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UNIVERSIDADE FEDERAL DE GOIS ESCOLA DE AGRONOMIA E ENGENHARIA DE ALIMENTOS

LEONARDO MIRINDANHA CALIXTO 113437 POLIANA XAVIER ALVES 113448

DETERMINAO COLORIMTRICA PELA REAO DE BIURETO

GOINIA 2013 1

LEONARDO MIRINDANHA CALIXTO 113437 POLIANA XAVIER ALVES 113448

DETERMINAO COLORIMTRICA PELA REAO DE BIURETO

Trabalho apresentado como requisito parcial para aprovao na disciplina Bioqumica ministrada na Universidade Federal de Gois Prof. Clayton L. Borges

GOINIA 2013

1.INTRODUO As protenas so constitudas por 20 tipos de aminocidos diferentes. Esses aminocidos so molculas orgnicas formadas por tomos de carbono(C), hidrognio (H), oxignio (O) e nitrognio (N). Todas as molculas de aminocidos contm um grupo carboxlico (COOH), um grupo amina (NH2) e uma molcula de hidrognio (H), ligados a um tomo de carbono, chamado de carbono alfa. A esse mesmo carbono tambm ligado um radical, genericamente chamado de R. Esse radical varia de acordo com o aminocido, ou seja, cada um dos 20 aminocidos existentes possui seu prprio radical. Os aminocidos se unem atravs de ligaes peptdicas, formando as protenas. Para que as clulas possam produzir suas protenas, elas precisam de aminocidos, que podem ser obtidos a partir da alimentao ou serem fabricadas pelo prprio organismo. O biureto um composto formado quando se aquece a ureia a 100C. Ele reage com ons cpricos, em meio alcalino, formando um produto de colorao violceo. A reao do Biureto ocorre devido s ligaes peptdicas, dando positiva para protenas e peptdeos com trs ou mais resduos de aminocidos. A reao tambm positiva para substncias que contm 2 carbonilas (-CONH2) ligadas diretamente ou atravs de um nico tomo de carbono ou nitrognio. Dependendo da complexidade da protena ou do peptdeo em questo, a cor do produto de reao a presena do Biureto varia substancialmente. A reao do Biureto pode ser utilizada para demonstrar a presena de protenas em materiais biolgicos, como tambm para quantific-las, uma vez que o complexo cobre-protena apresenta uma absoro mxima 545nm; a intensidade da cor depende exclusivamente da concentrao de protena. Para que a reao do Biureto seja positiva h necessidade da presena de pelo menos duas ligaes peptdicas na molcula. O objetivo deste experimento foi quantificar colorimetricamente a protena presente em uma amostra de concentrao desconhecida. 2.MATERIAIS E MTODOS 2.1.Materiais 1. Espectrofotmetro; 2. Agitador de tubos (vrtex). 3. Tubos de ensaio 2.2Reagentes 1. Casena 1%; 2. Glicina 1%; 3. Hidrxido de Sdio (NaOH) 1,0 mol/L; 4. Reativo de Biureto (sulfato de cobre 0,5%); 5. gua destilada. 3.1 Procedimento experimental 1. Foram identificados 5 tubos de ensaio: o primeiro o branco, o segundo a glicina e o restante foram enumerados de 1 a 3;

2. Foi adicionado 1 mL de gua destilada no tubo de ensaio denominado de branco; 3. No tubo denominado de glicina foi adicionado 1 mL de soluo de glicina; 4. Adicionado 0,2 mL de casena no tubo 1; 0,6 mL de casena no tubo 2 e 1 mL de casena no tubo 3. 5. Nos tubos 1 e 2 foi completado o volume para 1 mL com gua destilada; 6. Foi adicionado 3 mL de NaOH 1,0 mol/L em todos os tubos; 7. Adicionado 0,4 mL de Biureto em todos os tubos; 8. Foi aguardado um tempo de 15 minutos enquanto a reao foi processada; 9. No espectrofotmetro todas as solues foram lidas a 540 nm; 10o. Foram anotadas as leituras das absorbncias de cada tubo de ensaio. 3.RESULTADOS E DISCUSSES A tabela a seguir apresenta os resultado de absorbncia para cada um dos tubos. Tabela 01: Dados obtidos aps a leitura da absorbncia (540nm). Reativos Tubos B G 1 gua destilada 1,0 --Soluo de glicina (mL) -1,0 -Soluo de casena 1%(mL) --0,2 gua destilada (mL) --0,8 NaOH 1,0 mol/L 3,0 3,0 3,0 Reativo de Biureto 0,4 0,4 0,4 Agitar e aguardar 15 minutos 0 0,022 0,071 Resultado (Absorbncia)

2 --0,6 0,4 3,0 0,4 0,137

3 --1,0 -3,0 0,4 0,316

A imagem a seguir mostra a colorao de cada um dos tubos aps a realizao do experimento.

Imagem 01: Resultado da colorimetria pela reao de biureto.

Todos os tubos tiveram sua colorao inicial alterada aps a adio de sulfato de cobre (CuSO4). O primeiro tubo adquiriu colorao prpura; o segundo, azul claro, o terceiro adquiriu um tom levemente azulado e assim at o quinto tubo com a colorao roxa. Uma vez que a reao do biureto caracterizada por identificar a presena de protenas e peptdeos com trs ou mais resduos de aminocidos, o sulfato de cobre interage com as ligaes peptdicas, pode-se concluir que a primeira amostra adquire colorao prpura, devido a presena de protenas. J a segunda amostra, por conter somente aminocidos, no adquire colorao roxa, indicando assim a ausncia de ligaes peptdicas nessa, a qual apresenta colorao azulada semelhante terceira amostra que continha gua destilada. 5.CONCLUSO Conclui-se que os tubos que apresentaram colorao mais escura foram os tubos com maior concentrao de protena devido reao de biureto que ocorreu devido s ligaes peptdicas presentes na estrutura das protenas.

REFERNCIAS Nelson, L. D.; Cox, M. M.. Lehninger Principles of Biochemistry Third Edition. W.H. FR.E.E.MAN AND COMPANY, New York. New York and Basingstoke, 2000. Valim, Y. M. L. et al. Apostila do curso de Odontologia oferecido pelo Departamento de Fsica e Qumica da USP, Ribeiro Preto 2008. BERG, J. M. Bioqumica. 6 ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2008