INGENIERA DE BIOPROCESOS 2013

Produccin de Glutamato Monosdico

Ingenieria en Alimentos
Cabello Soledad Gonzalez Fernanda Roselot Stella Maris

Obtencin industrial de GMS a partir de fermentacin en tanque agitado utilizando la bacteria Corynebacterium Glutamicum

AMINOCIDOS Las protenas son polmeros de aminocidos los cuales estn unidos entre si mediante tipos especficos de enlaces covalentes. Comnmente en las protenas se encuentran 20 diferentes aminocidos, 10 de los cuales son considerados como esenciales. Los aminocidos difieren unos de otros por los grupos radicales presentes en sus cadenas y varan en estructura, tamao, carga elctrica y solubilidad en agua. Todos los aminocidos son -aminocidos, tienen un grupo carboxilo, un grupo amino, un grupo radical y un tomo de hidrgeno unido al mismo tomo de carbono; este tomo de carbono, conocido como carbono , es considerado como un centro quiral. Casi todos los compuestos biolgicos que presenten un centro quiral existen de manera natural en una sola forma estereoisomrica, ya sea D o L. Los aminocidos en las protenas son exclusivamente L estreo ismeros. Cuando los compuestos quirales se forman de simples reacciones qumicas, se obtienen mezclas de ismeros L y D las cuales son difciles de identificar y separar. Desde hace algn tiempo los procesos qumicos para la obtencin de aminocidos han dejado de utilizarse casi por completo para dar lugar a mtodos microbiolgicos debido a que las clulas son capaces de sintetizar especficamente los ismeros L, y ya que los sitios activos de las enzimas son asimtricos, las reacciones catalizadas por ellas son estreo especficas. Los principales microorganismos productores de aminocidos a escala industrial son cepas sobreproductoras, la mayora mutantes no reguladas o auxtrofas inducidas de cepas silvestres, el grupo de las corynebacterias es uno de los ms importantes. En 1957, se report la bacteria que fue identificada como Micrococcus glutamicus (reidentificada despus como Corynebacterium glutamicum), la cual produca L-cido glutmico en apreciables cantidades en medios de cultivo por lo que la produccin microbiana de glutamato monosdico dio inicio. De este grupo de corynebacterias, la especie ms utilizada es la Corynebaterium glutamicum aunque tambin se emplean Arthrobacter, Brevbibacterium, Microbacterium y Micrococuus.

PRODUCCION DE ACIDO GLUCONICO: En aos recientes la industria de alimentos ha incrementado considerablemente el uso de aditivos alimentarios. Los aditivos alimentarios son sustancias que se aaden a los alimentos con el fin de modificar sus propiedades, su conservacin o el proceso de elaboracin de los mismos. Dentro de los aditivos alimentarios encontramos a los potenciadores de sabor, que como su nombre lo indica, tienen la propiedad de incrementar el sabor de los alimentos, hacindolos ms apetitosos. El glutamato monosdico (GMS), es quizs el potenciador de sabor ms utilizado a nivel industrial.

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La produccin industrial de GMS se lleva a cabo por medio de una fermentacin sumergida en un proceso aireado, utilizando melazas de caa o de remolacha como sustrato y la bacteria Corynebacterium glutamicum (ATCC 13032). Posteriormente hay una serie de operaciones unitarias con el fin de separar el glutamato hasta obtenerlo como cristales. Para un buen desempeo de cualquier sistema biolgico, es necesario mantener el medio ambiente de los microorganismos en condiciones ptimas. Aparte de la temperatura y la composicin del medio, los dos factores ms importantes que afectan este ambiente son el grado de mezclado y la aireacin. La funcin del mezclado es obtener condiciones uniformes en la totalidad del volumen de trabajo del biorreactor. Se tiene reportado que Corynebacterium glutamicum tiene rendimientos del 50%, es decir el 50% de la fuente de carbono se utiliza para la produccin de cido glutmico.

