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Microbiologia Aula 5
Recombinao gentica
07/04/2013
Recombinao gentica
Griffith: 1928 (evento marcante na biologia pois forneceu as primeiras evidncias de que o DNA
era o material gentico)
DEFINIO
grego genno; fazer nascer) a cincia da hereditariedade e da variabilidade dos organismos.
GENTICA (do
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Estrutura do DNA
Dupla fita em forma de hlice Cadeia de nucleotdios
Watson e Crick
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Variabilidade em microrganismos
Gentipo: potencial total herdado
Estrutura do DNA
Cada nucleotdeo contm os seguintes elementos:
1 Base orgnica nitrogenada (Por que contm nitrognio na sua formao) 1 Acar chamado DESOXIRRIBOSE (Possui 5 Carbonos na sua molcula)
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Estrutura do DNA
5 to 3 (fitas so antiparalelas)
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ESTRUTURA DO DNA
1) Estrutura primria
5 to 3 (fitas so antiparalelas)
A=T CG
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20 aminocidos
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Como existem 4 bases (A, C, T e G), existem 4x4x4=64 diferentes combinaes de 3 bases formando cdon. No entanto, o nmero de aminocidos codificados apenas 20
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O cdigo "degenerado": trs aminocidos, Arg, Leu, Ser, tem seis cdons; outros tem 3 ou 4 cdons; apenas Met tem um nico cdon Aparentemente, o cdigo evoluiu para minimizar o efeito deletrio de mutaes
TAC CGC ATA CGA TAC CTC ACC GCT GAA CCA AAA CGG
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DNA girase
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Replicao do dna
Replicao do DNA
Na replicao o DNA (fita dupla) convertido em duas molculas filhas idnticas
Quando se inicia a duplicao o superenovelamento dos cromossomos relaxado pela enzima TOPOISOMERASE.
Em seguida as duas fitas do DNA so desenrolados por uma enzima: HELICASE. A helicase ou DNA helicase uma enzima que promove a abertura da hlice de DNA, separando-o em duas fitas simples para que possa sofrer replicao. A helicase quebra as LIGAES DE HIDROGNIO entre as bases nitrogenadas.
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A helicase ou DNA helicase uma enzima que promove a abertura da hlice de DNA, separando-o em duas fitas simples para que possa sofrer replicao. A helicase quebra as ligaes de hidrognios entre as bases nitrogenadas.
replicao
A topoisomerase uma enzima que desempenha importante papel nos processo de replicao e empacotamento de DNA. Ela catalisa uma quebra nas molculas de DNA, mas usa ligaes covalentes para segurar as molculas de DNA que foram quebradas.
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Forquilha de replicao
Em geral em procariotos ocorre uma replicao bidirecional duas forquilhas de replicao ocorrem ao mesmo tempo.
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Transcrio (DNA
Uma fita do DNA serve de molde Tem Uracil (U) no lugar de Timina (T) RNA fita simples Trs tipos de RNA com diferentes funes:
RNA)
mRNA (RNA mensageiro): especifica a sequncia de aa tRNA (RNA de transferncia): usa a informao contida no mRNA e traduz essa informao em uma sequncia de aa rRNA (RNA ribossmico): forma os ribossomos responsveis pela traduo do RNA em protenas
Traduo (RNA
protenas)
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O conjunto conhecido como polissomo ou polirribossomo Cada ribossomo funciona independentemente dos demais
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Variaes genotpicas
Ocorre graas a dois mecanismos:
Mutaes
Recombinao gentica
Mutaes
Alteraes (hereditrias) na sequncia de nucleotdeos de um gene. - Geralmente resultam em pequenas alteraes genticas
Recombinao gentica
Elementos genticos contidos em dois genomas diferentes so reunidos numa unidade. - Provoca alteraes mais significativas.
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Variaes genotpicas
MUTAES
Mudanas hereditrias nucleotdeos de um gene Diferentes tipos
Substituio de bases (troca de bases) Mutaes de remoo (remoo de bases) Adio ou perda de bases (protenas no funcionais) Mutaes sem sentido (trmino da cadeia de aa) Mutaes silenciosas (no acarreta efeito no fentipo) Mutaes de supresso (corrigem mutaes)
na
seqncia
de
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Deleco
(remoo de uma ou mais bases do DNA)
Pode ser removida uma nica base do DNA ou milhares delas. A remoo de um nmero de bases que no seja mltiplo de trs altera completamente a mensagem do gene.
