuclear intacta. Cada cromosoma ensambla dos cinetocoros hermanos sobre el centrmero, uno en cada
cromtida. Un cinetocoro es una estructura proteica compleja a la que se anclan los microtbulos.
Aunque la estructura y la funcin del cinetocoro no se conocen completamente, contiene varios motores
moleculares, entre otros componentes. Cuando un microtbulo se ancla a un cinetocoro, los motores se
activan, utilizando energa de la hidrlisis del ATP para "ascender" por el microtbulo hacia el
centrosoma de origen. Esta actividad motora, acoplada con la polimerizacin/despolimerizacin de los
microtbulos, proporciona la fuerza de empuje necesaria para separar ms adelante las dos cromtidas
de los cromosomas.

Cuando el huso crece hasta una longitud suficiente, los microtbulos asociados a
cinetocoros empiezan a buscar cinetocoros a los que anclarse. Otros microtbulos no se asocian a
cinetocoros, sino a otros microtbulos originados en el centrosoma opuesto para formar el huso
mittico. La prometafase se considera a veces como parte de la profase.
METAFASE
173
A medida que los microtbulos encuentran y se anclan a los cinetocoros durante la prometafase, los
centrmeros de los cromosomas se congregan en la "placa metafsica" o "plano ecuatorial", una lnea
imaginaria que es equidistante de los dos centrosomas que se encuentran en los dos polos del huso. Este
alineamiento equilibrado en la lnea media del huso se debe a las fuerzas iguales y opuestas que se
generan por los cinetocoros hermanos. El nombre "metafase" proviene del griego que significa
"despus."
Dado que una separacin cromosmica correcta requiere que cada cinetocoro est asociado a un
conjunto de microtbulos (que forman las fibras cinetocricas), los cinetocoros que no estn anclados
generan una seal para evitar la progresin prematura hacia anafase antes de que todos los cromosomas
estn correctamente anclados y alineados en la placa metafsica. Esta seal activa el checkpoint de
mitosis.
ANAFASE
Cuando todos los cromosomas estn correctamente anclados a los microtbulos del huso y alineados en
la placa metafsica, la clula procede a entrar en anafase (del griego que significa "arriba",
"contra", "atrs" o "re-"). Es la fase crucial de la mitosis, porque en ella se realiza la distribucin de las
dos copias de la informacin gentica original.
Entonces tienen lugar dos sucesos. Primero, las protenas que mantenan unidas ambas cromatidas
hermanas (las cohesinas), son cortadas, lo que permite la separacin de las cromtidas. Estas
cromtidas hermanas, que ahora son cromosomas hermanos diferentes, son separados por los
microtbulos anclados a sus cinetocoros al desensamblarse, dirigindose hacia los centrosomas
respectivos. A continuacin, los microtbulos no asociados a cinetocoros se alargan, empujando a los
centrosomas (y al conjunto de cromosomas que tienen asociados) hacia los extremos opuestos de la
clula. Este movimento parece estar generado por el rpido ensamblaje de los microtbulos. Estos dos
estadios se denominan a veces anafase temprana y anafase tarda. La anafase temprana viene definida
por la separacin de cromtidas hermanas, mientras que la tarda por la elongacin de los microtbulos
que produce la separacin de los centrosomas. Al final de la anafase, la clula ha conseguido separar
dos juegos idnticos de material gentico en dos grupos definidos, cada uno alrededor de un
centrosoma.
TELOFASE
La telofase (del griego , que significa "finales") es la reversin de los procesos que tuvieron lugar
durante la profase y prometafase. Durante la telofase, los microtbulos no unidos a cinetocoros
continan alargndose, estirando an ms la clula. Los cromosomas hermanos se encuentran cada uno
asociado a uno de los polos. La membrana nuclear se reforma alrededor de ambos grupos cromosmicos,
utilizando fragmentos de la membrana nuclear de la clula original. Ambos juegos de cromosomas, ahora
formando dos nuevos ncleos, se descondensan de nuevo en cromatina. La cariocinesis ha terminado,
pero la divisin celular an no est completa.
