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GUIA PARA LA ACREDITACIN DE LABORATORIOS QUE REALIZAN ANLISIS MICROBIOLGICOS G-ENAC-04 Rev. 2 Marzo 97

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GUIA PARA LA ACREDITACIN DE LABORATORIOS QUE REALIZAN ANALISIS MICROBIOLGICOS

Indice -------------------------------------------------------------------------------------------------------------Apartado Pgina -------------------------------------------------------------------------------------------------------------1. Introduccin y contenido del documento . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3 2. Alcance de la acreditacin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . .4 3. Personal . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .4 4. Locales y condiciones ambientales . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. 5 5. Equipos. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . 8 6. Medios de cultivo y reactivos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 12 7. Mtodos y procedimientos de ensayo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . 14 8. Validacin de mtodos y verificacin de los resultados . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .14 9. Aseguramiento de la calidad de los resultados/control de calidad . . . . . . . . . . . . . . 15 10. Auditorias internas y revisin del sistema de calidad . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . .. . 17 11. Manipulacin e identificacin de muestras . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 18 12. Eliminacin de residuos contaminados . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 19 13. Incertidumbre de la medida. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . 19 14. Uso de ordenadores: Sistemas de Gestin Informtica. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 19 15. Glosario de trminos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 20 16. Referencias bibliogrficas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 22 -------------------------------------------------------------------------------------------------------------Anexo A1 Utilizacin de cepas de referencia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . 23 Anexo A2 Cepas de referencia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . 24 Anexo B1 Directrices para la calibracin de equipos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 26 Anexo B2 Directrices para la puesta en servicio y verificacin de equipos . . . . . . . . . 27 Anexo B3 Directrices para el mantenimiento de equipos. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 29 --------------------------------------------------------------------------------------------------------------

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1- INTRODUCCIN Y CONTENIDO DEL DOCUMENTO 1.1 Los requisitos generales para la acreditacin de laboratorios aparecen definidos en el documento CGA-ENAC-LE, "Criterios generales de acreditacin, competencia tcnica de los laboratorios de ensayos", el cual incluye los requisitos establecidos en la norma UNE 66.501 "Criterios generales para el funcionamiento de los laboratorios de ensayo", equivalente a la norma europea EN45001 y los incluidos en la Gua ISO/CEI 25 "Requisitos generales para la competencia tcnica de los laboratorios de ensayo". Estos requisitos deben ser cumplidos por los laboratorios que deseen ser acreditados. 1.2 Esta gua ha sido elaborada por la Comisin Sectorial Agroalimentaria de la Entidad Nacional de Acreditacin (ENAC) y est basada en el documento EAL-G18 "Acreditation for Microbiological Laboratories". Esta gua revisa y sustituye al documento Gua para la acreditacin de laboratorios que realizan ensayos microbiolgicos G-CSMic-01 Rev. 1 Marzo 93. Esta gua complementa a los documentos citados en el punto anterior ofreciendo directrices especficas, tanto para auditores como para laboratorios que llevan a cabo ensayos microbiolgicos. Asimismo, contiene directrices detalladas para la interpretacin del documento CGAENAC-LE destinadas a aquellos laboratorios que realizan ensayos microbiolgicos. La norma UNE 66.501 sigue siendo el documento que prevalece y en caso de conflicto constituir la base para su resolucin por parte de ENAC. Esta gua es aplicable a laboratorios que realizan mediciones objetivas ya sean o no rutinarias, o como parte de actividades de investigacin y desarrollo. Las directrices contenidas en este documento pueden tambin utilizarse para la inspeccin de laboratorios segn normas de calidad, tales como BPL, BPF, BPC y certificacin segn ISO 9000. 1.3 Se considera que los ensayos microbiolgicos incluyen ensayos de esterilidad, deteccin, aislamiento, recuento e identificacin de microorganismos y sus metabolitos en diferentes materiales y productos o cualquier otro tipo de ensayo en el que utilicen microorganismos como parte de un sistema de deteccin, as como la utilizacin de microorganismos para ensayos ecolgicos. De ello se deriva que algunas de las directrices contenidas en el presente documento, por ejemplo, las referentes a la bioseguridad del laboratorio, debern ser interpretadas en consecuencia. Este documento puede tambin servir de gua para los laboratorios que utilizan tcnicas en reas relacionadas con la microbiologa, como bioqumica, biologa molecular y cultivos celulares. Sin embargo, los laboratorios con actividades no consideradas en este documento pueden tener que cumplir tambin otros requisitos adicionales.

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1.4

En el presente documento, se hace referencia a la calidad de los resultados de los ensayos y no se abordan especficamente los aspectos relacionados con la salud y la seguridad. Sin embargo, las prcticas de los laboratorios deben cumplir la legislacin vigente al respecto. Es importante recordar que, en algunos casos, los aspectos relacionados con la salud y la seguridad pueden influir en la calidad y el laboratorio tiene que tener este hecho en cuenta. Las definiciones de los trminos utilizados se facilitan en el glosario del apartado 15. ENAC invita a todas aquellas personas que deseen emitir comentarios a este documento a que los remitan por escrito a: ENAC C/ Serrano, 240, 7 28016-MADRID Att.: Direccin Tcnica de Laboratorios

1.5 1.6

2- ALCANCE DE LA ACREDITACIN EN 45002, puntos 4 y 12 El alcance de la Acreditacin de un laboratorio consiste en la definicin formal de las actividades para las que el laboratorio ha sido acreditado; dicho alcance se establece en un anexo tcnico entregado junto con el certificado de acreditacin. El alcance debe ser definido con la mayor precisin posible de manera que todas las partes implicadas conozcan con exactitud y sin ambigedad la serie de ensayos y/o anlisis cubiertos por la acreditacin de dicho laboratorio. 3- PERSONAL EN 45001, punto 5.2 Gua ISO 25, apartado 6 3.1 Cada laboratorio dispondr de una estructura organizativa y contar con personal adecuado a los diferentes campos analticos en que desarrolla su actividad. El personal deber contar con conocimientos, experiencia y competencia adaptados a las tareas y responsabilidades que tenga otorgadas. La direccin del laboratorio debe definir los niveles mnimos de titulacin, cualificacin y experiencia necesarios para las personas que ocupan puestos de trabajo clave en el laboratorio. El Director Tcnico ser un titulado experto en el rea de trabajo del laboratorio y su actividad. Los responsables de las diferentes divisiones operativas y de Garanta de Calidad debern tener titulacin y experiencia adecuada en el rea que dirigen. Los analistas y personal sin titulacin acadmica especfica podrn realizar ensayos siempre que se demuestre documentalmente que han recibido la preparacin adecuada o trabajen bajo supervisin.

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La competencia del personal debe ser evaluada de forma continua, por ejemplo, mediante tcnicas de Control de Calidad. 3.2 El laboratorio deber asegurar la formacin permanente de su personal y mantendr actualizado el curriculum vitae y, los registros de formacin que recibe cada uno de sus miembros. La formacin deber encaminarse a garantizar la competencia en las tcnicas analticas y mtodos que sean responsabilidad de cada trabajador.

