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CONTENIDO.
I.
INTRODUCCIN
II.
GENERALIDADES
III.
IV.
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I.
INTRODUCCIN.
ES EVIDENTE
QUE, AL MEJORAR EL NIVEL DE VIDA DE LOS PUEBLOS, SE HA
INCREMENTADO LA APARICION DE TOXIINFECCIONES ALIMENTARIAS COMO
CONSECUENCIA DE CAMBIOS EN ALGUNOS HABITOS SOCIOLGICOS COMO, POR EJEMPLO:
-
MUESTREO
ELECCIN DE TCNICA ANALTICA
INTERPRETACIN DE LOS RESULTADOS ANALTICOS
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57
II. GENERALIDADES
1. CONTROL MICROBIOLGICO DE LOS ALIMENTOS.
En la actualidad se tiene necesidad de asegurar la calidad de los alimentos y se considera
que los aspectos mas importantes son dos, la salud publica y la economa. La microbiologa
sanitaria juega un papel muy importante en estos aspectos donde se describen las tcnicas
mas comnmente usadas en el anlisis de alimentos, tanto para el recuento como para la
identificacin de grupos microbianos de inters sanitario.
La disponibilidad de alimentos frescos e inocuos es un reclamo universal. Aunque los
factores que determinan la conservacin o la perdida de esa frescura e inocuidad tienen un
carcter universal, cada pas disea, sigue estrategias y enfoques propios para satisfacer esa
demanda. El problema se atiende en funcin de sus recursos humanos y econmicos.
2. MICROORGANISMOS DE INTERES SANITARIO.
Los microorganismos de inters sanitario en los alimentos incluyen, de manera
convencional bacterias, hongos, levaduras,virus, parsitos, microscpicos o sus estados de
huevecillo o larvario y ciertas algas microscpicas. Se encuentran involucrados en dos
reas fundamentales de la microbiologa sanitaria. Como causa de deterioro de los
alimentos y como agentes etiolgicos de enfermedades asociadas a su consumo. Deben
considerarse adems, en menor escala, su participacin en la generacin controlada de
cambios sensoriales deseables y el empleo directo o indirecto en la preservacin de su
frescura e inocuidad. Estos dos ltimos efectos se asocian principalmente a la actividad de
bacterias lcticas.
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Citrobacter, Enterobacter, Escherichia, Erwinia, Klebsiella, Hafnia. Uso comn como indicadores de
antecedentes sanitarios en los alimentos. Frecuentes en alimentos crudos. Algunas cepas entero patgenas. .
Proteus, Serratia,, Bacterias saprofitas comunes en el ambiente, se aislan de una diversidad de alimentos.
Salmonella, Shigella, Transmisibles por el agua y alimentos, son causa frecuente de brotes de ETAs.
Yersinia. Una especie asociada con el consumo de alimentos, psicrtrofa.
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Mucor
Neurospora sitophila
Penicillium
Rhizopus
Levaduras
Candida
Debaromyces
Kluveromyces
Pichia
Rhodotorula
Saccharomyces
Torulopsis
Zygosaccharomyces
3.4 Virus.
Amplio grupo de agentes infecciosos muy heterogneo. Son causa de enfermedades infecciosas transmisibles
por agua y alimentos.
3.5 Parsitos.
Son organismos unicelulares (protozoarios) o multicelulares (helmintos). Los adultos de este ultimo grupo no
son microorganismos, sus dimensiones varias desde unos mm hasta varios metros. Se incluyen en la
microbiologa sanitaria porque son transmitidos por los alimentos, sus formas infectantes son muy pequeas y
porque los medios para prevenir su acceso a los alimentos e inactivarlos, pueden ser igualmente efectivos a
los aplicados para controlar las bacterias entero patgenas.
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PROCEDIMIENTO:
1. Preparar diluciones de la muestra de acuerdo a lo indicado para alimentos o agua.
2. Inocular 1 ml de cada dilucin decimal en cada uno de los tres tubos que contengan Caldo lactosado (para
agua) o Caldo Lauril sulfato de sodio (para alimentos).
3. Incubar a 35 +- 2 C durante 24 a 48 horas. Los tubos que muestren gas en cualquier cantidad a las 24
horas, se pasan a la siguiente maniobra; los negativos se incuban 24 horas mas, hasta un mximo total de 51
horas.
4. Tranferir una asada de cada tubo positivo a otro que contenga el caldo verde brillante bilis al 2%. Tomar
una asada retirndola en sentido perpendicular al nivel del liquido de manera que se forme un menisco bien
definido. Seleccionar los tubos positivos que habrn de confirmarse de acuerdo con los siguientes
lineamientos:
a) La dilucin mayor que muestre los tres tubos positivos y las dos siguientes
b) Si ninguna dilucin contiene 3 tubos positivos, seleccionar las tres ultimas diluciones que muestran tubos
positivos.
c) Si todos los tubos inoculados resultan positivos, seleccionar las tres diluciones mayores. Si todos estos
tubos son confirmados en la continuacin de la prueba, reportar mas de la cifra correspondiente
d) Si los tubos positivos no encuadran dentro de las posibilidades anteriores, revisar las condiciones de
operacin.
5. Incubar los tubos de Caldo verde brillante bilis al 2% o Caldo EC inoculados 24 y 48 horas a 35 +- 2 C y
observar la produccin de gas, lo que confirmara la presencia de coliformes en ese tubo
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6. La cuenta de coliformes por gramo o ml de muestra se obtiene localizando en la tabla del NMP
correspondiente (segn el numero de tubos y volmenes de muestra inoculados), la combinacin de tubos
positivos obtenidos ya continuacin la cifra buscada (ver tablas).
7. Multiplicar la cifra anterior por 10, 100, etc si las diluciones utilizadas para el calculo son respectivamente:
10 2, 10 3 y 10 4 , 10 3, 10 4 y 10 5, etc.
8. Reportar numero mas probable de organismos coliformes por gramo o ml de muestra. Si los volmenes
inoculados son: 10, 1 y o.i ml sin diluir, como es el caso del agua, notar que el NMP estar dado por 100 ml
de muestra.
ESCANEAR TABLAS. PAGS: 281-283
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- Medios de cultivo : Agar mtodos estndar (cat. 1020), Agar nutritivo (cat.1022) o Agar extracto glucosa y
tripticaseina (cat. 1013).
PROCEDIMIENTO:
1. A partir de la serie de diluciones decimales y por duplicado, depositar con pipeta estril, 1 ml de cada
dilucin en otras tantas placas de Petri estriles de 90 mm .
2. Agregar a cada placa unos 15 ml de PCA (Agar para cuenta estndar) previamente licuado y atemperado a
47 C.
Considerar lo siguiente:
El tiempo transcurrido entre el momento de depositar las distintas diluciones en las placas y verter sobre ellas
el medio de cultivo no debe ser superior a 10 minutos. Del mismo modo no se superaran los 20 minutos desde
que se prepara la primera dilucin en la serie de diluciones decimales, hasta que se vierte el agar en la ultima
placa.
3. Mezclar perfectamente el medio e inoculo sobre la mesa de trabajo, haciendo movimientos circulares con la
placa, a favor y en contra del sentido de las gujas del reloj y en forma de cruz, evitando al mismo tiempo que
el medio impregne la tapa. Dejar solidificar el agar en las placas sobre una superficie horizontal.
4. Cuando se ha solidificado perfectamente el agar, se invierten las placas y se introducen en la estufa,
evitando que se apilen en exceso y que entren en contacto con sus paredes. Incubar a 35 +- 2 C 24 a 48 horas.
