Medicina, Ribeiro Preto, 31: 434-449, jul./set.

1998

REVISO

PEROXIDAO LIPDICA E ETANOL: PAPEL DA GLUTATIONA REDUZIDA E DA VITAMINA E

LIPID PEROXIDATION AND ETHANOL: ROLE OF VITAMIN-E AND GLUTATHIONE

Alceu Afonso Jordo Jnior1; Paula Garcia Chiarello1; Mnica S. Meirelles Bernardes2 & Helio Vannucchi3

Doutorandos em Cincia dos Alimentos, rea de Nutrio Experimental da Faculdade de Cincias Farmacuticas da Universidade de So Paulo; 2Especialista em Laboratrio; 3Docente Diviso de Nutrio Clnica do Departamento de Clnica Mdica da Faculdade de Medicina de Ribeiro Preto da Universidade de So Paulo. CORRESPONDNCIA: Prof.Dr. Helio Vannucchi Diviso de Nutrio Clnica do Departamento de Clnica Mdica da Faculdade de Medicina de Ribeiro Preto da Universidade de So Paulo Av. Bandeirantes 3900; CEP: 14049-900 - Ribeiro Preto - SP. Email: hvannucc@fmrp.usp.br

JORDO Jr AA et al. Peroxidao lipdica e etanol: papel da glutationa reduzida e da vitamna E. Medicina, Ribeiro Preto, 31: 434-449, jul./set. 1998. RESUMO: A gerao de radicais livres um passo importante na patognese da injria heptica, associada ingesto de etanol. A ingesto do etanol induz a um aumento na peroxidao lipdica por dois mecanismos, por uma maior produo de espcies reativas de oxignio e/ou pela diminuio dos nveis dos antioxidantes endgenos. Esta reviso enfoca a gerao de radicais livres, especialmente a nvel microssomal, e o papel de dois antioxidantes nutricionais, a vitamina E e a glutationa. UNITERMOS:

Peroxidao de Lipdios. lcool Etlico. Glutationa. Vitamina E. Radicais Livres.

1. INTRODUO

grande o nmero de doenas em que se sugere o envolvimento dos radicais livres ou das espcies reativas de oxignio. Questiona-se, na maioria dos casos, se estas espcies representam a causa ou meramente a conseqncia destas doenas(1). Radicais livres e espcies reativas de oxignio podem contribuir para o aparecimento de doenas ou estarem presentes em situaes de toxicidade, como, por exemplo, diante do consumo de etanol. Na Tabela I, esto exemplificadas algumas situaes onde acredita-se existir o envolvimento dos radicais livres. Desde que o impacto biolgico adverso dos radicais livres esteja estabelecido, existe, por conseqncia, a necessidade de bloquear ou atenuar os seus efeitos deletrios(2) . 434

Tabela I - Algumas condies nutricionais associadas com dano oxidativo Cncer Pancreatite Artrite Doenas Inflamatrias Aterosclerose Diabetes Doena Renal Envelhecimento Alcoolismo Dermatite Consumo elevado de cidos graxos Hipertenso Sobrecarga de Ferro Deficincia de Selnio Isquemia e Reperfuso Deficincia de Vitamina E

Etanol e radicais livres

Neste sentido, essencial o conhecimento dos processos nos quais os radicais livres esto envolvidos, quais so as espcies qumicas geradas e sua atuao no processo fisiopatolgico. Partindo deste ponto, devemos conhecer os compostos que podem atuar como antioxidantes, qual a sua localizao nos sistemas biolgicos, como atuam interferindo nos efeitos deletrios dos radicais livres. Por fim, devemos saber em que concentraes estes antioxidantes atuam e como podemos obt-los. Ampliando nosso conhecimento em relao s questes que envolvem os radicais livres e os antioxidantes, melhores sero as condies de estabelecermos estratgias de interveno, atenuando os efeitos do estresse oxidativo, nos sistemas biolgicos. Os sistemas biolgicos oferecem condies favorveis para ocorrncia de reaes de carter oxidativo, devido existncia de lipdios insaturados, nas membranas celulares, e pela abundncia de reaes oxidativas que ocorrem durante o metabolismo normal. A susceptibilidade de uma clula ou de um tecido ao estresse oxidativo depende de um grande nmero de fatores que incluem a disponibilidade de antioxidantes e a capacidade de inativao ou eliminao dos produtos oxidados formados. O estresse oxidativo tem sido definido como um distrbio no estado de equilbrio, no sistema de pr-oxidantes e antioxidantes, nas clulas intactas. Esta definio implica no fato de que a clula deve ter um sistema onde exista um equilbrio entre a produo e a eliminao de espcies reativas de oxignio durante o metabolismo aerbico, normal. Quando existe maior ocorrncia de eventos oxidativos, o sistema pende para o lado pr-oxidativo, o que pode afetar os nveis de antioxidantes como a glutationa e a vitamina E, tendo, como resultado final, o dano oxidativo em lipdios, protenas, carboidratos e cidos nuclicos. A severidade deste processo pode levar morte celular. A eficcia do sistema antioxidante depende muito de qual o tipo de molcula a geradora do estresse oxidativo e da localizao intra ou extracelular dessa molcula. Como exemplo, temos que o dano membrana celular pode ser mais eficazmente prevenido pela vitamina E, que reage com radicais peroxila e hidroxila, do que pelos carotenides, que atuam reagindo com o oxignio singleto. H mais de (trinta) 30 anos, Di Luzio et al. propuseram que o estresse oxidativo era um dos componentes envolvidos na patognese da doena heptica alcolica(3,4). Clulas parenquimais e no parenquimais tm sido identificadas como fontes geradoras de radicais livres, devido ao do etanol. Espcies reativas

de oxignio como o O2, H2O2 e OH so produzidas por estas clulas hepticas, como uma conseqncia da oxidao do etanol. O citocromo P4502E1, a NADPH oxidase e a NADPH citocromo P450 redutase parecem estar particularmente envolvidos como fonte de radicais livres, devido inducibilidade destas enzimas, depois do consumo do etanol.
2. RADICAIS LIVRES

O que um radical livre? Os tomos contm um ncleo e os seus eltrons se distribuem ao redor do ncleo, usualmemente em pares. O radical livre um tomo ou molcula que contm um ou mais eltrons no pareados. A presena deste eltron no pareado altera a reatividade qumica dos tomos ou molculas, tornando-os mais reativos que as espcies no radicalares (com os eltrons pareados). O radical hidrognio (H), que contm um (1) protn e um (1) eltron o mais simples de todos os radicais. As reaes em cadeia dos radicais livres so, ento, iniciadas pela remoo (abstrao) do (H) de outras molculas, como, por exemplo, durante a peroxidao lipdica(5,6). Um radical livre capaz de existir independentemente. Apresentam, em geral, uma grande instabilidade, tm uma vida muito curta e reagem rapidamente com diversos compostos e podem atacar alvos celulares(5). Os tipos de reao dos radicais livres podem levar formao de complexos com protenas, glicoprotenas, purinas e pirimidinas, formao de produtos de oxidao de tiis, perxidos lipdicos, polmeros, epxidos, endoperxidos e produtos de cisso, como alquenais e hidroalquenais, que so citotxicos. A oxidao de tiis, a ligao covalente de alquenais com protenas e a modificao das glicoprotenas podem afetar a atividade enzimtica(7). Os processos de transcrio e de traduo podem ser impedidos ou modificados, em funo de leses no DNA, induzidas pelos radicais livres(2). O termo espcies reativas de oxignio um coletivo que inclui no somente radicais de oxignio como o radical superxido (O2) ou hidroxila (OH), mas, tambm, alguns derivados no radicalares, como o perxido de hidrognio (H2O2) e o cido hipocloroso (HOCL)(8), conforme demonstrado na Tabela II. A natureza autocataltica das reaes com radicais livres o fator mais importante na deteriorao oxidativa de substratos orgnicos. Durante o estgio de propagao, um nico radical pode produzir radicais ad infinitum, com somente a concentrao de oxignio e o reactante ditando o limite da reao. 435

AA Jordo Jr et al.

