PRACTICA N 02: PROCESOS FERMENTATIVOS: PRODUCCION DE PROTENA UNICELULAR O BIOMASA

Capacidades a lograr: 1. Conoce y aplica tcnicas de siembra, cultivo y cuantificacin del proceso fermentativo para produccin de protena unicelular. GENERALIDADES Los microorganismos no tienen un ciclo de vida obligatorio, como otras formas de vida superiores. Cuando se les coloca en un medio nutricionalmente ideal o completo, la clula microbiana crece ms y se divide para formar dos clulas, esto contina con la produccin de una poblacin de clulas. Este crecimiento celular est basado en la habilidad de cepas para multiplicar el nmero de individuos viables (no considerando las clulas muertas o agonizantes) por lo que es importante el empleo de mtodos de conteo de colonias y del nmero ms probable. Aunque hay varias tcnicas en uso para la estimacin de las densidades y concentraciones celulares, no hay ningn mtodo nico que determine la masa y la cantidad en una sola operacin. Entre los procedimientos ejecutados tenemos:

Recuento microscpico en cmara de Neubauer

En este mtodo se coloca un volumen conocido de cultivo y el recuento se hace por microscopa y se puede calcular la cantidad de microorganismos por mililitro.

Recuento en placa

Este mtodo consiste en sembrar una alcuota diluida del medio de cultivo en una placa con medio de cultivo slido, se incuba y cada clula viable va a formar una colonia.

Peso Seco Consiste en secar volmenes conocidos de cultivo hasta obtener un peso constante.

Adems de otros mtodos como Turbidimetra (recuento basado en absorbancias) y el Nmero Ms Probable (con base en estimaciones estadsticas). Estos mtodos permiten una estimacin aproximada del nmero de clulas. El crecimiento microbiano tiene las fases: a) Fase Lag o fase de adaptacin. El microorganismo restituye su capacidad de desarrollar. Es importante resaltar que las cepas productoras provienen de cultivos preservados, donde su metabolismo es casi nulo.

b) Fase Log o exponencial, donde se produce la replicacin microbiana y depende principalmente del suministro adecuado y suficiente de nutrientes que permita el desarrollo. Aqu se producen los metabolitos primarios. c) Fase estacionaria, donde se detiene la replicacin y las clulas consumen la energa para sus funciones vitales. Aqu se producen los metabolitos secundarios. d) Fase de muerte celular, donde las clulas terminan su ciclo de vida. La reproduccin y ciclo de vida celular decrece hasta detenerse. Para la produccin de biomasa la fase exponencial debe ser corta y llegar rpidamente a la fase estacionaria donde se detiene el proceso. Es decir, lograr la mxima cantidad de clulas en el menor tiempo posible. Si se requieren metabolitos primarios, la fase Log debe ser de mayor tiempo. Pero si se requiere producir metabolitos secundarios, la fase estacionaria es el objetivo. La composicin qumica de los medios de cultivo influye en el comportamiento de la curva de desarrollo o crecimiento microbiano (figura 1):

Figura 1. Curva de Crecimiento Microbiano

Si el cultivo tiene todas las fuentes de nutrientes (carbono, nitrgeno, azufre, minerales) el proceso tiene comportamiento exponencial; ac se producen los metabolitos primarios. Pero si se limita un ingrediente, fuente de nitrgeno por ejemplo, se logra la fase estacionaria y es en esta fase donde se manejan los ingredientes para producir los metabolitos secundarios. La produccin de biomasa es de importancia como alternativas de protena como la unicelular SCP o "biomasa". Este trmino "protena de origen unicelular" es aceptado para denominar de esa forma a clulas de bacterias, hongos y algas usadas como una fuente de protena. Esta opcin tiene ven tajas sobre otras protenas ya que se obtiene de sustratos relativamente baratos, con alto rendimiento y de calidad nutricional. Adems est sujeta a control lo que hace posible que su fabricacin sea maximizada. Algunas ventajas de la protena de microorganismos cultivada en biorreactores o sistemas similares, sobre la similar de plantas y animales se indican como sigue: 1. Los microorganismos tienen tiempos de generacin cortos e

