UNIVERSIDADE FEDERAL DE SERGIPE - UFS PRO-REITORIA DE PS-GRADUAO E PESQUISA NCLEO DE PS-GRADUAO EM ENGENHARIA QUMICA PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM ENGENHARIA QUMICA

MESTRADO EM ENGENHARIA QUMICA DISCIPLINA: CINTICA QUMICA

CINTICA ENZIMTICA

Prof. Dr. Roberto Rodrigues de Souza DEQ & PEQ/CCET/UFS

HISTRICO 1940 II Guerra Mundial crescimento superficial de fungos Engenharia de processos Penicilina (1928 Alexander Fleming Penicillium chrysogenum) 1857 Louis Pasteur processos fermentativos 1947 1s fermentadores - EUA Julho de 1947 Engenharia Bioqumica 2007 60 anos o principal foco tem sido os processos que fazem uso de agentes biolgicos como clulas e enzimas

DESAFIOS & POTENCIAIS APLICAES Obteno de produtos de alto valor agregado Tratamento biolgico de efluentes Obteno de produtos com custo menor

Slida base de conhecimentos de engenharia e a capacidade de interpretar tanto os prprios fenmenos de engenharia como os fenmenos celulares ou biolgicos, estes ltimos atravs de uma estreita interao com profissionais das reas bsicas de biologia.

O QUE ENGENHARIA BIOQUMICA? um ramo da Engenharia Qumica voltado aos processos biotecnolgicos industriais, que so aqueles processos nos quais ocorre a transformao de matrias-primas em produtos atravs da ao de material de origem ou carter biolgico, ou seja, clulas (microbianas, animais ou vegetais) ou enzimas.

PRODUTOS QUE PODEM SER OBTIDOS: - enzimas - cidos orgnicos - etanol - antibiticos, vacinas e hormnios - anticorpos fermento

* Processos bioqumicos relacionados rea de meio-ambiente, como o caso do tratamento biolgico de efluentes domsticos e industriais e da produo de gs metano

AS FUNES DO ENGENHEIRO PODEM SER RELACIONADAS A: - projeto de biorreatores - estudos de cintica de processos bioqumicos - modelagem e simulao - purificao de produtos biolgicos - transferncia de oxignio e ampliao de escala - anlise econmica - instrumentao e controle

BIOTECNOLOGIA Reviso de Bioqumica Industrial clulas (procariticas e eucariticas), biomolculas que compem a clula (protenas, lipdeos, carboidratos e cidos nuclicos: estrutura molecular e funes nas clulas)

Grupos de Microrganismos de Interesse Industrial bactrias, fungos (bolores e leveduras) e actinomicetos (caractersticas e melhores condies de cultivo), tcnicas de manuteno de culturas puras

BIOTECNOLOGIA (continuao) Processo Fermentativo Genrico definies e etapas (preparo do inculo, preparo e composio do meio de cultura, esterilizao)

Biorreatores (Reatores Bioqumicos) classificao, operao (reatores em fase aquosa com clulas livres, clulas imobilizadas e clulas confinadas entre membranas)

BIOTECNOLOGIA (continuao) Classificao dos Processos Fermentativos Industriais descontnuo, contnuo, descontnuo alimentado, semicontnuo. Descrio das formas de conduo e comparao entre as mesmas obtidas) (diferenas, vantagens e desvantagens, curvas

Estudo do Processo Descontnuo curvas de crescimento celular, de consumo de substrato limitante e de sntese de produto, fases de crescimento celular, clculos de velocidades (velocidade especfica de crescimento celular), fatores de converso e produtividades.

BIOTECNOLOGIA (continuao) grande a diversidade de produtos que podem ser obtidos atravs destes processos, exemplos: ! enzimas (indstrias txtil e de alimentos); ! etanol (combustvel na indstria de bebidas); ! antibiticos, vacinas e hormnios (rea de sade humana e animal); ! anticorpos (em kits de diagnstico); ! fermento (uso caseiro e na indstria alimentcia).

BIOTECNOLOGIA (continuao) Biotecnologia Moderna: busca manipular a vida pelos genes desenvolver novas caractersticas em animais, plantas ou

microorganismos, por meio de processos que a natureza levaria milhares de anos; criar novos medicamentos; produzir rgos semi-sintticos para transplantes; supermicroorganismos capazes de degradar resduos txicos que poluem o meio ambiente; desenvolver novos alimentos; produzir insumos biolgicos e bioinseticidas naturais.

EXEMPLO DE PROJETO DE BIORREATOR Hidrognio uma fonte de energia limpa e atrativa.

