INTRODUCCIN La toxicologa reguladora ha puesto cada vez mayor nfasis en la evaluacin de los riesgos que presentan las sustancias

qumicas sobre la salud pblica y ambiental, para lo cual realiza ensayos con animales. Debido a la presin pblica y a la de los mismos cientficos, existe una tendencia creciente a aplicar el principio de tres R (reduccin, remplazo, refinacin) en la investigacin con animales con el fin de minimizar el sufrimiento y la angustia de los animales en la medida de lo posible, hecho que se manifiesta en las propias legislaciones de los pases. Todo ello ha llevado a la investigacin de mtodos alternativos desarrollados con el fin de reemplazar a los animales de laboratorio, reducir su nmero o refinar las tcnicas utilizadas en los ensayos toxicolgicos obligatorios antes de la puesta en el mercado de nuevos productos. CONSIDERACIONES INICIALES Antes de de comenzar un estudio se tiene que considerar toda la informacin sobre la sustancia en estudio (identidad, estructura qumica, propiedades fsico-quimicas, toxicidad, etc.). Esta informacin ayudar en la seleccin de una dosis inicial adecuada.

PRINCIPIO DE LA PRUEBA Slo se utilizan dosis moderadamente txicas, y la dosis letal debe ser evitada. Adems, se deben evitar dosis que se espera causen dolor y sufrimiento, debido a la corrosin o severas acciones irritantes. Los animales moribundos o animales que manifiesten dolor o muestren signos de sufrimiento intenso y continuo sern sacrificados de forma compasiva. La dosis inicial es seleccionada sobre la base de un estudio preliminar a la concentracin esperada para producir signos claros de toxicidad sin causar efectos txicos graves o la mortalidad. Los procedimientos continan hasta que la dosis que causa toxicidad manifiesta o no ms de una muerte se identifica, o cuando no hay efectos se ven en la dosis ms alta o cuando se producen muertes a la dosis ms baja.

DESCRIPCIN DEL MTODO Seleccin de animales La rata adulta o conejo puede ser utilizado como conejillo de indias. Hay poca diferencia de sensibilidad entre los sexos, pero en aquellos casos en que se observan diferencias, las hembras son generalmente un poco ms sensibles. Sin embargo, si el conocimiento de las propiedades toxicolgicas o toxicocinticos de sustancias qumicas estructuralmente relacionadas indica que los machos tienden a ser ms sensibles a continuacin, este sexo debe ser utilizado. Se deben emplear cepas de animales adultos o jvenes sanos. Las hembras deben ser nulparas y no embarazadas. El animal, al comenzar el ensayo, debe estar entre 8 y 12 semanas de edad y su peso debe caer dentro de un intervalo de 20 % del peso corporal medio registrado en el laboratorio para la cepa particular utilizada.

Condiciones de alojamiento La temperatura de alojamiento de los animales debe ser de 22 3 C. Aunque la humedad relativa debe ser de al menos 30 % y preferiblemente no superior al 70%. La iluminacin debe ser artificial, la secuencia de 12 horas de luz y 12 horas de oscuridad. Para la alimentacin, dietas convencionales de laboratorio pueden usarse con un suministro ilimitado de agua potable. Los animales pueden alojarse en jaulas agrupados por dosis, pero el nmero de animales de cada jaula no debe interferir en las observaciones claras de cada animal.

Preparacin de los animales Los animales se aclimatan a las condiciones de laboratorio durante al menos cinco das antes del inicio del estudio. Los animales se seleccionaron al azar para su uso en el estudio y se marcan para proporcionar la identificacin individual. Aproximadamente 24 horas antes del estudio, piel debe ser removida de la regin dorsal del tronco de los animales del ensayo se esquila o afeita. Se debe tener cuidado en no daar la piel, ya que se puede modificar su permeabilidad. Al menos 10% del rea de superficie corporal debe ser clara para la aplicacin de la sustancia de ensayo. El peso del animal se debe tener en cuenta a la hora de decidir sobre la zona a despejar y las dimensiones de la cubierta.

Dosis de administracin La sustancia debe aplicarse uniformemente sobre una superficie equivalente al 10% de la superficie corporal total. Para sustancias altamente txicas la superficie cubierta puede ser menor, pero procurando que el rea debe ser cubierta con las pelculas lo ms fina y uniforme posible. El sitio de prueba debe cubrir ms de una manera adecuada para mantener el apsito de gasa y la sustancia e impedir que los animales puedan ingerir la sustancia de ensayo.

PROCEDIMIENTO Estudio preliminar El propsito del estudio preliminar es para permitir la seleccin de la dosis inicial adecuada para el estudio principal. La dosis de partida se selecciona a partir de los niveles de dosis fijas de 50, 200, 1000 y 2000 mg / kg como dosis esperada para producir toxicidad evidente basa, Se permitir un perodo de por lo menos 24 horas entre el anlisis de cada animal. Todos los animales deben someterse a observacin durante al menos 14 das. En los casos en que un animal controlada en el nivel ms bajo de dosis fija (50 mg / kg) en el estudio preliminar muere o muestra claros signos clnicos de toxicidad, el procedimiento normal exterminar el estudio. Slo cuando est justificado legalmente se usara un nivel de dosis fija superior adicional de 5,000 mg / kg puede ser considerado

Estudio principal El nmero de animales y los niveles de dosis Un total de cinco animales de un mismo sexo se utilizar normalmente para cada nivel de dosis investigado. El intervalo de tiempo entre la dosificacin en cada nivel se determina por el comienzo, la duracin, y gravedad de los signos txicos.

Prueba lmite Se utiliza principalmente en situaciones en las que el experimentador tiene informacin lo que indica que el material de ensayo es probable que sea no txico. Usando el procedimiento normal, una dosis inicial en el estudio preliminar de 2000 mg / kg (o excepcionalmente 5,000 mg / kg) seguido de la dosificacin de otros cuatro animales en este nivel sirve como un ensayo lmite para esta gua.

Observaciones Los animales se observaron inmediatamente despus de la dosificacin peridicamente durante las primeras 24 horas y un total de 14 das, excepto en que se encuentren muertos. Observaciones adicionales sern necesarios si los animales siguen presentando signos de toxicidad.

El peso corporal El peso de cada animal debe determinarse en el momento antes de la administracin de la sustancia estudiada y al menos cada semana a partir de entonces y al final de la prueba,

Patologa Todos los animales de prueba debe ser sometido a necropsia macroscpica.

DATOS Y PRESENTACIN DE INFORMES Datos Los datos relativos a cada animal se proporcionarn Informe de prueba El informe del ensayo debe incluir la siguiente informacin: Sustancia de ensayo Vehculo Animales de ensayo Condiciones de prueba Resultados Discusin e interpretacin de los resultados Conclusiones

ANEXOS:

ANEXO 2. La sustancia de ensayo se administra a cada animal de manera secuencial siguiendo los diagramas de flujo

ANEXO3: La clasificacin ser a los 50 mg / kg dosis fijas: Categora 1 si hay 2 o ms muertes ( resultado A) a 50 mg / kg , o de la categora 2, si hay 1 muerte (resultado B) en 50 mg / kg .

BIBLIOGRAFIA OECD (2004). OECD Guideline for Testing of Chemicals: Acute Dermal Toxicity 434. Available: [http://www.oecd.org/chemicalsafety/testing/32037747.pdf]