Tabela II - Algumas espcies reativas de oxignio, juntamente com sua meia-vida, em segundos Espcie Reativa de Oxignio HO HOO RO ROO ONOO H2O2 O2
1

3. ANTIOXIDANTES

Meia-vida (segundos) 10 10 10
-9 -8 -6

Radical Hidroxila Radical Hidroperoxila Radical Alcoxila Radical Peroxila Peroxinitrito Perxido de Hidrognio Radical Superxido Oxignio Singleto Radical Oxido Ntrico cido Hipocloroso

7 0,05 - 1 varivel varivel 10

-5

O2

NO HOCL

1 - 10 Estvel

Obs: R um lipdio, por exemplo o linoleato

O oxignio atmosfrico, embora sendo um radical, no reativo com molculas biolgicas, pois seus dois orbitais eletrnicos tm o mesmo estado em relao ao spin. Entretanto, o oxignio molecular pode ser reduzido a gua. Os passos intermedirios dessa reduo so a formao do nion superxido, perxido de hidrognio e do radical hidroxila, que so correspondentes aos passos de uma reduo por um, dois ou trs eltrons, respectivamente. Destas espcies formadas, o radical hidroxila o que tem vida mais curta, reagindo praticamente no seu stio de gerao(9). O2 + e O2 Oxignio molecular mais eltron resulta em radical superxido SOD O2 + O2 + 2H+ H2O2 + O2

Dismutao pelo superxido dismutase, formando perxido de hidrognio H2O2 + O2 + Fe++ OH + OH + O2 + Fe+++ Presena de ferro, formando o radical hidroxila (reao de Fenton). O radical hidroxila pode iniciar a peroxidao lipdica, abstraindo um hidrognio da cadeia de cidos graxos, poliinsaturados(10). 436

Por definio, uma substncia antioxidante aquela capaz de inibir a oxidao ou, ento, qualquer substncia que, mesmo presente em baixa concentrao, comparada ao seu substrato oxidvel, diminui ou inibe a oxidao daquele substrato. Do ponto de vista biolgico, podemos definir antioxidantes como aqueles compostos que protegem os sistemas biolgicos contra os efeitos deletrios dos processos ou das reaes que levam oxidao de macromolculas ou estruturas celulares. Isto implica que os diferentes antioxidantes podem atuar em nveis e com modo de ao distintos. Os antioxidantes podem, teoricamente, prolongar a fase de iniciao ou ento inibir a fase de propagao, mas no podem previnir completamente a oxidao. Os antioxidantes podem ser classificados, didaticamente, em duas categorias, o sistema primrio, que so os inibidores preventivos, que retardam a fase de iniciao, impedindo a gerao de espcies reativas ou seqestram estas espcies, impedindo sua interao com os alvos celulares, e o secundrio. O sistema secundrio consiste nos bloqueadores da etapa de propagao da cadeia radicalar (chain breaking), que, efetivamente, removem radicais intermedirios, como o radical peroxila ou alcoxila. Os inibidores preventivos podem induzir a decomposio de hidroperxidos para produtos inativos, exemplos so os tiis, sulfetos, catalases, peroxidases e as glutationas peroxidase e transferase. A superxido dismutase (SOD) atua como um inibidor preventivo, reduzindo o nion superxido ao perxido de hidrognio. Os supressores do oxignio singleto, como o -caroteno e a vitamina E, assim como os agentes quelantes, como peptdeos, cidos orgnicos e certos fosfatos orgnicos ou inorgnicos, podem tambm ser considerados como antioxidantes preventivos(2). Na Tabela III, so exemplificados alguns compostos antioxidantes. Os antioxidantes que bloqueiam a propagao da cadeia radicalar (chain breaking) interrompem a seqncia de auto-oxidao em cadeia, reagindo com os radicais livres, para produzirem produtos estveis. Um inibidor da propagao em cadeia rapidamente modificado a um produto inativo ou a um produto primrio com uma atividade antioxidante residual. Podemos, ainda, considerar um terceiro sistema de defesa antioxidante que seriam os sistemas de reparo do DNA, as proteases e as fosfolipases, que removem as leses oxidativas do DNA, protenas e lipdios, respectivamente(1).

Etanol e radicais livres

Tabela III - Componentes do sistema de proteo antioxidante Antioxidantes no enzimticos Glutationa Ubiquinona (Coenzima Q) cido rico Bilirrubina NADPH e NADH Flavonides Vitamina C Vitamina E Betacaroteno Licopeno Protenas ligadoras de metais Ceruloplasmina (cobre) Metalotionena (cobre) Albumina (cobre) Transferrina (ferro) Mioglobina (ferro) Antioxidantes enzimticos Superxido Dismutase (SOD) Catalase Glutationa Peroxidase (GPx)

Quanto ao consumo de antioxidantes no plasma, a ordem terica de preferncia no consumo de antioxidantes, no processo de peroxidao lipdica, a seguinte: vitamina C = tiis (GSH) > bilirrubina > cido rico > vitamina E(11). Desta maneira, nesta reviso, estamos avaliando dois antioxidantes que so consumidos em momentos diferentes, inicialmente a glutationa, que mais hidroflica e, finalmente, a vitamina E, substncia hidrofbica.
4. ANTIOXIDANTE NUTRICIONAL: VITAMINA E

A vitamina E foi descoberta em 1923, por Evans e Bishop, em estudos de fertilidade em ratos. Devido ao seu papel na fertilidade, a substncia foi chamada de tocoferol, que, literalmente, significa a substncia requerida para assegurar nascimentos normais. Uma

unidade internacional de vitamina E o equivalente atividade biolgica de 1 mg do acetato de dl--tocoferol. A deficincia de vitamina E, em animais, provoca problemas no sistema reprodutivo, como abortos, nas fmeas, e degenerao testicular, nos machos; provoca, tambm, distrofia muscular, cardiomiopatia, hemlise eritrocitria, necrose heptica e encefalomalcia entre outros efeitos indesejveis. J em 1947, alguns pesquisadores recomendavam o uso de vitamina E em doses que iam de dez (10) a cinqenta (50) vezes a recomendao normal para humanos, principalmente no sentido de tratamento de vrias doenas cardiovasculares(12). A vitamina E diettica absorvida sob a forma no esterificada no intestino delgado, incorporada a quilomcrons e secretada na circulao linftica intestinal. A enzima lipase, lipoprotica hidrolisa os triacilgliceris nos quilomcrons e promove a formao de remanescentes de quilomcrons, que so captados pelo fgado via receptor especfico para a apolipoprotena-E, localizado nas clulas parenquimais. A vitamina E secretada pelas clulas parenquimais hepticas, em associao com as lipoprotenas de muito baixa densidade (VLDL). Alguma vitamina E, associada a quilomcrons e VLDL, , provavelmente, transferida s celulas perifricas e s lipoprotenas de alta densidade (HDL) durante o processo de liplise. No metabolismo da VLDL, uma parte da vitamina se associa LDL e segue os mecanismos de captao de LDL, tanto nas clulas parenquimais hepticas quanto nas clulas perifricas(13,14). Os tocoferis so antioxidantes fenlicos, num grupo composto de quatro diferentes ismeros, que se diferenciam pelo nmero e posio do grupo metila, ligado ao anel fenlico(15). Os ismeros do tocoferol tambm contm uma cadeia lateral ftica, que pode ser saturada, no caso do tocoferis, ou insaturada, no caso dos tocotrienis, perfazendo, ento, oito homlogos naturais da vitamina E, que diferem em sua estrutura e atividade biolgica. Dentre todos os tocoferis conhecidos, o -tocoferol tem sido considerado o biologicamente mais ativo, inclusive no que diz respeito a sua atividade como antioxidante, sendo o principal antioxidante lipossolvel, nas membranas celulares(16). O fato de ser lipossolvel confere ao -tocoferol propriedade de se acumular no interior das membranas e de ser transportado pelas lipoprotenas, especialmente pela lipoprotena de baixa densidade (LDL). O -tocoferol da dieta armazenado em vrios tecidos, especialmente no fgado, tecido adiposo e 437

AA Jordo Jr et al.

msculo. A excreo do -tocoferol metabolizado pouco conhecida, podendo ocorrer pelas fezes, pela via biliar ou pela pele(15). Em condies patolgicas de estresse oxidativo muito intenso, como, por exemplo, em pacientes com AIDS, o -tocoferol pode ser excretado de modo significativo pela via urinria(17). A funo oxidante da vitamina , essencialmente, a captura de radicais peroxila e alcoxila, levando ao trmino da reao em cadeia da lipoperoxidao por formar um aduto no radicalar. Nesse processo, o -tocoferol atua, doando um tomo de hidrognio para estes radicais, derivados da oxidao de cidos graxos. O radical peroxila, analogamente, oxida a vitamina E e produz o radical tocoferoxila, um radical estvel, que no propaga a cadeia. Subseqentemente, o radical tocoferoxila regenerado vitamina E pelo cido ascrbico, mas glutationa e cido rico tambm so agentes de regenerao no plasma. A completa oxidao do tocoferoxila gera o -tocoferolquinona, por meio de reao irreversvel. O mecanismo eficiente de regenerao do -tocoferol permite pouca formao irreversvel deste ltimo radical. A explicao corrente a de que, assim que o radical tocoferoxila formado, o -tocoferol imediatamente regenerado, sugerindo que os nveis plasmticos e teciduais de vitamina E sejam repostos por um pool mantido na forma no oxidada(14). O contedo de vitamina E determina a susceptibilidade das membranas microssomais, da LDL, hepatcitos e rgos, em resposta ao dano provocado pelos radicais hidroxila, alcoxila, peroxila, oxignio singleto e por alguns complexos entre os metais e o oxignio. Estes agentes radicalares no somente danificam os lipdios, mas produzem intermedirios secundrios, os hidroperxidos lipdicos, que podem ser decompostos em radicais peroxila e alcoxila, levando a uma cadeia ininterrupta de reaes de peroxidao lipdica. Os tocoferis atuam, principalmente, na proteo aos lipdios contra os radicais peroxila(18) A capacidade antioxidante do -tocoferol est associada a sua estrutura fenlica. A sua cadeia ftica contribui muito pouco na atividade antioxidante, entretanto a presena desta cadeia facilita a incorporao e reteno do -tocoferol nas biomembranas(15). Sendo muito intenso o processo de lipoperoxidao, o -tocoferol da membrana poderia ser totalmente convertido no radical tocoferoxila, perdendo sua ao como antioxidante. Entretanto, o radical tocoferoxila regenerado por substncias, como a vitamina C e a ubiquinona, entre outras, sendo, novamente, reduzido 438