Portanto, processos sustentveis de produo de hidrognio tem que ser desenvolvidos para atingirem demandas futuras. Dentro do projeto europeu Biohydrogen, a completa converso de biomassa em hidrognio e gs carbnico estudada. Acetato convertido de acordo com a seguinte reao: 2CH3COO- + 8H2O + luz solar 4HCO-3 + 2H+ + 8H2

Uma bactria purprea no sulfrica usada para esta converso. A mistura de gs produzida consiste em H2/CO2 misturada com 90% v/v H2.

EXEMPLO DE PROJETO DE BIORREATOR (continuao)

EXEMPLO DE OPERACIONALIZAO DE BIORREATORES Para que um cultivo que seja eficiente, ocorrendo com elevadas velocidades de crescimento celular, significa altas velocidades de consumo da fonte de carbono, a fim de que haja abundncia de eltrons transportados na cadeia respiratria (gerao de ATP), mas significa tambm, obrigatoriamente, a necessidade da existncia de oxignio dissolvido, a fim de que eltrons sejam drenados ao final da cadeia.
Transferncia de Oxignio

CINTICA MICROBIANA Importncia de estudar a cintica do crescimento microbiano: Quando os microrganismos so desejveis: Produo de compostos de interesse Tratamento de efluentes Melhoria de processos de produo Quando microrganismos so indesejveis: Patgenos Deteriorantes Favorecer a inibio e eliminao

CINTICA DE CRECIMENTO MICROBIANO O crescimento bacteriano ocorre em dois nveis: individual e populacional. Mtodos de medida para crescimento bacteriano:

Mtodo Direto

Mtodo Indireto

CINTICA DE CRECIMENTO MICROBIANO (continuao) MTODO DIRETO Centrifugao e peso seco Contadores de partculas Cmaras de contagem (Neubauer) Esfregao corado

CINTICA DE CRECIMENTO MICROBIANO (continuao) MTODO INDIRETO Turbidemetria Diluio seriada (NMP) Plaqueamento em meio slido (UFC)

CINTICA DE CRECIMENTO MICROBIANO (continuao) Processo Fermentativo

Microrganismo Nutrientes Preparo do meio Esterilizao do meio Fermentador Controles Produto Resduo

Preparo do inculo

Ar

Esterilizao do ar

Recuperao do produto

USO

CURVA DE CRESCIMENTO MICROBIANO

Fase Lag Nesta fase no h um aumento no nmero de clulas, todavia, geralmente demonstram que h um aumento devido ao aumento no tamanho dos indivduos. Fase Exponencial Os microrganismos se encontram na plenitude de suas capacidades, num meio cujo suprimentos de nutrientes superior s necessidades. Fase Estacionria A velocidade de crescimento vai diminuindo at atingir a fase em que o nmero de novos microrganismos igual ao nmero de microrganismos que morre. As causas dessa parada de crescimento podem ser devido ao acmulo de metablitos txicos, o esgotamento de nutrientes e o esgotamento de O2.

CURVA DE CRESCIMENTO MICROBIANO (continuao)

Fase de Declnio ou Morte Nesta fase, a quantidade de microrganismos que morre torna-se progressivamente superior quela dos que surgem.

CURVA DE CRESCIMENTO MICROBIANO (continuao)

Biomassa Concentrao (g/L)

Produto

Substrato

Tempo de Cultivo (h)

CURVA DE CRESCIMENTO MICROBIANO (continuao) Tempo de gerao (g ou G) o intervalo de tempo necessrio para que uma clula se divida ou para que a populao duplique: varivel para os diferentes organismos; dependente de fatores genticos e nutricionais e ambientais.

Populao Total (N) (1) N= No x 2n onde: N= nmero final de clulas; No= nmero inicial de clulas; n= nmero de geraes Aplicando logaritmo (log): (2) log N= log No + n log 2 n = log N - logNo / log 2 n = log N - log No / 0,301 (3) n = 3,3 (log N-log No) A partir da equao 3 possvel calcular o nmero de geraes (n) que ocorreram em uma cultura se o n inicial de clulas for conhecido. Tendo-se o valor de n pode-se calcular o tempo de gerao (g) (4) g = t/n Exemplo: Calcular o tempo de gerao de uma cultura cuja populao celular passa de 103 para 108 aps 5 horas de cultivo n = 3,3 (log 108 - log 103) ----> n = 3,3 (8 - 3) = 16,5 geraes g = 5 / 16,5 = 0,3 horas Tempo para duplicar a populao celular foi de 0,3 horas.

