SESIN DE INTEGRACIN: VDRL y FR..

Gmez Esparza A; Contreras Gonzlez, L.A; Leos Alejandro, E; Martnez Romero, E; Medina Crdenas, M. G; Moreira Almaguer, A; Ramrez Duran, Z.
Laboratorio de Inmunologa-Unidad Acadmica Multidisciplinaria Z. Huasteca de la UASLP Romualdo del Campo No. 501, Frac. Rafael Curiel, Cd. Valles, S.L.P. CP 79060

VENEREAL DISEASE RESEARCH LABORATORY (VDRL) La sfilis es una enfermedad de transmisin sexual (ETS), que ha afectado al hombre durante siglos. Fue en 1905, que se descubri que era producida por un espiroqueta, el Treponema pallidum, a la que originalmente se le denomin Spirochaeta pallida. Para la deteccin de esta bacteria se cuenta con una gama muy amplia de mtodos por ejemplo la inoculacin de animales como la preuba RIT (Rabbit infectivity test) que consiste en la inoculacin del T. pallidum en los testculos de un conejo, siendo una prueba altamente sensible y especifica en comparacin con las otras pruebas para el diagnstico de sfilis. Adems es el mtodo ms antiguo para detectar una infeccin por T. pallidum. Este mtodo no se utiliza de rutina porque es costoso y representa una dificultad tcnica mayor. Tambin se recurre al cultivo, este se realiza en clulas epiteliales de conejo donde la multiplicacin de los grmenes es lenta, y el promedio de multiplicacin es de 30 a 33 horas. El T. pallidum se ha tratado de cultivar en medios acelulares microaeroflicos con poco xito. Este mtodo no es adecuado para el trabajo de rutina del laboratorio realizndose solo en los laboratorios de referencia. Las pruebas no treponmicas incluyen al VDRL, una prueba donde se detectan anticuerpos especficos como la reagina, la prueba de VDRL tambin se puede realizar en lquido cefalorraqudeo. El RPR es una prueba diseada para detectar reagina en el suero de manera rpida, no requiere inactivacin por calor. La muestra se mezcla con una suspensin que posee cardiolipina, lecitina y colesterol en partculas de carbn. Si la muestra es positiva se observa pequeos grumos negros (floculacin). El resultado se reporta como reactivo o no reactivo; todos aquellos reactivos deben ser diluidos seriadamente para realizar la titulacin, y se reporta la dilucin ms alta que exhibe reaccin. Las pruebas de TRUST y USR son pruebas menos usadas que el VDRL y la RPR. El TRUST (Toulidine red unheated serum test) es una prueba desarrollada para el despistaje de la sfilis, el principio es similar al del VDRL, pero no es necesario inactivar el suero y el rojo de toluidina se encarga de dar color a la reaccin. La sensibilidad y especificidad son similares a la prueba de RPR. La USR (Unheated serum reagin) tiene la ventaja que es poco costosa, tampoco requiere de inactivacin de suero por calor y, al igual que otras pruebas no treponmicas, tiene buena sensibilidad y especificidad. Entre las pruebas treponemicas, es decir aquellas donde se evidencia plenamente a la bacteria, tenemos la prueba de FTA-AB, que es un es un mtodo de observacin directo, que se utiliza como confirmacin cuando una de las pruebas no-treponmicas es positiva. Se utiliza suero inactivado por calor, el que se coloca sobre una lmina donde se encuentra el Treponema pallidum es suspensin. El conjugado consiste en antiglobulina humana (IgG o IgM) con isotiocianato de fluorescena, el que se diluye seriadamente hasta 1/800 ms. Luego de un

