Centro Universitrio da Zona Oeste Curso: Tecnologia em Produo de Frmacos e Farmcia Perodo: 5 perodo Disciplina: Microbiologia Industrial Professora:

Sabrina Dias

AULA 1 e 2: Introduo a Microbiologia Morfologia, nutrio e fatores de crescimento

Eucariontes

Procariontes

Material gentico separado do citoplasma Ausncia de carioteca, material gentico misturado no citoplasma

Biotecnologia tecnologia baseada na biologia, especialmente quando usada na agricultura, cincia dos alimentos e medicina.

A definio ampla de biotecnologia o uso de organismos vivos ou parte deles, para a produo de bens e servios. Nesta definio se enquadram um conjunto de atividades que o homem vem desenvolvendo h milhares de anos, como a produo de alimentos fermentados (po, vinho, iogurte, cerveja, e outros). Por outro lado a biotecnologia moderna se considera aquela que faz uso da informao gentica, incorporando tcnicas de DNA recombinante.

Biotecnologia

Estrutura Procaritica

ESTRUTURAS PROCARITICAS 1) Cpsula

Glicoclix, Glicoclice ou camada limosa Natureza polissacardea Funes: proteo e adeso

ligao s clulas do hospedeiro dificultar a fagocitose resistncia ao dessecamento fonte de nutrientes proteo contra bacterifagos proteo contra anticorpos

2) Fmbrias e pili apndices finos e curtos numerosas somente visualizadas por microscopia eletrnica natureza protica (pilina) protenas distintas:adesinas Funo: adeso Pili = plural de pilus bacteriana) fmbria sexual (conjugao

3) Flagelos
Apndices longos, finos. Somente vistos por M.E. Funo: Locomoo

bactria anfitrquia

bactria monotrquia

bactrias lofotrquias

bactrias peritrquias

Obs.: Flagelos periplasmticos Encontrados nas espiroquetas

4) PAREDE CELULAR
Presente na maioria das bactrias conhecidas Exceo: micoplasmas e algumas Archaea. Funes: FORMA BACTERIANA PROTEO PATOGENICIDADE (possui antgenos ou molculas envolvidas no reconhecimento celular).

1884

Christian Gram mtodo de colorao de bactrias separao em dois grupos distintos: Gram-positivas e Gram-negativas Advento da microscopia eletrnica e do aperfeioamento das tcnicas de anlise bioqumica dos componentes celulares: Diferenas entre as Gram-positivas e Gramnegativas Diferenas de composio e estrutura das paredes celulares.

Colorao de Gram

Composio da parede celular Peptideoglicano (murena ou mucopeptdeo) Responsvel pela rigidez da parede celular Formado por dois derivados de acares: N-acetilglicosamina (NAG) cido N-acetilmurmico (NAM)

O grupo carboxil de cada molcula tetrapeptdeo (4 aminocidos).

de

NAM

liga-se

a um

Destes aminocidos, o D-glutamato, D-alanina e o cido mesodiaminopimlico no so encontrados em nenhuma outra protena conhecida.

Conseqncia: maior resistncia da parede contra a maioria das peptidases.

Em Gram-positivas: Ligao entre os tetrapeptdeos (Ala-Glu-Lys-Ala indireta (mediada por ponte interpeptdica Ex.: 5 glicinas em S. aureus).

peptideoglicano de clulas Gram-positivas

Em Gram-negativas: Ligao entre os tetrapeptdeos (Ala-Glu-DAP-Ala)

direta

Diferenas entre Gram-positivas e Gram-negativas

Gram positivas Presena de cidos teicicos e lipoteicicos Peptidioglicana com vrias camadas Sem membrana externa Sem LPS Peptidioglicana com poucas camadas Gram-negativas Presena da membrana externa Presena de LPS (lipopolissacardeo)

Gram-positivas
cidos teicicos participam nos processos de passagem de ons pela parede Obs.: Em casos de escassez de fosfato, os cidos teicicos podem ser substitudos por cidos teicurnicos, deixando assim os fosfatos livres para comporem ATP ou DNA, por exemplo.

Gram-negativas Membrana externa uma segunda bicamada lipdica (semelhante membrana plasmtica), Localiza-se acima do peptideoglicano Contm fosfolipdeos, lipoprotenas, protenas e tambm LPS.

LPS (lipopolissacardeos) Tambm denominados de endotoxinas: provocam febre, choque e eventualmente morte, quando injetados em animais.
Composta por 3 regies distintas: lipdeo A polissacardeo central Cadeia polissacardica lateral O ou Antgeno O

Periplasma (gel periplasmtico) Espao situado entre a membrana externa e membrana citoplasmtica, encontrado em clulas Gram negativas. Contm diversas enzimas e outras protenas (Ex.: hidrolases, protenas de ligao envolvidas no transporte e quimiorreceptores).

