Area de Gentica.

Departamento de Microbiologa y Gentica

Ingeniera Qumica

Problemas de Introduccin a la Gentica (2014)

Alberto Jimnez Garca. Universidad de Salamanca

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Tema 2. Naturaleza y estructura del DNA 1) El anlisis qumico del DNA de un virus desconocido indica la siguiente composicin: 40% A, 20% T, 15% G, 25% C. Qu implicaciones tiene este resultado en relacin a la estructura del DNA vrico? 2) En el DNA de una especie bacteriana el porcentaje de timina es igual al porcentaje G+C. a. Qu % de adenina habra?. b. Cuntos residuos de adenina habra, como media, en un milmetro de dicho DNA?. 3) Si el RNA fuese el material gentico universal, cmo habra afectado a los experimentos de Avery, McLeod y McCarty?. 4) Los genomas de dos organismos distintos tienen idntico porcentaje (G+C) a. Indica este dato que ambos organismos poseen DNA de doble hlice? b. Significa que tienen la misma secuencia de bases? c. Indica que tienen la misma longitud? d. Sugiere que poseen la misma velocidad de renaturalizacin? e. Significa que son de igual densidad? f. Indica que los dos DNAs tienen la misma temperatura de fusin? 5) El DNA del virus T4 muestra un valor Cot1/2 de 0,5 y su genoma contiene 105 pb. Cuntos pb contiene el genoma del virus MS2 y el de la bacteria E. coli, cuyos DNA producen un valor Cot1/2 de 0,001 y 10,0 respectivamente? 6) Se quiere caracterizar el material hereditario de un organismo patgeno. Los anlisis realizados muestran que su material gentico es un cido nuclico que tiene la siguiente composicin de bases: A=21%; C=29%; G=29%; U=21% Adems, cuando se calienta muestra un importante efecto hipercrmico y el anlisis de su cintica de reasociacin proporciona la siguiente curva Cot:

a.Cul es el material gentico del organismo en cuestin? b.Podemos tener una idea del tamao de su genoma? !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
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Tema 3. Estructura y funcin de los cromosomas 1) Una clula vegetal diploide contiene 2000 millones de pb de DNA. a.Cuntos nucleosomas tiene la clula? b.Qu cantidad de cada tipo de histonas tiene la clula asociadas al DNA genmico? 2) Se ha descubierto una nueva especie vegetal y se quiere caracteriza su material gentico. Se aisla cromatina y se examina al microscopio electrnico observando una estructura similar a un collar de cuentas. Se trata la cromatina con una pequea cantidad de nucleasa que degrada la cromatina en cuentas individuales que contienen 280 pb de DNA cada una. Despus se aade ms nucleasa y se obtiene un fragmento de DNA de 120 pb enrollado alrededor de un ncleo de protenas histonas. El anlisis de las histonas revela la siguiente proporcin: H1 12,5%; H2A 25%; H2B nueva) 12,5%. 25%; H3 0%; H4 25%; H7 (una histona

Qu conclusiones se pueden obtener en base a estas observaciones acerca de la estructura del nucleosoma en esta planta? 3) Cuntas cromtidas tiene un cromosoma bacteriano?. Y centrmeros? !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! Tema 4. Replicacin del material hereditario 1) Supongamos una replicacin conservativa del ADN. Dibuja cuantitativamente los resultados que se obtendran en el experimento de Meselson y Stahl despus de una generacin y dos generaciones despus del paso del medio denso al medio ligero. Habra zonas de densidad intermedia?. 2) Un plsmido determinado inicia su replicacin mediante la sntesis de un cebador de RNA por la RNA pol. La elongacin est catalizada por la DNA PolIII de E. coli. El nmero de plsmidos por clula se encuentra regulado por medio de una protena represora de la iniciacin que es sintetizada poco despus del comienzo de la replicacin del plsmido. Determinar qu cambios se producirn en relacin al nmero de plsmidos por clula si se aaden a un cultivo en fase de crecimiento activo: 1.Rifampicina - inhibidor de la RNA pol 2.Cloramfenicol - inhibidor de la traduccin 3) Supongamos que se encuentra un cido nucleico de doble cadena en Marte. Cuando este cido nucleico se expone a las DNA Pol de E. coli la replicacin se produce de forma continua en ambas cadenas. A qu conclusin se puede llegar sobre la estructura de este cido nucleico diferente? 4) Mediante tcnicas moleculares se averigu que en el DNA de una clula epitelial de un organismo eucariota haba 200 unidades de replicacin (replicones). Si la duracin del periodo S en las clulas del tejido analizado es de 8 horas y la velocidad de replicacin de la
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DNA PolIII es de unos 15000 nucletidos /minuto, qu tamao tiene el genoma haploide de una clula germinal de dicho organismo? 5) En E. coli la horquilla de replicacin avanza a una velocidad de 750 nt/s. Cunto tardar en replicarse el gen de la ribonucleasa bacteriana, una protena que tiene 140 aminocidos? Sabiendo que en clulas humanas la velocidad de replicacin es unas 10 veces menor que en E. coli, se puede estimar el tiempo que tardara en replicarse una protena de 140 aminocidos?. Por qu? !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! Tema 5. Expresin gnica. Transcripcin 1) El siguiente diagrama representa un fragmento de DNA codificante. La cadena inferior (3-5) es la cadena molde en el proceso de transcripcin. Cul sera la molcula de RNA transcrita a partir de este DNA?. 5-ATG GTC AAT TGG CTA-3 3-TAC CAG TTA ACC GAT-5 2) Cul sera el efecto ms probable de una mutacin en las siguientes localizaciones de un gen de E. coli? a.posicin -8 b.-35 c.-20 d.En el sitio de inicio de la transcripcin 3) El siguiente diagrama representa una unidad transcripcional sobre una molcula de DNA:

