3814 - Imunologia Livro

Imunologia
Imunologia
Clia Regina Monte Barardi Sonia Gonalves Carobrez Aguinaldo Roberto Pinto
Florianpolis, 2010.
Governo Federal
Presidente da Repblica Luiz Incio Lula da Silva Ministro de Educao Fernando Haddad Secretrio de Ensino a Distncia Carlos Eduardo Bielschowky Coordenador Nacional da Universidade Aberta do Brasil Celso Costa
Comisso Editorial Viviane Mara Woehl, Alexandre Verzani Nogueira, Milton Muniz
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Laboratrio de Novas Tecnologias - LANTEC/CED Coordenao Geral Andrea Lapa Coordenao Pedaggica Roseli Zen Cerny Material Impresso e Hipermdia
Coordenao Laura Martins Rodrigues, Thiago Rocha Oliveira Adaptao do Projeto Grco Laura Martins Rodrigues, Thiago Rocha Oliveira Diagramao Grasiele Pilatti, Gregrio Bacelar Lameira, Laura Martins Rodrigues Ilustraes Amanda Cristina Woehl, Alexandre dos Santos Oliveira, Cristiane Amaral, Liane Lanzarin, Jean Menezes, Joo Antnio Amante Machado, Talita vila Nunes Reviso gramatical Isabel Maria Barreiros Luclktenberg
Pr-Reitora de Ensino de Graduao Yara Maria Rauh Muller Pr-Reitora de Pesquisa e Extenso Dbora Peres Menezes Pr-Reitora de Ps-Graduao Maria Lcia Camargo Pr-Reitor de Desenvolvimento Humano e Social Luiz Henrique Vieira da Silva Pr-Reitor de Infra-Estrutura Joo Batista Furtuoso Pr-Reitor de Assuntos Estudantis Cludio Jos Amante Centro de Cincias da Educao Wilson Schmidt
Curso de Licenciatura em Cincias Biolgicas na Modalidade a Distncia

Diretora Unidade de Ensino Sonia Gonalves Carobrez Coordenadora de Curso Maria Mrcia Imenes Ishida Coordenadora de Tutoria Zenilda Laurita Bouzon Coordenao Pedaggica LANTEC/CED Coordenao de Ambiente Virtual Alice Cybis Pereira
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Copyright 2010 Universidade Federal de Santa Catarina. Biologia/EaD/ufsc Nenhuma parte deste material poder ser reproduzida, transmitida e gravada sem a prvia autorizao, por escrito, da Universidade Federal de Santa Catarina. S007d SOBRENOME, Nome. Ttulo do livro/Nome e Sobrenome do autor. Florianpolis: Universidade Federal de Santa Catarina, 2009. 007p. ilust. inclui bibliografia. ISBN:07.007.007-7 1.Temtica 2.Temtica - subtema 3.Temtica I.Tema II.Tema CDU 007.07 Catalogao na fonte elaborada na DECTI da Biblioteca Universitria da Universidade Federal de Santa Catarina.
Sumrio
Apresentao........................................................................................ 9 1. Clulas, rgos e tecidos envolvidos na resposta imune..........13

1.1 Clulas da resposta imune........................................................................................15 1.2 rgos linfoides primrios...................................................................................... 21 1.2.1 Timo...................................................................................................................... 21 1.2.2 Medula ssea.......................................................................................................23 1.3 rgos linfoides secundrios................................................................................. 24 1.3.1 Linfonodos........................................................................................................... 24 1.3.2 Bao......................................................................................................................26 1.3.3 Tecidos linfoides associados a mucosas.......................................................... 27 Resumo............................................................................................................................... 29 Referncias........................................................................................................................ 30
2. Resposta imune inata e inamao.............................................33

2.1 Introduo................................................................................................................... 35 2.2 Componentes fsico-qumicos............................................................................... 36 2.3 Componentes humorais.......................................................................................... 37 2.4 Componentes celulares.......................................................................................... 39 2.5 Inamao.................................................................................................................. 39 Resumo............................................................................................................................... 42 Referncias........................................................................................................................ 44
3. Linfcitos B, anticorpos e complemento.....................................47

3.1 Introduo................................................................................................................... 49 3.2 Linfcitos B................................................................................................................. 50 3.2 Estrutura e funo dos anticorpos........................................................................ 53 3.2.1 Estrutura da molcula de imunoglobulina.....................................................54 3.2.2 Importncia da regio varivel da Ig..............................................................56 3.3 Diversidade gentica................................................................................................ 58 3.4 Troca de classe de imunoglobulina....................................................................... 58 3.4.1 Imunoglobulina M (IgM)....................................................................................60 3.4.2 Imunoglobulina D (IgD)..................................................................................... 61 3.4.3 Imunoglobulina G (IgG)..................................................................................... 61 3.4.4 Imunoglobulina A (IgA).....................................................................................62 3.4.5 Imunoglobulina E (IgE)......................................................................................62 3.5 Ativao das protenas do Sistema Complemento........................................... 63 3.5.1 Via clssica...........................................................................................................66 3.5.2 Via das lectinas...................................................................................................68 3.5.3 Via alternativa..................................................................................................... 69 3.5.4 Decincias do complemento.......................................................................... 69 3.5.5 Regulao da cascata de ativao do complemento................................... 71 Resumo............................................................................................................................... 71 Referncias........................................................................................................................ 72
4. Linfcitos T, citocinas e MHC.........................................................75

4.1 Introduo................................................................................................................... 77 4.2 Linfcitos T auxiliadores: CD4+. ............................................................................. 82 4.2.1 Linfcitos TH1.......................................................................................................82 4.2.2 Linfcitos TH2 ......................................................................................................84 4.3 Linfcitos T citotxicos: CD8+................................................................................. 85 4.4 Complexo principal de histocompatibilidade e processamento antignico................................................................................ 86 4.4.1 Estruturao do complexo principal de histocompatibilidade.................... 87 4.4.2 Estrutura das glicoprotenas de classe I do MHC . .........................................88 4.4.3 Estrutura das glicoprotenas de classe II do MHC...........................................88 4.4.4 Como se d a distribuio tecidual dessas glicoprotenas nas clulas?...................................................................89 4.4.5 Funes biolgicas do MHC..............................................................................90 Resumo............................................................................................................................... 93 Referncias........................................................................................................................ 94
5. Soros e vacinas...............................................................................97
5.1 Introduo................................................................................................................... 99 5.2 Imunizao passiva.................................................................................................100 5.3 Imunizao ativa..................................................................................................... 102 5.4 Tipos de vacinas....................................................................................................... 103 5.5 Adjuvantes................................................................................................................ 105 5.6 Vacinas humanas em uso...................................................................................... 106 5.7 Impacto das vacinas............................................................................................... 108 Resumo..............................................................................................................................110 Referncias.......................................................................................................................110
6. Hipersensibilidades e doenas autoimunes.............................113

6.1 Introduo..................................................................................................................115 6.2 Hipersensibilidade do tipo I...................................................................................115 6.3 Hipersensibilidade do tipo II................................................................................. 121 6.4 Reaes de hipersensibilidade do tipo III.......................................................... 124 6.5 Reaes de hipersensibilidade do tipo IV ou tardia........................................ 127 6.6 Doenas autoimunes.............................................................................................. 129 Resumo ........................................................................................................................... 133 Referncias...................................................................................................................... 134
7. HIV/AIDS........................................................................................137
7.1 Como surgiu o HIV? ................................................................................................ 139 7.2 Histrico da descoberta do vrus HIV.................................................................. 140 7.3 Isolamento do vrus da imunodecincia adquirida ou HIV......................... 141 7.4 Caractersticas do vrus HIV................................................................................... 141 7.5 HIV e sistema imune............................................................................................... 143 7.6 Transmisso do HIV................................................................................................. 145 7.7 Janela imunolgica e o perigo da transmisso................................................ 146 7.8 Diagnstico............................................................................................................... 147 7.9 Indivduo portador do vrus HIV e indivduo portador da AIDS................... 148 7.10 Monitoramento dos pacientes HIV+................................................................. 151 7.11 Terapia antirretroviral............................................................................................ 151 Resumo............................................................................................................................. 153 Referncias...................................................................................................................... 154
8. Interaes antgeno-anticorpo...................................................157
8.1 Reaes de hemaglutinao: grupos sanguneos ABO e Rh......................... 159 8.1.1 Sistema ABO....................................................................................................... 159 8.1.2 Sistema Rh.......................................................................................................... 163 8.1.3 Transfuso.......................................................................................................... 165 8.1.4 Reao de hemaglutinao............................................................................ 165 8.1.5 Doena hemoltica do recm-nascido...........................................................166 8.2 Imunouorescncia................................................................................................ 168 8.2.1 Mtodo direto ou em uma nica etapa......................................................... 169 8.2.2 Mtodo Indireto ou em duas etapas............................................................. 169 8.3 Passemos a entender os ensaios imunoenzimticos (ELISA)........................ 171 8.3.1 Mtodo indireto ............................................................................................... 171 8.3.2 Mtodo sanduche........................................................................................... 171 8.3.3 Mtodo competitivo......................................................................................... 172 8.4 Western-Blotting..................................................................................................... 172 8.5 Citometria de uxo................................................................................................. 176 Resumo ........................................................................................................................... 178 Referncias...................................................................................................................... 179
Apresentao
A disciplina de Imunologia tem como objetivo central estudar as bases fundamentais do sistema imune, com enfoque nas principais clulas, rgos e tecidos envolvidos em nossa defesa. Estudaremos o papel de protenas muito importantes em nossa defesa, como os anticorpos, as citocinas, o complemento e os receptores presentes na superfcie das clulas de defesa. Estudaremos as patologias associadas ao sistema imunolgico e o importante papel das vacinas, enfatizando ainda mais a importncia de um sistema imune sadio para ter uma vida sadia. Os mecanismos envolvidos nas reaes imunolgicas (interaes antgenoanticorpo) in vivo e in vitro tambm sero vistos, sendo destacadas as interaes in vitro que auxiliam no diagnstico. Motivao: Por que o estudo da Imunologia importante para o professor de Biologia? Todos ns j sabemos que respostas imunes defeituosas tornam o organismo suscetvel a srias infeces que podem levar morte. Constantemente nos deparamos com uma srie de questionamentos como estes: Por que anticorpos, que deveriam ser nossa principal forma de defesa, nem sempre nos protegem contra as doenas? Por que no conseguimos produzir vacinas contra muitas doenas importantes, como AIDS, malria, herpes, dengue, esquistossomose etc.? Por que montamos resposta imune contra materiais incuos ou montamos respostas imunes inapropriadas (alergias a alimentos, medicamentos, p, tecidos do corpo e outros)? Por que rejeitamos transplantes de rgos?
Por que nosso estado emocional, nossa atividade fsica e nossa alimentao exercem tanta inuncia sobre nossa resposta imune? Pois bem, para algumas, mas no para todas essas perguntas, encontraremos respostas ao estudarmos como funcionam as clulas e os tecidos envolvidos na nossa defesa, e, por essa razo, to importante que o professor de Biologia tenha respostas aos questionamentos dos seus alunos ou saiba explicar por que, para algumas dessas questes, no poderemos dar uma resposta denitiva. Sendo assim, esperamos que os contedos do presente livro lhes sejam muito teis e forneam subsdios para buscar outras respostas a outros questionamentos que certamente iro surgir. Desejamos a todos uma boa viagem ao nosso sistema de defesa.
Clia Regina Monte Barardi Sonia Gonalves Carobrez Aguinaldo Roberto Pinto
C A P T U LO 1
Clulas, rgos e tecidos envolvidos na resposta imune

Aqui comea a nossa viagem atravs do complexo sistema de defesa de nosso organismo, constitudo por clulas, organizado em vrios tecidos e rgos do corpo, alm de distribudo na circulao sangunea e linftica. Esse o trecho inicial de nossa viagem, e o seu aprendizado ser fundamental para que compreendamos os demais captulos que viro a seguir. Tudo ir se imbricar em cada captulo, e muitas vezes voltaremos a falar das clulas, dos tecidos e dos rgos aqui apresentados. Neste captulo conheceremos as clulas envolvidas em nossa defesa, como se formam e se diferenciam e qual o seu papel na nossa defesa. Aprenderemos tambm como importante o armazenamento dessas clulas nos distintos rgos e tecidos linfoides do corpo, enquanto elas no esto circulando atravs do sangue e da linfa. Desejamos que vocs fiquem fascinados por esse mundo da Imunologia e que compreendam que o bom funcionamento desse sistema fundamental para a manuteno de uma vida saudvel, para a aquisio de defesas contra infeces e para a recuperao do organismo em caso de infeces das mais variadas origens.
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1.1 Clulas da resposta imune

Neste primeiro captulo vamos iniciar o estudo sobre as clulas envolvidas em nossa defesa, vamos aprender que todas elas se originam de nica clula que tem mltiplas potencialidades. Essas clulas pluripotentes so chamadas progenitoras ou clulastronco hematopoiticas e so produzidas constantemente e em grandes quantidades na medula ssea. Essas clulas so realmente muito versteis e conhecidas como clulas-tronco pluripotenciais. Elas sero responsveis pela futura formao de todas as clulas sanguneas envolvidas direta ou indiretamente em nossa defesa. Isso inclui at as hemcias (clulas vermelhas do sangue ou eritrcitos) e as plaquetas (importantes na coagulao sangunea e responsveis pela formao dos trombos venosos). A primeira diferenciao dessas clulas-tronco ser na formao de clulas progenitoras denominadas mieloides e de clulas progenitoras denominadas linfoides. Neste captulo estaremos interessados em estudar as clulas que derivam do progenitor mieloide e do progenitor linfoide, e no entraremos em detalhes no estudo dos megacaricitos e dos eritrcitos. Os diferentes tipos de clulas sanguneas e suas linhagens esto resumidos na Figura 1.1. Comecemos pelo precursor mieloide. Os leuccitos polimorfonucleares (PMN) consistem em uma populao de clulas tambm denominadas de granulcitos. O precursor mieloide o responsvel pela formao desses granulcitos e tambm pela formao dos moncitos, dos macrfagos, das clulas dendrticas e dos
Granulcitos
Entende-se por granulcitos todas as clulas sanguneas que possuem grnulos no seu citoplasma e que possuem seu ncleo em formato polimrco, sobre as quais falaremos logo a seguir.
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Imunologia Clulas fagocticas

Clulas fagocticas so aquelas que tm a capacidade de englobar agentes estranhos e degrad-los totalmente ou em pores mais simples que sero subsequentemente reconhecidas pelo sistema imune.
mastcitos, todos eles superimportantes em nossa primeira linha de defesa contra muitos agentes patognicos. Falando um pouquinho de cada uma dessas clulas e comeando pelos macrfagos, vamos aprender que essas clulas constituem uma das principais (mas no nicas) clulas fagocticas do sistema imunolgico, um fenmeno sobre o qual j aprendemos em outras disciplinas e a que
Medula ssea
Clulas tronco hematopoitica pluripotente
Medula ssea
Progenitor linfoide
Progenitor mieloide
Progenitor de granulcitos e macrfagos
Progenitor de megacaricitos e eritrcitos
Megacaricitos
Eritroblastos
Sangue
Granulcitos ou leuccitos polimorfonucleares
Clula B
Clula T
Clula NK
Clulas dendrticas imaturas
Neutr- Eosinlo lo
Precursor Bas- desconhecido Monlo de mastcitos cito
Plaquetas
Eritrcitos (hemcias)
Linfonodos
Tecidos
Clula B
Clula T
Clula NK
Clulas dendrticas maduras
Clulas dendrtica imatura
Mastcito
Macrfago
Clulas efetoras
Plasmcito
Clula T ativada
Clula NK ativada
Figura 1.1 Clulas da resposta imune. (Adaptado de MURPHY et al., 2008, p. 4).
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Macrfagos alveolares do pulmo Clulas de Kuper no fgado Macrfagos residentes nos linfonodos e recirculantes Clulas precursoras na medula ssea
Figura 1.2 Sistema fagocitrio mononuclear. (Adaptado de MALE et al., 2006, p. 5).
chamamos de fagocitose, uma palavra que ser muito constante no curso da Imunologia. Em Clulas microgliais geral, clulas da srie dos macrfagos apresendo crebro tam duas funes principais. Uma funo, como seu prprio nome indica (macro = grandes e fagos = comedoras), ou seja, de engolfar e, com Macrfagos esplnicos o auxlio de todas as enzimas degradadoras em seus grnulos lisossomais, fragmentar os materiais englobados a aminocidos simples, acares e outras substncias para posterior excreo ou reutilizao. Como veremos em captulos Clulas A seguintes, a segunda maior funo dos macrsinoviais fagos englobar agentes estranhos, process-los por desnaturao ou digesto parcial e apresent-los em sua superfcie para clulas envolvidas na resposta imune especfica, que so os linfcitos T especficos, sobre os quais falaremos mais adiante. Assim, dizemos na Imunologia que os macrfagos tambm funcionam como clulas apresentadoras de antgenos. Os macrfagos distribuem-se amplamente em muitos tecidos do nosso corpo e at recebem nomes diferentes de acordo com o tecido em que se encontram (Figura 1.2). Os macrfagos so, na verdade, a forma madura dos moncitos sanguneos, ou seja, os moncitos so as clulas que circulam no sangue e, quando essas clulas migram para os tecidos, sofrero novas diferenciaes, compondo uma variedade de formas histolgicas que participam da fagocitose. Conforme explicado anteriormente, dependendo do tecido em que os macrfagos se encontram, eles tero um nome e um formato. Exemplos: clulas de Kupffer no fgado (clulas grandes com vrias projees citoplasmticas); macrfagos alveolares no pulmo; macrfagos esplnicos no bao; macrfagos peritoneais presentes no lquido peritoneal; micrglia no tecido nervoso central; osteoclastos nos ossos etc. Para resumir e ficar bem claro, os moncitos sanguneos, que constituem 5% a 10% das clulas brancas circulantes e que tm uma vida bem curta (passam aproximadamente 24h no sangue), logo vo se diferenciar
Os moncitos sanguneos desenvolvem-se na medula ssea, atingem a corrente sangunea, circulam por poucos dias e, nalmente, deslocam-se para os tecidos onde se diferenciam em outro tipo celular denominado macrfagos, ou seja, os macrfagos so a forma madura dos moncitos (ou outros nomes).
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nos macrfagos teciduais e, com isso, ter uma vida mais longa e ser mais eficientes na eliminao dos agentes estranhos. As clulas dendrticas esto sendo muito estudadas na Imunologia. Elas tambm so clulas fagocticas, mas o seu papel mais importante no o de degradar os agentes estranhos fagocitados, como fazem os macrfagos, mas sim processar esses agentes em formas mais simples e depois apresentar cada uma dessas pores para os linfcitos T. Assim, podemos dizer que as clulas dendrticas so as principais clulas apresentadoras de antgenos do nosso organismo e, por isso, elas esto sendo to estudadas. As clulas dendrticas podem ser encontradas na circulao e tambm residindo em alguns tecidos do corpo. A morfologia dessas clulas (nos tecidos, elas se parecem com estrelas-do-mar, e esses prolongamentos so denominados de dendritos e do o nome a essas clulas) est relacionada com sua excelente capacidade de capturar agentes estranhos e depois reapresent-los, pois isso aumenta muito a sua superfcie de contacto com esses agentes. Os mastcitos, cujo precursor sanguneo no est bem definido, tambm so clulas diferenciadas e residentes nos tecidos. Essas clulas se localizam principalmente prximo a pequenos vasos sanguneos e, quando so ativadas pela presena de um agente estranho, tm a capacidade de liberar substncias que vo afetar a permeabilidade desses vasos. Essas substncias ficam armazenadas em grnulos no interior dessas clulas e so muito conhecidas por desenvolver respostas alrgicas, ou at mesmo o choque anafiltico em alguns indivduos, dependendo da quantidade liberada na circulao. Sobre isso falaremos mais tarde, quando tratarmos das reaes imunes conhecidas como hipersensibilidades. Voltemos a falar dos granulcitos ou leuccitos polimorfonucleares (PMN), aquelas clulas que recebem esse nome por possurem grnulos densamente corveis em seu citoplasma e que possuem ncleos multilobados ou polimrficos. Esses ncleos constituem cerca de 65% das clulas brancas em nosso sangue. H trs tipos de granulcitos em nosso sangue, todos eles com uma vida relativamente curta e produzidos em grande quantidade durante as respostas imunes. Nessas horas, eles abandonam a circulao e conseguem chegar at o local da infeco ou da inflamao.
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Eles so assim denominados porque os seus grnulos se mantm relativamente sem colorao (neutros) ao microscpio.
Quando essas clulas fazem fagocitose e morrem, so responsveis pela formao do pus nos locais infectados. Sobre esse fenmeno tambm vamos estudar mais adiante. A aparncia dos grnulos dessas clulas ao microscpio ptico, aps colorao convencional, d origem a uma posterior subdiviso. O primeiro e mais abundante tipo de granulcito so os neutrfilos, que representam a terceira clula fagocitria do sistema imunolgico e possuem uma vida mdia de aproximadamente 12h em circulao. Os neutrfilos so os elementos mais numerosos (90% a 95% dos granulcitos so neutrfilos) e mais importantes de nossa primeira barreira de defesa, que vamos denominar imunidade inata. Isso fcil de entender quando nos deparamos com deficincias genticas na funo dos neutrfilos que levam a srias infeces bacterianas, que podem ser fatais se no forem corretamente tratadas. Para termos uma ideia da importncia dessas clulas, o seu nmero na circulao varia de 4.000 a 10.000 clulas/mm3 de sangue. Durante as infeces esse nmero chega a valores superiores a 20.000 clulas / mm3 de sangue, ou seja, esse nmero no mnimo dobra. Grnulos corados em vermelho esto presentes nos eosinfilos, que representam 3% a 5% dos granulcitos circulantes. Os eosinfilos so importantes na defesa contra infeces parasitrias, pois o contedo dos seus grnulos txico para os parasitos. O nmero dessas clulas aumenta na circulao quando a pessoa est com verminose, por exemplo. Grnulos com intensa colorao azul so encontrados nos basfilos, que representam 0,5 a 1% dos granulcitos. A funo dos basfilos provavelmente similar e complementar dos eosinfilos e mastcitos. A funo dessas clulas ser mais bem explicada na seo em que falaremos do seu papel nas alergias. Finalizamos a discusso sobre as clulas originadas a partir de progenitoras mieloides. Vamos agora passar a estudar as clulas originadas a partir de progenitoras linfoides, ou seja, os linfcitos. Como ponto de partida, vamos conhecer as principais caractersticas morfolgicas dessas clulas. Os linfcitos so clulas mononucleares que apresentam uma fina borda de citoplasma quando se encontram no seu estado de repouso. Uma clula em estado de repouso assim considerada quando ainda no foi estimulada por um antgeno e, portanto, encontra-se na fase G0 do ciclo celular.
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Como dito anteriormente, essas clulas, quando no estimuladas por antgenos, so pequenas e apresentam cerca de 6-10 m de dimetro, ncleo de cromatina condensada e um citoplasma muito escasso. No momento em que essas clulas so expostas e interagem com antgenos, elas so consideradas ativadas e progridem para as demais fases do ciclo celular. Na sequncia, observa-se a produo de novas protenas por essas clulas. Essas clulas aumentam de tamanho porque o citoplasma se torna mais abundante e rico em organelas. Os linfcitos tornam-se, ento, linfcitos grandes, conhecidos como linfoblastos, e chegam a atingir cerca de 10-12 m de dimetro. Quando h um grande nmero de clulas em processo de diviso celular, podemos dizer que ocorreu uma amplificao clonal. Esse processo observado quando produzido um grande nmero de clulas com capacidade de reagir contra os antgenos, que inicialmente foram as substncias responsveis pela ativao celular. Duas so as principais populaes de linfcitos, os linfcitos T ou clulas T (timcitos) e os linfcitos B ou clulas B. Os linfcitos constituem 25 a 35% do total das clulas brancas (os leuccitos) presentes no sangue. A presena dos linfcitos T e B no sangue obedece, respectivamente, relao de 5:1. Os linfcitos T ou clulas T se desenvolvem a partir de precursores no timo. Os linfcitos B ou clulas B se diferenciam no fgado fetal e na medula ssea. Nas aves, essa diferenciao ocorre em um rgo denominado de Bursa de Fabricius, situado prximo cloaca das aves. Os linfcitos T e B so clulas que desempenham funes distintas, so indistinguveis ao microscpio ptico, contudo apresentam diferenas que podem ser evidenciadas ao microscpio eletrnico e/ou outras tcnicas. Estudemos o processo de desenvolvimento dessas clulas. Vamos iniciar o aprendizado falando sobre os linfcitos T. Dissemos anteriormente que essas clulas se desenvolvem no timo. Cabe lembrar as aulas de Histologia em que foi discutido que esse rgo possui um microambiente prprio para a maturao e a produo dos linfcitos T.
Linfoblasto
Linfoblasto uma clula imatura encontrada na medula ssea em pequenas propores, precursora de linfcitos maduros.
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Pela importncia desse rgo no sistema imune, cabe record-lo e inserir novos conhecimentos importantes e fundamentais para o entendimento do sistema imune.
1.2 rgos linfoides primrios

1.2.1 Timo
Os rgos linfoides primrios representam o local onde ocorrem a maturao e a diferenciao dos linfcitos.
CD (do ingls, Cluster of Dierentiation) so grupos de diferenciao, nomenclatura adotada para caracterizar molculas que se encontram na superfcie das clulas e servem como seus marcadores. Os linfcitos e outros leuccitos expressam distintas molculas CD na sua superfcie celular, conferindo funes diferenciadas a essas clulas.
O timo um rgo linfoide primrio, bilobado (formado por dois lobos) e localizado no mediastino superior. Quando a cavidade torcica de um camundongo aberta, os lobos do timo apresentam uma estrutura semelhante a duas ptalas de rosas brancas que so observadas sobre o corao. Cada um desses lobos contm vrios lbulos. Esses lbulos apresentam trs regies, denominadas de zona subcapsular, crtex e medular (Figura 1.3). O processo de diferenciao das clulas no timo bastante complexo e envolve vrias etapas. As clulas precursoras dos linfcitos T, oriundas da medula ssea, migram para o timo e iniciam o seu processo de maturao. Na zona capsular, as clulas derivadas da medula ssea so ditas triplonegativas, uma vez que no apresentam molculas na superfcie celular. Isso significa dizer que essas clulas no possuem ainda molculas na superfcie celular e receptores para antgeno. Na regio cortical do timo, observam-se clulas que passam por rearranjos gnicos que resultam na aquisio de receptores para antgenos nas superfcies celulares. Esses receptores so denominados de TCRs (do ingls, T Cell Receptor, que significa receptor da clula T). As clulas T ou timcitos migram da regio cortical para a regio medular. Durante essa migrao, essas clulas tornam-se cada vez mais maduras, podendo ser caracterizadas no somente pela aquisio do receptor para antgeno na clula T (TCR), mas tambm pelo aparecimento ordenado e pela perda de muitas outras molculas expressas na superfcie da clula T (os marcadores de superfcie). Como exemplos de marcadores de superfcie dos linfcitos T, citamos o CD3, o CD4 e o CD8. Passemos a entender agora como se d o desenvolvimento dos linfcitos B ou das clulas B.
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Cpsula Trabcula Crtex Epitlio subcapsular Juno crticomedular Clula epitelial cortical Timcito-origem medula ssea
Clula epitelial medular Clula dendrtica origem medula ssea Macrfago origem medula ssea Cpsula
Medula Corpsculo de Hassal
Clulas epiteliais da regio cortical
Timo Pulmo Corao Crtex
Trabcula Timcitos Medula
Figura 1.3 Representao esquemtica do timo. (Adaptado de MURPHY et al., 2008, p. 274). Corpsculo de Hassall
Macrfago
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Nos mamferos, os linfcitos B diferenciamse na medula ssea. Durante a vida fetal, o fVaso Sanguneo gado tambm um importante local de desenSistema de volvimento do linfcito B. Assim como o timo, Havers a medula ssea tambm considerada como um rgo linfoide primrio (Figura 1.4). As clulas que se diferenciam na medula ssea passam por diversos estgios de desenvolviMedula mento que podem ser explicados pelos rearamarela (tutano) ranjos gnicos das molculas de imunoglobulinas produzidas endogenamente (denominadas anticorpos de superfcie) e pela expresso de molculas de superfcie, como, por exemplo, o CD 19. As molculas de imunoglobulinas ou anticorpos expressos na superfcie dos linfFigura 1.4 Medula ssea. citos B agem como receptores de antgenos. (Adaptado de A MEDULA Uma vez maduras, essas clulas deixam a medula ssea, entram na SSEA, 2005). circulao e migram para os rgos linfoides secundrios. Os linfcitos B representam aproximadamente 5 a 15% dos linfcitos circulantes. Nesses locais, os linfcitos B podem se diferenciar em clulas plasmticas (plasmcitos), que so clulas capazes de secretar anticorpos (imunoglobulinas). Mais adiante discutiremos a propriedade dessas clulas.
As clulas exterminadoras naturais ou clulas NK (do ingls, Natural Killer Cell) so um tipo de linfcito pertencente ao sistema imune inato. Tm um papel importante no combate a infeces virais e clulas tumorais. Identicadas pela primeira vez em 1975, foram rotuladas de exterminadoras naturais (Natural Killer) pela sua atividade citotxica contra clulas tumorais de diferentes linhagens, sem a necessidade de reconhecimento prvio de um antgeno especco.
Medula ssea vermelha
1.2.2 Medula ssea
Aprendemos como os linfcitos T e B se desenvolvem e se maturam. Resta-nos agora conhecer as caractersticas das clulas Natural Killer (NK). As clulas NK so originrias de precursores na medula ssea. No seu estado de repouso, essas clulas so pequenas em tamanho. Quando so ativadas, aumentam de tamanho e passam a ser reconhecidas como clulas ou linfcitos granulares grandes, uma vez que o citoplasma maior e rico em grnulos. Essas clulas so consideradas como uma populao distinta dos linfcitos T ou B. No migram para o timo e atuam na imunidade inata (como discutiremos adiante). Os seus receptores de superfcie, diferentemente dos linfcitos T e B, podem interagir com por-
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Imunologia
es proteicas, glicosiladas ou lipdicas de glicoprotenas ou ainda com glicolipdeos presentes nas superfcies de outras clulas. As clulas NK compreendem 10 a 15% das clulas no sangue e so responsveis pela citotoxicidade contra determinadas clulas-alvo, e como consequncia observa-se a lise delas. As clulas NK atuam preferencialmente na lise de clulas infectadas por vrus e de clulas tumorais ou de clulas recobertas por IgG. Concluindo o nosso aprendizado sobre os linfcitos T e B Uma vez maduros, os linfcitos T e B deixam o timo e a medula ssea, respectivamente, e migram para os rgos linfoides secundrios. Quais so, ento, esses rgos linfoides secundrios?
Locais em que a reposta imune poder se estabelecer.
1.3 rgos linfoides secundrios

