8.

HIDRATOS DE CARBONO EN SUELOS

INTRODUCCIN
Se estima que los carbohidratos constituyen entre el 5% y el 25% de la materia orgnica del suelo (Stevenson, 1994), y constituyen una de las principales fracciones de dicha materia orgnica. En general, los niveles de carbohidratos en el suelo van paralelos a los contenidos en materia orgnica, siendo por tanto, mayores en los horizontes superficiales, ms ricos en materia orgnica, y menores en los inferiores pobres en materia orgnica. Por otro lado, la proporcin en carbohidratos es mayor en suelos ricos en residuos vegetales sin descomponer o parcialmente descompuestos, como los suelos turbosos y los horizontes hmicos de los suelos forestales. En general, con el aumento de la humificacin disminuye progresivamente el contenido en carbohidratos de la materia orgnica del suelo (Senesi y Loffredo, 1999). Los carbohidratos llegan al suelo a partir de distintas fuentes: vegetales microorganismos y animales. Los carbohidratos constituyen entre el 50 y el 70% del peso seco de la mayora de los tejidos vegetales, por tanto son los compuestos adicionados en mayor cantidad en forma de residuo vegetal, adems los carbohidratos son importantes constituyentes estructurales y componentes tanto extra como intracelulares de los microorganismos del suelo. Los exudados radiculares y los residuos animales tambin son una fuente menor de carbohidratos para el suelo (Senesi y Loffredo, 1999). Los factores que determinan el nivel de carbohidratos en el suelo son los mismos que determinan la llegada de materia orgnica y su velocidad de descomposicin en el suelo. As, el contenido en carbohidratos de los suelos vrgenes estar determinado por los factores naturales que controlan la materia orgnica del suelo, y en particular la localizacin; mientras en suelos de cultivo, el contenido en carbohidratos depende fundamentalmente de las prcticas agrcolas. No obstante, la proporcin de carbohidratos en la materia

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orgnica del suelo permanece relativamente constante (Senesi y Loffredo, 1999).

EXTRACCIN Y COMPOSICIN
Los carbohidratos del suelo se extraen generalmente por hidrlisis acida (normalmente con H2SO4). Para la determinacin de los monosacridos obtenidos por la hidrlisis acida se utilizan distintos mtodos entre los que se encuentran: 1) las reacciones clsicas de Fehling y H2SO4 concentrado-fenol, para la determinacin de los azcares reductores totales, a menudo considerados como carbohidratos totales; 2) Determinacin colorimtrica de monosacridos especficos; y 3) Tcnicas cromatogrficas, que incluyen: cromatografa en papel, lquido-gas, y aninica de intercambio de alta presin, para la determinacin de monosacridos simples (Senesi y Loffredo, 1999; Stevenson, 1994). Los monosacridos identificados son prcticamente siempre los mismos, pero presentan considerables variaciones en cuanto a su distribucin en las distintas fracciones del suelo. As, el contenido en azcares hexosa en hidrolizados del suelo representa entre un 4 y un 10% del total; la glucosa es el monmero ms abundante y galactosa (Tabla 8.1), maosa, arabidosa, xilosa y rhamnosa tambin estn presentes; as como cantidades menores de fucosa y ribosa, junto con trazas de constituyentes menores, algunos de los cuales se han identificado como azcares metilados. Los aminoazcares (hexosaminas) principalmente glucosamina y galactosamina, y cidos urnicos parecen ser de presencia universal en el suelo en unos rangos entre 2 y 5% y 1 y 5% de la materia orgnica del suelo, respectivamente (Senesi y Loffredo, 1999). Si bien, la mayora de los carbohidratos en los suelos estn presentes como polisacridos, se presentan pequeas cantidades de monosacridos (azcares libres) y de oligosacridos. Por tanto los carbohidratos del suelo se pueden dividir en tres subclases (Stevenson, 1994): Tabla 8.1
RANGO DE AZCARES NEUTROS EN HIDROLIZADOS DE SUELO Azcar Glucosa Galactosa Maosa Arabidosa % total azcares neutros 24-54 12-20 10-19 5-18 Azcar Xilosa Rhamnosa Fucosa Ribosa % total azcares neutros
4-13 3-12 1-8 1-2