tiempo de incubacin, se observa al microscopio de fluorescencia en una habitacin oscura. La reaccin se reporta en cruces de 1+ a 4+ Las tcnicas ms nuevas para la deteccin de esta bacteria incluyen la prueba de ELISA que es un mtodo de cuantificacin inmunolgica que evala la reaccin antgeno-anticuerpo mediante una reaccin enzimtica, de acuerdo al diseo de la prueba se puede detectar una o ms inmunoglobulinas o se puede detectar antgenos especficos para lo cual se utiliza un conjugado, formado por un antianticuerpo o un antgeno, el cual se ha marcado con una enzima (peroxidasa de rbano, fosfatasa alcalina, glucosa oxidasa, etc.). El antgeno o anticuerpo que se utiliza, es inmovilizado sobre un soporte slido, que es generalmente una placa de poliestireno, por lo que la reaccin antgeno-anticuerpo que se produce tambin queda inmovilizada en el soporte slido. A esto se le adiciona un sustrato (enzima) marcado con un cromgeno que produce una reaccin de color, que es directamente proporcional al analito (antgeno o anticuerpo a ser detectado) y que es cuantificado con un lector de ELISA que es un espectrofotmetro modificado. El diagnostico de sfilis tambin puede realizarse por tcnicas ahora bien conocidas como los osn por Western blot, que detecta anticuerpos para eptopes especficos en antgenos, previamente separados por electroforesis de alta resolucin. En el Western Blot para Treponema pallidum, los antgenos pueden reaccionar con IgG, IgM o IgA presentes en el suero de pacientes con sfilis, la IgG reacciona fuertemente con una protena de membrana de 47 Kd., pero es menos sensible y especfica que la prueba de FTA-ABS. En cambio, cuando la prueba detecta IgM, es de gran utilidad en el diagnstico de la sfilis secundaria y congnita, con una sensibilidad del 83%. Esto se reduce cuando el Western blot detecta IgA, donde la sensibilidad disminuye al 67% y por ultimo dicho microorganismo tambin puede ser detectado por un mtodo muy sofisticado como lo es la PCR o reaccin en cadena de la polimerasa, detectando pequeos fragmentos de material gentico de Treponema pallidum tiene mucha sensibilidad y 100% de especificidad, es de gran utilidad en el diagnstico de aquellas sfilis cuyo diagnstico representa dificultad como son sfilis congnita, la sfilis tarda, y en detectar infeccin persistente en individuos que han recibido tratamiento ineficaz. La ventaja del PCR es que al amplificar ADN especfico de Treponema pallidum, se elimina la posibilidad de detectar falsos positivos, adems que puede realizarse en gestacin temprana, mediante el estudio del lquido amnitico. Factor reumatoide: F. R. es un anticuerpo que va dirigido a la fraccin Fc de IgG, dicho anticuerpo es sintetizado en procesos patolgicos que estimulan la proliferacin policlonal de Linfocitos B. No es especfico de Artritis Reumatoide pero s aparece en el 70-90% de los pacientes que la padecen (aunque tambin es positivo en el 10-25% de sujetos sanos mayores de 70 aos), aparece tambin en la prpura de Schnlein-Henoch, dermatomiositis, esclerodermia, infeccin viral crnica, hepatitis crnica, LES, sndrome nefrtico, etc. Tampoco nos es til para valorar la evolucin clnica de un paciente. Un rango normal de FR en la sangre es de 14 a 60 unidades/ml. La deteccin de la actividad de factor reumatoide en suero se relaciona con la presencia de anticuerpos que reconocen eptopes en la porcin terminal de la fraccin Fc de la IgG. Inicialmente

se describi el FR como un anticuerpo de isotipo IgM, aunque en la actualidad se reconoce la existencia de factor reumatoide con isotipo IgG, IgA e IgE. La deteccin de FR se puede llevar a cabo con diferentes tcnicas. Cada una tiene ventajas e inconvenientes, y su utilidad depende del objetivo que nos propongamos. Las tcnicas de laboratorio que ms se utilizan se resumen en la tabla 2 (Alonso-Ruiz, 2004).

BIBLIOGRAFA:
1. Alonso-Ruiz, A. (2004). Tcnicas de diagnstico y tratamiento en reumatologa. Editorial

medica panamericana. Madrid, Espaa.

2. Davidsohn I, Henry JB. Todd Sanford Diagnstico Clnico por el Laboratorio 6 ed. Salvat Editores, (1983). 3. Murria PR. Manual of Clinical Microbiology 6th Ed American Society for Microbiology (1995). 4. Turgeon ML. Immunology and Serology in Laboratory Methods 19th ed. Mosby (1996). 5. Henry JB. Clinical Diagnosis and Management by Laboratory Methods 19th Ed WB Saunders Company (1996).