Citocinesis
La citocinesis es un proceso independiente, que se inicia simultneamente a la telofase. Tcnicamente
no es parte de la mitosis, sino un proceso aparte, necesario para completar la divisin celular. En las
clulas animales, se genera un surco de escisin (cleavage furrow) que contiene un anillo contrctil de
actina en el lugar donde estuvo la placa metafsica, estrangulando el citoplasma y aislando as los dos
nuevos ncleos en dos clulas hijas. Tanto en clulas animales como en plantas, la divisin celular est
dirigida por vesculas derivadas del aparato de Golgi, que se mueven a lo largo de los microtbulos hasta
la zona ecuatorial de la clula. En plantas esta estructura coalesce en una placa celular en el centro del
fragmoplasto y se desarrolla generando una pared celular que separa los dos ncleos. El fragmoplasto
es una estructura de microtbulos tpica de plantas superiores, mientras que algunas algas utilizan un
vector de microtbulos denominado ficoplasto durante la citocinesis. Al final del proceso, cada clula
hija tiene una copia completa del genoma de la clula original. El final de la citocinesis marca el final de
la fase M.
Consecuencias de la mitosis
Mediante el proceso mittico, el material gentico se divide en dos ncleos idnticos, con lo que las dos
clulas hijas que resultan si se produce la divisin del citoplasma sern genticamente idnticas. Por
tanto, la mitosis es un proceso de divisin conservativo, ya que el material gentico se mantiene de una
generacin celular a la siguiente. La mayor parte de la expresin gnica se detiene durante la mitosis,
174
pero mecanismos epigenticos funcionan durante esta fase, para "recordar" los genes que estaban
activos en mitosis y transmitirlos a las clulas hijas.
Errores en la mitosis
Aunque los errores en la mitosis son bastante poco frecuentes, este proceso puede fallar,
especialmente durante las primeras divisiones celulares en el cigoto. Los errores mitticos pueden ser
especialmente peligrosos para el organismo, porque el descendiente futuro de la clula madre
defectuosa mantendr la misma anomala. Un cromosoma puede no separarse durante la anafase. Este
fenmeno se denomina "no-disyuncin". Si esto ocurre, una clula hija recibir dos cromosomas
hermanos y la otra se quedar sin ninguno. Esto da lugar a que una clula tenga tres cromosomas que
codifiquen la misma informacin gentica (dos hermanos y un homlogo), una condicin conocida como
trisoma, y la otra clula, que solamente tiene un cromosoma (el cromosoma homlogo), tendr
monosoma. Estas clulas se consideran aneuploides, y la aneuploida puede causar inestabilidad
gentica, un hecho frecuente en cncer.
La mitosis es un proceso traumtico. La clula pasa por cambios drsticos en su estructura, algunos
orgnulos se desintegran y se reconstruyen en cuestin de horas, y los microtbulos tiran
constantemente de los cromosomas. Por tanto, en ocasiones los cromosomas pueden daarse. Un brazo
del cromosoma se puede romper y perder un fragmento, causando delecin. El fragmento puede
incorporarse incorrectamente a otro cromosoma no homlogo, causando translocacin. Se puede
integrar de nuevo al cromosoma original, pero en una orientacin inversa, causando inversin. O se
puede tratar errneamente como un cromosoma separado, causando duplicacin cromosmica.
Una parte de estos errores pueden detectarse por alguno de los puntos de control existentes a travs
del ciclo celular, lo cual produce una parada en la progresin celular, dando tiempo a los mecanismos
reparadores a corregir el error. Si esto no ocurre, el efecto de estas anormalidades genticas
depender de la naturaleza especfica del error. Puede variar de una anomala imperceptible, a
carcinognesis o a la muerte del organismo.