incrementan rpidamente su masa; las bacterias y levaduras bajo condiciones de laboratorio alcanzan tiempos de generacin entre un 0.52h o de 1-3h. 2. Los microorganismos poseen una concentracin de protena elevada entre un 10-50%. 3. La SCP es de alta digestibilidad no es txica y de buen sabor. 4. La produccin de SCP se basa en sustratos relativamente baratos y abundantes como la celulosa, el AA o el petrleo, etc. 5. La produccin de SCP se logra con relativa facilidad en un cultivo controlado independientemente de factores ambientales.

PORCENTAJE PROMEDIO DE LA COMPOSICIN QUMICA PROXIMAL DE LA PROTENA UNICELULAR EN BASE A SU PESO SECO.
COMPUESTOS ORGNICOS (%) Protena Lpidos Cenizas cidos nucleicos HONGOS FILAMENTOSOS 5-8 2-8 9 - 14 7 ALGAS 7.5 - 10 7.0 - 20 8.0 - 10 3.0 - 8 LEVADURAS 7.5 - 8.5 2.0 - 6.0 5.0 - 9.5 6.0 - 12 BACTERIAS 11.5 - 50 1.5 - 3.0 3.0 - 7.0 8.0 - 16.0

En la presente actividad prctica vamos a desarrollar el mtodo de obtencin de PROTEINA UNICELULAR o BIOMASA:

EXPERIENCIA PRCTICA.

Materiales, Reactivos y Equipos Levadura de panificacin (hmeda) Glucosa Fosfato de Amonio DiHidrogenado Sulfato de Magnesio Fosfato potasico dihidrogenado NaCl (q.p.) Agar Estracto de Malta Agua destilada Matraz Erlenmeyer 500 ml Pipetas 10 mL Esptulas Varillas de agitacin Termmetro 0 - 50C Vasos de precipitacin 100 ml Mechero de alcohol Pizeta Algodn copn Papel blanco Pabilo Mechero de alcohol Autoclave Incubadora Estufa

PROCEDIMIENTOS. 1. Medio de Cultivo Glucosa 20 g/L Fosfato de potasio dihidrog. 1 g/L Fosfato de amonio di hidrogenado 1 g/L Sulfato de Magnesio 0,5 g/L Minerales 0,5 g/L Agua destilada c.s.p. 1 L

Preparar 500 ml del medio de cultivo en matraz Erlenmeyer, tapar con algodn, sellar con papel e hilo y llevar a autoclave a 121 C por 20 min.

3. Una vez frio el medio de cultivo, inocular la levadura (5% del volumen del medio de cultivo) en condiciones estriles: lejos de polvo, viento, con apoyo de mecheros; esto con la finalidad de eliminar la contaminacin.

La levadura debe estar rehabilitada por 12 horas en agar Extracto de Malta (fuente rica en nutrientes de alta calidad). Incubar a 30C.

4. Observar y registrar el desarrollo microbiano. Dependiendo de la cepa inoculada, el proceso puede durar desde uno a ms das. Luego filtrar el contenido y secar el filtrado en estufa a 60C hasta peso constante.

5. Reporte los gramos de biomasa resultante.

CUESTIONARIO:

1. Qu es la PROTEINA UNICELULAR y cul es su importancia?

2. En qu fase de desarrollo microbiano obtenemos la biomasa y cmo logramos mantenerla y evitar que el desarrollo avance a la siguiente fase?

3. Cul es la razn de inocular previamente la levadura en Agar Nutritivo y que fase de desarrollo microbiano tiene esta etapa?

4. Los microorganismos requieren de fuente de carbono, nitrgeno, azufre, minerales, etc. Identifique cules son las fuentes en la presente prctica.

Grafique en orden secuencial el procedimiento descrito, indicando cada etapa del proceso.