a -tocoferol(19). Outros efeitos fisiolgicos do -tocoferol incluem a alterao da fluidez da membrana, o aumento da funo imune, a reduo da mortalidade pela isquemia do corao, juntamente com a agregao plaquetria e a formao de cogulos (14). O -tocoferol atua como um seqestrador de radicais livres, em elevadas presses de oxignio, enquanto o -caroteno mais efetivo em ambientes de baixa presso. O -tocoferol um eficiente antioxidante seqestrador, que impede a propagao da cadeia radicalar, sendo, ento, regenerado, via ciclo enzimtico ou por reduo no enzimtica. A anlise pela cromatografia lquida, de alta eficincia e ressonncia eletrnica, paramagntica indica que o -tocoferol derivado do radical -cromanoxil pode ser reduzido pelo cido ascrbico, NADPH, NADH, enzimas microssomais ou mitocondriais, dependentes do succinato e pelo complexo reducional do cido -lipico/diidrolipico(14). A ubiquinona tambm est implicada na regenerao do -tocoferol e pode atuar como um antioxidante independentemente de sua ao regenerativa sobre o -tocoferol(20). Um dos produtos formados na utilizao do -tocoferol, no processo de peroxidao lipdica, o -tocoferilquinona considerado um excelente anticoagulante e pode ser o responsvel pelos efeitos benficos do -tocoferol na preveno de enfartos do miocrdio e ataques cardacos. Quando administrado em seres humanos, o -tocoferilquinona transformado em -tocoferol(21). A ingesto de 350 mg de -tocoferol, em humanos, resulta na formao de -tocoferoxil hidroquinina, que posteriormente reduzido pela ubiquinona(22). Os animais so incapazes de sintetizar o -tocoferol , sendo dependentes das fontes dietticas, sendo as suas principais fontes dietticas os leos vegetais; outras fontes incluem ovos, fgado, cereais e legumes. Na Tabela IV, exemplifica-se uma dieta geral, contendo quantidades adequadas de vitamina E.
5. TOXICIDADE DA VITAMINA E

A evidncia que micronutrientes e antioxidantes dietticos protegem contra o dano oxidativo a tecidos muito extensa. Entretanto, muitas questes importantes devem ser respondidas antes da recomendao acerca da suplementao nutricional ou mesmo da fortificao alimentar. As principais questes so quanto toxicidade, o potencial da substncia em exacerbar um estado patolgico pr-existente e sua

Etanol e radicais livres

Tabela IV - Exemplo de Dieta Geral, contendo 2340 Kcal, com aproximadamente 30 mg de vitamina E Desjejum Caf Acar Po francs Margarina Mamo Queijo Complementar da Manh Ma Almoo Arroz Feijo Carne Cenoura Couve Alface Tomate leo de soja Banana Complementar da Tarde Bolacha Suco de laranja Acar Jantar Arroz Feijo Carne Beterraba Brcolis leo de soja Abacaxi 150g 120g 60g 60g 75g 100g 2 flhas 3 fatias 7,5g 1 unid. Mdia 26g 250g 10g 120g 60g 60g 80g 150g 7,5g 100g 60g 20g 50g 10g 100g 45g

6. ANTIOXIDANTE: GLUTATIONA

A glutationa (GSH, L--glutamil-L-cistenilglicina) um tripeptdeo, contendo cistena e o tiol no protico mais abundante nas clulas dos mamferos. Concentraes baixas de GSH tm sido reportadas em algumas doenas, como a AIDS, e esto associadas a maior risco de estresse oxidativo e da ocorrncia de infeces oportunsticas. Este decrscimo do GSH pode refletir o aumento na produo de antioxidantes, num grau que excederia a capacidade de detoxificao do GSH(25,26). O ncleo do resduo cistenilglicina da glutationa est envolvido na sua funo como antioxidante, mais especificamente como um redutor intracelular, sendo capaz, por exemplo, de reagir com um eltron no pareado de um radical livre, formando um radical GS, que produz, por dimerizao, o GSSG (glutationa oxidada). O GSSG , ento, reduzido pela glutationa redutase, regenerando o GSH, num processo s custas do NADPH(27). A glutationa redutase, que regenera o GSH tem o NADPH como substrato(27). O fgado sintetiza o GSH, mas o GSH ingerido pode ser absorvido intacto, no intestino delgado, sendo transportado, aumentando o GSH plasmtico. A disponibilidade limitada do NADPH pode levar a aumento do GSSG e deixar as clulas mais sensveis ao dano oxidativo(28). O processo pelo qual a glutationa detoxifica hidroperxidos o seguinte: 2 GSH + ROOH GSSG + ROH + H2O Outra atividade de proteo do GSH na regenerao da vitamina E oxidada, no processo de detoxificao, sendo ento: R + vit.E RH + vit E vit. E + GSH vit E + GS 2 GS GSSG

capacidade de ao antioxidante especifica sobre um rgo ou estado do organismo. Nesse sentido, parece no existirem grandes problemas em relao toxicidade do -tocoferol, no sendo esta substncia carcinognica, mutagnica ou teratognica, mesmo quando consumida em quantidades elevadas(23). Entretanto, a administrao do -tocoferol no recomendada durante a terapia anticoagulante ou em pessoas portadoras de doena autoimune, pois pode precipitar acidentes hemorrgicos ou desencadear surtos autoimunes(24).

GSSG + NADPH 2GSH + NADP+ Portanto a glutationa (GSH) atua de maneira importante na proteo celular contra mudanas no quadro oxidativo e na defesa contra xenobiticos. Entre as funes do GSH, na proteo contra a peroxidao lipdica, lembramos que podem ocorrer trs reaes. Primeiro, o GSH usado como substrato pela glutationa peroxidase, na eliminao de perxidos. Segundo, o GSH reduz a forma oxidada da vitamina C, que assim pode atuar, mantendo a vitamina E na sua forma reduzida e funcional. Finalmente, o GSH 439

AA Jordo Jr et al.

pode, atravs da glutationa-S-transferase, detoxificar aldedos reativos (como o malondialdedo) que so gerados durante a peroxidao lipdica. Se, de fato, grande parte da ao do GSH obtida pela induo de suas enzimas, necessria a manuteno do nvel de GSH para suportar a ao funcional destas enzimas(29). Variaes nos nveis de glutationa afetam diretamente a sntese de protenas e de DNA. Oxidao ou depleo do GSH pode diminuir a sntese protica. O GSH pode ser perdido de modo irreversvel em situaes de estresse oxidativo muito intenso, permanecendo na forma oxidada e no sendo novamente reduzido(30).
7. METABOLISMO DO ETANOL