1.3.1 Linfonodos
Os linfonodos so estruturas encapsuladas que possuem cerca de 25 mm de dimetro e esto localizados junto aos tratos linfticos principais. Os linfonodos so conhecidos como gnglios linfticos ou ainda como ndulos linfticos. Apresentam uma estrutura semelhante a um pequenino feijo. Como exemplo, podemos citar os linfonodos axilares, encontrados nas axilas; os linfonodos inguinais, presentes na regio inguinal; e os linfonodos mesentricos, presentes no mesentrio. Estruturalmente, as trs principais reas encontradas em um linfonodo so crtex, paracortical e medula (Figura 1.5). Predominantemente encontramos nessas regies linfcitos B, linfcitos T CD4+, linfcitos T, linfcitos B e macrfagos, respectivamente. Em um linfonodo no estimulado, os linfcitos B organizam-se em folculos primrios no crtex. Aps o estmulo antignico, esses folculos crescem e formam os folculos secundrios, que contm reas de grande proliferao celular chamadas de centros germinativos. Nos processos infecciosos, os linfonodos aumentam significativamente de tamanho.
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Os capilares linfticos formam verdadeiros plexos que se entrelaam com os capilares sanguneos. Atravs dos vasos coletores aferentes, a linfa coletada para os linfonodos e, atravs dos vasos linfticos eferentes, deixa os linfonodos.
Clulas B virgens Clula T Clula B
Clula dendrtica Vaso linftico aferente Zona de clula B clula T virgem Vnula de endotlio alto Artria
Zona de clula T
Zona de clula T - crtex parafolicular
Zona de clula T - crtex linfoide
Figura 1.5 Estrutura morfolgica de um linfonodo. (Adaptado de ABBAS et al., 2007, p. 61).
Muitos de vocs certamente ouviram o comentrio popular estou com uma ngua. Essa ngua que sentida ao ser palpada o linfonodo inguinal que inchou ou aumentou o seu tamanho. Esse aumento se deve ativao dos linfcitos T e B, que se dividem e proliferam em processos infecciosos.
Canais linfticos eferentes
Local de drenagem dos uidos dos tecidos que transporta os antgenos dos locais de infeco para os linfonodos.
Falemos sobre a mobilidade dessas clulas. Como os linfcitos que esto na circulao penetram nos linfonodos? Os linfcitos circulantes entram nos linfonodos atravs das vnulas de endotlio alto (HEV) no paracrtex, migram at a medula nodular e retornam circulao via canais linfticos eferentes.
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Imunologia
1.3.2 Bao
um rgo linfoide secundrio localizado na regio abdominal esquerda (hipocndrio esquerdo) e possui muitas outras funes consideradas no imunes, que incluem a filtrao do sangue e a converso da hemoglobina em bilirrubina. Ao observar um corte de bao ao microscpio ptico, vemos uma polpa branca que compreende um tecido linfoide denso, nodular, envolvendo arterolas e que contm uma grande quantidade de linfcitos agregados. Observamos, ainda, uma polpa vermelha com seios e tecidos reticulares banhados pelo sangue, contendo hemcias (glbulos vermelhos ou eritrcitos) em processo de distribuio (Figura 1.6). Compreendendo a organizao da polpas: Polpa branca Os ndulos desta regio, os folculos linfoides, so reas onde se encontram, predominantemente, os linfcitos B. Devemos destacar que possvel observar no interior desses folculos a formao de centros germinativos contendo clulas B em processo de diviso celular. Esses centros germinativos podem ser formados durante a ativao de uma resposta imune. Foi dito anteriormente que a polpa branca compreende um tecido linfoide denso que envolve as arterolas. A camada ou bainha linfocitria que envolve essas arterolas denominada de bainha linfoide periarteriolar (BLPA). Nessa rea encontramos predominantemente os linfcitos T. Polpa vermelha Observa-se uma rede de vasos (arterolas, vnulas e uma rede de vasos de parede muita fina), os sinusoides. Nesses se observam moncitos e/ou macrfagos e clulas dendrticas em grande quantidade. Alm dessas clulas, podemos encontrar neutrfilos, eritrcitos, linfcitos e plasmcitos. Nessa regio do bao, considerada como um importante filtro para o sangue, percebe-se a hemocaterese, que consiste na eliminao das hemcias e plaquetas lesadas ou senescentes pela ao dos macrfagos.
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Superfcie renal
Superfcie renal Artria esplnica Veia esplnica Hilo
Cpsula Trabcula Sinusoide vascular
B
Folculo primrio Zona marginal Bainha linfoide periarteriolar Polpa branca
Figura 1.6 Estrutura morfolgica do bao. (Adaptado de GOLDSBY et al., 2003, p. 49).
Polpa vermelha
Centro germinativo Veia Artria
No bao, diferentemente dos linfonodos, os antgenos e os linfcitos atingem o rgo pelos vasos sanguneos (filtro do sangue). Uma das caractersticas das clulas no bao a lenta velocidade de circulao, o que permite um constante monitoramento do sangue, principalmente quanto invaso por agentes infecciosos. O bao tem a sua importncia reconhecida, uma vez que, entre outras funes, um rgo importante para a remoo de antgenos disseminados pelo sangue.
1.3.3 Tecidos linfoides associados a mucosas

Os tecidos linfoides no encapsulados na superfcie das mucosas gastrointestinais, respiratria e do trato geniturinrio so coletivamente chamados de tecidos associados s mucosas MALT (do ingls, Mucosal Associated Tissues). De todos esses tecidos, os melhores caracterizados so os tecidos associados ao intestino
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Imunologia
GALT (do ingls, Gut Associated Tissues) , que compreendem as Placas de Peyer no intestino delgado e os folculos linfoides isolados dentro da submucosa intestinal; os tecidos associados aos brnquios BALT (do ingls, Bronquio Associated Tissues); e os tecidos associados nasofaringe NALT (do ingls, Nasopharynx Associated Tissues), que compreendem as amgdalas e as adenoides (Figura 1.7). As clulas M so encontradas nesses tecidos, so clulas epiteliais especializadas. Os antgenos inalados ou ingeridos so captados por essas clulas M mediante um processo conhecido por pinocitose (captao de pequenos vacolos contendo lquidos e/ou molculas). Observam-se ainda nesses tecidos plasmcitos produtores de IgA, clulas T e macrfagos.
A
Figura 1.7 (A) Tecidos associados s mucosas adenoide e tonsilas e (B) Estrutura da Placa de Peyer. (Adaptado de: (A) MURPHY et al., 2008, p. 463 e (B) MALE et al., 2006, p. 55). Adenoide Tonsila Paladina Tonsila Lingual Lngua
Epitlio
Juno apertada
Linfcito intraepitelial Cripta
Clulas M
Linfcito lmina-prpria
Placas de Peyer
Membrana basal
Vnula de endotlio alto
Linfonodo mesentrico
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Resumo
No presente captulo, aprendemos que as clulas envolvidas na defesa imunolgica so derivadas de um nico progenitor comum, formado na medula ssea e que recebe a denominao de clula-tronco hematopoitica. Num primeiro estgio de diferenciao e ainda na medula ssea, essa clula-tronco se diferencia em progenitor mieloide e progenitor linfoide. O progenitor mieloide dar origem aos granulcitos ou clulas polimorfonucleares, que possuem grnulos em seu citoplasma e um ncleo polimrfico (clulas PMN). Os PMN so os neutrfilos (os PMN mais abundantes, responsveis pela fagocitose de antgenos e pela formao do pus em infeces), eosinfilos (grnulos corados em vermelho e envolvidos na defesa contra parasitas helmintos) e basfilos (grnulos corados em azul e atuantes em reaes alrgicas). Tambm envolvidos em reaes alrgicas esto os mastcitos teciduais, que possuem em seu interior grnulos contendo histamina e outros componentes importantes em reaes inflamatrias e alrgicas. O progenitor mieloide tambm dar origem aos moncitos, que posteriormente migram para vrios tecidos do corpo e se diferenciam em macrfagos. Os moncitos e os macrfagos constituem o chamado sistema fagoctico mononuclear, sendo os macrfagos clulas muito importantes na fagocitose de antgenos, destruindo-os ou processando-os para que sejam reconhecidos pelos linfcitos. Do progenitor mieloide tambm derivaro as clulas dendrticas, que, juntamente com os macrfagos e com os linfcitos B, constituiro clulas apresentadoras de antgenos para os linfcitos T na imunidade especfica. Tambm na medula ssea esto os progenitores linfoides, que daro origem aos linfcitos B, aos linfcitos T e s clulas NK. A medula ssea, por fazer parte da formao de todas essas clulas, recebe a denominao de rgo linfoide primrio. Aprendemos neste captulo que, para que os linfcitos T migrem para a circulao e os tecidos linfoides, eles precisam passar pelo timo aps sua pr-formao na medula ssea, sendo este tambm um rgo linfoide primrio. Todos os outros rgos e tecidos linfoides, e dentre
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Imunologia
os quais destacamos o bao, os linfonodos e os tecidos linfoides associados a mucosas respiratria e intestinal, so denominados secundrios. Esses so locais de armazenamento de linfcitos para onde so drenados os antgenos para que ocorra a maioria das interaes dos antgenos com os linfcitos na imunidade especfica.
Referncias
ABBAS, Abul K.; LICHTMANN, Andrew H.; PILLAI, Shiv. Cellular and molecular immunology. 6. ed. Philadelphia, PA: Saunders Elsevier, 2007. p. 61. A MEDULA ssea. 23 out. 2005. Disponvel em: <http:// topazio1950.blogs.sapo.pt/51001.html>. Acesso em: 19 dez. 2009. BENJAMINI, E.; COICO, R.; SUNSHINE, G. Imunologia. 4. ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2002. p. 288.
COICO, R.; SUNSHINE, G. Immunology: a short course. 6. ed. New Jersey, 2009. p. 391. GOLDSBY, R. A.; KINDT, T. J.; OSBORNE, B. A.; KUBY, J. Immunology. 5. ed. New York: W. H. Freeman and Company, 2003. p. 49.
MALE, D.; BROSTOFF, J.; ROTH, D. B.; ROTH, I. Immunology. 7. ed. Philadelphia, PA: Mosby, Elsevier, 2006. p. 5 e 55. MURPHY, K.; TRAVERS, P.; WALPORT, M. Janeways Immunobiology. 7. ed. New York: Garland Science, 2008. p. 4; 274 e 463. PEAKMAN, M.; VERGANI, D. Imunologia bsica e clnica. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 1999. p. 327.
C A P T U LO 2
Resposta imune inata e inamao

O que tem a ver nossa pele, pelos do nosso corpo, lgrimas, saliva, muco, batimento dos clios, tosse, espirro, fluxo urinrio, enfim, o que todos esses elementos to fisiolgicos tm a ver com a nossa imunidade? Pois bem, esses elementos tm tudo a ver com a nossa imunidade, pois so eles, juntamente com clulas e protenas, que constituiro a nossa primeira linha de defesa: aquela que j nasce com a gente, aquela que nos protege no dia a dia e que impede que adoeamos constantemente, mesmo estando rodeados de microorganismos patognicos no ar, na gua, nos alimentos etc. E sobre esses componentes da chamada imunidade inata que ns vamos discorrer neste captulo. A esses elementos, muitas vezes, s damos a devida importncia quando nos faltam ou esto funcionando mal: uma pele lesada por um corte ou uma queimadura a porta de entrada aberta para uma infeco e inflamao nesse local; a secura dos olhos por entupimento do canal lacrimal uma conjuntivite se instalando. Nessas horas veremos que a imunidade inata mesmo o nosso escudo principal de defesa. E a inflamao, a febre que se instala quando a inflamao est ocorrendo, tm essas coisas relao com a nossa defesa? Sobre esse tema tambm estudaremos neste captulo.
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2.1 Introduo
A imunidade inata conferida por aqueles elementos com os quais o indivduo nasce e que esto sempre presentes e disponveis no intuito de proteg-lo de invasores externos. Assim, a imunidade presente ao nascer denominada INATA (uma exceo a ser discutida mais tarde o conjunto de anticorpos protetores que os bebs adquirem de suas mes). Chamamos essa imunidade de primeira linha de defesa contra micro-organismos invasores. Os elementos da imunidade inata incluem componentes internos e externos, como a pele, as membranas mucosas, os cabelos e pelos do corpo e os reflexos da tosse, o espirro, o fluxo urinrio etc., que constituem barreiras fsicas efetivas aos agentes do meio ambiente. Influncias qumicas como pH e cidos graxos secretados tambm constituem barreiras efetivas contra a invaso por vrios microorganismos. A falta de especificidade levou ao uso do termo imunidade no especfica (Figura 2.1). Para melhor organizar o estudo da imunidade inata, podemos dizer que dessa imunidade participam trs componentes fundamentais: fsico-qumicos, humoral e celular.
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Imunologia
Lisozima nas lgrimas e em outras secrees Comensais Pele (barreira fsica cidos graxos comensais) Rpida alterao do pH PH baixo e comensais da vagina
Remoo de partculas pela rpida passagem do ar atravs dos ossos turbinados Brnquios (muco, clios) cidos Comensais Fluxo do trato urinrio Figura 2.1 Barreiras fsicas e bioqumicas presentes na imunidade inata. (Adaptado de MALE et al., 2006, p. 8).
2.2 Componentes fsico-qumicos

So as barreiras fsicas como a pele e as mucosas, as secrees que continuamente lavam e limpam as superfcies mucosas e os clios que ajudam na remoo de resduos e matria estranha. Voc j pensou na importncia da pele na sua proteo? A pele um envoltrio semipermevel que reveste todas as superfcies externas do corpo e serve como um escudo protetor do nosso organismo. A maioria dos organismos e das substncias estranhas no pode penetrar na pele intacta, mas pode entrar no corpo se a pele apresentar alguma leso. Quando as pessoas sofrem acidentes (queimaduras extensas, por exemplo) e perdem parte desse escudo protetor, est aberta uma porta para a entrada de milhes de bactrias e fungos patognicos que podem causar infeces graves e comprometer a vida do acidentado. Alguns micro-organismos tambm podem entrar atravs das glndulas sebceas e dos folculos pilosos. Da mesma maneira, pessoas em tratamento de tumores que perdem os cabelos e os pelos do corpo durante o tratamento (at mesmo os clios caem) ficam muito susceptveis a infeces oculares e respiratrias, j que todo o trato respiratrio revestido por clios. O consumo de lcool, o fumo de cigarros e os narcticos tambm podem suprimir
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por completo esse sistema de defesa. Outro componente envolvido na proteo em diferentes reas do corpo, dentre os quais os tratos respiratrio e gastrointestinal, est relacionado com o simples fato de que as superfcies dessas reas esto cobertas por muco. Nessas reas, a barreira das membranas mucosas serve como armadilha para os micro-organismos, os quais so arrastados por clulas epiteliais ciliadas em direo s aberturas externas.
2.3 Componentes humorais

Fatores imunologicamente ativos, presentes nas secrees das mucosas, no sangue e no lquido cerebroespinhal (os humores), so denominados humorais. Esses componentes sero estudados com mais detalhes ao longo do estudo da Imunologia, mas podemos iniciar aqui com alguns exemplos desses componentes, que so as protenas (citocinas) produzidas por clulas que atuam na fagocitose, as protenas de complemento que sero estudadas mais adiante, as protenas de fase aguda (Figura 2.2) produzidas no fgado durante infeces, entre tantas outras. Muitas dessas protenas tm a funo de opsoninas, e esse termo deve ser compreendido desde cedo no estudo da Imunologia. As enzimas proteolticas (por exemplo, a lisozima presente nas lgrimas, na saliva e no suor que quebra as proteoglicanas da parede de bactrias em um ponto preciso, clivando ligaes entre a N-acetilglicosamina e o cido N-acetilmramnico) matam as bactrias e, por isso, tambm so importantes Opsonizao componentes humorais da imunidade inata. Outro componente humoral extremamente importante na imunidade inata so os interferons do tipo I, mais precisamente o interferon alfa (IFN ou interferon leucocitrio constitudo por aproximadamente 20 protenas relacionadas) e o interferon beta (IFN ou interferon de fibroblastos e clulas epiteliais). Quando clulas do organismo so infectadas por vrus, elas so imediatamente estimuladas
Opsonizao em Imunologia o processo que facilita a ao do sistema imune por xar opsoninas na superfcie bacteriana, permitindo a fagocitose. Opson uma palavra grega que signica condimento, tempero, molho, ou seja, algo que facilite a digesto. Se for feita uma analogia, esse processo seria como passar mel em um ladro e coloc-lo num quarto fechado cheio de ursos. Nesse caso, os ursos seriam os macrfagos e granulcitos e o bandido seria o invasor do organismo.
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Imunologia
a biossintetizar esses IFNs. Ambos possuem o papel de inibir a replicao viral, aumentar a expresso de MHC de Classe I e ativar clulas NK (Figura 2.3).
IL - 6 Figura 2.2 Protenas de fase aguda. (Adaptado de MURPHY et al., 2008, p. 93).
Fgado
Lectinas ligantes de manose Fibrinognio Protena amiloide do soro Protena C reativa
Clula infectada por vrus produz IFN- e IFN-
Vrus
Figura 2.3 Ao dos interferons do tipo I na imunidade inata. (Adaptado de MURPHY et al., 2008, p. 95).
IFN-
IFN-
Induo de resistncias replicao viral nas clulas vizinhas
Aumento da expresso de MHC classe I
Ativao das clulas NK para matar as clulas infectadas por vrus
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O ambiente do trato gastrointestinal tambm hostil a vrios micro-organismos, pois diversos fatores contribuem para a baixa sobrevivncia das bactrias: enzimas hidrolticas da saliva, enzimas hidrolticas e bile no intestino delgado e baixo pH do estmago. Alis, o baixo pH de outros locais do corpo, como vagina e pele, tambm contribuem para essa baixa sobrevivncia.
2.4 Componentes celulares

Estima-se que a populao total de linfcitos possa reconhecer mais de um bilho de antgenos diferentes; todos os receptores da imunidade inata provavelmente reconhecem menos de mil padres moleculares microbianos.
Uma vez que um micro-organismo tenha atravessado as vrias barreiras fisiolgicas e qumicas, a prxima linha de defesa consiste em vrias clulas especializadas cujo propsito destruir o invasor. Esses componentes da imunidade inata so os neutrfilos, os macrfagos, os eosinfilos, os mastcitos e as clulas NK. No Captulo 1, o papel dessas clulas j foi explicado, e em outros momentos voltaremos a falar nelas, pois participam ativamente da defesa de nosso organismo, seja na imunidade inata, seja na imunidade especfica. Essas clulas tambm so extremamente importantes na inflamao, de que trataremos em seguida.
2.5 Inamao
A inflamao conhecida desde a Antiguidade. O primeiro a descrev-la em seus constituintes fundamentais foi Aurlio Cornlio Celso, na Roma Antiga, cerca de 50 a.C. J no sculo XIX, o patologista alemo Rudolf Virchow introduziu o conceito de perda funcional e estabeleceu as bases fisiopatolgicas do processo inflamatrio. A inflamao (do latim, inflammatio, que significa atear fogo) ou processo inflamatrio uma resposta do organismo a uma agresso sofrida e o principal componente dos mecanismos de defesa do organismo. Entende-se como agresso qualquer processo capaz de causar leso celular ou tecidual. Essa resposta-padro comum a vrios tipos de tecidos e mediada por diversas substncias produzidas pelas clulas danificadas e pelas clulas do sistema imune que se encontram eventualmente nas proximidades da leso.
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Imunologia
Dessa forma, uma importante funo das clulas fagocticas e da fagocitose sua participao na inflamao. A maioria das clulas envolvidas na resposta inflamatria constituda de clulas fagocticas, consistindo principalmente, em sua maior parte, em leuccitos polimorfonucleares. Esses se acumulam dentro de 30 a 60 minutos, fagocitam o invasor ou o tecido prejudicado e liberam suas enzimas lisossomais na tentativa de destruir o invasor (Figura 2.4). Se a causa da resposta inflamatria persistir alm desse ponto, dentro de 56 horas a rea ser infiltrada por clulas mononucleares que incluem macrfagos e moncitos. Os macrfagos vo intensificar a atividade fagoctica dos polimorfonucleares, amplificando assim a defesa da rea. Os sinais marcantes (conhecidos como sinais cardinais) da inflamao descritos h quase 2.000 anos so o edema (tumor), a vermelhido (rubor), o calor, a dor e a perda da funo da rea inflamada. Dentro de minutos aps o ferimento, o processo inflamatrio inicia-se com a concentrao e o aumento da concentrao de substncias farmacologicamente potentes (Figura 2.5).
Fagcito PMN
Diapedese
Ativao histamina, trombina
Quimiotaxia Leucotrieno D4 C5a N-formil-metionina
Inamao
Figura 2.4 Ativao, quimiotaxia e diapedese de neutrlos para o stio inamatrio. (Adaptado de: MAYER, 2010).
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Resoluo
Inamao Crnica
o za tri ca Ci e os cit go Fa o ra ig m s o e to ci iva uc At e le d
u A xo um sa en ng to pe u do rm ne ea o bi A lid u ad m e v en as to d cu a lar
Ex
Figura 2.5 Sinais cardinais da inamao e suas consequncias. (Adaptado de: <http://1.bp.blogspot.com/ _8tS29hVtT-Q/STknUBSlgUI/AAAAAAAABJE/Ik7rX5nkWto/s320/desenho+inama%C3%A7%C3%A3o.jpg>)
Pode-se classificar a inflamao em dois tipos principais, conforme sua velocidade de instalao: a aguda e a crnica. Inflamao aguda aquela que se instala rapidamente, como, por exemplo, aps um acidente em que ocorre leso tecidual de forma sbita. Algumas vezes, difcil ou impossvel remover as causas da inflamao. Assim, a inflamao crnica se instala de forma lenta e insidiosa, como, por exemplo, nas doenas reumatolgicas, na tuberculose, na glomerulonefrite e em doenas autoimunes. Essa classificao no diz respeito gravidade do processo, mas apenas, como j dito anteriormente, velocidade de instalao. Dessa forma, podem existir processos inflamatrios agudos de baixo
tra v pl asam as e m n t to ico
Mediadores Inamatrios
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Imunologia
grau ou alto grau de gravidade, o mesmo ocorInamao aguda rendo com a inflamao crnica. Dependendo Dura de 8 a 10 dias, no deixa sequelas e seus da durao da inflamao, essa resposta susintomas geralmente esto localizados onde plementada e multiplicada por elementos da predominam as clulas polimorfonucleares. imunidade especfica ou adquirida, que ser Inamao crnica tratada em captulos subsequentes deste livro. Dura 2 semanas, pode gerar sequelas como ciEsses elementos incluem anticorpos e imucatriz e perda de funo, provm de uma inanidade mediada por linfcitos T. Um ponto mao aguda, dela participam macrfagos e importante a ser destacado que a cascata de linfcitos e deixa uma brose como cicatriz. ativao das protenas de complemento tambm ativada, e disso tambm trataremos em captulos subsequentes. Essas protenas ativadas aumentam a permeabilidade vascular, a dilatao capilar e as substncias quimiotticas que atraem e ativam clulas polimorfonucleares adicionais e linfcitos antgeno especficos. Febre durante a inflamao: a febre funciona como um mecanismo adaptativo prprio dos seres vivos e uma das manifestaes mais comuns da infeco e da inflamao. As clulas fagocticas, ao exercerem suas funes, liberam protenas conhecidas como pirgenos endgenos. Dentre essas protenas citamos as interleucinas 1 e 6 (IL-1 e IL-6), o fator de necrose tumoral (TNF) e os interferons do tipo I. A sensao ruim que sente a pessoa febril faz com que ela poupe energia e descanse. Alm disso, o aumento da temperatura corprea para alm dos 37,5C inibe a proliferao de bactrias.
Resumo
Neste captulo aprendemos que a imunidade inata a primeira linha de defesa conferida por aqueles elementos com os quais o indivduo nasce e que esto sempre presentes e disponveis no intuito de proteg-lo de invasores externos. Os elementos da imunidade inata incluem componentes internos e externos, como a pele, as membranas mucosas, os cabelos e pelos do corpo e os reflexos da tosse, o espirro, o fluxo urinrio etc., que constituem barreiras fsicas efetivas aos agentes do meio ambiente.
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Influncias qumicas como pH e cidos graxos secretados tambm constituem barreiras efetivas contra a invaso por vrios micro-organismos. Alm desses elementos, h ainda alguns fatores imunologicamente ativos, presentes nas secrees das mucosas, no sangue e no lquido cerebroespinhal (os humores) e denominados fatores humorais. So importantes formas de defesa na imunidade inata. Dentre esses se destacam as citocinas produzidas por clulas que atuam na fagocitose e as protenas de complemento e de fase aguda produzidas no fgado. Vimos tambm o papel de enzimas proteolticas (por exemplo, a lisozima presente nas lgrimas, na saliva e no suor que quebra paredes de bactrias) e dos interferons do tipo I (IFN e IFN ) produzidos por clulas infectadas por vrus e que possuem o papel de inibir a replicao viral, aumentar a expresso de MHC de Classe I e ativar clulas NK. O termo opsonizao foi introduzido neste captulo e refere-se ao processo que facilita a fagocitose por fixar opsoninas (algumas protenas produzidas durante as infeces) na superfcie dos patgenos. Novamente neste captulo voltamos a falar de clulas como os neutrfilos, os macrfagos, os eosinfilos, os mastcitos e as clulas NK, de seu papel na defesa inata e tambm na inflamao. Vimos que a inflamao uma resposta do organismo a uma agresso sofrida e o principal componente dos mecanismos de defesa do organismo. Ela mediada por diversas substncias produzidas pelas clulas danificadas e pelas clulas do sistema imune que se encontram eventualmente nas proximidades da leso. Aprendemos que os sinais marcantes (conhecidos como sinais cardinais) da inflamao descritos h quase 2.000 anos so o edema (tumor), o vermelhido (rubor), o calor, a dor e a perda da funo da rea inflamada, podendo ser aguda ou crnica. Por fim, aprendemos que a febre durante a inflamao representa um mecanismo adaptativo dos seres vivos e ocorre porque as clulas fagocticas, ao exercerem suas funes, liberam protenas conhecidas como pirgenos endgenos. Dentre essas protenas vimos o papel das interleucinas 1 e 6 (IL-1 e IL-6), do TNF e dos interferons do tipo I. Esse mecanismo de defesa faz com que o organismo poupe energia por exigir descanso, alm de inibir a proliferao de bactrias.
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Imunologia
Referncias
BENJAMINI, E.; COICO, R.; SUNSHINE, G. Imunologia. 4. ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2002. p. 288. DESENHO INFLAMAO. Disponvel em: <http://1.bp. blogspot.com/_8tS29hVtT-Q/STknUBSlgUI/ AAAAAAAABJE/Ik7rX5nkWto/s320/desenho+inflama %C3%A7%C3%A3o.jpg>. Acesso em: 10 mar. 2010. MALE, D.; BROSTOFF, J.; ROTH, D. B.; ROITT, I. Immunology. 7. ed. Philadelphia, PA: Mosby/Elsevier, 2006. p. 8. MAYER, Gene. Imunidade inata. University of South Carolina. Disponvel em: <http://pathmicro.med.sc.edu/Portuguese/ immuno-port-chapter1.htm>. Acesso em: 10 mar. 2010. MURPHY, K.; TRAVERS, P.; WALPORT, M. Janeways Immunobiology. 7. ed. New York: Garland Science, 2008. p. 93 e 95. PEAKMAN, M.; VERGANI, D. Imunologia bsica e clnica. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 1999. p. 327.
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Linfcitos B, anticorpos e complemento

No presente captulo compreenderemos que os termos especificidade (capacidade de distinguir cada um dos componentes de um agente estranho), memria (capacidade de lembrar um contacto prvio com um antgeno) e discriminao entre o prprio e o no prprio (capacidade de responder a antgenos no prprios e evitar respostas a antgenos que fazem parte do prprio organismo) faro parte da resposta imune mediada por linfcitos T e B. Neste captulo aprenderemos que os linfcitos B so as nicas clulas capazes de produzir anticorpos. Conheceremos os passos dessas clulas at a sua diferenciao final. Saberemos que os anticorpos na superfcie do linfcito B tero uma especificidade nica para cada determinante antignico antes do contacto com qualquer antgeno. Aprenderemos sobre a estrutura e a funo de anticorpos. E, por fim, saberemos que os anticorpos sozinhos no vo proteger muito e que precisaro de outras protenas presentes no nosso soro, as protenas de complemento. Essas protenas so to importantes que, mesmo na imunidade inata (antes mesmo de termos anticorpos no soro para aquele agente invasor), j contaremos com essa defesa.
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3.1 Introduo
Quando estudamos a imunidade inata, aprendemos que essa a nossa primeira linha de defesa contra micro-organismos invasores e que tambm conhecida como imunidade no especfica. Nos Captulos 3 e 4, abordaremos com mais detalhes o desenvolvimento dos linfcitos B e T, que so as clulas responsveis pela resposta imune especfica, e as protenas associadas a essas respostas. As principais caractersticas dessa resposta imune que no est presente na imunidade inata so: a) especificidade: a capacidade de distinguir cada um dos componentes de um agente estranho (que chamamos de antgenos) e de montar uma resposta especfica para cada um deles (cada um dos componentes antignicos de um antgeno denominado eptopo antignico); b) memria: a capacidade de se lembrar de um contacto prvio com um determinado antgeno, de maneira que uma exposio subsequente leve a uma resposta imune mais potente e mais rpida; e c) discriminao entre o prprio e o no prprio: a capacidade de responder queles antgenos que so no prprios (estranhos) e de evitar respostas (ficar tolerante) queles outros antgenos que fazem parte do prprio. Claro que esses mecanismos s vezes falham e por isso alguns indivduos podem desenvolver doenas autoimunes por reconhecerem elementos
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Imunologia
de seu prprio corpo como estranhos e montarem uma resposta imune contra eles. Sendo assim, para reconhecer e lutar contra uma grande variedade de patgenos que um indivduo possa encontrar, os linfcitos do sistema imune adaptativo desenvolveram-se para reconhecer uma imensa variedade de antgenos diferentes provenientes de bactrias, vrus, fungos, parasitas e outros agentes causadores de doenas. Algumas vezes esses linfcitos reconhecem at mesmo agentes incuos como p, plen de flores, fezes de caros, entre outros agentes, e esses antgenos podem ser a causa de reaes alrgicas importantes sobre os quais discutiremos mais tarde.
3.2 Linfcitos B
Os linfcitos B so um componente da resposta imune adquirida que possuem caractersticas de especificidade e memria. Os papis mais importantes dos linfcitos B so: 1. assegurar a produo de anticorpos contra antgenos-alvo apropriados com a ajuda dos linfcitos T; e 2. apresentar antgenos aos linfcitos T e proporcionar sinais para a ativao dos linfcitos T. Reforando o aprendizado, as molculas de reconhecimento de antgenos que ficam na superfcie das clulas B so as imunoglobulinas ou Ig, ou popularmente conhecidas como anticorpos. Essas protenas so tambm sintetizadas pelos linfcitos B com uma ampla variedade de especificidades antignicas, sendo cada linfcito B responsvel pela sntese de uma imunoglobulina de especificidade nica para um nico eptopo antignico. Aps reconhecerem o eptopo antignico, essas clulas so ativadas e proliferam gerando muitos clones idnticos e produzindo Ig com a mesma especificidade para o mesmo eptopo antignico inicial. Algumas dessas clulas se diferenciam num tipo celular denominado plasmcito que, em vez de conter a Ig em sua membrana, excreta essa protena, conferindo o que chamamos de imunidade humoral, ou seja, uma imunidade que pode ser medida no soro dos indivduos pelo anticorpo ali presente.
Eptopo
Entende-se por eptopo a menor parte de um antgeno capaz de estimular resposta imunolgica ligando-se ao anticorpo. So reas nas molculas dos antgenos que se ligam aos receptores celulares e aos anticorpos. Um antgeno possui vrios eptopos.
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Processo de maturao e diferenciao O processo de maturao e diferenciao dos linfcitos B regido pela expresso da imunoglobulina de sua superfcie. As clulas mais precoces da linhagem B so conhecidas como clulas pr-B por serem as clulas progenitoras com capacidade de autorrenovao limitada. Essas clulas so derivadas de um precursor pluripotente denominado clula-tronco hematopoitica, conforme j estudamos na seo 1.
Clula-tronco
Pr-B
Pr-B
O primeiro passo da diferenciao dessas clulas ocorre por expresso de uma das cadeias da molcula de anticorpo denominada cadeia pesada mi (). Quando a clula B passa a expressar essa cadeia da imunoglobulina, chamada de clula pr-B. A expresso dessa protena pela clula pr-B sinaliza para que essa clula pare os rearranjos gnicos de cadeia pesada de Ig e passe a expressar cadeias leves. Quando uma protena de cadeia pesada se unir a uma protena de cadeia leve, forma-se uma molcula completa de imunoglobulina denominada IgM (o M vem da designao da cadeia pesada), cujas propriedades sero estudadas mais tarde. Quando uma molcula de IgM aparece na superfcie da clula B, esta passa a ser denominada de clula B imatura.
IgM
B imatura
Todo esse estgio de maturao ocorre no interior da medula ssea e independente de estimulao por qualquer antgeno. Nesse estgio, as clulas imaturas esto sujeitas seleo para a IgM B madura tolerncia aos antgenos do prprio corpo e para a sua capaciIgD dade de sobreviver no sangue perifrico. Somente clulas B com essa capacidade podem deixar a medula ssea e chegar ao sangue perifrico. Clulas que interagem com antgenos prprios Plasmcito (autorreativas) sofrem um processo denominado deleo B de memria clonal e entram em apoptose. Clulas que no interagem com autoantgenos passam a coexpressar tambm em sua superfcie uma molcula de IgD (com cadeia pesada delta ) ou IgM IgG, IgA, juntamente com a molcula de IgM, passando a chamar-se ou IgE clulas B maduras, tambm conhecidas como clulas B virgens. Assim, essas clulas podem permanecer em circulao Figura 3.1 Diferenciao dos linfcitos B ou alojadas em rgos linfoides at que sejam estimuladas dependente da expresso da molcula de imunoglobulina. (Adaptado de BENJAMINI pela ligao a um antgeno (Figura 3.1).
et al., 2002, p. 80).
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Imunologia
A produo diria de 10-20 x 106 novas clulas B corresponde somente a 5-10% das clulas B que vo para o sangue perifrico e os rgos linfoides, ou seja, 90 a 95% dessas clulas morrem diariamente. Cinquenta por cento das clulas maduras que chegam ao sangue perifrico sobrevivem aproximadamente trs dias. O restante sobrevive um pouco mais de tempo, sem ser estimulado por antgenos, principalmente se adentrar nos folculos linfoides dos rgos linfoides. Mas essas clulas s tero vida longa caso sejam estimuladas por antgenos. Os resultados importantes da ativao do linfcito B so a expanso clonal, com a gerao de linfcitos B de memria e clulas plasmticas (ou plasmcitos). Quando um linfcito B ativado por um antgeno, a primeira resposta a produo de IgM, comeando a aparecer no sangue perifrico do indivduo aps cinco a dez dias da estimulao (Figura 3.2). Portanto, percebam que, aps uma infeco, demoramos um tempo para detectar anticorpos no soro do indivduo, a isso denominamos janela imunolgica, ou seja, o indivduo est com uma infeco, mas ainda no pode ser diagnosticado pelo teste sorolgico (deteco de anticorpos no soro). Nessa fase o indivduo pode estar infectando outros sem que saiba de sua doena. Em alguns casos, como, por exemplo, na infeco pelo vrus HIV, isso muito srio e disso falaremos mais tarde no captulo sobre o HIV. A durao da janela imunolgica varivel e depende do antgeno em
Clula B Virgem IgM IgG IgG Clulas de Memria Pool de Memria Clulas de Memria IgG Clulas de Memria Figura 3.2 Seleo e expanso clonal de linfcitos B aps o contato com o antgeno, com gerao de LB de memria. (Adaptado de MAYER, 2010). IgM
1o Ag
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questo. A primeira imunoglobulina detectada no soro de classe IgM chamada de imunoglobulina de resposta imune primria, e, aps alguns dias de seu aparecimento, a classe da imunoglobulina ser alterada. Isso ser discutido no captulo em que discorreremos sobre as classes das imunoglobulinas e seu papel fisiolgico. O papel dos linfcitos B na proteo do hospedeiro pode ser exemplificado atravs de uma doena geneticamente rara conhecida como agamaglobulinemia ligada ao cromossomo X. Crianas portadoras dessa sndrome no possuem linfcitos B circulantes. Nenhum linfcito B significa nenhum anticorpo, e os pacientes sofrem de infeces recorrentes das vias areas superiores e inferiores, alm de enterites e m absoro de nutrientes. A mortalidade se relaciona principalmente a doenas pulmonares crnicas e infeces virais do sistema nervoso central.
3.2 Estrutura e funo dos anticorpos

