Determinacin de etanol en cerveza

Tcnicas Analticas de Separacin

2012
04/10/2012

Sonia Cuevas Mantecn David Hernando Hebrero Hctor Abans Espinosa

1: INTROD CCI!NResu"en
En esta prctica llevaremos a cabo el estudio de diversos tipos de cerveza y determinaremos cuales de ellas entran dentro de las consideradas con alcohol y cuales pertenecen al grupo de las de sin alcohol. Para poder llegar a conclusiones acertadas debemos de saber con anterioridad que segn la legislacin espaola vigentes las cervezas SI ! son aquellas que contienen una graduacin alcohlica in"erior al #$. 1#1 CROMATO$RA%&A DE $ASES: Para realizar este estudio utilizaremos como t%cnica anal&tica la cromatogra"&a de gases' utilizada para el anlisis de componentes voltiles mayoritarios. Esta t%cnica se basa en la volatilizacin de la mezcla a separar inyectndola despu%s en una columna cromatogr"ica en la que se encuentra al "ase estacionaria. (onseguimos la elucin )e*traer' mediante un l&quido o gas apropiado' una sustancia del medio slido que la ha absorbido+ gracias a un gas portador inerte' denominado "ase mvil' la cual no debe interaccionar con el analito en cuestin. , su paso por la columna los componentes de la muestra se va separando en "uncin de la retencin que presenten por la "ase estacionaria. Esto hace que alcancen el detector a distintos tiempos )tiempo de retencin+. Este tiempo de retencin permite identi"icar los componentes de la muestra. -a seal que se obtiene es un pico' cuyo rea nos da in"ormacin sobre la concentracin del analito.

1#' DETECTOR DE IONI(ACI!N DE ))AMA *%ID+:

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-os compuestos orgnicos se pirolizan a la temperatura de una llama de ./0aire produciendo iones y electrones que conducen la electricidad a trav%s de la llama. -a seal depende del nmero de tomos de carbono que entra en el detector por unidad de tiempo' por lo que es ms sensible a la masa que a la concentracin. Se aplica a compuestos orgnicos pero es poco sensible a grupos como carbonilo' aminas' alcoholes y halgenos. El detector es insensible a gases no combustibles como ./1' (1/' S1/ y 12. -as venta3as de %ste detector son su elevada sensibilidad )#45#6g0s+' gran intervalo lineal )#47+' ba3o ruido' resistente. Su inconveniente que es destructivo de la muestra. Es el detector ms utilizado en cromatogra"&a de gases.

1#, -ATR!N INTERNO -a incertidumbre inherente a las inyecciones puede dar lugar a una variacin de la seal entre un e*perimento y otro impidiendo su comparativa despu%s. Para solucionar este error en la medida se introduce en todas las muestras la misma cantidad de una sustancia la cual no puede intervenir con la muestra ni encontrarse en ella y cuya retencin sea similar a la de los compuestos a analizar. Este proceso hace posible la posterior comparativa de los picos obtenidos en el estudio. Para saber la concentracin de nuestro analito deberemos relacionar la concentracin del analito con la concentracin del patrn interno y crear la correspondiente recta de calibrado. Esta t%cnica tambi%n se utiliza cuando hay p%rdidas de la muestra durante su preparacin.

': O./ETI0O
8eterminacin 8eterminar del volumen alcohlico de diversas muestras de cerveza' con y sin alcohol' e*presando en $' empleando cromatogra"&a de gases y un patrn interno.

,: DESARRO))O E1-ERIMENTA)
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,#1 MATERIA)ES 2 REACTI0OS

(romatgra"o de gases con detector 9I8 :icro3eringa :atraces a"orados ;asos de precipitados Pipetas <ao de ultrasonidos

Etanol ,cetona (ervezas

,#': DESCRI-CI!N DETA))ADA DE )A -RE-ARACI!N DISO) CIONES3 -ATRONES DE CA)I.RACI!N 2 M ESTRAS ,#'#1 -reparacin de 4os patrones de ca4ibracin

