Universidad Nacional Autnoma de Mxico Facultad de Estudios Superiores Zaragoza Laboratorio de Bioqumica Celular y de los Tejidos I Anlisis de lpidos

de la yema de huevo Equipo: 2 Integrantes: Fernndez Martnez Didier Gonzlez Pea Rosa Martnez Mendoza Anel Elizabeth Sarabia Lpez Eduardo de Jess Fecha de entrega: 01 de abril del 2014

Objetivos. Analizar las propiedades de los lpidos Extraer los lpidos de la yema de huevo Cuantificar fosfatos de lpidos fosforilados y no fosforilados Analizar la importancia biolgica de los lpidos presentes en la yema de huevo

Resultados.

Las muestras patrn de fosfatos, para la curva estndar.

Cromatografa revelada con Yodo, la cual revela lpidos con insaturaciones.

Cromatografa revelada con Molibdato el cual revela lpidos fosforilados, ya que forma un complejo este reactivo con el fosforo un lpido que se presenta aqu es la fosfatidilcolina.

Cromatografa revelada con ninhidrina, la cual revela lpidos que presenten algn grupo amino, primario o secundario.

Cromatografa revelada con un reactivo de Bismuto, el cual daba lpidos con colina.

Analisis de Resultados. Para el anlisis de lpidos de la yema de huevo se mezcl bien la yema con los disolventes pero sin exagerar ya que se formara una especie de mayonesa imposibilitando una eficaz filtracin. Al momento de lavar con cloruro de sodio el filtrado, se realiz con fuerza media. Sin embargo, se form una emulsin y para quitarla fue necesario darle unos pequeos golpecitos al embudo de separacin para una mejor disgregacin; este fue un factor que contribuyo afectando los resultados esperados. As mismo se us un agente desecante para retirar la mayor cantidad de agua de la muestra a analizar (fase orgnica/capa inferior). Una vez que se separaron los lpidos no fosforilados de la solucin cetnica y del precipitado los lpidos fosforilados se guardaron en tubos eppendorf llenando estos hasta el tope o en su defecto se le agrego un antioxidante (hidroxiquinona) y se guardaron en el refrigerador. Posteriormente estas muestras se evaporaron a sequedad en un bao mara (fue necesario el uso de la campana), sin embargo, durante la evaporacin de las muestras problema los lpidos no fosforilados se proyectaron mezclndose restos de ellos con los lpidos fosforilados; as que en este paso se perdi cantidad de muestra siendo dicho factor que afecto los resultados obtenidos (ver grfica y concentracin de la muestra problema). Por otro lado, la digestin se llev de forma correcta aunque fue necesario usar varias veces perxido de hidrogeno para que la mezcla se volviera incolora. En este proceso es importante voltear el matraz kjeldahl de vez en cuando y agregar el perxido de hidrogeno cuando no haya vapores dentro de l, la digestin terminara cuando ya no haya vapores en el tubo principal y cuando la mezcla este incolora. Despus de la digestin se realizaron las diluciones correspondientes y se midi su absorbancia en el espectrofotmetro as mismo se calcul el contenido de fosfato en las muestras problemas (ver grafica). En cuanto a la cromatografa en capa fina cada equipo realizo sus cromatoplacas utilizando slica gel como disolvente una solucin de hidrxido de sodio estas placas fueron activadas en la estufa durante una hora con un temperatura de 100 a 120C, para retirar la mayor parte del agua. As mismo cada equipo coloco sus muestras problemas: lpidos totales, lpidos no fosforilados y lpidos fosforilados utilizando como eluyente una mezcla de disolventes (cloroformo-metanol-cido actico-agua (65:25:8:4)) utilizando diferentes reveladores: ninhidrina (lpidos que contenan grupos amino primario y secundario), yodo (lpidos con insaturaciones), reactivo de bismuto (lpidos que contenan colina) y reactivo de molibdato de sodio (fosfolpidos en general). Es importante realizar bien la papilla y de esta forma obtener una consistencia ligeramente viscosa y esta no bebe tener grumos. La capa no debe ser muy gruesa ni muy delgada; la aplicacin de la muestra debe ser concentrada para que se pueda revelar con los diferentes reactivos; en cuanto a la cmara de elucin debe estar saturada con los vapores de los disolventes y sellada as mismo no debe moverse. Es muy importante marcar hasta donde corri el eluyente as como el contorno de las muestras despus de ser reveladas.

Conclusiones.

Referencias Chapman D. Lpidos. Editorial Alhambra, Espaa, 1973 Escalante R. y Aguilar L. Bioqumica Celular y de los Tejidos 1. UNAM, 2008 Escalante R. y Aguilar L. Antologa para los Laboratorios de Bioqumica Celular y de los Tejidos 1. UNAM, 2008