4- LOCALES Y CONDICIONES AMBIENTALES EN 45001, punto 5.3.2 Gua ISO 25, apartado 7 4.1 Locales

4.1.1 La ubicacin, el diseo y la distribucin de las diferentes dependencias del laboratorio debe ser tal que el peligro de contaminacin de las muestras, ya sea derivado de las condiciones ambientales, contaminacin cruzada u otras causas, sea mnimo. Una de las formas ms efectivas de reducir al mnimo el riesgo de contaminacin cruzada es mediante la construccin del laboratorio segn un diseo "sin camino de regreso". Cuando esto no sea posible, deben tomarse medidas alternativas, como las siguientes: (i) realizar los procedimientos de manera secuencial, tomando las debidas precauciones para garantizar la integridad de los ensayos y de las muestras; (ii) separacin de actividades en el tiempo o en el espacio. 4.1.2 Es recomendable que los laboratorios dispongan de dos tipos de dependencias: (i) reas auxiliares (oficinas de administracin, aseos, guardarropas, almacenes, archivos, etc.) (ii) reas de ensayo, donde se llevan a cabo las actividades especficas de un laboratorio de microbiologa. En general, es conveniente que existan reas separadas o claramente designadas para las siguientes actividades: recepcin y almacenamiento de muestras. preparacin de muestras. reas analticas diferenciadas de las reas de apoyo. reas de apoyo (preparacin de medios de cultivo y reactivos, esterilizacin y descontaminacin, almacenamiento, lavado de material, etc.).

El rea de lavado (despus de la descontaminacin) puede compartirse con otras partes del laboratorio, siempre que se tomen las debidas precauciones para evitar la

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transferencia de trazas de substancias que podran afectar negativamente al crecimiento microbiano. La conveniencia de la separacin fsica debe juzgarse considerando los parmetros especficos del laboratorio ( por ejemplo, nmero de ensayos realizados, tipo de ensayos, etc.). 4.1.3 Con el objetivo de reducir el riesgo de contaminacin y facilitar las labores de limpieza y desinfeccin, se recomiendan a continuacin y a ttulo de ejemplo, una serie de medidas. Estas no son exhaustivas y no todas ellas podrn aplicarse en todas las situaciones. (i) referentes al diseo: - las reas de trabajo deben ser suficientemente espaciosas como para poder mantenerse limpias y ordenadas. El espacio requerido depender del volumen de anlisis realizados y de la organizacin interna del laboratorio; - uniones cncavas entre suelo, paredes y techos; - iluminacin empotrada en los techos; - las reas de trabajo deben estar debidamente ventiladas, lo que puede conseguirse mediante ventilacin natural o forzada, o mediante el uso de unidades de aire acondicionado, equipadas con filtros para el polvo en la entrada de aire; - disponer de suficiente espacio para almacenamiento; - las tuberas que transportan lquidos no deben pasar por encima de las superficies de trabajo, a no ser que estn provistas de un revestimiento hermticamente sellado; - no se recomienda el empleo de cortinas y /o persianas internas en las ventanas. Si esto fuera inevitable, deben estar incluidas en el programa regular de limpieza del laboratorio; - utilizacin de pantallas solares exteriores. (ii) referentes a materiales: - las paredes, techos, suelos y superficies de trabajo deben ser lisas, de material no absorbente y fcil de limpiar y desinfectar; - las superficies de madera de instalaciones y accesorios deben estar debidamente protegidas y selladas. Evitar las maderas rugosas y sin revestir; - no se recomiendan los azulejos como material de recubrimiento de las superficies de trabajo. (iii) otras: - minimizar la apertura de puertas y ventanas durante la realizacin de los ensayos; - los armarios, estanteras, equipos y material de laboratorio deben estar colocados de forma que se evite la acumulacin de polvo y se facilite su limpieza. Se recomienda el uso de armarios hasta el techo; - para facilitar las labores de limpieza, los telfonos y ordenadores que se encuentren dentro del rea de ensayo pueden estar provistos de un protector. El sistema de ventilacin de los equipos informticos debe estar orientado de manera que se evite la contaminacin. Por ejemplo, el flujo de aire no debe dirigirse hacia las superficies de trabajo;

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- utilizar lavamanos de accionamiento no manual; - ausencia de mobiliario, documentos y objetos que no sean los estrictamente necesarios para la realizacin de los ensayos. No debe haber plantas y objetos personales innecesarios en las reas de trabajo. 4.1.4 Cuando el trabajo en condiciones estriles sea limitado o tenga lugar slo ocasionalmente, puede ser suficiente con utilizar una superficie de trabajo limpia, siempre que se apliquen tcnicas aspticas rigurosas. 4.1.5 Deber establecerse un programa documentado de limpieza y desinfeccin del laboratorio que tenga en cuenta los resultados de la vigilancia de las condiciones ambientales y la posibilidad de contaminacin cruzada. 4.1.6 Dependiendo del tipo de ensayos que se realicen, el acceso al laboratorio de microbiologa debe restringirse al personal autorizado. Cuando existan este tipo de restricciones, el personal deber conocer: a) el uso restringido de una determinada rea; b) las restricciones impuestas al trabajo que puede realizarse en dichas reas; c) las razones para imponer esas restricciones. 4.1.7 En el laboratorio de microbiologa, debe utilizarse la indumentaria apropiada para el tipo de ensayos que se realicen. El personal debe despojarse de esta indumentaria antes de abandonar el rea. 4.2 Condiciones ambientales

4.2.1 Las condiciones ambientales bajo las cuales se realizan los ensayos microbiolgicos no deben invalidar los resultados. Dependiendo del tipo de ensayos que se realicen, el laboratorio debe disponer de un programa adecuado de vigilancia de las condiciones ambientales, tanto del aire como de las superficies de trabajo, con la finalidad de conocer las tendencias en los niveles de biocontaminacin. 4.2.2 El laboratorio debe definir los recuentos mximos de microorganismos que considere aceptables y disponer de un procedimiento documentado en el que se describan las medidas a tomar para corregir las situaciones en que se sobrepasen estos lmites. Estas medidas incluyen, por ejemplo: - limpieza y desinfeccin a fondo del laboratorio (incluyendo superficies de trabajo y filtros del aire acondicionado); - incremento de la frecuencia de las operaciones de limpieza y desinfeccin; - modificaciones en los procedimientos de limpieza y desinfeccin; - la instalacin de unidades de aire acondicionado.

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5- EQUIPOS EN 45001, punto 5.3.3 Gua ISO 25, apartados 7 y 9 5.1 Como parte de su sistema de calidad, el laboratorio debe documentar e implantar un programa para la limpieza, mantenimiento, calibracin y/o verificacin y esterilizacin de los equipos, cuando sea necesario. Los equipos habituales de un laboratorio microbiolgico pueden clasificarse como sigue: - material de uso general: material de vidrio o plstico ( matraces, tubos de ensayo, placas de Petri), instrumentos de muestreo, asas de siembra, etc. - baos termostticos, estufas, cabinas de seguridad biolgica, autoclaves, homogeneizadores, frigorficos, congeladores, equipos de filtracin, etc. - equipos volumtricos, como pipetas, distribuidores automticos, sembradores en espiral, etc. - instrumentos de medida, como termmetros, cronmetros, balanzas, pH-metros, contadores de colonias, etc. 5.2 Mantenimiento (Ver anexo B3) (En el documento ISO 7218, se facilitan directrices sobre el mantenimiento de los equipos).

