NORMA TCNICA NTC

COLOMBIANA 235-1


2002-04-30




GRASAS Y ACEITES ANIMALES Y VEGETALES.
DETERMINACIN DE LA MATERIA INSAPONIFICABLE.
MTODO DE EXTRACCIN CON TER ETLICO









E: ANIMAL AND VEGETABLE FATS AND OIL. DETERMINATION
OF INSAPONIFIABLE MATTER. METHOD USING DIETHYL
ETHER EXTRACTION.


CORRESPONDENCIA: esta norma es una adopcin
equivalente (EQV) de la ISO 3596:2000

DESCRIPTORES: determinacin de la materia
insaponificable por extraccin con
ter etlico; grasas; alimentacin;
grasa vegetal; grasa animal; aceite
vegetal; aceite animal; grasas y
aceites.












I.C.S.: 67.200.10

Editada por el Instituto Colombiano de Normas Tcnicas y Certificacin (ICONTEC)
Apartado 14237 Bogot, D.C. - Tel. 6078888 - Fax 2221435


Prohibida su reproduccin Editada 2002-05-14









PRLOGO


El Instituto Colombiano de Normas Tcnicas y Certificacin, ICONTEC, es el organismo
nacional de normalizacin, segn el Decreto 2269 de 1993.

ICONTEC es una entidad de carcter privado, sin nimo de lucro, cuya Misin es fundamental
para brindar soporte y desarrollo al productor y proteccin al consumidor. Colabora con el
sector gubernamental y apoya al sector privado del pas, para lograr ventajas competitivas en
los mercados interno y externo.

La representacin de todos los sectores involucrados en el proceso de Normalizacin Tcnica
est garantizada por los Comits Tcnicos y el perodo de Consulta Pblica, este ltimo
caracterizado por la participacin del pblico en general.

La NTC 235-1 fue ratificada por el Consejo Directivo del 2002-04-30.

Esta norma est sujeta a ser actualizada permanentemente con el objeto de que responda en
todo momento a las necesidades y exigencias actuales.

A continuacin se relacionan las empresas que colaboraron en el estudio de esta norma a
travs de su participacin en el Comit Tcnico 311501 Aceites y grasas vegetales y animales
comestibles.

ACEGRASAS S.A.
CARULLA VIVERO S.A.
CENIPALMA
COMESTIBLES RICOS S.A.
COMPAA NACIONAL DE LEVADURAS
FBRICA DE GRASAS Y PRODUCTOS
QUMICOS S.A.
SOCIEDAD INDUSTRIAL DE GRASAS Y
ACEITES
UNILEVER ANDINA S.A.

Adems de las anteriores, en Consulta Pblica el Proyecto se puso a consideracin de las
siguientes empresas:

ASOCIACIN NACIONAL DE INDUSTRIALES
ANDI
COLOMBINA S.A.
COMPAA NACIONAL DE CHOCOLATES
S.A.
COMPAA NACIONAL DE LEVADURAS S.A.
CORPORACIN COLOMBIA INTERNACIONAL
DISA S.A.
FABRICA DE ACEITES Y MARGARINAS DEL
MAGDALENA
FABRICAS UNIDAS DE ACEITES Y GRASAS
VEGETALES
FEDERACIN NACIONAL DE CULTIVADORES
DE PALMA
FIRMENICH S.A.
GRASAS S.A.
INDUSTRIAS ALIMENTICIAS NOEL - ZEN
S.A..
INDUSTRIAS DEL MAZ S.A.
INSTITUTO NACIONAL DE VIGILANCIA DE
MEDICAMENTOS Y ALIMENTOS INVIMA
IVONNE BERNIER LABORATORIO LTDA.
IBLAB
LLOREDA GRASAS S.A
MERCADEO DE ALIMENTOS DE
COLOMBIA S.A.
MINISTERIO DE AGRICULTURA
MINISTERIO DE DESARROLLO ECONMICO
MINISTERIO DE SALUD
NESTL DE COLOMBIA
NULAB LTDA
PRODUCTOS ALIMENTICIOS CRONCH
S.A.







