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FACULTAD DE MEDICINA
ESCUELA DE: OBSTETRICIA NUTRICION - ENFERMERIA
COORDINACION QUIMICA Y BIOQUIMICA
PROFESORES: ROBERTO BRAVO- MARIBEL ARNES
ENZIMAS
I.
INTRODUCCIN:
Las enzimas son protenas que funcionan como catalizadores especficos en la regulacin de la qumica
de las clulas de los organismos vivos.
Un catalizador es una sustancia que aumenta la rapidez o velocidad de una reaccin qumica, sin verse
alterada ella misma en el proceso global.
La velocidad y eficiencia con las cuales se realizan las transformaciones bioqumicas son notables. Si
stas se tratasen de hacer en el laboratorio, se comprobara que slo ocurriran si se suministrase una alta cuota
de energa ( por ejemplo calor), o pH extremos, o presiones elevadas, recursos todos ellos incompatibles con la
vida celular.. En las condiciones ambientales de una clula ( presin constante, pH fisiolgico y temperatura de
acuerdo a la especie, pero generalmente baja), la mayor parte de las reacciones bioqumicas ocurriran muy
lentamente o no se produciran en absoluto.
Luego las reacciones qumicas se realizan en los seres vivos a gran velocidad, en condiciones muy
moderadas de temperatura, pH y presin constante, gracias a los catalizadores.
II. CARACTERISTICAS GENERALES DE LAS ENZIMAS
Protenas altamente especializadas como catalizadores
Macromolculas
Son muy especficas respecto a sus sustratos
Funcionan en solucin acuosa en condiciones limitadas de temperatura y pH
Su actividad depende de la integridad de su conformacin
Existen algunas enzimas que requieren de un grupo qumico adicional de naturaleza no
proteica llamado grupo prosttico, el cual puede ser un cofactor ( iones metlicos Fe+2 , Mg+2,
Mn +2, Zn+2 ) o bien puede se una coenzima ( vitaminas)
cofactor
PROTENA
coenzima
apoenzima o
apoprotena
grupo prosttico
HOLOENZIMA
O
PROTEINA
CONJUGADA
Tambin se denominan las enzimas de acuerdo al tipo de reaccin que catalizan, por ejemplo deshidrogenasas,
descarboxilasas, etc.
Por otra parte, ciertas enzimas son conocidas con nombres comunes o tradicionales como Quimosina, pepsina,
etc.
La confusin creada por el uso de nombres segn distintos criterios, llev a la Unin Internacional de
Bioqumica ( IUB) a proponer un sistema de clasificacin, con normas para asignar a cada enzima un nombre
descriptivo y un numero que permite clasificarlas inequvocamente.
Los seis grandes grupos de la clasificacin internacional, segn el tipo de reaccin catalizada, son:
TRANSFERENCIA DE ELECTRONES
( iones hidruro o tomos de hidrogeno
TRANSFERENCIA DE GRUPOS DESDE UN SUSTRATO A OTRO (
GRUPOS TRANSFERIBLE: Amina,Carboxlo,Carbonilo,Metilo,Acilo,etc)
REACCIONES DE HIDRLISIS ( Catalizan la ruptura de enlaces C-O// CN// C-S// O-P , por adicin de agua)
ADICION DE GRUPOS A DOBLES ENLACES
FORMACION DE DOBLES ENLACES POR ELIMINACION DE GRUPOS
TRANSFERENCIA DE GRUPOS DENTRO DE UNA MOLECULA DANDO
FORMAS ISOMRICAS
FORMACION DE ENLACES ( C-C // C-S // C-O// C-N) MEDIANTE
REACCIONES ACOPLADAS DE ATP
Como ya se mencion algunas enzimas no requieren para su actividad ms grupos qumicos que
residuos aminocidos. Otras requieren un componente qumico adicional llamado cofactor. Este cofactor puede
ser uno o varios iones inorgnicos tales como Fe+2, Mg +2, Mn +2 o Zn+2 o un complejo orgnico o
metaloorganico denominado coenzima.