O etanol atinge todos os tecidos do organismo e afeta a maioria das funes vitais, por ser uma molcula pequena e solvel tanto em meio aquoso como lipdico(31). Aps a ingesto de etanol, cerca de 20% do total absorvido no estmago e o restante nas primeiras pores do intestino delgado. Somente de 2 a 10% do etanol absorvido eliminado via rins e pulmes, o restante oxidado, principalmente no fgado. Exceto pelo estmago, o metabolismo extra-heptico do etanol muito pequeno(31). A velocidade de absoro no estmago depende do tipo de bebida (no caso de humanos), da concentrao de etanol, do pH do meio e do estado de vacuidade ou repleo do estmago. Em seres humanos, a ingesto de cerca de quarenta e cinco (45) gramas de etanol, tomados sob a forma de aguardente de cana, com o estmago vazio, resulta numa concentrao, no sangue, que varia de 0,6 a 1,0 g/litro, aps uma refeio esta concentrao seria de 0,3 a 0,5 g/litro. No intestino delgado, a absoro extremamente rpida, completa e independe da concentrao de etanol ou da presena de alimentos. O etanol absorvido dever ser oxidado, visto que

o lcool no pode ser armazenado. Esta oxidao do lcool ocorre praticamente toda a nvel heptico. A primeira fase da biotransformao do etanol compreende sua oxidao a acetaldedo. No hepatcito, esta transformao realizada atravs de trs caminhos distintos: via lcool desidrogenase, no citosol ou na parte solvel da clula, via sistema microssomal de oxidao do etanol, localizada no retculo endoplasmtico ou, ento, via catalase, localizada nos peroxissomas, conforme mostrado na Tabela V. Cada um destes trs processos produz metablitos especficos e resultam na produo de acetaldedo, um produto tambm txico(31). O processo atravs da lcool desidrogenase (ADH), localizada no citosol, catalisado por esta enzima, tendo como cofator a nicotinamida adenina dinucleotdeo (NAD), que convertida a sua forma reduzida, conforme a equao: ADH CH3CH2OH + NAD+ CH3CHO + NADH + H+ Na oxidao do etanol pela lcool desidrogenase, ocorre a formao de um mol de NADH para cada mol de etanol oxidado. J a aldedo desidrogenase responsvel pela oxidao do acetaldedo. Durante o metabolismo do etanol, o fgado permanece depletado de NAD, pois o NADH no reoxidado em taxa suficiente para repor o NAD(32). A oxidao do etanol determina, assim, considervel produo de NADH e um aumento do NAD + H+ livre. A alterao deste sistema redox, com aumento da relao NADH2/NAD, responsvel por alteraes metablicas, decorrentes do consumo do etanol, tais como o aumento da -glicerofosfato heptica e o estmulo sntese de cidos graxos com concomitante diminuio da oxidao normal dos cidos graxos. Desta maneira, existe uma produo maior de triglicerdeos, criando-se condies para o aparecimento da esteatose heptica.

Tabela V Caractersticas dos principais sistemas enzimticos hepticos responsveis pela oxidao do etanol ADH Localizao pH timo Cofator Citosol NAD+ MEOS Retculo Endoplasmtico 6,9 7,5 NADPH Catalase Peroxissoma 5,5 H2O2

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Etanol e radicais livres

O tratamento crnico com etanol leva oxidao do lcool pelo sistema microssomal, com participao primordial do citocromo P4502E1(32). A oxidao do etanol atravs do sistema de MEOS (microssomal ethanol oxidizing system) ocorre conforme a seguinte reao:
MEOS
CH3CH2OH + NADPH + H2 + O2 CH3CHO + NADP+ + 2H2O

Este sistema gradativamente estimulado pelo uso crnico do lcool. O envolvimento da catalase na oxidao do etanol questionado, tendo por base a pequena produo do perxido de hidrognio, um pr-requisito para oxidao do etanol por esta via(32). No processo oxidativo do etanol via catalase, ocorre, inicialmente, a oxidao do NADPH atravs da NADPH-oxidase, com a formao da gua oxigenada, a qual, sob a influncia da catalase, promove a oxidao do etanol. Neste processo, ocorrem as seguintes reaes: NADP-oxidase NADPH + H+ + O2 NADP+ + H2O2 H2O2 + CH3CH2OH 2H2O + CH3CHO Catalase A biotransformao heptica peroxidativa do etanol limitada pela produo endgena de gua oxigenada. A produo fisiolgica, normal, de gua oxigenada estimada como sendo de 3,6 mmol/hora/grama de fgado. Sob circunstncias fisiolgicas, o sistema catalase responde por menos de 2% da oxidao do etanol. Entretanto, o consumo de lcool induz a maior atividade de NADPH-oxidase, contribuindo para maior formao de gua oxigenada, desta maneira, ampliando a participao deste sistema na oxidao do etanol. A segunda fase da oxidao do etanol ocorre a partir da formao do acetaldedo, com a formao de acetil-COA e acetato. A transformao do acetaldedo para acetato praticamente irreversvel. O acetaldedo pode inteirar com aminocidos como lisina, serina e cistena(32). A oxidao do acetaldedo ocorre atravs da aldedodesidrogenase, enzima que possui alta atividade mitocondrial. A formao de acetil-COA aumenta as chances de esteatose heptica. Alm dos distrbios da lipognese, tambm ocorre uma maior reduo do piruvato a lactato. Esta hiperlactacidemia contribui para acidose e ainda reduz a capacidade renal, quando a excreo de cido rico, provocando uma hiperuricemia secundria e

uma hipoglicemia ps-alcolica. Uma grande dose de etanol causa um aumento na taxa de metabolismo do etanol, coincidindo com um aumento de oxignio no fgado. Este efeito chamado de aumento rpido no metabolismo do etanol, sendo que este aumento, no fluxo de oxignio, est ligado a um aumento na taxa de reoxidao do NADH e, conseqentemente, na taxa de oxidao do etanol(32). Um outro efeito de uma dose alta de etanol no fgado de ratos o decrscimo do glicognio heptico, depleo que depende da dose administrada de etanol. possvel que a depleo do glicognio esteja associada ao aumento de fluxo de oxignio no fgado, pelo aumento do NADH pela via do cido citrco ou pela demanda de ATP necessrio repleo do glicognio(32). A enzima citocromo P4502E1 tem um papel central na detoxificao de xenobiticos, especialmente do etanol. Esta enzima tem como propriedade a ligao de eltrons ao oxignio e no ciclo do NADH. Como conseqncia, espcies reativas de oxignio so formadas, incluindo os radicais hidroxila, que podem iniciar a peroxidao lipdica na membrana, gerando produtos txicos finais como o malondialdedo(33). O CYP2E1 tambm tem um papel direto no dano heptico, podendo formar diretamente, atravs do etanol, o radical hidroxietila no retculo endoplasmtico(32). Tanto o acetaldedo como os radicais hidroxietila podem interagir com vrias protenas celulares, formando complexos que atuam como autoantgenos para iniciar a resposta imune(33). A ativao das clulas de Kuppfer um evento importante na iniciao da doena heptica alcolica. Estas clulas podem ser ativadas por endotoxinas, tendo sua concentrao de clcio aumentada pela abertura dos canais de clcio. A ativao destas clulas libera mediadores inflamatrios, incluindo citocinas e metablitos lipdicos, assim como espcies reativas de oxignio como o nion superxido(34). Clulas de Kupffer tambm esto envolvidas no estado hipermetablico com subseqente hipoxia nas clulas parenquimais, efeito observado na doena heptica alcolica. Desde que a hipoxia tem sido conhecida como promotora da formao de radicais livres de se conceber que estes eventos podem levar formao destas espcies reativas, durante o consumo de etanol(34). Sabe-se que microssomos hepticos, incubados com etanol, formam o radical hidroxietila (CH3CHOH) via citocromo P450 e tambm existe a reao do etanol com o radical hidroxila (OH). O acetaldedo, formado via etanol, tambm oxidado, formando o nion superxido (O2)(35). Alguns autores 441

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acreditam que os efeitos hepatotxicos do etanol s seriam evidenciados em situaes de desnutrio(36), o que no parece ser confirmado, visto que animais, recebendo uma dieta nutricionalmente equilibrada, tambm sofrem os efeitos hepatotxicos, provocados pela ingesto do etanol. Muito se tem estudado sobre os efeitos da ingesto crnica de etanol no ser humano, visto que esta ingesto exerce um efeito txico, que se manifesta sobre o sistema nervoso central, fgado, pncreas e corao, provocando alteraes significativas no metabolismo intermedirio de diversas substncias (37). Entre as alteraes nutricionais decorrentes da ingesto de etanol, podemos citar aquelas verificadas no metabolismo da niacina(38), do triptofano(39), do zinco(40), e da vitamina B6 em ratos(41). Em relao ao metabolismo protico, em alcolatras, sabe-se que pacientes cirrticos apresentam alteraes no metabolismo de aminocidos no plasma(42), e no lquido asctico(43). No sentido de garantir o suprimento adequado de protenas para alcolatras, tem-se testado o uso de dietas enterais compostas de aminocidos(44) e de frmulas base de leite de soja(45). Portanto, no existe dvida quanto ao potencial txico do etanol, tanto no sentido da maior gerao de espcies radicalares altamente reativas, como levando a alteraes de alto significado nutricional.
8. ETANOL E RADICAIS LIVRES