5) Membrana Citoplasmtica

Funes da Membrana citoplasmtica: Envolver o contedo celular Barreira osmtica, altamente seletiva (permeabilidade seletiva) Stio de diversas atividades enzimticas

6) Material gentico
Nucleide Plasmdeos nico cromossomo no envolto por carioteca cromossomo circular e bastante enovelado Obs.: Pode ser 1000 vezes maior que a prpria clula.

Plasmdeos: Molculas de DNA extracromossmico Genes no codificam caractersticas essenciais Conferem vantagens seletivas bactria Capazes de autoduplicao independente Encontram-se em nmero varivel

7) Corpsculos de incluso
So grnulos de armazenamento: Fonte de material de reserva ou energia Ex.: glicognio, amido, poli-hidroxibutirato, enxofre.

Algumas bactrias possuem magnetossomos

(Minrio de ferro)

E outras, vacolos de gs

flutuao (cianofceas)

8) Ribossomos
TODAS AS CLULAS POSSUEM Presentes em grande nmero Conferem ao citoplasma aparncia granular ao M.E. Funo: sntese protica

9) Endosporos
Estruturas de latncia Encontrados em alguns gneros Gram positivos Resistncia: calor, radiaes, desinfetantes desidratao. Em condies tornam-se inadequadas processo de esporulao manuteno de seu material gentico

Caractersticas do esporo Altamente desidratado Inativa enzimas Aumenta a termorresistncia Resistncia a alguns agentes qumicos

Morfologia: Tamanho, Forma, e arranjos bacterianos

Tamanho Maioria das bactrias 2 a 6 m de comprimento X 1 a 2 m de largura. Obs.: bactrias gigantes de at 500 ou 800 m visveis a olho nu Epulopiscium fishelsoni Thiomargarita namibiensis

Formas e arranjos

Outras formas
Prosteca Ex.: Prosthecomicrobium

Ex.: Verrucomicrobium

Nutrio e crescimento
Nutrio microbiana
Componentes necessrios s clulas Meios de cultura Condies ambientais

Crescimento populacional
- Velocidade de crescimento - Tempo de gerao - Medidas do crescimento

De todos os organismos vivos, os microrganismos so os mais versteis e diversificados em suas exigncias nutricionais. Alguns so to exigentes quanto o homem e outros animais. Todos os organismos vivos compartilham algumas necessidades nutricionais em comum: - carbono - nitrognio - gua

 Em algumas situaes os microrganismos so estudados em seu hbitat natural.

Ex.: Fendas termais, sistemas de tratamento de resduos, solo.

Para caracterizar suas propriedades (morfolgicas, fisiolgicas e bioqumicas) necessrio o cultivo em laboratrio. Cultivo in vitro: quando se conhece as exigncias nutricionais Cultivo in vivo: quando exigncias nutricionais especficas so
desconhecidas.
Cultivo in vitro: Cultivo in vivo - Keffir

Para o cultivo laboratorial (in vitro) so utilizados meios de cultura que simulam e at melhoram as condies naturais. Os elementos qumicos principais para o crescimento das clulas incluem C, N, H, O, S e P e so denominados de macronutrientes.

O carbono um dos elementos mais importantes para o crescimento microbiano (todos requerem carbono) Os compostos orgnicos so os que contm carbono (Exceo para CO2) MACROnutrientes: - Necessrios em grande quantidade. - Tem papel importante na estrutura e metabolismo. MICROnutrientes: - Necessrios em quantidades mnimas. - Funes enzimticas e estruturais das biomolculas

Componentes necessrios s clulas

Fonte de Carbono Compostos orgnicos (microrganismos heterotrficos): - Carboidratos - Lipdeos - Protenas Deles se obtm energia e unidades bsicas para o crescimento celular. Utilizao de CO2 (microrganismos autotrficos) a forma mais oxidada do carbono, assim a fonte de energia provm da luz.

Componentes necessrios s clulas Fonte de Nitrognio - elemento mais abundante depois do C, cerca de 12% (constituinte das protenas, cidos nuclicos, etc.) Molculas orgnicas (aminocidos, protenas, etc.) Molculas inorgnicas (NH3, NO3-, N2) Hidrognio - Principal elemento dos compostos orgnicos e de diversos inorgnicos (gua, sais e gases) Funo do H: Manuteno do pH Formao de ligaes de H entre molculas Serve como uma fonte de energia nas reaes de oxi-reduo da respirao

Componentes necessrios s clulas Oxignio - Elemento comum encontrado nas molculas biolgicas (aminocidos, nucleotdeos, glicerdeos ...) - obtido a partir das protenas e gorduras. Na forma de oxignio molecular (O2), requerido por muitos para os processos de gerao de energia.

