Ingeniera Bioqumica II Cursada 2006 CULTIVO DISCONTINUO ALIM NTADO !

BATC" ALIM NTADO# Otro modo de operar un biorreactor es empleando la tcnica de batch alimentado (BA) o fed batch. Esta tcnica se define como un cultivo en batch donde se alimenta continuamente medio nutritivo fresco o alguno de sus componentes. Si el nutriente que se alimenta es el limitante del crecimiento, esta tcnica permite controlar la velocidad de crecimiento () del microorganismo. El BA es particularmente til en procesos en los que el crecimiento celular !"o la formaci#n de producto son sensibles a la concentraci#n del sustrato limitante, es decir cuando el rendimiento celular o la poductividad de la biomasa o del metabolito buscado se ven afectados. As$, este mtodo se emplea cuando se quieren evitar fen#menos de inhibici#n por sustrato ! se requiere alcan%ar una alta concentraci#n de biomasa. ES&'E(A

F(t) SR(t)

Vf, Xf VR = Vf - V0 V0, X0, S0

RESERVORIO

BOMBA BIORREACTOR

)onde *(t)+ caudal de alimentaci#n Sr(t)+concentraci#n de sustrato de la alimentaci#n ,f+ volumen final de traba-o ,o+ volumen al inicio de la alimentaci#n .o+ concentraci#n de biomasa al inicio de la alimentaci#n So+ concentraci#n de sustrato limitante al inicio de la alimentaci#n El cultivo BA se inicia a partir de un cultivo en batch, por lo que , o, .o ! So son las condiciones finales de dicho batch. Es posible elegir distintas condiciones de alimentaci#n, !a sea mediante el empleo de caudales variables (* / *(t)), o bien mediante la variaci#n de la concentraci#n de sustrato limitante (Sr/Sr(t)). En el caso del 0raba-o 1r2ctico se utili%ar2 el sistema m2s simple, es decir */cte ! Sr/cte. 13O)'445O6 )E B5O(ASA+ E4'A45O6ES 7 )5SE8O El cultivo puede describirse matem2ticamente. 9a resoluci#n de las ecuaciones as$ obtenidas permitir2 calcular la evoluci#n de la biomasa durante el cultivo, la velocidad espec$fica de crecimiento, ! la productividad. Asimismo se podr2n determinar par2metros de dise:o, tales como * ! Sr. 1ara estudiar la evoluci#n de . durante el cultivo se deben plantear las ecuaciones de balance de materia. S'S03A0O acumulaci#n / suministro ; consumo 1

(<)

d(S. V) x V = F SR dt Yx/s

En este caso el volumen no es constante, como ocurre en cultivos en batch o en continuo. 1or lo tanto la e=presi#n (<) quedar2+ (>) V
dS dV x V +S = F.S R dt dt Yx/s

9a condici#n final del batch es S / ?, pues, como se intenta controlar @, S no puede ser saturante (recordar a (onod). Si SA ?, dS"dt / ?, con lo que (>) se transforma en (B)* . S3 ;
x V
Yx/ s =0

de aqu$, ! recordando que r = / @ . . (C) * . S3 /

rx V Yx /s

esta ecuaci#n indica que la velocidad de producci#n de biomasa se acomoda a la velocidad de suministro de sustrato, es decir que r = puede controlarse De=ternamenteE, modificando * !"o Sr. 9a ecuaci#n (B) es en realidad un l$mite superior !a que dados @, . ! ,, cualquier par de valores *, Sr que satisfagan la condici#n

xV (C) * . S3 Y x/s
har2n que la velocidad de crecimiento est limitada por la velocidad de alimentaci#n. Esta ecuaci#n (B) ser2 mu! til en el momento de dise:ar la alimentaci#n. B5O(ASA 9a velocidad de acumulaci#n de biomasa ser2+ (F) o, reordenando, (G) r= /
1 d(xV) V dt
1 d (x V) Yx/s dt

d(xV) d (xV) = x V o !"# = rx V dt dt

Si se reempla%a en (C) se obtiene (H) * . S3 /

que indica que la velocidad de acumulaci#n de biomasa depende de la velocidad de alimentaci#n de sustrato. 5ntegrando (H), se llega a (I) . , / =o ,o J 7="s * S3 t 'no de los ob-etivos planteados es conocer c#mo var$a la concentraci#n de biomasa con el tiempo. En cultivo en batch, al ser , / cte, .., es proporcional a .. En BA , no es constante, sino que var$a con el tiempo (* / d,"dt). 5ntegrando se tiene (K) , / ,o J * t reempla%ando en (I) ! despe-ando ., se tendr2
(10)

./

x o Vo Y FS t + x/s R Ft $ Vo Ft $ Vo

e=presi#n que describe la variaci#n de . con t a lo largo del cultivo alimentado. 1uede darse el caso en que el aumento de , sea tal que ha!a un efecto de diluci#n que provoque la disminuci#n de la concentraci#n de biomasa. As$, puede ocurrir que la concentraci#n final alcan%ada sea menor que la inicial, pero no as$ la cantidad total ..,. )5SE8O Se desea obtener una concentraci#n final de biomasa . f, con un volumen final ,f. El volumen total adicionado durante el BA ser2+
(11)

,f ; ,o / *.t

donde tf es el tiempo total de alimentaci#n. 4uando t / t f, la ecuaci#n (I) se transforma en

(1%)

.f,f / .o,o J Yx

S3 *.tf

3eempla%ando (<<) en (<>), ! despe-ando Sr queda

(1&)

S3 /

X f V f X oVo Yx s (V f Vo )

