INFORME LABORATORIO BIOQUIMICA

PRESENTADO POR: Laura Gutirrez Vargas C ! "#$%&'&' ()*+ (air) M)g),,-+ C C .$$'%/./ E01i+ Le-+ Ma+za+)

PRESENTADO A: DIEGO ALBARRACIN

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA 2 A DISTANCIA BOGOTA

PRCTICA 1

pH Y SOLUCIONES BUFFER

Resumen.

En el presente informe se encuentran contenidos los pasos y procedimientos seguidos en la preparacin de soluciones Buffer cidas y bsicas, con el fin de determinar de manera experimental el ph para estas soluciones en distintas concentraciones, los resultados obtenidos fueron comparados con el ph terico y as poder deducir los posibles inconvenientes y errores que se cometieron durante el calculo experimental y establecer el por que de la variacin de los ph de estas soluciones.Introduccin.

En esta practica de laboratorio, se trabajo con soluciones buffer, tambi n conocidas como tampn, las cuales son sustancias que afectan la concentracin de los iones de hidrogeno !o hidronios" en el agua. #as soluciones buffer o tampn, son disoluciones que por el agregado de cantidades moderadoras de cidos o bases fuertes mantienen prcticamente constante el ph. $ambi n se dice que una solucin es amortiguadora, reguladora o tampn si la concentracin de protones %&, es decir el ph de una solucin no se ve afectada significativamente por la adicin de peque'as cantidades o vol(menes de cidos y bases.

#os buffer consisten en sales hidroliticamente activas que se disuelven en el agua. #os iones de estas sales se combinan con cidos y lcalis. Estas sales hidroliticamente activas son los productos que resultan de la reaccin entre los cidos d biles y los lcalis fuertes como el carbono de calcio !a partir del acido carbnico e hidrxido de calcio" o entre cidos fuertes y lcalis d biles como el cloruro de amonio !a partir del acido clorhdrico e hidrxido de amonio". )n acido buffer reacciona cuando un acido d bil o base d bil se combina con su correspondiente sal hidrolitica en una solucin de agua, se forma un sistema amortiguador denominado buffer.

*o siempre un sistema buffer es apropiado, por que los iones de algunas sales hidroliticas pueden, por ejemplo, da'ar a los organismos que entran en contacto con el.

#uego de haber obtenido las disoluciones necesarias para reali+ar la practica, procedimos a hallar de manera experimental los ph de estas disoluciones. El ph no es otra cosa que el potencial de hidrogeniones !o peso de hidrogeno", que es regulado por un buffer o amortiguador. ,uando un buffer es a'adido al agua, el primer cambio que se produce es que el ph del agua se vuelve constante. El ph obtenido experimentalmente se comparo con el ph terico, el cual se obtiene mediante el desarrollo del balance de masa y balance de carga para una solucin reguladora tpica, llegando a una ecuacin c(bica donde la incgnita es la concentracin de iones hidronio u oxhidrilo. El p% de las disoluciones amortiguadoras depende de la proporcin de stas entre cido y sal, y a una proporcin dada ser siempre invariable. -e aqu que, cuando se preparan las disoluciones amortiguadoras, se puede calcular tericamente el p% seg(n la frmula.

[H ] = C C
+

cido sal

K o OH =

C base K C sal

-onde Ccido

es la concentracin del cido, C sal es la concentracin de la sal,

Cbase es la concentracin de la base y / es la constante de disociacin electroltica

del cido o base seg(n el caso. -e aqu se deduce que al cambiar las proporciones entre las concentraciones de los componentes de la me+cla amortiguadora, es posible preparar disoluciones con diferentes p%s dentro de los lmites determinados por la constante de disociacin de los cidos o bases. #a

proporcin de los componentes que constituyen la me+cla amortiguadora se quedan invariables. ,ada disolucin amortiguadora se caracteri+a por una capacidad amortiguadora determinada. Esta capacidad es la medida de la accin amortiguadora de la disolucin y se expresa por el n(mero de equivalentes gramo de cido o de base que deben ser agregados a 0 # de disolucin amortiguadora para despla+ar su p% en una unidad. #a capacidad amortiguadora de las disoluciones depende de su concentracin absoluta y con la dilucin disminuye de una manera directamente proporcional al grado de dilucin.

