CUANTIFICACIN DE AMINOCIDOS TOTALES EN HARINAS RESIDUALES DE LA EXTRACCIN DE ACEITE DE COPERNICIA ALBA MORONG.

Gorostegui, Horacio A.a,b,*, Mufari, Jesica R.b, Orrabalis, Camilo J.a,b, Guzmn, Carlos A.b y Calandri, Edgardo L.b
a b

Universidad Nacional de Formosa. Av. Gob. Gutnisky 3200. Formosa 3600, Argentina ICTA-Fac. Cs. Ex. Fs. y Nat.-UNC, Crdoba, 5016 - Argentina

*Autor a quien dirigir la correspondencia: gorostegui_41@hotmail.com

Resumen La palma blanca o caranday (Copernicia alba Morong) es una especie abundante en la zona este de la provincia de Formosa. La semilla posee cerca de un 20% p/p de aceite que, al separarse mecnicamente, deja una cantidad considerable de residuos de prensado y de pericarpio (cscara), los cuales poseen 7% p/p y 8% p/p de protenas, respectivamente. Estos residuos se molieron y a las harinas obtenidas se las sometieron a hidrlisis cida (HCl 6 M) y alcalina (Ba(OH)2 saturada), de manera sucesiva y en reflujo. Los residuos obtenidos se trataron con etoximetilenmalonato de dietilo en buffer borato (pH=9) por 50 minutos y con calor, a fin de obtener los aminocidos derivatizados. Finalmente, 20 L de cada muestra se inyect en un equipo HPLC (Perkin Elmer 200) con columna de fase reversa (Sorbax C18) y detector UV-visible (280 nm). Tanto el pericarpio como el residuo de prensado presentaron todos los aminocidos, destacndose histidina (5,94% p/p y 7,26% p/p, respectivamente) y valina (4,28% p/p y 5,25% p/p, respectivamente), con valores que superaron a los recomendados por la OMS para estos aminocidos esenciales. El puntaje qumico indic que, tanto para el pericarpio como para el residuo de prensado, metionina y cistena resultaron ser los aminocidos limitantes. Estos resultados posibilitaran el empleo de cscaras y residuos de extraccin como materia prima para elaborar aislados proteicos o bien, en preparaciones alimenticias. Palabras clave: Copernicia alba; aminocidos; pericarpio; residuo de prensado.

Introduccin
La palma caranday, Copernicia alba Morong, es una especie que pertenece a la familia de las palmceas. En la provincia de Formosa habita fundamentalmente en las zonas hmedas y tambin en reas de depresiones o baados de las zonas semiridas. Se lo conoce en la regin de acuerdo a su grado de madurez como palma blanca, colorada o negra, segn el color que presenta su leo. (Snchez et al, 2008). Su fruto es una drupa, negra y ovoide, cuando madura puede alcanzar de 1,5 a 2 cm de longitud, usualmente de una sola semilla, muchas veces fibrosa. Las semillas tambin son ovoides y germinan fcilmente (Dimitri, 1977). Tradicionalmente su estpite ha sido utilizado en construcciones rurales, aunque en la actualidad se han comenzado a producir con l muebles y pisos, aprovechando su calidad, coloreado y veteado particular (Monzn et al, 2008), mientras que sus hojas se destinan a la fabricacin de productos artesanales. Actualmente no existe uso alguno para sus frutos, aunque hay vagas referencias de un

empleo comestible de estos (Ministerio del Ambiente y Desarrollo Sustentable). El contenido de aceite de su semilla se encuentra entre el 15 al 20% y en nuestro grupo hemos logrado extraerlo mediante prensado en fro (Gorostegui et al, 2012), generndose residuos en dicho proceso, con potenciales usos industriales. Por lo antes expuesto, en el presente trabajo nos propusimos determinar el perfil aminoacdico de dichos residuos de extraccin, del aceite de semillas de Copernicia alba Morong a los fines de establecer el valor de las protenas que estos poseen y que permitiran sugerir posibles usos para las tortas residuales.