5. Transcurrido el tiempo de incubacin se cuentan las colonias en aquellas placas que muestren entre 30 y
300 colonias aisladas. Marcar las colonias contadas para evitar contarlas de nuevo.
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Bomba de vaci
Pipetas graduadas de 1 o 2 ml estriles
Pinzas estriles
Membranas estriles de poro 0.45 micras
Solucin amortiguadora estril
Medio de cultivo.- Agar ENDO (cat. 1009 y 1237), Agar Green M (cat. 1090), Agar
metodos estandar (cat. 1020), Agar extracto glucosa y tripticaseina (cat. 1013)
RECOMENDACIONES:
- Preparar y esterilizar el material necesario para la tcnica
- Verificar el funcionamiento optimo del equipo de filtracin
PROCEDIMIENTO:
1. Instalar el equipo en condiciones de esterilidad
2. Utilizando pinzas estriles, colocar una membrana estril (cuadriculado hacia arriba) sobre el portafiltro
poroso.
3. Cuidadosamente colocar el embudo sobre el receptculo y asegrelo en su lugar con las pinzas
4. adicionar la muestra al embudo con vacio parcial. Con el filtro aun en su lugar, enjuagar el embudo
mediante la filtracin de 3 porciones de 20 a30 ml de solucin amortiguadora estril.
5. Una vez terminado el enjuague y que el proceso de filtracin ha concluido, quitar el embudo y despus el
filtro con las pinzas estriles y colocarla sobre el medio de eleccin, evitando la formacin de burbujas entre
el agar y la membrana.
6. Colocar un control negativo de 100 ml de solucin amortiguadora estril cada 10 muestras para eliminar
una posible contaminacin cruzada o buffer contaminado.
7. Incubar las placas y el control bajo las mismas condiciones segn las especificaciones del medio en uso.
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COMPUESTO CROMOGENO--SUSTRATO
LIBERAN
AL MEDIO
CROMGENO
Enzimas caractersticas
COLONIAS DE
DIFERENTE COLOR
MEDIOS FLUOROGENICOS. (DIBIFLUOR)
USO: Para deteccin rpida de Escherichia coli mediante fluorescencia, demostrando con esto la presencia la
enzima caracterstica para utilizar el MUG (metilumbeliferil glucoronido).
PRINCIPIO: Dentro de la familia Enterobacteriaceae, E. coli posee junto algunas especies de Salmonella y
Shigella , la enzima B-D-glucoronidasa, que tiene la facultad de romper el sustrato 4-metil-umbeliferil B-Dglucoronido (MUG). Esta sustancia incorporada al medio de cultivo, libera como producto final $-metil
umbeliferona, por accin de la enzima. Este producto tienen la propiedad de emitir fluorescencia azul/verde
cuando se ilumina con luz ultravioleta a 366 nm.
Aprovechando esta caracterstica se utilizan medios de cultivo a los que se ha incorporado el sustrato MUG,
con la ventaja de poder realizar una prueba rpida para la investigacin de E.coli.
Tcnica en medio liquido.
1. Se preparan tres series de tres tubos cada una, cada tubo con 10 ml de Caldo lauril sulfato de sodio con
MUG (cat: 1307 o Caldo EC con MUG (cat. 1308) y campana de Durham.
2. A cada uno de los tres tubos de la primera serie se le aade 1 ml de la dilucin del alimento 1:10
3. A cada uno de los tres tubos de la segunda serie se le aade 1 ml de la dilucin del alimento 1:100
5. A cada de los tres tubos de la tercera serie se le aade 1 ml de la dilucin del alimento 1:1000
6. Incubar las tres series de tubos a 37 C durante 24 horas.
7. Lectura:
- Si se ha producido gas en la campana de Durham por fermentacin de la lactosa
- Si se produce fluorescencia azul/verde por prsencia de la enzima B-D-glucoronidasa
- Si la reaccin de indol es positiva al aadir el reactivo de kovacs.
8. Deben coincidir: la aparicin de gas en la campana de Durham, la fluorescencia azul/verde al observar los
tubos con la luz ultravioleta y la presencia de indol.
9. Para obtener el numero total de E. coli por gramo o mililitro, se recurre a la tabla del numero mas probable
(NMP).
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coliformes totales por el vire del medio a color verde azul. E. coli produce la enzima B-D-glucuronidasa,
que actua sobre el sustrato $-metilumbeliferil-B-glucoronido (MUG), formando 4-metilumbeliferona que se
caracteriza por ser fluorescente al iluminarse con una lmpara de luz UV a 366 nm y finalmente para
confirmar la presencia de E. coli se realiza la prueba de indol.
PROCEDIMIENTO:
1. Tomar la muestra de agua en el frasco hasta la marca de 100 ml
2. Agregar el reactivo (frasco con medio de cultivo) a la muestra
3. Agitar hasta completa disolucin e integracin del polvo (queda ligeramente amarillo)
4. Incubar a 35 +- 2 C durante 18 a 24 horas.
5. Interpretacin de resultados:
- Ausencia de coliformes si el medio no presenta cambio en el color o es amarillo
- Presencia de coliformes totales si se detecta un cambio de color verde azul
- Presencia de coliformes fecales , E. coli se determina al iluminar el cultivo con luz U.V.
366 nm, si hay fluorescencia la prueba es positiva. Para confirmar se realiza la deteccin de
la produccin de indol, al agregar unas gotas del reactivo de Kovacs a la muestra. Es
positiva si se forma un anillo rojo cereza en la superficie.
NOTA.- En la investigacin de cepas patgenas de Escherichia coli hay que tener en cuenta que las cepas
entero hemorrgicas (ECEH) no dan fluorescencia cuando se investigan por una tcnica MUG, debido a que
no poseen la enzima B-D-glucoronidasa.
DBC-E.coli
Deteccin de Bacterias Contaminantes
Prueba rpida para determinar la
Presencia - Ausencia de E.coli y Coliformes Totales
en muestras de agua.
Fcil de usar.
Resultados en 18 hrs.
Confiabilidad del 99 %.
Detecta desde 1 UFC por 100ml.
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Compuesto cromognico
Reaccin colorida
El producto es aplicable para la determinacin cuantitativa por la tcnica del nmero ms probable
(NMP).
PRUEBA CUANTITATIVA
Nmero ms probable (NMP):
Se recomienda consultar las normas siguientes para la aplicacin del producto segn sus necesidades:
NOM -042-SSA1-1993. Bienes y servicios. Hielo potable y hielo purificado. Especificaciones necesarias.
NOM-112-SSA1-1994. Bienes y servicios. Determinacin de bacterias coliformes. Tcnica del nmero ms
probable.
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MODO DE EMPLEO:
1. Tomar la muestra de agua en el frasco hasta la marca de 100ml.
Utilizar frasco con tiosulfato de sodio (Dibico catlogo 1614) para agua potable y sin tiosulfato
(catlogo 1613 ) para otras muestras de agua.
2. Vaciar DBC E. coli en polvo en el frasco con la muestra.
3. Agitar hasta completa disolucin e integracin del polvo (ligeramente amarillo).
Incubar a 35 2 C durante 18 a 24 h.
INTERPRETACION DE RESULTADOS:
Despus del periodo de incubacin, examinar si no existe cambio de color en el medio.
Ausencia de coliformes si el medio no presenta cambio en el color o es amarillo.
Confirmacin: de E.coli esta se realiza mediante la deteccin de la produccin de indol, al agregar unas
gotas del reactivo de Kovacs a la muestra. Si es positiva se forma un anillo rojo cereza en la superficie del
medio, si es negativa no se forma el anillo. Algunas cepas de E. coli como la O157:H7 no produce
fluorescencia , por lo que es importante la determinacin de indol .