DE

Preparar Se prepararon = estndares de calibrado cuya con una concentracin en etanol )>?$ v0v+ seade 4.=' /' =' 7 y #4$ en matraces de /=ml. Clculos del volumen de etanol puro necesario:
5#67:

vol etanol impuro=

25ml0.5 =0.125ml 100

'7:

vol etanol impuro=

25ml2 =0.5ml 100

67:

vol etanol impuro=

25ml5 =1.25ml 100

87:

vol etanol impuro=

25ml7 =1.75ml 100

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vol etanol =

25ml10 =2.5 ml 100

@enemos un alcohol al >?$' por lo que hay que recalcular los volmenes necesarios para que la concentracin sea la deseada o bien recalcular la concentracin que ahora tenemos. (omo los volmenes que se obtienen al recalcularlos son muy di"&ciles de coger' nosotros hemos decidido recalcular la concentracin. Para ello' en primer lugar calculamos los ml de etanol puro que contiene el volumen que hemos calculado anteriormente.
5#67:

vol etanol puro =

100 0.125ml =0.12 ml 96

En segundo lugar calculamos la concentracin a la que corresponde ese volumen de alcohol puro. concent. real = 0.12ml0.5 =0.48 0.125ml

'7:

vol etanol puro =

0.5ml96 0.48ml2 =0.48 ml concent.real = =1.92 100 0.5ml

67:

vol etanol puro =

1.25ml96 1.2ml5 =1.2 ml concent. real = =4.8 100 1.25ml

87:

vol etanol puro =

1.75ml96 1.68ml7 =1.68 ml concent. real = =6.72 100 1.75ml

157:

vol etanol puro =

2.5ml96 2.4ml10 = 2.4 ml concent. real = =9.6 100 2.5ml

ABecalcularemos las concentraciones de nuestros estndares con el volumen que realmente hemos pipeteadoC
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Procedimiento seguido en la preparacin de los patrones:

1 2

Se limpia todo el material con agua desionizada. Se aade a un vaso de precipitados etanol y a otro acetona' previa homogeneizacin de los mismos con / porciones de 6ml apro*imadamente del compuesto al que van a contener. 8e estos vasos se toman los volmenes necesarios de estos dos l&quidos para preparar los patrones. D (, deben tomarse las al&cuotas directamente del "rasco contenedor de procedencia. .omogeneizar una pipeta de /ml con 6 porciones de unos 4.=ml de acetona (oger = matraces de /=ml y aadimos /ml de acetona a cada uno de ellos. .omogeneizar una pipeta de /ml con 6 porciones de unos 4.=ml de alcohol. Se aaden a cada matraz uno de los volmenes de alcohol previamente calculados' es decir' a un matraz se aaden 4.#/=ml de etanol' por lo que contendr una concentracin de 4.EF$. , otro matraz se aaden 4.EFml de etanol y tendr una concentracin de #.>$' y as& hasta conseguir los = patrones. Etiquetar los matraces con la correspondiente concentracin de alcohol. Se enrasan con agua desionizada todos los matraces. .omogeneizar el contenido de cada matraz.

! 4 " #

$ % &

A-os volmenes que medimos en realidad coinciden todos con los calculados tericamente' por lo que no ser necesario recalcular las concentraciones de los patrones

,#'#' -reparacin de 4a "uestra

1 2

Se limpia todo el material con agua desionizada. Se aade a un vaso de precipitados cerveza Steinburg con alcohol' a otro <ucGler 4H4 y a otro Steinburg sin alcohol' previa homogeneizacin de los mismos con / porciones de 6ml apro*imadamente de la muestra que van a contener. Se llevan a desgasi"icar a un ultrasonidos' con precaucin de que la espuma "ormada no desborde el vaso en el que se encuentra la muestra. (oger 6 matraces de /=ml y aadimos /ml de acetona a cada uno de ellos.

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"

.omogeneizar una pipeta de #4ml con 6 porciones de unos 4.=ml de la cerveza cuya muestra estemos preparando. Se aaden /4ml de la cerveza con la que se ha homogeneizado la pipeta a uno de los matraces preparados en el punto E. Etiquetar debidamente el matraz con la caracter&stica de la cerveza )con' sin' 4H4+. Se enrasan con agua desionizada. Se homogeneiza la dilucin resultante. punto = al >.

