Medios de cultivo en el marco de

la NTP ISO- 15189 2008

Lic. Roberto E. Rojas Len
rerojasle@yahoo.com
Programa de control de calidad
Misin
Asegurar que la informacin generada por el
Laboratorio de Micologa:
Precisa, fiable y reproducible
Valorar los elemento de la calidad
LABORATORIOS DE MICOLOGIA:
CATEGORIAS
1. LIMITADOS BASICOS
2. SOLAMENTE IDENTIFICACION DE
LEVADURAS
3. GENERALES
LIMITADOS BASICOS
Preparaciones con
KOH o exmenes
con montaje
hmedo
SOLAMENTE
IDENTIFICACION DE
LEVADURAS
Asla e identifica hasta gnero y especie
hongos levaduriformes, rutinariamente
encontrados en el laboratorio
LEVADURAS: identificados con sistemas
comerciales y otros
Pruebas de susceptibilidad antifngica para
levaduras
GENERALES
Asla e identifica hasta gnero o
cuando clnicamente relevante hasta
gnero y especie de hongos
(levaduras y mohos), rutinariamente
encontrados en el laboratorio.
Pruebas de susceptibilidad
antifngica
Elementos de la Calidad
Calidad de la muestra clnica
Control
Procedimientos diagnsticos
Reactivos
Medios de cultivo
Instrumentos
Personal del laboratorio
Estos elementos afectan directamente la calidad del
resultado
Programa de QC
Debe
Monitoriza los elementos de la calidad
continuamente
Identifica posibles reas de mejora
Calidad de la muestra clnica
No se procesan muestras inaceptables
Solo si no se pueden tomar de nuevo
Nota en resultados
Muestras inaceptables
Hisopos para mltiples procedimientos
LCR, menor de 0,3 ml para deteccin de Ag
criptococal
Sueros hemolizados o lipmicos para serologa
fngica
Procedimientos
Utilizar procedimientos estandarizados
Libros, revistas y manuales reconocidos
Disponibles permanentemente
Procedimientos
Incluir en su redaccin
Fases del procedimiento
Lmites de tolerancia
Criterios de aceptabilidad
Preparacin de reactivos
Forma de realizar el informe
Controles de calidad necesarios y recomendados
Procedimientos
Revisados anualmente
Consignando y fechando
Cambios realizados
Persona responsable
PROCEDIMIENTOS ANALITICOS
5.5.1 .Los procedimientos preferidos son
aquellos que han sido publicados en manuales
reconocidos, en textos o publicaciones
evaluados por expertos, o en directrices
internacionales, nacionales o regionales. Si se
utilizan procedimientos propios, deben ser
validados de forma apropiada para su
utilizacin prevista y totalmente
documentados
NTP-ISO 15189, 2da Ed. 2008
PROCEDIMIENTOS ANALITICOS
5.5.2 se usan procedimientos validados
Validaciones documentadas y registradas
Revisin anual y documentada
5.5.3 Disponibles en el lugar de trabajo,
idioma comn del laboratorio
Fichas resumen o similar, abreviado
Cualquier desviacin se debe revisar y
documentar
PRIMERO ESTANDARIZAR
LUEGO REDESCUBRIR SI LA TIERRA ES EN
VERDAD REDONDA
PROCEDIMIENTOS
ANALITICOS
Contendr adems de identificadores
Propsito del anlisis
Principio
Especificaciones tcnicas (sensibilidad,
especificidad)
Tipo de muestra primaria
Tipo de recipiente y aditivo
Equipo y reactivos
Procedimientos de calibracin
Pasos del procedimiento
Procedimiento de control de calidad
Interferencias y reacciones cruzadas
Procedimiento para calcular los resultados
Intervalos de referencia biolgicos
Intervalo de los posibles resultados
Valores de alerta crtico
Interpretacin del laboratorio
Precauciones de seguridad
Fuentes potenciales de variabilidad
PROCEDIMIENTOS ANALITICOS
Manuales electrnicos, son aceptables

Control de equipos e instrumentos
Frecuencia necesaria
Garantiza correcto funcionamiento