Outros macronutrientes:
P S Snese de cidos nuclicos, ATP; Estabilidade de aminocidos, Na Requerido por em maior quantidade marinhos; Fe e no Papel-chave componente das transporte na dos de respirao, citocromos Ca Estabilidade da parede celular e termoestabilidade de endsporos; envolvidas eltrons. microrganismos

componente de vitaminas; K Atividade de enzimas;

Mg Estabilidade dos ribossomos;

protenas

Requisitos nutricionais - Micronutrientes

Metais so em quantidades muito pequenas (trao) necessrios na composio de um meio de cultura: Zn, Cu, Mn, Co, Mo e B
Exercem funo estrutural em vrias enzimas - Nem sempre sua adio necessria - Meios sintticos com compostos de alto grau de pureza e gua ultra pura podem apresentar deficincias desses elementos. gua Componente absolutamente indispensvel (com exceo dos protozorios que englobam partculas slidas) Laboratrio: destilada, filtrada, deionizada

 Tampes - Carbonato de clcio - Fosfatos - Protenas (peptona)

Inibidores Ex: produo de cido ctrico por Aspergillus niger Utiliza-se Fosfato e pH < 2 para reprimir o cido oxlico

Indutores - A maioria das enzimas de interesse comercial precisa de indutores. Ex: celulose induz a celulase pectina induz a pectinase amido induz a amilase

Antiespumantes - Cultivos com aerao ocorre a produo de espuma Remoo de clulas, perda do produto, contaminao; Reduo do volume do meio Um antiespumante reduz a tenso superficial das bolhas (lcoois, cidos graxos, silicones, poliglicis, ... )

MEIOS DE CULTURA

CONDIES AMBIENTAIS
Temperatura Atividade de gua oxignio pH Presso atmosfrica Presso osmtica

FATORES INTRINSECOS: Atividade de gua: A Aa indica a intensidade das foras que unem a gua com outros componentes no-aquosos, e a gua disponvel para o crescimento de m.o., reaes qumicas e bioqumicas.

FATORES INTRINSECOS: Atividade de gua:

FATORES INTRINSECOS: Acidez (pH):

FATORES INTRINSECOS: Acidez (pH): pH > 4,5 pouco cidos mais sujeitos ao crescimento microbiano; pH entre 4,0 e 4,5 cidos crescimento de bolores e leveduras poucas bactrias (lticas e espcies de Bacillus); pH < 4,0 muito cidos crescimento de bolores e leveduras.

FATORES INTRINSECOS: Potencial de xido-reduo:

Aerbio

Anaerbio Facultativo Microaerfilo

Anaerbio aerotolerante

FATORES EXTRINSECOS: Temperatura :

Psicrotrficos: crescem em temperatura de refrigerao, entre 0c a 7 c; Psicrfilo: cresce a temperatura de 0 c a 20 c; Mesfilo: cresce a temperatura de 5 c a 50 c; Termfilo: cresce a temperatura de 35 c a 90 c.

CRESCIMENTO MICROBIANO
Em microbiologia crescimento geralmente o aumento do nmero de clulas Na maioria dos procariotos ocorre a fisso binria: crescimento e diviso

Varia de minutos at dias Depende muito das condies ambientais Escherichia Coli - 20 minutos Pisolithus microcarpus 2,5 dias

O ciclo de crescimento
A fase exponencial

reflete apenas uma parte do ciclo de crescimento de uma populao microbiana. O crescimento de

microrganismos em um recipiente fechado (batelada) apresenta um ciclo tpico com todas as fases de crescimento.

1) Fase Lag Perodo de adaptao da cultura Mudana de meio, preparao do complexo enzimtico Reparao das clulas com danos.

2) Fase exponencial Fase mais saudvel das clulas onde todas esto se dividindo. A maioria dos microrganismos unicelulares apresentam essa fase, mas as velocidades de crescimento so bastante variveis: - Procariticos crescem mais rapidamente que os eucariticos - Eucariticos menores crescem mais rapidamente que os maiores

3) Fase estacionria: Num sistema fechado (tubo, frasco ou biorreator) o crescimento exponencial no pode ocorrer indefinidamente. Ocorre a limitao por depleo de nutrientes e acmulo de metablitos. Diviso = morte crescimento lquido nulo Ainda pode ocorrer: catabolismo e produo de metablitos secundrios

4) Fase de morte (declnio): A manuteno de uma cultura no estado estacionrio por longo tempo conduz as clulas ao processo de morte. - A morte celular acompanhada da lise celular

MEDIDAS DO CRESCIMENTO MICROBIANO

Podem ser realizadas pelos seguintes mtodos: 1) Peso seco total das prprias clulas filtrao, secagem e pesagem
2) Peso de algum componente celular extrao, secagem e pesagem

3) Variao no nmero de clulas a) contagem de clulas totais b) contagem de clulas viveis

a) Contagem de clulas totais (contagem microscpica direta) Utilizam-se cmaras especiais de contagem (lmina com grade quadriculada) Ex.: Cmara de Neubauer

Medidas do crescimento microbiano contagem direta

Vantagens: mtodo rpido e fcil

No distingue as clulas vivas das mortas Pode-se omitir clulas pequenas

Desvantagens

Clulas mveis precisam ser imobilizadas Entre outras.

