CULTURA DE MERISTEMAS OU DE PICES CAULINARES

CULTURA DE MERISTEMA: Tcnica usada para liberar plantas de infeces virais. Explantes so retirados de gemas apicais ou laterais. Compreende o pice caulinar (0,2 a 1,0 mm de comp.), consistindo de meristema apical e 1 ou 2 primrdios foliares. CULTURA DE PICES CAULINARES: Cultura de pices caulinares ou gemas laterais maiores (5 a 10mm de comp.) com + de 3 primrdios foliares Mtodo eficiente de propagao de plantas.

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APLICAES

Eliminao de vrus

Vrus se movem rapidamente atravs do sist. vascular da planta, no qual nos meristemas est ausente;

A alta atividade metablica nas clulas dos meristemas que se dividem ativamente no permite a multiplicao do vrus;

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APLICAES

Eliminao de vrus

Altos nveis endgenos de auxinas nas gemas apicais poderiam inibir a multiplicao do vrus.

Clulas isolados.

meristemticas

podem

ter

sistemas

qumicos

de

inativao, que podem ser potencializados em meristemas

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Exemplos de plantas nas quais vrus tem sido eliminados: crisntemo, dlia, cana-de-acar, soja, alho, banana, Cymbidium, morango, macieira, batata, aspargo, couve-flor. RPIDA MULTIPLICAO CLONAL CONSERVAO DO GERMOPLASMA

VANTAGEM: Manuteno da identidade do gentipo regenerado clulas do meristema tem grande estabilidade gentica.

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MTODOS DE ELIMINAO DE VRUS: TRATAMENTO DE CALOR

(TERMOTERAPIA) E CULTURA DE MERISTEMAS

Tratamento de calor: gua quente (gemas dormentes)

ar quente - Termoterapia (brotaes crescendo ativamente) 35 -40 C 6 a 12 sem. Principal limitao da termoterapia: nem todos os vrus so sensveis a esse tratamento e baixa % de sobrevivncia das plantas.

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CULTURA DE MERISTEMAS
TAMANHO DO EXPLANTE (Quanto < o tamanho > chance de erradicao do vrus < chance de sobrevivncia)

ISOLAMENTO DOS MERISTEMAS - Fonte de explantes: gemas apicais, axilares, brotaes de estacas ou de sementes germinadas. - Desinfestao: Sem desinfestao ou tratamento fraco - Isolamento: com auxlio de microscpio estereoscpico, pinas e

bisturis, o meristema retirado e inoculado no meio de cultura.

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FATORES QUE AFETAM Condies fisiolgicas da planta matriz Estado fitossanitrio, fisiolgico e nutricional da planta doadora Mantida em casa de vegetao, em fase de crescimento ativo

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FATORES QUE AFETAM

Condies fisiolgicas do explante

Brotaes em crescimento vegetativo ativo

(posio do explante na planta doadora, tamanho do explante, estao do ano)

Meristemas retirados de gemas terminais respondem melhor do

que os retirados de gemas axilares ( no ocorre com o morango) Explante: meristema apical, com 1 ou 2 primrdios foliares tamanho: 0,1 a 0,3 mm

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Meio de cultura: MS*

Algumas sps txico meios de cultura com baixa

formulao salina

Reguladores vegetais: baixa conc. (0,1 -0,5 mg L-1) de

auxina, ou citocinina ou ambos benfico.

Para algumas sps GA3 (0,1 mg L-1) combinado com BAP e ANA
essencial para regenerao de plantas a partir de meristemas.

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Consistncia do meio de cultura: semi-slido ou liquido. Induo de brotaes mltiplas: elevadas conc. de citocininas, combinadas ou no com auxinas. Enraizamento: auxinas

Condies de cultivo: luz ou escuro (reduzir o efeito de polifenis), temperatura (25-28 C) e fotoperiodo de 12-16 h.

Transplantio e aclimatizao de mudas

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MICROENXERTIA OU ENXERTIA IN VITRO

Consiste em enxertar, em condies asspticas, um meristema apical ou pice caulinar sobre um porta-enxerto estabelecido in

vitro.

Quando os microenxertos so bem sucedidos, o porta-enxerto e enxerto crescem juntos para formar uma planta. TERMO MICROENXERTIA: enxerto o meristema apical No tem aplicao direta na micropropagao

Tcnica que consome muito tempo e a taxa de sucesso geralmente muito baixa.