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Plaqueamento de rplicas
(replica plating)
Uma tcnica conhecida como plaqueamento de rplicas (replica plating),, permite a rpida identificao de clones mutantes . Nesta tcnica, as bactrias so plaqueadas em meio completo, no-seletivo, de forma a se obter colnias isoladas, as quais ocupam posies definidas no meio semi-slido. Esta placa pressionada sobre um pedao de veludo esterilizado ao qual ficaro aderidas as clulas bacterianas de cada posio. Em seguida o veludo pressionado sobre um meio seletivo, por exemplo, um meio seletivo contendo todos os requerimentos nutricionais exceto arginina. Aps um dia de incubao compara-se o posicionamento das colnias nas duas placas. Se uma colnia cresceu na placa de meio completo e no cresceu na placa de meio seletivo, podemos inferir que a colnia que ocupava aquela posio, na placa original, era um mutante biossinttico de arginina e ser identificado como Arg -.
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Plaqueamento de rplicas
(replica plating)
Esta placa pressionada sobre um pedao de veludo esterilizado ao qual ficaro aderidas as clulas bacterianas de cada posio. Em seguida o veludo pressionado sobre um meio seletivo, por exemplo, um meio seletivo contendo um antibitico. Aps um dia de incubao compara-se o posicionamento das colnias nas duas placas.
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Plaqueamento de rplicas
(replica plating)
Uma tcnica conhecida como plaqueamento de rplicas (replica plating),, permite a rpida identificao de clones mutantes . Nesta tcnica, as bactrias so plaqueadas em meio completo, no-seletivo, de forma a se obter colnias isoladas, as quais ocupam posies definidas no meio semi-slido. Esta placa pressionada sobre um pedao de veludo esterilizado ao qual ficaro aderidas as clulas bacterianas de cada posio. Em seguida o veludo pressionado sobre um meio seletivo, por exemplo, um meio seletivo contendo antibitico. Aps um dia de incubao compara-se o posicionamento das colnias nas duas placas. Se uma colnia cresceu na placa de meio completo e no cresceu na placa de meio seletivo, podemos inferir que a colnia que ocupava aquela posio, na placa original, era um mutante resistente ao antibitico presente no meio de cultura.
Agentes mutagnicos
Agentes qumicos: anlogos de base
Radiaes: raios-X, luz ultra-violeta Transposons So sequncias de DNA capazes de se movimentar de uma regio para outra num genoma.
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Ao
Substitui T, mas pareia com G Substitui A, mas pareia com C Desamina A e C Reage com C Metilao de G, que passa a parear com T Ligao cruzada das fitas de DNA, a regio cortada deleo pela DNA polimerase Inserem-se entre nucleotdeos Formao de dmeros de pirimidina Formao de radicais livres que quebram o DNA
Resultado
Troca de AT por GC Troca de AT por GC
Troca de AT por GC Troca de GC por AT Troca de GC por AT Troca de GC por AT Mutao pontual e
Radiao Ultravioleta
Radiao ionizante (ex. raios X)
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RADIAO ULTRA-VIOLETA
1. A exposio luz ultravioleta leva as timinas adjacentes(vizinhas) a fazerem ligaes
3. A
DNA-polimerase
preenche
lacuna
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ESTUDO DIRIGIDO: GENTICA BACTERIANA 1. Definir os termos: GENTICA, GENE, ALELO, CDIGO GENTICO, GENTIPO, FENTIPO. 2. Descreva o processo de replicao do DNA. Qual o papel das principais enzimas envolvidas nesse processo? 3. Por que as fitas de DNA so anti-paralelas explique. 4. Qual processo denominado semi-conservativo. Explique. 5. O que uma forquilha de replicao. Quando ela se forma. 6. Compare as molculas de DNA e RNA. Quais as diferens e semelhanas entre elas? 7. Explique a frase: O sentido da vida do 5 para o 3 8. Descreva o processo de transcrio e sntese protica. 9. Porqu o cdigo gentico e chamado de degenerado? 10. Descreva a tcnica de plaqueamento de rplicas. Qual a funo desse mtodo? 11. Escreva a molcula de DNA e RNA da seguinte protena: METIONINA- LEUCINA - ALANINA - SERINA - -CISTENA - ARGININA
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