Quando a frao do sangue constituda pelo soro (sangue coletado sem a presena de anticoagulante) ou pelo plasma (sangue coletado em presena de anticoagulante) submetida a uma eletroforese simples e no desnaturante (separao de protenas num campo eltrico), as protenas ali presentes podem ser separadas de acordo com a carga positiva ou negativa dos aminocidos que as constituem (Figura 3.3). Dentre as protenas solveis presentes no sangue destacam-se a albumina (a mais abundante) e as globulinas (divididas em fraes Alfa, Beta e Gama globulinas). Dentre essas, a frao gamaglobulina do soro apresenta majoritariamente propriedades que contribuem especificamente para a imunidade e a proteo contra uma substncia estranha. Podemos assim dizer que essas so glicoprotenas solveis que apresentam capacidade de ligar antgenos. Por terem essa funo, essas glicoprotenas so chamadas de anticorpos ou imunoglobulinas (Ig). A partir de agora vamos usar os dois termos como sinnimos neste captulo. Conforme j estudamos, as nicas clulas capazes de conter imunoglobulinas ligadas em sua membrana so os linfcitos B. Nessa fase a imunoglobulina presente na membrana da c-
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Imunologia
Catodo albumina Globulinas Absorbncia
Anodo
Ig- Ig- Ig- Ig-
Distncia migrada Figura 3.3 Migrao eletrofortica das protenas do soro. (Adaptado de MAYER, 2010). Figura 3.4 Estrutura do BCR. (Adaptado de MAYER, 2010).
lula B est associada com duas outras protenas dimricas chamadas de Ig/Ig. Esse conjunto todo que ir permitir ao antgeno a sua ligao especfica na Ig e tambm a estimulao dessa clula B, anteriormente chamada de LB virgem. Esse conjunto denominado receptor de clula B ou, conforme o termo em ingls, BCR (B Cell Receptor) (Figura 3.4). J os anticorpos secretados no sangue so produzidos pelos plasmcitos, que na verdade so os linfcitos B em seu estgio final de diferenciao e que servem como verdadeiras fbricas de anticorpos.
3.2.1 Estrutura da molcula de imunoglobulina

Em 1959, tiveram incio os estudos para determinar a estrutura-chave da molcula de imunoglobulina. Um dos experimentos envolveu a clivagem da molcula com enzimas proteolticas. A enzima papana cliva a molcula de imunoglobulina em trs fragmentos aproximadamente iguais. Ao serem isolados, descobriu-se que dois desses fragmentos retinham a capacidade de se ligar ao antgeno de forma altamente especfica. Eles foram ento nomeados de Fab (fragment antigen binding ou fragmentos ligantes de antgenos). O terceiro fragmento era homogneo e sua purificao
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permitiu que fosse cristalizado em uma soluo. Isso o levou a ser batizado como Fc (fragmento cristalizvel). Embora esse fragmento no ligue antgenos, ele o responsvel pelas funes biolgicas da imunoglobulina, como ligar em diversos tipos celulares. Outro experimento-chave para desvendar a estrutura da Ig foi feito por exaustivos tratamentos qumicos com mercaptoetanol, um agente capaz de reduzir pontes dissulfdicas das protenas. Esse tratamento levou ao isolamento de todas as cadeias de imunoglobulinas, e concluiu-se que ela composta de duas cadeias idnticas de peso molecular de aproximadamente 53.000 dltons cada uma e outras duas cadeias idnticas de 22.000 dltons. As cadeias maiores foram batizadas de pesadas (o termo Heavy em ingls e a sigla, portanto, H) e as cadeias menores, de leves (o termo Light em ingls e a sigla, portanto, L) (Figura 3.5). Dois pesquisadores, Porter, por descobrir as pores Fab e Fc, e Edelman, por descobrir as cadeias H e as cadeias L, dividiram o Prmio Nobel por elucidarem a estrutura da molcula de Ig.
Papana Fab Ligao Ag Valncia = 1 Especicidade determinada por VH e VL Fc Funes efetoras Fab Figura 3.5 Fragmentos da imunoglobulina: relao estruturafuno. (Adaptado de MAYER, 2010).
Fc
De acordo com o modelo proposto, todas as molculas de Ig so constitudas por uma unidade bsica (monmero) de quatro cadeias polipeptdicas, duas cadeias H idnticas e duas cadeias L idnticas, conectadas entre si por ligaes bissulfdicas e contendo mais ou menos resduos de carboidratos associados a elas. importante ainda ressaltar que o monmero de Ig possui regies denominadas de constantes (C) onde se concentram as propriedades biolgicas da classe de Ig e so idnticas para todos os anticorpos
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de uma mesma classe e de uma regio varivel (V), que ser o stio de ligao da Ig ao eptopo antignico (Figura 3.6).
Ponte dissulfeto
Atravs do uso combinado de tcnicas bioqumicas e sorolgicas foi demonstrado que, em quase todas as espcies de animais CL estudadas, so encontrados dois tipos de cadeias leves, conhecidos como kappa () e VL lambda (). Cada indivduo de uma espcie CH1 produz as duas classes de cadeias L, e , sendo encontrada num monmero de Ig a VH cadeia L (aproximadamente em dois teros dos casos) ou a cadeia (o tero restante), e nunca os dois tipos juntos. Com relao s cadeias H, foi demonstrado que em todas as espcies so encontradas cinco classes de imunoglobulinas diferentes. Essas cadeias H diferem umas das outras quanto sua quantidade de carboidratos associados, ao peso molecular, ao nmero de ligaes bissulfdicas e, principalmente, funo biolgica da Ig. Essas cadeias so conhecidas pelas letras gregas mi (), delta (), gama (), alfa () e psilon (). Elas so denominadas isotipos de imunoglobulinas, sendo, respectivamente, conhecidas como IgM, IgD, IgG, IgA e IgE (Figura 3.7). A natureza de cada um desses isotipos de Ig definido pela cadeia H vai conferir propriedades como meia-vida em circulao, habilidade para ativar outras protenas e capacidade de se ligar em receptores em outras clulas aps ligar-se com o antgeno. Com relao IgG e IgA, foram ainda definidas subclasses distintas com modificaes estruturais e biolgicas sutis entre elas. IgG assim subdividida em IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4, e as IgA, em IgA1 (93%) e IgA2 (7%).
Carboidrato
CH2 Regio de dobradia
CH3
Figura 3.6 Estrutura bsica do monmero de imunoglobulina. (Adaptado de MAYER, 2010).
3.2.2 Importncia da regio varivel da Ig

O grande desafio dos imunologistas era desvendar a pergunta de como a regio varivel podia gerar tantas especificidades individuais capazes de ligar uma variedade muito grande de eptopos antignicos distintos. Seriam mais de 107 possibilidades distintas de regies variveis capazes de interagir virtualmente com qualquer antgeno com que o indivduo viesse a entrar em contacto em sua vida.
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IgG
Monmero (7S)
IgG1, IgG2 e IgG4
IgG3
IgD
IgE
Monmero Poro da cauda
Monmero Domnio extra (CH4)
Poro da cauda
C4
IgM
IgA
Pentmero (195) Domnio extra (CH4) Cadeia J

Cadeia J
Soro - monmero Secrees (sIgA)
Dmero (115) Cadeia J Componente secretor
C4 Poro secretora Cadeia J
Figura 3.7 Estrutura de todas as classes de imunoglobulinas. (Adaptado de MAYER, 2010).
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Imunologia
3.3 Diversidade gentica

De uma forma bem simplificada, a expresso dos genes que codificam a molcula de Ig que a responsvel por essa enorme diversidade que permite a ligao dos mais distintos antgenos. Os genes que codificam para as pores constantes e variveis das Igs so constitudos por um complexo gnico dividido em pores (chamadas de segmentos ou fragmentos gnicos), que, quando corretamente agrupadas, originaro o gene final responsvel pela transcrio do RNA mensageiro codificador da protena final. Temos o grupo de segmentos gnicos que codificam para a regio varivel da molcula (chamados de V); genes que codificam a regio constante (C); genes responsveis pela parte da molcula que faz a juno dessas duas regies (chamados de J); e ainda genes que fazem uma contribuio adicional diversidade da molcula (chamados de D). Esses genes de cadeias leves e e genes de cadeias pesadas encontram-se ainda em cromossomos distintos dentro da espcie humana, sendo o cromossomo 2 para a cadeia , o cromossomo 22 para a cadeia e o cromossomo 14 para a cadeia pesada. Imaginem que, somente para a cadeia pesada, existem cerca de 250 a 1.000 segmentos gnicos V, aproximadamente 12 segmentos gnicos D e 4 segmentos J. Cada encontro de um segmento V, D, J e C forma uma cadeia pesada distinta. Assim, podemos fazer a conta aproximada de 1.000 x 12 x 4 = 48.000, que, quando combinados com genes de cadeias leves e , chegam a 55 milhes de RNA transcritos que geraro essa quantidade de molculas de Ig distintas para cada antgeno (Figura 3.8).
3.4 Troca de classe de imunoglobulina

Conforme j estudamos, a IgM ser a primeira Ig a aparecer na superfcie do LB e a expresso dessa molcula, associada finalmente coexpresso de IgD, far parte do processo de maturao dessas clulas na medula ssea. Assim, todo e qualquer eptopo antignico ir interagir inicialmente com uma IgM na superfcie do LB maduro e virgem, por isso chamamos essa Ig de resposta imune primria. Quando essa interao acontece, dizemos que essa
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Genes de cadeia pesada; Vn = 1000, Dn = 15 L P V1 P C L V2 P C C3 C1 C2 C4 C C1 C2 L Vn D1 D2 D3 Dn J1 J2 J3 J4 J5 E
CH1 H CH2 CH3 CH4
Genes de cadeia leve de lambda; n = 30 L P V1 P L V2 P L Vn J1 C1 J2 C2 J3 E E E C3 J4 E C4
Genes de cadeia leve de kappa; n = 300 L P V1 P L V2 P L Vn J1 J2 J3 J4 J5 E C
Figura 3.8 Segmentos gnicos de cadeia pesada e cadeia leve das imunoglobulinas responsveis pela diversidade gentica dessas molculas. As linhas que separam as caixas coloridas representam os ntrons que no so traduzidos em protenas. (Adaptado de MAYER, 2010).
clula B deixa de ser virgem e passa a ser uma clula ativada. Uma das consequncias dessa ativao a mudana da classe de cadeia pesada expressa pelo linfcito B ativado. Isso vai fazer com que a clula B passe a expressar, alternativamente IgM, as molculas de IgG, IgA ou IgE durante a resposta imune secundria, sem que isso altere a especificidade da interao com o eptopo antignico
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Imunologia
que antes se ligava IgM. Uma coisa interessante que ocorre que os anticorpos da classe IgM produzidos aps a interao primria com o antgeno tendem a ter uma baixa afinidade com o antgeno. Entretanto, a afinidade da IgG ou de outra classe de Ig de resposta imune secundria ser muito maior, e a isso denominamos maturao de afinidade. A seguir vamos estudar as funes biolgicas e um pouco mais das caractersticas estruturais de cada uma das classes de Ig.
3.4.1 Imunoglobulina M (IgM)

Conforme j explicado exaustivamente, a IgM a primeira Ig a ser sintetizada pelo LB no seu processo de maturao. Quando presente na superfcie dessa clula, denominada sIgM ou IgM de superfcie celular. Assim que comea a ser excretada pelo plasmcito, essa Ig passa a ser produzida como um pentmero, composto de cinco monmeros idnticos de Ig. Isso significa que essa Ig possui dez stios funcionais para ligar ao antgeno e um potente ativador das protenas de complemento, das quais falaremos mais tarde. Isso uma vantagem fundamental da resposta imune primria. Nveis elevados de IgM no soro normalmente indicam uma infeco recente ou uma exposio recente ao antgeno. A IgM no consegue atravessar a placenta, mas a nica classe de imunoglobulina sintetizada pelo feto a partir do quinto ms de gestao. Nveis elevados de IgM no feto podem indicar a presena de uma infeco congnita no beb em formao. Em consequncia dessa estrutura pentamrica, que compensa a menor afinidade ao antgeno, as IgM so anticorpos com funo aglutinadora muito eficiente, ou seja, formam pontes entre eptopos antignicos, fazendo com que os antgenos se aglutinem e sejam mais facilmente fagocitados pelas clulas fagocticas. Conforme estudado no captulo de grupos sanguneos, os anticorpos IgM incluem as chamadas isoemaglutininas naturais contra os antgenos das hemcias dos grupos sanguneos ABO. Assim, reaes de transfuso resultantes de incompatibilidade ABO podem ter consequncias desastrosas quando os anticorpos presentes no receptor reagem com as hemcias recebidas do doador.
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3.4.2 Imunoglobulina D (IgD)

Conforme j estudado, a IgD coexpressa com a IgM na superfcie dos linfcitos B maduros e sua presena serve como um marcador da diferenciao de clulas B maduras. Essa a menos caracterizada das imunoglobulinas do ponto de vista funcional. Est presente no soro em concentraes muito baixas como consequncia de no ser excretada pelos plasmcitos e de ser extremamente vulnervel digesto por enzimas proteolticas, sendo rapidamente degradada. Sua funo parece estar mais relacionada com a eliminao de clulas B capazes de reagir com autoantgenos, ou seja, pode deixar as clulas B autorreativas anrgicas (sem reao), sendo essas posteriormente eliminadas.
3.4.3 Imunoglobulina G (IgG)

Esta a imunoglobulina mais frequente e presente no sangue (constitui 15% das protenas totais do plasma), na linfa e no lquido cerebroespinhal e peritoneal. As IgG1, IgG2 e IgG4 apresentam a maior meia-vida no soro de todas as outras Igs (cerca de 23 dias). A IgG tem a propriedade de opsonizar patgenos de forma muito eficiente, tornando-os mais facilmente fagocitveis. Muitas clulas fagocticas (macrfagos e polimorfonucleares) possuem receptores para a poro Fc da IgG. Essas clulas aderem as bactrias revestidas de anticorpo IgG atravs de seus receptores Fc. Isso leva ao engolfamento e morte do patgeno. As IgGs tambm ativam as protenas do Sistema Complemento. Conforme ser estudado, essas protenas ativadas podem lisar ou opsonizar os patgenos, levando a uma alta eficincia de sua eliminao. As molculas de IgG (com exceo do isotipo IgG2) so a nica classe de Ig capaz de atravessar a placenta, o que possibilita me transferir sua imunidade ao feto, passando a ele uma resistncia considervel a vrias infeces. Somente trs ou quatro meses aps o nascimento, quando o nvel de IgG materna comea a cair, o recm-nascido comea a produzir suas prprias molculas de IgG. Conforme ser abordado no captulo 8 (Interao antgeno-anticorpo), a transferncia de IgG materna de mes Rh negativo sensibilizadas com sangue Rh positivo para bebs Rh positivo pode levar a consequncias desastrosas de anemia hemoltica ao beb.
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Imunologia
Outra caracterstica importante das IgGs a sua capacidade de neutralizar toxinas de bactrias (ttano, botulismo etc.), toxinas de venenos (cobras e escorpies) e tambm vrus. Estando neutralizados, esses antgenos no podem entrar nas clulas-alvo e serem lesivos a elas, sendo assim inativados.
3.4.4 Imunoglobulina A (IgA)

Depois da IgG, a IgA a segunda imunoglobulina mais abundante. a principal imunoglobulina presente nas secrees externas como saliva, muco, urina, suor, suco gstrico, lgrimas, colostro e leite materno. Sendo assim, a IgA uma importante linha de defesa imunolgica primria contra infeces locais em reas como tratos respiratrio e gastrointestinal, alm de ser a principal fonte de proteo contra patgenos no intestino dos bebs. Em todos os tecidos secretrios, as IgAs apresentam forma dimrica, ou seja, duas unidades monomricas de Ig unidas por uma cadeia J que faz a juno delas da mesma forma como faz para os pentmeros de IgM. Essa constituio faz com que essa classe de Ig seja eficientemente transportada para a luz intestinal e bronquial e ainda confere a ela uma grande resistncia degradao por enzimas proteolticas, muito frequentes nos ambientes de mucosa. Como a molcula de IgA no contm receptores para o complemento, ela no pertence s imunoglobulinas ativadoras de complemento. Entretanto, possui atividade bactericida contra micro-organismos Gram-negativos, alm de inibir a penetrao de vrus em clulas hospedeiras. Isso porque as IgAs impedem a adeso das bactrias ou toxinas s clulas epiteliais.
3.4.5 Imunoglobulina E (IgE)

A IgE tambm conhecida como anticorpo reagnico e possui a meia-vida mais curta de todas as imunoglogulinas do soro (somente dois dias). Est presente no sangue e nos lquidos extracelulares em nveis extremamente baixos (na faixa de mg/ml), aumentando na resposta a infeces por parasitas e em indivduos atpicos (com algum tipo de alergia). Esses nveis muito baixos nos lquidos corpreos se devem a dois fatores: primeiro devido
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baixa taxa de sntese dessa classe de Ig e segundo porque a poro Fc da IgE tem afinidade de ligao extremamente alta em mastcitos e basfilos, podendo ficar retida por essas clulas por semanas ou meses, mesmo em ausncia do antgeno. Quando o antgeno reaparece, sua ligao poro Fab das IgEs j ligadas s clulas efetoras faz com que a ativao dessas clulas seja imediata. No caso dos mastcitos ativados pelo antgeno, iro liberar o contedo de seus grnulos citoplasmticos constitudos de histamina, prostaglandina, heparina e leucotrienos. Isso desencadeia reaes de hipersensilibidades agudas ou brandas ou mesmo choques anafilticos, de que trataremos mais tarde. A IgE tambm pode se ligar com afinidade mais baixa em eosinfilos, e isso oferece proteo contra determinados parasitas (como vermes). Essa proteo se d pela ativao de uma resposta inflamatria aguda. Nveis elevados de IgE podem ser observados no soro de indivduos com infeces por Ascaris (lombrigas).
3.5 Ativao das protenas do Sistema Complemento

Aprendemos neste captulo que as IgG e as IgM so imunoglobulinas capazes de ativar as protenas do Sistema Complemento e que essa ativao muito importante na defesa do organismo. Mas, afinal, o que so essas protenas presentes no nosso sangue, por que elas so chamadas de complemento e qual a sua real importncia na nossa defesa? Muito bem, isso foi desvendado no final do sculo XIX, quando os cientistas que estudavam a reao do corpo s infeces por bactrias observavam que, se as bactrias fossem injetadas na circulao de cobaias e o sangue dos animais fosse retirado posteriormente, essas bactrias desapareciam da circulao. O mesmo experimento foi feito in vitro quando descobriram que o soro de animais que tinham sido infectados com um micro-organismo podia, a seguir, aglutinar (ou seja, agregar) e, aps, lisar as mesmas bactrias em um tubo de ensaio. Essa lise era inibida pelo preaquecimento do soro a 56oC por 30 minutos, o que comprovava a sua
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Imunologia
fragilidade. Isso no era devido ao decaimento ou inativao dos anticorpos presentes nesse soro, j que eles eram estveis ao aquecimento. Essa atividade era restabelecida quando se adicionava soro fresco de animais no imunizados, o que comprovava que elas no eram especficas para um determinado antgeno. Concluiu-se, ento, que deveriam existir no soro componentes termossensveis que complementariam a funo ltica desse soro. Por essa razo, esses componentes foram designados complemento. Hoje j se sabe que o complemento no uma nica protena, mas sim um sistema de protenas funcionalmente ligadas que interagem umas com as outras de uma forma altamente regulada. Essas protenas so enzimas proteolticas inativas (zimgenos) que se tornam sequencialmente ativadas a partir do momento em que so clivadas. A ativao s ocorre em stios localizados e finamente regulada por vrias protenas associadas s membranas celulares, que inibem a sua ativao em mltiplos passos. Esse sistema est composto de aproximadamente 30 protenas sintetizadas no fgado e de macrfagos e tem incio de sntese no primeiro trimestre da vida fetal. H trs maneiras para ocorrer ativao (Figura 3.9): via clssica, depende de formao do complexo antgenoanticorpo; via alternativa; e via das lectinas.
Via clssica Dependente de anticorpo Via da lectina Via alternativa
Independente de anticorpo Ativao de C3 e Gerao de C5 convertase Ativao de C5 Via do ataque ltico
Figura 3.9 Vias de ativao das protenas de complemento. (Adaptado de MAYER, 2010).
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As funes gerais dessas protenas so: a) citlise: atravs do Complexo de Ataque Membrana (MAC) formam-se poros na membrana do antgeno-alvo, rompendo a integridade da bicamada lipdica da membrana plasmtica; b) opsonizao: atravs de C3b, opsonizao de micro-organismos estranhos ou mesmo de partculas. Os leuccitos fagocticos possuem receptores especficos para essas opsoninas; c) ativao de mediadores de inflamao: componentes C4a, C3a e C5a so mediadores de processos inflamatrios, ativam mastcitos e aumentam a permeabilidade vascular. Os receptores para C3a e C4a esto expressos na superfcie dos mastcitos, dos basfilos, das clulas da musculatura lisa e dos linfcitos. Os receptores para C5a esto localizados na superfcie dos mastcitos, dos neutrfilos, dos moncitos/macrfagos e das clulas endoteliais. Os principais efeitos provocados pela ligao das anafilatoxinas na superfcie dos mastcitos e dos basfilos so a exocitose de grnulos tais como histamina, que aumenta a permeabilidade vascular e estimula a contrao da musculatura lisa visceral e da musculatura lisa em geral. C5a o mais potente mediador desses efeitos, C3a 20 vezes menos potente e C4a 2.500 vezes menos potente. C5a tambm age estimulando a liberao de TNF, atua diretamente no endotlio das clulas vasculares incentivando a contrao, causa extravasamento e exocitose vascular e estimula neutrfilos promovendo a quimiotaxia, contribuindo para aumentar a resposta inflamatria provocada pela ativao do complemento; e d) limpeza de imunocomplexos: os imunocomplexos opsonizados encontram receptores na superfcie dos eritrcitos que podem carre-los ao bao e fgado para fagocitose. Quando presentes na circulao, os imunocomplexos podem se acumular em pequenos vasos e danificar os tecidos por mediarem a liberao de enzimas proteolticas pelos macrfagos ativados por esses complexos.
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Imunologia
3.5.1 Via clssica

Essa forma de ativao em cascata ativada pela interao entre o antgeno e o anticorpo (que fique claro que tem que ser IgG ou IgM), formando o complexo antgenoanticorpo. Esse complexo provoca uma mudana conformacional na molcula do anticorpo, que, por sua vez, permite a ligao do primeiro componente do complemento denominado C1 (composto de trs subunidades C1q-C1r2-C1s2). Essa ligao requer pelo menos uma molcula de IgM ligada ao antgeno ou no mnimo duas molculas de IgG. Entre as imunoglobulinas humanas, a ordem crescente de ligar-se e ativar C1 IgM>IgG3>IgG1>IgG2, ou seja, IgG2, IgA, IgE e IgD no se ligam ou ativam C1. Uma vez ativada, a enzima C1s atua sobre dois componentes seguintes dessa cascata: C4 (clivado em C4a e C4b) e C2 (clivado em C2a e C2b). Quando os dois fragmentos de maior tamanho (C4b e C2b) se unem na superfcie do antgeno, forma-se o complexo C4b2b, que chamado de complexo C3convertase da via clssica (Figura 3.10). Sua atividade mais importante clivar um grande nmero de molculas de C3 em C3b e C3a. Essas molculas de C3b recobrem (opsonizam) a superfcie do patgeno (antgeno), ao mesmo tempo que os componentes C4a e C3a (principalmente) iniciam uma resposta inflamatria local. Nesse ponto, o patgeno revestido de C3b pode ser fagocitado pelas clulas fagocticas que reconhecem C3b por terem receptores para ele em sua superfcie (desses, o receptor CR1 o mais bem caracterizado). Caso a fagocitose no seja completa ou totalmente eficiente, o prximo passo na cascata a produo de C5-convertase formada pela juno de C3b, C4b e C3b (C3b4b3b) na superfcie do patgeno. Isso provoca a clivagem do componente C5, marcando o incio da montagem dos componentes terminais para formar o Complexo de Ataque Membrana do patgeno. C5 clivado nos componentes C5a (outro componente inflamatrio importante) e C5b, este iniciando a montagem do ltimo componente do complemento e sua insero na membrana do patgeno (Figura 3.11).
67
C1s ativado cliva C4 em C4a e C4b

C4 C1s C4a
C4b liga em C2 que clivado por C1s formando C4b2b

C2 C2a
C4b2b uma C3 convertase ativa e cliva C3 em C3a e C3b
Uma molcula de C4b2b pode clivar at 1.000 molculas de C3 sendo que C3b uma opsonina
C3
C3
C3a
C3a
C4b
C4b, 2b
C4b, 2b
C3b
C4b, 2b, 3b
C3b
Figura 3.10 Ativao das protenas de complemento at a formao de C5-convertase e opsoninas de C3b. (Adaptado de MURPHY et al., 2008, p. 66).
C3b liga-se em C4b2b (Via Clssica) e em C3bBb (Via Alternativa) e forma C5 convertase (C4b2b3b ou C3bBb3b)
C5 liga-se em C5 convertase
C5 clivado em C5a e C5b

C5a C5b C5a C5b C3b C4b, 2b C3b, Bb
C5 C3b C4b, 2b C3b, Bb C3b C4b, 2b C3b C3b, Bb
C5 C3b
Figura 3.11 Ativao do Sistema Complemento pelas vias clssica e alternativa at a formao de C5a e C5b. (Adaptado de MURPHY et al., 2008, p. 73).
Primeiro, uma molcula de C5b liga-se a uma de C6, formando C5C6. Essa ligao ativar o componente C7, que ir se inserir na bicamada lipdica do patgeno e, ao mesmo tempo, permitir a exposio de stios hidrofbicos de C8 e C9. C9 na verdade ir polimerizar-se atravs da unio de 10 a 16 molculas de C9, formando um poro na membrana e permitindo a passagem livre de solutos e gua atravs da bicamada lipdica (Figura 3.12). Essa ruptura da bicamada leva perda da homeostase celular, penetrao de enzimas hidrolticas e morte do patgeno.
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Imunologia
C5b liga-se em C6 e C7
C7
Complexo C5bC6C7 insere-se no patgeno atravs de C7
C8 liga-se ao complexo inserindo-se na membrana
Molculas de C9 so atradas e polimerizam
10-16 molculas de C9 unem-se e formam um poro transmembrnico
C6 C5b
C8
C9
Leses de membrana por poros
Leses laterais de membrana
Representao esquemtica de um poro
15nm 10nm
3nm
Figura 3.12 Formao do Complexo de Ataque Membrana (MAC). (Adaptado de: MURPHY et al., 2008, p. 77).
importante dizer que, dos trs componentes (C4a, C3a e C5a) que provocam reaes inflamatrias, o componente C5a o mais estvel e o que possui a maior atividade biolgica. Esses componentes induzem contrao de musculatura lisa, aumentam a permeabilidade vascular e ativam mastcitos, por isso eles so chamados de anafilatoxinas do Sistema Complemento, j que sua injeo sistmica pode conduzir ao choque anafiltico.
3.5.2 Via das lectinas

Esta via de ativao considerada similar via clssica, mas no necessita da formao do complexo antgenoanticorpo e nem dos componentes iniciais C1, C4 e C2. Dessa via participam as lectinas do soro, que so ligantes de resduos de manose da superfcie de alguns patgenos. Essas so chamadas de MBL (Manose Binding Proteins), que se ligam aos resduos de carboidratos na superfcie da bactria ou outra substncia e passam por uma mudana conformacional. Dessas protenas, as chamadas MASP1
69
e MASP2 (Manose Binding Associated Proteins) tornam-se ativadas e clivam C4 e C2 (ou seja, mimetizam C1r e C1s) para formar C4b2b. A partir dessa formao do complexo C3-convertase, essa via se comporta de forma idntica via clssica.
3.5.3 Via alternativa