Muestras y adicin del reactivo
Coliformes fecales, fluorescencia y prueba indol positiva (anillo color rojo en la superficie)
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III.
DE
Definiciones
1.
2.
Dilucin primaria: Es la solucin, suspensin o emulsin obtenida despus de pesar o medir una
cantidad del producto bajo examen y mezclarla con una cantidad de nueve veces en proporcin de
diluyente.
Diluciones decimales adicionales: Las suspensiones o soluciones obtenidas al mezclar un
determinado volumen de la dilucin primaria con un volumen de nueve veces un diluyente y que por
repeticin de esta operacin con cada dilucin as preparada, se obtiene la serie de diluciones
decimales adecuadas para la inoculacin de medios de cultivo.
Reactivos y materiales
Reactivos
1. Solucin de hidrxido de sodio 1.0 N
2. Solucin reguladora de fosfatos pH=7.2, distribuir en porciones de 99, 90 y 9 ml segn se requiera..
3. Agua peptonada pH=7 0.1
Materiales
1.
2.
3.
4.
5.
Pipetas bacteriolgicas para distribuir 10 y 1 ml (si es necesario de 1 y 2 ml), con tapn de algodn
Frascos de vidrio de 250 ml con tapn de rosca
tubos de 16 x 150 mm con tapn de rosca.
Utensilios esterilizados para la obtencin de muestras: cuchillos, pinzas, tijeras, cucharas, esptulas,
etc.
El material de vidrio puede sustituirse por material desechable
Aparatos e instrumentos
1.
2.
3.
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4.
5.
6.
PROCEDIMIENTO.
Preparacin de la dilucin primaria
Muestra liquidas
Homognea o fcilmente homogenizable
por medios mecnicos (agitacin, etc.)
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Mezclar cuidadosamente
57
La seleccin de las diluciones que se vayan a preparar o a inocular, dependen del numero esperado
de microorganismos en la muestra. En ausencia de informacin, trabajar con las diluciones de la 1 a la 6.
Utilizar pipetas diferentes para cada dilucin inoculando simultneamente las cajas de Petri
Si la pipeta es terminal y se transfiere un volumen de liquido equivalente a su capacidad total, escurrir
aplicando la punta de la pipeta una sola vez en un rea de la caja Patri sin liquido
Mientras se afora el liquido de la pipeta, la punta de esta debe apoyarse en interior del cuello del frasco y
Mantenerla en posicin vertical
1. Para la tcnica del NMP utilizar 3 tubos donde sea posible demostrar el
microorganismo en 10 ml de la dilucin mas alta.
2.
Para la tcnica de cuenta en placa, considerar aquellas en las que se puedan contar de 25 a 250
colonias en un mnimo de 1 a 3 diluciones en el metodo de cuenta de bacterias aerobias en placa. En
el caso de otros grupos microbianos, considerar el numero especificado de colonias en la NOM
correspondiente.
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Materiales
1.
Pipetas bacteriolgicas para distribuir 10 y 1 ml (si es necesario de 1 y 2 ml), con tapn de algodn.
Puede utilizarse pipetas graduadas en volmenes iguales a una dcima de su volumen total.
2. Cajas Petri
3. Frascos de vidrio de 250 ml con tapn de rosca
4. Tubos de 16 x 150 mm con tapn de rosca
5. Utensilios esterilizables para la obtencin de muestras: pinzas, tijeras, cucharas, esptulas, etc.
Todo el material e instrumentos que tengan contacto con las muestras bajo estudio, deben esterilizarse
mediante: horno, durante 2 h de 170 a 175 C o por 1 h a 180 C o autoclave, durante 15 minutos como
mnimo a 121 1 C.
Aparatos e instrumentos
1. Horno para esterilizar que alcance una temperatura mnima de 170 C
2. Incubadora con termostato que pueda ser mantenido a 251 C provista con termmetro calibrado
3. Autoclave que alcance una temperatura mnima de 121 1 C
4. Bao de agua con control de temperatura y circulacin mecnica, provista con termmetro calibrado
con divisiones de 0.1 C y que mantenga la temperatura a 45 1 C.
5. Contador de colonias de campo oscuro, con luz adecuada, placa de cristal cuadriculada y lente
amplificador
6. Registrador mecnico o electrnico
7. Microscopio ptico
8. Potencimetro con una escala mnima de 0.1 unidades de pH a 25 C
Preparacin de la muestra.
La preparacin de la muestra debe ser de acuerdo a lo establecido a NOM-110-SSA1-1994. Preparacin y
dilucin de muestras de alimentos para su anlisis microbiolgico.
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PROCEDIMIENTO
Preparar la muestra de acuerdo a lo establecido en la NOM-110-SSA1-1994
Mezclar cuidadosamente el medio con 6 movimientos de derecha a izquierda, 6 en sentido de las manecillas
Del reloj,6 en el sentido contrario y 6 de atrs para adelante, sobre una superficie lisa.
Dejar solidificar.
Preparar una caja control con 15 ml del medio PDA para verificar la esterilidad
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Expresin de resultados
Calculo del mtodo
Considerar la cuenta de placas con 10 y 150 colonias como las adecuadas para el informe.
Multiplicar por el inverso de la dilucin , tomando en consideracin los criterios de la NOM-092-SSA1-1994.
Mtodo para la cuenta de bacterias aerobias en placa.
Informar
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Reactivos y Materiales
Reactivos
1. Los reactivos deben ser grado analtico y cuando se indique agua debe entenderse como agua
destilada.
2. Soluciones diluyentes:
- Solucin reguladora de fosfatos pH= 7.2
- Agua peptonada
3. Medios de cultivo: Agar de bilis y rojo violeta (Agar rojo violeta bilis lactosa (RVBA)
Materiales
1.
Pipetas bacteriolgicas para distribuir 10 y 1ml (si es necesario de 11 y 2 ml), con tapn de algodn.
Pueden utilizarse pipetas graduadas en volmenes iguales a una dcima de su volumen total.
2. Frascos de vidrio de 250 ml con tapn de rosca
3. Tubos de 16 x 150 mm con tapn de rosca
4. Utensilios esterilizables para la obtencin de muestras; cuchillos, pinzas, tijeras, cucharas, esptulas,
etc.
5. Cajas Petri
6. Todo el materiale instrumentos
7. que tengan contacto con las muestras bajo estudio, deben esterilizarse mediante: horno, durante 2 h
de 170 a 175 C por 1 h a 180 C o autoclave, durante 15 minutos como mnimo a 121 1 C.
El material de vidrio puede sustituirse por material desechable que cumpla con las especificaciones deseadas.
Aparatos e instrumentos
1.
2.
3.
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Preparacin de la muestra
La preparacin de la muestra debe ser de acuerdo a lo establecido en la NOM-110-ssa1-1994 Preparacin y
dilucin de muestras de alimentos para su anlisis microbiolgico.