Medidas do crescimento microbiano contagem indireta

b) Contagem de clulas viveis: Contagem das colnias formadas em meio de cultura em placas.

 Diluio das suspenses celulares Amostras concentradas precisam ser diludas

Razes: Erros devido juno de clulas na colnia Restries podem fazer clulas viveis no originarem colnias

So empregadas vrias diluies decimais porque difcil prever o nmero de viveis. contada a placa com 30 a 300 colnias

Medidas do crescimento microbiano Outros mtodos

Turbidimetria As clulas dispersam a luz e quanto mais clulas mais turvo o meio Pode ser medida com um espectrofotmetro

O uso da turbidimetria exige a construo de uma curva padro - Turbidez X quantidade de clulas

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AULA 2: MICRORGANISMOS DE INTERESSE EM ALIMENTOS E NA INDSTRIA

MICRORGANISMOS IMPORTANTES EM ALIMENTOS

Patognicos

Benficos

Deteriorantes

Bactrias

Fungos Leveduras

Fungos Mofos

MICRORGANISMOS IMPORTANTES EM ALIMENTOS Mofos de Interesse Benficos: Gnero Mucor M. rouxii maturao de queijos; Gnero Aspergillus A. orizae produo de saqu de arroz, A. niger produo de cido ctrico, A. soyae produo do shoyu; Gnero Penicillium P. cammembert produo de queijo Brie, P. gorgonzolae produo de queijo gorgonzola, P. roquefort produo do queijo roquefort Mofos deteriorantes: Gnero Mucor M. mucedo maturao de queijos de pasta branda; Gnero Rhyzopus R. nigricans mofo do po; Gnero Aspergillus A. flavus produo de aflatoxina, A. glaucus deteriorao de alimentos com baixa Aa, A. ochraceus produo de micotoxina, Gnero Penicillium P. brevicaule maturao de queijos, P. candidus mofo da casca de queijo embolorado

MICRORGANISMOS IMPORTANTES EM ALIMENTOS Leveduras de Interesse Benficos: Gnero Saccharomyces S. cerevisiae panificao, cervejaria, vinicultura, S. Fragilis fermentao do soro do leite, S. kefir um dos constituintes do gro de kefir, S. lactis fermentao da lactose do leite; Leveduras Deteriorantes: Espcies Saccharomyces S. pasteurianus contamina cerveja; Espcie Picchia P. membranefaciens altera vinhos, forma pelcula sobre cerveja; Espcies Zygosaccharomyces S. octosporus deteriora alimentos com alto teor de solutos, ex. mel.

MICRORGANISMOS IMPORTANTES EM ALIMENTOS Bactrias de Interesse Benficos: Lactobacillus, Propionobacterium, Leuconostoc, Streptococcus

Bactrias Deteriorantes: Pseudomonas, Acetobacter, Halobacterium, Zymomonas, Pediococcus, Mycobacterium, Brucela, Micrococcus, Erwinia, Bactrias Patognicas: Staphylococcus, Bacillus, Klebsiela, Escherichia, Salmonella, Shigela, Clostridium, Listeria

Acetobacter spp.
Clulas bastonetes, gram negativas, no

esporuladas; Bactrias acticas, produzem cido actico a partir da oxidao do etanol; Acetobacter aceti So utilizadas na produo de vinagres, porm deteriorantes de sucos de frutas, vinhos e cervejas; Algumas oxidam etanol at cido actico,outras podem oxidar o cido actico a gs carbnico e gua (superoxidao); Aerbias, temperatura entre 33 e 35oC

Lactobacillus spp.
Bactrias lticas, gram positivas, na forma de bastonetes ou cocos; Produzem cido ltico como principal produto do metabolismo de carboidratos; Possuem fermentao homoltica ( produz s cido ltico) ou heteroltica ( produz cido ltico,
lactococcus lactis subsp. lactis

diacetil, acetona, gs carbnico, etc; Temperatura tima 37 a 45oC; Produzem laticnios e vinhos, produo de

vegetais fermentados, deteriorao de alimentos e bebidas.

Lactobacillus delbrueckii

Propionibacterium
Clulas em formato bastonete irregular, levemente curvada, gram positiva, anaerbias ou

aerotolerantes; Semelhante s bactrias lticas, produzem cido propinico, cido actico e gs carbnico durante a fermentao; Produz queijo suo.
Propionibacterium Shermanii

Doenas Transmitidas por Alimentos Natureza Microbiana

Intoxicaes (= intoxinaes) - Ingesto de toxinas pr-formadas no alimento Infeces - Ao do microrganismo per se Toxoinfeces - Ao de toxinas microbianas formadas in vivo