5.2.1 El mantenimiento de los equipos esenciales debe realizarse a los intervalos especificados dependiendo de factores tales como la frecuencia de uso, mantenindose un registro detallado de todas las operaciones efectuadas. 5.2.2 Debe considerarse la posibilidad de contaminacin cruzada causada por los equipos. Por ejemplo: - el material desechable debe estar limpio o estril, en funcin de su uso; - el material de vidrio reutilizable debe estar debidamente limpio o estril, en funcin de su uso; - lo ideal es que los laboratorios dispongan de ms de un autoclave. Sin embargo, siempre que se tomen las debidas precauciones para separar las cargas de descontaminacin y esterilizacin, y siempre que exista un programa documentado de limpieza para controlar las condiciones ambientales tanto externas como internas del autoclave, el laboratorio puede utilizar un nico autoclave.

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5.3

Calibracin y/o verificacin de los equipos

5.3.1 El laboratorio debe establecer un programa para la calibracin y/o verificacin de los equipos que tengan una influencia directa en los resultados de los ensayos. La frecuencia de estas calibraciones y/o verificaciones se establecer en funcin de la experiencia documentada y se basar en el uso, tipo y resultados previos de las calibraciones de los equipos. Los intervalos entre sucesivas calibraciones y/o verificaciones deben ser ms cortos que el perodo de tiempo durante el cual se observan desviaciones del equipo fuera de los lmites aceptables. En el Anexo B, se ofrecen ejemplos de los intervalos de calibracin y las verificaciones tpicas de las caractersticas tcnicas para diferentes instrumentos de laboratorio. 5.3.2 Equipos para medir la temperatura - Cuando la precisin de la medida de la temperatura tenga un efecto directo en el resultado del anlisis, los equipos como termmetros de columna lquida, termopares o termmetros de resistencia de platino (TRP) utilizados por ejemplo, en estufas y autoclaves, debern tener una calidad adecuada para cumplir las especificaciones del mtodo de ensayo. La calibracin de los equipos de medida de la temperatura debe ser apropiada para la precisin que se requiere. - La trazabilidad de la medida de la temperatura puede garantizarse mediante la calibracin del equipo de medida frente a un patrn de referencia adecuado, ya sea un termmetro, termopar o termmetro de resistencia de platino, de acuerdo con un procedimiento documentado, siempre que la incertidumbre global del patrn de referencia sea apropiada para la calibracin. - Cuando la precisin de la medida de la temperatura no tenga un efecto directo en el resultado del ensayo, por ejemplo, en el caso de frigorficos y congeladores, los laboratorios pueden cumplir tambin los requisitos de acreditacin utilizando termmetros de trabajo debidamente verificados por el laboratorio. - El laboratorio debe realizar una verificacin independiente de los indicadores y termmetros integrados en preparadores de medios y autoclaves para demostrar su precisin. Cuando no sea posible utilizar dispositivos como termopares, se pueden instalar en el autoclave termmetros de temperatura mxima que hayan sido calibrados dentro del rango necesario de temperaturas, para vigilar las temperaturas alcanzadas en el interior del autoclave. De esta forma se pueden comparar la temperatura indicada en el autoclave con la temperatura mxima alcanzada en el interior del mismo. Debe mantenerse un registro de todos los controles realizados y detalles sobre cualquier accin correctora adoptada.

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5.3.3 Estufas y baos termostticos La estabilidad y la uniformidad de la temperatura, as como el tiempo necesario para alcanzar condiciones de equilibrio en baos termostticos, estufas y salas con temperatura controlada deben establecerse inicialmente y documentarse. La constancia de las caractersticas registradas durante la verificacin inicial del equipo debe comprobarse y registrarse despus de cada reparacin o modificacin. El laboratorio debe mantener un registro adecuado de las medidas de temperatura de los equipos utilizados en los ensayos.

5.3.4 Autoclaves - Los autoclaves deben cumplir las tolerancias de temperatura especificadas. No se recomienda la utilizacin de autoclaves provistos slo de un manmetro para esterilizar medios o descontaminar residuos. - La estabilidad y la uniformidad de la temperatura, as como el tiempo necesario para alcanzar condiciones de equilibrio en los autoclaves debe verificarse inicialmente y documentarse. La constancia de las caractersticas registradas durante la verificacin inicial del equipo debe comprobarse y registrarse despus de efectuar una modificacin o reparacin, por ejemplo al sustituir el termostato o el programador. - Cuando sea necesario, el ciclo de esterilizacin/descontaminacin debe tener en cuenta el perfil de calentamiento de la carga. Deben darse instrucciones claras de funcionamiento basadas en los perfiles de calentamiento determinados para los usos que lo requieran. - Debe mantenerse un registro de las operaciones realizadas en el autoclave, incluyendo la temperatura y el tiempo. Esto debe realizarse para cada ciclo, indicando su aceptacin o rechazo. El control de la temperatura puede realizarse mediante una de las siguientes formas: (i) utilizando un termopar y un aparato registrador para obtener un grfico impreso; (ii) utilizando un termmetro de temperatura mxima; (iii) por observacin directa y registro de la temperatura mxima alcanzada. Adems de controlar directamente la temperatura del autoclave, puede comprobarse la eficacia de su funcionamiento durante cada ciclo, mediante la utilizacin de indicadores qumicos o biolgicos para fines de esterilizacin y descontaminacin. Debe utilizarse un sistema para distinguir que una carga ha sido procesada, pero no como un indicador para demostrar que ha finalizado un ciclo de esterilizacin aceptable.

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5.3.5 Pesas y balanzas Las pesas y balanzas deben calibrarse a intervalos regulares y demostrar su trazabilidad a patrones nacionales o internacionales. Adems de la calibracin completa, las balanzas se deben verificar rutinariamente (a diario o antes de usar) para asegurarse que estn en condiciones adecuadas de uso; estas verificaciones deben quedar registradas. En el caso de balanzas de precisin deben tenerse en cuenta las condiciones ambientales y/o de ubicacin. 5.3.6 Material volumtrico El laboratorio debe realizar una verificacin inicial de los equipos volumtricos tales como dispensadores y pipetas automticas, y realizar controles peridicos para garantizar que los equipos cumplen en todo momento las especificaciones requeridas. Debe mantenerse un registro actualizado de estas operaciones. La verificacin no ser necesaria para el material de vidrio que haya sido certificado para una tolerancia especifica. El material volumtrico de vidrio y el desechable "de un solo uso", se recomienda que provenga de empresas certificadas segn 1SO 9000. Es conveniente realizar controles aleatorios de su precisin. Si las empresas proveedoras no estn certificadas segn ISO 9000, el laboratorio debera verificar cada lote de equipos. 5.3.7 pH-metros, conductivmetros, medidores de oxgeno y equipos similares Los pH-metros, conductivmetros, medidores de oxgeno y otros equipos similares deben verificarse peridicamente o antes de ser utilizados. En el caso de los pH-metros la verificacin se har diariamente o cada vez que vayan a utilizarse si su uso no es diario. Peridicamente se verificar el funcionamiento correcto de los electrodos. Estas verificaciones debern quedar registradas. 5.3.8 Cabinas de flujo laminar y de seguridad biolgica En las cabinas de flujo laminar debe verificarse peridicamente la velocidad del aire, estado de los filtros y control microbiolgico de esterilidad del aire. En las cabinas de seguridad biolgica debe comprobarse adems su estanqueidad. Estas verificaciones deben quedar registradas.