METABOLISMO BIOSINTETICO - FERMENTACIN La ruta biosinttica para la obtencin del acido glutmico es conocida, a partir de glucosa como fuente de carbono utilizando la ruta metablica Embden-Meyerhof y el ciclo pentosa-fosfato se canalizan al ciclo de cidos tricarboxilicos. Las cepas comerciales son mutantes en el ciclo tricarboxilico, con un bloqueo de la alfacetoglutarato deshidrogenas, lo cual permite acumulacin de acido glutmico. La estequiometria de la reaccin con base a glucosa es de 1 mol de aminocidos por 1 mol de glucosa.

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Un proceso de fermentacin tpico de esta fermentacin se presenta a continuacin.

Todas las cepas productoras del cido glutmico tienen un requerimiento de biotina para crecer, carecen o tienen poca actividad de la enzima a-cetoglutarato deshidrogenasa y una alta actividad de glutamato deshidrogenasa. La biotina es una coenzima esencial en la sntesis de los cidos grasos. Durante el crecimiento con glucosa, los microorganismos sper-productores acumulan intracelularmente glutamato, hasta 25 - 35 g de cido L glutmico/ mg peso seco. Por medio de la regulacin por retroalimentacin o retroinhibicin, se bloquea la sntesis de glutamato, salvo que se modifique la permeabilidad de la clula y de esta manera se facilita la salida del aminocido al exterior de la clula. La modificacin de la permeabilidad, se consigue con una deficiencia en el bloqueo biosinttico de la biotina. Una deficiencia en biotina origina cambios en la composicin lipdica de la membrana debido al papel que desempea la biotina en la sntesis de cidos grasos. INGENIERA DE BIOPROCESOS 2013 | Produccin de GMS 4

Los niveles de biotina que se requieren para el medio son crticos a la hora de obtener una buena produccin de cido L- glutmico. Las concentraciones que se usan oscilan entre 1-5 g/L de biotina, por ello una concentracin mayor de 5 g/L produce un aumento en la sntesis de cido oleico, lo cual se manifiesta en un contenido mayor en fosfolpidos en la membrana celular. Las clulas con alto contenido en fosfolpidos son incapaces de excretar cido glutmico originando que la sntesis intracelular se detenga por retroinhibicion. MICROORGANISMO: BACTERIA Se utiliza un cierto nmero de bacterias Gram positivas, inmviles aerobias, dependientes de biotina, de los gneros Corynebacterium, Brevibacterium, Arthhrobacterium y Microbacterium. Estos gneros no esporulados, inmviles y con forma de coco o cocobacilo estn taxonmicamente relacionados y se conocen como bacterias de cido glutmico. Pueden emplear glucosa, acetato o etanol como fuentes de carbono. Las cepas productoras de cido glutmico se caracterizan por: Su requerimiento de biotina Por poseer una muy baja actividad de la enzima -ceto glutarato deshidrogenasa. Predominio de las vas anapleroticas

Cuando se cultivan estas bacterias dependientes de biotina en un medio limitante de biotina, tiene lugar un descenso en el contenido de fosfolpidos de la membrana celular. La disminucin que se produce en la permeabilidad de la membrana facilita la secrecin de cido glutmico. CONDICIONES DEL MEDIO DE CULTIVO: La materia prima requerida en el proceso de fermentacin son: una fuente de carbono para producir el esqueleto del acido glutmico y una fuente de nitrgeno para el grupo amino. Adems, son necesarios como materiales auxiliares: sales orgnicas, elementos de nutricin para el crecimiento de la bacteria, agentes neutralizantes y agentes despumantes.

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En la fermentacin de cido glutmico pueden ser utilizados una amplia variedad de carbohidratos. Entre los monosacridos que se utilizan se encuentran: glucosa y sacarosa; fructosa, maltosa, ribosa, xilosa y las fuentes de carbohidratos no refinados; las melazas de caa de azcar y de remolacha son las ms importantes; as como los hidrolizados de almidn. La melaza es una mezcla compleja que contiene sacarosa, azcar invertido, sales y otros compuestos solubles en lcali que normalmente estn presentes en el jugo de caa localizado, as como los formados durante el proceso de manufactura del azcar. Adems de la sacarosa, glucosa, fructosa los cuales son fermentables, las melazas tambin contienen sustancias reductoras no fermentables.