Taxa de crescimento especfica ou velocidade especfica de crescimento (k ou m): nmero de geraes por unidade de tempo. m = 1/g (h-1) ou m = n/t Se g = 0,3 horas ento m = 1/0,3 = 3,3 geraes/h

A taxa especfica de crescimento (m), e o tempo de gerao ou duplicao (g), de uma populao microbiana so parmetros muito importantes em Microbiologia, pois permitem prever a evoluo da concentrao de um microrganismo ao longo do tempo de crescimento exponencial. So parmetros que do indicao sobre a resposta do microrganismo s diversas condies ambientais incluindo a modificao do meio de cultura. O clculo dos valores de g e m de um dado microrganismo, em condies de cultura diferentes, til, por exemplo, para: selecionar as condies de cultura timas para o crescimento desse microrganismo; estudar o efeito que uma determinada alterao das condies ambientais exerce sobre o crescimento do microrganismo.

MODELO DE MONOD
Relaciona a taxa especfica de crescimento () e a concentrao de substrato limitante (S).

onde: max = mxima taxa especfica de crescimento Ks = constante de saturao A equao de Monod baseada no modelo de cintica enzimtica de Michaelis-Menten. O modelo de Monod muito utilizado para descrever o crescimento de vrios microrganismos.

CINTICA DE MICHAELIS-MENTEN
As reaes catalisadas por enzimas so saturveis, e a sua velocidade de catlise no indica uma resposta linear face ao aumento de substrato. Se a velocidade inicial da reao medida sobre uma escala de concentraes de substrato (denotada como [S]), a velocidade de reao (v) aumenta com o acrscimo de [S]. Todavia, medida que [S] aumenta, a enzima satura-se e a velocidade atinge o valor mximo Vmax.

REAES CATALISADAS POR MICRORGANISMOS Vias Metablicas de Produo de Energia: F Metabolismo dos carboidratos
Gliclise Ciclo de Krebs (respirao aerbica) Cadeia transportadora de eltrons Fermentao

Vias Metablicas de Uso de Energia:

Biossntese de Polissacardeos Biossntese de Lipdeos Biossntese de Aminocidos e Protenas Biossntese de Purinas e Pirimidinas

METABOLISMOS DOS CARBOIDRATOS

A maioria dos microrganismos oxida carboidratos como sua fonte primria de energia celular. O catabolismo de carboidratos de grande importncia no metabolismo celular. A glicose a fonte mais comum de carboidrato utilizada pelas clulas. A respirao da glicose ocorre em trs etapas principais: Gliclise Ciclo de Krebs Cadeia de Transporte de Eltrons

GLICLISE
a oxidao da glicose a cido pirvico sendo a primeira etapa no catabolismo dos carboidratos. As enzimas da gliclise catalisam a quebra da glicose (um acar de seis carbonos) em dois acares de trs carbonos. Estes acares so oxidados liberando energia e seus tomos so rearranjados para formar duas molculas de cido pirvico. A gliclise no requer oxignio podendo ocorrer sob condies aerbias ou anaerbias.

CICLO DE KREBS
uma srie de reaes bioqumicas nas quais a grande quantidade de energia qumica potencial armazenada em acetil-CoA liberada passo a passo. O cido pirvico, produto da gliclise no pode entrar diretamente no ciclo de Krebs. Em uma passo preliminar ele deve perder uma molcula de CO! e tornar-se um composto de dois carbonos. Esse processo chamado de descarboxilao.

CADEIA DE TRANSPORTE DE ELTRONS

Consiste em uma sequncia de molculas transportadoras que so capazes de oxidao e reduo. Como os eltrons so passados atravs da cadeia h uma gradual liberao de energia que utilizada para conduzir a gerao quimiosmtica de ATP; Nas clulas procariticas a cadeia de transporte de eltrons encontrada na membrana plasmtica.

FERMENTAO
A fermentao pode ser definida de vrias formas: Qualquer deteriorao de alimento por microrganismo (uso geral); Qualquer processo microbiolgico em grande escala ocorrendo com ou sem ar (usada na indstria); Qualquer processo metablico que libere energia e que ocorra somente sob condies anaerbias (tornando-se mais cientfica)

figura

Figura 9: Viso geral da Respirao e Fermentao

VIAS METABLICAS DE USO DE ENERGIA

Biossntese de Polissacardeos Os microrganismos sintetizam acares e polissacardeos. Aps a glicose ser sintetizada as bactrias podem coloc-la dentro de muitos polissacardeos complexos, tal como o glicognio.

Biossntese de Lipdeos

Biossntese de Purinas e Pirimidinas

Biossntese de Aminocidos e Protenas

As clulas sintetizam gorduras unindo glicerol e cidos graxos O mais importante papel dos lipidios como componente estrutural das membranas biolgicas.

Certos aminocidos (cido aspartico, glicina e glutamina) feitos de intermedirios produzidos durante a gliclise e no ciclo de Krebs participam na biossntese de purinas e pirimidinas.

Os aminocidos so requeridos para biossntese de protenas. Uma importante fonte de precursores intermedirios utilizada na sntese de aminocidos o ciclo de Krebs.