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Monosacridos: Derivados cetnicos o aldehlicos de determinados alcoholes. Oligosacridos: Formados por un gran grupo de polmeros de hidratos de carbono que contienen pocas unidades de monosacridos (< 8 unidades). Polisacridos: Comprende un grupo de polmeros que poseen ms de 8 monmeros (monosacridos), se trata de molculas de alto peso molecular. Las dos primeras subclases son solubles en agua, mientras la ltima es insoluble, la extraccin de los polisacridos se realiza por procedimientos especficos, no obstante, la fraccin de polisacrido unida fuertemente a los minerales de la arcilla y/o sustancias hmicas no pueden ser fcilmente aislados y purificados (Senesi y Loffredo, 1999). En la Fig 8.1 y 8.2 se recogen las estructuras de los monosacridos y polisacridos ms comunes en los suelos, respectivamente. Los polisacridos procedentes de vegetales y animales estn constituidos por las mismas unidades bsicas, pero en proporcin diferente, as, los polisacridos microbianos tienen entorno a un 70-90% de aldosas en forma de hexosas, mientras en los de origen vegetal esta proporcin es menor.

Fig. 8.1. Estructura de algunos de los azcares ms comunes.

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Fig. 8.2. Estructura de algunos polisacridos.

ESTADO EN EL SUELO
Los carbohidratos en los suelos los podemos encontrar: 1. Como azcares libres en la disolucin del suelo. 2. Polisacridos complejos de fcil extraccin y separacin del resto de los constituyentes orgnicos. 3. Como polmeros de distintas formas y tamaos unidos fuertemente a minerales de la arcilla y al humus, y muy difciles de aislar y purificar.

AZCARES LIBRES
Los azcares libres y oligosacridos por lo general, se encuentran en la disolucin del suelo en muy poca cantidad. Esto es lgico ya que su disponibilidad para los microorganismos es muy rpida como fuente de energa y alimento, y por tanto estn sujetos a descomposicin por ataques microbianos. Las mayores cantidades se dan en la capa superior de los suelos forestales de clima fro, donde la actividad microbiana est inhibida. Su contenido en los suelos minerales est determinado por el equilibrio entre sntesis y destruccin por los microorganismos, y se ve afectado por todos aquellos factores que inciden en la actividad microbiana, tales como humedad, temperatura y aporte de energa (Stevenson, 1994; Senesi y Loffredo, 1999).

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Los azcares libres son extrados con agua o mejor con etanol al 80% que no presenta problemas de dispersin del suelo y adems se puede eliminar fcilmente por evaporacin a vaco a baja temperatura (40C). El residuo azucarado obtenido se disuelve en agua, se centrifuga y es analizado por procedimientos cromatogrfcos (Stevenson, 1994; Senesi y Loffredo, 1999). La glucosa es el componente predominante en los extractos de suelos tanto minerales como orgnicos, pero tambin estn presentes, galactosa, mannosa, fructosa, arabidosa, xilosa, fucosa, rhammnosa y ribosa (Stevenson, 1994; Senesi y Loffredo, 1999).
POLISACRIDOS

Los polisacridos son la principal forma en la que los carbohidratos se encuentran en la materia orgnica del suelo. La mayora de los polisacridos del suelo se forman por recombinacin de monmeros procedentes de los polisacridos microbianos y vegetales, dando lugar a estructuras ms complejas y menos susceptibles de biodegradacin. No obstante, en suelos ricos en restos vegetales sin descomponer o parcialmente descompuestos, una buena proporcin de los polisacridos corresponde a la celulosa, principal polisacrido de las plantas superiores (Senesi y Loffredo, 1999). Que los polisacridos son productos del metabolismo microbiano se evidencia por su bajo contenido en xilosa y glucosa, que son particularmente abundantes en los polisacridos vegetales, y por sus niveles proporcionalmente mayores en otros monosacridos, que no estn presentes en los vegetales pero que son constituyentes comunes de los polisacridos extra y entracelulares de los microorganismos, incluida la quitina, que es el principal componente estructural de las paredes fungicas (Stevenson, 1994; Senesi y Loffredo, 1999). Al contrario que los azcares individuales, los polisacridos del suelo presentan una gran resistencia al ataque enzimtico, debido a varios factores (Senesi y Loffredo, 1999): Tamao y complejidad estructural que les proporcionan resistencia al ataque enzimtico, Formacin de sales insolubles o quelatos con cationes polivalentes, Adsorcin en silicatos y xidos del suelo, e Incorporacin a las sustancias hmicas como componentes integrales de sus molculas unidos al ncleo de su estructura por uniones ster (R^COORj) y otras uniones covalentes. En general, cuanto mayor es el tipo de uniones y ms ramificadas estn las estructuras de los polisacridos, mayor es la resistencia a la degradacin