Los principales azcares en la melaza son la sacarosa (60% - 63% en peso), la glucosa o dextrosa (6% - 9% en peso), y la fructosa o levulosa (5% - 10% en peso); estas dos ltimas constituyen la mayor porcin de los azcares reductores encontrados en los anlisis. Como fuente de nitrgeno se utilizan las sales amoniacales, y el amonio en estado gaseoso o en solucin acuosa. El amonio desempea un papel importante en la produccin industrial del cido glutmico. La alimentacin con amonio permite el control del pH y elimina el problema de la toxicidad del mismo, para ello se utiliza con mucha secuencia la urea. Como sales inorgnicas es necesario utilizar sulfatos de fosfato, magnesio, fosforo, manganeso y hierro. Los factores nutricionales para el crecimiento de la bacteria, as como las cantidades de los mismos a ser usada, deben ser seleccionados cuidadosamente debido a que son variables que afectan grandemente al rendimiento de la fermentacin, una concentracin total de tales elementos de un 0.2% se considera adecuada. Para este fin se usan normalmente sustancias naturales, aun cuando lo ms recomendable es usar aminocidos y vitaminas purificadas (BIOTIN), tales como: D-BIOTIN, DESTHIOBIOTIN, ACIDO 7-8 DIAMINOPERALGONICO y THIAMINA.

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La concentracin ptima de biotina depende de la fuente de carbono utilizada por ejemplo, en medios con el 10% de glucosa la concentracin es de 5 g/L, y en medios menores que el 10% de concentracin de glucosa es menor la concentracin de biotina. Como agente neutralizante al hidrxido de sodio o tambin puede utilizarse carbonato clcico. Como agente antiespumante se puede usar cualquier aceite vegetal o aceite de silicones. En un proceso tpico de fermentacin se logra que la bacteria convierte del 40 al 50 % de la fuente de carbono a acido L-glutmico, alcanzndose concentraciones de 80-100 g/Lt, con una productividad del orden de 20 toneladas por metro cubico de fermentacin por ao.

PRODUCCION INDUSTRIAL La produccin de Industrial se lleva a cabo en procesos discontinuos durante 2-4 das en fermentadores que contienen hasta 450 m3. Se han desarrollado mtodos que utilizan procesos continuos pero no han sido todava implementados en plantas comerciales. Debido a la alta velocidad de degradacin de los azcares y a la alta actividad respiratoria durante la fermentacin se produce un gran requerimiento de oxigeno. Las velocidades ptimas de aireacin para cada proceso individual dependen de las cepas, el sustrato y la va biosinttica. El exceso de calor debe ser disipado simultneamente ya que el proceso que se lleva a cabo a temperaturas de entre 28 y 38C.

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El pH se mantiene constante entre 6.8 y 8.0, dependiendo del proceso; frecuentemente se utiliza UREA para el control del pH y se metaboliza simultneamente como fuente de nitrgeno. Durante el proceso de fermentacin de aminocidos los parmetros crticos como la velocidad de aireacin, la temperatura, el pH y la dosis de antiespumante son todos regulados automticamente y en unos pocos casos estn bajo el control de un ordenador. El acido L-glutmico se produce por fermentacin; para obtener la sal, el acido se neutraliza con hidrxido de sodio. Se obtienen 87 g/Lt de acido glutmico, lo que da un rendimiento de conversin azcar-acido glutmico de 42.3 %, en tanto la conversin de acido glutmico a glutamato monosdico (GMS) es de 92%.

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DESARROLLO DEL INCULO La biomasa inoculada al reactor, se obtiene de un preinoculo que consiste en 50 ml de medio de cultivo en un matraz erlenmeyer de 500 ml el cual, es inoculado con pequeas colonias provenientes de una caja de petri incubada durante 24 horas en una estufa (Felisa) a 30C. Von der Osten, et. al. (1989), desarrollaron un medio definido para el crecimiento de Corynebacterium glutamicum, en el cual el citrato facilita la asimilacin de hierro. Estas concentraciones permiten un crecimiento de 4.7 g/l de biomasa en peso seco (BPS) con una velocidad de crecimiento especfico de 0.36 h-1 y un valor de YX/S igual a 0.43 g de BPS/g de glucosa. El preinoculo crece durante 10 horas, luego se toman 30 ml son transferidos a 3 matraces que contienen 100 ml de medio de crecimiento el cual se mantiene a 30C y 200 rpm en una agitadora mecnica. Para minimizar el oscurecimiento y alcanzar un pH inicial lo ms cercano posible a 7, el medio de crecimiento