Como foi citado, desde a dcada de sessenta (60), j se admitia a hiptese de que a ingesto de etanol poderia afetar a concentrao de antioxidantes na clula heptica e que haveria um aumento na peroxidao lipdica em homogenatos de fgado, recebendo uma dose aguda de etanol(3,4). Este aumento na peroxidao lipdica poderia ser prevenido pela adio, simultnea ao lcool, de antioxidantes. Estes resultados sugeriram que o etanol ou seus metablitos poderiam atuar como pr-oxidantes ou reduzindo os nveis dos antioxidantes hepticos(4). Entretanto, outros autores no encontraram um aumento nas substncias reativas ao cido tiobarbitrico (SRATB), que um ndice indireto da peroxidao lipdica, quando os ratos foram tratados tanto cronicamente ou de forma aguda com etanol(46,47). Estes resultados discrepantes quanto ocorrncia da peroxidao lipdica heptica, aps a administrao do etanol, so, principalmente, devidos s diferentes condies experimentais utilizadas, assim como nas tcnicas laboratoriais que 442

quantificam a peroxidao lipdica. Estudos mais recentes, utilizando tcnicas como quimioluminescncia tm mostrado que a administrao de etanol pode aumentar a peroxidao lipdica heptica em certas condies experimentais(48,49,50). Nesse sentido, acredita-se, principalmente, na induo do sistema do citocromo P450 microssomal assim como as enzimas xantina oxidase e aldedo oxidase, no citosol, como responsveis pela gerao de radicais livres pelo etanol. O etanol tambm pode levar a modificaes no metabolismo do ferro, neste caso o ferro pode atuar como um fator pr-oxidante(51). Sabe-se que a ingesto crnica de lcool em ratos tem aumentado a produo de espcies reativas de oxignio em microssomas isolados, especialmente quanto produo de superxido(52), perxido de hidrognio(53) e radicais hidroxila(54). Estes radicais podem ser gerados pela NADPH-citocromo P450 redutase, uma flavoenzima que pode produzir superxido, levando os radicais hidroxila (OH) para reao de Haber-Weiss, catalizada pelo ferro(51). Mas a maior parte dos derivados de oxignio, produzidos nos microssomos, ocorre pela induo do citocromo P450, mais especificamente sua isoenzima a CYP2E1, no sistema de oxidao microssomal do etanol. Esta isoenzima a citocromo P450 CYP2E1 pode ser induzida pelo etanol e outros lcoois(55), acetona e vrias outras substncias(56), com capacidade para gerar O2 e H2O2. A ingesto aguda de etanol leva a aumento significante na gerao de radicais superxidos nas mitocndrias, favorecido pelo decrscimo da taxa NAD+/NADH(57,58). Nos estudos experimentais, o lcool deve ser administrado aos animais separado dos alimentos, o que de fcil execuo. O valor calrico do lcool de 7,11 Kcal/grama e, em um millitro de etanol, temos 0,798 de grama de etanol, oferecendo, ento, 5,67 Kcal por ml(59); portanto deve-se levar em conta o potencial calrico do etanol. Em ratos, foi administrado etanol de modo agudo na concentrao cinco (5) gramas/kg de peso, numa soluo com 50% de gua, por via intragstrica, sendo medidas as SRATB e a alaninoaminotransferase (ALT) em perodos de 0, 2, 4, 8 e 24 horas aps a administrao do lcool. As SRATB aumentam nas duas (2) horas e depois voltam ao nvel normal, a ALT srica aumenta somente depois da queda das SRATB. Esses resultados indicam que o aumento da peroxidao lipdica, aps a administrao aguda do etanol, dependente do tempo e precede o dano

Etanol e radicais livres

hepatocelular(60). Tais resultados fortalecem a hiptese de que os efeitos hepatotxicos do etanol so devidos ao aumento na produo dos intermedirios das espcies reativas de oxignio. Um dos problemas associados com a identificao da peroxidao lipdica como mediadora da injria aguda do etanol vem do fato de que o malondialdedo, principal componente das SRATB rapidamente metabolizado. Desta maneira, as possveis discrepncias em relao ocorrncia do aumento na peroxidao lipdica depois da administrao de etanol pode ser explicada, em parte, devido ao tempo em que o material biolgico coletado aps a administrao do lcool. A administrao de 5 g de etanol/kg de peso para ratos por quatro (4) semanas no levou formao de perxidos lipdicos e nem alterou os nveis de antioxidantes enzimticos e no enzimticos. Nesse perodo de quatro (4) semanas pode ocorrer uma adaptao fisiolgica dos animais administrao do lcool(61).
9. ETANOL E ANTIOXIDANTES

No existe um consenso sobre os efeitos do etanol nas concentraes de vitamina E e glutationa. O efeito protetor da vitamina E contra a injria provocada pela participao de radicais livres em vrios processos patolgicos tem sido objetivo de vrios trabalhos experimentais e epidemiolgicos. Por ser constituinte essencial de membranas citoplasmticas, um dos alvos preferencias de espcies reativas de oxignio no desencadeamento de lipoperoxidao e tambm local de ataque de intermedirios reativos provenientes do metabolismo do etanol, a vitamina E talvez possa desempenhar um papel protetor frente a uma dose aguda de etanol. Segundo TYOPPONEN et al.(62) o tratamento crnico com etanol parece no afetar os nveis de vitamina E, mas a deficincia da vitamina E tem sido considerada um potencializador dos efeitos hepatotxicos do etanol. As enzimas lcool e aldedo desidrogenase tm a sua atividade heptica aumentada pela deficincia da vitamina E, afetando, portanto, a taxa de eliminao do etanol. A deficincia da vitamina E pode ser compensada pelo aumento do GSH heptico(62). A administrao crnica do etanol interfere negativamente no processo de regenerao heptica, aps a hepatectomia parcial, sendo que a deficincia de vitamina E potencializa esses efeitos. Nesse sentido, parece que a deficincia da vitamina E inibe a sntese do DNA(63). A administrao de etanol por seis

semanas levou a uma diminuio de 25% do -tocoferol, no fgado, especialmente nas clulas parenquimais, e levou, tambm, a uma diminuio de 55% no -tocoferol mitocondrial, quando comparado com o controle. Os nveis sricos de -tocoferol no mostraram diferena nos ratos recebendo etanol(13). A administrao de uma dieta deficiente em vitamina E para ratos, por cento e vinte (120) dias, foi a responsvel pelo decrscimo do citocromo P450 heptico, por baixos nveis de vitamina E srica, aliados a um aumento dos nveis do malondialdedo heptico(64). Outro grupo de autores acredita que apenas a ingesto crnica de etanol poderia levar a uma diminuio do -tocoferol heptico, no tendo a ingesto aguda os mesmos efeitos(13,65). Entretanto, os efeitos da administrao de etanol sobre a quantidade de -tocoferol heptico dependeriam da dose administrada, do tempo de administrao do etanol e da quantidade de vitamina E adicionada dieta destes animais. J a deficincia de vitamina E pode potencializar a toxicidade do etanol no fgado(62). A produo de SRATB, induzida pelo t-butil hidroperxido, em hepatcitos, foi suprimida pelo -tocoferol. Na ausncia do -tocoferol, os nveis de tiis diminuiram em cerca de 40%, j, com a adio da vitamina E, a diminuio foi de 20%. O tratamento com vitamina E tambm diminuiu o aparecimento de anormalidades morfolgicas nos hepatcitos, resultantes do dano celular(66). O mecanismo de reduo do tocoferol heptico e plasmtico, como efeito da administrao do lcool, no totalmente conhecido, mas acredita-se que possa ocorrer maior mobilizao heptica e tambm aumento na converso do -tocoferol para -tocoferilquinona. Nos ratos deficientes em vitamina E, tem-se que a ingesto de etanol no diminuiria a concentrao plasmtica de -tocoferol, apenas o seu contedo heptico(67). A deficincia de vitamina E, no alcoolismo crnico humano, no tem sido bem caracterizada. Quando nveis sricos, baixos, de vitamina E so encontrados em alcolatras tm-se colocado as possibilidades de insuficincia heptica, m-absoro de gorduras ou ingesto deficiente(68). Em pacientes com pancreatite crnica, tm-se encontrado nveis baixos das vitaminas E e A e do selnio no plasma, associados a um decrscimo da glutationa peroxidase, plasmtica, entretanto os nveis de SRATB no esto alterados nestes pacientes(69), conforme mostrado na Tabela VI. 443

