HIPTESIS Se sabe que la succinato deshidrogenasa (SDH) es una enzima inducible en Eschericia coli por su sustrato: el succinato; se reprime

al emplear glucosa como fuente de carbono [1]. As, al hacer el ensayo, se espera que en los cultivos celulares que crecieron en succinato como fuente de carbono la actividad de la SDH sea mayor a la que presenten los cultivo que emplearon la glucosa como fuente de carbono. OBJETIVO Con base en el crecimiento y la actividad enzimtica obtenidos bajo diferentes condiciones de cultivo, se analizarn los resultados obtenidos para concluir cul es el papel fisiolgico de la enzima succinato deshidrogenasa en Escherichia coli. DISEO EXPERIMENTAL Se prepararon cultivos celulares de Escherichia coli, crecidos con diferentes fuentes de carbono: Succinato y glucosa; posteriormente, en una segunda etapa, se inocularon matraces 2 por cada fuente de carbono, a uno se le cambi la fuente de carbono y el otro se creci con la misma fuente, esto para inducir o reprimir, segn la fuente de carbono la sntesis de la Succinato deshidrogenasa[1]. Antes de hacer las determinaciones, se ajustaron los cultivos a 0.8 de absorbencia a 600 nm, para tener la misma cantidad de clulas en todas las suspensiones. En una celda de espectrofotmetro se colocaron los reactivos: 2,6-diclorofenol indofenol, KCN, Regulador de fosfatos, succinato de sodio, metosulfato de fenazina y suspensin celular. Se agit por inversin e inmediatamente se comenz a leer el % de transmitancia a 600 nm en el espectro previamente ajustado con regulador de fosfatos. El succinato de sodio sirvi como sustrato de la enzima succinato deshidrogenasa, la cual cataliza la oxidacin de succinato a fumarato[2]. El 2,6-diclorofenol indofenol y el metosulfato de fenazina sirven para determinar la actividad de la enzima succinato deshidrogenasa por el mtodo de Ells[3], en el cual se forma una cadena de transporte de electrones artificial, donde los elctrones del FADH2 pasan al metosulfato de sodio y lo reducen, de ah son transferidos al 2,6-diclorofenol indofenol el cual al reducirse pierde su color azul, y es precisamente mediante el empleo de este compuesto como se cuantifica la actividad de la enzima. El cianuro de potasio sirvi como inhibidor de la cadena de respiratoria a nivel de la citocromo oxidasa, impidiendo que los electrones pasen al oxgeno[2], lo que promovera que estos sean aceptados por el 2,6-diclorofenol indofenol. BIBLIOGRAFA 1.Ruiz-Herrera, J. & Garca, L. G. (1972) Regulation of Succinate Dehydrogenase in Escherichia coli, Journal of general microbiology 72, 29-35. 2. Mathews-Van Holde-Ahern, BIOQUMICA; 3 ed., Pearson, Espaa, 2002, pp. 586,587,696,597. 3. Ells, H. Alan, Arch. Bioch. Biophys. 85 (1959).