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fue esterilizado en tres partes por separado en una autoclave a 121C durante 15 minutos. La primera parte consisti de glucosa y todas las sales minerales, en la segunda parte se incorporaron el sulfato de amonio o urea, las sales de fosfato y los aminocidos, las vitamina biotina fue esterilizada mediante filtracin porque es un compuesto termosensible. Despus de 10 horas, se obtiene una biomasa aproximada de entre 2 y 3 g/l. PROCESO DE PRODUCCION: La melaza de caa cruda deber someterse primero a un proceso de clarificacin y de hidrlisis de la sacarosa, toda vez que las sustancias de partida o sustratos a partir de las cuales la bacteria producir el acido glutamico son la dextrosa y fructosa, las cuales ya se encuentran presentes en la melaza en forma de azcar invertido (partes iguales de dextrosa y fructosa). El porcentaje en el cual se encuentra presente dicho azcar invertido en la melaza fresca, es del 20% mientras que la sacarosa esta en un 30%, esta es la razn de la hidrlisis de la sacarosa, la cual se realiza de acuerdo a la siguiente reaccin:

Por razones de crecimiento de la bacteria, se har el cultivo en dos tanques en serie, en este sentido es importante cuidar de los siguientes puntos relativos al control del proceso: a) Se requiere una seleccin cuidadosa de los componentes en el medio de cultivo, as como la concentracin de los mismos para maximizar el rendimiento. b) Es necesario realizar esterilizacin estricta del medio de cultivo del fermentador. Deber evitarse una exposicin del mismo valor a temperatura muy elevada, no solamente para ahorro de calor, sino tambin para prevenir la desnaturalizacin del medio de cultivo, que se incrementara el tiempo de fermentacin y disminuir el rendimiento. Es adecuado usar un filtro de lana de vidrio para eliminar la contaminacin de aire, el cual debe mantenerse libre de gotas de agua. Luego de agregadas las sales para el crecimiento de la bacteria, los agentes antiespumantes, vitaminas y una solucin de urea esterilizada (para mantener Ph neutro y fuente de nitrgeno), se lleva a cabo la fermentacin de acuerdo a las siguientes reacciones:

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FERMENTADOR Los tanques agitados se construyen generalmente de forma cilndrica. Si es posible la base del tanque debe ser redondeada con el fin de eliminar las esquinas y cavidades donde las corrientes de fluido pueden penetrar y propiciar la formacin de regiones estancadas. Los tanques son de acero inoxidable y estn pulidos a fin de facilitar la limpieza y posterior esterilizacin. SISTEMA DE AIREACIN

El aire se inyecta por la parte inferior del tanque y es distribuido por una corona que posee pequeos orificios espaciados regularmente. El chorro de aire sale de cada orificio es golpeado por las paletas de la turbina inferior generndose miles de pequeas burbujas de aire desde las cuales difunde el oxigeno hacia el seno del liquido. El aire que ingresa en el biorreactor debe estar estril. Un sistema de aireacin consta de cuatro partes mecnicas: fuente de aire; tubera y filtros de entrada; boquilla y difusor de aire; tubera y filtros de salida. Y tres partes de control: control de flujo aire; control de presin de aire; control de difusin de oxgeno disuelto que se explicaran en control de parmetros fsicos y qumicos ms adelante. Fuente de Aire: dado que el sistema de aireacin, en su conjunto, depende de la correcta eleccin del dispositivo que suministrar la fuente de aire, se siguieren dos opciones: Compresor de Aire: su principal caracterstica es que opera con: alta presin y bajo caudal de aire; por eso, cuando operan, es de manera continua o, cuando se requiere capacidad, debe haber un tanque de almacenamiento a alta presin como parte del sistema. Soplador Regenerativo: se caracteriza por funcionar como si fuera una bomba centrfuga de succin y desplazamiento de aire por lo que, opera con presin negativa (vaco) en la succin y presin positiva (compresin) en el desplazamiento. Esterilizacin del aire. La esterilizacin del aire que proporciona el oxigeno en un proceso aerbico, adems de ser vital, representa una demanda de energa muy importante. Un fermentador tpico INGENIERA DE BIOPROCESOS 2013 | Produccin de GMS 11