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necrose heptica ocorreram entre quinze (15) e vinte (20) horas aps a administrao da xenobitico, sendo que somente na vigsima hora houve um decrscimo da vitamina E heptiParmetro Pacientes (n = 35) Controle (n = 14) ca. Quando se administrou um lcool Vitamina A (g/dl) 30 11 49 12* aliftico, o GSH decresceu significativamente em apenas quinze a trinta Vitamina E (mg/l) 85 16 9* (15-30) minutos, a peroxidao lipSelnio (g/l) 54 20 87 11* dica foi verificada entre duas e quaGSH-Px (unidades/l) 903 313 1326 168* tro (2 e 4) horas aps a administraSRATB (mol/l) 0,88 0,41 0,87 0,08 o do xenobitico, e a vitamina E * decaiu na quarta hora. Estudando-se p < 0,05 os mesmos parmetros, mas em animais deficientes em vitamina E, verificou-se que o processo de peroxidao lipdica, da O GSH considerado o mais importante comnecrose heptica e o consumo de antioxidantes (vitaposto sulfidrila intracelular, sendo conhecido seu enmina E e GSH) estavam mais acelerados e mais involvimento num grande nmero de processos funciotensos; j, em animais tratados com uma dieta nais, celulares, principalmente quanto a sua particisuplementada em vitamina E, houve uma preveno pao em algumas reaes de detoxificao. O GSH quanto ocorrncia da peroxidao lipdica e da pode reagir diretamente com alguns compostos txinecrose heptica, mas esta suplementao no modicos, formando complexos ou, ento, participando ficou a taxa de depleo do GSH(71). Nesse expericomo substrato em reaes de conjugao. Intoxicamento, a depleo do GSH foi associada citotoxicio crnica com etanol resulta num aumento na fordade, mesmo existindo uma quantidade adequada de mao de perxidos lipdicos, favorecendo o consu-tocoferol. O decrscimo do GSH precederia o demo de GSH e sua oxidao para GSSG pela glutatiocrscimo da vitamina E e a ocorrncia da peroxidana peroxidase(70). Sabe-se que o jejum pode reduzir o lipdica. em at 50% a quantidade de GSH heptico, e potenA relao entre a administrao crnica do cializar a necrose quando existe a administrao de etanol e o metabolismo da glutationa no est estabexenobiticos. Alguns autores acreditam que a suplelecida, existindo indicaes de que os nveis de glutamentao de vitamina E no capaz de preservar a tiona no so alterados(73), podem decrescer(74) ou glutationa heptica, mesmo prevenindo a peroxidamesmo aumentar frente ingesto crnica de etanol(75). (71) o lipdica ; nesse sentido, a depleo do GSH no Estas disparidades podem estar relacionadas duraestaria associada toxicidade, quando existe uma o da exposio ao etanol, assim como influncia quantidade adequada de vitamina E, principalmente nutricional. Alm da diminuio heptica do GSH, tem sido relatada uma diminuio renal deste tripeptdeo a nvel heptico. Sob este ponto de vista, a extenso aps a ingesto crnica de etanol, sendo que os nveis da peroxidao lipdica est mais relacionada quan(72) de GSH no intestino, estmago e bao parecem no tidade de -tocoferol do que ao GSH . Num estuser afetados pela ingesto do lcool(76) do, verificando a toxicidade aguda de vrios xenobiComo foi citado, os nveis de glutationa (GSH) ticos, encontraram-se relaes interessantes entre o heptica podem sofrer um decrscimo quando existe metabolismo da vitamina E, glutationa, heptica e pea administrao aguda de etanol. A formao de um roxidao lipdica. Administrando-se o bromobenzecomplexo entre o acetaldedo, resultante da oxidao no, percebeu-se um decrscimo muito rpido do GSH do etanol, e a glutationa pode representar um dos heptico, em cerca de trs (3) horas, sendo a vitamina mecanismos desta diminuio(77). A administrao do E reduzida em doze (12) horas e a peroxidao lipdiprprio acetaldedo, para os animais, capaz de dica, assim como a necrose heptica, ocorreram aps minuir os nveis de GSH e aumentar a concentrao quinze (15) horas. J a administrao aguda do dietildos dienos conjugados a nvel heptico(78), conforme maleato induziu a uma queda dos nveis de GSH em mostrado na Tabela VII. apenas uma hora, mas a peroxidao lipdica e a
Tabela VI Nveis plasmticos de vitamina A, E, selnio, glutationa peroxidase (GSH-Px) e SRATB em pacientes com pancreatite (69) crnica

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Quanto ao metabolismo das enzimas relacionadas ao GSH, a administrao crnica de etanol aumenta a atividade das enzimas glutationa Dienos conjugados GSH (mol/g/fgado) Tratamento (nmol/mg/protena) peroxidase e glutationa redutase em aproximadamente 45 e 15%, respec4,49 0,31 81,3 11,9 Salina tivamente. A glutationa peroxidase aumentaria, como conseqncia de Acetaldedo (0,3 g/Kg) 3,34 0,13 * 128,6 13,9 * sua atividade em situaes de peroxiEtanol (3 g/Kg) 2,93 0,28 * 87,4 6,6 dao, j o aumento da glutationa redutase um reflexo da maior de Etanol (5 g/kg) 2,04 0,15 * 159,3 6,9 * manda do GSH, com sua oxidao * p < 0,05 em relao ao controle (salina) para GSSG(82). A ingesto aguda de etanol diminui os nveis dos grupos sulfidrila, ligados ou no a protenas. Em relao aos tiis livres, como a glutationa, existe um decrscimo A suplementao diettica com vitamina E ou heptico que dose dependente em relao admivitamina D 3 capaz de elevar os nveis do GSH nistrao de etanol, sendo que dois (2) gramas de heptico(79). O aumento na produo de O2 e H2O2 etanol/Kg peso do rato diminui o GSH heptico a acompanha a oxidao do etanol. Uma dieta conten66,93% em relao ao controle. J a administrao do 5% de etanol, administrada por vinte e um (21) do etanol a cinco (5) gramas/Kg de peso do animal dias levou a um aumento do GSH heptico, princilevou o GSH heptico a apenas 21,69% dos nveis do palmente quando os animais eram deficientes em vicontrole. As duas quantidades aplicadas de etanol, de tamina E. O etanol tambm levou a uma diminuio modo agudo, foram capazes de elevar as concentrado -tocoferol heptico, mas aumentou, de modo siges de malondialdedo no plasma, crebro e fgado(83). nificativo, o -tocoferol plasmtico(80). Em ratos, recebendo uma dieta suplementada com mil e duzentas 10. CONSIDERAES FINAIS (1200) vezes o valor recomendado para vitamina E e 10.1. Estudos experimentais etanol, por um ms, houve, de modo surpreendente, um aumento nas concentraes hepticas de SRATB A presente reviso foi realizada no sentido de e ao -tocoferol, no grupo que recebeu etanol + vitadeterminar os efeitos da administrao do etanol somina E, em comparao ao grupo que recebeu apenas bre a peroxidao lipdica, e o possvel papel protetor vitamina E. A suplementao com vitamina E tamde antioxidantes, como a vitamina E e a glutationa. bm no foi capaz de proteger contra os danos patoTem-se, claramente, que o etanol atua no organismo lgicos ao tecido heptico(81), conforme mostrado na de uma maneira pr-oxidativa, gerando espcies reTabela VIII. ativas de oxignio. Postula-se, portanto, qual seria o
Tabela VII Nveis hepticos de GSH e de dienos conjugados, em (78) ratos recebendo etanol ou acetaldedo

Tabela VIII Medidas do -tocoferol, SRATB e dano heptico, em animais recebendo mil e duzentas (1200) (81) vezes o recomendado de vitamina E Grupos Etanol Destrose + vit.E Etanol + vit.E -tocoferol (g/g fgado) 2,3 1,5 286 108
a

SRATB (mol/mg/protena)

Dano Patolgico (score) 3,3 0,5 0,4 0,4 3,4 0,8

b

512 46 75 15 139 18

1749 481

Obs: letras diferentes na mesma linha indicam significncia estatstica a 0,05

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papel de antioxidantes nutricionais frente a ingesto aguda ou crnica de etanol. Nesse sentido, verificamos, em alguns experimentos, que o etanol pode diminuir as concentraes hepticas de vitamina E e de glutationa reduzida. J a suplementao de vitamina tem-se mostrado efetiva em apenas algumas situaes experimentais de administrao de etanol, entretanto, no se tem comprovada a eficincia desta suplementao em humanos. Experimentos mostram que a modificao, tanto nos nveis da peroxidao lipdica como nos nveis de antioxidantes, depende, fundamentalmente, do tempo e pode explicar, pelo menos em parte, os resultados discrepantes em relao ao envolvimento de radicais livres e antioxidantes no metabolismo do etanol. 10.2. Suplementao antioxidante em alcolatras Quando tratamos de assunto ligado ao tema antioxidante e radicais livres, logo surge a questo dos suplementos antioxidantes. Seriam eles adequados ao consumo humano numa variedade de situaes? O interesse crescente na aplicao de nutrientes antioxidantes, numa srie de condies, incluindo a a melhora geral da sade e o retardo no processo de envelhecimento, tem atrado a ateno da populao em geral, que deseja, em ltima anlise, saber quais so os benefcios da ingesto de quantidades elevadas de suplementos antioxidantes. Infelizmente, a confuso, a falta de informao ou mesmo a informao enganosa levaram ao comrcio de suplementos, negcio altamente rendoso para alguns, mas de pouco significado prtico para o consumidor, pois estes suplemementos, vendidos como fazedores de milagre, so indicados sem base cientfica, mas como a panceia universal contra todos os males. Em 1993, a revista Newsweek revelou que sete (7) entre cada dez (10) norte-americanos consumiam suplementos, continua-