Conforme j comentado, o componente C3 bastante abundante no soro e, durante algumas infeces, pode ocorrer uma hidrlise espontnea desse componente, gerando C3(H2O). Essa conformao alterada de C3 permite sua ligao a um componente do soro denominado Fator B. A unio do fator B ao C3(H2O) permite que uma protease plasmtica denominada fator D clive o fator B, gerando Ba e Bb. Forma-se um complexo C3(H2O) Bb que uma C3-convertase solvel (no ligada superfcie do patgeno), mas que capaz de gerar a clivagem de muitas molculas de C3, levando formao de muitas molculas de C3b e C3a. Muitas molculas de C3b geradas so rapidamente clivadas, mas outras permanecem ligadas ao patgeno, unem fator B e formam C3bBb, que uma C3-convertase ativa que cliva C3, gera muitas molculas de C3b e C3a e, portanto, um feedback positivo de formao dessas opsoninas (C3b) e anafilatoxinas (C3a). Quando se forma o complexo C3bBb3b na superfcie do patgeno, ele denominado C5-convertase da via alternativa. Isso vai levar clivagem de C5 em C5a e C5b e posterior formao de MAC, com lise do patgeno, como nas outras vias de ativao (Figura 3.13).
3.5.4 Decincias do complemento

As deficincias das protenas de complemento podem ser genticas, mas mesmo indivduos normais tambm podem ter alguma deficincia. As deficincias genticas podem ser em nvel de C1q, C1r, C4, C2, C3, properdina e Fator D. A deficincia de C3 pode ser muito grave e estar associada com infeces bacterianas piognicas que podem ser fatais. As deficincias dos primeiros componentes do complemento podem estar associadas com doenas autoimunes como lpus eritematoso sistmico SLE
70
Imunologia
Os pequenos componentes do complemento atuando nos vasos e aumentando a permeabilidade vascular
C4a C5a C3a
A
Extravasamento de uidos, molculas de Ig e de complemento para os tecidos IgG Migrao de macrfagos, PMNs e linfcitos aumentam a atividade microbicida
IgM
B
Pequenos complexos Ag/Ac em circulao ativam complemento Ligaes de C3b ligado aos complexos Ag/Ac ao seu receptor CR1 na superfcie de eritrcitos
C1q
Figura 3.13 (A) Funo dos pequenos componentes do complemento em promover reaes inamatrias e aumentar a fagocitose. (B) Funo de C3b atuando tambm na limpeza de pequenos imunocomplexos, evitando que eles se depositem em pequenos vasos e outros locais do corpo. (Adaptado de MURPHY et al., 2008, p. 76 e 409).
Muitas molculas de C3b ligam-se nestes complexos Ag/Ac C3b
No bao e no fgado as clulas fagocticas removem os complexos Ag/Ac
C4b,2b,2b
71
(mais de 50% dos pacientes com deficincia em C2 e C4 so portadores de SLE). As deficincias em nvel de C5, C6, C7, C8 e C9 tambm foram descritas. Esses pacientes no podem formar MAC e, consequentemente, no lisam micro-organismos invasores.
3.5.5 Regulao da cascata de ativao do complemento

As clulas dos mamferos, em condies normais, expressam protenas reguladoras que inibem a ativao do complemento. Dessas protenas destacam-se o Fator H, que desloca o Bb impedindo a formao de muitos C3-convertases; o Fator I, que cliva C3b gerado; e o fator de acelerao do decaimento (DAF), que compete com o fator B pela unio ao C3b, deslocando tambm o Bb de uma C3-convertase que acabou de se formar. Tudo isso ocorre para impedir uma leso das clulas do hospedeiro mediada pelo complemento.
Resumo
Dentre os papis dos LB aprendemos que o principal deles o de produzir anticorpos contra antgenos-alvo apropriados. Mas essas clulas tambm podem apresentar antgenos aos linfcitos T e proporcionar sinais para a sua ativao. Sendo assim, as molculas de reconhecimento de antgenos que ficam na superfcie das clulas B so as imunoglobulinas ou Ig, popularmente conhecidas como anticorpos. Os estgios de diferenciao dessas clulas, que no incio so clulas-tronco, depois passam a progenitores linfoides, depois a clulas pr-B, pr-B, imaturas e maduras, tm uma ntima relao com a imunoglobulina que ser expressa em sua superfcie. Clulas B no estimuladas por antgenos sero mortas rapidamente, e os resultados importantes da ativao do linfcito B so a expanso clonal, com a gerao de linfcitos B de memria (clulas de vida longa), e as clulas plasmticas (ou plasmcitos), secretoras de anticorpos. Com relao estrutura das molculas de imunoglobulinas, aprendemos que todas as molculas de Ig so constitudas por uma unidade bsica (monmero) de quatro ca-
72
Imunologia
deias polipeptdicas, duas cadeias H idnticas e duas cadeias L idnticas, conectadas entre si por ligaes bissulfdicas e contendo mais ou menos resduos de carboidratos associados a essas cadeias. Dois tipos de cadeias leves (kappa- e lambda-) so conhecidos, mas o que determina a presena de cinco classes diferentes de imunoglobulinas so as cadeias pesadas. Essas cadeias so conhecidas pelas letras gregas mi (), delta (), gama (), alfa () e psilon (). Elas so denominadas isotipos de imunoglobulinas, sendo, respectivamente, conhecidas como IgM, IgD, IgG, IgA e IgE. A natureza de cada um desses isotipos de Ig definido pela cadeia H vai conferir propriedades como meia-vida em circulao, habilidade de ativar outras protenas e capacidade de se ligar com receptores em outras clulas aps se ligar com o antgeno. Dessas imunoglobulinas, as IgG e as IgM so aquelas capazes de ativar as protenas do Sistema Complemento, e essa ativao muito importante na defesa do organismo. As principais funes dessas protenas so citlise, atravs do Complexo de Ataque Membrana (MAC) formam-se poros na membrana do antgeno-alvo, rompendo a integridade da bicamada lipdica da membrana plasmtica; opsonizao, atravs de C3b ocorre a opsonizao de micro-organismos estranhos ou mesmo de partculas; ativao de mediadores de inflamao, componentes C4a, C3a e C5a so mediadores de processos inflamatrios, ativam mastcitos e aumentam a permeabilidade vascular; e limpeza de imunocomplexos: os imunocomplexos opsonizados encontram receptores na superfcie dos eritrcitos que podem carre-los ao bao e fgado para fagocitose.
Referncias
BENJAMINI, E.; COICO, R.; SUNSHINE, G. Imunologia. 4. ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2002. p. 80. JANEWAY, C. et al. Imunobiologia: o sistema imune na sade e na doena. 6. ed. Porto Alegre: Artmed, 2005. MAYER, Gene. Imunoglobulinas estrutura e funo. University of South Carolina. Disponvel em: <http://pathmicro.med.sc.edu/ Portuguese/immuno-port-chapter4.htm>. Acesso em: 10 mar. 2010.
73
MURPHY, Kenneth; TRAVERS, Paul; WALPORT, Mark. Janeways immunobiology. 7. ed. Garland Science, 2008. p. 66; 73; 76; 77 e 409. PEAKMAN, M.; VERGANI, D. Imunologia bsica e clnica. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 1999.
C A P T U LO 4
Linfcitos T, citocinas e MHC

Neste captulo conheceremos a biologia dos linfcitos T. Essas clulas so essenciais na eliminao de uma srie de micro-organismos que invadem o nosso organismo, conferindo um tipo de imunidade que conhecido como resposta imune mediada por clulas ou imunidade celular. Para que vocs possam compreender como os agentes infecciosos so eliminados pela ativao desse tipo de resposta, torna-se imprescindvel o conhecimento sobre os principais estgios do desenvolvimento celular, as propriedades funcionais, assim como o preponderante envolvimento do Complexo Principal de Histocompatibilidade e das citocinas.
C A P T U LO 4
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4.1 Introduo
Os linfcitos T so clulas que atuam na resposta imune especfica e so responsveis por uma imunidade denominada celular ou mediada por clulas, isso porque h um significativo envolvimento de diferentes subpopulaes de linfcitos T, diferentemente, portanto, da imunidade humoral (ou mediada por anticorpos), em que na fase efetora se observa a participao de molculas de anticorpos. Os linfcitos T, devido s suas propriedades estruturais, funcionais e consequente capacidade de interaoregulao com as demais clulas do sistema imune, conferem aos organismos distintos mecanismos imunes que podem contribuir eficazmente com a eliminao de patgenos que se utilizam da maquinaria intracelular dos organismos hospedeiros. Contudo, para que possamos entender como essas clulas atuam e interagem no sistema imune, preciso conhecer, inicialmente, a biologia dessas clulas. Vamos, ento, compreender o processo de maturao dessas clulas. No timo, os linfcitos T, ainda imaturos, passam por um processo complexo denominado de educao celular ou seleo tmica. Essa seleo tmica envolve diferentes etapas, conhecidas como seleo positiva e negativa. O que acontece com as clulas durante a seleo positiva e negativa no timo e qual a importncia desse processo no desenvolvimento celular?
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Imunologia
Ao adentrar no timo, na zona subcapsular desse rgo, as clulas progenitoras apresentam um fentipo triplo negativo. O que isso quer dizer? Isso significa que essas clulas no expressam molculas de superfcie celular, ou seja, CD3/TCR, CD4 ou CD8. Essas estruturas, como vocs estudaro detalhadamente adiante, so elementos de superfcie celular e fundamentais para o funcionamento delas. Vamos prosseguir com esse entendimento: em contato com o estroma tmico (clulas epiteliais), observase nas clulas triplas negativas o rearranjo dos genes / ou / do TCR (TCR, do ingls, T Cell Receptor, que significa receptor da clula T), assim como tambm a sua diferenciao em clulas duplas positivas (CD4+CD8+). Nessa etapa, cabe destacar a possibilidade da gerao de duas populaes de clulas T, uma que expressa o receptor para o antgeno / e outra que expressa o receptor para o antgeno /. Na seleo positiva, os linfcitos duplo positivos, anteriormente citados, precisam reconhecer, ainda, as molculas do Complexo Principal de Histocompatibilidade (MHC, do ingls, Major Histocompatibility Complex, que significa Complexo Principal de Histocompatibilidade) presentes em clulas epiteliais do crtex do timo, com baixa avidez. Devido sua importncia, estudaremos a estrutura e a funo desse complexo mais adiante. A interao de um linfcito T duplo positivo (CD4+CD8+) com uma clula epitelial tmica que apresenta uma molcula de Classe I do MHC faz com que esse linfcito passe a expressar apenas a molcula CD8+ (linfcito T CD8+). Por outro lado, se a interao de um linfcito T duplo positivo ocorrer com uma clula epitelial tmica que apresenta uma molcula de Classe II do MHC, o linfcito passar a expressar somente a molcula CD4+. Na seleo negativa, os linfcitos T duplo positivos (CD4+CD8+) precisam estabelecer uma fraca interao com o complexo MHCpeptdeo da clula epitelial tmica. Caso a ligao entre o TCR dos linfcitos T e o complexo MHC-peptdeo da clula epitelial do timo seja de alta afinidade, espera-se que esses linfcitos sejam eliminados por apoptose (morte programada) (Figura 4.1).
TCR
TCR, ou receptores de clulas T (em ingls, T Cell Receptor), assim como as imunoglobulinas (Ig) ou anticorpos so receptores antgeno-especcos essenciais para a resposta imune. Esto presentes na superfcie externa dos linfcitos T (clulas T), mas diferem das imunoglobulinas.
Complexo Principal de Histocompatibilidade

Grupo de genes com mltiplos loci codicam glicoprotenas que podem ser observadas na superfcie das clulas e so denominados de antgenos leucocitrios humanos (HLA). So eles antgenos leucocitrios humanos de Classe I e de Classe II.
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Fgado fetal medula ssea
Timo Crtex Medula CD4+ CD8 TCR+
Periferia CD4+ CD8 TCR+ Linfcito T auxiliador CD4+
CD4 CD8 TCR CD4 CD8 TCR CD4+ CD8+ TCR Seleo positiva /negativa
CD4 CD8+ TCR+
CD4 CD8+ TCR+ Linfcito T auxiliador CD8+ CD4 CD8 TCR+ Clula T
CD4 CD8 TCR+
Seleo?
CD4 CD8 TCR+
Figura 4.1 Seleo positiva e negativa dos linfcitos T no timo. (Adaptado de ABBAS et al., 2007, p.178).
importante salientar que aproximadamente 95% dos linfcitos T duplo positivos no amadurecem. Somente o restante, 5%, liberado para a circulao. Esse processo de seleo positiva e negativa de extrema importncia, uma vez que favorece apenas a liberao das clulas que esto aptas a reconhecer antgenos no prprios. No texto anterior, foi explicado que durante esse processo de educao celular se observa o rearranjo gnico do TCR, ou seja, da estrutura que atuar como receptora para antgeno nas clulas T. Para uma melhor compreenso, vamos entender a estrutura e o funcionamento dos TCRs. Esses receptores fazem parte da superfamlia das imunoglobulinas, tendo uma estrutura semelhante das molculas de imunoglobulinas. A maioria dos linfcitos apresenta o receptor do tipo /.
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Imunologia
Como a estrutura desses receptores? Os receptores do tipo / so heterodmeros (dmeros), compostos de duas cadeias, uma denominada e outra denominada , ligadas por uma ponte SS. Cada cadeia apresenta duas regies, uma denominada de regio varivel e outra denominada de regio constante. Os receptores para antgeno do tipo / nos linfcitos T esto sempre expressos na membrana e associados glicoprotenas adicionais, como, por exemplo, com o CD3 e o CD4 ou com o CD3 e o CD8 (Figura 4.2). Receptor do tipo / apresenta caractersticas estruturais semelhantes s descritas anteriormente, exceto pela expresso das duas cadeias, e . Cabe a observao de que os linfcitos T expressam o receptor para antgeno do tipo / ou /, mas nunca ambos. A maioria dos linfcitos T presentes no sangue perifrico apresenta o receptor antgeno do tipo / e somente uma minoria, cerca de 1 a 3%,
TCR Espao extracelular CD3

S S
S S
CD3
S S S S
S S
S S
S S S
ss
S S S
Membrana plasmtica
Citoplasma
Figura 4.2 Estrutura do TCR. (Adaptado de ABBAS et al., 2007, p. 142).
81
apresenta o receptor do tipo /. Os linfcitos T com receptores do tipo / so encontrados na pele e no tecido mucoso (intestino). Vamos agora estudar o papel das molculas (marcadores de superfcie) CD3, CD4 e CD8. CD3 esta molcula est associada com o TCR e um elemento importante na transduo de sinais, uma vez que sinaliza a ligao do antgeno ao TCR para o interior da clula. CD4 e CD8 so marcadores de superfcie celular, correceptores. Os linfcitos T que expressam a glicoprotena de membrana CD4 reconhecem o antgeno em associao a molculas de MHC de Classe II. As clulas que expressam a glicoprotena de membrana CD8 reconhecem o antgeno no contexto de molculas de Classe I do MHC. A expresso de CD4 ou de CD8 tambm define duas subpopulaes funcionais principais de linfcitos: os linfcitos T CD4+ geralmente funcionam como clulas T auxiliares que atuam ajudando na funo de diferentes clulas do sistema imune e so restritas ao MHC de Classe II; e os linfcitos T CD8+ geralmente funcionam como clulas T citotxicas responsveis pela lise de clulas-alvo e so restritas ao MHC de Classe I (Figura 4.3).
A
Clula apresentadora de antgeno (APC) MHC de classe II
MHC de classe I Clula hospedeira
Peptdeo
CD4
Peptdeo
CD8
Clula T TCR Correceptor
Clula T TCR Correceptor
Figura 4.3 TCR, correceptores e restrio com molculas de MHC expressas nas clulas. (A) Associao dos linfcitos T CD4+ com molculas de MHC de Classe II expressas em clulas apresentadoras de antgeno (APC) e (B) Associao dos linfcitos T CD8+ com molculas de MHC Classe I expressas em todas as clulas nucleadas. (Adaptado de COICO; SUNSHINE, 2009, p. 128).
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Imunologia
A proporo de linfcitos T auxiliares e de linfcitos T citotxicos em uma amostra pode ser determinada atravs da anlise do nmero de linfcitos T CD4+ e de CD8+. Essa proporo de aproximadamente 2:1 no sangue perifrico humano normal, mas pode ser significantemente alterada por determinados tipos de imunodeficincias, doenas autoimunes e outras doenas. Pela sua importncia, passemos a compreender o funcionamento das clulas consideradas como maestros do sistema imune, os linfcitos T auxiliadores: CD4+.
4.2 Linfcitos T auxiliadores: CD4+

Os linfcitos T CD4+ virgens, no estimulados pelo antgeno, so denominados linfcitos TH0. No incio da ativao das clulas T, os linfcitos TH0 podem se diferenciar em dois subgrupos distintos de linfcitos T CD4+ auxiliadores: os linfcitos TH1 e os linfcitos TH2. Como essas clulas podem ser distinguidas? Esses linfcitos so distinguveis pelo perfil de citocinas que secretam. Sabe-se que citocinas so produzidas por outras clulas (clulas NK, mastcitos, clulas apresentadoras de antgeno) como consequncia da exposio ao antgeno. Na presena de IL-12 e IFN-, os linfcitos TH0 tendem a se desenvolver em clulas TH1. O contato com helmintos parasitrios leva liberao de IL-4, que pode ser produzida por mastcitos. Na presena de IL-4, as clulas TH0 podem se diferenciar para TH2 (Figura 4.4).
4.2.1 Linfcitos TH1

Estes linfcitos quando ativados pelo antgeno so capazes de secretar Interleucina-2 (IL-2), INF- (interferon-gama ou imune) e TNF- (fator de necrose tumoral beta) em poucas horas aps a estimulao antignica. Essas citocinas liberadas pelas clulas TH1 atuam auxiliando a ao de outras clulas do sistema imune como, por exemplo, os
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Clula NK
Mastcito
IL-12 IFN- IL-18 Agente Infeccioso
IL-4
Macrfago IFN- IL-4 IL-10
Clula NK 1.1 + CD4+
IL-2 IFN- TNF-
IL-4 IL-15 IL-5 IL-13
Figura 4.4 Diferenciao da clula TH0 em TH1 e TH2. (Adaptado de BENJAMINI et al., 2002, p. 115).
macrfagos, que podem ser ativados, os linfcitos T citotxicos (CD8+), que exercem ao de citotoxicidade, e as clulas NK. Portanto, a ativao de linfcitos TH1, a princpio, facilita a imunidade mediada por clulas.
Citocinas
Citocinas so protenas de baixo peso molecular secretadas pelos leuccitos e por vrias outras clulas no organismo em resposta a inmeros estmulos. So mediadores solveis responsveis pela sinalizao entre as clulas do sistema imune, regulando seu desenvolvimento e comportamento. As citocinas esto envolvidas em processos celulares como, por exemplo, ativao celular, maturao celular, proliferao celular, secreo de anticorpos, migrao celular, entre outros.
IL-12 e IFN-
Clulas dendrticas, macrfagos e clulas NK, quando expostos a bactrias intracelulares (por exemplo, Listeria) e vrus, produzem IL-12 e IFN-.
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Imunologia
4.2.2 Linfcitos TH2

Estas clulas quando ativadas pelo antgeno secretam IL-4, IL-5, IL-10 e IL-13. Entre as diversas aes das citocinas liberadas pelos linfcitos TH2, destacam-se a estimulao, a proliferao de linfcitos B, a secreo policlonal de molculas de imunoglobulinas e a ativao de mastcitos e de eosinfilos. Desse modo, o produto da ativao de linfcitos TH2 induz ativao da imunidade humoral ou mediada por anticorpos. Cabe destacar que as citocinas liberadas por linfcitos TH1 podem regular o crescimento e as funes efetoras dos linfcitos TH2, e vice-versa. Sabe-se que a IL-4, a IL-10 e o TGF-, produzidos por linfcitos TH2, inibem a ativao e o crescimento de TH1. Do mesmo modo, o IFN- produzido pelos linfcitos TH1 inibe a proliferao de linfcitos TH2 (Figura 4.5).
TH1 Inibe a produo
Inibe a proliferao IL - 10
TH1
IFN
IL - 4 IL - 5
CD8
Ativao de macrfago Mastcito Anticorpo includo a IgE
B Eosinlo
Figura 4.5 Ao regulatria das citocinas sobre os subgrupos de linfcitos T auxiliadores. (Adaptado de MALE et al., 2006, p. 221).
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Para finalizar, podemos dizer que o envolvimento dos linfcitos T auxiliadores no sistema imune fundamental, uma vez que essas clulas constituem uma das principais fontes de citocinas, cujas propriedades so essenciais para a estimulao e a regulao da resposta imune.
4.3 Linfcitos T citotxicos: CD8+

Os linfcitos T citotxicos so clulas que exercem uma ao de citotoxicidade contra clulas-alvo infectadas por vrus e clulas tumorais. Contudo, preciso lembrar que essas clulas T CD8+ reconhecem o antgeno que apresentado por clulas que expressam, na sua superfcie de membrana, glicoprotenas de Classe I do MHC. Cabe salientar que as molculas de Classe I so encontradas em todas as clulas nucleadas do corpo. Os linfcitos T citotxicos contm grnulos ricos em perforina e granzimas. A interao especfica do linfcito T com a clula-alvo induz degranulao desses linfcitos. Como consequncia, esses grnulos liberam perforinas e granzimas. As perforinas formam poros na membrana da clula-alvo. A insero de um nmero elevado dessas molculas na membrana da clula-alvo pode levar lise osmtica da clula. As granzimas (serina-proteases) entram na clula-alvo atravs de canais, ativando caspases e nucleases que levam apoptose da clula-alvo (Figura 4.6a). Outro mecanismo de citotoxicidade pode ser observado e envolve a interao especfica do ligante de Fas (Fas-L) ou CD59L com a molcula de Fas ou CD59. Como esse mecanismo? A molcula Fas ou CD59 observada na superfcie de diversas clulas do organismo. Os linfcitos T citotxicos, quando ativados, passam a expressar na superfcie de membrana a molcula ligante de Fas, o Fas-L ou CD59L. A interao entre o ligante de Fas e a molcula Fas deflagra uma cascata de alteraes bioqumicas intracelulares que resultam na apoptose da clula-alvo (Figura 4.6b).
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Imunologia
LTc
LTc
Ca++ Polimerizao da perforina
Monmeros de perforina
Granzimas
Canais de perforina
Clula alvo
Clula alvo
FasL
Fas
Apoptose da clula alvo
FasL nas clulas T citotxicas interage com Fas na clula alvo
Figura 4.6 (A) Mecanismos de citotoxicidade dos linfcitos T CD8+ e (B) Interao FasL-Fas. (Adaptado de: (A) IMMUNOLOGY ON-LINE; 2010 e (B) ABBAS et al., 2007, p. 254).
4.4 Complexo principal de histocompatibilidade e processamento antignico

Todas as espcies apresentam um segmento gnico contendo um grupo de genes firmemente ligados, com mltiplos loci, denominados Complexo Principal de Histocompatibilidade (MHC, do ingls, Major Histocompatibility Complex). Os produtos da codificao desses genes so conhecidos como antgenos leucocitrios humanos (HLA, do ingls, Human Leukocyte Antigen, que
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significa antgeno leucocitrio humano). Na espcie humana, esse segmento gnico localiza-se no cromossomo 6. Os estudos sobre o Complexo Principal de Histocompatibilidade so de evidente importncia, dado o relevante papel nos processos que envolvem a rejeio entre rgos e tecidos transplantados, como tambm nos fenmenos imunolgicos que envolvem as interaes celulares em decorrncia da ativao de uma resposta imune adaptativa. Essas interaes se estabelecem entre clulas linfoides distintas e entre clulas apresentadoras de antgeno e linfcitos. Os antgenos de histocompatibilidade ou ainda antgenos de transplantao, presentes na superfcie de clulas ou em tecidos, so elementos determinantes nas situaes em que um transplante indicado. Esses antgenos de histocompatibilidade assumem grande importncia, uma vez que so imungenos potentes e, portanto, capazes de induzir uma resposta imune nos organismos hospedeiros. Sendo assim, a compatibilidade entre os antgenos de histocompatibilidade do possvel doador e do respectivo receptor dever ser previamente investigada a fim de se evitar uma rejeio do tecido transplantado, ou seja, da leso do tecido, provocada pela ativao imunolgica. Em transplantes, os antgenos de hiscompatibilidade considerados de grande relevncia so os antgenos leucocitrios humanos (HLAs), embora a anlise quanto compatibilidade entre os antgenos dos grupos sanguneos do sistema ABO deva ser igualmente exigida. Dada a relevncia desse complexo, vamos entender a sua estruturao.
4.4.1 Estruturao do complexo principal de histocompatibilidade

O Complexo Principal de Histocompatibilidade humano constitudo por trs subgrupos gnicos ou classes, denominadas de Classe I, Classe II e Classe III. Em humanos, o MHC de Classe I codifica glicoprotenas, conhecidas como HLA-A, HLA-B e HLA-C. Essas glicoprotenas se ligam a peptdeos gerados no cito-
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Imunologia
plasma (antgenos exgenos) e apresentam-nos para os linfcitos T CD8+. Por sua vez, o MHC de Classe II codifica glicoprotenas, conhecidas como HLA-D, que se ligam a peptdeos degradados em vesculas celulares (antgenos exgenos) e so apresentadas para clulas T CD4+. J o MHC de Classe III codifica componentes do Sistema Complemento e do fator de necrose tumoral (Figura 4.7).
4.4.2 Estrutura das glicoprotenas de classe I do MHC

As molculas de Classe I do MHC so heterodmeros constitudos por duas cadeias polipeptdicas: uma cadeia (cadeia pesada, com domnios 1, 2 e 3) codificada pelo MHC; e uma cadeia de 2-microglobulina (no codificada pelo MHC). Na extremidade aminoterminal, a molcula tem uma estrutura em forma de fenda. Nessa fenda, ocorre a ligao com peptdeos originados pela fragmentao de protenas.
4.4.3 Estrutura das glicoprotenas de classe II do MHC

As molculas de Classe II do MHC tambm so heterodmeros constitudos por duas cadeias: uma (domnios 1 e 2) e uma
Classe II DP HLA Genes B A B DQ A B DR A B Protenas 2 2 1 DP 1 DQ DR 2m
Classe I C 2m 2m A Membrana Celular 2m 1 2 C B A
Figura 4.7 Representao esquemtica do MHC humano. (Adaptado de COICO e SUNSHINE, 2009, p. 119).
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(domnios 1 e 2), ambas codificadas pelo MHC. Na extremidade aminoterminal est presente a fenda, onde se liga o peptdeo a ser apresentado ao sistema imune.
4.4.4 Como se d a distribuio tecidual dessas glicoprotenas nas clulas?