necesita varias toneladas de aire que deben, en principio, estar libre de microorganismos. Aunque durante la compresin del aire se produce una esterilizacin parcial, el mtodo ms utilizado es la filtracin, en el que el aire pasa a travs de una almohadilla de material fibroso. El efecto del espesor de la almohadilla es logartmico con respecto a la eliminacin de partculas ya que cada unidad de espesor del filtro elimina la misma proporcin de partculas que pasan a travs de l. Esto quiere decir que, aunque los filtros ms espesos eliminan ms partculas, se necesitara un espesor infinito para eliminar todas las partculas del aire. El filtro se esteriliza normalmente pasando a travs de l una corriente de vapor o bien calentndolo elctricamente. Para conseguir una esterilizacin absoluta de aire habra que pasarlo a travs de filtros con poros o aperturas suficientemente pequeas para que impidan el paso de partculas tan pequeas como una fraccin de una micra, que atrapara a las esporas microbianas o a las partculas de virus. No obstante, tales filtros son caros, se obstruyen fcilmente y requieren ser sustituidos con frecuencia, lo que provoca una fuerte cada de presin. Los materiales que se utilizan para los filtros de esta naturaleza son el papel, la cermica no viriada y el papel de parafina o los tapones de plstico poroso. Tubera - Lnea de Aire: esta debe ser de acero inoxidable. Filtros de las Lneas de Aire: para sistemas pequeos de dimetros de tubera estndar, se utilizan filtros en lnea con la tubera; estos son de membrana microporo que filtran el 99,99% de los contaminantes. Para sistemas mayores (industriales) debe disearse un mtodo de esterilizar in situ la lnea de aire; generalmente se hace calentando fuertemente la lnea de aire y luego enfriarla. Las membranas microporo que filtran el aire tienen un punto de burbuja que es la presin de agua mxima que pueden soportan antes de romperse (recuerde que el sistema tiene un medio lquido) y un flujo mximo el cual es el mximo caudal que puede soportar la membrana antes de su ruptura. Sistema de Difusin de Oxgeno Disuelto: debe optimizar al mximo la transferencia de oxgeno disuelto al medio lquido. El sistema consta de dos partes mecnicas: boquilla y difusor de aire; una parte de medicin: sensor de oxgeno disuelto y una de control: controlador de oxgeno disuelto que se explicaran en control de parmetros. Difusor de Aire: los cultivos aerbicos requieren que la corriente de aire estril que se difunda en la forma de miles de pequeas burbujas, desde el difusor de aire, hacia el volumen del lquido; esta accin se realiza mediante un plato o domo cilndrico de acero inoxidable finamente perforado. Alternativamente y si el sistema es pequeo o mediano en escala, se puede utilizar un difusor de material cermico poroso el cual, tiene la ventaja de que, provee una cama ms fina de burbujas (de menor dimetro) y mayor rea de transferencia (volumen de burbujas). SISTEMA DE TRANSMISIN DE CALOR

En los birreactores se suele usar principalmente dos procesos de transmisin de calor. El primero es la esterilizacin discontinua in situ del medio lquido. El recipiente del fermentador que contiene el medio de cultivo se calienta utilizando vapor de agua, se mantiene a la temperatura de esterilizacin por un

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cierto tiempo y luego se utiliza agua de refrigeracin para volver a la temperatura normal. La otra aplicacin es la de control de temperatura durante la operacin. Este sistema tambin consta de una etapa de control que se explicara en control de parmetros fsicos y qumicos ms adelante. SISTEMA DE AGITACIN