SANTANDEREANA DE ACEITES
SGS COLOMBIA S.A.
SUPERINTENDENCIA DE INDUSTRIA Y
COMERCIO
UNIVERSIDAD DEL VALLE
UNIVERSIDAD INCCA DE COLOMBIA
UNIVERSIDAD JORGE TADEO LOZANO
UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA



ICONTEC cuenta con un Centro de Informacin que pone a disposicin de los interesados
normas internacionales, regionales y nacionales.


DIRECCIN DE NORMALIZACIN

NORMA TCNICA COLOMBIANA NTC 235-1

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GRASAS Y ACEITES ANIMALES Y VEGETALES.
DETERMINACIN DE LA MATERIA INSAPONIFICABLE.
MTODO CON TER ETLICO PARA LA EXTRACCIN








1. OBJETO

La presente norma especifica un mtodo que usa la extraccin con ter etlico para la
determinacin del contenido de materia insaponificable en las grasas y aceites animales y
vegetales.

Este mtodo se aplica a todas las grasas y aceites pero no a las ceras, y adems, da
resultados aproximados en algunas grasas y aceites que tienen un contenido alto de materia
insaponificable, por ejemplo grasas derivadas de animales marinos.

El mtodo indicado en la NTC 235-2 puede ser utilizado cuando las condiciones climticas o
regulaciones no permiten el uso del ter etlico.


2. REFERENCIAS NORMATIVAS

La siguiente norma contiene disposiciones que, mediante la referencia dentro de este texto,
constituyen la integridad del mismo. En el momento de la publicacin eran vlidas las ediciones
indicadas. Todas las normas estn sujetas a actualizacin; los participantes, mediante
acuerdos basados en esta norma, deben investigar la posibilidad de aplicar la ltima versin de
la norma mencionada a continuacin:

NTC 5033: 2002, Grasas y aceites animales y vegetales. Preparacin de la muestra para
ensayo.


3. DEFINICIONES

Para los propsitos de la presente norma se aplica la siguiente definicin:

3.1 Materia insaponificable: todas las sustancias presentes en el producto, que, despus de
saponificacin de ste por hidrxido de potasio y extraccin por ter etlico, no son voltiles
bajo las condiciones especificadas.


Nota. El material insaponificable incluye lpidos de origen natural, como esteroles, hidrocarburos y alcoholes
superiores, alcoholes alifticos y terpnicos, al igual que cualquier material extrao extrado por el solvente y no voltil a
103 C (por ejemplo: aceites minerales) que pueden estar presentes.

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4. PRINCIPIO

Saponificacin de la grasa o aceite por ebullicin bajo reflujo con una solucin de hidrxido de
potasio etanlica. Extraccin de la materia insaponificable de la solucin de jabn con ter
etlico. Evaporacin del solvente y pesaje del residuo despus de secado.


5. REACTIVOS

Todos los reactivos deben ser de grado analtico reconocido. El agua usada debe ser agua
destilada o desionizada o agua de pureza al menos equivalente.

5.1 ter etlico, recin destilado libre de perxidos y residuos.

5.2 Acetona.

5.3 Hidrxido de potasio, solucin etanlica, c(KOH) 1 mol/l. Se disuelven 60 g de
hidrxido de potasio en 50 ml de agua y se diluye hasta 1 000 ml con etanol al 95 % (v/v). La
solucin debe ser incolora o de un amarillo pajizo.

5.4 Hidrxido de potasio, solucin acuosa, c(KOH) 0,5 mol/l.

5.5 Fenolftalena, solucin de 10 g/l en 95 % de etanol (v/v).


6. EQUIPO

El usual de laboratorio y en particular el siguiente:

6.1 Baln de 250 ml, con boca esmerilada.

6.2 Condensador de reflujo con junta esmerilada para unin a los balones (vase el numeral 6.1).

6.3 Embudos de separacin con capacidad de 500 ml, con llaves y tapones de
politetrafluoroetileno (PTF).

6.4 Bao de agua hirviendo.

6.5 Horno con capacidad para mantenerse a 103 C 2 C.


7. MUESTREO

El muestreo no es parte del mtodo especificado en la presente norma. En la NTC 217 se
presenta un mtodo de muestreo recomendado.