PROCEDIMIENTO
Colocar en cajas Petri por duplicado 1 ml de la muestra liquida directa
o de la dilucin primaria con una pipeta estril
Repetir el procedimiento tantas veces como diluciones decimales se requiera sembrar, utilizando una pipeta
estril para cada dilucin
Preparar una caja control con 15 ml del medio para verificar la esterilidad
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Seleccionar las placas que contengan entre 15 y 150 colonias. Las colonias tpicas son de color rojo oscuro,
Generalmente rodeadas de una halo de precipitacin debido a las sales biliares, el cual es de color rojo claro o
rosa. La morfologa colonial es semejante a lentes biconvexos con un dimetro de 0.5 a 2.0 mm
EXPRESIN DE RESULTADOS
Calculo del mtodo
Separar las placas que contienen entre 15 y 150 colonias caractersticas en dos diluciones consecutivas
Contar las colonias presente. Calcular el numero de coliformes por ml o por g del producto. Multiplicando el
numero de colonias por el inverso de la dilucin, tomando en cuenta los criterios de la NOM-092-SSA1-1994
INFORME DE LA PRUEBA
Informar UFC/g o ml en placa de agar rojo violeta bilis, incubados a 35 2 C durante 24 2 h
En caso de emplear diluciones y no observar crecimiento, informar utilizando como referencia la dilucin mas
baja utilizada, por ejemplo dilucin 10 -1
En caso de no obtener crecimiento en la muestra sin diluir informa no desarrollo de coliformes por ml.
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Reactivos y materiales
Reactivos.
1. Soluciones diluyentes:
- Solucin reguladora de fosfatos (solucin concentrada)
- Agua peptonada
2. Medios de cultivo :
a) Caldo lactosado ( medio de enriquecimiento para agua potable y hielo)
b) Caldo lauril sulfato triptosa (medio de enriquecimiento selectivo)
c) Caldo lactosa bilis verde brillante (Caldo verde brillante bilis al 2%) medio de
confirmacin.
d) Caldo de soya y tripticaseina
En caso del anlisis de agua potable y hielo puede utilizarse Caldo lactosado o caldo lauril sulfato triptosa
(caldo lauril sulfato de sodio) con prpura de bromocresol (concentracin 0.01 g/l de medio), como
alternativa al uso de campanas de fermentacin. Los tubos positivos se manifiestan por el vire del indicador a
color amarillo.
Materiales.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
Aparatos e instrumentos.
1.
2.
3.
4.
5.
Preparacin de la muestra.
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Las muestras deben prepararse y diluirse, siempre que sea posible, de acuerdo a la NOM-110-SSA1-1994.
PROCEDIMIENTO
Para agua potable y hielo
Prueba presuntiva
Inoculacin
Agitar la muestra
Transferir volmenes de 10 ml de muestra a cada uno de los 5 tubos con 20 ml de caldo lactosado de mayor
Concentracin y 1.0 ml y 0.1 ml de muestra a cada uno de los tubos de las series de 5 respectivamente con
10 ml de caldo lactosado de concentracin sencilla o caldo lauril triptosa con prpura de bromocresol.
De cada tubo que muestre gas, tomar una asada y sembrar en un numero igual de tubos
Con medio de confirmacin.
Prueba confirmativa
De cada tubo que muestre gas, tomar una asada y sembrar en un numero igual de tubos
Con medio Caldo verde brillante bilis al 2%
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Para alimentos
Preparar diluciones
Prueba presuntiva
Inoculacin
Tomar 3 tubos de medio de enriquecimiento de mayor concentracin. Transferir a cada tubo 10 ml
De la muestra si es liquida o 10 ml de la dilucin primaria inicial, en el caso de hoyitos productos
Tomar 3 tubos de concentracin sencilla del medio selectivo de enriquecimiento. Transferir a cada uno de
Estos tubos 1 ml de la muestra si es liquida o 1ml de la dilucin primaria en el caso de otros productos
Prueba confirmativa
De cada tubo con formacin de gas, tomar una asada y sembrar en un numero igual de tubos
Con medio de Caldo verde brillante bilis al 2%
Incubar 24 2h a 35 0.5 C
Si la formacin de gas no se observa prolongar la incubacin 24 h (48 2 h)
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incubadora con termostato que evite variaciones mayores de 1.0 C, provista con termmetro
calibrado
Contador de colonias de campo oscuro, con luz adecuada, placa de cristal cuadriculada y lente
amplificador
Registrador mecnico o electrnico
Microscopio ptico
Bao de agua con o sin circulacin mecnica, provista con termmetro calibrado con divisiones de
hasta 1.0 C y que mantenga la temperatura a 45 1.0 C
Medio de cultivo: Agar triptona extracto de levadura (Agar para cuenta estndar)
Preparacin de la muestra
Para la preparacin de la muestra seguir la NOM-110-SSA1-1994,
Preparacin y dilucin de muestras de alimentos para su anlisis microbiolgico
Procedimiento
Distribuir las cajas de Petri estriles en la mesa de trabajo de manera que la inoculacin; la adicin
de medio de cultivo y homogenizacin. Se puedan realizar cmoda y libremente. Marcar las cajas en sus
tapa con los datos pertinentes previamente a su inoculacin y correr por duplicado.
Despus de inocular las diluciones de las muestras preparadas en las cajas de Petri, agregar de 12 a 15 ml
Del medio preparado, mezclar mediante 6 movimientos de derecha a izquierda, 6 en el sentido de las
Manecillas del reloj, 6 en el sentido contrario y 6 de atrs a adelante, sobre una superficie lisa y horizontal
Hasta lograr una completa incorporacin del inoculo en el medio.
Dejar solidificar
Incluir una caja de Petri sin inoculo por cada lote de medio
Y diluyente preparado como testigo de esterilidad
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El tiempo transcurrido desde el momento en que la muestra se incorpora al diluyente hasta que finalmente
Se adiciona el medio de cultivo a las cajas, no debe exceder de 20 minutos.
temperatura
55 2 C
35 2 C
20 2 C
52C
y tiempo de incubacin.
48 2 h
48 2 h
3 a 5 das
7 a 10 das
Lectura
Seleccionar aquellas placas donde aparezcan entre 25 a 250 UFC
Contar todas las colonias desarrolladas en las placas seleccionadas (excepto las de mohos y levaduras),
Incluyendo las colonias puntiformes
Expresin de resultados
Cuando solo una dilucin esta en el intervalo apropiado, calcular la cuenta promedio
Por gramo o ml de dicha dilucin
Cuando dos diluciones estn en el intervalo apropiado determinar la cuenta promedio dada por cada dilucin,
Antes promediar la cuenta de las dos diluciones para obtener la cuenta en placa por g o por ml.
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Informe de la prueba
Reportar como: Unidades formadoras de colonias ____ UFC/g de bacterias aerobias en placa
En agar extracto de levadura o agar para cuenta estndar, incubadas ____horas a ____ C
1. Medios de preenriquecimientos.
a) Agua peptonada amortiguada
b) Caldo lactosado
2. Medios de enriquecimiento.
a)
b)
c)
d)
e)
f)
3. Medios de aislamiento
a)
b)
c)
d)
e)
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5. Soluciones
a)
b)
c)
d)
e)
f)
g)
h)
i)
6. Antisueros polivantes (O y H)
7. Equipo
a)
b)
c)
d)
e)
f)
g)
h)
Autoclave
Incubadora
Horno
Bao Mara
Balanza granataria
Licuadora
Mecheros
Potenciometro
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PROCEDIMIENTO
Procesamiento de la muestra
Pesar 25 g en 225 ml de Caldo lactosado/ Leche descremada (dulces)
Mezclar
Aislamiento
Agitar suavemente la muestra
57
Incubar 18 a 24 h a 35 C
(para muestras altamente contaminadas
incubar a 42C / 18 a 24 h)
Incubar 24 2h a 35 C
57
57
12. Aparatos
t) Horno para esterilizar que alcance 180C
u) Autoclave con termmetro
v) Bao de agua con regulador de temperatura de 35 0.5C
w) Bao de agua con regulador de temperatura de 45 0.5C
x) Balanza con capacidad no mayor de 2, 500 g
y) Incubadora a 35 1C
PROCEDIMIENTO
Procesamiento de la muestra (NOM 110)
Pesar 10 g o ml + 90 ml de diluyente
11 g o ml + 99 ml de diluyente
Inocular por superficie 0.1 ml de cada dilucin en placas de Agar Baird Parker
Distribuir el inoculo sobre la superficie del agar con varillas estriles de vidrio en ngulo
recto.