Endomitosis
La endomitosis es una variante de la mitosis sin divisin nuclear o celular, lo que da lugar a clulas con
muchas copias del mismo cromosoma en el mismo ncleo. Este proceso tambin se denomina
endoreduplicacin, y las clulas resultantes endoploides. Un ejemplo de una clula que sufre endomitosis
es el megacariocito.

MUERTE CELULAR
La homeostasis en organismos eucariotas se mantienen por la existencia de mecanismos que regulan la
proliferacin, diferenciacin y muerte celular. Estos mecanismos parece que estn bien determinados
en los dos primeros procesos, pero no ocurre as con el tercero, en cuya comprensin se ha avanzado
desde hace relativamente poco tiempo.
Los dos tipos de muerte celular que se reconoce en el organismo son la necrosis y la apoptosis. La
primera tiene un carcter patolgico y se desencadena tras un dao celular extremo. Por el contrario, la
apoptosis es un proceso fisiolgico irreversible que ocurre de forma habitual en los organismos
eucariotas pluricelulares, tanto en el desarrollo embrionario como en la etapa adulta.

175
NECROSIS
La necrosis es la muerte patolgica de un conjunto de clulas o de cualquier tejido del organismo,
provocada por un agente nocivo que causa una lesin tan grave que no se puede reparar o curar. Por
ejemplo, el aporte insuficiente de sangre al tejido o isquemia, un traumatismo, la exposicin a la
radiacin ionizante, la accin de sustancias qumicas o txicos, una infeccin, o el desarrollo de una
enfermedad autoinmune o de otro tipo. Una vez que se ha producido y desarrollado, la necrosis es
irreversible.
Desde el punto de vista morfolgico, la necrosis se caracteriza por una dilatacin del retculo
endoplasmatico, una floculacin de la cromatina nuclear y una entrada de agua que acaba por provocar la
ruptura osmtica de la clula y la salida al exterior del contenido celular, es un proceso pasivo, que no
requiere una activa participacin de la clula, y que puede afectar a una zona mas o menos amplia de
tejido.
A diferencia de la apoptosis, la necrosis no requiere sntesis de nuevos ARNm o protenas. De los datos
recogidos de una gran variedad de estudios podra deducirse que el origen de todos los desordenes
necroticos es un desequilibrio osmtico. La permeabilidad de la membrana plasmtica se altera y se
establece un flujo anormal de iones hacia el interior, principalmente de calcio que va acompaado de la
entrada pasiva de agua. El volumen celular aumenta (tumefaccin) y algunas rutas metablicas se
alteran por las nuevas concentraciones inicas que se establecen. As, la mayor concentracin
intracelular de calcio inhibe la produccin de ATP, a la vez estimula la sntesis de algunas enzimas
proteolticas. La cromatina nuclear pierde su conformacin original y constituye pequeos agregados.
Algunos orgnulos membranosos, como el retculo endoplasmatico o la mitocondria, se dilatan por la
entrada de agua, los ribosomas se desorganizan y los lisosomas se rompen. Como etapa final, los
orgnelos estallan, la membrana plasmtica y la envoltura nuclear se fragmentan y el contenido
intracelular se vierte al exterior, promoviendo una respuesta inflamatoria. Las clulas fagocticas que
acuden al tejido ingieren y degradan estos restos. Esta salida del contenido celular ser la responsable
de la extensin del fenmeno necrtico, ya que las clulas adyacentes van a verse afectadas, bien
directamente, o bien de modo indirecto por la reaccin inflamatoria.

APOPTOSIS
La apoptosis es una forma de muerte celular, que est regulada genticamente, la muerte celular
programada es parte integral del desarrollo de los tejidos tanto de plantas como de animales
pluricelulares. La muerte celular durante el desarrollo normal de los animales fue descrita en 1951 por
Glucksmann. Mas tarde, en 1971, Kerr y colaboradores descubrieron el proceso a nivel ultra estructural
y le denominaron apoptosis. En la actualidad este trmino se usa como sinnimo de muerte celular
programada.