Metodologa.

Reactivos y materiales 1 2 3ipetas graduadas de 04 ml 1 0 5oporte para tubos de ensayo 1 06 tubos de ensayo

1 74 ml de disolucin 4.089 de fosfato potsico monosustituido 1 :4 ml de disolucin 4.089 de fosfato potsico disustituido 1 2; ml de disolucin 4.0 * de cido ac tico 1 :8 ml de disolucin 4.0 * de acetato sdico 1 p% metro

Procedimiento

0. 3reparacin soluciones buffer cidas.

En 7 tubos de ensayo previamente numerados, verter las disoluciones de cido ac tico y acetato sdico en las proporciones dadas en la tabla 0.

Disolucin ,antidad de cido ac tico 4.0 * !ml" ,antidad de acetato sdico 4.0 * !ml" p% calculado p% experimental

Nmero del tubo de ensayo 1 < 2 ; 3 8 : ! 2 " 0

<

$abla 0. 5oluciones Buffer cidas

,on la ayuda del p% metro, determine el p% experimental de cada muestra.

2. 3reparacin de soluciones buffer bsicas. En ocho tubos de ensayo previamente numerados, verter las disoluciones de fosfato potsico monosustituido y fosfato sdico disustituido en las proporciones dadas en la tabla 2.

Disolucin ,antidad de *a%23>6 4.08 9 !ml" ,antidad de *a2%3>6 4.08 9 !ml" ph calculado ph experimental

Nmero del tubo de ensayo 1 <.8 4.8 2 < 0 3 ; 2 = : ! 7 6 " 8 8 # 6 $ : =

$abla 2. 5oluciones Buffer Bsicas

,on la ayuda de un p% metro, determine el p% experimental de cada muestra.

Resultados.

-iagrama de flujo

Nu3erar ,)s tu4)s 0e e+sa5)

Me0ir 5 a6a0ir e, 7),u3e+ 0e 8!i0) ) 0e 4ase !)rres9)+0ie+te

Me0ir 5 a6a0ir e, 7),u3e+ 0e sa, !)rres9)+0ie+te Deter3i+ar e, 9: 0e ,a s),u!i-+

$ablas.

Disolucin

Nmero del tubo de ensayo 1 2 3 ! "

,antidad de cido ac tico 4.0 * !ml" ,antidad de acetato sdico 4.0 * !ml" p% calculado p% experimental

<

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< !.#1 "&32

$abla :. p% calculado y p% experimental para cada solucin preparada !acidas"

Disolucin ,antidad de *a%23>6 4.08 9 !ml" ,antidad de *a2%3>6 4.08 9 !ml" p% calculado p% experimental(

Nmero del tubo de ensayo 1 <.8 4.8 !.!$ !&"$ 2 < 0 !.'% !&#2 3 ; 2 ".2! "&% = : ". ' "&3% ! 7 6 "."$ "&$% " 8 8 ".$" "&#% # 6 $ : = #.23

7 #.%3

$abla 6. p% calculado y p% experimental para cada solucin preparada !bsicas"

,lculos.

p% calculado !acidas".

[H ] = C C
+

cido sal

/ ? 1.74 10 -5 9
C cido ? 4.0 * x < m# @ 04 m# ? 4.< meqAgr x !0mmol@0meqAgr" @ 04 m# C cido ? 4.4< 9 C sal ? 4.0 * x 0 m#@04 m# ? 4.0 meqAgr x !0mmol@0meqAgr" @ 04 m# C sal ? 4.40 9

.09 [H ] = 0 1.74 10 0.01

+

= 1.566 10 4

p% ? A#og [H + ] ? :.;

p% calculado !bsicas".