Control de equipos e instrumentos
Equipo Procedimiento Periodicidad Lmites de tolerancia
Refrigeradores Registro de temperatura* Diario o continuo 2 C a 8 C
Congeladores Registro de temperatura* Diario o continuo 8 C a 20 C
60 C a 80 C
Estufas Registro de temperatura* Diario o continuo 45 C 1 C
35,5 C 1 C
30 C 1 C
Baos de agua Registro de temperatura* Diario 36 C a 38 C
55 C a 57 C
Autoclaves Prueba con la tira de esporas
(Bacillus stearothermophilus)
Semanalmente Ausencia de
crecimiento
pHmetros Soluciones calibradoras de pH Con cada uso 0,1 unidades de pH
del estndar
Centrfugas Revisin de revoluciones por minuto
(tacmetro)
Mensualmente Dentro del 5% del
ajuste del mando
Campana de seguridad Medicin de la velocidad de aire
a travs de la apertura frontal
Cada 3-6 meses 1,52 m
3
de aire/min.
0,152 m
3
/min.
* Cada termmetro debe ser calibrado con un termmetro patrn.
Control de equipos e instrumentos
Material de vidrio reutilizable
Limpio y estril
Cubierto con papel aluminio
Rotular con fecha de caducidad (tres semanas)
Control de equipos e instrumentos
Documentos e informes relativos al equipo
Conservarse durante vida til
Control de medios de cultivo
Medios elaborados en el propio laboratorio
Probar 5% (al azar) de cada lote interno preparado
del lote, 35 C y la otra a 25 C x 72 hs.
Diaria inspeccin
Solo ser aceptable el lote interno preparado, si
< del 5% de contaminacin de los medios incubados
Control de medios de cultivo
Rotular los lotes de medios con:
Nmero de lote
Fecha de caducidad
Mtodo de esterilizacin utilizado
Cantidad de medio preparado
Control de medios de cultivo
Medios comerciales, verificar
Color
Grado de sequedad
Presencia de contaminacin
Control de esterilidad
Estn exentos del control de rendimiento
Constando cumplimiento de M22-A
Control de medios de cultivo
Medios elaborados en el laboratorio y los
medios comerciales que no cumplan con M22-
A, comprobar con cada lote nuevo:
Cepas QC
Morfologa
Fisiologa
Propiedades bioqumicas conocidas

Medio
a
pH ( 0,2) Incubacin Organismo control
b
ATCC
c
Resultados esperados
Agar glucosado Sabouraud (SDA)
d
5,6 4 sem Candida albicans 60193 Crecimiento
Emmonds modificado
d
6,9 4 sem Trichophyton mentagrophytes
Escherichia coli

Aspergillus niger
9533
25922

16404
Crecimiento
Inhibicin con antimicrobianos

Inhibicin con cicloheximida; Crecimiento con gentamicina o cloramfenicol
Agar glucosado de patata (PDA)
d
5,6 4 sem Candida albicans
Trichophyton mentagrophytes
60193
9533
Crecimiento
Crecimiento
BHIA (Agar-Infusin
de Corazn-Cerebro)

+ Sangre de cordero
d


+ Sangre de cordero +
antimicrobianos
7,4 1-3 das Candida albicans
Trichophyton mentagrophytes

Candida albicans
Trichophyton mentagrophytes

Candida albicans
Trichophyton mentagrophytes
Escherichia coli
Aspergillus niger
60193
9533

60193
9533

10231
9533
25922
16404
Crecimiento
Crecimiento

Crecimiento
Crecimiento

Crecimiento
Crecimiento
Inhibicin
Inhibicin con cicloheximida
Agar Czapek Dox 7,3 1-2 sem Aspergillus niger 16404 Crecimiento
Agar fungus selection
d
6,9 4 sem Trichophyton mentagrophytes
Candida albicans
Aspergillus niger
Escherichia coli
9533
10231
16404
25922
Crecimiento
Crecimiento
Inhibicin
Inhibicin
Agar inhibidor de mohos 6,7 4 sem Aspergillus niger
Candida albicans
Escherichia coli
Trichophyton mentagrophytes
16404
10231
25922
9533
Crecimiento
Crecimiento
Inhibicin
Crecimiento
Agar extracto de malta 5,6 4 sem Candida albicans
Trichophyton mentagrophytes
60193
9533
Crecimiento
Crecimiento
Agar ascospora 6,5 1-4 sem Saccharomyces cerevisiae
Candida albicans
9763
10231
Ascosporas
Ausencia de ascosporas
Agar harina de maz
+/- Polisorbato (Tween 80)