Materiales y Mtodos
Acondicionamiento del material vegetal Se secaron los frutos en un horno de circulacin forzada, dispuestos sobre bandejas metlicas, en cantidad de 3 kg por bandeja y a temperaturas entre 80 y 100C, durante alrededor de 4 horas. Cada 30 minutos se realiz un pesaje por bandeja hasta alcanzar peso constante. Para la separacin de las semillas se emple un molino de discos marca Braun, modelo U.A. 53, Motor 2 HP, Fuerza Centrfuga Relativa 302 G. Esta accin permiti liberar a las semillas del pericarpio, el cual se separ mediante un tamiz de malla 5. De las semillas se extrajo el aceite, en condiciones de temperatura y humedad controladas, mediante una prensa de tornillo (IBG Monforts Oekotec CA59G), a escala piloto. La obtencin de las harinas, tanto del residuo pericarpiano como del residuo de prensado, se realiz utilizando un molino de martillo marca Fritsch, motor 1,5 HP, Fuerza Centrfuga relativa 636 G, y un tamiz de 0,25 mm. Determinacin del perfil aminoacdico: se emple el procedimiento descripto por Mufari, 2011. Hidrolisis de harinas Hidrlisis cida: se peso 1 g de harina desengrasada en un baln y se adicionaron 50 mL de acido clorhdrico 6 M, se calent a reflujo por 24 hs, en un manto de calentamiento. Mtodo oficial de anlisis de AOAC Internacional, 994.12. Hidrolisis alcalina: se peso 1 g de harina desengrasada en un baln y se adicionaron 50 mL de una solucin saturada de hidrxido de bario, se coloco a reflujo por 8 hs, en un manto de calentamiento (Comai et al, 2007). Una vez concluidas ambas hidrlisis, se dejo enfriar hasta alcanzar la temperatura ambiente, luego se las trasvas a tubos cnicos de centrifuga, y se centrifugaron por 15 minutos a 3000 rpm (1006 G). El sobrenadante se conservo en cmara fra a 5 1 C, hasta el momento de realizar el anlisis por HPLC. Perfil de aminocidos Se determinaron y cuantificaron los aminocidos presentes en la muestras mediante cromatografa liquida de alta resolucin. Para tal fin se utilizo un equipo HPLC Perkin Elmer 200, equipado con un detector UV-visible y una columna Zorbax Eclipse Plus C18 (Agilent Technologies).

Derivatizacin: un volumen conocido de los hidrolizados proteicos se coloco en un tubo eppendorf y se llev a sequedad en una estufa con circulacin de aire forzada (Dalvo) a 40-50 C, aproximadamente por 12 horas. Se resuspendi la muestra con 1 mL de buffer borato 1 M (pH=9) que contiene 0,02% de azida de sodio. Se adicionaron 0,8 L de etoximetilenmalonato de dietilo, se colocaron los tubos eppendorf cerrados en un bao a 50 C por 50 minutos, agitando cada 5 minutos los tubos con un vortex. Los derivados obtenidos N-[2,2- bis (etoxicarbonil) vinil] de los aminocidos, fueron conservados a temperatura ambiente hasta su inyeccin (Alaiz et al,1992). Cromatografa Fueron inyectados 20 L de cada muestra, la resolucin de los derivados de aminocidos se logro usando un sistema de gradiente binario, empleando como fase mvil: (A) buffer acetato de sodio 25 mM (pH=6) y (B) acetonitrilo, con un flujo de 0,9 mL/min a temperatura ambiente. Los derivados fueron detectados a 280 nm. Se empleo el siguiente programa de elucin: 0,5 min equilibrio con A:B (91:9), 1,5 min gradiente lineal a A:B (86:14), 7,5 min elucin con A:B (86:14) (solo en este tiempo se utilizo un flujo de 0,7 mL/min), 8,5 min gradiente lineal a A:B (69:31), 2,5 min elucin con A:B (69:31). Para la siguiente inyeccin la columna se reacondiciono por 4,5 min con un gradiente lineal a A:B (91:9) (Alaiz et al, 1992).

Resultados y discusin
En la tabla N1 se muestran los resultados obtenidos. Se pudo establecer la existencia de 17 diecisiete aminocidos, tanto en el pericarpio como en el residuo de prensado de la Palma Caranday, destacndose histidina, valina, glicina y fenilalanina (resaltados en la tabla). Tabla N 1: Aminocidos en harinas de pericarpio y residuo de prensado (gAA/ 100 g ) Aminocidos c. Asprtico + Asparragina c. Glutmico + Glutamina Serina Histidina Glicina Treonina Arginina Alanina Prolina Tirosina Valina Metionina Cistena Isoleucina Leucina Fenilalanina Lisina Pericarpio 6,58 0,55 5,22 0,93 2,94 2,33 5,94 0,77 4,02 0,80 2,39 0,47 3,07 0,73 3,12 0,56 0,54 0,58 1,31 0,30 4,28 0,03 0,48 0,14 0,95 0,17 0,18 0,04 2,16 0,46 3,74 0,78 2,30 0,51 Res. de Prensado 7,99 0,44 13,97 2,12 6,41 1,84 7,26 0,61 4,01 0,35 2,42 0,26 9,28 0,85 3,87 0,36 2,76 0,59 1,51 0,14 5,25 0,29 0,70 0,17 1,18 0,20 0,42 0,04 2,48 0,22 5,12 0,45 3,35 0,30

Valores expresados como (Media SD) n=6, en base seca.

La hidrlisis cida provoca la descomposicin de asparragina y glutamina en los cidos asprtico y glutmico, respectivamente, mientras que en medio alcalino esa hidrlisis no tiene lugar, permitiendo la determinacin de ambos aminocidos y sus respectivas amidas, por diferencia. En la tabla 2 se presenta el contenido de los cidos asprtico y glutmico, asparragina y glutamina.