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5.3.9 Otros equipos Cuando la humedad influya en el resultado del ensayo, debern calibrarse los higrmetros para garantizar la trazabilidad a patrones nacionales o internacionales. Los cronmetros, incluidos los de los autoclaves, deben verificarse utilizando un cronmetro calibrado o seal horaria nacional.

6- MEDIOS DE CULTIVO Y REACTIVOS Gua ISO 25, apartado 8.1 6.1 Los medios de cultivo pueden prepararse en el laboratorio a partir de diferentes ingredientes qumicos o a partir de productos en polvo deshidratados comerciales, pero tambin pueden adquirirse medios listos para su uso. El laboratorio debe asegurarse de que la calidad de los medios de cultivo y reactivos es apropiada para los ensayos realizados. Se recomienda que provengan de empresas certificadas segn ISO 9000. El laboratorio debe asegurarse de que la certificacin cubre todas las operaciones relevantes, entre ellas las de suministro y entrega, cuando estas influyan en la calidad de los productos, deber solicitar tambin, una copia del certificado de registro ISO 9000 a los proveedores de los productos. Se recomienda realizar controles adicionales con carcter aleatorio, para asegurarse de que los productos siguen cumpliendo las especificaciones requeridas. Estos controles pueden incluirse en el programa interno de control de calidad. Si las empresas proveedoras no disponen de certificacin segn ISO 9000, el laboratorio debera verificar cada uno de los lotes suministrados. 6.4 Los medios de cultivo, productos en polvo deshidratados y reactivos comerciales deben consumirse antes de la fecha de caducidad. El laboratorio debe registrar la fecha de recepcin, la fecha de caducidad y la fecha de apertura del envase. El almacenamiento debe realizarse en las condiciones apropiadas. Todos los envases, especialmente los que contengan medios deshidratados, deben estar hermticamente cerrados. No deben utilizarse medios deshidratados que presenten apelmazamiento o un cambio de color.

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6.3

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6.5

El fabricante debera aportar, inicialmente, una "especificacin de calidad" que incluya el mayor nmero posible de los puntos siguientes: a) caducidad del producto b) condiciones de almacenamiento c) plan y frecuencia de muestreo d) control de esterilidad, incluyendo criterios de aceptabilidad e) controles de la eficacia, incluyendo el microorganismo usado, referencia de la coleccin de cultivos y criterios de aceptabilidad f) fecha de emisin de la especificacin Cuando esta informacin sufra modificaciones, el fabricante deber entregar una nueva especificacin. Cada lote de productos suministrado debe incluir una garanta de que cumple la especificacin. Para la preparacin de medios, soluciones y tampones, debe utilizarse agua destilada, desionizada o de smosis inversa, y que haya sido sometida a controles peridicos que aseguren su calidad (conductividad, pH y contaminacin microbiana) y llevar un registro actualizado de los mismos. Los medios de cultivo, soluciones y reactivos deben prepararse, almacenarse y utilizarse de acuerdo con un procedimiento documentado. En el documento ISO 7218, se incluyen una serie de directrices para la preparacin y esterilizacin de medios, as como los tiempos de almacenamiento recomendados. Los lotes de medios preparados segn formula en el laboratorio deben verificarse para comprobar que facilitan el crecimiento de determinados cultivos microbianos procedentes de una coleccin reconocida y debe verificarse que los medios selectivos inhiben el crecimiento de microorganismos no deseados. En lugar de utilizar el mtodo frecuente de cultivo en lnea, se recomienda utilizar un procedimiento cuantitativo que consiste en inocular en el medio un nmero conocido, normalmente pequeo, de microorganismos y evaluar el nmero de microorganismos recuperados. Este mtodo puede utilizarse para establecer el nivel de recuperacin por debajo del cual se rechaza un lote. Debe verificarse la esterilidad de los medios y diluyentes preparados en el laboratorio. El laboratorio debe asegurarse de que los medios y reactivos ( incluidas las soluciones madre) estn debidamente etiquetados para garantizar su identificacin, concentracin, condiciones de almacenamiento, caducidad y/o perodos recomendados de almacenamiento. Asimismo, debe poder identificarse a la persona que ha preparado el medio o reactivo, la fecha de preparacin y la fecha de caducidad, ya sea por medio de una etiqueta o de un registro apropiado.

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7- MTODOS Y PROCEDIMIENTOS DE ENSAYO EN 45001, punto 5.4 Gua ISO 25, apartado 10 7.1 El laboratorio puede utilizar mtodos oficiales, mtodos normalizados nacionales e internacionales o mtodos internos desarrollados por l mismo. El laboratorio no debe sentirse obligado a utilizar un mtodo normalizado si dispone de un mtodo interno que obtenga resultados equivalentes o superiores, utilice tecnologa ms moderna y presente un grado de validacin adecuado. El laboratorio debe demostrar que un mtodo es adecuado para la finalidad pretendida. La precisin, repetibilidad/reproducibilidad, especificidad, sensibilidad, lmite de cuantificacin,efectos matriciales y facilidad de uso son caractersticas que deben tenerse en cuenta antes de seleccionar un determinado mtodo de ensayo. El laboratorio debe elegir unos mtodos que sean adecuados para sus objetivos (ver seccin 8 -Validacin de mtodos y verificacin de los resultados). Los mtodos utilizados por el laboratorio deben ser debidamente documentados. El documento ISO 78/2 -Layouts for Standards. Parte 2 contiene recomendaciones en relacin con estos procedimientos.

7.2

7.3

8- VALIDACIN DE MTODOS Y VERIFICACIN DE LOS RESULTADOS 8.1 En el caso de que se utilicen mtodos oficiales, mtodos normalizados o mtodos de organismos nacionales o internacionales reconocidos, o basados en ellos, es posible que no se requiera validacin. Cuando se utilicen estos mtodos los laboratorios debern antes de analizar ninguna muestra verificar su capacidad para cumplir de forma satisfactoria todos los requisitos establecidos en dichos mtodos. Los sistemas de ensayo que se venden en el mercado (kits) pueden no requerir una nueva validacin si se dispone de datos sobre validacin procedentes de fuentes alternativas. El laboratorio debe solicitar a los fabricantes datos sobre validacin y evidencias de que cumplen un sistema reconocido de aseguramiento de la calidad. Cuando no se disponga de datos completos sobre la validacin, el laboratorio debera completar la validacin del mtodo antes de utilizarlo con carcter rutinario. Los mtodos internos desarrollados por el propio laboratorio deben validarse para garantizar la fiabilidad de los resultados obtenidos y, en caso posible, conocer la dispersin de los mismos. Cada laboratorio establecer los requisitos que deben cumplir estos mtodos, con objeto de demostrar que son adecuados para la finalidad pretendida.

