Prctica No.

2
ACTIVIDAD
ENZIMATICA.

Lab. De bioquimica.
























12/03/14
UNIVERSIDAD AUTONOMA
DEL ESTADO DE MORELOS
FACULTAD DE FARMACIA.
Alumnos:
Cruz Rodrguez Esly
Reboollar Mtz. Eduardo D.
Aaron

5 B

PRACTICA 2.
ACTIVIDAD ENZIMATICA.

Objetivo:
Estudiar la actividad de una enzima que cataliza una reaccin oxido-
reduccin bajo la influencia de los factores de concentracin, temperatura y
pH.

Introduccin:
Las estructuras que forman el cuerpo de los seres vivos se encuentran realizando
un sinfn de reacciones qumicas estas, dan lugar a las funciones que todo ser
vivo realiza, en esta prctica nos centramos en la enzimas que son las encargadas
de dirigir esa variedad de reacciones: hacen que ocurra la reaccin necesaria, en
el lugar adecuado y en el momento preciso.
Dichas enzimas son de molculas de naturaleza proteica que actan como
catalizadores en todas las reacciones del metabolismo. Para que ocurran estas
reacciones es generalmente necesaria la presencia de un catalizador (sustancia
que facilita la reaccin y de este modo aumenta la velocidad a la que esta se
desarrolla, catador que, adems, ha de ser especfico para determinada reaccin
(pues de lo contrario podran ocurrir reacciones no deseables).
Las enzimas, por tanto, adems de ser catalizadores, han de ser capaces de
reconocer sobre qu sustancia (s) han de actuar (sustrato o sustratos de la
enzima) y tambin han de ser capaces de provocar una transformacin.
Todas estas condiciones las enzimas las pueden cumplir por ser molculas de
estructura proteica (terciaria globular). Eso hace que tengan en su superficie solo
tengan un centro activo, en el cual solo encaja una molcula: sustrato.
Mientras est encajado el sustrato en el centro activo tiene lugar la transformacin
del sustrato dando lugar a los productos de la reaccin. Estos se separan de la
enzima, quedando el centro activo de esta libre y la enzima esta lista para volverse
a unir a otra molcula de sustrato, es decir, lista para volver a actuar.
En esta prctica estudiamos la actividad de una enzima la cual puede
determinarse midiendo la cantidad de producto formado (o de sustrato consumido)
por unidad de tiempo. Pero por otro lado evaluamos la existencia de distintos
factores que pueden modificar dicha actividad enzimtica. Los factores que
ocasiona esto son: concentracin de enzima, concentracin de sustrato,
temperatura, pH e inhibidores.
Temperatura: para toda enzima existe una temperatura ptima de actividad,
a la cual la velocidad de la reaccin es mxima. A temperatura por debajo
de esta temperatura, la frecuencia de choques entre la enzima y el sustrato
es baja y, por lo tanto, la velocidad de reaccin tambin lo es. Conforme se
incrementa la temperatura, aumenta la frecuencia de choques y se favorece
la velocidad de reaccin. Pero si la temperatura es muy elevad, pueden
romperse las fuerzas de van der Waals y los puentes de hidrogeno que
estabilizan la estructura de las enzimas; como consecuencia, se produce su
desnaturalizacin y la perdida de la actividad enzimtica.
Efecto del pH sobre la actividad enzimtica: La estructura de la enzima se
encuentra estabilizada por una serie de enlace no covalentes (hidrofbicos,
puentes de hidrogeno, atracciones electrostticas) y covalentes (puentes
disulfuro) en los aminocidos. Los cambios de pH modifican las cargas de
los grupos R de los aminocidos que no son neutros (aspartato, lisina,
arginina y glutamato), e interfieren con las reacciones electrostticas y su
estabilidad estructural, lo que provoca una prdida total o parcial en su
actividad enzimtica. Para cada enzima existe un pH ptimo en relacin con
la actividad, el cual vara segn la regin celular en que se encuentre dicha
enzima: por ejemplo, el pH dentro del lisosoma o en el estmago es
alrededor de 2 (y ese es el pH ptimo de las enzimas all localizadas),
mientras que las enzimas presentes en el plasma o en el duodeno tienen un
pH ptimo de actividad entre 7.0 y 8.0.
Efecto de la concentracin de la enzima sobre la actividad enzimtica: en
toda reaccin enzimtica, si se incrementa la concentracin de enzima, se
forma mayor cantidad de producto por unidad de tiempo. El incremento en
la velocidad de reaccin es directamente proporcional al incremento en la
concentracin de enzima, siempre y cuando la cantidad de sustrato no sea
limitante, es decir, que el sustrato no llegue a agotarse.
Para poder evaluar estas condiciones utilizamos el modelo propuesto por Leonor
Michaelis y Maud Menten, que consiste en graficar la velocidad de la actividad
enzimtica y la concentracin del sustrato. Esta representacin grfica permite
determinar la constante de Michaelis-Menten (KM) al interpolar la mitad de la
velocidad mxima (V
mx
). En esta prctica se emplear la enzima catalasa de la
levadura y la peroxidasa de la zanahoria y para para analizar algunos aspectos de
la cintica enzimtica.








Imgenes:

*Efecto de la concentracin de la enzima. *Efecto de la inhibicin:











*Efecto de la temperatura: *Efecto del pH:










Bibliografas:
Produccin de oxgeno (burbujas) de la
enzima peroxidasa en papa y zanahoria a
concentraciones de 0.1, 0.25 y 0.5 gr.

El tubo 3 contiene en inhibidor NaCN 5%
y el tubo 4 contiene Pb(NO
3
)
2.
pH 4 pH 7
pH 10
http://books.google.com.mx/books?id=8SAtkthrFEkC&pg=PA1&lpg=PA1&dq=pract
ica+actividad+enzimatica+concentracion,+temperatura+y+pH&source=bl&ots=oDrj
zpq04e&sig=Qme2gmYZF7jtA1pYXVCNbTne7MY&hl=es&sa=X&ei=HuklU-
T5LOPM2AXmr4HYCw&ved=0CFEQ6AEwBw#v=onepage&q=practica%20activid
ad%20enzimatica%20concentracion%2C%20temperatura%20y%20pH&f=false
http://www.uaq.mx/investigacion/difusion/veranos/memorias-
2010/12%20Verano%20Ciencia%20Region%20Centro/UAQ%20Cedillo%20Jimen
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http://recursostic.educacion.es/ciencias/biosfera/web/profesor/practicas/Actividad_
enzimatica.pdf