[H ] = C C
+

cido sal

/ ? 1.38 10 -7 9
C cido ? 4.08 9 x <.8 m# @ 04 m# ? 0.628 mmol @ 04 m# C cido ? 4.0628 9 C sal ? 4.08 9 x 4.8 m#@04 m# ? 4.4=8 mmol @ 04 m# C sal ? 4.44=8

.1425 [H ] = 0 1.38 10 0.0075

+

= 2.622 10 6

p% ? A#og [H + ] ? 8.8;

)n*lisis de resultados.

0. 3ara el clculo del p% de las soluciones buffer bsicas, se hace necesario aclarar que las soluciones preparadas son d bilmente cidas debido a que las sales utili+adas para su elaboracin son cidos d biles, las especies mono y di sustituidas del fosfato sdico tienen carcter cido ya que provienen del cido fosfrico, el cual tiene tres hidrgenos capaces de protonarse. -ebido a lo anterior, el clculo se hace con la ecuacin para p% cidos. 2. En la mayora de los casos el p% calculado estuvo un poco por encima del p% experimental, lo que se puede explicar por el valor de la constante o por del n(mero de cifras significativas que se usaron en los clculos. En general, los p% calculados coincidieron !en un rango aceptable" con los p% medidos experimentalmente.

:. 3ara un mismo tipo de solucin amortiguadora, Bpor qu vara el p% de las diferentes soluciones preparadasC El p% vara de acuerdo a la proporcin entre la concentracin del cido y la concentracin de la sal

+onclusiones.

 5e lograron preparar dos soluciones buffer, una con p% entre : y 7 y otra con un p% entre 8 y =. Due posible determinar el p% experimental usando un p% metro El p% terico fue calculado a partir de la constante de disociacin del cido ac tico y del fosfato monosustitudo. El comparar los valores del p% terico y experimental se encontr que son muy cercanos y que siguen una misma tendencia. ,ibliogra-a.

http.@@dta.utalca.cl@quimica@profesor@ur+ua@cap<@acidobase@acidobase.htm http.@@laguna.fmedic.unam.mx@Feva+que+@464:@constantes de disociacion.html

RESUMEN (USTIFICACION

La 4i);u<3i!a es u+a !ie+!ia ;ue estu0ia t)0as ,as =)r3as 0e 7i0a> ,) ;ue 9rete+0e3)s es a0;uirir !)+)!i3ie+t)s 48si!)s a!er!a 0e ,as 4i)3),e!u,as 5 su 3eta4),is3) !)39re+0ie+0) ,a i+tera!!i-+ e+tre e,,as> ,as 9r)9ie0a0es estru!tura,es 5 =u+!i)+a,es 0e ,as 9ri+!i9a,es 3),!u,as ;ue i+ter7ie+e+ e+ ,a a,i3e+ta!i-+ 5 e, 9a9e, ;ue ?uega+ e+ ,e 3eta4),is3) 0e ,)s 3e0i!a3e+t)s> esta es ,a !,a7e 9ara ,a !)rre!ta i+ter9reta!i-+ 5 u+ 9re0i!!i-+ a!erta0a 0e ,a

D./.RMIN)+I0N D. 1I/)MIN) + .N 2R3/)4 5 1.RD3R)4

6,7./I1648

-eterminar la cantidad de vitamina , o acido ctrico contenida en una muestra dada. -eterminar si los conservadores o aditivos qumicos de productos procesados afectan la vitamina ,.