Es importante que el laboratorio reciba una muestra representativa y que no haya sido daada
o alterada durante el almacenamiento o transporte.


8. PREPARACIN DE LA MUESTRA DE ENSAYO

La muestra de ensayo se prepara de acuerdo con la NTC 5033.


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9. PROCEDIMIENTO

9.1 PORCIN DE ENSAYO

Se pesan aproximadamente 5 g de la muestra de ensayo (vase el numeral 8), con
aproximacin a 0,01 g, en un baln de 250 ml (vase el numeral 6.1).

9.2 SAPONIFICACIN

Se agregan 50 ml de solucin de hidrxido de potasio (vase el numeral 5.3) y algunas perlas de
vidrio. Se conecta el condensador de reflujo (vase el numeral 6.2) al baln y se deja el contenido
en ebullicin lenta durante 1 h. Al terminar este perodo, se suspende el calentamiento, se agregan
100 ml de agua destilada por la parte superior del condensador y se agita.

Si la extraccin de la materia insaponificable se lleva a cabo para determinar los tocoferoles, es
necesario adicionar pirogalol y la extraccin debe realizarse rpidamente (Es decir menos de 30 min).

9.3 EXTRACCIN DE LA MATERIA INSAPONIFICABLE

Despus del enfriamiento, se transfiere la solucin a un embudo de separacin de 500 ml
(vase el numeral 6.3). Se enjuagan el baln y las perlas varias veces con ter etlico (vase el
numeral 5.1) usando 100 ml en total, y se vierten estos enjuagues en el embudo de separacin.
Se coloca el tapn, se agita vigorosamente durante 1 min y se libera presin peridicamente
invirtiendo el embudo y abriendo la llave con cuidado.

Se deja reposar hasta que haya separacin completa de las dos fases, y luego se separa la
capa inferior (capa acuosa) en un segundo embudo de separacin.

Si se forma una emulsin, sta se destruye agregando pequeas cantidades de etanol o
hidrxido de potasio concentrado, o solucin de cloruro de sodio.

Se extrae la solucin jabonosa etanlica acuosa dos veces ms, cada una de ellas en la misma
forma con 100 ml de ter etlico. Se recogen los tres extractos de ter etlico en el embudo de
separacin, que contiene 40 ml de agua.

9.4 LAVADO DEL EXTRACTO ETREO

Suavemente se rota el embudo de separacin que contiene los extractos combinados y los
40 ml de agua.

PRECAUCIN. Una mezcla muy fuerte en este estado puede provocar emulsiones.

Se deja que las capas se separen completamente y se decanta la capa menos acuosa. Se
lavan la solucin etrea dos veces ms con porciones de 40 ml de agua, se agita
vigorosamente despus de cada lavada y se descarta la capa acuosa despus de la
separacin. Se decanta cada solucin de lavado, dejando 2 ml, luego se gira el embudo
alrededor de su eje. Se espera algunos minutos para recolectar la capa acuosa restante. Al
decantar, se cierra la llave cuando la solucin etrea alcanza el dimetro interior de la misma.

Sucesivamente, se lava la solucin etrea con 40 ml de solucin de hidrxido de potasio
(vase el numeral 5.4), 40 ml de agua, otra vez con la solucin de hidrxido de potasio y luego
dos veces ms con 40 ml de agua.


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Se contina lavando con agua hasta que los enjuagues no presenta color rosado al agregar
una gota de solucin de fenolftalena (vase el numeral 5.5).

9.5 EVAPORACIN DEL SOLVENTE

Se transfiere cuantitativamente la solucin de ter etlico, poco a poco si es necesario, a
travs del embudo de separacin, hacia un baln de 250 ml secado previamente a 103 C 2 C
en el horno (vase el numeral 6.5), enfriado y pesado con aproximacin a 0,1 mg. Se evapora
el solvente en un bao de agua hirviendo (vase el numeral 6.4).

