UREA -S

Reactivo para la determinacin Enzimtica

de Urea en suero, plasma y orina.


1/2 2007-06v4.0
Cdigo Presentacin

05409 2x 50ml

PRINCIPIO
La urea es el producto final mayoritario del metabolismo del
nitrgeno proteico en los seres humanos. Constituye la fraccin
ms abundante del nitrgeno no proteico. La urea se produce en
el hgado y es excretada por la orina. Su elevacin es producto
de trastornos en la funcin renal o heptica, problemas dietticos,
diabetes y otros.

La urea presente en la muestra, es desdoblada a amonio por
accin de la enzima ureasa, segn la proposicin de Faucet y
Scott.

(NH2)2CO + 2 H20 UREASA 2NH3 + C02 + H20

El amonio producido reacciona con salicilato e hipoclorito en
ambiente alcalino, formndose un complejo de color verde. La
intensidad del color producido es directamente proporcional a la
cantidad de urea presente en la muestra, y su absorbancia se lee
a 578 nm (560-620).

CONTENIDOS

UREASA Suspensin
Ureasa >50 mM
Estabilizantes y preservantes no reactivos c.s.

REACTIVO SALICILATO
Acido Saliclico 5 mM
Nitroprusiato de Sodio 5 mM
Tampn Fosfato pH 6.9 100 mmol/l

REACTIVO HIPOCLORITO
Sodio Hidrxido 200 mM
Sodio Hipoclorito 10 mM

PATRON
Solucin estabilizada equivalente a: UREA 66 mg/dl
BUN 30 mg/dl

PRECAUCIONES Y ADVERTENCIAS
Conservado entre 2C y 8C y protegido de la luz, estable
hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta.
Los reactivos contienen menos del 0.1% de azida sdica. La
azida sdica puede reaccionar con tuberas de cobre y plomo
formando compuestos explosivos. Las regulaciones locales
para el desecho de compuestos peligrosos deben ser
respetadas, descartar con abundante agua.

MATERIALES ADICIONALES REQUERIDOS NO
SUMINISTRADOS
Bao termoregulado.
Espectrofotmetro o foto colormetro de filtros capaz de medir
absorbancia a 578nm. (rango 560-620 nm)
Pipetas automticas.
Cronometro y/o timer.


MUESTRAS
Suero, Plasma u Orina (diluida 1:100). El plasma debe obtenerse
utilizando anticoagulantes libres de amonio. No utilizar fluoruro
pues inhibe la accin de la enzima ureasa. La urea es estable en
el suero por lo menos 24 horas a temperatura ambiente, varios
das entre 2 y 8C, y hasta 3 meses a -20C.
La orina de 24 horas debe ser recogida en un frasco que
contenga 2.0 ml de Acido Clorhdrico (HCL) Solucin al 50% y
centrifugar antes de su uso como muestra.


PROCEDIMIENTO
Llevar el reactivo a la temperatura que se realizar el ensayo. Las
pipetas a utilizar deben estar limpias y libres de residuos para no
contaminar el reactivo.

Para la determinacin de Urea en Orina, diluir la muestra de Orina
1:50 (0.1 ml Orina + 4..9 ml agua desmineralizada) Multiplicar el
resultado por 50.

BLANCO PATRON MUESTRA
Ureasa 50 l 50 l 50 l
Reactivo
Salicilato
1 ml 1 ml 1 ml
Mezclar.
Patrn -- 10 ul --
Muestra -- -- 10 ul

Incubar 3 minutos a 37C o 10 minutos a temperatura
ambiente.

Reactivo
Hipoclorito
1 ml 1 ml 1 ml

Mezclar, incubar 5 minutos a 37C o 10 minutos a temperatura
ambiente.

Leer las absorbancias a 578 nm (560620nm) llevando a cero el
espectrofotmetro con el blanco de reactivo. El color resultante es
estable por lo menos 60 minutos.


CLCULOS

SUERO, PLASMA u ORINA

FACTOR = ____ 66 _______
Absorbancia Estndar

Urea (mg/dl)= Factor x Abs. Muestra

CONCENTRACION DE UREA EN ORINA DE 24 HORAS

Urea en Orina = mg/dl en Orina X Vol. De Orina en 24 horas X 0.01
(mg / 24 horas)


NOTA: Para expresar los valores obtenidos como Nitrgeno Ureico
(mg/dl) multiplicar el valor obtenido por 0.455.


VALORES DE REFERENCIA

Suero o plasma: Urea: 10 a 50 mg/dl
Nitrgeno Ureico: 4.5 a 22.7 mg/dl

Orina: Urea: 15 a 30 mg/24 hrs
Nitrgeno Ureico: 7 a 14 mg/24 hrs

Nota: Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios
intervalos de referencia.


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Reactivo para la determinacin Enzimtica
de Urea en suero, plasma y orina.


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CONTROL DE CALIDAD
Pueden ser empleados todos los sueros con valores de Urea
determinados por este mtodo. Nosotros recomendamos el uso
de nuestro suero de origen animal IHR Diagnstica para verificar
la funcionalidad del procedimiento de medida. Cada laboratorio
debe establecer su propio programa de control de calidad interno,
as como procedimientos de correccin en el caso de que los
controles no cumplan con las tolerancias aceptables.

CARACTERISTICAS DE DESEMPEO

LINEARIDAD
La reaccin es lineal hasta 300 mg/dl. Para valores superiores, diluir la
muestra con suero fisiolgico y el resultado obtenido se multiplica por el
factor de dilucin

REPETITIVIDAD
Concentracin media S.D. C.V.%
14 mg/dl 0.41 2.83
50 mg/dl 1.63 3.25

REPRODUCIBILIDAD
Concentracin media S.D. C.V.%
14 mg/dl 0.52 3.54
50 mg/dl 1.96 3.80

LIMITE DE DETECCION
El limite de deteccin fotomtrica hallado fue 0.001 Abs equivalente a 0.2
mg/dl.

EXACTITUD
Una comparacin entre este procedimiento y un reactivo similar usando
110 muestras entre 8.0 y 55 mg/dl produjo un ecuacin de regresin lineal
de y= 1.00x -0.47 con un coeficiente de correlacin (r) igual a 0.998.

INTERFERENCIAS
Valores elevados de hemoglobina hasta 80 mg/dl, Bilirrubina hasta 32
mg/dl, triglicridos hasta 700mg/dl producen interferencias significativas
(<5%) en este mtodo. Otros medicamentos y sustancias pueden
interferir
4
.

BIBLIOGRAFA
1. Kaplan, A. and Teng, L.L. in Selected Methods of Clinical Chemistry, Vol. 9, Ed. By W.R. Faulkner and S. Meites,
AACC, Washington, pp 357-363 (1982).
2. Tietz, N.W., textbook of Clinical Chemistry, W.B. Saunders Co., Philadelphia, p.1270-1271 (1986).
3. Morin, L.G., Clin. Chem. 20:51 (1974).
4. Henry, R.J., Clinical Chemistry, Principles and Technics. 2 Ed. Harper and Row Publisher. New York, 1974.
5 Young D.S., et al., Clin Chem. 21:1D 1975.
6.Young D.S. Effects of drugs on clinical laboratory tests, 4
th
Ed AACC, 1995


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