UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA DE MXICO FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES CUAUTITLN DEPARTAMENTEO DE CIENCIAS BIOLGICAS SECCIN DE BIOQUMICA Y FARMACOLOGA HUMANA

LIC. FARMACIA BIOQUMICA DE SISTEMAS ____________________

SEMESTRE: EQUIPO: 7

GRUPO: 2551

ASESORES DE LABORATORIO:

INTRODUCCIN Los aminocidos constituyen un grupo de nutrientes muy especiales. Su principal funcin es su incorporacin a las protenas corporales, proceso que es importante sobre todo durante el crecimiento. Los aminocidos forman parte tambin de pptidos y son precursores de todas las sustancias nitrogenadas del organismo (con excepcin de las vitaminas). Cuando la dieta es hiperproteica, los aminocidos pueden utilizarse con fines energticos. Y si la dieta carece de hidratos de carbono, podrn convertirse en glucosa para su consumo por el sistema nervioso central. Las rutas metablicas de los aminocidos se entroncan con determinados metabolitos de la gluclisis y del ciclo de Krebs. En el organismo existen 20 aminocidos, nueve de los cuales son esenciales; los otros once son los no esenciales. Los aminocidos esenciales son los que no pueden ser sintetizados por el organims y, por tanto, deben ser obtenidos a partir de la dieta. Estos nueve aminocidos son los siguientes: Fenilalanina (Phe) Valina (Val) Triptfano (Trp) Teronina (Thr) Isoleucina (Ile) Metionina (Met) Histidina (His) Lisina (Lys) Leucina (Leu)

Hay dos reacciones esenciales para el metabolismo de los aminocidos: la transaminacin y la desaminacin oxidativa. Los aminocidos tambin actan como precursores para la biosntesis de: Purinas y pirimidinas Porfirinas Neurotransmisores Hormonas

Es por ello que es importante estudiar las alteraciones metablicas al administrar la lisina en ratas Wistar.

CAPTULO 1. PANORMICA GENERAL 1.1. Generalidades Las protenas de la dieta se hidrolizan en el tracto gastrointestinal, produciendo aminocidos y pptidos de pequeo peso molecular que se absorben por las clulas de la mucosa. Algunos aminocidos se utilizan en las clulas en funciones energticas y para el recambio tisular, mientras que otros sufren ciertas transformaciones metablicas de manera que los aminocidos que llegan al hgado por va portal no son exactamente los mismos que se absorbieron en la mucosa intestinal. El destino metablico de los aminocidos es: utilizacin energtica o gluconeognesis, sntesis de aminocidos no esenciales, formacin de otros compuestos nitrogenados, sntesis de pptidos y protenas, etc. Todas las sustancias nitrogenadas del organismo derivan de aminocidos. El hgado metaboliza gran parte de los aminocidos que llegan por va portal, pero libera a su vez aminocidos de circulacin general. Estos aminocidos liberados por el hgado son captados por los tejidos perifricos, pero, a su vez, algunos de estos tejidos envan aminocidos a la circulacin. La insulina estimula la captacin de aminocidos y la sntesis de protenas en el tejido muscular, mientras que los glucocorticoides favorecen la protelisis y la salida de los aminocidos al plasma. 1.2. Reacciones generales del metabolismo de los aminocidos La transaminacin es la reaccin ms frecuente de los aminocidos. Afecta a todos ellos en alguna etapa de su degradacin y es utilizada tambin en la sntesis de aminocidos no esenciales. La transaminacin se conecta con la desaminacin del glutamato a -cetoglutarato en la utilizacin catablica de los aminocidos. La descarboxilacin tiene otro significado, ya que los productos que se originan suelen tener gran actividad biolgica.

En el catabolismo de algunos aminocidos, especialmente en los ramificados, se produce la descarboxilacin oxidativa de los cetocidos originados previamente por la transaminacin. La reaccin de transaminacinconsiste en la transferencia de un grupo amino desde un aminocido a un -cetocido. En casi todos los casos interviene el sistema glutamato/ cetoglutarato. Las enzimas se denominan aminotransferasas o transminasas. La conversin de aminocidos a cetocidos permite en muchos casos la utilizacin energtica, ya que la mayora de estos cetocidos se integran en las v{ias catablicas de la glucosa. Las reacciones de transaminacin permiten la snteis de los aminocidos no esenciales a partir de los cetocidos correspondientes. As mismo, estas reacciones se realizan sobre metabolitos de los aminocidos (lisina, prolina, triptfano o arginina). El sistema de desaminacin ms frecuente en el organismo humano es la desaminacin oxidativa del glutamato, esta reaccin consiste en el paso de glutamato a -cetoglutarato con prdida del grupo nitrogenado como amoniaco y oxidacin mediada por NAD o NADP, y est catalizada por una enzima, la glutamato deshidrogenasa, que abunda especialmente en las mitocondrias hepticas.