% &

10 Para la preparacin de las cervezas restantes repetir el mismo procedimiento del

,#,: MEDIDA

DESCRI-CI!N

DETA))ADA

DE)

-ROCEDIMIENTO

DE

,#,#1 Condiciones de traba9o 1ven temp #C #64I( Iso time #C = Bamp time #C 4 (arrier #C =4ml min5# Inyector tempC #7=I( 8etector tempC /44I( ,#,#' Identi:icacin de 4os picos cro"ato;r<:icos En primer lugar es necesario saber en que orden aparecen los distintos compuestos en el cromatograma' es decir' cuales son los distintos tiempos de retencin de los analitos con los que se va a traba3ar. Para ello' se inyectan los dos compuestos presentes en la muestra )etanol y acetona+ por separado. El componente ms voltil ser menos retenido por la columna en esta cromatogra"&a por lo que su pico tardar menos en aparecer. Modo de actuacin:
1

Dna vez que el cromatgra"o alcanza las distintas temperaturas en cada componente' aparece en pantalla la palabra BE,8J -avar la micro3eringa con agua desionizada .omogeneizar la micro3eringa con la disolucin de etanol.
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2 !

4 " #

Succionar 4.= K- de etanol con la micro3eringa. Inyectar el contenido en el cromatgra"o. Sacar la micro3eringa y pulsar la tecla BD cromatograma. para comenzar a registrar el

$ % &

-os gr"icos resultantes se imprimirn automticamente. Pulsar 96 para imprimir los datos num%ricos. Dna vez se imprimen los datos caracter&sticos del pico y el tiempo de retencin pulsar I S@ @EB:' la pantalla.

10 Esperar a que transcurra el tiempo de equilibrio y vuelva a aparecer BE,8J en

11 -impiar la micro3eringa con agua desionizada. 12 Bepetir el proceso anterior del punto 6 al #4 esta vez con acetona.

(omparamos los dos cromatogramas y observamos cual de los compuestos ha quedado menos tiempo retenido. En nuestro estudio la acetona permanece menos tiempo dentro de la columna cromatogr"ica' por lo que es el primero en aparecer. (on esta in"ormacin podemos distinguir a que componente de la muestra corresponde cada pico cuando hagamos las inyecciones de los patrones y de las muestras. ,#,#, In=eccin de 4os patrones -os patrones sern inyectados en orden ascendente de concentracin. El procedimiento a seguir es el siguienteC
1

Dna vez que el cromatgra"o alcanza las distintas temperaturas en cada componente' aparece en pantalla la palabra BE,8J -avar la micro3eringa con agua desionizada .omogeneizar la micro3eringa con el primer patrn. Succionar # K- del primer patrn con la micro3eringa. Inyectar el contenido en el cromatgra"o. Sacar la micro3eringa y pulsar la tecla BD cromatograma. para comenzar a registrar el

2 ! 4 " #

$ %

-os gr"icos resultantes se imprimirn automticamente. Pulsar 96 para imprimir los datos num%ricos.
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&

Dna vez se imprimen los datos caracter&sticos del pico y el tiempo de retencin pulsar I S@ @EB:' la pantalla.

10 Esperar a que transcurra el tiempo de equilibrio y vuelva a aparecer BE,8J en

11 -impiar la micro3eringa con agua desionizada. 12 Bepetir el proceso anterior del punto 6 al #4 con cada patrn.

!!4

In=eccin de 4as "uestras

Dna vez que el cromatgra"o alcanza las distintas temperaturas en cada componente' aparece en pantalla la palabra BE,8J -avar la micro3eringa con agua desionizada .omogeneizar la micro3eringa con la primera muestra. Succionar # K- de la primera muestra con la micro3eringa. Inyectar el contenido en el cromatgra"o. Sacar la micro3eringa y pulsar la tecla BD cromatograma. para comenzar a registrar el

2 ! 4 " #

$ % &

-os gr"icos resultantes se imprimirn automticamente. Pulsar 96 para imprimir los datos num%ricos. Dna vez se imprimen los datos caracter&sticos del pico y el tiempo de retencin pulsar I S@ @EB:' la pantalla.