Una coenzima o ion metlico unido covalentemente a la protena enzimtica se denomina grupo
prosttico y acta como transportadora transitoria de grupos funcionales especficos.
Muchas vitaminas, que son nutrientes orgnicos requeridos en pequeas cantidades en la dieta, son
precursores de coenzimas, en la siguiente tabla se muestran algunos ejemplos
BIOCITINA
TETRAHIDROFOLATO
PRECURSOR EN LA
DIETA
GRUPOS TRANSFERIDOS
VIT-B1 ( Tiamina)
Aldehdos
VIT-B2 ( Riboflavina)
Electrones
Acido Pantotnico
VIT- B6 ( Piridoxina)
VIT-B12
BIOTINA
FOLATO
Grupos Acilo
Gupos Amino
Atomos de hidrogeno y grupos alquilo
CO2
Grupos monocarbonados
OH O P O
Coenzima A
O
N
N
OH
N O
OH
OH
NH
O P O P O
O
NH
SH
NH2
Transferencia de Acilo
Vitamina : Acido Pantotnico ( B5)
Funcin Principal
O
B io tin a
NH
HN
lisina
S
Carboxilacin
Funcin Principal
Vitamina: Biotina
CHO
HO
H3C
OH
OH
Piridoxal Fosfato
Transaminacin
Vitamina: Piridoxal
Funcin Principal
H3C
N
Tiamina Pirofosfato
O
S
NH N
H2N
O
O
H3C
P
O
Transferencia de grupos
Vitamina: Tiamina ( B1)
Funcin Principal
O
-
O
N
H2N
O
N
O
CH2
P
O
HO
OH
O
CH2
HO
OH
H2N
Oxido-Reduccin
Vitamina: Nicotinamida ( niacina)
H2N
O
N
HO
OH
P
O
OH
OH OH
N
N
O
N
H
O
Oxido-Reduccin
Vitamina: Riboflavina ( B12)
Funcin Principal
Unidad de Nicotinamida
NH2
NH2
OH OH
N
O
O P O P O
OH
O
OH
OH
OR
NAD+ : R= H
NADP+:R=(P04)-2
A modo de ejemplo del funcionamiento del NAD+ se muestra en la siguiente figura la reaccin de oxidacin de
un alcohol
NAD
H
comienza la
oxidacin de un
alcohol
NADH
R
H
R
Transferencia de
un hidrogeno
Perdida de un protn
O
H
H H
H
NH2
NH2
C
R
Resto de
la NAD+
Resto de
la NAD+
unidad de riboflavina
CH3
unidad de adenosina
H3C
OH OH
OH
O
N
HO
OH
HN
CH3
CH3
H
N
RESTO DE LA COENZIMA
HN
N
N
NH
N
O
RESTO DE LA COENZIMA
NH2
HO
O P O P O
OH
CH 3
FADH2
H
CH 3
Coordinacin Qumica y Bioqumica: Profesores R.Bravo- M.Arns. Facultad de Medicina ao 2003
IV SITIO ACTIVO
La mayora de las reacciones comunes en bioqumica suponen situaciones qumicas que son
desfavorables o poco probables en el ambiente celular, las que no se dan a una velocidad til sin catlisis. Una
enzima soluciona estos problemas al proporcionar un ambiente dentro del cual una reaccin determinada es,
energticamente, ms favorable.
Una enzima une de manera especfica una molcula de sustrato o varios sustratos en el sitio activo, este
sitio activo es con frecuencia un bolsillo o una hendidura rodeada por cadenas laterales de aminocidos que
facilitan la unin del sustrato. Existen dos modelos de la interaccin enzima-sustrato, el modelo de cerradurallave y el modelo de ajuste o encaje inducido.