Figura 1. Reacciones de transaminacin. CAPTULO 2. DESTINO DEL ESQUELETO CARBONADO DE LOS AMINOCIDOS 2.1. Introduccin El destino natural de los aminocidos es su incorporacin a pptidos y protenas o su utilizacin como precursor de otros compuestos nitrogenados. Cuando el aporte de aminocidos con la dieta es excesivo, tambin pueden utilizarse como fuente energtica. Otra posibilidad es su conversin en glucosa cuando la dieta
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carece de hidratos de carbono o en circunstancias como el ayuno, el estrs metablico o la diabetes. En todos estos casos, se produce la desaminacin de los aminocidos. La sede principal de todos estos procesos es e hgado, aunque la gluconeognesis se produce tambin en la corteza renal. No todos los aminocidos se pueden convertir en glucosa, sin embargo, la mayora de los aminocidos pueden originar cidos grasos cuando la dieta es hiperproteica e hipocalrica. La utilizacin energtica de los aminocidos es especialmente importante en el hgado, el msculo, los enterocitos y las clulas del sistema inmunitario. 2.2. Hgado Los aminocidos solo se utilizan como fuente de energa si llegan en cantidad excesiva como consecuencia de una dieta muy rica en protenas. Cuando la ingesta proteica es normal, los aminocidos resultantes se incorporan preferentemente en las vas biosintticas (formacin de protenas, purinas, etc.). Por lo tanto, se puede decir que las vas catablicas solo utilizan los aminocidos cuando sobran. 2.3. Msculo. Las clulas musculares utilizan ampliamente los aminocidos ramificados como fuente de energa. 2.4. Enterocitos. Estas clulas utilizan los aminocidos como fuente de energa importante, sobre todo la glutamina. Clulas del sistema inmunitario. Utilizan la glutamina como fuente energtica principal. La degradacin de los aminocidos transcurre a travs de la gluclisis y del ciclo de Krebs.

Los aminocidos se utilizan como sustrato gluconeognico cuando de consumen dietas sin hidratos de carbono, en el ayuno, en el estrs metablico, en la diabetes y en todas aquellas situaciones en las que las hormonas catablicas predominen sobre la insulina. CAPTULO 3. DESTINO DEL AMONIO La desaminacin de los aminocidos produce amoniaco. Las clulas hepticas pueden utilizar este amoniaco para la formacin de aminocidos no esenciales a travs del glutamato deshidrogenasa. El glutamato puede aceptar el glutamato para formar glutamina, sin embargo, el destino principal del amoniaco es su transformacin en urea, que no es txica y que se elimina finalmente por orina. La sntesis de la urea se realiza siguiendo un ciclo metablico de reacciones alimentado por el carbamilfosfato y el aspartato que aporta el segundo grupo amino. Algunas reacciones son mitocondriales y otras son citoplasmticas. Se desarrollan

exclusivamente en el hgado, aunque algunas pueden llevarse en otros tejidos, concretamente en las clulas de la mucosa intestinal se desarrollan la mayor parte de estas etapas, aunque el producto final no es la urea si no los aminocidos ornitina, prolina, citrulina y arginina. 3.1. Etapas enzimticas El carbamilfosfato se origina a partir del dixido de carbono y amoniaco con el concurso de la enzima carbamilfosfato sintetasa. Se gastan dos molculas de ATP, lo que garantiza energticamente el funcionamiento de la reaccin y por lo tanto, la desaparicin del amoniaco. En las mitocondrias se forma citrulina, la cual se une al aspartato con produccin de arginina succinato y gasto de ATP. En la etapa siguiente, se forma arginina y se libera fumarato. Por ltimo, la arginina se hidroliza produciendo urea y regenerando la ornitina. El ciclo de la urea supone el gasto de 3 molculas de ATP por cada molcula de urea sintetizada. 3.2. Regulacin

La regulacin del ciclo de la urea se realiza a nivel de carbamilfosfato sintetasa; este compuesto se forma a partir de la acetil-CoA y glutamato y la reaccin es activada por la arginina. A largo plazo, se produce una induccin generalizada de las enzimas de la ureognesis cuando las dietas son muy ricas en protenas o durante el ayuno.