da ou ocasionalmente, sendo que, no mercado norteamericano, neste perodo, existiam trs mil e quatrocentos (3.400) diferentes tipos de suplementos minerais e vitamnicos, numa indstria que movimenta cerca de quatro (4) bilhes de dlares por ano(84). Muito se tem falado sobre a suplementao de vitamina E como mecanismo preventivo da peroxidao lipdica. Por exemplo, o enriquecimento da lipoprotena de alta densidade com -tocoferol estabiliza a produo de hidroperxidos e diminui a formao de produtos secundrios de oxidao, como as SRATB(85). Entretanto, num estudo in vitro, a suplementao com vrios antioxidantes no melhorou a defesa contra o estresse oxidativo(86). Avaliando-se os efeitos da vitamina como antioxidante, em um estudo com lipoprotenas de baixa densidade (LDL), o -tocoferol mostrou uma atividade contrria ao esperado, agindo como substncia pr-oxidante(87). A suplementao diria com 500 mg de vitamina E, por um perodo de um ano, em alcolatras crnicos, aumentou significativamente o nvel plasmtico de -tocoferol, mas no influenciou em parmetros de funo heptica, mortalidade ou tempo de permanncia desses pacientes no hospital(88). Devemos lembrar que, a nvel experimental, a suplementao com mil e duzentas (1200) vezes a quantidade recomendada de vitamina E no se mostrou efetiva(81). Tendo em vista estas informaes, adotamos, como posio, o declarado pela American Dietetic Association, que se manifestou em relao ao consumo de antioxidantes, afirmando que a melhor estratgia nutricional para promover a sade e reduzir o risco de doenas crnicas a obteno dos nutrientes de uma grande variedade de alimentos. Suplementos vitamnicos e minerais s seriam apropriados quando bem aceitos pelo paciente e prescritos sob evidncias cientficas que comprovem sua eficcia e sua segurana(84).

JORDO Jr AA et al. Lipid peroxidation and ethanol: role of vitamin-E and glutathione. Medicina, Ribeiro Preto, 31: 434-449, july/sept. 1998. ABSTRACT: Free radical generation is a important step in the pathogenesis of ethanol associated liver injury. Administration of ethanol induces an increase in lipid peroxidation either by enhancing the production of oxygen reactive species and by decreasing levels of endogenous antioxidants. This review focuses the generation of free radical, specially at the microssomal levels and the role of two nutritional antioxidants: vitamin E and glutathione. UNITERMS:

Lipid Peroxidation. Alcohol, Ethyl. Glutathione. Vitamin E. Free Radicals.

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Etanol e radicais livres

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
1 - HALLIWELL B. Oxidants and human disease: some new concepts. FASEB J 1: 358-364, 1987. 2 - BONORDEN WR & PARIZA MW. Antioxidant nutrients and protection from free radicals. In: Kotsonis FN et al. Nutritional Toxicology, Raven Press, New York, p. 19-48, 1994. 3 - DI LUZIO NR. Prevention of the acute ethanol-induced fatty liver by antioxidants. Physiologist 6:169-173, 1963. 4 - DI LUZIO NR. & HARTMAN AD. Role of lipid peroxidation in the pathogenesis of ethanol-induced fatty liver. Fed Proc 26: 1436-1442, 1967. 5 - HALLIWELL B. Free radicals, antioxidants, and human disease: curiosity, cause or consequence. Lancet 344 : 721-724, 1994. 6 - FREI B. Reactive oxygen species and antioxidant vitamins: mechanisms of action. Am J Med 97: 5S-13S, 1994. Suppl. 7 - SERHAN C et al. Phosphatidate and oxidized fatty acids are calcium ionophores. J Biol Chem 256: 2736-2741, 1981. 8 - HALLIWELL B et al. Free radicals, antioxidants and human disease: where are we now? J Lab Clin Med 119: 598-620, 1992. 9 - SIES H. Strategies of antioxidant defense. Eur J Biochem 215: 213-219, 1993. 10 - DUTHIE GG. Lipid peroxidation. Eur J Clin Nutr 47: 759-764, 1993. 11 - JACOB RA. The integrated antioxidant system. Nutr Res 15: 755-766, 1995. 12 - OLSON RE. Vitamin E and its relation to heart disease. Circulation 48: 179-184, 1973. 13 - BJORNEBOE GEA et al. Reduced hepatic -tocopherol content after long-term administration of ethanol to rats. Biochim Biophys Acta 918: 236-241, 1987. 14 - LIEBLER DC. The role of metabolism in the antioxidant function of vitamin E. Crit Rev Toxicol 23: 147-169, 1993. 15 - CHAN WKM & DECKER EA. Endogenous skeletal muscle antioxidants. Crit Rev Food Sci Nutr 34: 403-426, 1994. 16 - MACHLIN LJ & BENDICH A. Free radical tissue damage: protective role of antioxidant nutrients. FASEB J 1: 441-445, 1987. 17 - JORDO JR AA et al. Urinary excretion and plasma vitamin E levels in patients with AIDS. Nutrition 14: 423-426, 1998. 18 - Di MASCIO P et al. Antioxidant defense systems: the role of carotenoids, tocopherols and thiols. Am J Clin Nutr 53: 194S-200S, 1991. 19 - PACKER L. Protective role of vitamin E in biological systems. Am J Clin Nutr 53: 1050S-1055S, 1991. Suppl. 4 20 - STOCKER R et al. Ubiquiunol-10 protects human low density lipoproteinmore efficiently against lipid peroxidation than does alpha-tocopherol. Proc Natl Acad Sci (USA) 88: 1646-1650, 1991.

21 - MOORE ANJ & INGOLD KU. -Tocoferyl quinone is converted into vitamin E in man. Free Radic Biol Med 22: 931-934, 1997. 22 - KOHAR I et al. Is a -tocopherol a reservoir for -tocopheryl hidroquinone. Free Radic Biol Med 19: 197-207, 1995. 23 - BENDICH A & MACHLIN LJ. Safety oral intake of Vitamin E. Am J Clin Nutr 48: 612-619, 1988. 24 - CORRIGAN Jr JJ. The effect of vitamin E on warfarin induced vitamin K deficiency. Ann N Y Acad Sci 292 : 361-368, 1982. 25 - BRAY TM & TAYLOR CG. Tissue glutathione, nutrition and oxidative stress. Can J Physiol Pharmacol 71: 746-751, 1993. 26 - MEISTER A. Glutathione metabolism. Methods Enzymol 251 : 3-7, 1995. 27 - KRETZSCHMAR M. Regulation of hepatic glutathione metabolism and its role in hepatotoxicity. Exp Toxicol Pathol 48: 439-446, 1996. 28 - SHAN X et al. Glutathione dependent protection against oxidative injury. Pharmacol Ther 44: 61-71, 1990. 29 - JONES DP et al. Impact of nutrients on cellular lipid peroxidation and antioxidant defense system. Fundam Appl Toxicol 26: 1-7, 1995. 30 - UHLIG S & WENDEL A. The physiological consequences of glutathione variations. Life Sci 51: 1083-1094, 1992. 31 - LIEBER CS. Ethanol. metabolism, cirrhosis and alcoholism. Clin Chim Acta 257: 59-84, 1997. 32 - KITSON KE & WEINER H. Ethanol and acetaldehyde metabolism: past, present and future. Alcohol Clin Exp Res 20: 82A-92A, 1996. 33 - SONG BJ & CEDERBAUM AI. Ethanol-inducible cytochrome P450 (CYP4502E1): biochemistry, molecular biology and clinical relevance: 1996 update. Alcohol Clin Exp Res 20: 138A-146A, 1996. 34 - ISHII H & THURMAN RG. Oxidative stress in alcoholic liver injury. Alcohol Clin Exp Res 20: 162A-167A, 1996. 35 - POLI G. Liver damage due to free radicals. Br Med Bull 49: 604-620, 1993. 36 - DERR RF et al. Is ethanol per se hepatotoxic? J Hepatol 10: 381-386, 1990. 37 - VANNUCCHI H et al. Tryptophan metabolism in in alcoholic pellagra patients: measurement of urinary metabolites and histochemical studies of related muscle enzimes. Am J Clin Nutr 35: 1368-1374, 1982. 38 - VANNUCCHI H & MORENO FS. Interaction of niacin and zinc metabolism in patients with alcoholic pellagra. Am J Clin Nutr 50: 364-369, 1989. 39 - VANNUCCHI H et al. Alcoolismo e nutrio: aspectos fisiopatolgicos, clnicos e teraputicos. Rev CEN 6: 13-20, 1982. 40 - VANNUCCHI H et al. Assessment of zinc nutritional status of pellagra patients. Alcohol Alcoh 30: 297-302, 1995.

447

AA Jordo Jr et al.