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enzimtica de estos compuestos en el suelo. Esto da lugar a la acumulacin relativa de polisacridos en el suelo frente a otros carbohidratos. Sin embargo Cheshire et al. (1974) y Cheshiere (1977) indican que la persistencia de los polisacridos en el suelo puede estar relacionada con su inaccesibilidad debida a las combinaciones qumicas, complejidad e insolubilidad, y no a la estructura biolgicamente estable. Por ejemplo, la adsorcin de polisacridos por silicatos expansibles en los espacios intermicelares e interlaminares, los hace inaccesibles a ataque microbiano. La caracterizacin de los polisacridos del suelo requiere su: extraccin, aislamiento, purificacin, fraccionamiento e identificacin de los monmeros. Extraccin El primer problema es la eleccin del extractante ya que idealmente ha de ser (Stevenson, 1994; Senesi y Loffredo, 1999): 1) igual de efectivo para todos los suelos; 2) extraer selectivamente los polisacridos o proporcionar extractos en los que las impurezas se puedan eliminar fcilmente; 3) no destructivo; 4) la cantidad de polisacrido extrado ha de ser representativa del total. Un extractante que compla todos estos requisitos no se ha encontrado. En la prctica se utiliza: 1. Agua caliente (70-100C) en Soxhlet. 2. cidos como H2SO4 y HC1. 3. Disolventes polares. 4. Disolventes orgnicos como el cido frmico. 5. Tampones acuosos a pH 7. 6. Agentes complej antes como EDTA, Amberlita, urea o dimetilformamida, y 7. NaOHO,5M. Con un nico extractante los mejores rendimientos (3,5-11,5%) se han obtenido utilizando cido frmico anhidro conteniendo LiBr 0,2N. Una extraccin secuencial (Fig. 8.3) que consta de un doble tratamiento con HC1 1N y NaOH 0,5N seguida de un tercer tratamiento con cido actico anhidro en H2SO4 2,5% a 60C durante 2h aumenta el rendimiento hasta el 80% (Stevenson, 1994). La obtencin de los preparados de polisacridos crudos, despus de la extraccin, se puede realizar por varios mtodos (Fig. 8.4): dilisis, filtracin a travs de carbn activo, precipitacin con acetona, ter o alcohol y despropeinizacin por extraccin lquido-lquido.

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La dilisis permite eliminar sales y compuestos de bajo peso molecular (hidratos simples). Solamente se recogen polisacridos de alto peso molecular. El carbn activo consigue separar polisacridos si bien la recuperacin no es completa. Muchos polisacridos pueden precipitar en disoluciones acuosas por la adicin de acetona, ter o alcohol en concentraciones entorno al 80% (v/v). Con los polisacridos del suelo la precipitacin es incompleta y el producto final tiene muchas impurezas. La desproteinizacin por el procedimiento de Sevag, supone una extraccin lquido-lquido en presencia de un detergente; Las protenas quedan en la interfase y los polisacridos en la fase disolucin, al igual que otros procedimientos no se logra una separacin completa. Una vez purificados, se requiere un fraccionamiento de los polisacridos crudos para su posterior identificacin, normalmente los mtodos utilizados para el fraccionamiento son (Stevenson, 1994; Senesi y Loffredo, 1999): 1) precipitacin fraccionada con etanol y compuestos de amonio cuaternario o con cetavalon; 2) filtracin en gel de Sephadex; 3) combinacin de cromatografa en celulosa cargada y Sephadex, y 4) procesos de intercambio aninico por medio preparaciones de resinas o Sephadex de intercambio aninico, e intercambio aninico de celulosa de intercambio aninico.

Fig. 8.3. Extraccin secuencial de los polisacridos del suelo. Swincer, et al. (1969).

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Fig. 8.4. Esquema de recuperacin de los polisacridos crudos (Stevenson, 1994).

Cheshire et al. (1983) han descrito un mtodo basado en la metilacin del suelo para la extraccin de los polisacridos, y posterior caracterizacin por infrarrojo (IR) y cromatografa de gas-espectrometra de masas. Sin embargo, no es posible la recuperacin completa de los polisacridos del suelo, incluso utilizando los procedimientos ms elaborados, lo que indica que una parte de estos compuestos est unida de forma irreversible a la fraccin mineral del suelo. La composicin en monmeros de los polisacridos del suelo se determina por anlisis cromatografico o colorimtrico. Los azcares ms comnmente identificados son: las hexosas: glucosa, galactosa y maosa; las pentosas: arabidosa, xilosa y ribosa; y las desoxihexosas: rhamnosa y fucosa. Tambin se han identificado otros azcares como: fructosa, trazas de azcares metilados, los aminoazcares glucosamina, galactosamina y cido murnico, los azcares alcohlicos: manitol e inositol, y los cidos urnicos: glucurnico y galacturnico (Stevenson, 1994; Senesi y Loffredo, 1999). No obstante la fraccin ligera y pesada de los suelos presentan marcadas diferencias en cuanto a su composicin en monmeros de los polisacridos. La fraccin ligera, generalmente, es ms rica en glucosa y xilosa que la pesada, debido posiblemente al predominio de desechos vegetales en la fraccin