a. Suponiendo que esta molcula de DNA pertenece a una bacteria, dibujar la localizacin aproximada del promotor y terminador de la unidad transcripcional. b. Suponiendo que la molcula pertenece a un eucariota, dibujar la localizacin aproximada de un promotor de la RNA polimerasa II. 4) Una cepa bacteriana posee una mutacin termosensible en el gen que codifica la subunidad rho de la RNA polimerasa. A altas temperaturas rho no es funcional. Si esta cepa se cultiva a alta temperatura, cul de los siguientes efectos esperara ver?, por qu? a.No ocurre la transcripcin b.Todas las molculas de RNA son ms cortas de lo normal c.Todas las molculas de RNA son ms largas de lo normal d.Algunas molculas de RNA son ms largas de lo normal e.Algunas molculas de RNA son ms cortas de lo normal
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5) En la siguiente figura se muestra la organizacin exn-intrn de un gen de una especie vegetal que tiene una transcripcin diferencial en hojas, raz y embrin. En cada uno de estos rganos o estadios se expresa una variante transcripcional diferente. Se representan los promotores especficos (P) de cada rgano o estadio y a continuacin los exones del gen. Tambin se indica dnde se localizan los codones de iniciacin (ATG) y los codones de terminacin (STOP) para cada variante. a.Cules son los exones presentes en cada variante transcripcional? b.Cules son los exones especficos de cada tejido u rgano? c.A qu variante corresponde el mRNA maduro de mayor tamao? d.Cul es la variante que codifica el polipptido de mayor tamao?

!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! Tema 6. Expresin gnica. Traduccin 1) Clulas de una cepa silvestre de E. coli se irradiaron con luz UV para obtener mutantes nutricionales. Despus del tratamiento una dilucin adecuada de bacterias fueron sembradas en un medio completo. Adems, mediante tcnicas de rplica en placa se transfirieron las colonias que haban crecido en el medio completo a cinco medios diferentes: mnimo + metionina; mnimo + leucina; mnimo + arginina; mnimo + met + leu y mnimo + arg + leu. Los resultados obtenidos se representan a continuacin. Describir el genotipo de las colonias que aparecen en el medio completo.

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2) A continuacin se representa una ruta metablica que est implicada en la aparicin de algunas enfermedades congnitas y que corresponden a bloqueos en diversos puntos de la ruta. Estos bloqueos se producen porque los genes que codifican las enzimas de las reacciones correspondientes tienen alguna mutacin. c.Determinar qu intermediario metablico se acumular en cada una de las enfermedades que se indican. d.Qu intermediario metablico habra que suministrar a un enfermo de albinismo para que no manifestara la enfermedad? e.Si la ruta que se presenta fuera la nica va de formacin de la tirosina, qu fenotipo presentara un enfermo de fenilcetonuria?

3) Neurospora es capaz de utilizar hipoxantina como nica fuente de nitrgeno. Se han aislado mutantes que no son capaces de utilizarla y se han clasificado en cinco grupos. La tabla indica las posibilidades de utilizar eficazmente diferentes fuentes de nitrgeno que tienen estos grupos de mutantes. Describe la posible ruta catablica, indicando qu paso tiene alterado cada grupo de mutantes.