8.2

8.3

8.3.1 Los mtodos de ensayos microbiolgicos cualitativos (en los que la respuesta se expresa en trminos de presencia/ausencia), deben validarse estimando, cuando sea apropiado, la especificidad, desviacin positiva, desviacin negativa, lmite de deteccin y efecto matricial (ver definiciones en el glosario).

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8.3.2 En el caso de ensayos microbiolgicos cuantitativos, debe considerarse la especificidad, sensibilidad, precisin relativa, desviacin positiva, desviacin negativa, repetibilidad, reproducibilidad y lmite de cuantificacin dentro de una variabilidad establecida y, en caso necesario, determinar cuantitativamente estos parmetros. Las diferencias debidas a las matrices deben tenerse en cuenta al analizar diferentes tipos de muestras. Los resultados deben evaluarse utilizando mtodos estadsticos apropiados. 8.4 Para demostrar que una versin modificada de un mtodo cumple las mismas especificaciones que el mtodo original, deben realizarse comparaciones utilizando replicados. Todos los datos sobre validacin de los mtodos deben registrarse y almacenarse, como mnimo mientras estos sean vigentes y siempre que sea necesario para asegurar la adecuada trazabilidad de los datos primarios y resultados. La participacin en, o la organizacin de, ensayos intercolaborativos, ensayos de aptitud o ensayos de intercomparacin, ya sean formales o informales, es tambin una forma de comprobar la validez de los mtodos, aunque se reconoce que no siempre es posible. El anlisis de muestras utilizando el nuevo mtodo propuesto y los mtodos ya existentes para realizar la misma determinacin puede ayudar a establecer la validez del primero. Incluso cuando se haya realizado una validacin, el laboratorio tendr que verificar peridicamente que se cumplen los parmetros documentados, por ejemplo, utilizando muestras inoculadas, etc.

8.5

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9- ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD DE LOS RESULTADOS/CONTROL DE CALIDAD EN 45001, Punto 5.4.2 e y f Gua ISO 25, apartado 5.6 En el glosario, se incluye la definicin de aseguramiento de la calidad segn ISO. 9.1 El aseguramiento de la calidad es un programa de actividades llevadas a cabo por un laboratorio con la finalidad de mejorar en conjunto su funcionamiento. Estas actividades incluyen promocin del uso rutinario del control de calidad interno, apoyo a programas de ensayos de aptitud y todas las medidas adoptadas para mejorar la reproducibilidad, tanto dentro del laboratorio como entre diferentes laboratorios, ya sea por medio de cursos de formacin, conferencias o estudios intercolaborativos de mtodos de laboratorio. Control de calidad interno

9.2

9.2.1 El laboratorio debe disponer de un programa de control de calidad interno para evaluar con carcter continuo sus actividades. Dicho programa puede incluir: recuentos cruzados entre analistas, anlisis duplicados de una misma muestra por distintos analistas, uso de materiales de referencia, tcnicas estadsticas, etc.

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9.3

Cepas de referencia Para demostrar la trazabilidad, el laboratorio debe utilizar cepas de referencia de microorganismos suministrados por una coleccin nacional o internacional reconocida. (Ver anexo A2, cepas de referencia). Las cepas de referencia se reconstituirn y sometern a los controles de pureza y ensayos bioqumicos que sean necesarios. Sern subcultivadas una sola vez para obtener las cepas de reserva, de las que se obtendrn las cepas de trabajo. Las cepas de reserva deben conservarse utilizando, una tcnica que mantenga las caractersticas deseadas de las cepas de referencia, como por ejemplo, liofilizacin, ultracongelacin (70C), conservacin en nitrgeno lquido, etc. Las cepas de trabajo, se conservarn en refrigeracin durante un perodo de tiempo que asegure la viabilidad del microorganismo (ver anexo A1 sobre utilizacin de cepas de referencia). Cuando se descongelan las cepas de reserva no deben volverse a congelar y reutilizar. En general, las cepas bacterianas de trabajo no deben ser subcultivadas, sin embargo, pueden ser subcultivadas hasta un nmero determinado de veces cuando: a) as lo requieran los mtodos normalizados b) el laboratorio pueda aportar evidencias documentadas que demuestren que no se ha producido prdida de viabilidad (cuando sea importante), cambios en la actividad bioqumica y/o cambios en la morfologa. Las cepas de trabajo no deben ser subcultivadas para sustituir a las cepas de reserva.

9.4

Materiales de referencia y materiales de referencia certificados. Los materiales de referencia y los materiales de referencia certificados (ver definicin en el glosario) proporcionan la trazabilidad esencial en las mediciones y son utilizados, por ejemplo, para demostrar la precisin de los resultados, calibrar equipos y mtodos, validar mtodos y permitir la comparacin de mtodos al ser utilizados como patrones de referencia. Se recomienda su utilizacin siempre que sea posible. Los materiales y substancias de referencia, as como los materiales de referencia certificados, deben almacenarse y manipularse en unas condiciones que no alteren su integridad, de acuerdo con un procedimiento documentado y el mtodo de ensayo correspondiente.

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9.5

Control de calidad externo (ensayo de aptitud)

9.5.1 Los programas de ensayos de aptitud organizados externamente constituyen un medio independiente por el cual un laboratorio puede evaluar objetivamente y demostrar la fiabilidad y precisin de los resultados obtenidos con sus mtodos analticos. La participacin en estos ensayos permite al laboratorio comparar sus resultados frente a los de otros laboratorios. Es importante evaluar los resultados obtenidos en los ensayos de aptitud como una manera de comprobar la calidad de los ensayos, adoptando las medidas oportunas, si son necesarias. 9.5.2 ENAC reconoce los beneficios de estos programas y recomienda enrgicamente a los laboratorios que participen en ensayos de aptitud como una parte importante de sus procedimientos de aseguramiento de la calidad. Se recomienda que los laboratorios participen regularmente en programas relacionados con el alcance de su acreditacin; en algunos casos concretos, esta participacin puede ser un requisito. 10- AUDITORAS INTERNAS Y REVISIN DEL SISTEMA DE CALIDAD EN 45001, PUNTO 5.4.2 Gua ISO 25, apartados 5.3-5.5 Documento G-ENAC-01 10.1 La auditora y la revisin son dos aspectos importantes en el funcionamiento de un sistema de calidad. La auditora de calidad es el control peridico que hace el laboratorio de su sistema de calidad para asegurar su implantacin, eficacia y cumplimiento por todos los miembros del personal del laboratorio. La revisin del sistema de calidad consiste en la verificacin peridica del mismo para asegurarse que cumple las necesidades del laboratorio y los requisitos de las normas de calidad. El laboratorio deber establecer un programa de auditoras internas adaptado a las diferentes reas de trabajo, (como documento de consulta puede utilizarse la "Gua para la realizacin de auditoras internas y revisiones del sistema de calidad en laboratorios" G-ENAC-01). Esta actividad ser realizada por personal cualificado de una forma peridica y debidamente documentada. Regularmente y al menos una vez al ao se realizar una revisin del sistema de calidad comprobando su cumplimiento e implantacin aplicando las acciones correctoras oportunas cuando procedan. Se mantendr actualizado el Manual de Calidad introduciendo los procedimientos normalizados nuevos y las modificaciones.