Sitio activo
Sitio activo
Sustrato
Sustrato
MODELO DE
LLAVE CERRADURA
Sitio activo
+
Productos
Sustrato
Sitio
Activo
Sustrato
MODELO
ENCAJE INDUCIDO
Sitio
Activo
Producto
FAVORABLE
SP
G*
G t
P
Coordenada de la reaccin
El catalizador reduce la barrera de energa para una reaccin, con lo que aumenta la fraccin de
molculas que tienen la energa suficiente para alcanzar el estado de transicin y hacer que la reaccin vaya
ms rpida en ambas direcciones.
Sin embargo, la presencia de un catalizador no tiene efecto alguno sobre la posicin de equilibrio,
puesto que la diferencia en las magnitudes de la barrera en las dos direcciones es exactamente la misma en
presencia o no del catalizador. As pues, G no se modifica por un
catalizador.
S+E ES EPE +P
Energa libre
Estado de transicin **
G* sin
G* catalizador
ES
EP
G
P
coordenada de reaccin
G= RT lnKc
( R= 8.315 J/mol
T=298K)
LOS GRUPOS
CATLITICOS DE UNA
ENZIMA
ENERGA DE FIJACIN
Es la principal fuente de energa libre para disminuir la energa de
activacin de las reacciones
PRINCIPIOS
FUNDAMENTALES
1. - El poder cataltico de una enzima proviene de la energa liberada al
formarse el complejo enzima-sustrato
2. -La energa de fijacin proporciona tanto especificidad como catlisis
3. - Las interacciones dbiles son optimas en el estado de transicin de las
reacciones
4. -Los sitios activos de las enzimas son complementarios a los estados de
transicin
VI ACTIVIDAD ENZIMATICA:
La actividad de una enzima puede determinarse midiendo la cantidad de producto formando ( o de
sustrato consumido ) por unidad de tiempo.
Para definir la actividad de una preparacin enzimtica se utiliza en la practica distintas expresiones. La
cantidad de enzima se indica habitualmente en Unidades Internacionales ( UI).
Una Unidad Internacional es: La cantidad de enzima que cataliza la transformacin de un micromol
de sustrato por minuto, bajo condiciones definidas de temperatura y pH.
CONCENTRACIN DE ENZIMA
CONCENTRACION DE SUSTRATO
TEMPERATURA
pH
INHIBIDORES
A) CONCENTRACION DE ENZIMA
Cuando se determina la velocidad inicial de una reaccin catalizada por una enzima a distintas
concentraciones de sta, en presencia de concentraciones saturantes de sustrato y manteniendo
constante los otros factores ambientales ( temperatura y pH) se puede establecer la relacin entre
cantidad de enzima y actividad.
Si los resultados se representan en una grfica ( Concentracin de enzima vrs actividad) se obtiene la
siguiente grfica:
Actividad Enzimtica
VELOCIDAD DE REACCION
Concentracin de Enzima
b) CONCENTRACION DE SUSTRATO
La teora fundamental de la catlisis enzimtica se basa en los estudios clsicos de Michaelis y de
Menten. El anlisis cuantitativo de la accin de las enzimas que ha sido desarrollado depende en gran medida de
la determinacin de las velocidades de reaccin.
Uno de los factores clave que afectan a la
velocidad de una reaccin catalizada por una enzima
es la concentracin de sustrato presente, [S]. Como se
observa en la grfica adjunta:
V
* [S]
V = max
o Km + [S]
Vo ( uM/min)
Vmax
Vmax
Km
Concentracin de Sustrato
1
Km
1
1
=
*
+
[S] Vmax
V
V
o
max
Para las enzimas que obedecen la relacin de
Michaelis-Menten la grfica de 1/Vo frente a 1/[S] da
una lnea recta.