Utilizar una para cada dilucin
Mantener las placas sin invertir hasta que el inoculo sea absorbido por el agar
Cuando las placas tengan menos de 15 colonias tpicas tambin pueden ser utilizadas y al
informe se debe agregar la nota de valor estimado
Las colonias tpicas son negras, circulares, brillantes, convexas, lisas, de dimetro de 1 a 2
mm y muestran una zona opaca y un halo claro alrededor de la colonia
Seleccionar las colonias de acuerdo con el siguiente cuadro para realizar las pruebas de
coagulasa y termonucleasa
57
Sembrar cada una en tubos con 0.5 ml de BHI. Incubar 24 h a 35C. Sembrar en la misma
forma cepas testigo de S. aureus y S. epidermidis
Pasar con pipeta Pasteur estril 0.3 ml de cada cultivo a otro tubo. Conservar para la,prueba
de Termonucleasa. El resto del cultivo de usa para la prueba de Coagulasa
PRUEBA DE COAGULASA
Agregar a los 0.2 ml del cultivo + 0.2 ml plasma de conejo (diluido v/v con solucin salina
estril)
PRUEBA DE TERMONUCLEASA
Calentar 15 minutos 0.3 ml de cultivo en BHI en bao de agua hirviendo
57
Pasar 1 gota de cada cultivo por medio de pipeta Pasteur al Agar DNasa con azul de
toluidina.
En un portaobjeto limpio o caja de Petri de 60 x 15 mm agregar 3 ml del medio fundido,
dejar solidificar. Cuando el agar solidifique, hacer orificios con la punta de una pipeta
Pasteur. Conservar en refrigeracin para evitar la deshidratacin
Pasar 1 gota de cada cultivo con pipeta Pasteur a un orificio del medio. Incluir testigo
Si las pruebas confirmativas resultan negativas en todas las colonias probadas, informar:
0 UFC/g en muestras directas
-
57
Reactivos
Los reactivos deben ser grado analtico
cido actico 5 N
cido Clorhdrico 1 M
cido sulfanilico (cristales)
Alfa-naftilamina
Alfa-naftol 5% en etanol absoluto
Etanol absoluto
Granalla de zinc
Hidrxido de sodio 1 M
Lactamato de glicil-glicina (anhdrido de glicina)
Regulador de fosfatos glicerinado con pH 9.0 +- 0.2
Sangre de carnero desfibrinada
Solucin al 3% de peroxido de hidrgeno
Sueros comerciales para tipifacion de Listeria spp
Sulfato de cadmio al 20%
Zinc pulverizado
Reactivos para tincin de Gram
Alcohol acetona
Cristal violeta
Solucin de yodo
Safranina
Reactivos para la determinacin de nitritos
A: Alfa-naftilamina
cido actico 5N
B: cido sulfanilico
cido actico 5N
C: Alfa naftol
cido actico 5N
Solucin de sulfato de cadmio al 20%
Medios de cultivo
-Caldo de soya y tripticaseina
- Caldo de enriquecimiento para Listeria monocytogenes
- Medio de cloruro de litio Feniletanol moxolactam (LMP)
- Medio Oxford (OXA)
- Agar de soya y tripticaseina con 0.6 % de extracto de levadura (ASTEL)
- Agar sangre de carnero
- Caldo nitrato
- Medios para la prueba de movilidad: SIM, MTM
- Caldo prpura para fermentacin de carbohidratos
PROCEDIMIENTO
Procedimiento de enriquecimiento
57
Identificacin
Utilizar cepas de referencia positivas y negativas
57
57
Medios de cultivo:
-
Soluciones y Reactivos:
-
Procedimiento.
Tomar la muestra
Preparar la muestra
(para moluscos bivalvos)
Desconchar de 10 a 12 piezas grandes
57
Incubar 12 a 16 h , 35 a 37C
Revisar crecimiento
Para realizar la pruebas bioqumicas se puede inocular
A los agares gelatina (GA) y gelatina sal (GS) en el segundo dia.
Incubar 18 a 24 h, 35 a 37 C
b) Caldo Triptosa al 3% de NaCl (T1N1)
c) Prueba de oxidasa
A partir de cultivos puros de Agar de soya y tripticaseina
(2% de NaCl)
Colocar un circulo de papel filtro en una caja de Petri
Y humedecerlo con algunas gotas de reactivo para oxidasa.
Con un palillo de madera sacar un poco del cultivo en la placa y tocar el papel
Humedecido
57
Mesofilicos aerobios
NOM-034-SSA1-1993
BIENES Y SERVICIOS.
PRODUCTOS DE CARNE
MOLIDA Y CARNE MOLIDA
MOLDEADA. ENVASADAS.
ESPECIFICACIONES
SANITARIAS
Pag. 67
Staphilococcus aureus
1000 UFC/ g
Salmonella spp.
En 25 g ausente
PRODUCTO
NOM-213-SSA1-2002
PRODUCTOS CARNICOS
PROCESADOS.
ESPECIFICACIONES
SANITARIAS.
Pag. 50
MESOFILICOS
COLIFORMES
AEROBIOS
FECALES
(UFC/g)
(NMP/g)
Ver Catalogo (1020) (1170,1307,
1159, 1308)
Salmonella spp
en 25 g
(1036,1183,1024
1026,1065,1076)
Cocidos
10,000 en planta
<3
60,000 en punto de venta
Ausente
Crudos
N.A.
N.A.
Ausente
Curados
N.A.
<3
Ausente
Marinados o
Salmuera
N.A.
<3
Ausente
Fritos
N.A.
N.A.
N.A.
N.A. = No aplica
57
NOM-036-SSA1-1993
BIENES Y SERVICIOS.
HELADO DE CREMA DE
LECHE O CREMA VEGETAL,
SORBETES Y BASES O
MEZCLAS PARA HELADOS.
ESPECIFICACIONES
SANITARIAS.
Pag. 80
Mesoflicos aerobios
Coliformes totales
Salmonella spp.
En 25 g ausente
Coliformes totales
Salmonella spp.
En 25 g ausente
Mohos y levaduras
50 UFC/g
Vibrio cholerae
En 50 g Ausente
Listeria monocytogenes
En 25 g Ausente
57
NOM-147-SSA1-1996
BIENES Y SERVICIOS.
CEREALES Y SUS
PRODUCTOS. HARINAS DE
CEREALES, SMOLAS O
SEMOLINAS. ALIMENTOS Y
BASE DE CEREALES,
SEMILLAS COMESTIBLES,
HARINAS SMOLAS Y
SEMOLINAS O SUS MEZCLAS.
PRODUCTOS DE
PURIFICACIN.
DISPOSICIONES Y
ESPECIFICACIONES
SANITARIAS.
Pag. 9,10,11,18,19
Coliformes totales
Mohos
300 UFC/g
Coliformes totales
Mohos y
levaduras
20 UFC/g
20 UFC/g
Pan dulce
Mesoflicos aerobios
Coliformes totales
Mohos y
levaduras
50 UFC/g
50 UFC/g
Staphylococcus aureus
57
Galletas
NOM-147-SSA1-1996
BIENES Y SERVICIOS.