Se adicionan 5 ml de acetona (vase el numeral 5.2) y se evapora completamente el solvente
con una corriente de aire colocada en la parte superior del baln, oblicuamente, mientras se
gira el baln en un bao con agua.

9.6 SECADO DEL RESIDUO Y DETERMINACIN

9.6.1 Se seca el residuo durante 15 min en el horno (vase el numeral 6.5) a 103 C 2 C,
con el baln en posicin casi horizontal. Se deja enfriar en un desecador y se pesa con
aproximacin a 0,1 mg

Se repite el secado por perodos sucesivos de 15 min hasta que la prdida de masa entre dos
pesajes sucesivos sea menor de 1,5 mg. Si no se obtiene masa constante despus de tres
perodos de secado, la materia insaponificable probablemente est contaminada y entonces, se
debe repetir la determinacin.


Nota. Si hay disponibilidad se puede usar un evaporador rotatorio, particularmente si la materia insaponificable va a
ser examinada ms tarde.


9.6.2 Si se considera necesaria una correccin para cidos grasos libres, despus del pesaje
del residuo, se disuelve ste en 4 ml de ter etlico (vase el numeral 5.1) y luego se agregan
20 ml de etanol, previamente neutralizado, hasta obtener un color rosado suave en presencia
de fenolftalena (vase el numeral 5.4) como indicador. Se titula con solucin etanlica
volumtrica estndar de hidrxido de potasio, c(KOH)=0,1 mol/l hasta obtener el mismo color
final. La masa de los cidos grasos libres se calcula como cido olico y la masa del residuo se
corrige de acuerdo con esto (vase el numeral 10).

9.7 NMERO DE DETERMINACIONES

Se llevan a cabo dos determinaciones en la misma muestra de ensayo.

9.8 ENSAYO EN BLANCO

Se lleva a cabo un ensayo en blanco usando el mismo procedimiento y las mismas cantidades
de todos los reactivos, pero omitiendo la porcin de ensayo. Si el residuo excede 1,5 mg, se
investigan la tcnica y los reactivos.

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10. EXPRESIN DE LOS RESULTADOS

El contenido de materia insaponificable, expresado como un porcentaje en masa de la muestra,
es igual a:


%
) (
0
3 2 1
100
m
m m m



Donde:

m
o
= es la masa, en gramos, de la porcin de ensayo;

m
1
= es la masa, en gramos, del residuo;

m
2
= es la masa, en gramos, del residuo obtenido con el blanco;

m
3
= es la masa, en gramos, de los cidos grasos libres, si los hay (vase el
numeral 9.6.2) y es igual a 0,28 Vc.


Donde:

V = es el volumen, en mililitros, de la solucin etanlica volumtrica estndar
de hidrxido de potasio usada para la titulacin;

c = es la concentracin exacta, en moles por litro, de la solucin etanlica
volumtrica estndar de hidrxido de potasio.


El resultado se considera como la media aritmtica de las dos determinaciones.


11. PRECISIN

El Anexo A contiene los detalles de un ensayo interlaboratorio sobre la precisin del mtodo.
Los valores derivados de este ensayo pueden no ser aplicables a rangos y matrices diferentes
a las que se dan.


12. INFORME DE ENSAYO

En el informe se debe especificar:


- toda la informacin necesaria para completar la identificacin de la muestra;

- el mtodo de acuerdo con el cual se llev a cabo el muestreo, si es conocido;

- el mtodo utilizado;

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- tambin se deben mencionar todos los detalles operativos no especificados en la
presente norma, o considerados como opcionales, junto con los detalles de
cualquier evento que pueda haber influido en los resultados del ensayo.

- el(los) resultado(s) de ensayo obtenidos, o, si la repetibilidad ha sido verificada, el
resultado final obtenido.


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Anexo A (Informativo)

Resultados del ensayo interlaboratorio


A1. Un ensayo internacional colaborativo incluy 51 laboratorios y 16 pases.