Mutantes Silvestre amr ale aln ure xdh

cido Alantoico + + + +

Alantona + +

Amonio + + + + + +

Hipoxantina + -

Urea + + + + +

cido rico + + +

(+) - capacidad de utilizacin del compuesto (-) - incapacidad

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4) Siete mutantes nutricionales necesitan para crecer los aminocidos F y H. Los resultados obtenidos al aadir otras sustancias relacionadas al medio mnimo se indican en la siguiente tabla: a. Proponer una ruta metablica para la biosntesis de los aminocidos F y H b. Indicar el paso metablico que tiene bloqueado cada mutante y el compuesto que acumula.

5) Guest y Yanofsky observaron las siguientes substituciones de aminocidos en un punto determinado de la protena A de la triptfano-sintetasa de E. coli Ala!Asp"Gly"Cys Siendo Gly el aminocido que ocupa esta posicin en la secuencia de aminocidos de la protena del tipo silvestre, y los otros aminocidos las sustituciones encontradas de la Gly en ese punto, especificar qu codones podran codificar la Gly en el tipo silvestre para explicar esas substituciones. Explicar adems el tipo de mutacin ocurrido en cada caso

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6) Se produjo una mutacin sin sentido (aparicin de stop codon) en un codn del gen leuB de E. coli. A partir del mutante se obtuvieron estirpes en las que el gen leuB haba revertido a nuevas formas allicas en las que el codn stop haba pasado a presentar significado. Cuando se analiz el aminocido codificado en los distintos revertientes (mutantes que ya no presentaban el codn stop) por el anterior codn stop se obtuvieron los siguientes resultados: Arginina- 24%; Cistena- 26%; Glicina- 13% Leucina- 12%; Serina- 12%; Triptfano- 13% Suponiendo que los cambios producidos hayan sido sustituciones en una sola base, determinar cul fue el codn stop aparecido en el gen leuB del mutante. !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! Tema 7. Regulacin de la expresin gnica. 1) Partimos de un gen cuyo nivel de transcripcin es X y cuyo nivel de expresin a nivel de protena es tambin X. La actividad enzimtica de la protena se corresponde con los niveles de protena en la clula. Determinar a qu nivel se ha producido algn mecanismo de regulacin de la expresin gnica en los siguientes supuestos: - Se mide un aumento de los niveles de mRNA del gen, pero la cantidad de protena es la misma que en el control y la actividad enzimtica tambin. - Se detectan unos niveles de protena muy altos, pero la actividad enzimtica no vara. - Se mide un intenso incremento de la actividad enzimtica, pero los niveles de mRNA y de protena permanecen constantes. 2) En una bacteria la presencia de glucosa en el medio de cultivo ocasiona la sntesis de la protena Nos y no de la protena Vis. Por el contrario, en ausencia de glucosa se sintetiza la protena Vis, pero no la protena Nos. La transcripcin del gen nos es independiente de regulacin por glucosa ya que su promotor es constitutivo. La ausencia de glucosa activa indirectamente un promotor que transcribe el gen vis y como consecuencia no se produce Nos, pero s Vis. Proponer un posible mecanismo de regulacin. 3) La transcripcin del gen CEX de levadura es constitutiva; sin embargo existen unos niveles mnimos y mximos de actividad de la protena aunque no se han documentado inhibidores o activadores de su actividad. El anlisis de la regin codificante del gen CEX muestra un codn de iniciacin y una secuencia de poliadenilacin. No obstante, en la fase de lectura 1 del ATG iniciador existen una serie de codones STOP (X). Se realiz una hibridacin del DNA codificante del gen CEX con el mRNA de CEX obteniendose un heterodplex que se esquematiza.

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Justificar la presencia de codones STOP en la regin codificante de CEX y proponer un mecanismo de regulacin que se deduce de los resultados obtenidos. 4) La biosntesis de un aminocido de elevado inters biotecnolgico en una bacteria est controlada por un opern reprimible. La represin transcripcional del citado opern se produce mediante la unin de una protena reguladora (represor) a la secuencia reguladora del opern (operador). Se pretende construir una cepa bacteriana capaz de alcanzar altos niveles de biosntesis del aminocido para su obtencin a nivel industrial. Qu manipulaciones genticas se requieren para que la bacteria en cuestin sintetice altas concentraciones del aminocido? 5) En la secuencia operador ocurre una mutacin que evita que la protena reguladora se una. Qu efecto tendr esa mutacin en los siguientes tipos de operones? a. b. La protena reguladora es un represor en un opern reprimible La protena reguladora es un represor en un opern inducible