Bactrias Gram positivas

S. aureus

C. botulinum

C. perfringens L. monicytogenes

Bactrias Gram negativas

S. typhi

S. dysenteriae

E. coli

Clostridium botulinum

Produtor de neurotoxinas termolbeis 7 tipos sorolgicos: A, B, C, D, E, F e G

A, B, E e F causam botulismo humano C e D causam botulismo animal G: sem evidencia de causar doena

Toxina: ao nas junes mioneurais atravs do bloqueio de neurotransmissores (AcC)

Produtor de toxinas (13) Intoxicao alimentar acusada pela enterotoxina A Enterotoxina formada durante o processo de esporulao (in vivo) Enterotoxina atua no transporte de ions atravs da mucosa do ID Diarria, dores abdominais agudas

Bacillus cereus
Aerbio Produtor de esporos Esporos de elevada resistncia trmica Reservatrio: solo e gua Amplamente distribudo na natureza Provoca duas sndromes diferentes: Gastroenterite diarreica : Toxina LT- FASE LOG Toxina inativada a 55C/ 20 MINUTOS Incubao: 8 a 16 h Sintomas: diarria e dores abdominais Gastroenterite emtica: Toxina ST-FASE DE ESPORULAO Toxina inativada a 126C/ 90 MINUTOS Incubao: 1 a 2h Sintomas: vmitos e nuseas

Listeria monocytogenes

Aerbia No produtora de esporos Amplamente distribuda na natureza (solo, gua, etc) Caractersticas psicrotrficas Afeta principalmente mulheres grvidas, recm-nascidos, idosos e adultos com o sistema imunolgico comprometido Listeriose: Incio: Resfriado comum com febre e dores musculares Gastrenterite febril aguda Agravamento: bacteremia, meningite, aborto, parto prematuro, infeces no RN

Salmonella sp
Pertence famlia Enterobacteriaceae Anaerbio facultativo No produtor de esporos Hospedeiro-adaptado Homem: diversos sorovares Aves: S. Gallinarum, S. Pullorum Sunos: S. Cholerasuis outros 3 sndromes: Febre tifide (S. Typhi) Febres paratifides (S. Paratyphi A e B) Salmoneloses (outros 2700 sorovares) Diversos fatores de virulncia: Adeso Invaso Produo de enterotoxinas Produo de citoxinas Ilhas de patogenicidade: stios de colonizao especficos

Escherichia coli diarreiognicas

Pertence famlia Enterobacteriaceae Pertence ao grupo dos coliformes termotolerantes Anaerbia facultativa No produtora de esporos Pelo menos 6 linhagens patognicas distintas: EPEC : E. coli enteropatognica STEC : E. coli produtora da toxina de Shiga (EHEC : E. coli enterohemorrgica) ETEC : E. coli enterotoxignica EAEC : E. coli enteroagregativa EIEC : E. coli enteroinvasora DAEC : E. coli que adere de forma difusa a clulas epiteliais

Escherichia coli diarreiognicas

Inmeros fatores de virulncia Adesinas Fatores de Colonizao (fimbrias, fibrilas, protenas de membrana externa) Produo de toxinas e protenas efetoras Citotoxinas Enterotoxinas
Sintomatologia varia de acordo com a linhagem: Diarria aquosa, leve ou severa Diarria sanguinolenta Disenteria Febre

Shigella sp

Pertence famlia Enterobacteriaceae Poucos dados sobre envolvimento em DTAs Muitas semelhanas com EIEC (E.coli Enteroinvasora): Caractersticas bioqumicas Mecanismo de patogenicidade Sndromes

Campylobacter sp.
Pertencem famlia Spirillaceae Mveis, flagelos polares, movimento saca-rolha Microaerfilos:3-5% de O2 ; 2 a 10% de CO2 Pouco resistentes a refrigerao, congelamento, desidratao, etc 14 espcies, 3 patognicas para o homem C. jejuni subsp. doylei C. jejuni subsp. jejuni C. coli C. lari Espcies patognicas so termotolerantes

Campylobacter sp.

Diversos fatores de virulncia Adeso (adesinas e quimiotaxia) Invaso Produo de enterotoxinas Produo de citotoxinas Produo de siderforos Sintomatologia: depende do FV Sindrome de Guillain-Barr

Vibrio sp.
Trs espcies patognicas V. cholerae V. parahameolyticus V. vulnificus Halotolerantes Haloflicos: V. parahameolyticus e V. vulnificus Agente etiolgico da clera Sorogrupo O1 e no-O1 (ou 0139) O1: sete pandemias O139: oitava pandemia (1993) O1 tem trs sorotipos: Inaba, Ogawa e Hikojima Todos tem dois biotipos: Clssico e El-Tor

Vibrio cholerae
Transmisso pela gua e pescados Endmica em algumas regies Produz CT (enterotoxina colrica) Causa desequilbrio eletrolitico da mucosa Diarria aquosa profusa (gua de arroz): desidratao, colapso circulatrio e morte