Cuando el medio no es apto para la clula, se ejecuta un programa de suicidio celular denominado
apoptosis. Este programa produce la muerte de la clula de manera controlada, la unidad biolgica no es
capaz de sostener la homeostasis. Las clulas ms viejas cuentan con mitocondrias ms daadas, por lo
que la capacidad de aportar ATP se ve disminuida, y si a eso se le unen las condiciones del medio, el
resultado es que las ms viejas son las que menos se alimentan en un medio precario. A su vez, la
ralentizacin de los ciclos metablicos descompensa otras funciones celulares, y lo que antes tena una
cancelacin de cargas favorable para la vida, ahora ha de recurrir a otras formas de cancelar la carga,
produciendo la expresin de genes que desemboca en la apoptosis.
176
La ejecucin en s depende bien de factores externos a la clula (generalmente variaciones de
concentracin de factores de crecimiento, estmulos para la permanencia en el tejido o bien estmulos
apoptticos directos desde linfocitos) activando el ligando de FAS en la membrana celular, o bien de
factores internos en los que la clula expresa metablicamente su programa de muerte celular como
consecuencia de un dao celular. En este contexto, dao implica desde oxidacin por radicales libres
que la clula evala como irreparable hasta el acortamiento de telmeros debido a sucesivos ciclos de
divisin celular, lo cual, en ltima instancia, producira dao gentico por prdida de informacin en caso
de nuevas divisiones celulares, pasando esta definicin de "dao" por todos los que generan apoptosis
La apoptosis es un fenmeno biolgico fundamental, permanente, dinmico e interactivo. Existen
mecanismos pro- y anti-apoptticos, regulados genticamente, que actan de forma activa y equilibrada.
Esta muerta celular es necesaria para el buen funcionamiento de organismo, por que se eliminan clulas
funcionalmente anormales y excedentes celulares normales. As, en el sistema nervioso de vertebrados
hasta un 50% de algunos tipos neuronales son inducidos muy tempranamente a morir por apoptosis. En
embriones machos de mamferos, las clulas del conducto de muller (que en la hembra darn lugar al
tero y a las trompas uterinas) mueren por apoptosis en el momento de la diferenciacin de lo rganos
genitales. La regresin caudal en la metamorfosis de algunos vertebrados, la perdida de la regin
interdigital en amniotas, y la formacin de la regin del paladar o la retina son otros ejemplos de
muerte celular programada. Pero la apoptosis tambin ocurre en clulas somticas adultas. As, en el
recambio continuo de los tejidos, la renovacin de los epitelios, la atrofia de la prstata tras la
castracin, la regresin de las glndulas mamarias despus de la lactacin o la atrasia del Folculo
ovrico. La muerte celular programada en el sistema hematopoyetico es muy elevada: miles de millones
de clulas mueren diariamente en la clula sea y rganos linfoides durante la diferenciacin y, fuera
de estos rganos, miles de millones de leucositos neutrofilos inservibles mueren diariamente de esta
manera en el hombre. Por eso, es en el sistema inmunitario donde mejor se ha estudiado este fenmeno,
y se ha podido comprobar que desempea un papel muy importante en la deleccion de poblacin de
linfocitos auto reactivos, habindose incluso identificado los genes y las protenas que participan en
esta muerte celular. Adema los linfocitos T citotxicos y las clulas asesinas (NK) actan induciendo
apoptosis en sus clulas diana. Una deficiente regulacin de este proceso puede dar lugar a mltiples
desordenes. En el hombre se piensa que es esa deficiencia parte importante de la etiologa de algunos
tipos de cncer, SIDA, enfermedades auto inmunitarias o trastornos del sistema nervioso central.

ASPECTOS MORFOLGICOS:
En contraste con la necrosis, la apoptosis no es un proceso pasivo que se realice sin una activa
participacin de la clula, sino que se desencadena como un proceso individual en cada clula. Como una
respuesta fisiolgica a la influencia del entorno, mediada por una cscada de transduccin de seales
desde la superficie celular hasta el ncleo, para poner en marcha un nuevo programa gentico. La clula
no sufre cambios osmticos, sino que atraviesa estadios morfolgicos distintos que pueden seguirse con
la microscopia y el empleo de determinadas tinsiones. Pueden distinguirse 3 fases.
