PRUEBA DE INDOL Fundamento Se determina si la bacteria posee una enzima (triptofanasa). La triptofanasa hidroliza el triptfano en indol y alanina.

. El indol se detecta empleando un reactivo especfico (Reactivo de Kovacs), el cido clorhdrico proporciona el pH cido que requiere la reaccin y el alcohol amlico es, insoluble en agua y menos denso. El triptfano forma parte de las peptonas del medio. Los productos finales de la reaccin son el indol, cido pirvico,amonaco (NH3) y energa. Como coenzima de la reaccin se requiere al fosfato de piridoxal. Resultado Los resultados positivos se muestran por la presencia de un color rojo o rosa-rojizo, el alcohol concentra el complejo coloreado en la superficie de la capa en el cultivo, dicho complejo est entre el indol y el p-dimetilamino benzaldehdo. Un resultado negativo se muestra amarillo. Un resultado variable puede ocurrir cuando se muestra un color anaranjado. Ello es debido a la presencia de escatol, tambin conocido como metil-indol o indol metilado, otro posible producto de la degradacin del triptfano. ROJO DE METILO Fundamento Permite determinar la formacin de cidos orgnicos que se producen durante la fermentacin de un carbohidrato (actico, frmico, etc.), relativamente fuertes y bajan el pH del medio hasta 4-5. El microorganismo en estudio se cultiva en un caldo de cultivo con algn carbohidrato fermentable, el ms comn es la glucosa aunque se pueden utilizar otros carbohidratos como lactosa, sacarosa, manitol, etc., con produccin de cido por la va cido mixta, adicionado con el rojo de metilo como indicador de pH. Resultado

Una reaccin positiva, es decir, el viraje del medio a un color rojo (pH 4-5), indica que el microorganismo realiza la fermentacin de la glucosa por la va cido-mixta. Una prueba negativa no cambia el color del medio (color amarillo a pH>6) VOGES-PROSKAUER Fundamento Determinar la capacidad de algunas bacterias para generar un producto final neutro (acetoina y 2,3 Butanodiol) a partir de la fermentacin de la glucosa. En esta fermentacin se producen menor cantidad de cidos que en la fermentacin cido-mixta, y una gran cantidad de butanodiol. Mediante un reactivo, (alfa-naftol y KOH al 40%), se detecta la presencia de un precursor del butanodiol que es la acetona, sta en presencia de oxgeno se oxida a diacetilo. El diacetilo origina una coloracin roja al reaccionar con los restos guanidnicos de algunos aminocidos de la peptona del medio (Ej. Arginina). Resultado La acetona en contacto con el oxgeno y la potasa origina diacetilo (compuesto de color rosado), el alfa naftol acta como catalizador para revelar un complejo color rojo incrementando la sensibilidad de la reaccin. La prueba ser positiva si en 20 minutos aparece una coloracin roja. Los cultivos negativos se incuban 1-2 horas a 37 oC en posicin inclinada efectundose de nuevo la lectura. El contacto con el oxgeno y la elevada temperatura favorecen la reaccin.

CITRATOS Fundamento Sirve para determinar si un microorganismo puede crecer utilizando citrato como nica fuente de carbono introduciendolo al interior de la clula, donde es incorporado al ciclo de los cidos tricarboxilicos o ciclo de Krebs y a su vez utilizan sales de amonio como nica fuente de nitrgeno. Se hace crecer al microorganismo en estudio en caldo citrato. Actualmente el medio ms utilizado es el Agar Citrato de Simmons un medio slido en tubo con pico de flauta el cual posee un indicador de pH (azul de bromotimol). El metabolismo del citrato requiere el desdoblamiento del citrato por la enzima citritasa (citrato-oxalacetato-liasa o citrato desmolasa) en presencia de magnesio o manganeso y de transportadores como citrato permeasas. La citritasa acta sobre el citrato produciendo acido oxalacetico y acetato; productos que son convertidos enzimaticamente a piruvato y dixido de carbono. Durante esta reaccin el medio comienza a alcalinizarse por el CO2 que se genera, el cual se combina con el agua y el sodio para formar Carbonato un producto alcalino, este carbonato da la alcalinidad que produce el cambio de color del indicador de pH del medio de verde a azul Prusia oscuro (indicador: azul de bromotimol, amarillo a pH< de 6.0 y azul a pH > de 7.6). El medio incluye citrato como nica fuente de carbono y fosfato de amonio como nica fuente de nitrgeno. Resultado Un resultado positivo es cuando se observa turbidez en el tubo, debido al crecimiento bacteriano. Un resultado negativo es cuando no se observa crecimiento. Si el microorganismo es capaz de crecer en el ACS, producir cidos orgnicos provenientes de la utilizacin del citrato, el medio se alcaliniza y el indicador vira a color azul, esto ser un resultado positivo, el medio sin inocular es de color verde, de esta manera un resultado negativo no habr crecimiento y el color seguir siendo verde. CATALASA Fundamento La catalasa es una enzima que descompone el peroxido de Hidrogeno (H2O2) en agua y oxigeno. El peroxido de Hidrogeno se forma como uno de los productos finales del metabolismo aerobio de los hidratos de carbono. Si se permite que se acumule resulta letal para la clula bacteriana. Resultado La produccin rpida y sostenida de burbujas o efervescencia constituye una reaccin positiva.