Yersinia enterocolitica
Pertencem famlia Enterobacteriaceae Anaerbias facultativas Psicrotrficas Mecanismos de patogenicidade: Adeso Invaso Produo de enterotoxina termoestvel Yst

Benefcio dos Fungos na indstria

Produo de cido ctrico (Aspergillus niger) Produo de -caroteno (Choanephora cucurbitarium) Aspergillus niger Produo de enzimas: Invertase (S. cerecisiae) Lipase (Yarrowia lipolytica) Pectinases (Penicillium corylophilum) Amilases (Macrophomina phaseolina) Produo de antibiticos, como penicilina (P. chrysogenum e P. notatum) Choanephora cucurbitarium

Penicillium corylophilum

Industria farmacutica
Produo de antibiticos Penicilina Alexandre Fleming1929 Penicillium notatum Cefalosporinas

Produo de hormnios Insulina

Penicillium notatum
Hormnio do crescimento

Saccharomyces spp.
Levedura com clulas redondas, ovais ou alongadas, podendo formar pseudomiclios; Reproduo por gemulao;
Saccharomyces Cerevisiae

Metabolismo fermentativo. Utilizado na produo de bebidas destiladas, fermentadas, e panificao.

Zygosaccharomyces spp.
Leveduras fermentadoras de acares, toleram Aa de 0,7; Encontradas em xaropes, mel. Melado, doces em massas; Toleram cido, podendo se multiplicar em pH 1,8;

Zygosaccharomyces rouxii

Doenas alimentares - Fungos

MICOTOXICOSES: Intoxicao pela ingesto de alimentos contaminados por micotoxinas produzidas por fungos MICROSCPICOS.

MICETISMO: Intoxicao pela ingesto de fungos MACROSCPICOS (Fungos do grupo dos Basidiomicetos, conhecidos como Cogumelos)

Micotoxinas: Efeito agudo: Deteriorao das funes heptica e renal. Fatal em alguns casos. Interferncia na sntese protica. Imunodeficincia extrema. Neurotxicas. Micotoxinas: Efeito crnico: Induo de cncer (sobretudo de fgado). Micotoxinas: Efeitos mutagnicos e teratognicos: Alteraes na Replicao do DNA de diversos tipos celulares, causando efeitos mutagnicos e teratognicos.

Alcalide do esporo do centeio

Causa o ERGOTISMO C.fusiformis.

Claviceps purpurea Forma gangrenosa, marcada pela vaso constrio perifrica e necrose das extremidades distais. C.fusiformis. Forma convulsiva ergotismo neurolgico, marcado por espasmos musculares, convulses e alucinaes.

As alucinaes devem ser causadas pelo cido lisrgico que faz parte da molcula de ergotamina.

Claviceps purpurea

AFLATOXINAS Produzidas principalmente por Aspergillus flavus e Aspergillus parasiticus. Existem 17 compostos denominados aflatoxinas. As aflatoxinas B1, B2, G1, G2 (maior quantidade), e M1, M2, B2A, G2A, GM1, GM2 (menor quantidade). A aflatoxina B1 o mais potente carcinognio natural conhecido e a principal aflatoxina produzida por cepas toxignicas.

Aspergillus parasiticus

Aspergillus flavus

Miclio septado

Aspergillus sp.

Penicillium sp.

Possuem miclio septado, reproduo assexuada, crescimento superficial; Deteriorante de vegetais, produtos crneos, e laticnios; Colorao verde, azul, preta e amarela.; Apresenta gneros produtores de micotoxinas, como aflatoxinas e patulina Alguns gneros so usados para produo de queijos.

Centro Universitrio da Zona Oeste Curso: Tecnologia em Produo de Frmacos e Farmcia Perodo: 5 perodo Disciplina: Microbiologia Industrial Professora: Sabrina Dias

AULA 3: CONTROLE DE CRESCIMENTO MICROBIANO

CONTROLE DAS POPULAES MICROBIANAS

OS AGENTES FSICOS E QUMICOS PODEM PROMOVER: Esterilizao: destruio de todas as formas de vida (clulas vegetativas e esporos ). Desinfeco: destruio das formas vegetativas dos microrganismos (patognicos e incuos), mas no necessariamente das formas esporuladas. Geralmente refere-se a substncias qumicas ( desinfetantes ) aplicadas sobre objetos inanimados. Anti-sepsia: processo permite a remoo de parte dos microrganismos presentes em tecidos vivos. Associado a substncias qumicas ( anti-spticos ) aplicadas sobre estes tecidos. Esporocida: agente fsico ou qumico que mata as formas esporuladas dos microrganismos. Assepsia: conjunto de tcnicas utilizados para impedir a penetrao de germes em locais que no os contenha.