+ Glucosa

5,8

5,8

3 das

1-4 sem

Candida albicans
Candida pseudotropicalis
Trichophyton rubrum
Candida albicans

10231
8553
28188
10231

Crecimiento, clamidosporas
Crecimiento, no clamidosporas
Crecimiento, rojo
Crecimiento
Controles de calidad para medios de cultivo micolgicos
a: Los inculos no estn estandarizados
b: Organismos recomendados para control de calidad. Aunque se citan cepas de la ATCC, se acepta cualquier hongo que
ofrezca un resultado similar
c: ATCC, American Type Culture Collection
d: Exento de realizar control de calidad si los medios son comerciales
Colorantes y reactivos
Rotulados
Nombre
Nmero de lote
Fecha de caducidad
Condiciones de almacenamiento
Productos comerciales, fechados
A la recepcin
Momento de apertura para su uso

Colorantes y reactivos
Productos preparados, etiquetados con
Fecha de preparacin
Iniciales del Licenciado que lo prepar
Valoracin NFPA
Procedimientos de preparacin, siempre
disponibles
Adquisicin de reactivos
Garantizados no menos de seis meses

Control de calidad de Colorantes
Colorante Organismo control
a
Resultado esperado Periodicidad
Blanco de Calcoflor Candida albicans
control negativo
color azul brillante o verde manzana
libre de contaminacin
cada vez que se use
Tinta china Cryptococcus albidus
control negativo
Presencia de cpsula hialina
libre de contaminacin
cada vez que se use
Hidrxido de potasio muestra de esputo
control negativo
disuelve el moco
libre de contaminacin
cada vez que se use
Azul de lactofenol Penicillium spp.
control negativo
pared fngica de azul intenso
libre de contaminacin
cada vez que se use
a: Organismos recomendados para control de calidad. Aunque se citan cepas de la ATCC,
se acepta cualquier hongo que ofrezca un resultado similar
Controles de calidad de los procedimientos de
identificacin morfolgicos
Procedimiento Organismo control
a
ATCC Resultado esperado Periodicidad
Tubo germinativo Candida albicans
C. tropicalis
60193
66029
Tubos germinativos
Ausencia de tubos germinativos
Cada vez que se
realice
Conversin dimrfica
(BHI con 10% de sangre
de cordero)
Histoplasma capsulatum
Sin inculo
Crecimiento/conversin a
levadura
No crecimiento
Cada nuevo lote
Perforacin del pelo Trichophyton mentagrophytes
Trichophyton rubrum
Perforacin
Ausencia de perforacin
Cada vez que se
realice
Termotolerancia Aspergillus fumigatus
Aspergillus flavus
Crecimiento a 45-50 C
Ausencia de crecimiento
Cada vez que se
realice

a: Organismos recomendados para control de calidad. Aunque se citan cepas de la ATCC, se acepta cualquier hongo que ofrezca un resultado similar
Controles de calidad de las pruebas de identificacin bioqumica
Se realizan con cada lote
Se realizan segn instrucciones del fabricante
(manuales, insertos, etc.), se citan:
Organismos control para testar
Resultados esperados
Formato de solicitud de examen
No deben faltar datos
Identificacin del paciente
Diagnstico
Caractersticas clnicas
Tratamiento
Informe de resultados
Debe asegurarse de alguna forma rpida su
informe si es relevante
Presencia de agente infeccioso en algn lquido
normalmente estril
Levaduras capsuladas en LCR (C. neoformans)
Telefnica, nunca sustituye al formato escrito
Registrar, personal de salud que lo recibi, fecha y
personal que realiz la llamada
EJEMPLO
Conservados por lo menos dos aos
Control de calidad externo
Permiten controlar mtodos analticos
Procedimientos
Instrumentos
Reactivos
etc.
CAP, aproximadamente $ 800
SEIMC
Laboratorio Central de Salud Pblica del Reino
Unido