As molculas de Classe I do MHC so expressas em todas as clulas nucleadas do organismo. As molculas de Classe II so constitutivamente expressas em linfcitos B, clulas dendrticas e clulas do epitlio tmico, e manifestadas, sob induo, em macrfagos, clulas endoteliais e clulas T ativadas (Figura 4.8).
Tecido Tecidos linfoides Clulas T Clulas B Macrfagos
MHC de classe I
MHC de classe II
+++ +++ +++ +++ +
+* +++ ++ +++ +++
Outras clulas apresentadoras de antgenos, exemplo: clulas de Langerhans Clulas epiteliais do timo Outras clulas nucleadas Neutrlos Hepatcitos Rim Crebro Clulas no nucleadas Eritrcitos
+++ + + +
_ _ _ _
Figura 4.8 Distribuio das molculas de MHC nas diferentes clulas. (Adaptado de MURPHY et al., 2008, p. 136). * Somente clulas T ativadas expressam MHC-II. No crebro a maioria das clulas so MHC-II negativas, com exceo da microglia, que so relacionadas com o macrfago e so MHC-II positivas
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Imunologia
4.4.5 Funes biolgicas do MHC

Apresentao dos peptdeos para os linfcitos T Vamos recordar inicialmente quais so as clulas capazes de apresentar antgenos. So elas os macrfagos, as clulas de Langerhans na pele, as clulas dendrticas e os linfcitos B. A apresentao do antgeno por essas clulas se d em associao com glicoprotenas de Classe II do MHC. Nessa etapa, a funo do MHC se observa inicialmente no interior das clulas, onde as molculas de Classe II do MHC se ligam aos fragmentos peptdicos e, na sequncia, conduzem-nos at a superfcie celular (Figura 4.9). As clulas B reconhecem antgenos na sua forma nativa, como, por exemplo, protenas na superfcie do patgeno no processado. As clulas T reconhecem apenas antgenos processados, ou seja, fragmentos peptdicos. Quando dito que houve processamento do antgeno, isso significa que a molcula antignica (molcula de alto peso molecular) foi exposta a uma srie de eventos bioqumicos e o produto final dessa exposio gerou fragmentos peptdicos menores que podero se ligar s glicoprotenas do MHC e ser apresentados para as clulas T (apresentao do antgeno). Reconhecendo os diferentes antgenos Devemos destacar a importncia do desencadeamento de uma resposta imune adequada. Para isso, o sistema imune precisa distinguir entre os patgenos extracelulares (antgenos exgenos) e os intracelulares (antgenos endgenos). Diante de uma exposio a antgenos exgenos, desejvel que o sistema imune seja capaz de desencadear uma resposta imune diretamente contra o antgeno, ou seja, atravs da ativao de mecanismos humorais ou mediados por anticorpos e da ativao das clulas fagocitrias. Para tanto, nessa etapa inicial essencial, como j vimos, a apresentao desses antgenos em associao com as molculas de MHC Classe II. Na sequncia, os eventos secundrios que seguem a apresentao desses antgenos so igualmente importantes, uma vez que as citocinas produzidas determinaro a classe de anticorpos a serem produzidos e o recrutamento de outros tipos celulares (Figura 4.10).
Peptdeo antignico Pe Peptd
Clula T citotxica
Bactria Bact ria TCR TC CR Citocinas
Molcula de Classe Class II do MHC
Imunidade medida por clulas (ataque em clulas infectadas)
Clula T auxiliadora CD4
Clula a dendrtica de endrtic e ndrtic ca
B cell
Imunidade humoralsecreo de anticorpos por plasmcitos
Figura 4.9 Apresentao do antgeno para os linfcitos T. (Adaptado de CAMPBELL e REECE, 2005).
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Imunologia
J a resposta do sistema imune aos antgenos endgenos deve ser distinta da anteriormente exposta, uma vez que preciso que o sistema imune elabore uma resposta que seja capaz de destruir a clula do organismo onde esses antgenos esto sendo produzidos. Desse modo, uma resposta de citotoxicidade que resulta na destruio da clula-alvo mais apropriada. Essa resposta de citotoxicidade ou lise da clula-alvo ocorre em associao com molculas de Classe I do MHC (Figura 4.11). Para finalizar, destacamos que as molculas de Classe I do MHC apresentam peptdeos antignicos para clulas T CD8+, enquanto as molculas de Classe II apresentam antgenos para clulas T CD4+. Por esse motivo dito que as clulas T CD4+ so restritas s
TH2 Ativao Lise
LTC
Toxina bacteriana Clula B antgeno Especca Clula infectada por vrus
TH2
LTC
Anticorpo anti-toxina
Clula apopttica Plasmcito Figura 4.10 Reconhecimento dos antgenos extracelulares. (Adaptado de MURPHY et al., 2008, p. 351). Figura 4.11 Reconhecimento dos antgenos intracelulares. (Adaptado de MURPHY et al., 2008, p. 351).
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molculas de Classe II e as clulas T CD8+, restritas s molculas de Classe I do MHC. MHC e a resistncia ou susceptibilidade a doenas A expresso de um alelo especfico do MHC tem sido associada resistncia e susceptibilidade a vrios agentes infecciosos, como, por exemplo, o vrus T-linfotrpico humano (HTLV-1), a malria, a lepra, a tuberculose, a hepatite B e a rpida progresso da AIDS. Adicionalmente, a associao entre a expresso de certas glicoprotenas do MHC e um risco maior de adquirir certas doenas autoimunes ou inflamatrias tem sido documentada. Discutiremos sobre esse assunto com mais detalhes no Captulo 6.
Resumo
J aprendemos que os linfcitos T so clulas que realizam a sua maturao no timo. Contudo, neste captulo abordamos os diferentes estgios do desenvolvimento, o processo de seleo positiva e negativa, considerado essencial para a maturao e o funcionamento adequado dessas clulas. Os TCRs so estruturas que atuam como receptores para antgenos e so adquiridos durante o processo de maturao celular. Eles podem ser do tipo / (presentes na maioria dos linfcitos T) ou /. Associadas a essas estruturas, so observadas as molculas de superfcie celular CD3 e CD4 ou CD3 e CD8, que tambm so adquiridas durante os estgios de diferenciao da clula. Esses componentes celulares so importantes para a clula na medida em que auxiliam na transduo de sinais, na identificao e na ativao celular. Cabe ressaltar a importncia da populao de linfcitos T CD4+. Essas clulas so consideradas clulas maestro do sistema imune, uma vez que funcionam auxiliando a ao de outras clulas desse sistema. Elas so restritas ao MHC de Classe II. Os linfcitos T CD8+ geralmente funcionam como clulas T citotxicas e so restritos ao MHC de Classe I. Dois subgrupos de linfcitos T auxiliadores so conhecidos, os linfcitos TH1 e os linfcitos TH2. Esses linfcitos so distinguveis pelo perfil de citocinas que secretam. Uma vez liberadas, essas citocinas sero responsveis pelo direcionamento da resposta imune. Cabe
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Imunologia
lembrar que essas subpopulaes de linfcitos so passveis de regulao pela ao das citocinas liberadas por eles. O envolvimento do Complexo Principal de Histocompatibilidade de extrema importncia nos fenmenos que envolvem as interaes celulares, como tambm nos processos que envolvem a rejeio a tecidos e rgos transplantados. Sabe-se que a expresso de determinadas glicoprotenas de superfcie codificadas pelo MHC est associada resistncia e susceptibilidade de certas doenas.
Referncias
ABBAS, Abul K.; LICHTMANN, Andrew H.; PILLAI, Shiz. Cellular and molecular immunology. 6. ed. Philadelphia, PA: Saunders Elsevier, 2007. p. 142; 178 e 254. BENJAMINI, E.; COICO, R.; SUNSHINE, G. Imunologia. 4. ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2002. p. 115. CALICH, Vera; VAZ, Celidia. Imunologia. 2. ed. Rio de Janeiro: Revinter, 2009. Campbell, Neil; Reece, Jane. Power point lectures for biology: the immune system, chapter 43. 7. ed. Lectures by Chris Romero. Pearson Education, Inc. publishing as Benjamin Cummings, 2005. COICO, Richard; SUNSHINE, Geoffrey. Immunology: a short Course. 6. ed. New Jersey, 2009. p. 119 e 128. IMMUNOLOGY ON-LINE. Disponvel em: <http://www. immunologyonline.com>. Acesso em: 10 mar. 2010. MALE, David et al. Immunology. 7. ed. Philadelphia, PA: Mosby; Elsevier, 2006. p. 22. MURPHY, Kenneth; TRAVERS, Paul; WALPORT, Mark. Janeways immunobiology. 7. ed. New York: Garland Science, 2008. p. 136 e 351. NAIRN, Roderick; HELBERT, Matthew. Imunology for medical students. 2. ed. Philadelphia, PA: Mosby; Elsevier, 2007.
C A P T U LO 5
Soros e vacinas
Embora j tenhamos ideia da importncia das vacinas, no presente captulo vamos aprender por que o uso de soros e vacinas tem salvado a vida de milhes de pessoas e reduzido a incidncia de muitas doenas infecciosas comuns. Os soros so constitudos de anticorpos, que conferem proteo imediata contra uma determinada doena, porm no conferem proteo em longo prazo. J as vacinas so constitudas de antgenos do agente infeccioso contra o qual se deseja induzir proteo, alm de substncias inespecficas chamadas adjuvantes. A resposta imune gerada pelas vacinas aparece algumas semanas aps sua administrao, porm a imunidade pode durar por muitos anos. As vacinas podem ser constitudas de micro-organismos inteiros atenuados ou inativados ou de macromolculas purificadas, cada tipo de vacina oferece vantagens e desvantagens. Atualmente h inmeras outras estratgias sendo estudadas na tentativa de se gerar proteo contra diversas doenas contra as quais ainda no existem vacinas eficazes disponveis.
C A P T U LO 5
Soros e vacinas
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5.1 Introduo
A manipulao do sistema imune na tentativa de proteger os seres humanos contra doenas infecciosas muito antiga, embora somente no sculo XX tenha se tornado uma prtica rotineira para grandes populaes. Durante os ltimos 200 anos, desde quando o mdico ingls Edward Jenner fez a primeira vacinao contra a varola em 1796, inmeras doenas tm sido controladas atravs do uso de vacinas. O processo de vacinao muitas vezes to eficiente que pode levar erradicao de doenas, como aconteceu com a varola, que teve seu ltimo caso natural registrado em 1977, e como deve acontecer com a poliomielite em breve. Por essas razes, o uso de vacinas representa um dos maiores avanos da medicina. Na primeira dcada do sculo XX, os anticorpos tambm comearam a ser utilizados para prevenir doenas, sendo essa formulao chamada de soro. Os primeiros soros utilizados em seres humanos foram contra difteria e ttano. Dessa maneira, duas formas de proteo ou imunizao podem ser induzidas: imunizao passiva e imunizao ativa. A imunizao passiva acontece quando ocorre a transferncia de anticorpos, geralmente produzidos em outros animais, para impedir a infeco de uma pessoa que potencialmente tenha tido contato com o agente infeccioso. Na imunizao ativa o indivduo recebe o antgeno antes do contato com o agente infeccioso para montar sua prpria resposta imune protetora (Tabela 5.1).
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Tabela 5.1 Tipos de imunizao Ativa Natural (infeco) Articial (vacinao) Passiva Natural (transferncia de anticorpos pela placenta e pelo colostro) Articial (soroterapia)
5.2 Imunizao passiva

A imunizao passiva ocorre atravs da transferncia de anticorpos provenientes de um indivduo (ou de animal de outras espcies) que foi previamente imunizado para um indivduo receptor. Uma caracterstica muito importante da imunizao passiva que ela confere proteo imediata, ou seja, logo aps a administrao dos anticorpos. Alm disso, a imunizao passiva no ativa clulas do sistema imune, no gerando, portanto, clulas de memria, sendo, ento, esse tipo de imunidade transiente, ou seja, de curta durao. A imunizao passiva pode ser dividida em natural e artificial. A imunizao passiva natural quando ocorre a transferncia de anticorpos da me para o beb, seja atravs da placenta (IgG), seja atravs do leite e do colostro (IgA). Esse tipo de imunizao muito importante, pois, poca do nascimento, o sistema imunolgico dos bebs ainda no est totalmente formado e, portanto, est suscetvel a infeces. A transferncia de todo o repertrio de IgGs maternas contra os mais diversos patgenos ocorre atravs da placenta durante a gestao e, dessa forma, confere proteo ao beb contra todas as infeces a que a me tem imunidade. Por isso muito importante que a me esteja imunizada contra as mais diversas doenas (ttano, sarampo, plio, difteria etc.), pois assim pode prover proteo para a criana nos primeiros meses de vida. Outra forma muito importante de transferncia de anticorpos da me para a criana atravs da amamentao. Principalmente anticorpos do tipo IgA (e tambm IgG e IgM, porm em quantidades bem menores) so encontrados no leite materno, sendo sua maior concentra-
Soros e vacinas
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o encontrada no colostro (primeiro leite), imediatamente aps o parto. Esses anticorpos se aderem a toda superfcie do trato digestrio e conferem proteo principalmente contra patgenos entricos, como bactrias dos gneros Escherichia, Salmonella e Shigella, bem como contra vrus da plio e rotavrus, dentre outros. A imunizao passiva artificial, tambm chamada de soroterapia, a administrao de anticorpos na forma de soros, bastante utilizados contra venenos de animais peonhentos e toxinas bacterianas. O uso de soros muito importante, pois rapidamente neutraliza venenos e toxinas. Os anticorpos geralmente so obtidos de outros animais, geralmente cavalos e coelhos, que so imunizados com os patgenos contra os quais se deseja produzir o soro. Embora a utilizao de soros seja de fundamental importncia para prevenir diversas doenas, deve-se lembrar que os anticorpos provenientes de outros animais podem ser reconhecidos pelo sistema imunolgico humano como uma molcula estranha, levando a uma resposta imunolgica que conduz rpida eliminao da circulao dos anticorpos provenientes do soro, impedindo a neutralizao do veneno ou de toxinas, alm de poder gerar processos inflamatrios, como a chamada doena do soro, e reaes alrgicas. Uma alternativa para evitar tais efeitos indesejados o uso de anticorpos humanos que podem ser obtidos de seres humanos que se recuperaram da infeco contra a qual se deseja utilizar o soro ou que tenham sido previamente imunizados. A Tabela 5.2 mostra os soros mais comumente utilizados atualmente.
Tabela 5.2 Soros mais comumente utilizados Doena Ttano Botulismo Difteria Raiva Picada de cobras Picada de aranha viva-negra Soro Antitoxina tetnica origem equina ou humana Antitoxina produzida em cavalos Antitoxina produzida em cavalos Imunoglobulina antirrbica de origem equina ou humana Antiveneno produzido em cavalos Antiveneno produzido em cavalos
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Imunologia
5.3 Imunizao ativa

A imunizao ativa resultado da produo de anticorpos, bem como da ativao de linfcitos T, dirigida contra o agente infeccioso ou contra seus produtos txicos. Esse tipo de imunizao confere proteo de longa durao, pois induz a gerao de linfcitos de memria, que podem perdurar por muitos anos. Porm, a proteo conferida por esse tipo de imunizao no imediata, diferente dos processos de imunizao passiva, levando algumas semanas at que ela se desenvolva completamente. A imunizao ativa tambm pode ser dividida em natural e artificial. A imunizao ativa natural acontece quando o indivduo adquire uma infeco e se cura, tratando-se, portanto, de uma imunizao no intencional. Em muitas infeces, quando o indivduo se cura, ele permanece com uma resposta imune protetora por muitos anos e, caso venha a entrar novamente em contato com aquele agente infeccioso, no adoecer novamente. por isso que muitas doenas so adquiridas somente uma vez na vida, como caxumba, rubola, sarampo, dentre outras. Quando as vacinas so utilizadas para prevenir uma doena, tem-se a imunizao ativa artificial, que uma forma de imunizao intencional. Vrias caractersticas so essenciais em uma vacina para que ela possa ser considerada eficaz o suficiente para ser administrada em grandes populaes, a saber: a proteo proporcionada pela vacina deve ser duradoura, ou seja, durar vrios anos; a vacina deve induzir a proteo efetiva contra o agente infeccioso, porm sem o perigo de causar doena ou efeitos adversos graves; a vacina deve estimular o tipo de resposta imune protetora mais eficaz contra o agente infeccioso (por exemplo, induzir anticorpos neutralizantes ou estimular linfcitos T); e a vacina deve ser estvel para permitir o armazenamento, o transporte e o uso, bem como ter um baixo custo, permitindo, assim, que seu uso seja vivel para ampla utilizao.
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5.4 Tipos de vacinas

As vacinas contm, em sua formulao, antgenos, que so molculas especficas derivadas do micro-organismo contra o qual se deseja induzir uma resposta imune protetora, bem como adjuvantes, que so molculas inespecficas cujas funes sero explicadas adiante ainda neste captulo. Existem diferentes maneiras pelas quais as vacinas podem ser preparadas. Podem ser empregados micro-organismos inteiros inativados ou atenuados, ou pode ser utilizada apenas uma molcula do agente infeccioso, ou pode tambm ser utilizado DNA na forma de plasmdeo. As caractersticas gerais de cada tipo de vacinas so apresentadas a seguir, sendo na Tabela 5.3 listadas algumas mais comumente utilizadas, bem como o tipo de preparao vacinal utilizado.
Tabela 5.3 Classicao de algumas vacinas de uso em seres humanos Doena ou patgeno Tipo de vacina
Doenas causadas por bactrias Antrax Clera Coqueluche Micro-organismos inteiros Peste Tuberculose Doenas causadas por vrus Inuenza Raiva Poliomielite (vacina Salk) Poliomielite (vacina Sabin) Caxumba Varicela zoster Febre amarela Inativada Inativada Inativada Atenuada Atenuada Atenuada Atenuada Inativada Inativada Inativada Inativada Atenuada
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Toxoides Difteria Macromolculas puricadas Ttano Exotoxina inativada Exotoxina inativada Polissacardeos capsulares Haemophilus inuenzae tipo B Neissera meningitidis Streptococcus pneumoniae Polissacardeo capsular conjugado com protena Polissacardeo capsular Polissacardeos capsulares
Antgeno recombinante Hepatite B Antgeno de superfcie viral recombinante
Vacinas de micro-organismos inativados Contm os agentes infecciosos inteiros em sua formulao, porm esses micro-organismos devem ser previamente tratados com agentes fsicos (radiao UV, calor etc.) ou qumicos (formol, por exemplo). Os micro-organismos perdem a capacidade de replicao, porm ainda so capazes de induzir resposta imune. Essas vacinas so bastante seguras, mas requerem que sejam administradas vrias vezes para que seja induzida uma resposta imune satisfatria. Vacinas de micro-organismos atenuados Tambm contm micro-organismos inteiros, porm esto vivos, ou seja, preservam a capacidade de replicao, mas no tm a habilidade de causar doenas. Diz-se que esses micro-organismos esto atenuados e esse processo de atenuao pode ser obtido de diversas maneiras, por exemplo, atravs do crescimento do agente patognico em condies adversas. Essas vacinas so bastante imunognicas, e, muitas vezes, uma nica dose suficiente para conferir proteo por longo tempo. Entretanto, so menos estveis que as preparadas com micro-organismos inativados e, em algumas situaes, podem causar a doena que elas deveriam proteger.
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Vacinas de macromolculas Diferem das anteriores, pois sua formulao consta de molculas derivadas e purificadas de micro-organismos. Atualmente trs categorias de vacinas podem ser encontradas nessa subdiviso: a) toxoides: vacinas preparadas a partir de exotoxinas bacterianas; b) polissacardeos capsulares: utilizam antgenos polissacardicos da cpsula bacteriana fusionados com antgenos proteicos; e c) antgenos recombinantes: utilizam protenas preparadas atravs de engenharia gentica. Vacinas de DNA So constitudas por um plasmdeo bacteriano que, alm de outros componentes essenciais, deve conter o gene que codifica um antgeno importante contra o qual a resposta imune ser induzida. A inteno que as clulas do indivduo vacinado captem o DNA e passem a expressar o antgeno do patgeno. Embora considerada uma vacina segura, barata e de fcil obteno, esse tipo de vacina induziu respostas imunes muito fracas em seres humanos. Atualmente esto licenciadas duas vacinas de DNA para uso veterinrio: uma para proteger cavalos contra o vrus do Oeste do Nilo e outra para proteger salmes contra o vrus da necrose hematopoitica infecciosa. Ainda no h nenhuma vacina de DNA licenciada para uso humano.
5.5 Adjuvantes
Alm do antgeno proveniente do patgeno contra o qual se deseja induzir resposta imune, as vacinas contm em sua composio outra substncia chamada adjuvante. Os adjuvantes tm como funo aumentar o efeito das vacinas. Muitas vacinas, sem a presena de adjuvantes, estimulam uma resposta imune fraca que no confere proteo. Os adjuvantes geram uma inflamao no local da administrao da vacina, e isso leva ativao de macrfagos e ao recrutamento de clulas inflamatrias. Alm disso, os adjuvantes retardam a destruio do antgeno vacinal, fazendo com
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que a vacina permanea estimulando os linfcitos por tempo mais prolongado. Existem diversas substncias e preparaes utilizadas como adjuvantes em vacinas de uso veterinrio, muitas vezes contendo componentes bacterianos em suspenses oleosas que so proibidos para uso humano. At o presente momento, o nico adjuvante aprovado para uso em vacinas humanas o almen, uma forma de hidrxido de alumnio. Embora o almen no seja o adjuvante mais potente conhecido, ele utilizado em detrimento de outros, pois o mais seguro. Os outros adjuvantes induzem muitas reaes adversas. A funo de adjuvante pode tambm ser fornecida pelos componentes bacterianos das vacinas, como os componentes da parede celular de Bordetella pertussis na vacina DPT e da Mycobacterium na vacina contra tuberculose. Atualmente existem muitas pesquisas sendo conduzidas na tentativa de desenvolver adjuvantes mais eficientes e seguros.
5.6 Vacinas humanas em uso

Embora a Organizao Mundial da Sade recomende um esquema de vacinao, cada pas adota o esquema que julgar mais apropriado. No Brasil existem trs calendrios: o de Vacinao da Criana (Tabela 5.4), o de Vacinao do Adolescente e o de Vacinao do Adulto e do Idoso. As vacinas presentes nos calendrios vacinais so gratuitas e disponveis a todos os brasileiros. Alm disso, alguns indivduos podem receber vacinas adicionais (Tabela 5.5) quando existe a possibilidade de exposio a agentes infecciosos em situaes bastante particulares, como o caso de viajantes para reas endmicas de algumas doenas, de profissionais da rea de sade ou de militares. Atualmente tambm existem vacinas que no esto no calendrio vacinal oficial, mas que podem ser adquiridas em clnicas particulares por quem desejar. o caso, por exemplo, da vacina contra o HPV (vrus do papiloma humano), que previne o cncer de colo de tero.
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Tabela 5.4 Calendrio brasileiro de vacinao da criana Idade 1 ms Vacinas Dose nica de BCG 1 dose da vacina trplice bacteriana + vacina contra Haemophilus 1 dose da vacina oral contra plio 2 meses 1 dose da vacina oral de rotavrus humano 2 dose da vacina trplice bacteriana + vacina contra Haemophilus 2 dose da vacina oral contra plio 4 meses 2 dose da vacina oral de rotavrus humano 3 dose da vacina trplice bacteriana + vacina contra Haemophilus 6 meses 3 dose da vacina oral contra plio 3 dose da vacina contra hepatite B 9 meses 12 meses Dose inicial da vacina contra febre amarela Dose nica da vacina trplice viral Reforo da vacina oral contra plio 15 meses 1 reforo da vacina trplice bacteriana (DPT) 2 reforo da vacina trplice bacteriana Reforo da vacina trplice viral 10 anos Reforo da vacina contra febre amarela Doenas evitadas Formas graves de tuberculose Difteria, ttano, coqueluche, meningite e outras infeces causadas pelo Haemophilus inuenzae tipo B Poliomielite Diarreia por rotavrus Difteria, ttano, coqueluche, meningite e outras infeces causadas pelo Haemophilus inuenzae tipo B Poliomielite Diarreia por rotavrus Difteria, ttano, coqueluche, meningite e outras infeces causadas pelo Haemophilus inuenzae tipo B Poliomielite Hepatite B Febre amarela Sarampo, rubola e caxumba Poliomielite Difteria, ttano e coqueluche Difteria, ttano e coqueluche Sarampo, rubola e caxumba Febre amarela
4 a 6 anos
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Tabela 5.5 Vacinas de usos em circunstncias especiais Exposio ocupacional ou de outro tipo Veterinrios, tratadores de animais, vtimas de mordeduras de animais Tratadores de animais e pessoas que trabalham com pele, ossos, l e cerdas de animais Militares Indivduos que vivem e trabalham em regies de oresta contendo carrapatos infectados com Borrelia burgdorferi Viajantes para determinadas reas Vacina Raiva
Antrax Meningococo, febre amarela, antrax
Doena de Lyme
Meningococo, febre amarela, clera, febre tifoide, peste, encefalite japonesa B
Adaptado de: Benjamini et al., 2002, p. 256.
5.7 Impacto das vacinas

O impacto das vacinas foi to benfico que muitas pessoas atualmente desconhecem os perigos das doenas por elas prevenidas. Isso faz com que em algumas partes do mundo um nmero cada vez maior de pais no deseje vacinar seus filhos. Alm disso, existem evidncias de que as vacinas possam induzir reaes adversas severas. Essas reaes adversas so muito variveis, podendo ir desde eventos leves e passageiros, como febre e dor no local da aplicao, at causar a prpria doena que deveriam prevenir. Esse evento chamado de reverso de patogenicidade, que pode ocorrer quando vacinas atenuadas so utilizadas em indivduos com algum quadro de imunossupresso. Existem indcios que ainda carecem de confirmao relacionando o uso de vacinas com o aumento de incidncia de doenas autoimunes e alergias. Embora tenha havido uma queda enorme no nmero de caso de doenas contra as quais existem vacinas, h vrias doenas que
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causam muitas mortes e contra as quais ainda no existem vacinas, como AIDS, malria, esquistossomose, hepatite C, dentre outras. Mesmo que muitas pesquisas estejam em andamento na tentativa de obteno dessas vacinas e se conhea muito mais do funcionamento do sistema imune hoje do que na primeira metade do sculo XX, quando a maioria das vacinas atualmente utilizadas foram descobertas, tem sido muito difcil desenvolver novas vacinas. Com frequncia, a dificuldade para se desenvolver uma vacina nova est relacionada s caractersticas do agente infeccioso, que geralmente apresenta mecanismos de escape do sistema imune. O uso de ferramentas de Biologia Molecular tem sido uma estratgia diferente daquelas utilizadas no passado, cada vez mais recorrente para desenvolver novas vacinas, embora, at agora, bem poucas vacinas tenham sido desenvolvidas com essa abordagem. Outra estratgia que tem sido bastante pesquisada a utilizao de vrus recombinantes como carregadores de antgenos, mesmo que at o presente momento nenhuma vacina para uso humano utilizando essa estratgia tenha sido licenciada.
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Imunologia
Resumo
O uso de soros e vacinas tem salvado a vida de milhes de pessoas e reduzido a incidncia de muitas doenas infecciosas comuns. Os soros so constitudos de anticorpos que conferem proteo imediata contra uma determinada doena, porm no conferem proteo em longo prazo. J as vacinas so constitudas de antgenos do agente infeccioso contra o qual se deseja induzir proteo, alm de substncias inespecficas chamadas adjuvantes. A resposta imune gerada pelas vacinas aparece algumas semanas aps sua administrao, porm a imunidade pode durar por muitos anos. As vacinas podem ser constitudas de micro-organismos inteiros atenuados ou inativados ou de macromolculas purificadas, cada tipo de vacina oferece vantagens e desvantagens. Atualmente h inmeras outras estratgias sendo estudadas na tentativa de se gerar proteo contra diversas doenas contra os quais ainda no existem vacinas eficazes disponveis.
Referncias
BRASIL. Ministrio da Sade. Disponvel em: <www.saude.gov. br>. Acesso em: 10 mar. 2010. MURPHY, K. M.; TRAVERS, P.; WALPORT, M. Janeways immunobiology. 7. ed. Garland Publishing Philadelphia, 2008. PLOTKIN, S. A.; ORENSTEIN, W. A. Vaccines. 5. ed. Philadelphia, Pensylvania, EUA: Saunders Company, 2008.
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Hipersensibilidades e doenas autoimunes

Ao estudar este captulo, voc compreender os mecanismos imunolgicos envolvidos em algumas reaes imunes consideradas inapropriadas, visto que, em vez conferirem proteo, provocam alguns sintomas e sinais clnicos indesejveis e conhecidos por vocs, como a rinite alrgica, a asma e a incompatibilidade Rh. Estamos nos referindo s reaes de hipersensibilidade. Elas so de quatro tipos, ou seja, tipo I, II, III e IV. As reaes de hipersensibilidade do tipo I, II e III so mediadas por anticorpos, enquanto a reao de hipersensibilidade do tipo IV mediada pelas clulas T. Discutiremos tambm a autoimunidade e os fatores que podem contribuir com a manifestao de doenas autoimunes. Essas doenas envolvem a ativao de mecanismos imunolgicos que tambm so indesejveis na medida em que colaboram com o comprometimento ou a destruio do(s) rgo(s) e/ou do(s) tecido(s) envolvido(s).
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6.1 Introduo
H fenmenos imunolgicos que nem sempre implicam na proteo dos organismos. Neste captulo abordaremos mecanismos imunolgicos que, por vezes, so exacerbados e, ao contrrio de conferirem proteo, podem gerar respostas que levem leso de certos tecidos dos organismos. Vamos iniciar o nosso estudo com as reaes de hipersensibilidades. Elas podem ser de quatro tipos: I, II, III e IV. De um modo geral, podemos dizer que as reaes de hipersensibilidades do tipo I, II e III so mediadas por anticorpos, enquanto as reaes de hipersensibilidades do tipo IV so mediadas por clulas. Cada uma delas deflagra mecanismos distintos que podem causar diferentes doenas. Alrgenos
So substncias que em alguns indivduos tm a capacidade de induzir a produo de anticorpos IgE especcos em humanos [anticorpos analticos (do latim, ana = contra, laxis = proteo)]. Essas substncias so encontradas no meio ambiente e podem invadir os organismos por diferentes vias, ou seja, atravs da inalao, de componentes da dieta ou at mesmo da administrao de certos frmacos.
6.2 Hipersensibilidade do tipo I

Comecemos pela reao de hipersensibilidade do tipo I. Essa reao tambm conhecida como reao de hipersensibilidade imediata ou anafiltica. Como dito anteriormente, essa reao considerada genericamente como mediada por anticorpos. A classe de anticorpo envolvida nessas reaes a IgE. Essas reaes so causadas pela ligao cruzada de antgenos, nesse caso os alrgenos, s molculas de IgE,
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Imunologia
que, por sua vez, esto ligadas ao FcRI na superfcie dos mastcitos e basfilos. Mas como isso acontece? Vamos detalhar o processo. Aps a primeira exposio ao alrgeno, alguns indivduos respondem ativando fortemente linfcitos T CD4+ do tipo TH2, que, por sua vez, induzem a produo de anticorpos preferencialmente da classe IgE. A sntese de IgE pode ser regulada por diversos fatores: hereditrios e ambientais (exposio natural ao alrgeno). Cabe destacar que a IgE tem uma alta afinidade pelo seu receptor FcRI (FcRI, do ingls, High Affinity IgE Receptor, que significa receptor de alta afinidade para a poro Fc de IgE), que encontrado na superfcie de mastcitos e basfilos. As molculas de IgE, uma vez produzidas, podem se ligar aos receptores presentes nessas clulas. Os mastcitos e os basfilos so essenciais nessa etapa e, por esse motivo, so conhecidos como componentes celulares primrios. Exposies sucessivas ao mesmo alrgeno podem deflagrar uma reao de hipersensibilidade caso o alrgeno forme uma ponte (ligao de forma cruzada) com duas molculas de IgE adjacentes que esto ligadas aos mastcitos ou basfilos. Quando isso acontece, observam-se a degranulao e a liberao de mediadores qumicos estocados em mastcitos (ou basfilos) (Figura 6.1). A liberao desses mediadores qumicos requer energia, e uma srie de eventos observada: a) aumento no influxo de clcio nos mastcitos; b) ativao da enzima fosfodiesterase intracelular; c) queda nos nveis intracelulares de monofosfato cclico de adenosina (AMPc); d) migrao dos grnulos citoplasmticos contendo os mediadores para a superfcie da clula; e) fuso das membranas dos grnulos com a membrana celular; e f) liberao do contedo dos grnulos (mediadores qumicos) para o exterior da clula (exocitose). Os sintomas decorrentes da reao de hipersensibilidade do tipo I, mediada por IgE, so explicados pela ao dos mediadores qumicos liberados pelos mastcitos (ou basfilos) ativados.
Esta sigla utilizada para se referir ao receptor ao qual a poro Fc da molcula de IgE se liga.
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Antgeno
Esses mediadores qumicos responsveis pelas reaes anafilticas so divididos em dois grupos: os pr-formados e os neoformados (Tabela 6.1).
Anticorpo da classe lgE (anti-antgeno)
FcRI IgE
Os mediadores pr-formados so aqueles sintetizados previamente pela deflagrao da reao e armazenados nos grnulos de mastcitos (ou basfilos). So eles a histamina, a serotonina, os fatores quimiotticos, a heparina, as enzimas e os proteoglicanos.
Figura 6.1 - Degranulao de mastcitos mediada pela ligao cruzada do antgeno s molculas de IgE adjacentes ligadas ao receptor FceRI. (Adaptado de COICO; SUNSHINE, 2009, p. 223).
Os mediadores neoformados incluem os mediadores lipdicos e vrias citocinas. Os mediadores lipdicos so formados pela ao da enzima fosfolipase. Aps a degranulao dos mastcitos (ou basfilos), as alteraes nas membranas celulares fazem com que a enzima fosfolipase A2 libere o cido araquidnico. O cido araquidnico subsequentemente degradado, via lipo-oxigenase ou ciclo-oxigenase, a leucotrienos ou prostaglandinas e mediadores tromboxanos, respectivamente. A lisofosforilcolina acetilada forma o fator ativador de plaqueta (PAF, do ingls, Platelet-activating Factor). Dentre as citocinas (mediadores neoformados) merecem destaque TNF-, IL-1, IL-4, IL-5, IL-6, IL-13, IL-3 e GM-CSF. Em suma, os efeitos farmacolgicos decorrentes da liberao desses mediadores qumicos so o aumento da permeabilidade vascular, a contrao da musculatura lisa e o influxo de eosinfilos.
Choque analtico
Um quadro bastante grave e que pode ser letal o choque analtico. Nesse caso em particular, h uma ativao disseminada de mastcitos que, aps a degranulao e a liberao dos mediadores qumicos (histamina em alta concentrao), provoca um aumento da permeabilidade vascular, o lquido do espao vascular , ento, extravasado para o extracelular e h signicativa queda no tnus vascular e da presso sangunea, constrio das vias respiratrias e fechamento de epiglote, causando o sufocamento.
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A reao da fase tardia se caracteriza por uma resposta inflamatria a componentes da matriz granular dos mastcitos, que pode ser potencializada pela ao de citocinas responsveis pelo recrutamento de eosinfilos e pelo aumento da expresso de molculas de adeso celular.
Tabela 6.1 Principais mediadores da analaxia
Mediadores Histamina Caractersticas estruturais imidazol etilamina Pr-formados PM 111 kDa Serotonina (roedores e herbvoros) Citocinas 5-hidroxitriptamina PM 176 kDa TNF PM 51 kDa Derivados do cido araquidnico (via lipoxigenase) Derivados do cido araquidnico (via ciclo-oxigenase) Fosfolipdeos derivados da fosforilcolina Hormnios proteicos PM < 26 kDa TNF (trmero) PM 51 kDa Funes principais Contrao de msculo liso Aumento da permeabilidade vascular Produo de muco Contrao de msculo liso, aumento da permeabilidade vascular Recrutamento de leuccitos Contrao prolongada de msculo liso, aumento da permeabilidade vascular, produo de muco Vasodilatao e broncoconstrio Aumento da permeabilidade vascular, broncoconstrio, migrao e ativao de leuccitos Recrutamento e ativao de leuccitos, produo e maturao de clulas efetoras
Leucotrienos, C4,D4,E4
Neoformados
Prostaglandina D2
PAF (Platelet-activating Factor, do ingls, fator ativador de plaquetas)
Citocinas (TNF, IL-1, IL-4, IL-5, IL-3 e GM-CSF)
Adaptado de CALICH; VAZ, 2009, p. 215.
A Tabela 6.2 a seguir apresenta um sumrio que relaciona a patologia com os alrgenos, a via de entrada e as reaes observadas nos organismos.
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Tabela 6.2 Sumrio relacionando a patologia, os alrgenos, a via de entrada e as reaes de hipersensibilidade do tipo I
Patologia Analaxia sistmica Analaxia local Alrgenos/ Exposio drogas, soro, venenos, sementes venenos de insetos plen, fezes de caros Via de entrada/Acesso ao organismo Intravenosa Efeitos clnicos edema, aumento de permeabilidade vascular, ocluso da traqueia, colapso do sistema circulatrio, morte edema local vasodilatao e edema da mucosa nasal, obstruo nasal e espirros, aumento da secreo de muco contrao da musculatura lisa, reduo do uxo areo, aumento da secreo de muco, inamao das vias respiratrias
Subcutnea
Rinite alrgica
Inalao
Asma brnquica
plen, fezes de caros
Inalao
Alergia a produtos da dieta
leite, trigo, ovos, frutos do mar
Oral estes alrgenos precisam ser absorvidos atravs da mucosa da boca e dos lbios ou ser resistentes a enzimas digestivas e ao pH baixo
coceira, urticria, vmito, diarreia, analaxia
Adaptado de MURPHY et al., 2008, p. 557.
Na nossa rotina, o contato com as substncias (alrgenos) frequente. A pergunta que surge a seguinte: por que somente em algumas pessoas essas substncias ativam mecanismos imunes exacerbados, caractersticos de reaes de hipersensibilidade do tipo I? Para responder a esse questionamento, devemos considerar vrios fatores, entre eles o gentico e o ambiental. Ao que parece, h uma predisposio gentica s doenas atpicas. Vale aqui uma explicao sobre o termo atopia. H evidncias que sugerem que as reaes de hipersensibilidade mediadas por IgE sejam geneticamente controladas por genes ligados ao MHC que se encontram no cromossomo 6. Outros genes de grande importncia so aqueles responsveis pela regulao da expresso da molcula de IgE. A cadeia do receptor de IgE de alta afinidade, o FcRI, codificada
Atopia
Atopia palavra grega que signica singularidade e usada para as reaes de hipersensibilidade do tipo I mediadas por IgE. A atopia inuenciada por inmeros genes.
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pelo gene localizado no cromossomo 11. Ressaltam-se, ainda, os grupos de genes localizados no cromossomo 5 que so envolvidos no direcionamento da resposta TH2/IL-4, que inclui a expresso de vrias citocinas responsveis pelo switch (troca) de classe da IgE, pela sobrevivncia de eosinfilos e pela proliferao de mastcitos, como a IL-3, IL-4, IL-5, IL-9, IL-13 e GM-CSF. Em pacientes atpicos verifica-se que polimorfismos no promotor do gene da IL-4 esto associados a um aumento nos nveis de IgE. Quanto aos fatores ambientais, h evidncias que sugerem a associao desses fatores a um aumento da incidncia de alergias no mundo. Essas evidncias levaram formulao da hiptese da higiene, que baseada em algumas constataes, como, por exemplo, a induo da ativao de linfcitos T CD4+ do tipo TH1 decorrente da exposio a micro-organismos na infncia que leva a uma diminuio no risco do desenvolvimento de doenas alrgicas; a asma rara nas reas em que a tuberculose comum; crescer em fazendas e estar exposto ao gado diminuem o risco de asma. Todos esses relatos servem de subsdio para as pesquisas que buscam ainda uma melhor compreenso sobre esse tema.
Tratamento
Identificar, evitar e remover os alrgenos. Terapia de dessensibilizao ou hipossensibilizao consiste na administrao de quantidades muito pequenas do alrgeno. Com o tempo, a quantidade de alrgeno aumentada de forma progressiva. Esse procedimento leva formao de anticorpos da classe IgG que se ligam ao antgeno. Desse modo, a ligao do antgeno s molculas de IgE fica impedida, evitando-se, assim, o desencadeamento de reaes anafilticas. Esse tipo de tratamento muitas vezes eficaz, uma vez que induz uma mudana, um desvio de uma resposta TH2 (IgE) para TH1, reduzindo os nveis de IgE e o nmero de mastcitos no local da reao alrgica. Uso de bloqueadores dos efeitos finais da liberao do mediador agonistas 2 adrenrgicos por exemplo, o salbutamol
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simula os efeitos do sistema nervoso simptico e atua evitando a contrao da musculatura lisa dos brnquios em pacientes asmticos. A epinefrina (adrenalina) utilizada no tratamento da anafilaxia quando a presso arterial sofre uma queda significativa pelo extravasamento do lquido dos vasos para os tecidos, causado pelo aumento na permeabilidade vascular. A epinefrina aumenta a presso arterial e reverte a obstruo das vias areas. Acredita-se que a atuao do cromoglicato de sdio seja na estabilizao dos mastcitos e na reduo da sua degranulao. utilizado principalmente nas crises de asma. Os corticosteroides atuam de modo a evitar a reao de hipersensibilidade imediata, a fase tardia e a inflamao alrgica crnica. Os anti-histamnicos bloqueiam os receptores de histamina especficos. Os bloqueadores de receptores de leucotrieno, os inibidores da ciclo-oxigenase e os broncodilatadores so, por vezes, utilizados para aliviar os sintomas alrgicos.
6.3 Hipersensibilidade do tipo II