Un sistema de agitacin consta de cuatro partes mecnicas y una de control de velocidad que se explicara ms adelante en el control de parmetros fsicos y qumicos. Motor impulsor: suministra la potencia al eje de potencia, dee ser de corriente alterna Eje de trasmisin de potencia: es una barra cilndrica de acero inoxidable, esta transmite la potencia del motor impulsor at raves de las hojas de agitacin. Puerta de entrada del biorreactor: superficie fsica donde se instala un dispositivo de entrada o salida del biorreactor, un anclaje3 o aparato mecnico o de medicin. Blafles: disminuyen la turbulencia ocasionada por las hojas del impulsor que rompen disgregan los cmulos celulares y micelos. Estos mejoran la eficiencia de mezclado. La agitacin se realiza mecnicamente mediante un eje provisto de un rotor accionado por un motor. El efecto rotatorio de rodete consiste en bombear el lquido y crear un flujo regular. El liquido es empujado fuera de rodete, circula a travs de reactor y peridicamente retorna a la regin de rodete. El tipo de flujo existente depende del diseo de rodete. Aunque la mayora de los agitadores son de accin rotatoria, el flujo circular del liquido alrededor del eje del agitador s perjudicial y debe evitarse. En un flujo circular, el lquido se mueve de manera laminar y existe poca mezcla de fluido situado a diferentes altura del tanque. El flujo c circular tiende a formar vrtices por ello se instalan deflectores que irrumpen el flujo circular. Adems del fuljo circular existe tambin un movimiento del flujo en direccin radial y axial. Estos flujos son generados por el rodete son responsables de la mezcla de fluido. Los rodetes se clasifican como axial o radial dependiendo de la direccin que toma el lquido ala salido del rodete Rodete de flujo axial: las Palas estn situadas en forma paralela al eje del agitador y del tanque. Rodete de flujo radial: las palas forman un ngulo inferior a 90 con el plano de rotacin, es el caso de hlices y turbinas de palas inclinadas. Este tipo de rodetes son tiles cuando se necesitan corrientes verticales fuertes, reduce los esfuerzos cortantes, disminuye la turbulencia y la potencia requerida para homogeneizar el mezclado. Si el objetivo que se persigue es una mezcla perfecta se recomiendo impulsores de flujo axial para cultivar clulas sensibles.

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CONTROL DE PARAMETROS FISICOS Y QUIMICOS Control de velocidad del motor: Los motores de induccin de corriente alterna tienen velocidades nominales de rotacin de 1800rpm a 3600rpm. Estas velocidades son muy altas para los sistemas biolgicos causando destruccin de las clulas y microorganismos de cultivo la velocidad de rotacin debe reducirse a un mximo de 600 rpm para que no cause dao celular. Usualmente se coloca a la salida del eje de rotor una caja de reduccin de velocidad. Adicionalmente se coloca un control de velocidad que puede ser anlogo o digital al motor para un control ms fino y preciso de la velocidad de rotacin. Control de temperatura: Mantiene estable y dentro de un rango ptimo requerido por el cultivo para su mximo crecimiento, la temperatura interna del sistema consta de un intercambiador de calor, un controlador de temperatura, un sensor de temperatura y tuberas d conduccin de agua. Para el control se utilizan sondas de temperatura como termmetros y termistores. Los termmetros estn basados en que la resistencia de los materiales aumenta con la temperatura. Se construyen con un hilo de longitud determinada y se enrollan en forma de ovillo para reducir su tamao. Cuando la corriente pasa a travs del ovillo se genera una diferencia de voltaje que se puede relacionar con la temperatura. Al estar encapsulados en una membrana para protegerlos del ambiente tienen un tiempo de respuesta de 5 a 10 segundos. Control de pH: El cultivo puede variar el pH por sus productos de desecho y el metabolismo propio del microorganismo. El sistema de control consta de-. Un sistema dispersor de acido, un sistema dispersor de lcali, un controlador de pH ordena y regula la accin del motor que controlan las bombas peristlticas que suministran el acido y lcali y un sensor de pH. Control y Regulacin del Flujo de Aire: Las membranas que filtran el aire tienen un punto de burbuja y un flujo mximo por encima del cual, se rompen; por eso, se debe regular el flujo de aire y controlar la presin en la lnea de aire. La forma ms econmica de hacerlo es manualmente, con un manmetro para presin. Existe tambin la versin digital, ms costosa, pero que, controla de forma automtica el flujo de aire y la presin segn se escoja.