- Muestra A. Aceite de soya refinado, blanqueado, desodorizado

- Muestra B. Aceite de soya seco, crudo y desgomado,


Se usa el mtodo con ter etlico.

Los ensayos fueron organizados por la FOSFA International Federation of Oils, Seeds and Fats
Associations Ltd, en junio de 1995, y los resultados obtenidos fueron analizados
estadsticamente de acuerdo con la norma ISO 5725
1
. En la Tabla A1 se registran los datos de
los resultados de la precisin.


Tabla A1. Precisin de los datos

Aceite de soya
A B
Nmero de laboratorios participantes despus de
retirar los anmalos
49 50
Promedio, % (en masa) 0,58 0,69
Desviacin estndar de repetibilidad, sr,% 0,025 0,027
Lmite de repetibilidad, r (2,8 sr),% 0,07 0,08
Coeficiente de variacin de repetibilidad,% 4,3 3,9
Desviacin estndar de reproducibilidad (SR ) 0,22 0,24
Lmite de reproducibilidad, R (2,8 x SR ) 0,62 0,67
Coeficiente de variacin de reproducibilidad 37,9 34,7


A2. Otro ensayo internacional colaborativo incluy 43 laboratorios y 17 pases, en Julio de 1989,
en aceite crudo de pescado japons.

Los ensayos fueron organizados por la FOSFA International Federation of Oils, Seeds and Fats
Associations Ltd. y los resultados obtenidos fueron analizados estadsticamente de acuerdo
con la norma ISO 5725
1)
. En la Tabla A2 se registran los datos de los resultados de la
precisin.




1)
ISO 5725:1986 (anulada), fue la norma empleada para la determinacin de la precisin de los datos.


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Tabla A2. Precisin de los datos


Aceite de pescado
Nmero de laboratorios participantes despus de
retirar los anmalos
37
Promedio, % (en masa) 0,81
Desviacin estndar de repetibilidad, sr,% 0,02
Lmite de repetibilidad, r (2,8 sr),% 0,06
Coeficiente de variacin de repetibilidad,% 2,46
Desviacin estndar de reproducibilidad (SR ) 0,29
Lmite de reproducibilidad, R (2,8 x SR ) 0,81
Coeficiente de variacin de reproducibilidad 35,8


A3. Un tercer ensayo internacional colaborativo incluy 10m laboratorios. Los ensayos
fueron organizados por la IUPAC entre 1976 y 1997. Losa resultados obtenidos fueron
analizados estadsticamente de acuerdo con la norma ISO 5725
1)
. En la Tabla A3 se registran
los datos de los resultados de la precisin.


Tabla A3. Precisin de los datos


Aceite refinado de
soya
Sebo refinado
Aceite crudo de
colza
Nmero de laboratorios participantes despus de
retirar los anmalos
10 10 10
Promedio, % (en masa) 0,639 0,253 1,432
Desviacin estndar de repetibilidad, sr,% 0,032 0,024 0,068
Lmite de repetibilidad, r (2,8 sr),% 0,089 0,067 0,19
Coeficiente de variacin de repetibilidad,% 5,0 9,3 24,7
Desviacin estndar de reproducibilidad (SR ) 0,140 0,154 0,137
Lmite de reproducibilidad, R (2,8 x SR ) 0,397 0,435 0,389
Coeficiente de variacin de reproducibilidad 22,3 60,9 9,6












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Bibliografa


[1] NTC 217:1996, Grasas y aceites animales y vegetales. Muestreo

[2] ISO 5725:1986, Precision of Test Methods. Determination of Repeatability and
Reproducibility for a Standard Test Method by Interlaboratory Tests.

[3] ISO 18609, Animal and Vegetable Fats and Oils. Determination of Unsaponifiable
Matter. Method Using Hexane Extraction.












NORMA TCNICA COLOMBIANA NTC 235-1

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DOCUMENTO DE REFERENCIA

INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION. Animal and Vegetable Fats and
Oils. Determination of Unsaponiable Matter. Method Using Diethyl Ether Extraction. Geneve:
ISO, 2000, 8 p. (ISO 3596).