9a ecuaci#n (<B) permite calcular la concentraci#n de sustrato limitante en el reservorio. 3esta calcular *, cu!o valor debe ser tal que satisfaga la ecuaci#n (C). En particular, para t / ? (inicio de la alimentaci#n )ser2+
(1')

* S3

o X oVo
Yx
s

((

El valor de tf se calcula a partir de la ecuaci#n (<<). 6O0A+ o puede ser igual a ma= si la alimentaci#n se inicia el final de la fase e=ponencial del batch. )ebe destacarse que si *.S r fuera ma!or que la velocidad de consumo de sustrato, habr$a una acumulaci#n de sustrato en el medio, ! el crecimiento no ser$a limitado. Es interesante conocer la variaci#n de durante el batch alimentado. 3ecordando el balance de materia para la biomasa
d ( xV) 1 d ( xV) = =, / dt xV dt

d ( xV ) = Yx s FS R dt 1or lo tanto se obtiene

(1))

/ Yx s FS R

1 xV

Si se reempla%a (I) en (<F), ser2

(1*)

/ X V + FS Y t o o R x s

FS RYx

e=presi#n que indica que disminu!e con t a lo largo del batch alimentado. 1uede representarse un cultivo en batch alimentado operando en las condiciones halladas.

&

.?M.,?M BA04N t / t?

S? / ? BA04N A95(E60A)O

Al obtener valores de Sr ! *, se ha )5SE8A)O una alimentaci#n para el cultivo en batch alimentado. El caso descrito hasta aqu$ tiene en cuenta que tanto * como S r sean constantes. Es claro que en caso de ser * / *(t) !"o Sr / Sr(t), dicha funcionalidad habr2 de ser tenida en cuenta para resolver las ecuaciones planteadas. 4OE*545E60E )E (A60E65(5E60O 4E9'9A3 9os microorganismos requieren energ$a para mantener ciertas funciones espec$ficas, tales como recambio de material celular, traba-o osm#tico, movilidad, entre otros. Esto es decir que a n cuando el crecimiento celular sea nulo (r = / ?) puede observarse cierto consumo de fuente de carbono ! energ$a. As$, puede escribirse una ecuaci#n para e=presar la velocidad de consumo de la fuente de carbono ! energ$a que tenga en cuenta dicho mantenimiento celular
(1)

rs /

rx + ms x Yx s

con r= / .

(>)

Esta es la famosa ecuaci#n lineal de consumo de sustrato descrita por 1irt, donde+ ms + 4OE*545E60E )E (A60E65(5E60O (g sustrato " g biomasa . hora) 7O="s + rendimiento te#rico (rendimiento obtenido si no hubiera consumo de fuente de carbono ! energ$a para mantenimiento) El valor de 7O ="s es ma!or que 7="s, siendo ste el nico posible de ser obtenido a partir de datos e=perimentales. El coeficiente ms puede variar en un amplio intervalo (?,?< ; ?,< g"g.h). ms aumenta con la temperatura, con el aumento de presi#n osm#tica ! con la fuer%a i#nica. Es evidente que se debe tratar de traba-ar en condiciones tales que m s sea ba-o si se desea obtener un alto rendimiento en biomasa. 9as ecuaciones que describen un cultivo en batch alimentado pueden adaptarse para el caso en que ms ? (lo que tal ve% sea m2s real que considerar ms / ?) El balance de materia para la biomasa ser2
(&)

d ( xV) = =, dt

! para el sustrato
d (sV) = FS R rs V = 0 dt

(C)

que se iguala a ? por ser crecimiento restricto. 3eempla%ando (<) ! (>) en (C) llegamos a
())

d ( SV ) xV = F . SR ms xV = 0 dt Yx/ s

Si introducimos (B) en (F), ser2

'

(*)

F.S R

1 d ( xV) + s xV = 0 Yx / s dt

! reordenando
(,)

d ( xV) + + s Yx / s xV = Yx / s FS R dt

)ebe notarse que si ms / ?, esta es la e=presi#n de velocidad de acumulaci#n de biomasa para batch alimentado. 5ntegrando, con . / .o ! , / ,o para t / ?, obtenemos
(-)
ms / ? ms Q ?

FS R FS R +sYx / st xV = + x o Vo " +s +s
..,

(6O0A)+ para.integrar, hacer la sustituci#n ?., ? P / 7O="s * S3 ; ms 7O="s =,

t? 9a variaci#n de .., con t puede representarse gr2ficamente

En (..,)ma= / cte, ser2 d(..,)"dt / ?. 1or lo tanto, de (H) surge que (..,)ma= / *.Sr " ms Esto significa que todo el sustrato se utili%a en mantenimiento, ! la concentraci#n celular . disminu!e, pues ha! una gran diluci#n del sistema. Esto puede anali%arse desde el punto de vista de d(..,)"dt / ? / r=., o sea, r= / ? 4on estas consideraciones puede evaluarse ms. )e la ecuaci#n (G ) surge que
(.)

ms /

F.S R 1 d ( xV) 1 xV Yx / s dt xV

/)

E=perimentalmente podr2n encontrarse tres casos+ .., / cte, lo cual implica que (<?) F. S R = +s xV

Acumulaci#n de biomasa, es decir d(=,)"dt > ?. 1or lo tanto

(11)

F. S R > +s xV )

0)

)isminuci#n de la biomasa+ d(=,)"dt L ?. En este caso ser2 (<>) F. S R < +s xV

(Este ltimo caso se e=plica mediante el llamado modelo del metabolismo end#geno)