177
En una fase inicial, la clula individual embebida en el tejido, pierde el contacto con las clulas que la
rodean, la cromatina nuclear se condensa y fragmenta, permaneciendo la envoltura nuclear. El volumen
citoplasmtico disminuye por perdida de agua y condensacin de las protenas, pero la mayora de los
orgnelos celulares permanecen intactos.
La segunda etapa del proceso se caracteriza por la deformacin de la membrana plasmtica, que acaba
fragmentndose, y la aparicin de los llamados cuerpos apoptoticos, que consisten en material nuclear y
citoplasmtico englobado por esos fragmentos de membrana. Anlisis bioqumicos de estos cuerpos
ponen de manifiesto su alto contenido en protenas, muy empaquetadas resistentes a acciones
proteolticas.
En la fase final, las clulas circundantes y los macrfagos presentes en el tejido fagocitan estos
cuerpos para su completa degradacin, en la que participan proteasas dependientes de calcio que se
encargan de dirigir protenas integrantes del citoesqueleto. A diferencia de la necrosis, no hay ruptura
de la clula que muere ni sus restos se vierten al exterior. El reconocimiento para la fagocitosis puede
estar mediado por la interaccin de glucoproteinas alteradas expuestas en la membrana plasmtica que
rodea los cuerpos apoptoticos y los receptores de membrana de tipo lecitina de las clulas fagocticas.
Otras veces las clulas fagocticas segregan a la matriz extracelular protenas denominadas
trovospondina y vitronectina, que se unen a la membrana de los cuerpos apoptoticos. Como la superficie
celular de las clulas fagocticas presenta receptores del tipo integrina con afinidad por la
trombospondina o por la vitronectina, estas actan de puente de unin para la fagocitosis. Todo el
proceso es bastante rpido, puede completarse en unas horas y ocurre sin perdida de material
intracelular, dao secundario a las clulas adyacentes o reaccin inflamatoria en el tejido.
MECANISMO.
La apoptosis puede iniciarse en el tercio final de G1 para impedir que una clula daada ingrese a la fase
de sntesis de manera que las mutaciones no se reproduzcan durante la replicacin del ADN y en la fase
G2 para impedir que las clulas que no hayan llegado a la madurez entren en mitosis.
En el mecanismo molecular que controla la apoptosis actan varios agentes, de los cuales uno de los ms
importantes y mejor estudiados es el complejo de cisteinil-aspartato proteasas (caspasas). Se han
descrito 11 caspasas en clulas humanas que provocan una degradacin proteica bien definida hasta
llegar a la formacin de cuerpos apoptticos. Algunas caspasas son "iniciadoras" y otras "efectoras" del
proceso cataltico, actuando sobre endonucleasas que son las responsables directas de la fragmentacin
del ADN. La cadena de degradacin proteica tiene sucesivos clivajes dependientes de la ubicacin del
cido asprtico que se repite en la estructura de la enzima. Se han descrito varios cientos de sustratos
de caspasas. La activacin de las caspasas, que existen en calidad de pro-caspasas inactivas, se produce
por diversas vas en que participan varios complejos moleculares.

178
NUCLEOLO
En 1781 Fontana describi una formacin dentro del ncleo que corresponde al nuclolo. En 1838
Schleiden y Schwann observaron esta formacin en diversos tipos celulares, principalmente vegetales. En su
interpretacin, basados en la teora celular, llegaron a la conclusin de que esta estructura originaba el
ncleo, as como el ncleo originara la clula y sta los tejidos. Cajal, utilizando tinciones de plata, observ el
nuclolo como un conjunto de esferas. Esta imagen, de zonas claras y oscuras, se corresponde con la que se
observa al microscopio electrnico y que Stable y Sotelo (1950) interpretaron como un ovillo de filamentos
(nucleolonema) entre los que quedan espacios claros (el nucleoloplasma). Con el perfeccionamiento tcnico de la
microscopia electrnica se interpret la estructura del nuclolo como la de una esponja, con tabiques
irregulares interconectados entre los cuales quedan espacios vacos.

