Anexo 7

ACTIVIDAD DE LABORATORIO

MITOSIS Y EXTRACCIÓN DE ADN EN CEBOLLA

La mitosis (M) es normalmente el período más corto del ciclo celular, con una
duración aproximada del 5 al 10% del mismo. El evento principal consiste en la
duplicación de los núcleos celulares con todos sus cromosomas y su ADN. La
célula que se divide se llama célula madre o parental y las resultantes células
hijas.

Cada célula hija no sólo contiene un núcleo con el número cromosómico completo,
sino que contiene también aproximadamente la mitad del citosol y organelos de la
célula progenitora. Por lo tanto la mitosis es el proceso de formación de células
nuevas y el núcleo es la principal estructura participante.
Durante la mitosis se pueden observar cambios progresivos en la estructura y
apariencia de los cromosomas; los biólogos han dividido convencionalmente este
proceso para su estudio en cuatro fases: profase, metafase, anafase y telofase.

Profase: Es el primer estado de la mitosis. Los cromosomas sufren un proceso de

condensación hasta formar una serie de espirales; al adquirir esta estructura
pueden desplazarse con más facilidad. Cuando los cromosomas se hacen visibles,
cada uno aparece como un doble filamento compuesto por dos mitades
longitudinales, las cromátidas hermanas. Cada cromátida contiene una de las
moléculas replicadas de DNA, ambas son idénticas desde el punto de vista
químico y se encuentran unidas en la región del centrómero. En la profase el
centrómero se divide en un par de centrómeros hermanos, desaparecen los
nucleolos (estructuras esféricas intranucleares que contienen componentes
ribosómicos) y la membrana nuclear. El citoplasma y el nucleoplasma se hacen un
sólo.
Metafase: Se hace visible el huso acromático cuyas fibras apuntan hacia cada uno
de los polos celulares. Los cromosomas se acomodan en el planto ecuatorial de la
célula y cada centrómero hermano se une a las fibras del uso provenientes de
polos opuestos.

Anafase: Es la fase mitótica más corta, ocurre cuando se separan los pares de
cromátidas hermanas y cada miembro de este par, se mueven hacia los polos
opuestos del huso. Cuando las cromátidas de mueven, parecen seguir a su
respectivo centrómero por lo que los cromosomas adquieren la forma de una V
con las puntas dirigidas hacia
los polos.

Telofase: En esta fase se

forma una nueva membrana
nuclear alrededor de cada
núcleo hijo, los cromosomas
se desenrollan y reaparecen
los nucleolos; es decir, se
regeneran los núcleos
interfásicos. Al final el huso
se ha dispersado y el
citoplasma se ha dividido en
dos por la formación de una
nueva membrana celular.

OBJETIVO

 Identificar las formas de organización del material genético en células

(eucariotas) interfásicas y en división.
MATERIAL
 Bulbos de cebolla
 Portaobjetos
 Cubreobjetos
 Vidrio de reloj
 Navaja de rasurar nueva
 Pincel delgado
 Servilletas desechables
 Lienzo de franela
 Lápiz con goma
 Barniz transparente para uñas
 Microscopio campo claro
 Ácido clorhídrico 5N
 Ácido acético al 45%
 Acetorceína

PROCEDIMIENTO
1. Con una navaja se corta a la cebolla las raíces muertas.
2. Se coloca la cebolla en un recipiente sumergiendo en agua la parte
de la raíz rasurada. Se coloca en un sitio oscuro.
3. Se cambia el agua cada 24 horas para evitar la formación de hongos
y se limpia el bulbo con frecuencia para evitar que se pudra.
4. Una vez que las raíces alcancen una longitud de 3 cm, se selecciona
aquellas que se observen traslúcidas y al tacto sean las más suaves.
Se hace un corte a 1 cm de la punta.
5. Con la navaja de rasurar nueva y sobre un portaobjetos, se efectúa
un corte longitudinal al fragmento de raíz, después se hacen cortes
transversales de aproximadamente 2 mm de longitud.
6. Con el pincel se colocan los cortes en un portaobjetos excavado y
rápidamente se agregan unas gotas de HCI 5N hasta cubrirlos.
7. Después de 3 min. Se absorbe el ácido con una servilleta evitando
tocar los cortes.
8. Se cubren los cortes con unas gotas de acetorceína durante 12
minutos.
9. Con el pincel delgado se pasan dos cortes a un portaobjetos plano
procurando que queden centrados, (procurando no secar el
colorante). Se pueden hacer varias preparaciones con una sola raíz.
10. Se agregan dos o tres gotas de ácido acético al 45% para quitar el
exceso de colorante.
11. Se coloca el cubreobjetos de canto y se deja caer suavemente sobre
los tejidos para evitar la formación de burbujas.
12. Se presiona con la goma de un lápiz firmemente sobre el
cubreobjetos hasta extender el tejido (squash), con cuidado para que
no se deslice. Este paso se puede realizar sobre una servilleta en
una superficie plana para presionar sin dificultad y evitar romper la
preparación.
13. Se absorben con una servilleta los obrantes de la tinción cuidando de
no secar en exceso para no deshidratar los tejidos.
14. Se hace la observación en el microscopio a 10X y si las células se
observan claramente aún sin identificar las fases, se pasa al
siguiente aumento.
15. Se sellan los borden del cubreobjetos con esmalte de uñas
transparente y así obtenemos una preparación temporal.
16. Se realiza la observación a través del microscopio con diferentes
aumentos, se enfoca el área en que a simple vista se ven los tejidos
teñidos.
Actividades
 Con apoyo de las descripciones e imágenes que se incluyen en esta
práctica, identifica las fases de la mitosis.
 Dibuja tus observaciones y escribe el nombre de las etapas de la mitosis y
del ciclo celular según va el ciclo.
 Indica en tus dibujos las estructuras cromosómicas que logres identifica.
 Describe tus observaciones con relación a la organización del material
genético en la interfase y en cada fase de la mitosis.