Tabla N 2: Contenido de cidos asprtico y glutmico, asparragina y glutamina en harinas de pericarpio y residuo de prensado (gAA/ 100 g) Hidrlisis cida c. c. Asprtico + Glutmico + Asparragina Glutamina Pericarpio 6,58 0,55 5,22 0,93 Hidrlisis alcalina c. Asprtico Diferencia entre hidrlisis Glutamina 2,59 0,99 10,15 2,31

c. Asparragina Glutmico 4,06 0,7

2,52 0,15 2,63 0,06

Residuo de 7,99 0,44 13,97 2,12 1,85 0,03 3,82 0,19 6,14 0,47 Prensado Valores expresados como (Media SD) n=4, en base seca.

En la tabla N 3 se comparan los requerimientos de aminocidos esenciales de las muestras con la protena patrn indicado por la FAO/OMS, para nios de entre 2 y 5 aos, grupo etario ms exigente, se observa que tanto Histidina como Valina superan al patrn, adems podemos decir que Isoleucina y Treonina presentan valores prximos al recomendado por estas organizaciones. Asimismo, los aminocidos limitantes corresponden a los denominados azufrados (Metionina y Cistena), aunque debemos decir que estos superan el 55% del valor recomendado. Tabla N 3: Comparacin entre los requerimientos de aminocidos esenciales y los presentes en las muestras. mg de AA en mg de AA en patrn* pericarpio Histidina Treonina Triptofano Valina Metionina + Cistena Isoleucina Leucina Fenilalanina + Tirosina Lisina mg de AA en residuo Puntaje qumico en pericarpio 342,11 73,53 131,43 56,00 78,57 65,15 65,08 62,07 en residuo 373,68 73,53 142,86 64,00 89,29 74,24 74,60 68,97

19 65 71 34 25 25 11 n/d n/d 35 46 50 25 14 16 28 22 25 66 43 49 63 41 47 58 36 40 *Patrn FAO/OMS para nios de 2-5 aos

Conclusin
Teniendo en cuenta que actualmente las semillas de la palma Caranday, no son aprovechados y que existe la posibilidad de extraer aceites de las mismas, es importante poder utilizar los residuos que se generan, y de acuerdo a estos resultados podramos afirmar que los mismos posibilitaran el empleo de cscaras y residuos de extraccin como materia prima para elaborar aislados proteicos o bien, en preparaciones alimenticias.

Referencias
Alaiz, M.; Navarro, J. L.; Girn J. y Vioque, E. (1992) Amino acid anlisis by highperformance chromatography alter derivatization with dietil ethoxymethylenemalonate. J. of Chromatogr., 591, 181-186. AOAC International. (1999) Official Methods of Analysis of the Association of Official Analysis Chemist. 16th Edition, 5th Revision, Gaithersburg, USA. Comai, S., Bertazzo, A., Bailoni, L., Zancato, M., Costa, C. V. L., Allegri, G. (2007) The content of proteic and nonproteic (free and protein-bound) tryptophan in quinoa and cereal flours, Food Chem.,100, 1350-1355. Dimitri, M. J. (1977). Enciclopedia argentina de agricultura y jardinera. Tomo I. Volumen I. Editorial ACME S.A.C.I. 3ra Edicin. Bs As Argentina. 185 194. Gorostegui, H. A.; Orrabalis, C. J.; Guzmn, C. A. y Calandri, E. L. (2012) .Parmetros fisicoqumicos de frutos, pericarpios y semillas de Copernicia alba Morong, recolectados en la provincia de Formosa, Argentina. Natura Neotropicalis (Revista de la Asociacin de Ciencias Naturales del Litoral y de la Facultad de Humanidades y Ciencias, Universidad Nacional del Litoral). Aceptado ao 2012. Monzn, L.; Camera, R.; Gmez, M. (2008). Dinoderus minutus, taladrillo en Copernicia alba (palma blanca) apeada en la Provincia de Formosa. Resmenes XI jornadas de ciencia y tecnologa. Ao 11. N 11. ISSN 1851 8923. Mufari , Jesica Romina. 2011. Determinacin y cuantificacin de protenas solubles y de aminocidos totales en harinas de Quinoa. FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS U.N.C. Ministerio del Ambiente y Desarrollo Sustentable

http://www.ambiente.gov.ar/archivos/web/PBVyAP/File/A3/PIARFON%20PCHsa/PFNM%20.pdf. Fecha de ltima

consulta: 03/05/2012. Snchez, V.; Bogado, D.; Acosta, R.; Iribarren, R.; Oviedo, R.; Ferreiro, J.; Gon, V. (2008). Evaluacin cuali-cuantitativa de palma caranday (Copernicia alba Morong) en la Provincia de Formosa. Resmenes XI jornadas de ciencia y tecnologa. Ao 11. N 11. ISSN 1851 8923.