Reactivos 2Anitroanilina 4.07G en ac tico H %,I *itrito de sodio 4,4;G en %2> Etanol <7G Ecido oxlico 4.08G 5olucin de vitamina ,, reci n preparada !4.2 mg@mI"

1. Procedimiento

En este grupo tomamos la pulpa de un mandarina, 3ara obtener el extracto problema se procede de la siguiente manera. En el caso de las frutas ctricas se toma 0 ml de jugo, se

pesa y luego se agregan 6 ml de cido oxlico al 4,08G, se me+cla bien y se filtra, el filtrado se conserva para hacer la determinacin colorim trica. Jotular ; tubos de ensayo y adicionar los siguientes reactivos Druta problema 0gr &6ml acido oxlico !4.08G" filtrar completar filtrado con 8 ml tomar 0 ml

/ubos +ondiciones B 4.0 4.0 0 4.0 4.0 2 4.0 4.0 : 4.0 4.0 6 4.0 4.0 8 4.0 4.0 7 4.0 4.0 Druta -0 4.0 4.0 Kerdura -2 4.0 4.0

2Anitroanilina, ml *itrito de sodio, ml 9e+clar y esperar la decoloracin Etanol <7G, ml 3atrn vitamina ,, ml Lcido oxlico, ml Extracto problema, ml

:.; HH 0.4 HH

:.; 4.0 4.< HH

:.; 4.2 4.; HH

:.; 4.6 4.7 HH

:.; 4.7 4.6 HH

:.; 4.; 4.2 HH

:.; 0.4 HH HH

:.; HH HH 0.4

:.; HH HH 0.4

9e+clar bien y dejar en reposo cinco minutos *a>% 04G, ml Egua destilada, ml 0.2 :.; 0.2 :.; 0.2 :.; 0.2 :.; 0.2 :.; 0.2 :.; 0.2 :.; 0.2 :.; 0.2 :.;

5e me+cla bien el contenido de cada tubo y se lee en el espectrofotmetro las Ebsorbancias correspondientes a una longitud de onda de 864 nm. Elabore la curva de calibracin e interpole las Ebsorbancias de sus muestras.

JE5)#$E->5 G @ T u 4 ) @ T u 4 ) A T u 4 ) # T u 4 ) & T u 4 ) " T u 4 ) ' T u 4 ) M @ #@ ' G A @ #. / G # @ @# & G & @ @A & G " @ $. / PROM EDIO

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EB5>JBE*,IE es la cantidad de intensidad de lu+ que absorbe una muestra esta varia de acuerdo a la lu+ el tiempo que pasa antes de llevarla a l espectrofotmetro ya que los componentes se sientan y los resultados varan E53E,$J>D>$>9E$J> es un instrumento que tiene la capacidad de manejar un ha+ de Jadiacin Electromagn tica !JE9", com(nmente denominado #u+, separndolo en facilitar la identificacin, calificacin y cuantificacin de su energa. Mste tiene la capacidad de proyectar un ha+ de lu+ monocromtica !de una longitud de onda particular" a trav s de una muestra y medir la cantidad de lu+ que es absorbida por dicha muestra. Esto permite obtener informacin sobre la naturale+a de la sustancia en la muestraN midiendo la absorbancia !Ebs" a distintos largos de onda !l" y graficar estos valores en funcin del largo de onda, formando un espectrograma ,uando se hace pasar un rayo de lu+ por una probeta !habitualmente un tubo transparente estandari+ado para el aparato en uso" con una solucin que se desea anali+ar, algo de la lu+ lo atravesar y otra parte quedar OretenidaO por la muestra. E lo OretenidoO se lo denomina Ebsorbancia, y a lo que pasa. $ransmitancia, existiendo una relacin entre ambas. ,onocida una tabla de valores, es posible calcular la concentracin de la solucin en anlisis. Esto se puede reali+ar con el Dotocolormetro !se colocan filtros especficos de lu+, para que pase slo una determinada frecuencia" o con el Espectrofotmetro !tiene un prisma que descompone la lu+ y permite utili+ar una frecuencia especfica que es la ms (til para anali+ar la sustancia en cuestin".

>B5EJKE,I>*E5

-urante el proceso hubieron interferencias que pudieron haber sido contaminacin u alg(n otro factor como la lu+ el tiempo que transcurri antes llevar la muestra al espectrofotmetro, los componentes pudieron sentarse y al tomar los resultados se alteraron. Jeali+amos titulaciones para determinar la concentracin de cido existente.

,>*,#)5I>*E5.