CONTROLE DAS POPULAES MICROBIANAS

CONDIES QUE AFETAM A AO ANTIMICROBIANA DOS AGENTES FSICOS E QUMICOS 1. Relacionadas ao microrganismo: - tipo: forma vegetativa (mais susceptvel), forma esporulada (mais resistente). - estado fisiolgico das clulas: clulas jovens (mais susceptveis), clulas velhas (mais resistentes, que por poderem apresentar alteraes fisiolgicas e/ou estruturais, tornam-se mais resistentes ). - n de microrganismos: quanto maior o nmero de microrganismos presentes num material, maior a chance de haver sobreviventes e formas resistentes.

CONTROLE DAS POPULAES MICROBIANAS

CONDIES QUE AFETAM A AO ANTIMICROBIANA DOS AGENTES FSICOS E QUMICOS 2. Relacionadas ao ambiente ou material onde se encontram os microrganismos: - pH: o calor mais eficiente em pH cido. - temperatura: quanto maior, maior a probabilidade de eliminao. - presena de compostos orgnicos: protegem os microrganismos, diminuindo a ao de alguns agentes qumicos. - consistncia do material: aquoso (maior penetrao), viscoso, denso (menor penetrao) 3. Tempo: os processos no so instantneos.

CONTROLE DAS POPULAES MICROBIANAS

AGENTES FSICOS MICRORGANISMOS CALOR: a) Calor Seco: 1- Forno de Pasteur (forno de ar quente): ao esterilizante (causa a morte por promover: a oxidao das protenas que constituem o microrganismo). - Condies de esterilizao: de 150 a 170 C, de 1 a 2 horas - Utilizao: esterilizao de substncias imiscveis em gua (como ps, leos etc.), instrumentos cortantes (tesouras, bisturis, agulhas hipodrmicas e etc.) e vidrarias limpas e secas (placas de Petri, seringas de vidro, pipetas, bales, tubos de ensaio). UTILIZADOS NO CONTROLE DOS

CONTROLE DAS POPULAES MICROBIANAS

2- Incinerao: ao esterilizante. Leva carbonizao do material e dos microrganismos. - Para descartveis: animais usados em experimentos e produtos contaminados (cotonetes, curativos e ataduras contaminados, seringas plsticas contaminadas e etc.). 3- Flambagem: ao esterilizante: carbonizao do microrganismo. - O material submetido a ao direta da chama. - Condies de esterilizao: 200 a 300C, por poucos segundos. - Uso: apenas na rotina microbiolgica (alas e agulhas de platina, estiletes, bocas dos tubos).

CONTROLE DAS POPULAES MICROBIANAS

b) Calor mido: 1- Autoclavao: realizada em autoclaves (aparelhos que utilizam vapor saturado sob presso). Ao esterilizante. Causa a morte por promover a desnaturao das protenas que constituem os microrganismos. - Condies para esterilizao: 121 C por 15 a 30 m inutos a 1 atmosfera a mais de presso. - Substncias miscveis com gua (meios de cultura, soluo salina, gua, etc.), cotonetes, luvas de ltex (cirrgica), sondas, cateteres, gaze, rouparia, material contaminado, etc. OBS: utilizada apenas em materiais que no se alteram com a temperatura. 2- Ebulio: gua temperatura de 100 C por um tempo de 30 minu tos. Causa desnaturao protica, eliminando apenas formas vegetativas.

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3- Pasteurizao: processo utilizado para alimentos. Elimina apenas microrganismos patognicos: Salmonella typhi, Brucella abortus e etc. - Condies: 63 C por 30 minutos ou 72 C por 15 segu ndos, seguido de resfriamento rpido (leite e vinho). UHT: leite aquecido a 74 C, em seguida aquecido a 140 C (5 segundos) e resfriament o imediato. 4- Vapor Fluente Fracionado - Tindalizao : submeter ao vapor fluente contnuo por 3 vezes, com intervalo de 12 a 18 horas aps cada execuo, tomando-se o cuidado de no abrir o recipiente onde est acondicionado o material. Elimina formas vegetativas e esporuladas. Causa a morte por promover a desnaturao de protenas dos microrganismos. - Uso: solues (vitaminas, carboidratos) e materiais que no suportam temperaturas acima de 100C.

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c) Radiaes: o tempo e a intensidade das radiaes depende do material a ser esterilizado. 1- Radiaes No Ionizantes - raios Ultra-Violeta: baixo poder de penetrao: l longo (carreia menos energia). Utilizado apenas em superfcies. Causam danos ao DNA levando a formao de dmeros de pirimidina (mutao). -Utilizado: eliminao de microrganismos em superfcies. 2- Radiaes Ionizantes - raios X e raios Gama : alta penetrabilidade. l curto (muita energia). Promovem a excitao de eltrons, formando radicais altamente reativos (OH-, H+, H2O2 ). - Esterilizao de fios de sutura, material biolgico (soros, antibiticos e vacinas) que no podem ser submetidos ao do calor.