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Tabla 8.II
COMPOSICIN DEL EXTRACTO CRUDO DE POLISACARIDOS DEL SUELO (Senesi y Loffredo, 1999) Suelo agrcola Areno limoso De pradera Spodosol Extractante NaOH 0,5N Ac. Frmico anhidro conteniendo LiBr Purificacin Carbn activo Precipitacin con Cetavalon Cenizas (%) n.d. 6,0 11,7 5,7 Carbohidratos (%) 80 26,3 37,8 24,7 3,02 Nitrgeno (%) 3,16 2,65 0,34 15,8 15,8 17,8 16,3 Anhdrido urnico (%) Aminoazcares (%) 0 5,2 5,0 3,1 Monosacridos* 33,6 Glucosa 20,8 33,6 37,7 Galactosa 23, 20,1 20,0 19,1 Maosa 17,9 21,9 18,0 18,2 6,7 Arabidosa 11,7 7,9 7,6 7,5 8,2 Xilosa 23,6 7,9 Ribosa 1,5 11,2 13,5 8,2 0 Rhamnosa Los monosacridos individuales se dan en porcentaje de los azcares neutros totales en la preparacin.

inicial. En la Tabla 8.II se recoge la composicin del extracto crudo de los polisacridos obtenidos de distintos suelos. Estudios con ultracentrifugacin, filtracin en gel, y electroforesis muestran que los polisacridos del suelo son extremadamente polidispersos. El peso molecular va de menos de 4.000 Da a ms de 450.000 Da, determinado por el mtodo de sedimentacin, viscosidad y filtracin en gel. La filtracin en gel de Sephadex indica que las molculas de oligosacridos presentan un continuo en cuanto a tamao molecular con un peso molecular aproximado de 200.000 Da (Stevenson, 1994; Senesi y Loffredo, 1999). Los polisacridos del suelo presentan una marcada viscosidad en medio acuoso, propiedad que est directamente relacionada con su tamao, forma y estructura molecular, lo que permite su utilizacin para estimar el peso molecular, por otro lado est inversamente relacionada con la facilidad para precipitar en medio acuoso con disolventes orgnicos. Otra propiedad de los polisacridos en medio acuoso es su rotacin ptica, que se utiliza como un ndice de heterogeneidad en el estudio de las fracciones. Fuerte dextrorotacin est asociada con el predominio de uniones a-glucosidicas, mientras levorotacin indica predominio de las uniones (3-glicosidicas. Los polisacridos del suelo son levgiros lo que indica un predominio de uniones (3 entre las unidades de azcar, por tanto, la existencia de estructuras en hlice lineales. Por el contrario, los polisacridos con pre-

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dominio de uniones a se considera que presentan configuraciones ms globulares o al bazar. Esto hace que las configuraciones con uniones [3 puedan tener un contacto mayor con las superficies del suelo, especialmente con las superficies planas de los silicatos, que las que presentan uniones a. El espectro infrarrojo de los polisacridos del suelo indica la presencia de (Senesi y Loffredo, 1999): 1. Grupos hidroxilo y enlaces C-C y C-O caractersticos de azcares con estructura de anillo y uniones glicoxidicas. 2. Grupos carboxilo, atribuidos a posibles cidos urnicos. 3. Uniones N-H debidas a posibles aminoazcares.