-eterminamos la cantidad de vitamina , o cido ctrico >bservamos si los conservadores o el proceso de elaboracin no afectan a la vitamina ,

3. +uestionario 0. ,ompare el m todo que utili+ con otro m todo de determinacin de la misma vitamina. -eterminacin de vitamina ,. El cido ascrbico o vitamina , !,7%;>7" se puede determinar por medio de una titulacin yodom trica. #a vitamina , es un agente reductor suave que reacciona rpidamente con el in triyoduro, en esta prctica se genera un exceso conocido de ion triyoduro !I: A " por reaccin de yodato con yoduro, se deja reaccionar y luego el exceso de I: A se titula por retroceso con una solucin de tiosulfato. El m todo se basa en las siguientes reacciones. ;IA & I>: A & 7%& :I: A & :%2> ,7%;>7 & I: A & %2> P ,7%;>= & 2%& & :ILcido ascrbico cido deshidroascrbico I: A & 2!52>:"A2 :IA & !56>7"A2 $iosulfato tetrationato 2BQu ocurrira si no se decolora por completo la solucin de 2Anitroanilina al adicionar nitrito de sodioC El *a*>2 !nitrito de sodio" lo estas utili+ando como un agente oxidante para formal la sal de dia+onio en la amina.

la reaccin es. 2Anitroanilina & *a*>2 AAR 2A*itroAben+enedia+onio hay varias causas por las cuales no se decoloro 0. lo que puede haber pasado es que tu *a*>2, lo hallas preparado mucho tiempo antes y haya perdido su poder oxidante !cosa q es poco com(n... la 2 es mpas com(n". 2. otra causa es que el medio no sea lo suficientemente cido se necesita al menos una concentracin tres veces superior a la del nitrito de sodio en protones en el medio para

que se genre el agente que permite la reaccin *> !generalmente se hace en un medio con exceso de cido %25>6 generalmente esto es porque se debe generar el *> in situ en el medio. %& & *a*>2 AAR %*>2 & *a& !primer equivalente gastado" %& & %*>2 AAR %2> & *>& !segundo equivalente gastado" !y el tercero es para mantener el equilibrio" esto se puede saber colocando una gota del medio en papel de almidon iodulado , si cambia a negro inmediatamente est bien !hay poder xidante *>". :. #a nitroanilina puede haberse oxidado antes produciendo un 0,2Adinitrobenceno, el cual genera *Anitroso derivados.

2. B,ul es la funcin del hidrxido de sodio en la determinacin de la vitamina ,C #a vitamina , es el cido ascrbico y el hidrxido de sodio una base, por tanto este act(a como titulante de la vitamina ,.

:. B,mo se afectara la determinacin si la muestra ha sido tratada previamente con calorC #a vitamina , se oxida rpidamente y por tanto requiere de cuidados al momento de exponerla al aire, calor y agua. 3or tanto cuanto menos calor se aplique, menor ser la p rdida de contenido. #as frutas envasadas por haber sido expuestas al calor, ya han perdido gran contenido vitamnico, lo mismo ocurre con los productos deshidratados. En los jugos, la oxidacin afecta por exposicin prolongada con el aire y por no conservarlos en recipientes oscuros

%IDRBLISIS DE POLICACARIDOS
ALMIDON ST#),>5E

B sD+ a,3 i0) + 3, Ag ua 0es ti,a 0a Na ): EA &NF N!, E&N F $ @

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COLOCAR LOS TUVOS @G' EN BAHO DE MARIA A EBULLICION 2 DE(ARLOS EN EL SIGUIENTE TIEMPO Tie3 9) 0e $ $ # ' % @ @ A

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Fi+a,iza0) e, tie39) 0e i+!u4a!i-+ sa!ar !a0a tu4) 5 0ete+er ,a *i0r-,isis agrega+0) Na): A& N 3, Rea!ti 7)# " 0i+itris i,at) $ $ @ @ @ @ @ @