CEREALES Y SUS
PRODUCTOS. HARINAS DE
CEREALES, SMOLAS O
SEMOLINAS. ALIMENTOS Y
BASE DE CEREALES,
SEMILLAS COMESTIBLES,
HARINAS SMOLAS Y
SEMOLINAS O SUS MEZCLAS.
PRODUCTOS DE
PURIFICACIN.
DISPOSICIONES Y
ESPECIFICACIONES
SANITARIAS.
Pag. 9,10,11,18,19
Mesoflicos aerobios
Coliformes totales
Mohos
Levaduras
20 UFC/g
20 UFC/g
Coliformes totales
Mohos
Levaduras
50 UFC/g
50 UFC/g
Coliformes totales
Mohos
Levaduras
50 UFC/g
50 UFC/g
Salmonella spp.
En 25 g ausente
57
NOM-147-SSA1-1996
BIENES Y SERVICIOS.
CEREALES Y SUS
PRODUCTOS. HARINAS DE
CEREALES, SMOLAS O
SEMOLINAS. ALIMENTOS Y
BASE DE CEREALES,
SEMILLAS COMESTIBLES,
HARINAS SMOLAS Y
SEMOLINAS O SUS MEZCLAS.
PRODUCTOS DE
PURIFICACIN.
DISPOSICIONES Y
ESPECIFICACIONES
SANITARIAS.
Pag. 9,10,11,18,19
Staphylococcus aureus
Escherichia coli
Negativo
Cacao
57
NOM-186-SSA1-1996
BIENES Y SERVICIOS.
CACAO, PRODUCTOS Y
DERIVADOS. I. CACAO. II
CHOCOLATE. III. DERIVADOS.
ESPECIFICACIONES
SANITARIAS. DENOMINACIN
COMERCIAL.
Pag. 11,13,15
Mesoflicos aerobios
Coliformes totales
Mohos
Levaduras
20 UFC/g
20 UFC/g
Salmonella spp.
En 25 g ausente
Salmonella spp.
En 25 g ausente
Derivados
Manteca de cacao
Torta de cacao
Cocoa
Pasta de cacao
Coliformes totales
UFC/g
10
10
10
10
Salmonella ssp
Ausente
Ausente
Ausente
Ausente
NOM-187-
57
SSA1/SCFI-2002
BIENES Y SERVICIOS.
MASA, TORTILLAS,
TOSTADAS Y HARINAS
PREPARADAS PARA SU
ELABORACIN Y
ESTABLECIMIENTOS DONDE
SE PROCESAN.
ESPECIFICACIONES
SANITARIAS.
INFORMACIN COMERCIAL.
METODO DE PRUEBA
Pag. 12,13
Mesofilicos aerobios
Masa
Tortillas
Harinas para preparar
Tortillas de trigo
Harinas de maz nixtamalizado
Para preparar tortillas y tostadas
Harinas integrales para preparar
Tortillas
Mesofilicos aerobios
Negativo
NOM-032-SSA1-1993
BIENES Y SERVICIOS.
PRODUCTOS DE LA PESCA.
MOLUSCOS BIVALVOS EN
CONSERVA.
ESPECIFICACIONES
SANITARIAS.
Pag. 62
Mesoflocos anaerobios
2000
< 30
150
100
500
Negativo
Negativo
Negativo
Termoflicosa aerobios
Termoflicos anaerobios
NOM-129-SSA1-1994
Staphylococcus aureus
57
BIENES Y SERVICIOS.
PRODUCTOS DE LA PESCA:
SECOS-SALADOS,
AHUMADOS, MOLUSCOS,
CEFALOPODOS Y
GASTERPODOS
FRESCOS REFRIGERADOS Y
CONGELADOS.
DISPOSICIONES Y
ESPECIFICACIONES
SANITARIAS.
Pag. 189,190
Salmonella spp.
En 25 g ausente
Coliformes fecales
<230 NMP/ 100ml
Staphylococcus aureus
500 UFC/g
Listeria monocytogenes
Negativo
Clostridium botulinum
Negativo
Agar ASTEL
Agar OXFORD (1097)
Agar LPM
Caldo tripticasa Peptona glucosa
Extracto de levadura adicionado con
Tripsina (TPGYT)
Medio de carne cocida (CMM)
Caldo Tripticasa Peptona glucosa
Extracto de levadura (TPGY)
Agar hgado de ternera Yema de huevo
Agua peptonada alcalina (1216)
Agar TCBS (1130)
57
Mesofilicos aerobios
NOM-042-SSA1-1993
BIENES Y SERVICIOS.
HIELO POTABLE Y HIELO
PURIFICADO.
ESPECIFICACIONES
SANITARIAS.
Pag. 88
Coliformes totales
Coliformes totales
NMP/ 100 ml *
No dtectable
UFC/ 100 ml **
Cero
Negativo
NOM-201-SSA1-2002
BIENES Y SERVICIOS.
AGUA Y HIELO PARA
CONSUMO HUMANO,
ENVASADOS Y AL GRANEL.
ESPECIFICACIONES
SANITARIAS.
Pag. 13,23
Coliformes totales
< 1,1 NMP/ 100 ml *
Para determinacin del NMP se debe aplicar el mtodo establecido en la NOM-112SSA1-1994 y el apndice normativo b de la NOM-145-ssa1-1995.
En el caso de los coliformes totales para el aislamiento se aplica el mtodo
establecido en el apndice normativo B de la NOM-181-SSA1-1994.
57
NOM-114-SSA1-1994
BIENES Y SERVICIOS.
METODO PARA LA
DETERMINACIN DE
SALMONELLA EN
ALIMENTOS.
Pag. 23-32
MEDIOS DE CULTIVO:
Medios de pre-enriquecimiento:
Agua peptonada tamponada (1217)
Caldo lactosado (1038)
Caldo de enriquecimiento:
Caldo selenito cistina (1183)
Caldo tetrationato (1036)
Caldo rappaport vassiliadis (1258)
Caldo de soya y tripticaseina (1042)
Leche descremada
Caldo de soya y tripticaseina estril con sulfito de potasio
Medios de aislamiento:
Agar verde brillante
Agar sulfito de bismuto
Agar XLD
Agar Salmonella y Shigella
Agar entrico de Hektoen
Pruebas bioqumicas:
Agar de hierro y triple azcar (TSI)
Agar de hierro y lisina (LIA)
Agar nutritivo
Medio SIM
Agar citrato de Simmons
Caldo MR-VP
Caldo manitol
Caldo malonato
Caldo urea
Caldo urea rpido
Caldo infusin cerebro y corazn
Diagrama de flujo
Preenriquecimiento
Enriquecimiento
Seleccin
no
fin
Si
Identificacin
TSI (-) LIA(-)
TSI(-) LIA(+)
fin
no
Purificar
McC, HE, XLD
Si
Prueba ureasa
Positivo
si
fin
No
Confirmacin serolgica
NOM-115-SSA1-1994
BIENES Y SERVICIOS.
MEDIOS DE CULTIVO:
Diluyente:
Agua peptonada
Medios de aislamiento y confirmacin:
57
METODO PARA LA
DETERMINACIN DE
STAPHYLOCOCCUS AUREUS
EN ALIMENTOS.
Pag. 154-158
Diagrama de flujo
Depositar 0.1 ml en Agar de Baird Parker
Distribuir el inoculo de cada dilucin en el Agar Baird Parker
Dejar absorber
Incubar 45 a 48 hrs a 35 C
Seleccionar placas entre 15 y 150 colonias tpicas de S. Aureus
Seleccionar colonias para pruebas de Coagulasa y Termonucleasa
Como prueba confirmativa
Listeria monocytogenes
NOM-143-SSA1-1995
BIENES Y SERVICIOS.