FUNCIONES
Las funciones que pueden desempear los carbohidratos en el suelo son muy variadas y estn ntimamente relacionadas con sus grupos funcionales, especialmente hidroxilos en estructura de anillo, carboxilos de cidos urnicos y grupos amino de hexosaminas. La presencia de estos grupos les proporciona amplias posibilidades para interaccionar con iones metlicos para la formacin tanto de sales como de complejos. Tambin pueden reaccionar con lignina y aminocidos en el suelo contribuyendo de esta forma a la formacin de macromolculas como las sustancias hmicas. Todas estas interacciones pueden modificar la qumica y conducta en el suelo tanto de la fraccin de carbohidratos como de la materia orgnica total del suelo y de la fraccin mineral. As: a) Actan como unidades de formacin de sustancias hmicas, como se ve en el Tema 5. b) Complejan iones metlicos. Este hecho puede tener distintas consecuencias en el suelo: a. A determinados pH impiden la precipitacin de fosfatos de Fe y Al. b. Aceleran la meteorizacin de los minerales del suelo. c. Facilitan el trasporte de Fe y Al en el suelo d. La solubilidad y velocidad de descomposicin de los polisacridos en el suelo puede depender de la formacin de dichos complejos. c) Contribuyen a la capacidad de intercambio catinico del suelo, este hecho es atribuible al contenido en cidos urnicos y por tanto depende del pH. Tambin pueden contribuir a la retencin de aniones debido a los grupos amino (-NH2). d) Mejoran la estructura del suelo. La adsorcin de mono y polisacridos sobre minerales de la arcilla aumento la agregacin de las partculas del suelo, y por tanto contribuye a la estabilidad estructural, e incide en un

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buen nmero de las propiedades fsicas del suelo. Esta adsorcin est muy influenciada por el tipo de silicato, pH y cationes intercambiables. La adsorcin en silicatos, especialmente montmorillonita, y su unin a las sustancias hmicas ralentiza la velocidad normalmente rpida de descomposicin de carbohidratos en suelo. e) Aumentan la retencin de agua del suelo. Se trata de sustancias muy hidrfilas, lo que contribuye a la retencin de agua, si bien, en condiciones de alta humedad se hinchan y pueden obturar los poros del suelo y de esta forma reducir la infiltracin y permeabilidad del agua en el suelo. f) Inciden en la disponibilidad de nutrientes. Adems de impedir la precipitacin de fosfatos de Fe y Al, el recubrimiento de las superficies del suelo por los carbohidratos adsorbidos impide la retencin del fosfato. La presencia de cabohidrato rpidamente metabolizables contribuye a incrementar la inmovilizacin microbiana de nitrgeno y, posiblemente, simultneamente de la desnitrificacin. Adems, dichos materiales pueden conducir a un aumento de la descomposicin de la materia orgnica estable del suelo, y por tanto al aumento de la mineralizacin del nitrgeno. Tanto los azcares libres como los polisacridos forman complejos estables con los iones borato. g) Poseen actividad biolgica al servir como fuente de energa para los microorganismos, esto puede acelerar la degradacin de plaguicidas orgnicos y productos del petrleo en presencia de materiales ricos en carbohidratos.

MUCLAGO Y MUCIGEL
Las superficies de la raz, principalmente en las zonas apicales, estn cubiertas por material gelatinoso de alto peso molecular (muclago), que est constituido fundamentalmente por polisacridos con un contenido aproximado en cidos poligalacturnicos de entre 20 y 50%. Este material lo segregan las clulas la cofia y de la epidermis radicular; y su produccin es directamente proporcional al crecimiento de la raz. En medios no estriles tambin incluye compuestos procedentes de la degradacin bacteriana de las paredes celulares. En el suelo el muclago est normalmente invadido por microorganismos y partculas del suelo. Esta mezcla de muclago con microorganismos y partculas del suelo se denomina mucigel (Marschner, 1995). Son varias las funciones propuestas para el mucigel (Marschner, 1995), muchas de ellas relacionadas con las propiedades de los carbohidratos estudiadas en el apartado anterior: > Proteger a las zonas apicales de las races de la desecacin,

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Actuar como lubricante de la raz en su movimiento en el suelo, Toma de iones, Mejorar el contacto suelo-raz, especialmente en suelos secos, y Dar lugar a la agregacin del suelo en la rizosfera. El estrecho contacto entre las partculas del suelo y las superficies radiculares va muclago, puede mejorar la toma de fosfato por la desorcin del fosfato de las superficies del suelo por parte del cido poligalacturnico presente en el muclago (Nagarajah et al. 1970). El muclago tambin protege a los vegetales de la toxicidad por determinados metales pesados debido a su elevada capacidad para formar complejos con cationes de metales pesados (Pb > Cu > Cd) por intercambio con Ca2+ (Morel et al. 1986). As, la gran preferencia por el Pb constituye un importante mecanismo para restringir la toma de Pb por las races. Tambin el mucilago restringe la toma de Al por los vegetales y es considerado el factor que ms contribuye a la tolerancia de los vegetales al aluminio (Marschner, 1995).

BIBLIOGRAFA
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