10.2

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11- MANIPULACIN E IDENTIFICACIN DE MUESTRAS EN 45001, punto 5.4.5 Gua ISO 25, apartados 10 y 11

11.1

Hay que tener en cuenta que la flora microbiana puede ser sensible a factores tales como temperatura o duracin del almacenamiento y transporte, por lo que es importante verificar y registrar el estado de la muestra cuando se recibe en el laboratorio. El laboratorio debe disponer de un procedimiento que incluya la entrega de muestras. Si la muestra es insuficiente o si se encuentra en mal estado debido a deterioro fsico, temperatura incorrecta, envase roto o etiquetado defectuoso, el laboratorio debe rechazarla o (si es posible realizar el trabajo) describir su estado en el informe del ensayo. El laboratorio debe registrar la siguiente informacin: a) una identificacin nica y sin ambigedades que pueda utilizarse para el seguimiento de la muestra desde su llegada al laboratorio hasta el final del proceso analtico; b) fecha y, cuando sea oportuno, hora de la llegada de la muestra; c) nombre del solicitante; d) nmero de identificacin de la muestra asignado por la persona que realiza la toma de muestras (si es que existe alguno); e) Descripcin del producto; f) lista de ensayos requeridos; y, siempre que sea necesario, g) temperatura y estado de la muestra a su llegada; h) caractersticas de la operacin de muestreo (fecha de muestreo, condiciones del muestreo, etc.)

11.2

11.3

11.4

Las muestras que se encuentran a la espera de ser analizadas deben almacenarse en condiciones adecuadas para reducir al mnimo cualquier modificacin en la poblacin microbiana presente. El envase y etiquetado de las muestras puede estar, en potencia, altamente contaminado y las muestras deben manipularse y almacenarse con precaucin para evitar que se propague la contaminacin.

11.5

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11.6

La preparacin de las muestras y porciones de ensayo deben realizarse segn procedimientos documentados basados en normas nacionales o internacionales aplicables a los productos que son objeto del ensayo, si es que existen, y segn las directrices generales contenidas en los documentos ISO 6887 e ISO 7218. Debe existir un procedimiento documentado para la conservacin y eliminacin de muestras. Cuando se sepa que algunas porciones de muestras de ensayo estn altamente contaminadas, deben descontaminarse antes de su eliminacin. Si es necesario, las muestras deben conservarse hasta que se hayan obtenido los resultados del ensayo, o ms tiempo.

11.7

12- ELIMINACIN DE RESIDUOS CONTAMINADOS 12.1 La correcta eliminacin de los materiales contaminados puede no afectar directamente a la calidad del anlisis de la muestra. Sin embargo, es un aspecto de la correcta gestin de un laboratorio, debindose respetar las normas nacionales e internacionales sobre medio ambiente, salud y seguridad (ver tambin ISO 7218).

13- INCERTIDUMBRE DE LA MEDIDA 13.1 La definicin internacional de la incertidumbre de la medida puede encontrarse en la referencia bibliogrfica nmero 11. Se reconoce que los actuales conocimientos sobre la incertidumbre de la medida vara segn las disciplinas microbiolgicas. Por esta razn, es posible que los laboratorios no tengan actualmente acceso a unas directrices apropiadas para estimar la incertidumbre de la medida en su disciplina particular. Esta situacin est siendo abordada en la actualidad por la comunidad de laboratorios y se espera que en un futuro se disponga de unas directrices ms claras en el campo de la microbiologa.

13.2

14- USO DE ORDENADORES: SISTEMAS DE GESTIN INFORMTICA EN 45001, puntos 5.3.3 y 5.4 Gua ISO 25, apartado 10.7 14.1 Los sistemas de gestin informtica debern incluir los procedimientos de autorizacin, y validacin de las partes de que consta. Asimismo tendrn capacidad para comprobar el seguimiento de la muestra. Toda aplicacin informtica deber ser convenientemente documentada mediante informacin detallada que permita demostrar que no se produce prdida, manipulacin o corrupcin de los datos. Ser capaz de mantener la inviolabilidad del sistema mediante control de acceso. Se obtendrn copias peridicas de seguridad con el objeto de asegurar su registro y archivo durante el tiempo reglamentado. (Los ordenadores adaptados al control de equipos no estn incluidos en este apartado).

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15- GLOSARIO DE TRMINOS ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD (QA): Conjunto de acciones planificadas y sistemticas que son necesarias para proporcionar la adecuada confianza de que un producto o servicio satisfar los requisitos dados sobre la calidad. [ISO 8402:1986 Vocabulario relacionado con la calidad] CALIBRACIN: Conjunto de operaciones que permiten establecer, en condiciones especficas, la relacin existente entre los valores indicados por un instrumento de medida o un sistema de medida, o los valores representados por una medida material o un material de referencia, y los valores correspondientes a una magnitud obtenidos mediante un patrn de referencia. [ UNE-EN 30012-1, 3.23: 94] [ISO/IEC GUIDE 25, 3.4:90] NOTA1: El resultado de una calibracin permite la estimacin de los errores de indicacin del instrumento de medida, sistema de medida o medida material, o la asignacin de valores a las marcas de escalas arbitrarias. CEPAS DE REFERENCIA: Microorganismos obtenidos de una coleccin nacional o internacional reconocida. CEPAS DE RESERVA: Cepas obtenidas a partir del cultivo de una cepa de referencia preparada y conservada por un laboratorio. CEPAS DE TRABAJO: Subcultivos de microorganismos obtenidos a partir de las cepas de reserva para ser utilizados en los ensayos que lo precisen. CONTROL DE CALIDAD (QC): Tcnicas y actividades operacionales que se usan para cumplir los requisitos de calidad. [ISO 8402:1986 Vocabulario relacionado con la calidad] DESVIACIN NEGATIVA: Ocurre cuando el mtodo alternativo da un resultado negativo sin confirmacin y el mtodo de referencia da un resultado positivo. Esta desviacin se convierte en un resultado negativo falso cuando puede demostrarse que el resultado verdadero es positivo. DESVIACIN POSITIVA: Ocurre cuando el mtodo alternativo da un resultado positivo sin confirmacin y el mtodo de referencia da un resultado negativo. Esta desviacin se convierte en un resultado positivo falso cuando puede demostrarse que el resultado verdadero es negativo. ESPECIFICIDAD: Grado en que un mtodo se ve afectado por los otros componentes en una muestra con mltiples componentes. Un mtodo especfico es el que no se ve afectado por ninguno de los otros componentes. LIMITE DE CUANTIFICACIN: Nmero mnimo de organismos dentro de una variabilidad definida que pueden determinarse bajo las condiciones experimentales del mtodo evaluado.