Km/Vmax
1/Vmax
-1/Km
1/S
Para poder comparar una enzima con otra en cuanto a su poder cataltico debe
estandarizarse al estado estacionario
Estado estacionario:
La velocidad de formacin y desaparicin del complejo Enzima -Sustrato se
igualan. Segn la ecuacin general:
k2
S + E [ES]E+P
k1
k-1
KM = k-1 + k2 / k1
KM:
ES LA CONCENTRACION
DE SUSTRATO A LA CUAL SE
ALCANZA LA MITAD DE LA
VELOCIDAD MAXIMA
Ejemplo:
Si k2 <<<k-1 entonces
Km= k-1/k1
c) TEMPERATURA:
Optima
Actividad enzimtica
Actividad enzimtica
Optimo
pH
E) INHIBIDORES DE ENZIMAS
Muchos tipos diferentes de molculas inhiben las enzimas, y actan de diversas formas. Estos
inhibidores pueden provocar una inhibicin reversible o una inhibicin irreversible.
Inhibidores Irreversibles:
Producen cambios permanentes en la molcula de enzima, con deterioro definitivo de su capacidad
cataltica. ( Ejemplos, son los compuestos organofosforados utilizados como insecticidas, el alopurinol un
inhibidor utilizado en el tratamiento de la Gota, etc) .La caracterstica de una inhibicin irreversible, esta dada
porque la enzima se une a la molcula inhibidora COVALENTEMENTE, lo que implica que no puedan separarse.
Inhibidores Reversibles:
Los diversos modos de inhibicin reversible implican todos ellos la unin no covalente de un inhibidor
a la enzima, pero difieren en los mecanismos por medio de los cuales reducen la actividad enzimtica y en la
forma en que afectan la cintica de la reaccin. De esta manera existen tres tipos de Inhibicin reversible:
COMPETITIVA , NO COMPETITIVA y ANTICOMPETITIVA
INHIBICIN REVERSIBLE
Unin no covalente entre un
compuesto y la enzima
El compuesto inhibidor puede
unirse al sitio activo de la
enzima o en otro sitio dejando
libre el sitio activo
1. - Inhibicin Competitiva
2. - Inhibicin NO Competitiva
INHIBICIN IRREVERSIBLE
Unin covalente entre un
compuesto y la enzima
Se unen al sitio activo de la
enzima en forma irreversible
Casi todos estos inhibidores son
sustancias txicas naturales o
sintticas
Cianuro
Diisopropil fluorofosfato
Sarin
Penicilina
Paration
Fisostgmina
Inhibidor competitivo.:
Un tipo de inhibicin reversible comn es la que se denomina competitiva. Este inhibidor (I) compite con
el sustrato por el sitio activo de la enzima, provocando que la reaccin normalmente no tenga lugar cuando se
ha fijado el inhibidor, ya que mientras este ocupa el sitio activo impide la fijacin del sustrato.
Los inhibidores competitivos son, frecuentemente, compuestos que se parecen al sustrato y que se combinan
con la enzima formando el complejo EI.
Debido a que el inhibidor se une de manera reversible a la enzima, se puede cambiar el sentido de la
competicin en favor del sustrato aumentando la cantidad de este. Este fenmeno se puede determinar
fcilmente mediante una grfica de 1/Vo frente a 1/[S] para la reaccin con y sin inhibidor.
Inhibidor no competitivo.
Este tipo de inhibidor reversible se fija a un sitio distinto del que se fija el sustrato no bloqueando la
fijacin de este y viceversa.
El inhibidor rebaja de manera efectiva la concentracin de enzima activa, por ende si se grfica 1/Vo
frente a 1/[S] para la reaccin con y sin inhibidor se observar que disminuye la V max
Inhibidor incompetitivo
Tambin es un tipo de inhibidor reversible el cual se fija a un sitio distinto al del sustrato, con la
diferencia que solamente se fija al complejo ES.
Considerando que los dos tipos de inhibicin ms frecuentes son la competitiva y la no competitiva,
veamos algunas diferencias y semejanzas.