41 - VANNUCCHI H et al. Interaction among niacin, vitamin B6 and zinc in rats receiving ethanol. Int J Vitam Nutr Res 56: 355-362, 1986. 42 - VANNUCCHI H et al. Plasma amino acid patterns in alcoholic pellagra patients. Alcohol Alcoh 26: 431-436, 1991. 43 - VANNUCCHI H et al. Amino acid patterns in the plasma and ascitic fluid of cirrhotic patients. Braz J Med Biol Res 18: 465-470, 1985. 44 - MARCHINI JS et al. Protein requirements of a group of chronic alcoholics: efficiency of duodenal amino acid infusion. Nutr Res 8: 239-248, 1988. 45 - CUNHA DF & VANNUCCHI H. Estudo do valor nutricional do leite de soja no tratamento de alcolatras desnutridos. Rev Assoc Med Bras 37: 163-168, 1991. 46 - REID AMB & SLATER TF. Some effects of ethanol in vivo and in vitro lipid peroxidation. Biochem Soc Trans 5 : 1292-1294, 1977 47 - TORRIELLI MV et al. Ethanol-induced hepatotoxicity: experimental observations on the role of lipid peroxidation. J Pathol 126 : 11-25, 1978. 48 - ALBANO E et al. Spin trapping studies on the free-radical products formend by metabolic activation of carbon tetrachloride in rat liver microssomal fractions isolated hepatocytes and in vivo in the rat. Biochem J 204: 593-603, 1982. 49 - MLLER A & SIES H. Alcohol, aldehydes and lipid peroxidation: Current notions. Alcohol Alcoh 1: 67-74, 1987. Suppl. 50 - REINKE LA et al. Reactive free radical generation in vivo in heart and liver of ethanol-fed rats: Correlations with radical formation in vitro. Proc Natl Acad Sci (USA) 84: 9223-9227, 1987. 51 - NORDMANN R et al. Implication of free radical mechanisms in ethanol- induced cellular injury . Free Radic Biol Med 12: 219-240, 1992. 52 - EKSTRM G & INGELMAN-SUNDBERG M. Rat liver microssomal NADPH-supported oxidase activity and lipid peroxidation dependent on ethanol inducible cytocrome P450 (P450 IIE1). Biochem Pharmacol 38: 1313-1319, 1989. 53 - THURMAN R.G. Induction of hepatic microssomal NADPH-dependent production of hydrogen peroxide by chronic prior treatment with ethanol. Mol Pharmacol 9: 670-675, 1973. 54 - DICKER E. & CEDERBAUM AI. HydroxyL radical generation by microssomes after chronic ethanol comsumption. Alcoh Clin Exp Res 11: 309-314, 1987 55 - JOHANSSON I et al. Ethanol, fasting and acetone-inducible cytocrome P-450 in rat liver: Regulation and charactheristics of enzimes belonging to IIB and IIE gene subfamilies. Biochemistry 27:1925-1934, 1988. 56 - KOOP DR et al. Immunochemical evidence for induction of the alcohol-oxidizing cytochrome P-450 of rabbit liver microsomes by diverse agents: Ethanol, imidazole, trichloroethylene, acetone, pyrazole and isoniazid. Proc Natl Acad Sci (USA) 82: 4065-4069, 1985.

57 - SLATER TF et al. Changes in liver nucleotide concentrations in experimental liver injury. 2. Acute ethanol poisoning. Biochem J 93: 267-270, 1964 58 - SINACEUR J et al. Superoxide formation in liver mithocondria during ethanol intoxication: Possible role in alcohol hepetotoxicity. In: POLI G et al., eds. Free Radicals in liver injury. Oxford, IRL Press, p. 175-177, 1985 59 - PORTA EA & GOMEZ-DUMM CLA. A new experimental approach in the study of chronic alcoholism. Lab Invest 18: 352-364, 1968. 60 - SADRZADEH SMH & NANJI AA. Detection of lipid peroxidation after acute ethanol administration is dependent of time of sampling. Int J Vitam Nutr Res 64: 157-158, 1994. 61 - COUDRAY C et al. Blood and liver peroxide status after chronic ethanol administration in rats. Clin Chim Acta 219: 35-45, 1993. 62 - TYOPPONEN JT & LINDROS KO. Combined vitamin E deficiency and ethanol pretreatment: liver glutathione and enzime changes. Int J Nutr Res 56: 241-245, 1986. 63 - TANAKA T et al. Effect of vitamin E deficiency on inhibition of liver regeneration by long term administration of alcohol. Alcohol Clin Exp Res 20: 47-50, 1996. 64 - IWASAKI M et al. Effects of vitamin E deficiency on hepatic microssomal cytocrome P450 and phase II enzymes in male and female rats. Int J Vitam Nutr Res 64: 109-112, 1994. 65 - HANNAH JS & SOERES JH. The effects of vitamin E on the ethanol metabolizing liver in the rat. Nutr Rep Int 19: 733-744, 1979 66 - WANG S-T et al. Vitamin E protection of cell morphology and protein thiols in rat hepatocytes treated with tert-butyl hydroperoxide. Toxicol Lett 89: 91-98, 1996. 67 - SADRZADEH SMH et al. Effect of chronic ethanol feeding on plasma and liver -and--tocopherol levels in normal and vitamin E deficient rats. Biochem Pharmacol 47: 2005-2010, 1994. 68 - LIEBER CS. The influence of alcohol on nutritional status. Nutr Rev 46: 241-253, 1988. 69 - GOSSUM AV et al. Deficiency in antioxidant factors in patients with alcohol-related chronic pancreatitis. Dig Dis Sci 41: 1225-1231, 1996. 70 - ALTOMARE E et al. Hepatic glutathione content in patients with alcoholic and non-alcoholic liver diseases. Life Sci 43: 991-998, 1988 71 - MAELLARO E et al. Lipid peroxidation and antioxidant systems in the liver injury produced by glutathione depleting agents. Biochem Pharmacol 39: 1513-1521, 1990. 72 - PASCOE GA et al. Vitamin E protection against chemicalinduced cell injury. Arch Biochem Biophys 256 : 150-158, 1987. 73 - CALLANS DJ et al. Effects of ethanol feeding and withdrawal on plasma glutathione elimination in the rat. Hepatology 7: 496-501, 1987.

448

Etanol e radicais livres

74 - BOYER CS & PETERSEN DR. Potentiation of cocainemediated hepatotoxicity by acute and chronic ethanol. Alcoh Clin Exp Res 14: 28-31, 1990. 75 - HASSING JM et al. Hepatic glutathione in D-penicillaminefed ethanol dependent rats. Res Commun Chem Pathol Pharmacol 25: 389-394, 1979. 76 - FERNANDEZ V & VIDELA LA. Effect of acute and chronic ethanol ingestion on the content of reduced glutathione of various tissues of the rat. Experientia 37: 392-394, 1981. 77 - VINA J et al. Effect of ethanol on glutathione concentrations in isolated hepatocytes. Biochem J 188: 549-552, 1980. 78 - VIDELA LA et al. Liver lipoperoxidative pressure and glutathione status following acetaldehyde and aliphatic alcohols pretreatment in rats. Biochem Biophys Res Commun 104: 965-970, 1982. 79 - SARDAR S et al. Comparative effectiveness of vitamin D3 and dietary vitamin E on peroxidation of lipids and enzimes of the hepatic antioxidant system in Sprague-Dawley rats. Int J Vitam Nutr Res 66: 39-45, 1996. 80 - KAWASE T et al. Lipid peroxidation and antioxidant defense system in rat liver after chronic ethanol feeding. Hepatology 10: 815-821, 1989. 81 - SADRZADEH SMH et al. High dose vitamin E supplementation has no effect on ethanol induced pathological liver injury. J Pharmacol Exp Ther 273: 455-460, 1995.

82 - MacDONALD CM. The effects of ethanol on hepatic lipid peroxidation and on the activities of glutathione reductase and peroxidase. FEBS Lett 35: 227-230, 1973. 83 - CALABRESE V et al. Stress proteins and SH-groups in oxidant-induced cell damage after acute ethanol administration in rat. Free Radic Biol Med 20 :391-397, 1996. 84 - AMERICAN DIETETIC ASSOCIATION. Position of the American Dietetic Association: vitamin and mineral supplementation. J Am Diet Assoc 96: 73-77, 1996. 85 - LAUREAUX C et al. a-Tocoferol enrichement of high-density lipoproteins: stabilization of hydroperoxides produced during cooper oxidation. Free Radic Biol Med 22: 185-194, 1997. 86 - CAO G & CUTLER RG. High concentrations of antioxidants may not improve defense against oxidative stress. Arch Gerontol Geriatr 17: 189-201, 1993. 87 - NEUZIL J et al. Requirement for promotion, or inhibition by a-tocoferol of radical induced initiation of plasma lipoprotein lipid peroxidation. Free Radic Biol Med 22: 57-71, 1997. 88 - MAZA MP et al. Effects of long-term vitamin E supplementation in alcoholic cirrhotics. J Am Coll Nutr 14: 192-196, 1995. Recebido para publicao em 12/06/98. Aprovado para publicao em 01/09/98.

449