Passemos agora a abordar as reaes de hipersensibilidade do tipo II ou citotxica. Essas reaes tambm so mediadas por anticorpos. Os anticorpos so da classe IgG ou IgM, que se ligam superfcie celular ou matriz extracelular (membrana basal). Como consequncia dessa ligao, a clula-alvo danificada ou destruda. Os mecanismos que levam destruio da clula-alvo so os seguintes: 1. Reaes que envolvem a participao do Sistema Complemento: a ligao dos anticorpos superfcie celular pode levar ativao do Sistema Complemento. Como consequncia da ativao da cascata do complemento, observa-se a lise da
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Imunologia
clula-alvo ou a opsonizao, ou seja, a fagocitose facilitada, mediada por receptores para a poro Fc ou para o componente C3b, que leva destruio das clulas-alvo por macrfagos e neutrfilos; 2. Citotoxicidade dependente de anticorpos: as clulas-alvo recobertas por anticorpos so lisadas pela ao de clulas citotxicas dependentes de anticorpos (ADCC, do ingls, Antibody-dependent Cell-mediated Cytolysis, que significa citlise mediada por clula, dependente de anticorpo) que possuem na superfcie de membrana receptores para poro Fc de IgG; e 3. Disfuno celular mediada por anticorpos: a produo de anticorpos especficos para receptores pode levar perda funcional normal desses receptores. Como exemplo, citamos os autoanticorpos produzidos contra os receptores de acetilcolina presentes nas sinapses das placas motoras dos msculos esquelticos. Esses autoanticorpos, ao se ligarem aos receptores de acetilcolina, impedem a ligao da acetilcolina nesses receptores, interferem na atividade funcional desses receptores e provocam fraqueza muscular (Figura 6.2). As reaes de hipersensibilidade do tipo II ou citotxicas se verificam nas seguintes situaes: A incompatibilidade do sistema ABO: quando a transfuso de sangue realizada entre indivduos incompatveis no sistema ABO, observa-se a destruio das hemcias do doador. Essa destruio explicada pela ligao dos anticorpos naturais presentes no receptor. Como esses anticorpos naturais so da classe IgM e sendo essa molcula altamente eficiente na ativao do Sistema Complemento, o resultado desse procedimento desastroso a lise das hemcias (hemlise). A incompatibilidade com o fator Rh: a sensibilizao de uma me Rh poder ocorrer durante a primeira gestao. Essa sensibilizao poder acontecer se o feto for Rh+ e se alguns eritrcitos desse beb atingirem a circulao materna durante o parto. A me, ao ser exposta a esses eritrcitos Rh+, produzir anticorpos contra o fator Rh da classe IgG. Sabemos que
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essa molcula capaz de atravessar a placenta. Desse modo, em uma segunda gestao de um filho Rh+, esses anticorpos podero atravessar a placenta, ligar-se aos determinantes Rh+ e promover a destruio dos eritrcitos do feto pelo efeito opsonizante da poro Fc de IgG, que interage com os receptores para a poro Fc presentes em clulas fagocticas do bao e do fgado. Esse quadro conhecido como doena hemoltica do recm-nascido.
Mediado pelo complemento
+ Ac (anticorpo)
+ Complemento
C3b
C5-9
Complexo de ataque a membrana Lise osmtica C3b Fagocitose pelo macrofgo
Clula alvo Receptor Fc Macrfago Opsonizao Receptor C3b
ADCC (clula citotxica dependente de anticorpo) Clula alvo
Anticorpos anti-receptor
Acetilcolina
+A
c (a
Placa motora em Miastenia grave
nti
cor p
o)
Receptor Fc clula NK
Apoptose da clula T
Figura 6.2 Mecanismos imunolgicos envolvidos nas reaes de hipersensibilidade do tipo II. (Adaptado de COICO; SUNSHINE, 2009, p. 238).
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Reaes induzidas por drogas: algumas drogas so haptenos. Alguns frmacos se ligam a clulas ou a outros componentes do sangue e induzem a produo de anticorpos. A ligao desses anticorpos s clulas revestidas com essas drogas pode levar destruio das clulas-alvo pelos mecanismos citados nos itens anteriormente. Reaes autoimunes: esta situao se verifica quando h a produo de autoanticorpos contra componentes do prprio organismo. A ligao desses autoanticorpos aos componentes prprios pode levar sua destruio. Um exemplo a prpura trombocitopnica idioptica. Nesses casos, os anticorpos so produzidos contra as plaquetas do prprio indivduo. Como consequncia dessa ligao, as plaquetas so destrudas pela ativao do Sistema Complemento (lise) ou pela ao de clulas fagocticas (opsonizao). A perda de plaquetas leva ao sangramento, cujo quadro clnico conhecido como prpura.
Haptenos
Substncias de baixo peso molecular que, por si s, no so imunognicas; contudo, se acopladas a um carreador, tornam-se potentes imungenos.
6.4 Reaes de hipersensibilidade do tipo III

Esta reao mediada por anticorpos que so produzidos aps a exposio a antgenos de natureza solvel. A ligao desses anticorpos aos antgenos solveis pode levar formao de imunocomplexos. Em geral, os imunocomplexos so formados quando a quantidade de antgeno superior dos anticorpos. Esses imunocomplexos podem causar vrios tipos de danos ao organismo. Destacam-se os casos em que se observa um excesso de antgeno, como, por exemplo, em infeces persistentes ou em doenas autoimunes. Nessas situaes, verifica-se a formao de imunocomplexos solveis na corrente sangunea que se depositam na parede das arterolas, glomrulos e juntas (Figura 6.3). Outra possibilidade de formao de imunocomplexos verificada nas situaes em que pacientes sensibilizados so expostos inalao repetida de antgenos. Nessa situao observam-se a formao e a deposio extravascular dos imunocomplexos nos tecidos.
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Antgeno na circulao
Formao de imunocomplexo
Endotlio Clula B
Plasmcito
Complexo antgeno-anticorpo
Anticorpo livre
Deposio de imunocomplexo
Clula inamatria
Citocinas
Complexo antgeno-anticorpo
C
Figura 6.3 Mecanismos imunolgicos envolvidos nas reaes de hipersensibilidade do tipo III. (Adaptado de COICO; SUNSHINE, 2009, p. 242).
Inamao mediada por imunocomplexos
Complemento Neutrlo Agregao plaquetria
Necrose brinoide Enzimas lisossomais do neutrolo
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As reaes de hipersensibilidade do tipo III podem ser sistmicas ou localizadas: Reao sistmica (doena do soro) Previamente ao advento dos antibiticos, o soro imune de equinos (soroterapia) era utilizado no tratamento de pacientes com infeces. Transcorrido um perodo equivalente entre sete e dez dias da injeo do soro heterlogo, observavam-se nesses pacientes a formao e a deposio de imunocomplexos nos tecidos, seguidas de reaes inflamatrias intensas. Os pacientes apresentavam sinais clnicos caracterizados por febre, calafrios, adenopatia, vermelhido, artrite, dores nas articulaes e, em alguns casos, glomerulonefrite. Hoje sabemos que a injeo de grandes quantidades de soro heterlogo de uma espcie diferente capaz de induzir no organismo receptor a produo de anticorpos contra a imunoglobulina no prpria (presente no soro heterlogo previamente administrado). Quando esses imunocomplexos so formados, observam-se os sintomas conhecidos da doena do soro. O conhecimento sobre esses mecanismos que levam formao desses imunocomplexos e s respectivas consequncias clnicas assume grande importncia atual, uma vez que anticorpos monoclonais produzidos em camundongos ou ratos so utilizados em pacientes com neoplasia, doenas autoimunes e rejeio de enxerto. Reao localizada (reao de Arthus) Esta reao tem essa denominao porque foi constatada pelo pesquisador francs Arthus, que, em 1903, observou reaes cada vez mais graves em coelhos medida que o soro de cavalo era repetidamente injetado nesses animais, por via intradrmica. Inicialmente, nas primeiras 24 horas aps a injeo do soro de cavalo, observavam-se nos coelhos, no local da injeo, vermelhido e edema. Contudo, com as injees subsequentes do soro de cavalo, leses hemorrgicas acompanhadas de necrose eram percebidas. Esse tipo de reao de hipersensibilidade do tipo III caracteriza-se pela formao de imunocomplexos localizados.
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Cabe ressaltar que a ativao do complemento, a migrao e o acmulo de leuccitos polimorfonucleares so eventos observados nas reaes de hipersensibilidade do tipo III, quer sejam essas sistmicas ou localizadas. Reaes de hipersensilidade do tipo III so observadas, ainda, em pacientes que apresentam certos tipos de doenas autoimunes. A formao de imunocomplexos observada em pacientes que desenvolvem, por exemplo, o lpus eritematoso sistmico. Nessa condio, antgenos endgenos como o DNA pode servir de alvo para autoanticorpos. Do mesmo modo, pacientes com artrite reumatoide apresentam no soro o fator reumatoide, que um autoanticorpo (IgM) que se liga poro Fc de IgG normal.
6.5 Reaes de hipersensibilidade do tipo IV ou tardia

Este tipo de reao de hipersensibilidade, diferentemente das reaes de hipersensibilidades previamente estudadas, mediado por linfcitos T antgeno-especficos. Por que chamamos essa reao de tardia? A razo temporal. Aps a inoculao do antgeno, cerca de um a trs dias so necessrios para que a resposta imune seja observada. Um exemplo clssico dessa reao o teste tuberculnico (teste de Mantoux), que utilizado com o objetivo de avaliar se o indivduo foi previamente infectado ou vacinado com Mycobacterium tuberculosis. Para tanto, uma pequena quantidade de antgeno, usualmente o extrato proteico de M. tuberculosis, o PPD (do ingls, Purified Protein Derivative), inoculado por via intradrmica. A reao se desenvolve lentamente entre 12 e 24 horas aps a injeo do antgeno e atinge a reatividade mxima aps 24 a 48 horas. Observam-se inicialmente eritema (vermelhido) e um infiltrado neutroflico. Posteriormente, um infiltrado constitudo de clulas mononucleares (linfcitos e macrfagos) acompanhado de enrijecimento da regio do inculo.
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Mecanismos celulares envolvidos nessa reao Essa reao mediada por linfcitos T do tipo TH1, que migram para o local da inoculao e reconhecem os peptdeos antignicos associados s molculas de Classe II do MHC. Vrias citocinas inflamatrias so liberadas, entre elas destacamos IFN-, IL-8, TNF-, IL-3 e GM-CSF. Essas citocinas promovem aumento na permeabilidade vascular, eritema, recrutamento e ativao de macrfagos no local da inoculao. Outra citocina liberada por essas clulas a IL-12, que tem a propriedade de inibir TH2, direcionando, portanto, a resposta para TH1, que libera citocinas que ativaro macrfagos. Consequncias da reao de hipersensibilidade tardia Destruio dos antgenos pelos macrfagos (ingesto, ativao de macrfagos pelo IFN- e degradao dos antgenos pela ao de enzimas lisossomais e por produtos derivados da exploso respiratria). Nos casos em que o antgeno encontra-se protegido (ovo de esquistossoma e microbactrias encapsuladas com lipdeos), observa-se um acmulo de macrfagos que leva ao agrupamento de clulas epitelioides que se fundem para formar clulas gigantes e contribuir para o granuloma. Como pode haver a substituio de tecido normal por granulomas, isso pode levar necrose caseosa. Classicao das reaes de hipersensibilidade do tipo IV As reaes de hipersensibilidade do tipo IV se classificam em: 1. contato; 2. tuberculina; e 3. granulomatosa. Essa classificao baseada no tempo, em sintomas clnicos e nas observaes histolgicas (Figura 6.4).
As variantes das reaes de hipersensibilidade do tipo IV Reao tardia Contato Tuberculina Granulomatosa Tempo mximo de reao 48 - 72 horas 48 - 72 horas 21 - 28 dias
Necrose caseosa
Necrose caseosa ou necrose de caseicao outra forma peculiar de necrose que recebe esse nome porque a estrutura necrosada assemelha-se grosseiramente massa grumosa do queijo branco, fresco (caseum).
Figura 6.4 As variantes das reaes de hipersensibilidade do tipo tardia. (Adaptado de MALE et al., 2006, p. 478).
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Os linfcitos T CD8+ podem estar presentes nas reaes de hipersensibilidade tipo IV e causar dano aos tecidos atravs da ativao de mecanismos de citotoxicidade. Isso se observa com certos agentes qumicos, solveis em lipdeos, que so capazes de induzir respostas de hipersensibilidade tardia. Esses agentes qumicos, ao atravessarem a membrana celular, reagem com protenas citoslicas e geram peptdeos modificados. Esses peptdeos so translocados para o retculo endoplasmtico, expostos na superfcie celular e associados s molculas de Classe I do MHC. As clulas apresentando esses peptdeos podem ser destrudas pela ao dos linfcitos T CD8+. Como exemplo citamos a substncia qumica da hera venenosa, o pentadecilcatecol (Figura 6.5).
Estimulao contnua
Doena
Granuloma
Antgeno
Th
Hipersensibilidade de contato Resposta a tuberculina
Intradmica /solvel
Diagnstico
Figura 6.5 Papel dos linfcitos T auxiliadores especcos nas reaes de hipersensibilidade do tipo IV. (Adaptado de MALE et al., 2006, p. 483).
6.6 Doenas autoimunes

Primeiramente precisamos ter clareza sobre o conceito de doena autoimune e de autoimunidade. importante entender o significado desses termos e saber distingui-los. Certo nmero de doenas so consideradas autoimunes pela sua natureza. Isso significa dizer que os mecanismos imunolgicos observados nessas patologias so resultantes de uma falha na to-
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lerncia aos constituintes prprios do organismo. Esses mecanismos imunolgicos podem envolver a participao de linfcitos T e de molculas de anticorpos e afetar (danificar) vrios rgos e/ou tecidos do organismo. Nessas doenas, um ou mais de um tipo de reaes de hipersensibilidade podem ser observados. Autoimunidade, diferentemente da doena autoimune, pode ser entendida como uma resposta do organismo que nem sempre prejudicial e pode ser observada durante o desenvolvimento de uma resposta imune. Como exemplo citamos o reconhecimento dos idiotipos prprios por anticorpos anti-idiotipos, essenciais para a diversificao e a regulao das respostas imunes. Passemos a entender as causas da autoimunidade: Existe uma srie de fatores que, de forma individual ou associados e sob certas condies, podem contribuir para o desenvolvimento de uma doena autoimune. Dentre eles citamos os fatores fsicos e qumicos, a idade, o sexo, os fatores hormonais e biolgicos/ infecciosos, a exposio a estmulos estressores e a predisposio gentica. A Figura 6.6 mostra a associao entre algumas molculas do MHC e o desenvolvimento de certas doenas autoimunes. Os mecanismos imunopatolgicos que podem levar a doenas autoimunes so vrios, entre eles citamos as anormalidades na seleo dos linfcitos (j discutidas no Captulo 4, em que foi vista a biologia dos linfcitos T), a alterao na tolerncia perifrica, a ativao linfocitria policlonal, as reaes cruzadas entre antgenos estranhos e prprios ao organismo, a regulao anormal de respostas linfocitrias e a formao de neoantgenos ou liberao de antgenos sequestrados, previamente no apresentados para a tolerncia imunolgica. As doenas autoimunes podem ser classificadas em doenas rgo/tecido especficas ou sistmicas. Nas doenas autoimunes rgo/tecido especficas, a resposta imune dirigida contra antgenos associados a um rgo/tecidoalvo e, nas doenas autoimunes sistmicas, as reaes imunes so dirigidas contra antgenos associados a vrios rgos/tecidos-alvo. Na figura 6.7 temos um sumrio dessas doenas.
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Doena de Adison (adrenal)
B8 DR3 DR3 DR4 DR3/4 DR3 DR2 DQ6 B8 DR4 DR2/3 1 2 3 4 5 6 7 12 14 16 18 20 >20 Risco Relativo
Diabete mellitus dependente de insulina
Miastenia grave
Esclerose mltipla
Artrite reumatoide Lupus eritematoso sistmico
Figura 6.6 Associaes HLA em doenas. (Adaptado de MALE et al., 2006, p. 368).
Com relao ao diagnstico dessas doenas autoimunes, o que devemos considerar? As evidncias clnicas (sintomas e ausncia de outra causa ou de uma reao secundria) devem ser acompanhadas de uma avaliao criteriosa da presena de reaes autoimunes. Para tanto, ensaios imunolgicos que permitam a deteco de autoanticorpos e/ou clulas auto-T reativas devem ser conduzidos. Os testes imunolgicos, comumente utilizados para essa finalidade, so os de imunofluorescncia, ELISA e radioimunoensaio, embora, em alguns casos, testes bioqumicos sejam tambm solicitados. Como feito o tratamento das doenas autoimunes? O tratamento das doenas autoimunes envolve diferentes abordagens:
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Imunologia
rgo especco
rgo no especco
Tireoidite de Hashimoto Mixoedema primtrio Tirotoxicose Anemia perniciosa Gastrite atrca auto-imune Doena de Adison Menopausa pr-matura (poucos casos) Diabete mellitus dependente de insulina Sndrome da rigidez Sndrome de Goodpasture Miastenia grave Infertilidade masculina (poucos casos) Pngo vulgar Pengoide Oftalmia simpattica Uveite facognica Esclerose mltipla Anemia hemoltica auto-imune Prpura trombocitopenica idioptica Leucopenia idioptica Cirrose biliar primria Hepatite crnica ativa ( Antgeno HBs negativo) Cirrose criptognica (alguns casos) Colite ulcerativa Aterosclerose Sndrome de Sjogren Artrite reumatoide Dermatomiosite Escleroderma Doena do tecido conectivo misto Sndrome anti-fosfolipdeo Lupus eritematoso discoide Lupus eritematoso sistmico (SLE)
Figura 6.7 O espectro das doenas autoimunes. (Adaptado de MALE et al., 2006, p. 367).
1. administrao de drogas anti-inflamatrias no esteroidais, drogas anti-inflamatrias esteroidais e drogas citotxicas imunossupressoras; 2. administrao de drogas que atuam no controle metablico. A vitamina B12 administrada em pacientes que apresentam anemia perniciosa; 3. drogas anticolinesterase e timectomia, indicadas na Miastenia gravis. A Miastenia gravis uma doena neuromuscular que
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leva fraqueza e fadiga muscular anormalmente rpida dos msculos voluntrios. A fraqueza causada pela ligao de anticorpos aos receptores de acetilcolina presentes na juno neuromuscular ps-sinptica, bloqueando, portanto, a ligao da acetilcolina no referido receptor; 4. plasmaferesis (terapia que envolve a remoo do plasma, que substitudo por albumina do soro normal ou por plasma). Pode ser indicada no tratamento de doenas como a de Guillain-Barr, no lpus eritematoso sistmico, na sndrome de Goodpasture. A sndrome de Goodpasture tambm conhecida como doena de Goodpasture e doena antimembrana basal glomerular. uma rara condio caracterizada por rpida destruio dos rins e por hemorragia dos pulmes; e 5. esplenectomia (doenas hemolticas e na prpura trombocitopnica idioptica).
Resumo
Aprendemos que as reaes de hipersensibilidade do tipo I so mediadas por anticorpos. Nessa resposta, os alrgenos induzem ativao de linfcitos TH2. Essas clulas liberam citocinas que resultam na produo de anticorpos da classe IgE. Esses anticorpos se ligam a receptores presentes em mastcitos e/ou basfilos. Aps sucessivas exposies ao mesmo alrgeno, poderemos observar a ligao cruzada de duas molculas de IgE adjacentes, e tal evento poder estimular a liberao de mediadores qumicos presentes nos grnulos de mastcitos e basfilos. Esses mediadores qumicos so responsveis pelo aumento da permeabilidade vascular, pela contrao da musculatura lisa e pelo recrutamento de eosinfilos. O resultado dessas reaes provoca quadros de rinite alrgica, alergia a alimentos, asma e reaes sistmicas graves, como o choque anafiltico. As reaes de hipersensibilidade do tipo II so mediadas por anticorpos da classe IgM e IgG. Esses anticorpos se ligam superfcie das clulas-alvo e causam danos atravs da ativao de me-
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Imunologia
canismos que envolvem a ativao do Sistema Complemento e a ativao de clulas fagocticas (opsonizao) e de clulas citotxicas dependentes de anticorpos. Um exemplo bastante conhecido desse tipo de reao a incompatibilidade do sistema ABO e Rh. As reaes de hipersensibilidade do tipo III, igualmente, so mediadas por anticorpos. So formados complexos imunes (antgenosanticorpos) que tm a propriedade de ativar o Sistema Complemento. Uma vez liberados, alguns componentes desse sistema podero causar o aumento da permeabilidade vascular e a quimiotaxia e favorecer a fagocitose. Esses eventos so observados nas reaes de hipersensibilidade que podem se manifestar de forma sistmica ou localizada. As reaes de hipersensibilidade do tipo IV so mediadas por linfcitos T. Essa reao envolve a participao de linfcitos TH1 e a secreo de citocinas e quimiocinas que levam ativao de macrfagos. As reaes de hipersensibilidade so classificadas em reaes de hipersensibilidade de contato, tuberculnica e granulomatosa.
Referncias
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C A P T U LO 7
HIV/AIDS
O que vem a ser AIDS? O que diferencia um indivduo com AIDS de um indivduo portador do vrus HIV? Os casos de AIDS comearam a aparecer mesmo na dcada de 1980, quando o vrus foi descoberto, ou so muito anteriores a essa data? Por que os anticorpos anti-HIV no so capazes de acabar com o vrus e curar o indivduo? O que se usa para conter a replicao do HIV? Por que no se consegue desenvolver uma vacina contra o vrus HIV? Por que a proteo fsica continua sendo a melhor forma de se conter a infeco pelo HIV? Por que devemos estudar o HIV durante o curso de Imunologia? Muito bem, essas so perguntas que sero respondidas ao longo deste captulo, que iniciar com um breve histrico que precedeu descoberta desse retrovrus e que nos mostrar o quanto a Virologia e a Imunologia tiveram que evoluir para entender a forma como esse vrus se replica, adquire tantas mutaes e, se no for contido, deteriora por completo o sistema imunolgico dos infectados.
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7.1 Como surgiu o HIV?