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Control y Medicin del Oxgeno Disuelto (OD): adems de regular el flujo y la presin del aire en la lnea o tubera, se debe controlar el valor y la concentracin del oxgeno disuelto (OD) dentro del medio lquido; variable que puede medirse en dos formas (parmetros): a) Oxgeno Disuelto (OD): es la concentracin de oxgeno disuelto requerido para la reduccin qumica de un equivalente en iones sulfito (de sodio) a la cantidad de materia orgnica presente en el medio lquido que se debe oxidar. b) Demanda Bioqumica Oxgeno (DBO): es la taza de oxidacin biolgica o demanda bioqumica de oxgeno disuelto requerida por el microorganismo o clula en cultivo para oxidar la materia orgnica presente en el medio lquido. Una probeta o electrodo OD es un sensor que mide la concentracin de oxgeno disuelto en el medio lquido. Similarmente, una probeta o electrodo BOD mide la concentracin de oxgeno disuelto en el medio lquido en equilibrio con el gas. ) En ambos casos, el material de su construccin debe ser acero inoxidable y su especificacin es por la longitud de inmersin (H) y dimetro (D) de la probeta. Para el control de oxigeno disuelto se emplean sondas de oxigeno disuelto. Consisten bsicamente en una camisa de acero inoxidable o de cristal que contienen dos electrodos y un electrolito adecuado. Para separar el electrodo y los electrolitos del caldo de fermentacin, la sonda est recubierta con una membrana. el oxigeno difunde a travs de la membrana y se reduce en el ctodo polarizado negativamente con respecto al nodo. Este produce una corriente que puede ser trasladada a la concentracin del oxigeno. Control de nivel de espuma: La formacin de espuma puede ser un problema muy serio en la fermentacin. Si se permite su formacin puede bloquear los filtros de salida, estimular la contaminacin o reducir el rendimiento. Lamentablemente la mayor parte de los medios de fermentacin facilitan la formacin de espuma y su reduccin se puede conseguir qumica o mecnicamente. El control de la espuma se lleva a cabo utilizando un aparato sencillo de corte, ayudado por control qumico d la espuma, para lo que existe conjunto de agentes antiespumantes. Los sistemas de adicin automtica de antiespumante incorporan una sonda de conductividad inmersa a travs de la parte superior de la vasija de fermentacin. La sonda puede ser simplemente una varilla de acero inoxidable recubierta de tefln con el extremo expuesto. La sonda ser activada tocar la espuma el extremo de la sonda. Una seal ser enviada al sistema de control que conduce la adicin de antiespumante mediante una bomba (en los fermentadores pequeos) o neumticamente ( en los grandes) el antiespumante entra en el fermentador, rompe la espuma que separa el extremo de la sonda y de esta forma se rompe el circuito.

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Es importante adicionar la cantidad adecuado de antiespumante, ya que demasiado antiespumante reducir el contenido de gas afectando por lo tanto la transmisin de oxigeno y puede complicar la recuperacin de producto. RECUPERACIN DE PRODUCTO Una vez que se obtiene el caldo fermentado comienzan las etapas de recuperacin y purificacin del producto .En primer lugar se realiza una filtracin para separar la masa celular y restos del medio de cultivo del lquido ya que el cido glutmico se encuentra en solucin, para ello se hace una microfiltracin, que retiene partculas de 0.1 a 10 m. se usan membranas fabricadas en polipropileno las cuales son resistentes y se trabajan a presiones de 0.5 a 5 kg/cm2, de esta manera se obtiene el filtrado que contiene cido glutmico. Posteriormente esta solucin se hace pasar por una columna de adsorcin utilizando carbn activado con el objetivo de eliminar olores y coloracin. Luego ingresa al evaporador (evaporador de simple efecto), en cual se concentra el cido para facilitar las etapas de separacin siguientes. La solucin concentrada de cido glutmico se neutraliza con hidrxido de sodio concentrado para formar la sal cristalina de glutamato monosdico. Luego ingresa a un filtro de tambor para separar los cristales una vez que se obtienen estos son enviados a un secador de tnel con una humedad del 15% para salir de esta etapa con una humedad del 0.04% aproximadamente. Posteriormente se realiza una reduccin del tamao de partcula (0.2-0.4 mm) en un tamiz y se lo enva a la empaquetadora. Tratamiento de residuos De la microfiltracin se obtienen por un lado los slidos (clulas y partculas del medio de cultivo) los cuales se envan a la planta de tratamiento o se pueden vender a otra industria. En el vapor de simple efecto adems del cido glutmico concentrado se obtienen vapor de agua y otras sustancias voltiles al igual que el vapor de agua que se extrae del secadero de tambor todos estos vapores son sometidos a una destilacin para recuperar el agua luego ingresa a una resina de intercambio inico y es enviada nuevamente al proceso sumistrandola a los equipos que lo requieran.