CAPTULO 4. BIOSNTESIS DE AMINOCIDOS NO ESENCIALES 4.1. Introduccin Los aminocidos no esenciales se sintetizan a partir de cetocidos intermediarios del metabolismo de los hidratos de carbono por transaminacin. Cuando los aminocidos derivan de cetocidos que no se producen en el organismo humano, su sntesis endgena es imposible, por lo tanto, tienen que ser aportados por la alimentacin y reciben el nombre de aminocidos esenciales. Existen nueve aminocidos claramente esenciales: valina, leucina, isoleucina, treonina, lisina, metionina, histidina, fenilalanina y triptfano.

Figura 2. Vas de formacin de los aminocidos. 4.2. Vas metablicas principales de la lisina La lisina es un aminocido esencial cuya degradacin es un metabolito llamado cido cetoadpico. En la degradacin de la lisina, los dos grupos nitrogenados de este aminocido son transferidos al -cetoglutarato, aunque por mecanismos diferentes, en la va degradativa principal que se realiza en el hgado. En los tejidos extrahepticos, uno de los grupos nitrogenados es separado como amoniaco por la lisina oxidasa. Finalmente, el esqueleto carbonado de la lisina origina la acetil-CoA, por lo que este aminocido puede considerarse cetognico. Es importante sealar que la lisina, de manera anloga a la prolina, se incorpora a la estructura del colgeno y cumple un papel fundamental en la consistencia de esta protena tras su conversin en hidroxilisina con el concurso de la vitamina C. La lisina como aminocido esencial es importante para la proliferacin celular y para la sntesis proteica, influyendo sobre el sistema inmunitario. La deficiencia de lisina aumenta la morbilidad y la mortalidad en respuesta a la infeccin tanto en animales como en seres humanos, reducindose la produccin de anticuerpos y la inmunidad celular. Es conocida la competencia en el transporte con otros aminocidos bsicos. As, el aumento de las concentraciones extracelulares de lisina inhibe la concentracin

intracelular de arginina, reducindose la formacin de NO en los macrfagos. No se dispone de estudios relevantes sobre la accin de lisina en el sistema inmunitario en seres humanos. Ente los derivados nitrogenados de la lisina, el ms interesante es la carnitina, compuesto fundamental para la entrada de los cidos grasos de cadena larga en las mitocondrias.

Figura 3. Metabolismo de la lisina 4.3. Carnitina La L-carnitina (-hidroxi--trimetilaminobutirato) es un derivado de los aminocidos de lisina y metionina ampliamente distribuido en todos los tejidos de los mamferos y particularmente abundante en el tejido muscular. Es una molcula fundamental en la oxidacin de los cidos grasos y por lo tanto en el metabolismo energtico. Su funcin mejor conocida es la de actuar como lanzadera de lo cidos grasos de cadena larga, facilitando su entrada en la matriz mitocondrial, donde son oxidados. La L-carnitina parece tambin facilitar la salida de los cidos grasos de cadena corta desde la mitocondria al citosol. Otras funciones de la carnitina son la proteccin de la estructura de las membranas celulares y la reduccin de la produccin de lactato. Por otra parte, numerosas observaciones han puesto de manifiesto su papel en el control del ciclo celular. Varias evidencias sugieren que la apoptosis celular inducida por adicin de palmitato o estearato a los medios de cultivo se relaciona con la sntesis de novo de ceramida; la carnitina inhibe la muerte celular programada al prevenir la hidrlisis de la

esfingomielina y la consecuente sntesis de ceramida. Este efecto es especfico para la esfingomielinasa cida, que disminuye su actividad en presencia de la acetilcarnitina.