MICROENXERTIA OU ENXERTIA IN VITRO

Vantagens: Contornar problemas da enxertia ex vitro:

Deteco precoce da incompatibilidade
Limpeza clonal

Rejuvenescimento de clones

Diferenas da enxertia ex vitro: cond. asspticas e dimenses do enxerto e porta-enxerto

MICROENXERTIA OU ENXERTIA IN VITRO

TCNICA DE ENXERTIA IN VITRO ETAPAS: Obteno do porta-enxerto, Obteno e preparo do enxerto, Execuo da enxertia Aclimatizao da planta enxertada na condio ex vitro

MICROENXERTIA OU ENXERTIA IN VITRO

TCNICA DE ENXERTIA IN VITRO ETAPAS: Obteno do porta-enxerto: A partir de sementes germinadas in vitro * (custo reduzido, variabilidade gentica diferenas de resposta quanto ao crescimento e desenvolvimento do enxerto) Algumas sps precisam de tratamentos especiais para superao da dormncia das sementes: - estratificao 3 a 4 C -30 a 120 dias para ameixa, damasco, pssego - tratamento com BAP (200 mg L-1) ou GA3 (100 mg L-1) ou ambos por 24 h Ou a partir de gemas alongadas da micropropagao (espcies com dificuldade na produo de sementes viveis) .

MICROENXERTIA OU ENXERTIA IN VITRO

TCNICA DE ENXERTIA IN VITRO ETAPAS:

Execuo da enxertia in vitro:

Condies asspticas (cmara de fluxo laminar), com auxlio de pinas e bisturis prepara o porta-enxerto (elimina os cotildones e raiz e faz um corte em T invertido, sem atingir o crtex) e depois o enxerto (meristema com 2 primrdios)

MICROENXERTIA OU ENXERTIA IN VITRO

TCNICA DE ENXERTIA IN VITRO ETAPAS: Obteno do meristemas microenxerto: pices meristemticos ou

Coleta: Podem ser retirados de gemas apicais ou axilares de brot. crescendo ativamente em casa de vegetao ou no campo ou podem ser removidos de brotaes crescendo in vitro

Ex: videira meristemas (0,1-0,2 mm) pssego pice caulinar (0,5-1 mm)

Desinfestao Oxidao pode ser reduzida por imerso em sol. anti-oxidante ou colocar 1 gota de soluo no porta-enxerto na hora de inserir o enxerto (Sol. de 2 g L-1 de DIECA)

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TCNICA DE ENXERTIA IN VITRO ETAPAS: pices podem ser enxertados diretamente ou cultivados por

um curto perodo, com citocinina antes de serem transferidos.

Unio das partes, com auxlio de microscpio estereoscpico

Planta enxertada meio de cultura sala de crescimento

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TCNICA DE ENXERTIA IN VITRO ETAPAS: Transplantio da plntula microenxertada 45 dias de incubao, quando o microenxerto j emitiu 2 a 3 folhas transplantio para substrato esterilizado.

Desidratao a principal causa do fracasso dos enxertos Micropropagao da planta obtida a partir do pice

microenxertado por meio da cultura de gemas aumenta a % de plantas livres de vrus.

MICROENXERTIA OU ENXERTIA IN VITRO

FATORES QUE AFETAM:

Espcie de planta (efeito do gentipo) e o tipo de enxertia; Ex: algumas sps florestais so recalcitrantes micropropagao

Afinidade e analogia entre as plantas; (idade do porta-enxerto tem que ser definida de acordo com o tamanho do enxerto) Contaminaes endgenas; Presena de compostos fenlicos e Habilidade manual do enxertador ( material vegetativo tenro, exige destreza e rapidez na execuo da enxertia)

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APLICAES NA REA FLORESTAL E FRUTFERAS

ESTRATGIAS DE MELHORAMENTO GENTICO DE DIFERENTES ESPCIES
AUMENTO DA PRODUTIVIDADE EM PLANTIOS COMERCIAIS LIMPEZA CLONAL TCNICA DE REJUVENESCIMENTO: SERIADA

Exemplos: Acacia mangium,Quercus rubra, Sequoia sempervirens,

Larix decidua, Anacardium occcidentalle, Garcinia indica.

Frutferas: macieira, damasqueiro, videira, laranja, tangerina, limo, pssego, abacate.

MICROENXERTIA DE Citrus

MTODOS ALTERNATIVOS DE MICROENXERTIA