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Descripcin de las etapas: Microfiltracin

Temperatura de operacin 25C Retiene partculas de 0.1-10 m 2 Presin de operacin: 0.5-5 Kg/cm

Columna de Carbn Activado

Temperatura de operacin: 15 C Presin de operacin: 2 Kg/cm 2 Se adsorbe 2% de cido glutmico

- Evaporador Efecto Simple Temperatura de operacin: 140C

Presin de operacin: 1.1 Kg/cm 2

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Neutralizacin y cristalizacin:

Tanque neutralizador Potencia del motor: 0.5 HP Eficiencia del motor: 70 % RPM: 30 Impulsor: Turbina Rushton 6 paletas Temperatura de operacin: Medio; T entrada: 100 C, T salida 20C Agua enfriamiento: T entrada: 4 C, T salida 20 C Los cristales de MSG se obtienen por una filtracin en un equipo de filtro tambor y son sometidos luego a un proceso de secado en un secadero de tnel donde se obtienen cristales con 15 % de humedad. Finalmente pasan por tamiz mvil de base fija con rango de partculas 0,4-0,6 mm para obtener el producto final con granulometra homognea.

Problema propuesto Calcular las concentraciones mnimas de glucosa y urea que debe contener el medio de cultivo para producir 100g/l de clulas en un fermentador de 50lt.Considerar: del total de glucosa incorporada solo el 60% es usado por el microorganismo. Formula C3.97H6.46O1.94N0.845 PM: 96,97 g/mol 100 g de cl/lt *50lt = 5000 g de cl 96,97 g/mol de cl 47,64 g/mol de C 5000g de cl X =2456,43 g de C PM de glucosa: 180 g/mol 180 g/mol de glucosa 72 g/mol de C 6141,07 g de glucosa = X 2456,43 g de C 6141,07 g de glucosa 60% 10235,12 g de glucosa= X 100% Respuesta: se necesitan 10,23kg de glucosa. INGENIERA DE BIOPROCESOS 2013 | Produccin de GMS 18

PM de urea: 60 g/mol 96,97 g/mol de cl 5000g de cl 60 g/mol de urea 1307,1 g de urea = X

11,83 g/mol de N X = 609,98 g de N 28g/mol de N 609,98 g de N

Respuesta: se necesitan 1,307kg de urea.

BIBLIOGRAFIA: ESTUDIO DE PREFACTIBILIDAD PARA LA INSTALACIN DE UNA PLANTA PRODUCTORA DE GLUTAMATO MONOSDICO UTILIZANDO SACAROSA COMO SUSTRATO Profesores: Mario Ricardo Arteaga Martnez, Octavio Francisco Gonzlez Castillo, Rosaura Guerra Vargas Juan Manuel Morgan Sagatsume. Universidad Iztapalaya-MEXICO Belitz, H.-D. Aminocidos, Pptidos y Protenas, en Qumica de los Alimentos. Zaragoza: Acribia. Garca, G. Q.M. Biotecnologa alimentaria. Mxico, D.F.: Limusa. Biosntesis de L-lisina en con Corynebacterium glutamicum. Dr. Eleazar M. Escamilla Silva.

INGENIERA DE BIOPROCESOS 2013 | Produccin de GMS

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