METODO DE PRUEBA
MICROBIOLOGICO PARA
ALIMENTOS.
DETERMINACIN DE
LISTERIA MONOCYTOGENES.
Pag. 280-285
En 25 g de muestra Ausente
MEDIOS DE CULTIVO:
Medios de cultivo:
Caldo de soya y tripticaseina con 0.6% de extracto de levadura
Caldo de enriquecimiento (EB) pH= 7.3
Medio de cloruro de litio feniletanol moxolactam (LMP)
Medio Oxford
Medio base Oxford (OXA)
Agar de soya y tripticaseina con 0.6% de extracto de levadura (ASTEL)
Agar gelosa sangre de carnero
Caldo nitratos
Medios para prueba de movilidad:
Medio SIM
Medio MTM
Caldo prpura fermentacin de Carbohidratos
Diagrama de flujo
25 ml o 25g en 225 ml de medio de enriquecimiento (EB)
incubar 48 h a 30 C
57
Aislamiento
Resembrar en los medios LPM y OXA
Incubar LPM 24 a 48 h a 30C y OXA a 35C
Observar el medio LPM con luz blanca en un angulo de 45
O con lupa a simple vista.
En el medio OXA las colonias negras
Seleccionar 5 o mas colonias del medio OXA o LPM
Pasar al medio ASTEL, incubar 24h a 35 C
Identificacin
Realizar prueba de movilidad en fresco
Prueba de catalasa
Tincion de Gram
Prueba de hemolisis
Prueba de reduccin de nitratos
Prueba de movilidad en agar
Prueba de utilizacin de carbohidratos
Prueba de CAMP
57
MEDIOS DE CULTIVO:
NOM-111-SSA1-1994
BIENES Y SERVICIOS.
METODO PARA LA CUENTA
DE MOHOS Y LEVADURAS.
Pag. 134-136
Diagrama de flujo
Colocar 1ml de muestra en cajas Petri por duplicado
De cada dilucin efectuada
Adicionar 15 a 20 ml de ADP acidificado (a 45C)
Mezclar cuidadosamente, dejar solidificar
Tener una placa control para verificar esterilidad
Incubar a 25C durante 3,4,5 das
Reportar resultados
MEDIOS DE CULTIVO:
NOM-112-SSA1-1994
Diluyente:
- Agua peptonada
BIENES Y SERVICIOS.
DETERMINACIN DE
BACTERIAS COLIFORMES.
TCNICA DEL NUMERO MAS
PROBABLE.
Pag. 139-146
Medios de cultivo:
- Caldo lactosado
- Caldo lauril sulfato triptosa
- Clado lauril triptosa con prpura de bromocresol
- Caldo lactosa bilis verde brillante
Diagrama de flujo
57
Prueba confirmativa
Tomar una asada de cada tubo con gas, sembrar
En Caldo lactosa lauril verde brillante
Incubar por 48 h
Establecer anlisis de resultados
Para alimentos
Prueba presuntiva
Tomar 10 ml de muestra (lquida) o 10 ml de dilucin primaria
Tomar tres tubos de concentracin sencilla del medio
Selectivo de enriquecimiento y transferir 1ml
Incubar a 35 2 C , Observar a las 24 hrs
Formacin de gas , incubar hasta 48 hrs
Prueba confirmativa
De cada tubo con gas, tomar una asada
Y sembrar en el medio de confirmacin
Incubar a 35 2C por 24 hrs, si no se observa gas
Incubar hasta 48 hrs
Lectura de resultados: Buscar el NMP en los cuadros correspondientes
MEDIOS DE CULTIVO:
NOM-113-SSA1-1994
BIENES Y SERVICIOS.
METODO PARA LA CUENTA
DE MICROORGANISMOS
COLIFORMES TOTALES EN
57
PLACA.
Pag. 149 -150
NOM-027-SSA1-1993
BIENES Y SERVICIOS.
PRODUCTOS DE LA PESCA.
PESCADOS FRESCOS
REFRIGERADOS Y
CONGELADOS.
ESPECIFICACIONES
SANITARIAS.
Pag. 4,5
*Mesofilicos aerobios
* Coliformes fecales
400 NMP/g
* Staphylococcus aureus
1000 UFC/g
Salmonella spp
Mesofilicos aerobios
Negativo
NOM-028-SSA1-1993
BIENES Y SERVICIOS.
Mesoflocos anaerobios
Negativo
57
PRODUCTOS DE LA PESCA.
PESCADO EN CONSERVA.
ESPECIFICACIONES
SANITARIAS.
Pag. 12
NOM-029-SSA1-1993
BIENES Y SERVICIOS.
PRODUCTOS DE LA PESCA.
CRUSTCEOS FRESCOS
REFRIGERADOS Y
CONGELADOS.
ESPECIFICACIONES
SANITARIAS.
Pag. 4,5
Termoflicosa aerobios
Negativo
Negativo
Termoflicos anaerobios
*Mesofilicos aerobios
* Coliformes fecales
400 NMP/g
* Staphylococcus aureus
1000 UFC/g
Salmonella spp
Mesofilicos aerobios
Negativo
NOM-030-SSA1-1993
Mesoflocos anaerobios
BIENES Y SERVICIOS.
Negativo
PRODUCTOS DE LA PESCA.
CRUSTECEOS EN CONSERVA. Termoflicosa aerobios
ESPECIFICACIONES
Negativo
SANITARIAS.
Pag.
Termoflicos anaerobios
57
Negativo
NOM-031-SSA1-1993
BIENES Y SERVICIOS.
PRODUCTOS DE LA PESCA.
MOLUSCOS BIVALVOS
FRESCOS-REFRIGERADOS Y
CONGELADOS.
ESPECIFICACIONES
SANITARIAS.
Pag. 40
*Mesofilicos aerobios
* Coliformes fecales
400 NMP/g
* Staphylococcus aureus
1000 UFC/g
Salmonella spp
NOM-032-SSA1-1993
BIENES Y SERVICIOS.
PRODUCTOS DE LA PESCA.
MOLUSCOS BIVALVOS EN
CONSERVA.
ESPECIFICACIONES SANITARIAS.
Pag. 62
VER PAGINA 8
CONSERVAS
57
NOM-129-SSA1-1993
BIENES Y SERVICIOS.
PRODUCTOS DE LA PESCA.
VER PAGINA 8
SECOS-SALADOS,
AHUMADOS,
MOLUSCOS,
CEFALOPODOS
Y
GASTERPODOS
FRESCOSREFRIGERADOS
Y
CONGELADOS.
CONSERVAS
ESPECIFICACIONES SANITARIAS.
Pag. 189,190
Coliformes totales
NOM-035-SSA1-1993
BIENES Y SERVICIOS.
QUESOS Y SUERO.
ESPECIFICACIONES SANITARIAS.
Pag. 74
Staphylococcus aureus
1000 UFC/ g
Mohos y levaduras
500 UFC/ g
Salmonella spp
En 25 g Ausente
Vibrio cholerae
En 50 g Ausente
NOM-091-SSA1-1994
BIENES Y SERVICIOS.
LECHE PASTEURIZADA DE VACA.
ESPECIFICACIONES SANITARIAS.
Pag. 40
Listeria monocytogenes
En 25 g Ausente
Agar ASTEL
Agar OXFORD (1097)
Agar LPM
Mesofilicos aerobios
* Salmonella spps
En 25 g Ausente
57
En 25 ml Ausente
* Listeria monocytogenes
Agar ASTEL
Agar OXFORD (1097)
Agar LPM
En 25 ml Ausente
Frescos
NOM-121-SSA1-1994
BIENES Y SERVICIOS.