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LIMITE DE DETECCIN: Nmero mnimo de organismos que pueden ser detectados, pero en cantidades que no pueden ser estimadas con precisin. LINEALIDAD: Capacidad del mtodo cuando se utiliza con una determinada matriz para dar resultados proporcionales al nmero de microorganismos presentes en la muestra. MATERIAL DE REFERENCIA: Material o substancia, en la cual uno o ms valores de sus propiedades son suficientemente homogneos y estn claramente establecidos como para poder ser utilizados en la calibracin de un aparato, la evaluacin de un mtodo de medida o la asignacin de valores a materiales. [Gua ISO 30:1992 Trminos y definiciones utilizados en relacin con los materiales de referencia]. MATERIAL DE REFERENCIA CERTIFICADO: Material de referencia acompaado de un certificado, en el cual uno o ms valores de sus propiedades han sido certificados mediante un procedimiento que establece su trazabilidad con una realizacin exacta de la unidad en la que se expresan los valores de dichas propiedades. Cada valor certificado se acompaa de una incertidumbre con las indicaciones de un nivel de confianza. [Gua ISO 30:1992 Trminos y definiciones utilizados en relacin con los materiales de referencia] PRECISIN RELATIVA: Grado de concordancia entre los resultados del mtodo evaluado y los obtenidos utilizando un mtodo de referencia, como los proporcionados por los Organismos Nacionales de Normalizacin o el Organismo Internacional de Normalizacin (ISO) . REPETIBILIDAD: Grado de concordancia entre los resultados de sucesivas mediciones del mismo mesurando realizadas en las mismas condiciones de medicin. [ISO Vocabulario internacional de trminos bsicos y generales de metrologa: 1993] REPRODUCIBILIDAD: Grado de concordancia entre los resultados de mediciones del mismo mesurando realizadas en diferentes condiciones de medicin. [ISO Vocabulario internacional de trminos bsicos y generales de metrologa: 1993] SENSIBILIDAD: Capacidad del mtodo para detectar ligeras variaciones en el nmero de microorganismos dentro de una determinada matriz. VERIFICACIN: Confirmacin mediante examen y aportacin de pruebas de que se han cumplido unos determinados requisitos. [Gua ISO/IEC 25: 1990 Requisitos generales para la competencia de laboratorios de calibracin y ensayo, 3 edicin]

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16- REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS 1. CGA-ENAC-LE. Criterios generales de acreditacin. Competencia tcnica de los laboratorios de ensayo. UNE 66.501:1991. Criterios generales para el funcionamiento de los laboratorios de ensayo. EN 45001: 1989. Criterios generales para el funcionamiento de laboratorios de ensayo. Gua ISO/IEC 25: Requisitos generales para la competencia de laboratorios de ensayo y calibracin. Tercera edicin: 1990. EAL G-18. Acreditation for microbiological laboratories. ISO 9000-1: 1994. Normas de gestin de calidad y aseguramiento de la calidad. Parte 1 - Gua para la seleccin y uso. Borrador ISO/DIS 7218. Microbiologa - Directrices generales para anlisis microbiolgicos. [Revisin de la primera edicin ISO 7218: 1985]. ISO 78/2: 1982. Layouts for standards. ENAC G-RELE-01 rev.0. Mayo 1993. Gua para la realizacin de auditorias internas y revisiones del sistema de calidad en laboratorios de ensayo y calibracin. ISO 6887: 1983. Preparacin de diluciones. Gua ISO 30: 1992. Trminos y definiciones utilizadas en relacin con los materiales de referencia. NIS 31 Edicin 2, Mayo 1992. NAMAS Executive. ISO 8492: 1986. Vocabulario sobre la calidad. ISO Vocabulario internacional de trminos bsicos y generales de metrologa: 1993. Organizacin Mundial de la Salud (1980). Laboratory Biosafety Manual. Ginebra: OMS. ISO 3534-1:1993. "Estadsticas - Vocabulario y smbolos. Parte 1: Probabilidad y trminos estadsticos generales". Manual of Methods for General Bacteriology. Philipp Gerhard y cols. American Society for Microbiology, Washington 1981.

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5. 6.

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ANEXO A1

UTILIZACIN DE CEPAS DE REFERENCIA

CEPA DE REFERENCIA

RECONSTITUCIN

?
Cultivada una sola vez

?
(*)

?
OBTENCIN DE LAS CEPAS DE RESERVA

?
CONSERVACIN POR DISTINTOS MTODOS (liofilizacin, nitrgeno lquido, ultracongelacin rpida, etc.) (especificar tiempo y condiciones de almacenamiento)

?
(*)

?
DESCONGELACIN/RECONSTITUCIN

?
(*)

?
CEPAS DE TRABAJO (Especificar tiempo y condiciones de almacenamiento).

?
UTILIZACIN EN EL CONTROL DE CALIDAD Y EN ENSAYOS QUE LO PRECISEN

( * ) Deben realizarse los controles de pureza y los ensayos bioqumicos que sean necesarios.

Todas las fases del proceso han de estar documentadas y se debe mantener un registro detallado de todas las operaciones realizadas.

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ANEXO A2 CEPAS DE REFERENCIA. Las cepas de referencia pueden obtenerse de: 1. Coleccin espaola de cultivos tipos (CECT) Laboratorio de microbiologa de la facultad de Biologa de la Universidad de Valencia. Avda. de la Moreras, s/n Burgasot (Valencia) National Collection of Type Cultures (NCTC) ( Coleccin Nacional de cultivos tipo), Central Public Health Laboratory, 61 Colindale Avenue, London NW9 5HT. Tel. 081299-4400 (Bacterias, bacterifagos, micoplasmas, plsmidos) National Collection of Pathogenic Fungi (NCPF) ( Coleccin Nacional de Hongos Patgenos), PHLS Mycological 91 Reference Laboratory, Avenue, London NW95HT Tel: 081-200-4400 (Hongos patgenos) CAB International Mycological Institute (CMICC); Ferry Lane, Kew, Surrey TW9 3AF. Tel: 081-940-4086 (Hongos aislados, distintos a patgenos humanos y animales y, levaduras) National Collection of Yeast Cultures (NCYC) (Coleccin Nacional de Cultivos de Levaduras), Food Research Institute, Colney Lane, Norwich, Norfolk NR4 7 UA. Tel Norwich (01603) 255000, fax: (01603) 507723. (Levaduras distintas a las patgenas conocidas) National Collections of Industrial and Marine Bacteria Ltd. (NCIMB) (Colecciones Nacionales de Bacterias Industriales y Marinas). 23 St. Machar Drive, Aberdeen AB2 1RY. Tel. Aberdeen (0224) 273332, Fax: 0224 487658 UNIABN G: Telecom Gold/Dialcoms 75: DB10271 (Bacterias no patgenas, actinomicetos y plsmidos) National Collection of Food Bacteria (NCFB) (Coleccin Nacional de Bacterias alimentarias), AFRC Institute of Food Research, Reading Laboratory, Berks. 23 St. Machar Drive, Aberdeen AB24 3 RY, Gran Bretaa. . Tel: (0734) 883103 (Bacterias)