!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! Tema 8. Mutacin 1) Supongamos que queremos ampliar las lneas de produccin de nuestra empresa biotecnolgica y nos proponemos iniciar una lnea de produccin del aminocido del problema 8.4. Sin embargo, en este caso no tenemos acceso a tcnicas de ingeniera gentica y tan solo disponemos de un cromatgrafo para analizar la produccin del aminocido y de una fuente de luz UV. Cmo aislaras mutantes super-productores del aminocido?. 2) La regin que codifica tRNA de una levadura ha sufrido una mutacin gnica. Se trata de una sustitucin en la secuencia anticodn del tRNA que reconoce el codn UCA (Ser). La secuencia anticodn silvestre es AGT y la mutante es ATT (transversin G-T). Indicar las consecuencias de dicha mutacin. 3) La secuencia de nucletidos que se muestra a continuacin se encuentra en la cadena molde del DNA.
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3-T1AC TGG CCG TTA GTT GAT ATA ACT24-5 En primer lugar, determine los aminocidos de la protena codificada por esa secuencia. En segundo lugar, describa la secuencia de aminocidos que codificara la secuencia de DNA si sufriera las siguientes mutaciones: mutante 1: una transicin en el nucletido 11 mutante 2: una transicin en el nucletido 13 mutante 3: una delecin en el nucletido 7 mutante 4: una transversin T-A en el nucletido 15 mutante 5: una insercin del triplete TGG despus del nucletido 6 mutante 6: una transicin en el nucletido 9

!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! Tema 9. Ciclos de vida. Mitosis y Meiosis 1) Una clula en G1 de la interfase posee 12 cromosomas. Cuntos cromosomas y cuntas molculas de DNA se encontrarn por clula en los siguientes estadios?: a. b. c. d. e. f. g. h. G2 de la interfase Metafase I de la meiosis Profase de la mitosis Anafase I de la meiosis Anafase II de la meiosis Profase II de la meiosis Tras la citocinesis que sigue a la mitosis DNA Tras la citocinesis que sigue a la meiosis

2) La mosca de la fruta Drosophila melanogaster posee cuatro pares de cromosomas; sin embargo, la mosca comn Musca domestica tiene seis. Suponiendo que el resto de las caractersticas sean iguales, en qu especie esperaramos una mayor variacin gentica entre la progenie? 3) El hongo filamentoso Neurospora crassa es un organismo haploide que tiene 7 cromosomas. Si se cruzan dos estirpes de este hongo, por ejemplo Ay B: c. Cul es la probabilidad de que un individuo herede los 7 cromosomas de la variedad A? d. Cul sera el resultado de a) si N. crassa fuera un organismo diploide? 4) En una preparacin citogentica se puede observar una clula con 6 cromosomas, todos ellos con distinta morfologa. De qu clula se trata?. Pertenece a un organismo haploide o diploide?. !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!

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Tema 10. Gentica mendeliana 1) En los ratones, el pelaje de color negro (B) es dominante respecto del color marrn (b) y un patrn liso (S) es dominante respecto del moteado blanco (s). Tanto el color como el patrn de moteado estn determinados por genes que se distribuyen de forma independiente. Se cruza un ratn negro moteado con uno marrn liso, ambos homozigotos. Todos los ratones de la F1 son negros y lisos. Luego se realiza un cruzamiento prueba de los ratones de la F1 con ratones marrones moteados. Describir los genotipos de los padres y de los ratones de la F1 Describir los genotipos y fenotipos, junto con las proporciones, que se esperan en la progenie del cruzamiento prueba 2) Dos perros de pelo largo se cruzan y producen una camada de cuatro cachorros. Tres de ellos tienen el pelo largo y un tiene pelo corto. Asumiendo que la longitud del pelo est controlada por un nico locus, el carcter pelo corto, es dominante o recesivo?. Si uno de los parentales se cruza con un perro de pelo corto, qu tipo de descendencia se puede esperar?, y en qu proporciones? 3) Si dos pares de genes A (A,a) y B (B,b) se transmiten (distribuyen) independientemente, siendo los alelos A y B dominantes sobre a y b respectivamente, calcula la probabilidad de obtener: 1. un gameto AB a partir de un individuo AaBb. 2. un gameto Ab a partir de un individuo AABb. 3. un zigoto AABB a partir de un cruzamiento AaBb x AaBb. 4. un zigoto AABB a partir de un cruzamiento aabb x AABB. 5. un individuo de fenotipo AB a partir de un cruzamiento AaBb x AaBb. 6. un individuo de fenotipo AB a partir de un cruzamiento aabb x AABB. 7. un individuo de fenotipo aB a partir de un cruzamiento AaBb x AaBb. 4). En dos estaciones agrcolas experimentales se realizaron pruebas con dos variedades de tomate que diferan en la forma (redonda o picuda; P, p) y en el color (rojo o amarillo; A, a). Se realizaron cruzamientos dihbridos y se obtuvieron las siguientes proporciones fenotpicas en la F2:
P_A_ Estacin norte Estacin sur 108 89 ppA_ 35 30 P_aa 18 17 ppaa 7 8

