PRCTICA 2

Objetivo general

El alumno comprender el mecanismo de osmosis y comprender la importancia de la presin osmtica en los seres vivos.

Materiales, Reactivos y Equipo requerido por mesa Materiales

Probeta de 100 ml Pipeta de cristal de 10 ml Gradilla Tubos de ensayo Vaso precipitado de 100 ml Puntas para pipeta automtica de 200 ml y 1000 ml.

Equipo
Centrifuga Balanza analtica

Reactivos
Pizeta con agua destilada Cloruro de sodio Anticoagulante EDTA

ANTECEDENTE
La membrana plasmtica de los eritrocitos -igual que sucede con la de otras clulas tiene la propiedad de ser una membrana semipermeable, es decir, que permite la difusin de agua a travs de ella, pero no la de las sales minerales disueltas en el agua. Por el fenmeno de la smosis, el agua tiende a pasar del medio en el que se encuentran las sales ms diluidas, al medio en el que se encuentran ms concentradas, hasta igualar la concentracin (y por tanto la presin osmtica) de ambos medios.1 Se define smosis como una difusin pasiva, caracterizada por el paso del agua, disolvente, a travs de la membrana semipermeable, desde la solucin ms diluida a la ms concentrada.

La difusin en las disoluciones puede ser directa o indirecta, en el caso de la difusin indirecta las partculas de soluto y del disolvente encuentran un tabique orgnico permeable y lo atraviesan libremente. La presin osmtica se combina como la suma de los choques que le tocan a una superficie determinada del tabique semipermeable en la unidad de tiempo.

Por resistividad osmtica de los eritrocitos se entiende la estabilidad de los eritrocitos contra la hemolisis bajo la accin de disoluciones hipotnicas de cloruro sdico. Es conocido que en la formacin de la envoltura de los eritrocitos participan junto con otras sustancias, la lecitina y el colesterol. En la envoltura de los eritrocitos a lecitina, mientras que en la envoltura de los eritrocitos viejos, el colesterol. Por lo tanto los eritrocitos jvenes son ms propensos a la hemolisis que los viejos.

DETERMINACIN DE LA RESISTIVIDAD OSMTICA DE ERITROCITOS

Se realizo los clculos g)

del Nacl ( 2.5

Preparacin del cloruro sdico al 1%

Donacin 5ml de sangre

Se Ajusto la tabla de las concentraciones de las disoluciones ( Nacl, agua destilada)

Enumeracin de los tubos de ensayo

Tubo 1, 5, 6,7, 10

Se verti el Nacl y el agua destilada en cada uno de los tubos de ensayo

A la sangre se le agrego EDTA para que la sangre no se coagule

Se pipeteo 0.1 ml de sangre a cada uno de los tubos de ensayo

Se agitaron cada uno de los tubos de ensayo, para si mezclar las sustancias.

Se introdujo los tubos de ensayo en el equipo de centrifugacin Pasado en tiempo se sacaron los tubos para su posterior observacin y determinacin de la resistividad de la sangre

Un tiempo de 6 min a 24 C con 3000 r.p.m

PROCEDIMIENTO

1.- Se realizaron los clculos para sacar la cantidad del cloruro de sodio a pesar. Dando como resultado la siguiente cantidad.

Cloruro de sodio 1% 1% 100

250 = 2.5 g

Nota: Por cada gramo de cloruro de sodio es igual 100 ml

2.- El compaero lus amablemente dono la cantidad de 5 ml de sangre para realizar la prctica.

Nota: el maestro le agrego a la sangre la solucin EDTA para evitar que la sangre se coagule y as repartirlo por cada mesa de trabajo.

3.- Antes de preparar la disolucin se tuvo que modificar la tabla de las distintas concentraciones, ya que los tubos que nos proporcionaron no eran los adecuados para la cantidad de las soluciones proporcionadas.

N de probeta

10

NaCl al 1% (ml)

2.5

0.5

Agua destilada (ml) Concentracin obtenida de

2.5

4.5

0.5

0.3

0.25

0.2

0.05

NaCl

4.- Se enumeraron los tubos de ensayo para las soluciones y as poder identificarlas

5.- Posteriormente a cada tubo de ensayo se le agrego las siguientes cantidades de las soluciones que solo fue el cloruro de sodio y el agua.

Numero de tubos de ensayo Concentracin Tubo 1 Tubo 5 Tubo 6 Tubo 7 Tubo 10

NaCl al 1% (ml)

5ml

3ml

2.5ml

2ml

0.5ml

Agua destilada (ml)

2ml

2.5ml

3ml

4.5ml

Agregado del agua destilada

Agregado del cloruro de sodio

Tubos de ensayo listos con las soluciones

6.- En seguida se pipeteo 0.1 ml de sangre en cada tubo preparado, agitndolo varias veces para que se disuelvan correctamente.

Se sellaron los tubos con el paraflim o papel enserado.

Se dej reposar por 10 minutos

7.- Terminando los 10 minutos de reposo se llevaron los tubos de ensayo a la centrifuga.

Para la centrifugacion de los tubos se requirio de un tiempo de 6 minutos, con una temperatura de 24C y un 3000 r.p.m.

Nota: se coloco un tubo de ensayo con agua a la centrifuga para poder equilibrar las posiciones de los tubos y asi poder llevar acabo el proceso de la centrifugacion.

8.- Por ultimo transcurido el tiempo se sacaron los tubos de ensayo para poder determinar aquellos tubos en donde la hemolisis acaba de iniciar y aquellas donde esta se realizo hasta el final.

Resultados

Conclusin El tubo de ensayo 1 y 6 no hay hemlisis ya que los glbulos rojos estn en el fondo del tubo de ensayo y la solucin salina se observo incolora. En el tubo de ensayo 5 si hubo una hemlisis parcial porque se observo un depsito celular, pero la solucin salina se tio de rojizo. Y en los tubos de ensayo 7 y 10 se observo una hemlisis total, porque no se observaron glbulos rojos en el fondo del tubo de ensayo y solucin salina se tio muy rojo.