INHIBICION REVERSIBLE
No competitiva
Competitiva
E + S ES
+
I
E+P
EI
E + S ES
+
+
I
I
E+P
EI+S EIS
s
s
I
I
s
INHIBICION REVERSIBLE
No competitiva
Competitiva
inhibidor
inhibidor
Sin inhibidor
1/ Vmax
Sin inhibidor
1/ Vmax
-1/ Km
1/S
-1/ Km
1/S
Sitio
modulador
SITIO CATALITICO
SITIO
ACTIVO
sustrato
Modulador
Sitio
modulador
Al sacar el modulador la
enzima se inactiva
HO
OH
Fosfato
Fosfato
Fosfatasa
Quinasa
Inactiva
Activa
Regulacin Irreversible:
Principalmente en las enzimas digestivas, existe el mecanismo de regulacin por Escisin
Proteoltica. Estas enzimas se producen como Zimgenos ( formas inactivas ), a las cuales se les
produce un corte de una parte de su estructura para lograr que se activen. Para inactivar las
enzimas activas se debe unir a su sitio activo una protena inhibidora
QUIMOTRIPSINOGENO
QUIMOTRPSINA
TRIPSINA
245
16
245
3.- Cual de los siguientes son mecanismos por los cuales la actividad de una enzima puede ser regulada
a) por unin de protenas reguladoras
b) por modificacin covalente de residuos de triptofano
c) por rompimiento proteoltico de precursores de enzimas inactivas
d) por unin de pptidos regulatorios por puentes dislfuro
e) por unin de molculas efectoras a un sitio distinto del sitio activo
4.- Cual de las siguientes afirmaciones sobre el complejo enzima-sustrato no son verdaderas. Explique
a) Se forma por unin covalente del sustrato
b) El complejo enzima-sustrato no puede ser aislado debido a que es muy inestable
c) El sustrato se une en cualquier lugar de la protena
d) Se estabiliza por interacciones dbiles
5.- Explique porqu hay un alto grado de estereoespecificidad en la interaccin de la enzima con su sustrato
6.- Cual de la siguientes afirmaciones sobre la cintica enzimtica de Michaelis -Menten son correctas:
a) La Km es expresada en trminos de una velocidad de reaccin ( mol/seg)
b) Km es la constante de disociacin del complejo enzima-sustrato
c) Km es la concentracin de sustrato requerida para alcanzar la mitad de la velocidad mxima
d) Km es la concentracin de sustrato requerida para convertir la mitad de la enzima total en el complejo enzimasustrato
7.- Cual de la siguientes afirmaciones sobre los diferentes tipos de inhibicin son correctas:
a) el inhibidor competitivo se une al sitio activo de la enzima
b) La inhibicin no competitiva de una enzima no puede ser revertida por la adicin de un exceso de sustrato
c) El inhibidor competitivo tiene una estructura qumica similar al sustrato de la enzima
d) El inhibidor no competitivo se une a la enzima en forma irreversible
8.- Cual es la proporcin de [S] a Km cuando la velocidad de una reaccin alcanza el 80% de la velocidad mxima
9.- Los siguientes datos corresponden a los de una reaccin catalizada por una enzima.
a) Determine si la enzima sigue una cintica michaeliana
b) Si es as calcule Km y velocidad mxima
[S] (mM)
0,1
0,2
0,5
0,8
1,0
2,0
10.- Los siguientes datos corresponden a reacciones catalizadas por enzimas michaelianas, en presencia y ausencia de un
inhibidor, para ambos casos
a) Determine el tipo de inhibicin
b) Explique si el inhibidor se une a la enzima, al complejo enzima sustrato o a ambos
v (mmol ml-1 min-1)
[S] (mM)
0,2
0,4
0,8
1,0
2,0
4,0
Sin inhibidor
5,0
7,5
10,0
10,7
12,5
13,6
v (mmol ml-1 min-1)
[S] (mM)
0,2
0,4
0,8
1,0
2,0
4,0
Con inhibidor X
3,0
5,0
7,5
8,3
10,7
12,5
Sin inhibidor
5,0
7,5
10,0
10,7
12,5
13,6
Con inhibidor Y
2,0
3,0
4,0
4,3
5,0
5,5