10 Esperar a que transcurra el tiempo de equilibrio y vuelva a aparecer BE,8J en

11 Bepetir este proceso otras / veces con la misma muestra. 12 -avar la micro3eringa con agua desionizada. 1! .omogeneizar la micro3eringa con la siguiente muestra. 14 Bepetir el proceso anterior del punto E al #/ con cada muestra. 1" Dna vez terminado el proceso de inyeccin' lavar cuidadosamente la

micro3eringa para eliminar cualquier resto posible de azcares contenidos por las muestas' evitando as& la obturacin de la misma.
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>: AN?)ISIS 2 DISC SI!N DE )OS RES )TADOS

(alculamos la relacin etanol0acetona para obtener nuestra recta de calibradoC
Concentracin patrones 0'4% 1'&2 1'2 #'$2 &'# Acetona Etanol cerveza (rea pico) (rea pico) 4&"'&!0! !4'$"%$ 4#%'"0"& 11"'"!%" #4$'1#"& !$1'!01& !4&'2!1" 2%"'4$21 !$#'&#2% 4!&'&!# Relacin etanol acetona 0'0$00%$%$! 0'24##10""" 0'"$!$!"2## 0'%1$42&41! 1'1#$0"41"

0a4ores obtenidos para 4a cerve@a AsinB: (alculamos la relacin etanol0acetona con los datos obtenidos e*perimentalmenteC
Acetona (rea pico) "#!'10%# &2$'222# 4#&'%01$ Etanol cerveza (rea pico) "0'&%!# #!'!#%" !2'"&1& Relacin etanol acetona 0'0&0"!&""1 0'0#%!422$! 0'0#&!$!$!%

Sustituimos en la recta obtenida los valores obtenidos para la relacin etanol0acetona )y+ y calculamos la concentracin de alcohol )*+ que tenemos en la muestra inyectada. ,l haber traba3ado con una muestra diluida calculamos debemos calcular la concentracin que hay realmente en la cerveza pura )sin diluir+.
!"estra sin alco#ol 1 2 ! concentracin $"estra(%(v v)) 0'#&!0"1##1 0'"00!##&"! 0'"0&!20#41 concentracin lata cerveza(%(v v)) 0'%##!14"$# 0'#2"4"%#&1 0'#!##"0%02 concentracin vli&a (%(v v) 0'#2"4"%#&1 0'#!##"0%02

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Dno de los datos obtenidos di"iere bastante con el resto' por lo que deducimos que se ha producido algn tipo de error y descartamos la in"ormacin obtenida con el. Para conocer el error que hemos cometido calculamos el intervalo de con"ianza' para lo que necesitaremos el valor medio de nuestras muestras y su desviacin t&pica. ,plicando la siguiente "rmula obtenemos nuestro intervalo de con"ianza al >=$C L SiendoC
( media de los valores o)tenidos

t S t S ,+ n n

tC @ de Student para / muestras a un nivel de con"ianza del >=$M E.64 Xi 2 SC desviacin t&picaM 2iC cada concentracin obtenida nC nmero de muestras
clc"lo esta&(stico media Desvest *nt con+ianza res"lta&o 0'#!10"4$4# 0'00$&1401% 0'0!40!02$#

uestro intervalo de con"ianza al >=$ para la cerveza sin alcohol esC 4'?6#4=E7E?$)v0v+ N 4'46E464/7?

0a4ores obtenidos cerve@a con a4coCo4# (alculamos la relacin etanol0acetona con los datos obtenidos e*perimentalmenteC
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Acetona (rea pico) "!$'4!%" "2#'14#4 ##!'$%#%

Etanol cerveza (rea pico) 210'2%44 20#'0114 2"4'040$

Relacin etanol acetona 0'!&12$1""& 0'!&1"4$#$# 0'!%2$142&&

Sustituimos en la recta obtenida los valores obtenidos para la relacin etanol0acetona )y+ y calculamos la concentracin de alcohol )*+ que tenemos en la muestra inyectada. ,l haber traba3ado con una muestra diluida calculamos debemos calcular la concentracin que hay realmente en la cerveza pura )sin diluir+.
!"estra con alco#ol 1 2 ! concentracin $"estra(%(v v)) !'!0!"$2"#" !'!0"&#&40$ !'22&2&0$&2 concentracin lata cerveza(%(v v)) 4'12&4#"$0# 4'1!24#1$"& 4'0!##1!4&

Para conocer el error que hemos cometido calculamos el intervalo de con"ianza' para lo que necesitaremos el valor medio de nuestras muestras y su desviacin t&pica. ,plicando la siguiente "rmula obtenemos nuestro intervalo de con"ianza al >=$C t S t S ,+ L n n SiendoC
( media de los valores o)tenidos

tC @ de Student para 6 muestras a un nivel de con"ianza del >=$M 6.#F Xi 2 SC desviacin t&picaM 2iC cada valor obtenido nC nmero de muestras