H evidncias de que a infeco pelo vrus HIV teve seu incio em tribos africanas subsaarianas isoladas. O vrus da imunodeficincia smia (SIV), que infecta uma subespcie de chimpanzs africanos, apresenta uma similaridade muito estreita com o HIV, apontando para a hiptese de que ambos evoluram de uma espcie comum. Provavelmente, o estabelecimento da infeco em humanos foi resultado da transmisso interespcie. Alguns estudos sorolgicos tm sugerido que o HIV passou a infectar os seres humanos entre as dcadas de 1940 e 1950, na frica. No se pode precisar quanto tempo o vrus ficou latente nas clulas humanas das tribos africanas. Recentemente, pesquisas sobre variaes genticas de alguns genes do HIV, com simulaes em computador, sugerem que o ano provvel do aparecimento do vrus foi 1931. O fato real que somente quando o vrus comeou a se espalhar e chegou aos pases desenvolvidos na dcada de 1980 que ele foi isolado e a sndrome da imunodeficincia humana foi desvendada. Hoje, dois tipos de vrus HIV esto descritos: o HIV1, difundido mundialmente, responsvel por 99% dos casos e mais virulento; e o HIV2, encontrado principalmente na frica Ocidental e em algumas regies da Europa, sendo esse tipo de uma latncia mais prolongada. Parece que o responsvel pela disseminao do vrus HIV2 o macaco da espcie Cercocebus atys.
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Imunologia
7.2 Histrico da descoberta do vrus HIV

Em 1981, a agncia norte-americana Centro de Controle e Preveno de Doenas (CDC) recebeu um alerta sobre o aparecimento de uma nova doena: em apenas oito meses haviam aparecido, na rea de Los Angeles, Estados Unidos, cinco casos de uma pneumonia extremamente rara causada por um protozorio (Pneumocystis carinii). Essa era uma infeco oportunista que at aquele momento s tinha sido detectada em pessoas com alto grau de comprometimento do sistema imune (cncer e usurios de frmacos imunossupressores). Para se ter uma ideia da raridade dessa infeco, entre 1967 e 1979 haviam sido diagnosticados apenas dois casos dessa infeco e, ento, repentinamente, cinco homossexuais masculinos foram afetados. Nesse mesmo perodo, o CDC recebeu a notificao de 26 casos de Sarcoma de Kaposi, um tipo de cncer que envolve os vasos sanguneos da pele ou dos rgos internos extremamente raro e que pode acometer pessoas com alto grau de comprometimento imunolgico. Em 1982, sem saber exatamente o que estava causando essas doenas raras, os cientistas apontaram, como causa do seu aparecimento, a ausncia de linfcitos T CD4+ nos pacientes. Por essa razo, nesse mesmo ano, essa ausncia de linfcitos T CD4+ que no tinha origem gentica foi denominada AIDS (em ingls, Acquired Immunodeficiency Syndrome) ou Sndrome da Imunodeficincia Adquirida. O que marcava essas doenas, no incio de seu aparecimento, era a homossexualidade, a maioria das pessoas acometidas era homossexual do sexo masculino. Mas logo as doenas comearam a ser relatadas e levaram a bito hemoflicos e usurios de drogas injetveis, apontando para alguma infeco por via sangunea e por contacto sexual. Em 1982, comearam a ser diagnosticados os primeiros casos de AIDS no Brasil, inicialmente em So Paulo e no Rio de Janeiro.
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7.3 Isolamento do vrus da imunodecincia adquirida ou HIV

Em 1983, dois grupos de pesquisadores, um deles liderado pelo Dr. Robert Gallo do National Institute of Health (NIH, EUA) e outro liderado pelo Dr. Luc Montaigner do Instituto Pasteur (Frana), isolaram linfonodos de pacientes que haviam morrido pela AIDS, um vrus que foi denominado HIV (sigla internacionalmente aceita cujo termo em ingls significa Human Immunodeficiency Virus ou Vrus da Imunodeficincia Humana). A partir dessa data, comeou a contagem do tempo para os casos de indivduos infectados pelo HIV no mundo todo.
7.4 Caractersticas do vrus HIV

O vrus HIV um retrovrus humano da famlia dos lentivrus. Esses vrus possuem como caractersticas marcantes um envelope constitudo por uma bicamada lipdica e o genoma constitudo por RNA, que reversamente transcrito a DNA (chamado de DNA proviral) aps infectar a clula-alvo por uma enzima viral denominada transcriptase reversa. Preste muita ateno: vrios outros vrus causadores de doenas tambm tm o seu genoma constitudo de RNA em vez de DNA, mas somente nos retrovrus esse RNA transcrito a DNA, que se integra ao DNA (genoma) da clula hospedeira e fica assim escondido da resposta imunolgica e silencioso, at que, por qualquer estimulao da clula infectada, o DNA proviral transcrito a RNA viral e assim so traduzidas as protenas virais, completando-se o ciclo de replicao do vrus. Podemos, ento, dizer que todos os retrovrus so vrus de genoma RNA, mas nem todos os vrus de genoma RNA so retrovrus. O genoma do HIV constitudo por duas fitas nicas e idnticas de RNA genmico, sendo, portanto, um vrus de genoma diploide (ateno, quando o vrus infecta a clula-alvo, somente uma das fitas de RNA transcrita a DNA, a segunda fita fica como reserva para o vrus caso ocorra algum problema durante a transcrio reversa). Esse genoma est localizado no interior do nucleocapsdeo viral, onde tam-
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Imunologia
bm se localizam trs enzimas muito importantes para a replicao desse vrus: a transcriptase reversa, a integrase e a protease. No envelope do vrus, que derivado da membrana da clula que foi infectada, esto ancoradas duas glicoprotenas muito importantes para o processo infeccioso viral: gp 120 e gp 40. Sendo assim, os constituintes do vrus so identificados por p (quando tratamos de protenas virais) e gp (quando tratamos de glicoprotenas virais), seguidos de seus respectivos pesos moleculares (Figura 7.1).
Nucleocapsdeo gp120 gp41 Integrase Genoma RNA
gp120 Envelope
Protease
Nucleocapsdeo
Transcriptase reversa
Envelope
Figura 7.1 Estrutura do HIV: lentivrus, uma das trs subfamlias dos retrovrus. (Adaptado de MURPHY et al., 2008, p. 531).
O genoma do HIV est dividido em trs regies que codificam as protenas estruturais do vrus: uma regio codificadora das protenas de capsdeo interno do vrus, denominada regio gag; uma regio codificadora das enzimas virais (protease, transcriptase reversa e integrase), denominada pol; e uma regio codificadora das protenas do envelope viral (gp 120 e gp 40), denominada env. Vrios outros genes codificam protenas de regulao viral, incluindo os genes tat, vif e nef, os quais tambm so alvos das terapias antivirais das quais trataremos mais adiante neste captulo (Figura 7.2).
VPR REV GAG LTR POL VIF TAT VPU ENV REV TAT NEF LTR Figura 7.2 Genoma do HIV (9.749 nucleotdeos). (Adaptado de MURPHY et al., 2008, p. 536).
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7.5 HIV e sistema imune

Por que estudamos o vrus HIV na disciplina de Imunologia? Para responder a essa pergunta, temos que entender como o vrus infecta a clula hospedeira e qual o seu caminho de replicao e espalhamento para as outras clulas. A gp 120, que a glicoprotena de envelope viral, apresenta uma alta afinidade de ligao na protena CD4. Assim, todas as clulas que possuem CD4 em sua superfcie, ou seja, os linfcitos T helper CD4 (estes majoritariamente), os macrfagos, os moncitos e as clulas dendrticas (estas expressando baixos nveis de CD4) so alvos em potencial para o vrus. Se a via de infeco envolveu mucosa (por exemplo, a via sexual), o vrus ficar estocado nos tecidos linfoides associados mucosa cujas clulas serviro como reservatrios virais. Agora vamos entender o que acontece para que o vrus infecte a clula hospedeira: lembram-se das glicoprotenas gp 120 e gp 40 presentes no envelope viral e quando estudamos que essas protenas so importantes no processo de entrada do vrus na clula? Pois bem, aps a ligao da gp 120 viral ao receptor CD4 da clula hospedeira, a gp 40 promover a fuso do envelope viral com a membrana celular, promovendo a entrada do genoma viral e das enzimas associadas a ele dentro da clula infectada. Uma vez presente no interior da clula hospedeira, o RNA viral ser convertido em DNA pela enzima transcriptase reversa (chamamos esse DNA de DNA complementar ou cDNA). Essa enzima ser responsvel tanto pela sntese da primeira como da segunda fita de DNA proviral. Aqui vale comentar que a enzima transcriptase reversa uma DNA polimerase que comete muitos erros durante a sntese do DNA a partir do RNA viral molde e tambm durante a sntese da segunda fita de DNA proviral, usando a primeira fita como molde. Isso significa que cada vez que a transcriptase reversa copiar fitas de DNA, essas fitas geradas so alteradas, criando, com isso, muitos mutantes virais. Imaginem que num mesmo indivduo durante todo o curso de infeco pelo HIV podem surgir mais de 1.000 mutantes virais diferentes!!! Por essa razo, a resposta imune, que altamente especfica, nunca consegue resolver a infeco, pois sempre ter que gerar uma nova resposta contra os novos mutantes virais.
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Aps a fase de sntese do DNA dupla fita, ele atravessar a membrana nuclear e integrar-se- ao genoma da clula, ficando, dessa forma, latente ou escondido, e isso pode durar muitos anos. A enzima viral responsvel por essa integrao chamada de integrase. E como ser que o vrus, que est com o seu genoma de DNA proviral escondido no genoma da prpria clula e, por isso, invisvel resposta imune, ir continuar sua replicao, formar novos vrus e infectar outras clulas? Isso ocorre porque, quando a clula que est infectada for ativada por qualquer antgeno estimulador (lembrem-se de que essas so clulas da resposta imune e nada impede que elas sejam estimuladas), uma cascata de reaes resulta na transcrio do RNA viral pela RNA polimerase do prprio hospedeiro, ou seja, em vez de a RNA polimerase celular transcrever RNA celular para sntese de protenas celulares, ela passa a transcrever o RNA do prprio vrus. Fica, assim, selado o destino de destruio para essa clula. Assim que o RNA transcrito, tem-se incio sntese das protenas virais, replicao do RNA e montagem de novas partculas virais. Durante a sntese das protenas virais, elas so formadas como pr-protenas precursoras. E, durante a montagem das partculas virais, outra enzima tem um papel fundamental no processo a protease viral , que cliva as pr-protenas e permite a juno das protenas maduras que iro empacotar o genoma viral e finalizar a partcula viral madura. Por exemplo, quando sintetizadas as protenas de envelope, forma-se uma pr-protena precursora de 160 kd (gp 160). Somente aps a clivagem pela protease viral surgiro a gp 120 e a gp 40. Os vrus maduros esto agora prontos para ser liberados e se espalhar para outras clulas. Como se trata de um vrus envelopado, a sada da clula ocorre por um processo denominado de brotamento, e, neste caso, a hora de passar atravs da membrana que vai ser fundamental para a aquisio do envelope glicolipdico na partcula viral. No caso dos macrfagos, mais frequente que eles mesmos sirvam como reservatrios virais transportando o vrus para outras partes do corpo (tecidos linfoides e sistema nervoso central). Nas clulas T CD4, ocorre com mais frequncia a liberao de um nmero muito grande de partculas virais, fazendo
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com que o nmero de leses na membrana causadas pelo brotamento do vrus seja muito alto, a clula no consiga se regenerar e seja lisada. Ainda h um agravante de essas clulas infectadas e no lisadas pela passagem do vrus ficarem com gp 120 presas em suas membranas na hora da passagem do vrus por brotamento. Essa presena da gp 120 faz com que essas clulas se liguem em receptores CD4 de linfcitos T helper sadios. Formam-se, ento, clulas gigantes multinucleadas, denominadas sinccios, que so resultados de fuso de linfcitos T CD4 infectados com linfcitos T CD4 no infectados. J sabemos que clulas infectadas por vrus so alvo de destruio pelos linfcitos T CD8+ pois elas expressam protenas virais associadas MHC I em sua superfcie. Assim, os linfcitos T CD8 positivos proliferam para gerar muitos clones de clulas que destroem as clulas T CD4+ infectadas pelos vrus. Temos, assim, uma diminuio progressiva das clulas T CD4+ e um aumento de linfcitos T CD8+ nos pacientes HIV positivos que esto em fase de proliferao viral (Figura 7.3).
Anticorpos contra a protena do envelope do HIV Clulas T citotxicas especicadas Anticorpos contra a protena central do HIV Vrus infeccioso no plasma 4-8 semanas 2-12 anos 2-3 anos 0-1 anos
Figura 7.3 Cintica de infeco pelo HIV e resposta imune. (Adaptado de MURPHY et al., 2008, p. 538).
7.6 Transmisso do HIV

O vrus da imunodeficincia humana pode ser transmitido atravs de trs vias importantes: contacto com sangue contaminado pelo vrus (aqui identificamos as transmisses por transfuses de sangue contaminado que atualmente so raras devido aos testes feitos antes da liberao das bolsas de sangue e tambm as contaminaes devidas ao compartilhamento de agulhas utilizadas para
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injetar drogas); atravs de fluidos corporais genitais (o contacto sexual direto e sem proteo permite um ntimo contacto com clulas de mucosa potencialmente infectadas pelo vrus); e a chamada transmisso vertical, que ocorre quando a gestante HIV+ transmite o vrus atravs da placenta durante a gestao ou durante o parto atravs do contacto com sangue e grande quantidade de fluidos corpreos. O que mais assusta que, apesar das campanhas massivas feitas pelos agentes de sade governamentais e pelas escolas, 85% das infeces atualmente ocorrem por transmisso sexual. O fato que duas caractersticas de transmisso viral mudaram e adquiriram um novo perfil desde o isolamento do vrus em 1983: a heterossexualizao (antes a doena era tpica de homossexuais) e a feminilizao (antes a prevalncia era de homens).
7.7 Janela imunolgica e o perigo da transmisso

Aps a infeco inicial pelo HIV, muitos pacientes permanecem assintomticos, outros apresentam uma doena semelhante a uma gripe, caracterizada por febre, dor de cabea, dor de garganta e indisposio geral. Durante esse perodo, ocorre viremia (ou seja, vrus circulantes na corrente sangunea), com queda brusca dos linfcitos T CD4+. Entretanto, nesse perodo, que pode variar de 2 a 6 semanas, caso o indivduo infectado fizesse um teste de sorologia para HIV, esse teste seria negativo, pois nessa fase o sistema imune est sendo estimulado para gerar uma resposta especfica contra o vrus. Essa fase denominada de janela imunolgica. Com a estimulao da resposta imune especfica, clulas T citotxicas iro responder ao vrus, sendo em parte responsveis pela reduo do nmero de clulas T CD4+ infectadas pelo vrus. Tambm, nessa fase, clulas B proliferaro, diferenciar-se-o em plasmcitos e passaro a excretar anticorpos no soro contra as protenas do HIV. Nesse ponto o paciente considerado soroconvertido e o diagnstico da infeco pelo HIV pode ser realizado por testes sorolgicos de procura de anticorpos no soro. Nessa fase, o nmero de clulas CD4+ no sangue perifrico aumenta, o indivduo
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fica totalmente assintomtico e permanecer dessa forma por perodos de tempo variveis, podendo chegar a muitos anos. Depleo de clulas CD4 LT Portanto, ateno: algumas pessoas, quanCD4+ do suspeitam que podem ter sido infectaCD4+ PBL 1000 das pelo HIV, por medo de discriminao, 500 resolvem doar sangue para poder fazer o 200 teste sem se identificar nos laboratrios e 0 inclusive mentem na entrevista de autoexSintomas leves Fase assintomtica Fase AIDS cluso. Esse constitui um perigo e pe em (2-6 semanas) (vrios anos) sintomtica risco a vida de pacientes inocentes que neFigura 7.4 Fases da infeco cessitam desse sangue para transfuses. Caso esse doador esteja pelo HIV at o aparecimento da na fase de janela imunolgica, os testes aplicados no iro detectar AIDS. (Adaptado de MURPHY et al., 2008, p. 530). o vrus, o sangue ser liberado para doao e contaminar outras pessoas (Figura 7.4).
Infeco Soroconverso Morte
7.8 Diagnstico
Os diagnsticos mais comuns de HIV esto baseados na busca de anticorpos anticonstituintes virais (protenas virais) no soro do paciente, ou seja, o indivduo infectado reage contra o vrus e produz anticorpos contra esse vrus, por isso se busca em seu soro a presena desses anticorpos. O teste de ELISA, que ser estudado no captulo 8, o teste de triagem mais comum usado inclusive nos bancos de sangue para triagem de sangue de doadores para serem liberados para transfuso. Esse teste bastante sensvel e utiliza placas de um plstico especial (poliestireno) de 96 poos sensibilizados com protenas purificadas do HIV (usualmente os kits de diagnstico por ELISA usam as protenas gp 120, gp 41 e p 24). Se o indivduo estiver infectado e no estiver na janela imunolgica, ele ter, em seu soro, anticorpos que se ligaro s protenas virais que esto no poo da placa e podero, assim, ser detectados. Caso o teste ELISA seja positivo, para efeitos de triagem, o sangue no usado para transfuso e descartado, mas, para efeitos de diagnstico, outro teste ento aplicado: o Western-blotting. Esse teste, conforme explicado no captulo 8, de alta sensibilida-
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de e alta especificidade, e dizemos que um teste confirmatrio de diagnstico do HIV. Ele busca a interao dos anticorpos presentes no soro do indivduo com as protenas virais isoladas gp 120, gp 41, p 24 e gp 31 (Figura 7.5). Ateno, esses testes sorolgicos no so vlidos se aplicados para bebs filhos de mes HIV+ at pelo menos o oitavo ms de vida. Lembram-se de que os anticorpos da classe IgG podem atravessar a placenta? Pois bem, todo beb filho de me HIV+ necessariamente soropositivo para o HIV, mas no necessariamente est infectado pelo vrus, que pode no ter sido transmitido durante a gestao e o parto. Se somente os anticorpos maternos foram transmitidos, o que ocorrer que eles iro gradualmente desaparecendo do sangue do beb com o passar dos meses, conforme j estudamos. Nesses casos, aplicamse testes para buscar a presena ou ausncia do vrus no sangue do beb e se busca, ento, realizar testes de Biologia Molecular baseados na amplificao do genoma viral por PCR (reao em cadeia da polimerase), que amplifica in vitro o genoma viral e permite sua deteco. Esse teste mais caro, no usado em testes de triagem em bancos de sangue e s usado quando indicado, inclusive para o monitoramento de pacientes HIV+ em terapia antirretroviral.
7.9 Indivduo portador do vrus HIV e indivduo portador da AIDS

Essa questo extremamente delicada e devemos saber diferenciar muito bem esses dois termos, pois muitas vezes os indivduos HIV+ so tratados com extrema discriminao, sendo em alguns casos afastados do convvio social por ignorncia das pessoas com as quais convivem. Conforme j relatamos no curso da infeco pelo HIV, na fase inicial da infeco pelo vrus, ocorre uma diminuio bastante acentuada de linfcitos T CD4+ no sangue perifrico. Para termos uma ideia bem clara, o nmero de LT CD4+ em indivduos no infectados varia de 1.000 a 800 clulas/mm3 de sangue. Logo no incio da infeco (que pode ter alguns sintomas leves de uma virose ou muitas vezes ser assintomtica), esse nmero cai bastante, podendo chegar a 400 clulas/mm3 de sangue.
120 - 95 - 68 - 45 - 12 40 24 -
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HIV
Dissociao das protenas pelo detergente SDS
Eletroforese desnaturante das protenas do HIV
Transferncia das protenas para papel especial e incubao com o soro do paciente
Deteco da interao protenas HIV/Anticorpos com uma anti-lgG marcada
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Figura 7.5 Diagnstico conrmatrio do HIV por Western-blotting. (Adaptado de MURPHY et al., 2008, p. 756).
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Imunologia
Mas, assim que a resposta imunolgica ativada, esse nmero de clulas sobe, a carga viral (partculas de HIV no sangue) cai e o indivduo entra na fase assintomtica da doena, que pode se prolongar por muitos anos. Muito bem, esse indivduo HIV+, mas no portador da AIDS! Com o passar dos anos e com o aumento da estimulao de clulas cronicamente infectadas pelo vrus (lembram-se das clulas que ficam com o DNA proviral escondido em seu genoma?), novas partculas virais so liberadas e comea a ocorrer uma diminuio mais acentuada do nmero de linfcitos T CD4+. Logo falaremos dos frmacos antivirais e da estratgia que se est buscando para aumentar cada vez mais esse perodo de latncia e de diminuio das partculas virais no sangue, comprovando que o indivduo HIV+ pode passar toda a sua vida sem AIDS. Se o nmero de linfcitos T CD4+ carem para menos de 400 clulas/mm3 de sangue, comeam o ocorrer infeces oportunistas, que so aquelas causadas por bactrias, fungos, vrus, protozorios, neoplasias pouco comuns (por exemplo, Sarcoma de Kaposi), alteraes neurolgicas, encefalopatias e demncia. Essa a fase sintomtica da infeco pelo HIV, que, quando tratada e o indivduo responder ao tratamento, ele no est com AIDS, sendo portador do vrus HIV com presena de infeces oportunistas. Se o nmero de LT CD4+ cair em nveis inferiores a 200 clulas/ mm3 de sangue, as infeces tornam-se muito comuns, de vrias origens e concomitantes e o indivduo no tem mais condies de responder aos tratamentos devido ao seu alto grau de comprometimento imunolgico. Nessa fase, e somente nessa fase, dizemos que o indivduo portador da AIDS. O vrus HIV, diferentemente de vrios outros vrus que infectam um determinado rgo ou local do corpo causando uma doena especfica, tem como alvo as clulas da resposta imune. Por isso, no causa uma doena especfica, mas impede o indivduo de lutar contra qualquer doena, mesmo as mais benignas e insignificantes para os indivduos sadios. Para no esquecer!
Quando convivemos com um indivduo portador do vrus HIV e o nmero de clulas CD4+ desse indivduo estiver baixo, devemos ter extremo cuidado para no transmitir doenas a ele, essa ser a forma de demonstrarmos amor e solidariedade aos infectados. E nunca podemos usar o termo AIDS ou, pior, AIDTICO ao indivduo portador do vrus HIV, pois essa ser somente a fase terminal dele, que talvez nunca venha a acontecer.
AIDS no uma doena especca, e sim uma sndrome de imunodecincia causada pela incapacidade de o sistema imunolgico do indivduo responder a qualquer tipo de infeco por estar extremamente deciente.
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7.10 Monitoramento dos pacientes HIV+

O monitoramento dos pacientes se d pela contagem de linfcitos no sangue perifrico por citometria de fluxo e tambm se medindo a carga viral (ou seja, o nmero de partculas virais no sangue) por tcnicas de Biologia Molecular. A contagem da subpopulao CD4+ possui um papel importante, pois o melhor marcador para se avaliar o sistema imune no paciente HIV+. Com esse parmetro, sabe-se quando iniciar o tratamento profiltico e a manuteno dos pacientes sintomticos, alm de fornecer um segundo parmetro no controle da eficcia do tratamento.
7.11 Terapia antirretroviral

A terapia antirretroviral atualmente recebe um nome elegante cuja sigla em ingls HAART (em ingls, Highly Active Anti Retroviral Treatment) e cuja traduo para o portugus Terapia Antirretroviral de Alta Atividade. Pacientes que seguem o coquetel denominado HAART com disciplina tm mostrado excelentes resultados de tratamento. A HAART reduziu a mortalidade em 40-70%, a hospitalizao em 80%, alm de ter contribudo significantemente para o aumento da qualidade e do tempo de vida dos pacientes. O uso da HAART tambm reduziu dramaticamente o nmero de recm-nascidos filhos de mes HIV positivas infectados pelo vrus, pois, como a carga viral das gestantes mantida em nmeros muito baixos, isso reduz a possibilidade de passagem do vrus pela placenta. Dentre os medicamentos que fazem parte desse coquetel, os anlogos de nucleosdeos inibidores da transcriptase reversa so de papel fundamental na composio. Lembram-se de que a transcriptase reversa uma enzima que copia DNA a partir da fita de RNA molde? Pois bem, para fazer isso, ela precisa dos nucleotdeos Adenina (A), Citosina (C), Guanina (G) e Timina (T); e esses nucleotdeos ela usa da clula hospedeira que est constantemente em processo de duplicao de seu prprio DNA. Em sua forma final, esses nucleotdeos so: ATP, CTP, GTP e TTP. Lembram-se tambm de que a transcriptase reversa no uma enzima muito
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Imunologia
seletiva e que comete muitos erros na hora de sintetizar o DNA viral? Pois bem, os pesquisadores se utilizaram, ento, de uma estratgia que consistiu em utilizar substncias que imitam os nucleotdeos, mas que possuem uma diferena muito pequena na sua composio. Se esses anlogos de nucleotdeos forem usados pela transcriptase reversa (e ela os usa), a sntese do DNA no prossegue e o vrus paralisa a sua replicao. Hoje j esto disponveis no mercado vrios desses anlogos. O mais famoso deles (e o primeiro que foi patenteado e entrou no mercado) o AZT (azidotimidina trifosfato), um nucleotdeo muito semelhante ao TTP (timidina trifosfato). A DNA polimerase celular no usa esse anlogo na duplicao do seu DNA celular, mas a transcriptase reversa viral usa e com isso bloqueia a replicao. Outros anlogos disponveis so o ddC (anlogo do CTP), o ddA (anlogo do ATP), o ddI (anlogo de qualquer nucleotdeo) etc. Outro componente importante do HAART um composto inibidor da enzima protease. Lembram-se de que a protease cliva as pr-protenas precursoras permitindo a montagem da partcula viral madura? Pois bem, com a protease inibida no h como clivar as precursoras e a partcula viral no deixa a clula e no invade as clulas vizinhas. Mas se o coquetel anti-HIV funciona to bem, qual o problema em se utilizarem esses medicamentos e por que o seu uso deve ser criteriosamente estudado para cada indivduo? A resposta simples: esses medicamentos, como a maioria dos medicamentos de uso contnuo, tm algumas desvantagens, uma delas que a transcriptase reversa pode se tornar resistente ou seletiva ao uso dos anlogos de nucleotdeos e, assim, preferir o uso dos nucleotdeos celulares disponveis. Existem casos de indivduos que j so infectados por cepas de HIV resistentes aos anlogos, e isso um problema srio no tratamento. O uso de vrios deles nos coquetis tem permitido um emprego mais prolongado sem induo de resistncia, mas esse um perigo que sempre se corre. E os efeitos colaterais? Essa outra desvantagem, pois esses medicamentos possuem muitos efeitos colaterais, como nuseas, vmitos, hepatotoxicidade etc. e seu uso prolongado complica mais ainda essa administrao.
HIV/AIDS
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A composio final da HAART pode variar de paciente para paciente. Existem outros componentes, como inibidores de protenas regulatrias do vrus, estimuladores da resposta imune do paciente, soroterapia etc., mas sobre isso no entraremos em detalhes neste captulo. O que mais importante que o tratamento com HAART deve ser muito bem planejado entre mdico e paciente, inclusive o melhor perodo para seu incio.
Resumo
Aprendemos neste captulo que o vrus HIV um retrovrus humano que possui como caractersticas marcantes um envelope constitudo por uma bicamada lipdica e o genoma constitudo por RNA, que reversamente transcrito a DNA (chamado de DNA pr-viral) aps infectar a clula-alvo por uma enzima viral denominada transcriptase reversa. O HIV pode ser transmitido atravs de trs vias importantes: contacto com sangue contaminado pelo vrus, atravs de fluidos corporais genitais (o contacto sexual direto e sem proteo permite um ntimo contacto com clulas de mucosa potencialmente infectada pelo vrus) e a chamada transmisso vertical, que ocorre quando a gestante HIV+ transmite o vrus atravs da placenta durante a gestao ou durante o parto atravs do contacto com sangue e grande quantidade de fluidos corpreos. A infeco pelo vrus ocorre porque a gp 120, que a glicoprotena de envelope viral, apresenta uma alta afinidade de ligao com a protena CD4+. Assim, todas as clulas que possuem CD4+ em sua superfcie, ou seja, os linfcitos T helper CD4+, os macrfagos, os moncitos e as clulas dendrticas so alvos em potencial para o vrus. Aps a fase de sntese do DNA dupla fita viral, ele atravessar a membrana nuclear e integrar-se- ao genoma da clula, entrando na fase de latncia viral, que pode durar muitos anos. Na fase de proliferao viral ocorre uma diminuio progressiva das clulas T CD4+ e um aumento de linfcitos T CD8+ nos pacientes HIV positivos. Se o nmero de LT CD4+ cair em nveis inferiores a 200 clulas/mm3 de sangue, as infeces tornam-
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Imunologia
se muito comuns, de vrias origens e ao mesmo tempo devido ao alto grau de seu comprometimento imunolgico e o indivduo est, dessa forma, portador da sndrome da imunodeficincia ou AIDS. O tratamento baseado na HAART tem mostrado excelentes resultados, tendo reduzido a mortalidade e a hospitalizao, alm de ter contribudo significantemente para o aumento da qualidade e do tempo de vida dos pacientes.
Referncias
BENJAMINI, E.; COICO, R.; SUNSHINE, G. Imunologia. 4. ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2002. MURPHY, K. M.; TRAVERS, P.; WALPORT, M. Janeways immunobiology. 7. ed. Philadelphia: Garland Publishing, 2008. p. 530; 531; 536; 538 e 756. PEAKMAN, M.; VERGANI, D. Imunologia bsica e clnica. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 1999. SANTOS, N. S. O.; ROMANOS, M. T. V.; WIGG, M. D. Introduo virologia humana. 2. ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2008.
C A P T U LO 8
Interaes antgenoanticorpo
Neste captulo voc aprender os princpios que norteiam as reaes antgenoanticorpo que constituem a base de diversos ensaios imunolgicos. Discutiremos ainda as reaes de aglutinao utilizadas na determinao dos grupos sanguneos do sistema ABO e Rh, os mtodos envolvidos no diagnstico da gravidez, os mtodos de imunofluorescncia, os ensaios imunoenzimticos, o Western-blotting e a citometria de fluxo.
C A P T U LO 8
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8.1 Reaes de hemaglutinao: grupos sanguneos ABO e Rh

Foi no incio do sculo XX que a transfuso de sangue adquiriu bases mais cientficas. Em 1900, foram descritos os grupos sanguneos A, B e O por Landsteiner e, em 1902, o grupo AB por De Costello e Starli. A descrio do sistema Rh foi descrito posteriormente, em 1940, por Landsteiner e Wiener. Os grupos sanguneos de maneira geral so constitudos por antgenos que so a expresso de genes herdados da gerao anterior. Quando um antgeno est presente, isso significa que o indivduo herdou o gene de um ou de ambos os pais e que esse gene poder ser transmitido para a prxima gerao.
8.1.1 Sistema ABO