QUESOS: FRESCOS, MADURADOS Y
PROCESADOS
ESPECIFICACIONES SANITARIAS.
Pag. 170
Coliformes fecales
(NMP/g)
100
Madurados
Procesados
50
-------
100
< 100
Mohos y levaduras
UFC/ g
500
500
100
Salmonella ssp
En 25 g
Ausente
Ausente
Ausente
Ausente
Agar ASTEL
Agar OXFORD (1097)
Agar LPM
ESPECIFICACIONES MICROBIOLOGICAS
NOM-001-ECOL-1996
QUE ESTABLECE LOS LIMITES
MXIMOS PERMISIBLES DE
CONTAMINANTESEN LAS
DESCARGAS DE AGUAS
RESIDUALES EN AGUAS Y BIENES
57
NACIONALES
VER NOM-112-SSA1-1994. Determinacin de bacterias coliformes. Tcnica del Nmero
ms probable. Pag 14 de esta gua.
TIPO DE REUSO
Servicios al publico
Con contacto directo
Servicios al publico
Con contacto indirecto
u ocasional
<_ 1
1000 *
<_ 5
NOM-CCA-016-ECOL/1993
ESPECIFICACIONES MICROBIOLOGICAS
NOM-041-SSA1-1993
BIENES Y SERVICIOS.
PURIFICADA ENVASADA.
ESPECIFICACIONES SANITARIAS
LIMITE MXIMO
Mesoflicos aerobios
UFC / ml
Coliformes totales *
NMP / 100 ml
No detectable
Coliformes totales **
UFC / 100 ml
Cero
Negativo
57
ESPECIFICACIONES MICROBIOLOGICAS
PROY-NMX-AA-042-SCFI-2005
CALIDAD DEL AGUA
DETERMINACIN DEL NUMERO
MAS PROBABLE (NMP) DE
COLIFORMES TOTALES,
COLIFORMES FECALES
(TERMOTOLERANTES) Y Escherichia
coli PRESUNTIVA.
Pruebas confirmativas
Resembrar tubos positivos en un medio de confirmacin
(Caldo bilis lactosa verde brillante, 1048 o Caldo EC, 1159)
Incubar a 37 C 48 h
Detectar la produccin de gas e indol
57
NMX-AA-102-SCFI 2005
CALIDAD DEL AGUA
DETECCION Y ENUMERACION DE
ORGANISMOS COLIFORMES
TERMOTOLERANTES Y Escherichia
coli PRESUNTIVA METODO DE
FILTRACIN EN MEMBRANA
57
ESPECIFICACIONES MICROBIOLOGICAS
NOM-127-SSA1-1994
SALUD AMBIENTAL.
LIMITE MXIMO
AGUA PARA USO Y CONSUMO
NMP / 100 ml Caldo lauril sulfato de sodio(1170,1307)
HUMANO. LIMITES PERMISIBLES DE Coliformes totales *
CALIDAD Y TRATAMIENTOS A QUE
Ausencia o no detectables Caldo EC (1159,1308)
DEBE SOMETERSE. EL AGUA PARA
SU POTABILIZACION.
Coliformes totales **
UFC / 100 ml
Agar ENDO (1009)
Pag. 50 de la norma
Ausencia o no detectables
Escherichia coli o coliformes fecales u
Organismos termotolerantes **
Ausencia o no detectables
NOM-180-SSA1-1998
SALUD AMBIENTAL.
AGUA PARA USO Y CONSUMO
HUMANO. EQUIPOS DE
TRATAMIENTO DE TIPO
DOMESTICO. REQUISITOS
SANITARIOS.
Pag. 39 a 45
APNDICE INFORMATIVO A
DETERMINACIN DE ORGANISMOS COLIFORMES TOTALES. METODO
DEL SUSTRATO CROMOGENICO (Aprobado por el Committee of standard
methods,1992)
Aplicaciones: Se recomienda para el anlisis de muestras de agua potable, agua purificada
o agua limpia proveniente de cualquier fuente.
La prueba del sustrato cromognico no se usa para verificar siembras presuntivas de
coliformes o colonias de filtracin con membrana por que el sustrato puede ser
sobrecargado con el inoculo pesado de B-D-galactosidasa dbil producido por no
coliformes,causando resultados falsos positivos.
APNDICE INFORMATIVO B
DETERMINACIN DE BACTERIAS COLIFORMES TOTALES Y COLIFORMES
FECALES METODO DE FILTRACIN DE MEMBRANA.
57
NOM-201-SSA1-1998
PRODUCTOS Y SERVICIOS.
AGUA Y HIELO PARA CONSUMO
HUMANO, ENVASADOS Y AL
GRANEL. ESPECIFICACIONES
SANITARIAS.
Pag. 13
NOM-110-SSA1-1998
PRODUCTOS Y SERVICIOS.
PREPARACIN Y DILUCIN DE
MUESTRAS DE ALIMENTOS PARA
SU ANLISIS MICROBIOLOGICO
Pag. 130
Coliformes totales *
57
NOM-130-SSA1-1995
BIENES Y SERVICIOS.
ALIMENTOS ENVASADOS EN
RECIPIENTES DE CIERRE
HERMTICO Y SOMETIDOS A
TRATAMIENTO TERMICO.
DISPOSICIONES Y
ESPECIFICACIONES SANITARIAS
Pag. 205
57
Coliformes totales
Hongos y levaduras
<10 UFC/g
Mesoflcos anaerobios
Negativo
Termoflicos aerobios
Negativo
Termoflicos anaerobios
Negativo
Mesofilicos aerobios
Salmonella spps
En 25 g Ausente
Staphylococcus aureus
500 UFC / g
57
Coliformes totales
20 NMP / g
Escherichia coli
Negativo
Mesoflicos anaerobios
Negativo
Termoflicos aerobias
Negativo
Termoflicos anaerobios
Negativo
Mohos y levaduras
Negativo
Los alimentos deshidratados envasados:
Mesoflicos aerobios
Salmonella spps
En 25 g Ausente
Coliformes totales
20 NMP / g
Salmonella spps
En 25 g Ausente
57
Coliformes totales
20 NMP / g
Productos y
derivados
NOM-159-SSA1-1996
BIENES Y SERVICIOS. HUEVO, SUS
PRODUCTOS Y DERIVADOS.
DISPOSICIONES Y
ESPECIFICACIONES SANITARIAS.
Huevo, Huevo
fresco refrigerado
Huevo Liquido
Refrigerado o
congelado
Huevo, Yema y
clara congelados
Huevo, Yema y
Clara deshidratados
Huevo, Yema y
Clara Pasteurizados
y Envasados
Aspticamente
Mesoflicos
aerobios
UFC/g (1)
Salmonella
En 25g (2)
Coliformes
totales
UFC/g(3)
S. aureus UFC/g
(4)
100 000
Ausente
50
<100
15 000
Ausente
10
<100
15 000
Ausente
10
<100
25 000
Ausente
10
<100
1000
Ausente
10
<100
Medios de cultivo:
1. Agar Para Mtodos Estndar (1020).
3. Caldo Selenito Cistina (1183), Caldo Tetrationato (1036 y 1255), Caldo RV
(Rappaport y Vassiliadis) (1258), Agar Para Salmonella y Shigella (1024), Agar
Sulfito de Bismuto (1026), Agar Verde Brillante (1028), Agar XLD (1065), Agar
Desoxicolato y Citrato (1076), Agar Entrico de Hecktoen (1114).
4. Agar de Bilis y Rojo Violeta (1005 y 1300).
5. Agar Baird Parker (1066).
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