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clc"lo esta&(stico media Desvest *nt con+ianza

res"lta&o 4'0&&"1!#"2 0'0"44&!$!2 0'0#1##4!!

uestro intervalo de con"ianza al >=$ para la cerveza con alcohol esC E.4>>=#6?=/$)v0v+ N 4.4?#??E66

0a4ores obtenidos para 4a cerve@a A5D5B: (alculamos la relacin etanol0acetona con los datos obtenidos e*perimentalmenteC
Acetona (rea pico) 4&0'0&21 "4&'&222 4$#'#%&4 Etanol cerveza (rea pico) 4'2%&& 4'21%# !'%"14 Relacin etanol acetona 0'00%$"!2"! 0'00$#$12#$ 0'00%0$&4$"

Sustituimos en la recta obtenida los valores obtenidos para la relacin etanol0acetona )y+ y calculamos la concentracin de alcohol )*+ que tenemos en la muestra inyectada. ,l haber traba3ado con una muestra diluida calculamos debemos calcular la concentracin que hay realmente en la cerveza pura )sin diluir+.

!"estra con alco#ol 1 2 !

concentracin $"estra(%(v v)) ,0'01#%&%%4% ,0'02#2&10%" ,0'022$4$#14

concentracin lata cerveza(%(v v)) ,0'02112!"# ,0'0!2%#!%"$ ,0'02%4!4"1%

Para conocer el error que hemos cometido calculamos el intervalo de con"ianza' para lo que necesitaremos el valor medio de nuestras muestras y su desviacin t&pica. ,plicando la siguiente "rmula obtenemos nuestro intervalo de con"ianza al >=$C L SiendoC
( media de los valores o)tenidos Pgina 13 de 15

t S t S ,+ n n

tC @ de Student para 6 muestras a un nivel de con"ianza del >=$M 6.#F Xi 2 SC desviacin t&picaM 2iC cada valor obtenido nC nmero de muestras
clc"lo esta&(stico media Desvest *nt con+ianza res"lta&o ,0'02$4$!&$% 0'00"&2%$&# 0'00#$0%&41

uestro intervalo de con"ianza al >=$ para la cerveza O4H4! esC, 54'4/7E76>7F$)v0v+ N 4'44?74F>E#

6: CONC) SIONES
1#E Se Ca puesto a punto un "todo cro"ato;r<:ico para 4a deter"inacin de4 contenido de a4coCo4 en cerve@as3 basado en e4 e"p4eo de acetona co"o patrn interno#

'#E Se observa una re4acin 4inea4 entre e4 <rea de4 pico cro"ato;r<:ico = 4a concentracin de a4coCo4 en e4 interva4o de 5#>F a G#H 7 *vIv+

,#E E4 an<4isis de cerve@a sin a4coCo43 con a4coCo4 = 5#5 Ca sido rea4i@ado satis:actoria"ente# )os va4ores obtenidosJ#

Cerve@a AsinB a4coCo4 -os datos proporcionados por el "abricante de la cerveza sin alcohol indican que el producto que o"rece al consumidor contiene un 4.7$v0v de alcohol.
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En nuestro anlisis hemos comprobado que tal in"ormacin es cierta' ya que los datos que hemos obtenidos son coincidentes con los "acilitados por el "abricante. Siendo esto as&' la cerveza que el "abricante vende como Osin! sigue las normas estipuladas' ya que no supera el #$v0v de alcohol permitido para este tipo de bebida. Cerve@a con a4coCo4 -os datos "acilitados por el "abricante de esta cerveza indican que el producto que o"rece al consumidor contiene un E.F$v0v de alcohol. En nuestros anlisis hemos obtenido un $v0v de alcohol de 4.4?#??E66. E.4>>=#6?=/$ N

Este resultado es un poco in"erior al indicado por el "abricante pero se apro*ima bastante.

Cerve@a A5D5B El "abricante de la cerveza 4H4 se compromete a que su producto no contenga alcohol. -os datos que hemos obtenido para la concentracin de alcohol en la cerveza O4H4! son negativos. Evidentemente una concentracin no puede ser negativa' por lo que sacamos como conclusin que la concentracin alcohlica de la cerveza 4H4 es 4$v0v. @al y como indica el "abricante' la cerveza que distribuye no contiene alcohol.

NOTA: G

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