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d) Microondas: muito empregado em laboratrios. As radiaes emitidas no afetam diretamente os microrganismos, mas geram calor, que o responsvel pela morte dos microrganismos. Ainda no existem trabalhos mostrando tempo e potncia.

e) Filtrao: fazem desinfeco e no esterilizao. Apresentam poros de diferentes dimetros. Ex.: Membranas Filtrantes - Millipore: ster de celulose (remove bactrias e alguns vrus)

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Baixas temperaturas: Diminuio ou interrupo do metabolismo. Dessecao: Liofilizao ou dessecamento natural, que atua

diferentemente nos organismos, dependendo do tipo de meio, do material dessecado e da intensidade do processo. Via de regra, os cocos Gram negativos so mais sensveis que os Gram positivos, sendo M. tuberculosis um dos exemplos clssicos de organismo resistente dessecao (vrias semanas em escarro seco). Presso osmtica: conservas com altos teores de sal ou acar.

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AGENTES QUMICOS UTILIZADOS NO CONTROLE DOS

MICRORGANISMOS. a) lcoois: anti-spticos ou desinfetantes. Atua sobre formas vegetativas promovendo a desnaturao de protenas. mais eficiente 70%, pois as protenas celulares so mais facilmente desnaturadas na presena da gua. b) Aldedos e derivados: atua alquilando grupamentos funcionais das protenas como aminas, carboxilas e hidroxilas, formando hidroximetilderivados inativos. Mais empregados: aldedo frmico (concentrao: 3 - 8%) e aldedo glutrico a 2%.

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c) Fenis e derivados: Atua sobre protenas a uma concentrao de 0.2 a 1%. Bastante txico. Mais empregados: cresis (metacresol um dos ismeros mais ativos). A creolina (mistura de cresis) utilizada na desinfeco de pisos, vasos sanitrios, excrementos, etc. d) Halognios e derivados: o iodo o mais empregado. Atua como bactericiada, fungicida e esporocida, combinando-se irreversivelmente com protenas, atravs de interao com aminocidos aromticos (fenilalanina e tirosina). As solues alcolicas contendo 2% de iodo exercem ao imediata. e) Cloro: ataca grupamentos aminados das protenas, formando cloroaminocidos inativos. Utilizado sob a forma: hipoclorito de sdio ou clcio, cido hipocloroso.

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f) Compostos Quaternrios de Amnio: detergentes catinicos: utilizados em desinfeco e anti-sepsias. Mais empregados so: cloreto de benzalcnio, cloreto benzetnio e cloreto de cetilpiridnico. Clorexidina: empregada na anti-sepsia da pele, em anti-spticos bucais, etc.

g) Esterilizantes gasosos: xido de etileno: utilizado na esterilizao de instrumentos cirrgicos, fios de sutura, etc. Atua promovendo a alquilao direta dos grupamentos carboxila, hidroxilas e sulfidrilas, inativando certas enzimas.

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INDICADORES DE ESTERILIZAO: - Substncias com ponto de fuso conhecidos :cido Benzico (121 C) e Uria (125 C). - Cultura de microrganismos esporulado: Bacillus stearothermophilus - Fitas indicadoras de esterilizao. ANTISSEPSIA DA PELE Vrias substncias qumicas so utilizadas no processo de anti-sepsia da pele. Dentre estas, encontramos o iodo, lcool, triclosan e clorexidina como uma das mais utilizadas.

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IODO O iodo um halognio que exibe sua ao sobre os microrganismos atravs de diferentes mecanismos de ao quais sejam: promovendo inativao enzimtica ou como oxidante, causando assim sua morte, Atua como bactericiada, fungicida e esporocida, combinando-se irreversivelmente com protenas, atravs de interao com aminocidos aromticos (fenilalanina e tirosina). As solues alcolicas contendo 2% de iodo exercem ao imediata. Os lcoois: anti-spticos ou desinfetantes. Atua sobre formas vegetativas promovendo a precipitao e desnaturao de protenas. mais eficiente 70%, pois as protenas celulares so mais facilmente desnaturadas na presena da gua.

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GLUCONATO DE CLOREXIDINA O gluconato de clorexidina um Anti-sptico qumico, Antifngico e um bactericida capaz de eliminar tanto bactrias gram-positivas quanto as gram-negativas, no entanto mostra-se menos eficiente com os microrganismos gram-negativos. Tambm um bacteriosttico, impedindo a proliferao de bactrias. Acredita-se que o mecanismo de ao ocorra atravs da ruptura da membrana celular, e no pela inativao por ATPase como pensava-se anteriormente.

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TRICLOSAN Triclosan ou triclosano um agente anti-sptico efetivo contra bactrias gram negativas, bem como gram positivas. eficaz tambm contra fungos e bolores. encontrado em medicamentos, sabonetes, loes e cremes dentais. Apresenta boa tolerncia para uso na pele e cavidade bucal em baixas concentraes. OBJETIVO: utilizar uma soluo de iodo, lcool, triclosan e clorexidina sobre uma poro da pele com a finalidade de reduzir a microbiota , eliminando quase todos os microrganismos presentes.