Se distinguieron los siguientes componentes:
Parte amorfa. Corresponde a los espacios de escasa densidad a los electrones que forman cavidades
intercomunicadas en la parte densa. Contiene grnulos de ADN y equivale al nucleoloplasma.
Parte densa. Se corresponde con el nucleolonema. A su vez se distinguen en ella:
Parte granular. Formada por agrupaciones de grnulos de unos 25 nm de dimetro, que contienen
ribonucleoprotenas.
Parte fibrilar. Ms densa que la anterior, constituida por fibrillas de unos 8-10 nm, tambin formadas por
ribonucleoprotenas.
Centro fibrilar. Muy evidente en algunos nuclolos, donde puede haber varios centros fibrilares y de
densidad inferior a la de las partes granular y fibrilar. Consiste en finas fibrillas de 7-9 nm. Contiene
ADN y algo de ARN. Debido al contenido en ADN, se ha considerado que los centros fibrilares
corresponden a organizadores nucleolares en fase activa o de transcripcin. Algunos autores han
discrepado de esta interpretacin debido a que los centros fibrilares no se observan en muchos tipos
celulares y no parecen indispensables para la correcta funcin del nuclolo, y han atribuido al centro
fibrilar otras funciones, como la de almacn de reservas proteicas para la sntesis ribosmica.
En muchos nuclolos se observa tambin una masa fibrilar densa que contiene exclusivamente ADN. Es la
heterocromatina asociada al nuclolo y corresponde a la heterocromatina telomrica de los
organizadores nucleolares. En los ovocitos y espermatocitos de muchas especies, durante la profase de la
primera divisin meitica, las partes fibrilar y granular forman estructuras separadas (segregacin
nucleolar). Adems, los ovocitos de muchas especies suelen mostrar numerosos nuclolos de gran
tamao (hasta 12 micras de dimetro) y aparecen separados de los cromosomas.
COMPOSICIN QUMICA
La presencia de cidos nucleicos en el nuclolo pudo demostrarse pronto al comprobarse que este
componente nuclear absorba la luz ultravioleta. El empleo de los test citoqumicos para el estudio de
los cidos nucleicos permiti establecer que el nuclolo se diferencia de la cromatina en que contiene
bsicamente ARN y no ADN: se tie con la pironina y no con el verde metilo, y da negativo el test de
Feulgen (tincin selectiva para el ADN).
La proporcin de ARN en el nuclolo es muy variable y depende del tipo celular y del estado funcional. Se
estima como valor medio un 10 %, aunque en algunas clulas alcanza el 30 %. El componente mayoritario son
179
las protenas, que constituyen prcticamente el resto del nuclolo. Se trata de fosfoprotenas (cidas)
y otras protenas muy diversas, algunas de las cuales son bsicas. De la proporcin de las diversas
protenas y ARN depende el carcter tintorial del nuclolo. A diferencia de la cromatina, que siempre es
basfila, el nuclolo puede ser acidfilo. De ah la distincin hecha en los primeros estudios de
microscopa ptica entre basicromatina (cromatina en sentido estricto) y oxicromatina (cromatina
cida, correspondiente al nuclolo). Al estar constituido por ARN y protenas cidas del tipo
fosfoprotenas, el nuclolo debera ser siempre basfilo; y as ocurre muchas veces. Si n embargo,
posee tambin otras protenas bsicas que pueden disponerse enmascarando el ARN y las protenas
cidas, y en este caso el nuclolo es acidfilo. Debido a este comportamiento tintorial variable, el
nuclolo resulta ser un componente anffilo. Tambin es caracterstica la tincin con plata del nuclolo,
que se debe a una protena especfica, conocida como nucleolina, que slo se une a transcritos de ARNr
y es muy abundante. Entre las protenas del nuclolo se encuentran las snRNP, que intervienen en la
maduracin del ARNr y ayudan a la construccin del ribosoma.