I+tr)0u!ir t)0)s ,)s tu4)s e+ 4a6) 0e Mar<a a e4u,,i!i-+ 0ura+te " 3i+ut)s 0e?ar e+=riar 5 agregar / 3, 0e agua 0esti,a0a agitar 3e0ir tra+3ita+!ia a "&$ +3 uti,i!e e, B 9ara a?ustar @$$I 0e tra+s3ita+!ia @ gru9 ) tu4) $ @ A # & " $ $A $ $ $A ' $ @" $ $ @A " $ A& A $ A' & $ @. . $ #& . $ #' @ $ A@ & $ '$ @ $ .& @ $ $" @ $ @& . $ A' ' $ &# # $ /. " $ .A A $ $# $ $ A% & $ &' ' $ 'A A $ /' A $ .& @ $ $@ ' $ @' ' $ #. " $ "# & $ /$ ' $ "# / A # & "

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PR)+/I+) 9 ! .:/R)++I6N D. PR6/.IN)4 .N 4.MI;;)4 D. ;.<3MIN64)4 5 +.R.);.4 P6R 46;3,I;ID)D.

JE5)9E* -e la siguiente practica de laboratorio podemos encontrar los diferentes pasos para la extraccin de protenas de una sustancia determinada en este caso de la harina de soya en las cuales encontramos albuminas, globulinas, prolaminas y glutelinas. El rendimiento de estas extracciones los cuales se deducen de los porcentajes de protena total #a solubilidad de una buena cantidad de protena es funcin de la fuer+a ionica, el ph y la concentracin de solvente orgnico.

>BUE$IK>5 Identificacin de la solubilidad de los diferentes tipos de protenaV ,ompara los resultados de la literatura consultada con los obtenidos en la practica

I*$J>-),,I>*

#a extraccin de protenas es considerada a menudo como un paso preliminar para una subsiguiente purificacin o para un estudio electrofor tico, pero de hecho constituye un paso crucial para el estudio de protenas vegetales, ya que el procedimiento de extraccin determina la naturale+a y la estabilidad de las protenas extradas, lo que a su ve+ determina la calidad y la valide+ de los resultados. #a extraccin con buffers acuosos de baja fuer+a inica nos permite recuperar las protenas solubles citoplsmicas y de los espacios intercelulares, mientras que con buffers de alta fuer+a inica tambi n extraemos las protenas ligadas a la pared celular. Econtinuacion explicaremos algo sobre los materiales que vamos a utili+ar en el laboratorio Jeactivo Biuret. El Reactivo de ,iuret es aquel que detecta la presencia de protenas, p ptidos cortos y otros compuestos con dos o ms enlaces peptdicos en sustancias de composicin desconocida. Est hecho de hidrxido potsico !/>%" y sulfato c(prico !,u5>6", junto con tartrato de sodio y potasio !/*a,6>7W6%2>". El reactivo, de color a+ul, cambia a violeta en presencia de protenas, y vira a rosa cuando se combina con polip ptidos de cadena corta. El %idrxido de 3otasio no participa en la reaccin, pero proporciona el medio alcalino necesario para que tenga lugar.

5e usa normalmente en el ensayo de Biuret, un m todo colorim trico que permite determinar la concentracin de protenas de una muestra mediante espectroscopa ultravioletaAvisible a una longitud de onda de 874 nm !para detectar el in ,u2&".

Procedimiento 5e toma un tubo de ensayo y se colocan tres centmetros c(bicos de alb(mina de huevo, es decir la parte transparente. A 5e a'aden 2 centmetros c(bicos de solucin de hidrxido de sodio al 24G. # 9s adelante se agregan 6 8 gotas de solucin de sulfato c(prico diluida al 0G. 6. El resultado es que la me+cla se torna de color violeta, indicando la presencia de protenas.
@

9E$>->#>TIE %2> desminerali+ada

 *a,l al 0 G Etanol al =8G *aoh al 4.0 * Jeactivo de Biuret 5olucin de concentracin conocida