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Culture Collection of Algae and Protozoa (CCAP). (Coleccin de cultivos de algas y protozoos). Dunstaffnage Marine Laboratory, PO Box, 3 OBAN, Argyll PA34 4AD, Scotland. Tel: 0631 62244 (Hongos Marinos) Culture Collection of Algae and Protozoa (CCAP). (Coleccin de Cultivos de algas y protozoos). Institute of Freshwater Ecology. The Windermere Laboratory, Far Sawrey Ambleside, Cumbria LA22 OLP. Tel: 09662 2468/9 (Hongos) European Collection of Animal Cell Cultures (ECACC). (Coleccin Europea de Cultivos de clulas animales). PHLS. Centre for Applied Microbiology and Research, Porton Down, Salisbury, Wiltshire SP4 OJG. Tel: 0980 61391 (Clulas animales) European Collection of Plant Pathogenic Bacteria (NCPPB). (Coleccin Nacional de Bacterias patgenas de plantas). Central Science Laboratory, Hatching Green, Harpenden, Hertfordshire AL5 2BD. Tel: 0582715241. (Patgenos) National Collection of Wood Rotting Fungil (NCWRF). ( Coleccin Nacional de Hongos que carcomen la madera). Bio-deterioration Section, Timbeer Division, Building Research Establishment, Garston, Watford, Hertfordshire WD2 7JR. Tel: 0923 894040 (Hongos) Central Bureau Voor Shimmelcultures (CBS). (Oficina Central de Cultivos de Mohos), PO Box 273, Oosterstraat 1, NL-3740 AG Baarn, Netherlands. Tel: 31-2154-81211 (Hongos, actinomicetos) American Type Culture Collection (ATCC). (Coleccin Americana de cultivos tipo) 12301 Parklawn Drive, Rockville MD 20852, USA Microbial Strain Data Network. An international network of Microbial and cell line information resources. (Red de datos de cepas microbiolgicas. Una red internacional de bancos de microbios y lineas celulares). Institute of Biotechnology, Cambridge University, 307, Huntingdon Road, Cambridge CB3 OJX Tel: 0223 276622. Barbara Kirsop. CNCM. Collection Nationale de Cultures de Microorganismes INSTITUR PASTEUR 25 Rue du Docteur Roux 75724 PARIS CEDEX 15

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ANEXO B1 DIRECTRICES PARA LA CALIBRACIN DE EQUIPOS. La informacin que se facilita es meramente orientativa. La frecuencia depender del uso, tipo y resultados previos de las calibraciones del equipo.

Tipo de aparato Termmetro de referencia Termopar de referencia Termmetros de trabajo Termopares de trabajo Balanzas Pesas de calibracin Pesa(s) de control

Requisitos Recalibrado plenamente trazable. Punto nico (p.ej., punto de congelacin) Frente a termmetro de referencia en punto de congelacin y/o rangos de temperatura de trabajo Calibracin plenamente trazable Calibracin plenamente trazable Frente a pesa calibrada o verificar en la balanza inmediatamente despus de la calibracin trazable Frente a seal horaria nacional

Frecuencia sugerida Cada 5 aos Anualmente Anualmente

Anualmente Bianualmente/anualmente dependiendo de la clase Anualmente

Cronmetros

Anualmente

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ANEXO B2 DIRECTRICES PARA LA PUESTA EN SERVICIO Y VERIFICACIN DE EQUIPOS. La informacin que se facilita es meramente orientativa. La frecuencia depender del uso, tipo y resultados previos del equipo. Tipo de aparato Equipos con temperatura controlada (incubadoras, baos, refrigeradores, congeladores) Estufas de esterilizacin Requisitos a) Verificar la estabilidad y uniformidad de la temperatura b) Verificar la temperatura a) Verificar la estabilidad/uniformidad de la temperatura b) Verificar la temperatura a) Verificar la estabilidad/uniformidad de la temperatura b) Verificar la temperatura c) Verificar el tiempo a) Verificar las caractersticas tcnicas b) Verificar la velocidad del aire c) Verificar el recuento de partculas a) Verificar las caractersticas tcnicas b) Verificar la esterilidad Ajuste de la respuesta utilizando como mnimo 2 tampones y verificacin posterior Ajuste del cero y verificacin con la pesa de control a) Conductividad b) Contaminacin microbiana Frecuencia sugerida a) Inicialmente y despus de reparacin/ modificacin b)Diariamente/ con cada uso a) Inicialmente y despus de reparacin/modificacin b) Con cada uso a) Inicialmente y despus de reparacin/modificacin b) Con cada uso c) semestralmente a) Inicialmente y despus de reparacin/modificacin b) Anualmente c) Anualmente a) Inicialmente y despus de reparacin/modificacin b) Mensualmente Diariamente/con cada uso

Autoclaves

Cabinas de seguridad

Cabinas de flujo laminar

pH metros

Balanzas Destilador, desionizador y unidad de smosis inversa

Diariamente/con cada uso a) Semanalmente b) Mensualmente

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Tipo de aparato Diluidores gravimtricos

Requisitos a) Peso y volumen (peso) distribuido b) Verificar coeficiente de dilucin Verificar el volumen distribuido

Frecuencia sugerida a) Diariamente b) Mensualmente Inicialmente y peridicamente dependiendo de la frecuencia y naturaleza de uso. Inicialmente y peridicamente dependiendo de la frecuencia y naturaleza de uso. a) Inicialmente y anualmente b) Diariamente/con cada uso c) Mensualmente Anualmente Con cada uso

Distribuidores de medios

Pipetas automticas

Verificar la precisin y exactitud del volumen distribuido

Sembradores en espiral

a) Verificar caractersticas tcnicas frente a mtodo convencional b) Verificar el estado del punzn y puntos de inicio y fin c) Verificar volumen distribuido Verificar frente al recuento manual Indicador anaerbico

Contadores automticos de colonias Jarra de anaerobiosis

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ANEXO B3 DIRECTRICES PARA EL MANTENIMIENTO DE EQUIPOS La informacin que se facilita es meramente orientativa. La frecuencia depender del uso, tipo y resultados previos del equipo.

Tipo de aparato Incubadoras, refrigeradores, congeladores y estufas Baos mara Centrfugas Autoclaves

Requisito Limpiar las superficies internas y desinfectar si es necesario Vaciar, limpiar, desinfectar y rellenar Limpiar y desinfectar Verificar visualmente la junta, limpiar/drenar la cmara Revisin/cambio de filtros Limpieza de objetivos a) Limpiar electrodos b) Revisar/rellenar electrolito a) Limpiar b) Revisar Limpiar y desincrustar Sustituir cartucho y membrana Limpiar/desinfectar Limpiar y desinfectar segn sea apropiado

Frecuencia sugerida Semestralmente

Cada mes o cada 6 meses si se utiliza un biocida Trimestralmente Mensualmente

Cabinas de seguridad y de flujo laminar Microscopios pH metros

Anualmente Anualmente a) Con cada uso b) Cuando sea necesario a) Con cada uso b) Anualmente Segn sea necesario Segn las recomendaciones del fabricante Despus de cada uso Con cada uso

Balanzas/Diluidores gravimtricos Destilador Desionizador, unidad de smosis inversa Jarra de anaerobiosis Distribuidores de medios, equipos volumtricos, pipetas, equipos de filtracin de membrana, etc. Sembradores en espiral

a) Revisar b) Descontaminar, limpiar y esterilizar

a) Anualmente b) Con cada uso