En el anlisis bioqumico de los nuclolos siempre se encuentra algo de ADN (1-3 %). Si se excepta
cierta cantidad de ADN contaminante, ya que el nuclolo no tiene membrana, el ADN nucleolar puede
corresponder al centro fibrillar y a la heterocromatina asociada al nuclolo. En el nuclolo se han
detectado enzimas, principalmente las necesarias para la sntesis del ARN y su procesamiento.

CICLO NUCLEOLAR.
Igual que ocurre con los cromosomas, el comportamiento del nuclolo es muy diferente segn se
consideren clulas interfsicas o mitticas. En la interfase no se observan grandes cambios en el
nuclolo: suele aumentar el volumen a lo largo de ella y hay cierta tendencia a la fusin de nuclolos, lo que
ocurre cuando dos organizadores nucleolares se sitan en posiciones muy prximas.
Durante la divisin celular, el nuclolo muestra una serie de cambios que determinan un tipo de
conducta nucleolar: el ciclo mittico tpico del nuclolo, el cual ocurre en la mayora de las clulas. Este
consiste fundamentalmente en tres procesos.
Desorganizacin profsica.
Es un proceso en el que el nuclolo presenta las siguientes caractersticas:
a) disminuye de tamao.
b) su forma se hace irregular generalmente polilobulada o estrellada.
c) su afinidad tintorial por muchos colorantes disminuye.
d) aparecen pequeas masas de material nucleolar libres entre los cromosomas profsicos que se
estn condensando.
Transporte metafsico y anafsico. En esta etapa el nuclolo ha perdido su individualidad. Ya no se
observa como cuerpo, pero sus materiales constituyentes se han dispersado en el ncleo profsico y
180
terminan entroncndose o incorporndose (de una manera poco conocida) a los cromosomas
metafsicos. Generalmente en esta fase el material nucleolar no se detecta
morfolgicamente. Sin embargo, despus de marcar con uridina tritiada en la interfase
previa, y de consultar por radioautografa que gran parte del marcaje corresponde al
nuclolo, se puede observar que durante la metafase y anafase el marcador
(presumiblemente ARN nucleolar o ribosomal) se encuentra sobre los cromosomas.
Tambin se ha comprobado que existe una proporcin de ARN en los cromosomas
metafsicos utilizando citoqumica.
Reorganizacion telofsica.
En la primera mitad de la telofase aparecen cuerpos laminares entre los cordones
cromosmicos en vas de descondensacin. Al mismo tiempo, se observan cuerpos ms
esfricos, resultado de la aglomeracin y fusin de los ms pequeos. El material de estos
cuerpo, dispuestos tambin entre los cromosomas, presenta todas las reacciones
citoqumicas propias del nuclolo interfsico. Su ultra estructura (cuerpos
fundamentalmente formados por regiones fibrilares, rodeados por regiones granulares) es
tambin semejante a la del nuclolo interfsico.
Todas estas caractersticas, y adems su particular conducta, hacen que se llame a stos
cuerpos prenucleolares, lo que denota su significaci n en el ciclo nucleolar.
Avanzada la telofase, los cuerpos prenucleolares se hacen mayores y comienzan a formar un nuclolo
interfsico. El proceso se produce por coalescencia y fusin de los cuerpos prenucleolares en torno a la
regin organizadora nucleolar. Cuando esto termina, se observan uno o ms nuclolos maduros (en
funcin del nmero de organizadores) habiendo prcticamente desaparecido los cuerpos prenucleolares.

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B I B L I O G R A F I A

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Partamos de un ncleo que tiene 2C de ADN que se encuentra en el perodo G

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