H vrios grupos sanguneos herdados independentemente entre si, sendo conhecidos diversos sistemas de grupo sanguneos. Entre eles podemos citar os sistemas ABO, Rh, MNS, Kell, Lewis etc. O sistema ABO o de maior importncia na prtica transfusional e no ensino da Imunologia por ser o mais imunognico, ou seja, por ter maior capacidade de provocar a produo de anticorpos, seguido do sistema Rh.
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Imunologia
Os antgenos desse sistema esto presentes na maioria dos tecidos do organismo. Fazem parte desse sistema trs genes A, B e O , podendo qualquer um dos trs ocupar o loco ABO em cada elemento do par de cromossomos responsveis por esse sistema. Os genes ABO no codificam diretamente seus antgenos especficos, mas sim enzimas carreadoras que tm a funo de transportar acares especficos para uma substncia precursora na superfcie dos eritrcitos, resultando nos antgenos ABO. O indivduo do grupo AB possuidor de um gene A e de um gene B, sendo um herdado da me e o outro do pai. Ele possui nos seus glbulos vermelhos os antgenos A e B, e seu gentipo AB. No caso do grupo O, foi herdado do pai e da me o mesmo gene O. As clulas de grupo O so reconhecidas pela ausncia de antgeno A ou B. Quando o gene O herdado ao lado de A, apenas o gene A se manifesta; e, quando herdado ao lado do gene B, apenas o gene B se manifesta. Ao realizarmos os testes rotineiros em laboratrio, no podemos diferenciar os indivduos BO e BB, e nem AO e AA. Os smbolos A e B, quando nos referimos a grupos sanguneos, indicam fentipos, enquanto AA, BO etc. so gentipos. dito homozigoto o indivduo possuidor de genes iguais (AA, BB, OO) e heterozigoto quando os genes so diferentes (AO, BO, AB). Regularmente as pessoas expostas a um antgeno que no possuem podem responder com a produo de um anticorpo especfico para esse antgeno. Entretanto, h alguns antgenos que possuem uma estrutura que se assemelha muito com antgenos de bactrias e plantas, s quais estamos constantemente expostos. Nesses casos, ocorre a produo de anticorpos a partir do contato com as bactrias e as plantas, e no com o antgeno eritrocitrio. Nesse grupo encontramos os antgenos do sistema ABO. Por esse processo, os indivduos com idade superior a seis meses possuem o anticorpo contra o antgeno que no existe na superfcie de seus eritrcitos, pois j foram expostos a essas bactrias e plantas atravs da alimentao. Esses anticorpos so chamados de isoaglutininas ou aglutininas naturais e so da classe IgM (Tabela 8.1).
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A classicao sangunea ABO A determinao do grupo sanguneo desse sistema feita usando dois tipos de teste: 1. atravs da identificao da presena de antgenos nos eritrcitos, empregando como reativos anticorpos purificados (anti-A e anti-B). Essa a chamada classificao ou tipagem direta e ser utilizada na aula prtica; e 2. atravs da identificao da presena de anticorpos no soro/ plasma, usando como reativos antgenos conhecidos (hemcias A e hemcias B). Essa a classificao ou tipagem reversa (ver Tabela 8.1).
Tabela 8.1 Determinantes antignicos e anticorpos naturais do sistema sanguneo ABO
Grupo sanguneo do indivduo A B AB O Soro de tipagem Anti-A e anti-B + + + + Hemcias de tipagem A e B + + + + Antgeno A B AeB Anticorpo presente no soro do indivduo Anti-B Anti-A Ausente Anti-A e anti-B
Observando o quadro anterior, podemos perceber a presena dos antgenos e dos anticorpos em cada grupo sanguneo. nessa presena ou ausncia de antgenos e anticorpos que se baseiam a tipagem sangunea e a escolha do sangue a ser transfundido. As transfuses podem ser: isogrupo quando doador e receptor so do mesmo grupo ABO; e heterogrupo doador e receptor so de grupo sanguneo diferente. A escolha do sangue se baseia no fato de que o indivduo no pode ser transfundido com um sangue que possua um antgeno que ele no tem, pois o anticorpo presente no seu plasma contra esse antgeno iria reagir com essas hemcias transfundidas. Em vista disso e observando o quadro anterior, fica claro que um indivduo do grupo A no pode receber sangue B, e assim por diante.
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Imunologia
Nas transfuses sanguneas, em relao ao sistema ABO, preciso considerar, inicialmente, que a taxa de aglutinognios nas hemcias significativamente maior que a taxa de aglutininas no plasma. Dessa maneira, so inviveis as transfuses em que o sangue doado contm aglutinognios que encontraro no receptor as aglutininas contrastantes. Isso significa que, se o sangue doado apresenta aglutinognios A, o sangue do receptor no pode conter aglutininas anti-A; e que, se o sangue doado contm aglutinognios B, o receptor no pode apresentar aglutininas anti-B. Assim, exemplificando, um indivduo do grupo B no pode doar sangue para outro do grupo O, uma vez que as aglutininas anti-B do receptor reagiriam com os aglutinognios B do doador, semelhana de uma reao antgenoanticorpo. Dessa reao, na qual os aglutinognios B atuariam como antgeno (estranho ao receptor do grupo O) e as aglutininas anti-B como anticorpos, resulta a aglutinao do sangue doado, fato que pode provocar a obstruo de vasos sanguneos, com consequncias que podem levar o receptor morte. No entanto, um indivduo do grupo O pode doar sangue para outro do grupo B. Isso porque o volume de sangue doado no contm aglutininas em taxa suficientemente grande para provocar a aglutinao das hemcias do receptor. Observe, ento, que as hemcias que se aglutinam so aquelas presentes no sangue doado e, para tanto, devem conter aglutinognios (antgenos) estranhos, isto , que no existem no sangue do receptor. No entanto, sempre que possvel, deve se transfundir sangue isogrupo, pois, se transfundimos um sangue do grupo O a um paciente do grupo A, junto com as hemcias transfundidas temos uma quantidade de plasma onde h anticorpo anti-A que poder reagir com as hemcias desse paciente, causando certo grau de hemlise maior ou menor, mas que poder ter um significado dependendo do quadro clnico do paciente. Cada caso deve ser particularmente analisado pelo hemoterapeuta (Figura 8.1). Esse sistema ABO tambm pode ocasionar incompatibilidade materno-fetal, com desenvolvimento da doena hemoltica perinatal. Apresenta tambm importncia em transplantes renais ou cardaco, com menor papel nos hepticos ou de medula ssea. Em alguns processos pode ocorrer a perda parcial do antgeno A ou B, como em algumas leucemias.
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Hemcias de indivduos dos grupos sanguneos
A
Estrutura dos carboidratos
AB
R GlcNAc Gal GalNAc Fuc + R GlcNAc Gal Gal Fuc
R GlcNAc Gal Fuc Soro de indivduos do tipo
R GlcNAc Gal Gal R GlcNAc Gal GalNAc Fuc Fuc
O Anticorpos Anti-A e Anti-B A Anticorpos Anti-B
No Aglutinao
Aglutinao
Aglutinao
Aglutinao
No Aglutinao
No Aglutinao
Aglutinao
Aglutinao
B Anticorpos Anti-A
No Aglutinao
Aglutinao
No Aglutinao
Aglutinao
AB
Ausncia de anticorpos para A ou B
No Aglutinao
No Aglutinao
No Aglutinao
No Aglutinao
Figura 8.1 Caracterizao da compatibilidade dos grupos sanguneos ABO. GlcNAc = N-Acetilglicosamina; Gal = Galactosamina; Fuc = Fucose. (Adaptado de MURPHY et al., 2008, p. 744).
8.1.2 Sistema Rh
O fator Rh constitudo de aproximadamente 40 antgenos, e essa famlia gnica ainda no totalmente compreendida. Sabe-se que cada pessoa herda um gene ou um complexo gnico Rh de cada um dos pais. No sistema descrito por Fisher e Race, os pares allicos produzem cinco antgenos (D, C, c, E e e). Esses antgenos so lipoprotenas e esto dispersamente distribudos na
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Imunologia
superfcie das hemcias. Quando dizemos que um indivduo Rh positivo, quer dizer que o antgeno D est presente na superfcie de suas hemcias. Isso porque o antgeno D foi o primeiro a ser descoberto nesse sistema e inicialmente foi considerado como nico. Aps os antgenos A e B (do sistema ABO), o antgeno D o mais importante na prtica transfusional. Em algumas situaes podemos ter uma expresso fraca do antgeno D. Isso pode ocorrer por: variaes quantitativas que so transmitidas geneticamente; efeito de posio, sendo o mais conhecido o enfraquecimento do antgeno D quando o gene C est na posio trans em relao ao D; e expresso gnica parcial por ausncia de um dos mltiplos componentes do antgeno D. Esses casos so chamados na prtica de Rh fraco e se referem ao que era conhecido anteriormente como Du. O antgeno Du particularmente importante na tipagem de sangue de populaes de negros nas quais mais frequente e pode levar a falsos resultados Rh negativos e a aloimunizaes tanto por transfuses quanto por gestao incompatvel. Ao contrrio do que ocorre com os antgenos A e B, as pessoas cujos eritrcitos carecem do antgeno D no tm regularmente o anticorpo correspondente. A produo de anti-D quase sempre posterior exposio por transfuso ou gravidez a eritrcitos que possuem o antgeno D. Uma alta proporo de pessoas D-negativas que recebem sangue D-positivo produz anti-D. Se encontrarmos anticorpos desse sistema, podemos concluir que ocorreu uma imunizao atravs de uma transfuso ou de uma gravidez. Qualquer antgeno desse sistema capaz de provocar a produo de anticorpos e assim a gerar situaes de incompatibilidade. Aloimunizaes contra antgenos E, c, e, C so tambm observadas em pacientes politransfundidos, mas com uma frequncia inferior. A maioria dos casos de doena hemoltica do recm-nascido (DHRN) devida ao anti-D. A profilaxia por imunoglobulinas
Aloimunizao
A aloimunizao ou isoimunizao Rh uma condio caracterizada pelo contacto de indivduos Rh negativos com hemcias Rh positivas, levando produo de anticorpos contra os antgenos presentes naquelas hemcias. Esses anticorpos tm a capacidade de destruir as hemcias Rh positivas. No caso de mes Rh negativas que possuem anticorpos anti-Rh, esses anticorpos atravessam a placenta, entram em contato com o sangue fetal e tm a capacidade de destruir as hemcias fetais. O resultado nal a anemia, que pode ser grave e levar insucincia cardaca e a edema generalizado.
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anti-D diminuiu o nmero de aloimunizaes maternas contra o antgeno D, mas no contra E, c, e, C. Na rotina, realizada a tipagem apenas para o antgeno D nesse sistema. Os outros antgenos (E, C, c, e) so determinados apenas em situaes onde ocorre incompatibilidade. A produo de anticorpos contra esses antgenos ocorre de forma semelhante produo de anti-D. A capacidade de provocar a produo de anticorpos desses antgenos varia. Partindo do mais imunognico, temos D > c > E > C > e.
8.1.3 Transfuso
Para efeito de transfuso, considerado que pacientes Rh positivos podem receber sangue Rh positivo ou negativo e que pacientes Rh negativos podem receber somente sangue Rh negativo. Para os pacientes D fraco, existem alguns critrios a serem observados. Se o antgeno D est enfraquecido por interao gnica, estando ele presente integralmente, o paciente poder receber sangue Rh positivo ou negativo. Porm, nos casos em que o antgeno D est enfraquecido por ausncia de um dos componentes, pode ocorrer produo de anticorpos contra o antgeno D na sua forma completa. Como, rotineiramente, no se identifica a causa que leva expresso enfraquecida do antgeno, costuma-se dar preferncia a usar sangue Rh negativo para os pacientes Rh fraco. Existem situaes clnicas em que necessrio avaliar o risco benefcio e fazer outras opes. Nesse momento necessrio o acompanhamento do hemoterapeuta.
8.1.4 Reao de hemaglutinao

A medida direta da ligao de um anticorpo ao antgeno especfico utilizada na maioria dos ensaios sorolgicos. Alguns importantes ensaios esto baseados na capacidade do anticorpo de se ligar ao antgeno e essa ligao levar a uma alterao do estado fsico do antgeno. Essas interaes secundrias podem assim ser detectadas de diversas maneiras. Por exemplo: quando o antgeno est presente numa superfcie de uma partcula grande como, por
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Imunologia
exemplo, uma bactria ou um eritrcito, os anticorpos, uma vez ligados, levam essas partculas a se agruparem num fenmeno conhecido por aglutinao. O mesmo princpio aplica-se s reaes utilizadas para determinao dos grupos sanguneos em que os antgenos encontram-se na superfcie das hemcias, e essa reao de aglutinao causada pela ligao do anticorpo denominada hemaglutinao (do grego, haima, sangue). Esse procedimento utilizado para determinar o grupo sanguneo ABO e tambm pode ser utilizado para o grupo Rh, mas se deve levar em considerao que somente 75% dos indivduos Rh positivos (D positivos) podem ser tipados dessa forma, j que existem os D fracos que necessitam ser testados pela forma de aglutinao indireta (coombs indiretos). Para a tipagem utilizamse anticorpos (aglutininas) anti-A ou anti-B e anti-D que se ligaro nos determinantes antignicos A, B e D, respectivamente, presentes nas hemcias (aglutinognios). Esses aglutinognios esto presentes num grande nmero de cpias na superfcie das hemcias, levando as clulas a se ligarem cruzadamente entre si quando da ligao do anticorpo especfico. Essas ligaes cruzadas ocorrem pela interao das clulas e pela ligao simultnea de uma mesma molcula de anticorpo em clulas diferentes, j que cada molcula de Ig possui pelo menos dois stios de ligao ao antgeno.
8.1.5 Doena hemoltica do recm-nascido

Anticorpos maternos da classe IgG podem atravessar a placenta e lesar as hemcias fetais. A doena hemoltica do recm-nascido observada com mais frequncia quando existe incompatibilidade materno-fetal quanto ao antgeno D. Assim, mulheres Rh negativas, cujos filhos so Rh positivos, podem ser imunizadas pelas clulas fetais por ocasio do parto. Geralmente esse primeiro filho no sofrer ao dos anticorpos maternos, mas um segundo filho poder ser prejudicado. Os anticorpos maternos, entrando na circulao fetal atravs da placenta, fixam-se s hemcias e causam destruio dessas clulas. Para compensar a anemia resultante, a medula fetal responde excessivamente, assim como outros rgos hematopoiticos. Como consequncia evidenciam-se eritroblastose, anemia e hepatoesplenomegalia (Figura 8.2).
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Teste de Coombs Direto
Teste de Coombs Indireto
Me Rh- grvida de criana Rh+
Rh+
Rh
Lavagem das hemcias fetais recobertas de anticorpos maternos
Soro materno
Adicione hemcias Rh+ e lave anticorpos no ligados
Adicione anticorpo de coelho anti-humano
Adicione anticorpo de coelho anti-humano
Aglutinao
Figura 8.2 Coombs direto e indireto no diagnstico da anemia hemoltica do recm-nascido. (Adaptado de MURPHY et al., 2008, p. 749).
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Imunologia
8.2 Imunouorescncia
As tcnicas de imunofluorescncia abriram vrias perspectivas para a rea de Imunologia e consequentemente para outras reas do conhecimento, como a Patologia, a Histologia e a Biologia. Anteriormente padronizao dessas tcnicas, as reaes antgeno anticorpo eram evidenciadas por mtodos indiretos, mediante a observao e a anlise de fenmenos secundrios (formao de imunocomplexos resultantes da unio entre antgeno e anticorpo), como precipitao, aglutinao, fixao do complemento etc. A ideia de ligar radicais fluorescentes s molculas de anticorpos possibilitou a visualizao direta desses anticorpos, como tambm das estruturas antignicas. O sucesso dessa tcnica se deve intensa luminosidade emitida por quantidades extremamente diminutas de fluorescena (fluorocromo). Segundo Coons, em 1956, cada clula bacteriana visvel pela fluorescena fixa cerca de 3 x 107 microgramas de protenas de anticorpos, conjugados com 1,5 x 109 microgramas de fluorescena. Outro fator que contribui com a sensibilidade da tcnica que ela permite distinguir uma nica bactria fluorescente entre 107 bactrias no fluorescentes, isto , uma em dez milhes. Vamos conhecer as propriedades dos fluorocromos. Fluorocromos so molculas que tm a capacidade de ser excitadas a um estgio energtico mais elevado por uma radiao luminosa de comprimento de onda caracterstico. Com o retorno dos eltrons excitados ao seu estado normal, o excesso de energia liberado sob a forma de luz. O comprimento de onda da luz emitida maior do que o usado para excitar as molculas. Quando o processo de excitaoemisso ocorre por um espao de tempo muito curto, da ordem de 10-9 a 10-8 segundos, ele denominado de fluorescncia. Vrios so os corantes fluorescentes, entre eles citamos o isotiocianato de fluorescena e a rodamina. Essas molculas apresentam comprimentos de onda caractersticos de excitao e emisso. O isotiocianato de fluorescena, por exemplo, tem uma excitao mxima a 490-495 nm e um mximo de emisso a 517 nm. Esse fluorocromo emite uma luz de cor verde-amarelo.
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8.2.1 Mtodo direto ou em uma nica etapa

No teste de imunofluorescncia direta, o anticorpo especfico para o antgeno diretamente marcado com o fluorocromo. Como alternativa, o fluorocromo pode ser conjugado ao antgeno para deteco de anticorpos especficos sintetizados por clulas ou seces em tecidos. Nesse teste, o material em estudo incubado por um perodo de 20 a 60 minutos, com o antgeno ou anticorpo marcado. Aps esse perodo, a lmina contendo a amostra lavada, secada e, por fim, examinada ao microscpio de fluorescncia. Por exemplo: identificao de linfcitos B, bacilo diftrico, sorotipos de leptospiras etc.
8.2.2 Mtodo Indireto ou em duas etapas

Na imunofluorescncia indireta, o antgeno previamente fixado lmina. O soro do paciente contendo ou no anticorpos especficos para o antgeno fixado na lmina aplicado sobre a amostra antignica. A lmina incubada por um perodo equivalente a 30 minutos para possibilitar a reao entre o antgeno e o anticorpo. A lmina lavada para se removerem todas as protenas (imunoglobulinas) no fixadas ao antgeno. Em seguida, um antianticorpo (anti-imunoglobulina) marcado com uma substncia fluorescente adicionado amostra. Novamente, a amostra submetida a um perodo de incubao de 30 minutos. Esse procedimento seguido de lavagem e secagem das lminas. Ao final, as lminas so analisadas ao microscpio de fluorescncia. A tcnica utilizada na pesquisa de anticorpos circulantes no diagnstico de toxoplasmose, sfilis, doena de Chagas, anti-DNA, anticorpos antitireoide etc (Figura 8.3). preciso enfatizar que o mtodo indireto tem algumas vantagens sobre o mtodo direto. As justificativas so abaixo listadas. A fluorescncia mais evidente, uma vez que a um determinante antignico liga-se somente uma molcula de anticorpo e, quando se aplica o antianticorpo conjugado a um corante fluorescente, vrias molculas podem se ligar ao anticorpo presente no soro do paciente. Muitos anticorpos podem ser pesquisa-
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Imunologia
dos usando o mesmo conjugado marcado, pois a especificidade no para o antgeno, mas para a imunoglobulina. A tcnica permite detectar a classe do anticorpo circulante em determinada fase da infeco, pois basta selecionar o antianticorpo especfico para a cadeia pesada caracterstica de cada classe. A realizao de diluies seriadas de cada soro nos permite ter uma ideia semiquantitativa do ttulo desse soro. Devemos destacar que, alm dessa tcnica de conjugao com radicais fluorescentes, outros processos de marcao so utilizados: istopos radioativos ou substncias eletrondensas. Esses permitem a identificao e a localizao por meio de tcnicas autorradiogrficas e de microscopia eletrnica, respectivamente. As tcnicas imunoenzimticas (ELISA, do ingls, Enzyme Linked Immunosorbent Assay) so baseadas na ligao de anticorpos a enzimas (ELISA). O emprego dessa tcnica constitui uma alternativa vantajosa, visto a sensibilidade satisfatria dessa tcnica e o fato de ela permitir uma anlise quantitativa das amostras em estudo.
Anticorpo primrio ligado ao Agm
Clulas contendo antgenos de membrana (Agm)
Fl Fl Anticorpo primrio Fl Fl Fl Anticorpo secundrio anti-isotipo
Fl
Fl
Fl
Protena A Fl Fl Fl Fl Fl Fl Fl Fl
Mtodo direto/anticorpo marcado com uorocromo e ligado ao Agm
Mtodo indireto/anticorpo antiisotipo marcado com uorocromo
Mtodo indireto/protena A marcada com uorocromo
Figura 8.3 Mtodo direto e indireto de imunouorescncia. (Adaptado de GOLDSBY et al., 2003. p.153).
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8.3 Passemos a entender os ensaios imunoenzimticos (ELISA)

Estes ensaios so desenvolvidos em placas de plstico constitudas por pocinhos em que os reagentes so depositados. Antgenos ou anticorpos, dependendo do objetivo do mtodo, so adsorvidos placa. Enzimas so conjugadas s molculas de anticorpos ou antgenos. Nessa condio, quando se aplica o substrato da enzima, seguido da adio de uma substncia cromgena, gera-se um produto colorido que poder ser lido por espectrofotometria. Vrias enzimas podem ser conjugadas, entre elas, citamos a peroxidade e a fosfatase alcalina. Essa reao apresenta alta sensibilidade, especificidade e custo baixo.
8.3.1 Mtodo indireto

O soro ou amostra contendo o anticorpo primrio colocado sobre a placa contendo o antgeno adsorvido. Segue-se um perodo de incubao de 30 minutos para favorecer a ligao dos anticorpos ao antgeno. Posteriormente, a placa lavada. Todo o anticorpo livre, no ligado ao antgeno, desprezado nessa lavagem. Um anticorpo secundrio (antianticorpo) conjugado a uma enzima adicionado. Segue-se mais um perodo de incubao de 30 minutos. Esse passo seguido de lavagem para remover os anticorpos livres. Adiciona-se o substrato para a enzima e o cromgeno. O produto colorido quantificado em leitores de placa (espectrofotmetros especializados) que medem a absorbncia.
8.3.2 Mtodo sanduche

O anticorpo imobilizado na placa de microtitulao. A amostra contendo ou no antgeno adicionada na placa. Segue-se um perodo de incubao para permitir a ligao do antgeno ao anticorpo fixado. Aps esse perodo de incubao, a placa lavada e um anticorpo especfico ligado a uma enzima para os diferentes eptopos do antgeno adicionado para permitir a reao com o antgeno ligado. Aps a remoo dos anticorpos secundrios li-
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Imunologia
vres, o substrato adicionado, seguido do cromgeno, e o produto colorido da reao quantificado. Esse ensaio permite a deteco ou a quantificao do antgeno.
8.3.3 Mtodo competitivo

Nesta tcnica, o anticorpo primeiramente incubado em soluo com uma amostra contendo ou no o antgeno. A mistura antgenoanticorpo ento adicionada a uma placa coberta previamente com o antgeno. Quanto maior a quantidade de antgeno na amostra, uma quantidade menor de anticorpo ficar disponvel para se ligar aos antgenos prefixados na placa. A adio de um anticorpo secundrio conjugado a uma enzima para o isotipo do anticorpo primrio pode ser usada para quantificar os nveis de anticorpos primrios ligados na placa, como feito no ensaio indireto. No ensaio competitivo, como geralmente a concentrao de antgeno da amostra original maior, haver uma quantidade menor de anticorpos disponveis para se ligarem aos antgenos fixados na placa. Com a lavagem, ocorre a remoo dos antgenos (da amostra original) e dos anticorpos primrios ligados. O anticorpo secundrio conjugado a enzima, no encontrando o seu ligante, removido da lavagem. A adio do substrato e do cromgeno resultar em um produto no colorido, portanto a absorbncia ser menor. Dessa forma, nos ensaios competitivos, ensaios do tipo inibitrio, a concentrao do antgeno na amostra inversamente proporcional cor produzida no ensaio. Esses ensaios so frequentemente utilizados para o diagnstico de doenas, a dosagem de antgeno, anticorpo e de substncias, como, por exemplo, as citocinas (Figura 8.4).
8.4 Western-Blotting
Este mtodo permite a identificao de uma protena em uma mistura complexa de protenas. No Western-blotting, a protena separada eletroforeticamente em um gel de poliacrilamida na pre-
173
ELISA indireto
Lavagem Placa adsorvida com antgeno Adio do anticorpo a ser mensurado
Lavagem
Lavagem Adio do anticorpo secundrio conjugado com enzima Adio do substrato (S) e mensurao da cor
ELISA Sanduche
Lavagem Placa adsorvida com anticorpo Adio do antgeno a ser mensurado
Lavagem
Lavagem Adio do anticorpo secundrio conjugado com enzima
E E S
Adio do substrato e mensurao da cor
ELISA Competitivo
S S
Incubao do anticorpo com antgeno a ser mensurado
Lavagem Adio da mistura Ag-Ac a placa adsorvida com antgeno
Lavagem Adio do anticorpo secundrio conjugado com enzima
Adio do substrato e mensurao da cor
Figura 8.4 Variaes do ELISA. (Adaptado de GOLDSBY et al.,2003. p.149).
sena de docecilsulfato de sdio (SDS). As bandas proteicas so transferidas por eletroforese para uma membrana de nitrocelulose (eletrotransferncia). A deteco pode ser feita pela adio de anticorpos monoclonal ou policlonal radiomarcado, e os complexos antgenoanticorpos que se formam so visualizados por radioautografia. Essa tcnica est em desuso, dado que h outras tcnicas mais seguras, rpidas e de custo mais baixo.
174
Imunologia
Outras alternativas para essa deteco incluem mtodos cuja marcao feita pela ligao de uma enzima que, aps a adio de um substrato, gera um produto colorido que ser visualizado na membrana. Outro exemplo a adio de uma enzima, por exemplo, a peroxidase, que ligada secundariamente em conjuno com um agente quimioluminescente. Os mtodos de deteco quimioluminescentes dependem da incubao do Western-blot com um substrato que fluoresce quando exposto enzima reveladora no anticorpo secundrio. A luz detectada por um filme fotogrfico ou por cmeras que capturam uma imagem digital do Westernblotting. A imagem analisada por densitometria, a qual avalia a quantidade de protena colorida e quantifica os resultados em termos de intensidade ptica. O mtodo de deteco por quimioluminescncia ampliada considerado um dos mtodos mais sensveis para anlise em blot. As aplicaes do mtodo de Western-blotting so vistas tanto em pesquisas bsicas, clnicas e em diagnstico. Citaremos apenas alguns exemplos do uso desse mtodo na confirmao de alguns diagnsticos: a confirmao dos resultados positivos encontrados no teste de ELISA para o HIV feita atravs do Western-blotting. Nesse teste analisada no soro do paciente a presena de anticorpos dirigidos contra as protenas virais, especificamente, a p 24 ou p 31, gp 41 e gp 120/160. A presena de anticorpos para essas quatro protenas virais considerada como prova de infeco pelo HIV; em certos casos, fundamental analisar se recm-nascidos de me soropositivas esto infectados com o vrus ou se os anticorpos antivrus maternos foram transferidos para o feto; e o Western-blotting tambm um teste definitivo para a doena da vaca louca (Figura 8.5).
175
Adio da mistura proteica tratada com SDS nos pocinhos do gel Eletroforese em gel de poliacrilamida-SDS +
Direo da migrao Antgenos proteicos desnaturados em SDS
Remoo do gel e realizao da eletrotransferncia
Corrente eltrica Membrana porosa Ligao do antgeno de interesse aos anticorpos conjugados com enzimas
Adio do substrato para ativao da reao que produzir cor (revelador)
Figura 8.5 Western-blotting. (Adaptado de GOLDSBY et al., 2003, p. 151).
176
Imunologia
8.5 Citometria de uxo

Esta tcnica permite a identificao, a caracterizao, a quantificao e a seleo de clulas. Como vrios parmetros podem ser analisados simultaneamente, a tcnica tambm conhecida como citometria de fluxo multiparamtrica. Essas anlises so realizadas em um equipamento de alta tecnologia composto de vrios componentes: um sistema fluido (cmara de fluxo de clula), uma fonte de luz, um detector e um conversor de sistema analgico para digital (ADC), gerando FSC (do ingls, Forward Scatter, que significa ngulo de disperso frontal) e SSC (do ingls, Side Scatter, que significa ngulo de disperso lateral), assim como sinais fluorescentes, sistema de amplificao linear ou escala logartmica e um computador para anlise de sinais. Os procedimentos iniciais implicam o tratamento da amostra celular (marcao) com substncias fluorescentes. Essas clulas marcadas so submetidas a uma cmara de fluxo contnuo. Elas so alinhadas em fila nica e foradas a passar em fila, uma por uma, por um feixe luminoso, normalmente laser, de um nico comprimento de onda (cor). Essa passagem garantida por um sistema de baixa presso ao redor delas. No equipamento h detectores que so apontados para o local onde o fluxo passa atravs do feixe de luz: um na linha do feixe de luz, o FSC, e vrios perpendiculares a este, o SSC, alm de um ou mais detectores fluorescentes. O FSC fornece dados sobre o volume celular e o SSC, sobre a forma do ncleo, a quantidade e o tipo dos grnulos citoplasmticos e da Parmetros medidos
Os parmetros possveis de medir so o volume e a complexidade morfolgica das clulas e dos pigmentos celulares como clorola, DNA (anlise de tipo de clulas, cintica celular, proliferao etc.) e RNA; e a anlise e a classicao de cromossomas, protenas, antgenos superfcie celular (marcadores CD), antgenos intracelulares (vrias citocinas, mediadores secundrios etc.), antgenos nucleares, atividade enzimtica, pH, clcio ionizado intracelular, magnsio, potencial de membrana, uidez da membrana, apoptose (quanticao, medidas da degradao do DNA, potencial da membrana mitocondrial, alteraes na permeabilidade, atividade da caspase), viabilidade celular, monitorizao da electropermeabilizao das clulas, caracterizao da multirresistncia a frmacos em clulas tumorais, glutationa e vrias combinaes (DNA/antgenos de superfcie etc.). Essa lista muito longa e est em constante expanso.
(Disponvel em: Wikipdia, a enciclopdia livre; 2009).
177
Figura 8.6 Citometria de uxo. (Adaptado de GOLDSBY et al., 2003, p. 155).
rugosidade da membrana. Com esse sistema, cada clula esquadrinhada de forma individual. Cada partcula suspensa que passa atravs do feixe dispersa a luz de uma forma, e os corantes fluorescentes encontrados na partcula ou juntos partcula podem ser excitados e emitir luz. Os sinais pticos gerados so convertidos em sinais eletrnicos e, por fim, digitalizados para posterior anlise em computador (Figura 8.6).
Clulas coradas com: Anticorpo anti-A + anti-B Anticorpo anti-A Bico do vibrador ultrasonico Anticorpo anti-B No corado
Laser
Fluorescncia
+ Fluorescncia anticorpo anti-B Tela do computador Clulas AB+ Placas de deexo Clulas A+B+
Clulas AB
Clulas A+B
Fluorescncia anticorpo anti-A
Clulas AB+ Clulas A+B
Clulas AB
Clulas A+B+
178
Imunologia
Resumo
Ao final deste aprendizado, voc ser capaz de realizar e interpretar os testes que envolvem reaes de aglutinao, imunofluorescncia, ELISA, Western-blotting e citometria de fluxo. Nas reaes de aglutinao, a natureza do antgeno envolvido na reao antgenoanticorpo particulada ou insolvel. Como exemplo citamos as reaes que envolvem a determinao dos grupos sanguneos do sistema ABO e Rh. Os mtodos de imunofluorescncia so de dois tipos: o direto e o indireto. O mtodo direto utilizado para a deteco de antgeno ou de molculas de anticorpos. Nesse mtodo, os fluorocromos so conjugados ao anticorpo especfico para a visualizao do antgeno. No mtodo indireto ou em duas etapas, o anticorpo especfico para a molcula antignica no marcado com a substncia fluorescente. A deteco do anticorpo obtida pela adio de antianticorpo marcado com o fluorocromo. A avaliao dessas reaes feita em microscpios de imunofluorescncia. Os princpios metodolgicos que regem os ensaios imunoenzimticos so muito semelhantes aos observados nas reaes de imunofluorescncia, exceto pela marcao das molculas, que no feita pelo uso de substncias fluorescentes, mas sim pela conjugao de enzimas e pela adio de substrato enzimtico e cromgeno. O sistema de leitura feito por espectrofotometria. O Western-blotting uma tcnica utilizada para identificar uma protena em uma mistura complexa de protenas, para isso as bandas proteicas so transferidas por eletroforese para uma membrana de nitrocelulose (eletrotransferncia). A deteco pode ser feita pela adio de anticorpos monoclonal ou policlonal marcado com substncias radioativas, com enzimas, em conjuno ou no, com agentes quimioluminescentes. A citometria de fluxo permite a identificao, a caracterizao, a quantificao e a seleo de clulas.
179
Referncias
CITOMETRIA de fluxo. Wikipdia. Disponvel em: <http://pt.wikipedia.org/wiki/citometria_de_fluxo>. Acesso em: 19 dez. 2009. MUNDO VESTIBULAR. Disponvel em: <http://www. mundovestibular.com.br/content_images/1/Biologia/ sanguineo/45.jpg>. Acesso em: 10 mar. 2010. GOLDSBY, R. A.; KINDT, T. J.; OSBORNE, B. A.; KUBY, J. Immunology. 5. ed. New York: W. H. Freeman and Company, 2003. p. 149; 151; 153 e 155. MURPHY, Kenneth; TRAVERS, Paul; WALPORT, Mark. Janeways immunobiology. 7. ed. New York: Garland Science, 2008. p. 744 e 749. VAZ, A. J., TAKEI, K.; BUENO, E. C. Imunoensaios: fundamentos e aplicaes. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2007.

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Equipe de Desenvolvimento de Materiais

Curso de Licenciatura em Cincias Biolgicas na Modalidade a Distncia

Apresentao........................................................................................ 9 1. Clulas, rgos e tecidos envolvidos na resposta imune..........13

2. Resposta imune inata e inamao.............................................33

3. Linfcitos B, anticorpos e complemento.....................................47

4. Linfcitos T, citocinas e MHC.........................................................75

6. Hipersensibilidades e doenas autoimunes.............................113

Clulas, rgos e tecidos envolvidos na resposta imune

Clulas, rgos e tecidos envolvidos na resposta imune

1.1 Clulas da resposta imune

Imunologia Clulas fagocticas

Clulas tronco hematopoitica pluripotente

Progenitor de granulcitos e macrfagos

Progenitor de megacaricitos e eritrcitos

Clulas dendrticas imaturas

Precursor Bas- desconhecido Monlo de mastcitos cito

Clulas dendrticas maduras

Clulas dendrtica imatura

Clulas, rgos e tecidos envolvidos na resposta imune

Clulas, rgos e tecidos envolvidos na resposta imune

Clulas, rgos e tecidos envolvidos na resposta imune

1.2 rgos linfoides primrios

Medula Corpsculo de Hassal

Clulas epiteliais da regio cortical

Timo Pulmo Corao Crtex

Trabcula Timcitos Medula

Clulas, rgos e tecidos envolvidos na resposta imune

Medula ssea vermelha

1.2.2 Medula ssea

1.3 rgos linfoides secundrios

Clulas, rgos e tecidos envolvidos na resposta imune

Clulas B virgens Clula T Clula B

Zona de clula T - crtex parafolicular

Zona de clula T - crtex linfoide

Clulas, rgos e tecidos envolvidos na resposta imune

Superfcie renal Artria esplnica Veia esplnica Hilo

Cpsula Trabcula Sinusoide vascular

Centro germinativo Veia Artria

1.3.3 Tecidos linfoides associados a mucosas

Linfcito intraepitelial Cripta

Vnula de endotlio alto

Clulas, rgos e tecidos envolvidos na resposta imune

Resposta imune inata e inamao

Resposta imune inata e inamao

2.2 Componentes fsico-qumicos

Resposta imune inata e inamao

2.3 Componentes humorais

Lectinas ligantes de manose Fibrinognio Protena amiloide do soro Protena C reativa

Clula infectada por vrus produz IFN- e IFN-

Induo de resistncias replicao viral nas clulas vizinhas

Aumento da expresso de MHC classe I

Ativao das clulas NK para matar as clulas infectadas por vrus

Resposta imune inata e inamao

2.4 Componentes celulares

Ativao histamina, trombina

Quimiotaxia Leucotrieno D4 C5a N-formil-metionina

Resposta imune inata e inamao

o za tri ca Ci e os cit go Fa o ra ig m s o e to ci iva uc At e le d

tra v pl asam as e m n t to ico

Resposta imune inata e inamao