4.3.1. Metabolismo Los requerimientos de carnitina se satisfacen por biosntesis endgena a partir de lisina y metionina, llevada a cabo en el hgado y en el rin, y por la dieta. La leche y los productos lcteos, la carne y el pescado don fuentes ricas en carnitina. Por el contrario, los vegetales, entre ellos los granos, son fuentes pobres de este compuesto. La carnitina libre es absorbida de forma prcticamente completa en el intestino delgado. La proporcin de carnitina sintetizada depende de una serie de factores, como la carnitina de la dieta y la coexistencia de estados patolgicos, como insuficiencia renal, diabetes mellitus, abuso de alcohol, isquemia del miocardio y cncer. En la va biosinttica de la carnitina, los cuatro carbonos de la cadena y el nitrgeno derivan de lisina, y los res grupos metilos son aportados por la S-adenosilmetionina (SAM). En todos los mamferos, algunos residuos de lisina presentes en las protenas son metilados por la protena-lisina metiltransferasas que usan SAM como donante de grupos metilo. El producto metilado es un residuo de 6-N-trimetil-lisina que se encuentra en numerosas protenas como las histonas, la miosina, la calmodulina y el citocromo c. La 6-N-trimetil-lisina es liberada por protelisis y sufre cuatro reacciones hasta convertirse en carnitina. El sitio mayoritario para la formacin de trimetil-lisina es el msculo esqueltico, aunque todos los tejidos tienen capacidad para formarla, dependiendo de la biodisponibilidad de los sustratos. Una vez que la trimetil-lisina es hidroxilada dentro de cada tejido, puede pasar a la circulacin sistmica, y la -butirobetana es hidroxilada, fundamentalmente en el hgado y en el rin, para dar carnitina, que es distribuida de nuevo a otros tejidos. 4.3.2 Funciones La deficiencia de carnitina en la especie humana se describi por primera vez en 1973. Desde entonces, se ha diagnosticado ms de 100 casos de deficiencia gentica de
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carnitina. El mecanismo bioqumico que da lugar a la deficiencia de carnitina parece residir en anomalas funcionales de un transportador especfico de iones de carnitina. Esta deficiencia puede ser sistmica o simplemente mioptica y da lugar a una serie de sndromes, que incluyen debilidad muscular progresiva con infiltracin lipdica del msculo esqueltico y la concentracin reducida de carnitina muscular, miocardiopata, hipoglucemia grave, concentraciones elevadas de amonio en sangre y capacidad disminuida de produccin de cuerpos cetnicos en respuesta al ayuno. La deficiencia de carnitina puede tambin ocurrir junto con otras alteraciones metablicas, como la aciduria orgnica, o ser secundaria a algunos tratamientos mdicos, como la dilisis renal, nutricin parenteral de larga duracin y tratamiento con cido valproico. Numerosos estudios han demostrado que la suplementacin con carnitina mejora notablemente las complicaciones cardiacas y la capacidad para realizar ejercicio, as como los sntomas musculares como la hipotensin intradialtica y la anemia resistente a la eritropoyetina, normalizando la actividad reducida de la carnitina

palmitoiltransferasa. La FDA ha aprobado la utilizacin de la carnitina, no slo para el tratamiento de la deficiencia de carnitina en los pacientes sometidos a la hemodilisis sino tambin para su prevencin. CAPTULO 5. METABOLISMO DE LOS AMINOCIDOS EN LOS DISTINTOS TEJIDOS El metabolismo de los aminocidos presenta claras diferencias en los distintos tejidos. 5.1. Metabolismo de los aminocidos en el enterocito Los aminocidos que llegan al enterocito pueden seguir varias vas metablicas, entre las que destacan su utilizacin para la sntesis de protenas de la mucosa, intercambios entre ellos, consumo energtico y liberacin a la sangre portal. Los enterocitos utilizan hasta un 10% de los aminocidos absorbidos en la sntesis de protenas de secrecin, protenas celulares de recambio y protenas destinadas al reemplazo de las clulas perdidas por descamacin.
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Las clulas de la mucosa realizan transformaciones en los aminocidos absorbidos, especialmente la transaminacin del aspartato y el glutamato. La sangre portal no contiene cantidades importantes de estos aminocidos sino de su producto metablico nitrogenado, que es la alanina. Tanto el aspartato como el glutamato son txicos para la regin hipotalmica de la rata y el ratn, aunque esta toxicidad no ha sido demostrada en los primates. El metabolismo proteico del enterocito, al contrario que el del hgado y el del msculo, no est sujeto a control hormonal. 5.2. Metabolismo de los aminocidos en el hgado El hgado desempea un papel fundamental en el metabolismo nitrogenado. Los aminocidos que llegan por la vena porta pueden seguir alguna de estas vas: Pasar a la circulacin sistmica por la vena supraheptica sin metabolizacin. Originar pptidos, protenas y otros derivados metablicos nitrogenados. Algunos de estos compuestos, fundamentalmente ciertas protenas, sern luego liberadas a la circulacin, como la albmina y dems protenas plasmticas. Catabolizarse para producir energa; este destino solo es importante cuando el aporte de protenas en la dieta es elevado. Los aminocidos ramificados no son catabolizados de forma importante en el hgado, en cambio se metabolizan de forma activa en el msculo. Utilizarse para sintetizar glucosa, cuando la dieta carezca de suficientes hidratos de carbono.