Se desea comprobar la concordancia de los datos con un patrn de segregacin mendeliana 5). Se autofecund una planta heterozigtica para cinco genes independientes (AaBbCcDdEe). Calcular: 1. El nmero de gametos distintos que puede producir 2. El nmero de fenotipos distintos que pueden obtenerse 3. El nmero de genotipos distintos que pueden obtenerse !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
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Tema 12. Cartografa cromosmica. Ligamiento y recombinacin 1). Se dispone de dos cepas puras, una con el fenotipo recesivo del locus a+/a y otra con el fenotipo recesivo del locus b+/b. Ambos loci se encuentran en el mismo cromosoma. 1. Cul es el genotipo de estas dos cepas? 2. Si las cruzamos, cul ser el genotipo de los descendientes?. En qu fase se encontrarn los alelos, en acoplamiento o en repulsin? 3. Si solo se dispusiera de estas dos cepas, sera posible obtener individuos en la fase contraria a la anterior?, cmo?. 2) En una planta de maz heterozigtica para dos genes ligados (A,a; B,b) y que estn en fase de repulsin, Si la frecuencia de recombinacin entre los dos genes es de 0.3, qu tipo de gametos se producirn, y en qu frecuencia? Si esta planta se autofecunda, Cul sera la probabilidad de que un descendiente tuviera el genotipo aaBb?, y la de que tuviera un fenotipo a, B? 3) Se llevaron a cabo una serie de cruzamientos de dos puntos entre siete loci (a, b, c, d, e, f, g) y se obtuvieron las siguientes frecuencias de recombinacin. Realiza el mapeo de los siete loci e indica los grupos de ligamiento, el orden de los loci y las distancias genticas.
Frecuencia locus recombinacin locus Frecuencia recombinacin

a-b a-c a-d a-e a-f a-g b-c b-d b-e b-f b-g

50 50 12 50 50 4 10 50 18 50 50

c-d c-e c-f c-g d-e d-f d-g e-f e-g f-g

50 26 50 50 50 50 8 50 50 50

4) Tenemos 2 cepas haploides de Saccharomyces cerevisiae con los fenotipos Leu+, ura- y leu-, Ura+. Cruzamos las dos cepas, obtenemos la cepa diploide y la cultivamos en un medio sin fuente de nitrgeno. Despus de aislar las ascas, realizamos un anlisis de ttradas obteniendo los siguientes resultados:
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asca
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 leuleu-, uraleuuraleuurauraWT leuleu-, uraleuuraWT leuuraWT leuleuuraleuuraleu-, uraleuWT uraleuleu-, uraura-

fenotipos
uraurauraleuleu-, urauraleuleu-, urauraleu-, urauraleuleuleu-, uraleuleuurauraWT leuleuWT uraWT leuurauraWT

Determinar si los dos loci responsables de las mutaciones estn ligados y calcular la distancia de mapa. !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! Tema 15. Tecnologa del DNA recombinante 1) Se ha obtenido la secuencia de un fragmento de DNA de un microorganismo oleaginoso que se emplea en la produccin biotecnolgica de cidos grasos omega-3. a) El fragmento de DNA se trata con las siguientes enzimas de restriccin: BglIIEcoRI; MboI; SacI; Xho-SmaI. Cules sern los fragmentos resultantes de las digestiones? b) Se quiere clonar el fragmento completo en un vector de clonacin. Qu enzimas se pueden emplear para aislar dicho fragmento? c) Se quiere amplificar slo la regin codificante del gen mediante PCR. Disea la pareja de oligonucletidos que se deben emplear.

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2) Dibujar el mapa de restriccin del siguiente fragmento de acuerdo a los resultados obtenidos tras la digestin y electroforesis.
EcoRI 2Kb 1Kb 0.5Kb 0.2Kb 0.1Kb PstI SalI BamHI EcoRI

SalI

SalI

PstI

BamHI

SalI

3) Se quiere iniciar una lnea de produccin industrial de la enzima del problema 1. Con ese objetivo se decide expresar la ORF en un vector de expresin bacteriano. Cmo se puede clonar la ORF en dicho vector teniendo en cuenta el sitio de clonacin mltiple (MCS) del vector?.

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