CAPACITACION DEL
PERSONAL
La introduccion del CQI deber estimular un
incremento sustancial en el tiempo empleado
en entrenamiento y educacin contnua. La
aplicacin del CQI en la industria ha
demostrado que ampliar el entrenamiento
reduce sustancialmente los errores y as pues la
cantidad de tiempo requerido para monitorear
y detectar errores
Clin Microbiol Rev 1994, 7(1):55-88
CAPACITACION DEL
PERSONAL
El personal evaluado
semianualmente, el primer ao, en
adelante una vez al ao
Las actividades de la competencia
del personal sern documentadas y
mantenidas indefinidamente
5% del tiempo de trabajo
CAPACITACION DEL
PERSONAL
Se requiere de un
Programa de Capacitacin
y Educacin Continua
EFECTIVO
Registros de QC
Personal registra datos del CC en formatos apropiados
Supervisor responsable
revisin peridica de datos y documentacin del CC
Mantener registros de manera organizada
INSPECCION
Todos los registros mantenidos por lo menos 2 aos
STOCK 2009
CODIGO NOMBRE
STOCK
(L)
MSDS COMPOSICION QC
CONSUMO
ABRIL
CANTIDAD
FRASCOS X 500 G
1 Agar, Agar 33.3

1
2A Agar Bacteriological 100.0 LP0011 * &

3
2B AGAR N1 66.7

2
2 Agar, Technical 133.3 LP0013 * &

4
6 Brain Heart Infusion Agar 21.3 CM0375 * &

2
7 Brain Heart Infusion Broth 27.0 CM0225 * &

2
11 Cary Blair Medium 76.9 CM0519 * &

2
17 Columbia Blood Agar Base 25.6 CM0331 * &

2
22 Dermasel Agar Base 33.3
CM0539
* &

3
26 GC Medium Base 13.9 CM0367 * &

2
27 Haemophilus Test Medium Base 69.8 CM0898 * &

3
32 Lysine Iron Agar 29.4 CM0381 * &
1
2
33 MacConkey Agar N3 67.3 CM0115 * &
3
7
36 Mannitol Salt Agar 36.0 CM0085 * &
3
8
40 Mueller Hinton Agar 197.4 CM0337 * &
19
15
46 Perfringens Agar Base 10.9 CM0587 * &

1
50 Sabouraud Dextrosa Agar 53.8 CM0041 * &

7
51 Salmonella Shigella Agar 47.6 CM0099 * &
3
6
55 SIM 50.0 CM0435 * &

3
56 Simmons Citrate Agar 100.0 CM0155 * &
1
5
57 Sorbitol MacConkey Agar 40.0 CM0813 * &

4
58 TCBS Agar 22.7 CM0333 * &
3
4
62 Thioglycolate USP Fluid Medium 16.7 CM0173 * &

1
66 Triple Sugar Iron Agar 38.5 CM0277 * &

5
67 Tryptone Soya Agar 62.5 CM0131 * &
7
7
68 Tryptone Soya Broth 183.3 CM0129 * &

11
72 XLD Agar 75.5 CM0469 * &
4
8
CONTROL DE CALIDAD DE MEDIO DE CULTIVO
AO 2006
MEDIO: Agar Sabouraud Dextrosa PERFORMANCE:
APARIENCIA FISICA:
Aceptable=Inocular Candida albicans desarrollo
Aceptable= color beige claro, semislido,
olor caracterstico
ESTERILIDAD: Referencias:
Aceptable= contaminacin 5% del lote
repartidos a 35 y 25 C x 3 das
McGinnis; Laboratory handbook of medical mycology.
New York, Academic Press, 1980
Fecha
Registro
T.M.
Fecha de
Control
Fuente Lote N
Fecha de
Expiracin
Apariencia
a
Esterilidad
a
Performance
a

Comentario/accin correctiva
A NA A NA A NA




























a
A, aceptable; NA, no aceptable
El control de calidad en
Microbiologa, mas que una
ciencia es un arte, por lo tanto
debemos estar
permanentemente inspirados