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Figura 4. Metabolismo de los aminocidos en el hgado. 5.3. Metabolismo de los aminocidos en el msculo La captacin muscular de aminocidos y su utilizacin en la sntesis de protenas es estimulada por la insulina. Despues de la ingestin de alimento, predominan la captacin y utilizacin de los aminocidos para la proteosntesis, mientras que en los perodos interdigestivos y en el ayuno predomina la liberacin de aminocidos con fines gluconeognicos. La alanina es el principal aminocido gluconeognico.

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 Objetivo Determinar la presencia de lisina en ratas wistar despus de la necropsia con ayuda del la tcnica de Bratton y Marshall para despus cuantificar los rganos por espectrofotometra, realizado una comparacin (machos y hembras) entre los cuantificaciones y daos presentados en los rganos.

Hiptesis Si se les administra lisina en ciertas dosis a las ratas wistar durante cierto periodo al momento de la necropsia se podr ver el dao generado en algunos rganos y se comprobara con ayuda de la espectrofotometra.

Material biolgico 40 ratas wistar (20 machos y 20 hembras)

Reactivos Flourdinitrobenceno Lisina Acido piclico ter Equipo Jeringas insulnicas (1,3 y mL) Balanza Espectrofotmetro Gradilla Cajas petri Jaulas para animales Campana de anestesia Estuche de diseccin Algodn

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 Diagraman de flujo Protocolo

Pesar, marcar y distribuir a las ratas en los lotes

Lote 1 5 ratas macho 5 ratas hembra

Lote 2 5 ratas macho 5 ratas hembra

Lote 3 5 ratas macho 5 ratas hembra

Lote 4 5 ratas macho 5 ratas hembra

Administrar _______ de lisina va intraperitonial

Administrar _______ de lisina va intraperitonial

Administrar _______ de lisina va intraperitonial

Administrar _______ de lisina va intraperitonial

Sacrificar a las ratas

Obtener muestras de hgado, corazn, rin, cerebro etc. Aporx.1 gramo de c/u

Tratar las muestras con la tcnica de Bratton Marshall

Comparar los resultados entre los gneros y dosis correspondientes

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 Cronograma de Actividades Cronograma del Protocolo de Bioqumica de Sistemas Semana Actividad Resultados Tiempo

Anlisis de costos Jeringas 1. 3 y 5 mL (8) .. $32 Agujas de 25x16 (8) .. $32 Algodn .. $10

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 Anexos 1.-Fundamento del mtodo de Bratton-Marshall Es un anlisis colorimtrico utilizado para la cuantificacin de sulfonamidas mediante el acoplamiento de sus sales de diazonio con N-(1-naftil)-etilendiamina para formar una solucin colorida que absorbe en la regin visible. Diazoacin de aminas aromticas Las aminas aromticas primarias reaccionas con una solucin acida de acido nitroso para dar sales de diazonio. Es probable que la reaccin se desarrolle por medio de una nitrosacin inicial de la amina seguida de una tautomerizacin de la nitrosoamina y la descomposicin de azohidrxido, la reaccin es: AR-NH2 + HNO2 + HCl AR-N2+ Cl- + 2H2O AR-NH-N=O + H2O AR-N=N-OH + HCl [AR-NN] + Cl- + H2O En realidad, la nitrosamida no se forma, por reaccin con cido nitroso; en su lugar el verdadero reactivo es el ion nitroso acido (H2ONO+), el anhdrido nitroso (H2O3) o el innitrosonio (NO+), segn las condiciones de reaccin. Estas especies se forman a partir del cido nitroso en medio cido, de acuerdo a la siguiente reaccin.

Referencias http://dgsa.uaeh.edu.mx:8080/bibliotecadigital/bitstream/231104/632/1/Determinacion%20de%20la% 20digestibilidad%20in-vitro.pdf

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