3rocedimiento en -iagrama de flujo

JE5)#$E->5

$EB#E ,ondicione s 5ol patrn albumina Draccin albumina, ml Draccin globulinas Draccin prolaminas B 0 A A A 4.8 0.4 A 4.8 0.4 A 4.8 0.4 4.0 4.: 4.8 4.= 4.< 0.2 A A A A A A A A 2 : 6 8 7 = ; < 04 00 02 0: 06

Draccin glutelinas %2> destilada, ml

A 4.8 0.4 2 0.< 0.= 0.8 0.: 0.0 4.; 0.8 0.4 0.8 0.4 0.8 0.4 0.8 0.4

R.)+/I16 D. ,I3R./ .N /6D64 ;64 /3,64

M;

TJ) 3> 0 $)B> 0 2 : 6 8 7 = ; < 04 00 02 4,4:0 4,4=8 4,028 4,086 4,246 4,2<; 4,420 4,40: 4,447 4,42< 4,4:0 4,407 4,4:6 4,4=2 4,04< 4,087 4,0<0 4,2=; 4,447 4,446 4,0:; 4,2<: 4,486 4,4<0 4,427 4,470 4,008 4.40=0 4,248 4,2=8 4,468 4,446 4,04< 4,222 4,226 4.624 4,022 4,477 4,4=2 4,2:0 4,:47 4,42: 4 4,4:: 4,482 4,448 4,4:2 4,427 4,4:2 4,47; 4,028 4,07: 4,4<; 4,2<7 4.408 4 4.222 4,64< 4,047 4,0<: 2 : 6 8

0: 06

4.4:; 4,42<

4,420 4,404

4,042 4,470

4,4:7 4,47:

4,4=; 4,46;

TJEDI,E -E JE5)#$E->5

,>#>J -E #>5 $)B>5 -E53)E5 -E )* BEX> -E E :4 Y,

E*E#I5I5 -E JE5)#$E->5 En el resultado de la practica determinamos la concentracin de protenas en la harina de soya y el nivel de absorbancia atraves de un fotmetro. $ambi n los diferentes tipos de protena que en ella se encuentra como la albumina, globulinas prolaminas y glutelinas, dando respuesta de su solubilidad. 3or medio de la grafica anterior se pudo determinar la cuantificacin de las fracciones obtenidas por muestra.

BIB#I>TJEDIE

http.@@ZZZ.dclmexico.com@espaGD0ol@proteinaPtotal.pdf

9>-)#> Q)I9I,E >JTE*I,E )*E-

PR)+/I+) D. ;),6R)/6RI6 N3M.R6 " .4/3DI6 +IN./I+6 D. ;) 3R.)4)

JE5)9E* #a ureasa es una en+ima que se utili+a como agente cataltico y en este trabajo se pretende determinar varios factores caractersticos de la ureasa como su temperatura y ph caracterstico en este caso nos permite el estudio sobre la temperatura y la comparacin de micromoles de urasa vs temperatura. >bjetivos -eterminar la concentracin de ureasa y la temperatura sobre la velocidad de reaccin

I*$J>-),,I>* #as reacciones qumicas que ocurren en los sistemas vivientes son tan variadas como complejas. 5in embargo, la naturale+a provee velocidades de reaccin en condiciones por dems suaves, que haran avergon+ar al mejor qumico. #a mayora de las reacciones que ocurren en los sistemas vivos son catali+adas por protenas conocidas con el nombre de enzimas. ,ientos de en+imas han sido aisladas y probablemente existen cientos de miles en la naturale+a. 5u estructura es muy compleja, y puede ser representada como se muestra en la figura 6. #as en+imas reciben su nombre en funcin de su actividad especfica, as, por ejemplo, la en+ima OureasaO catali+a con eficiencia la hidrlisis de la urea, las proteasas act(an sobre las protenas, las amidasas sobre las amidas, etc. $odas las en+imas desde el punto de vista qumico son protenas, pero pueden asociarse con substancias no protenicas, llamadas coen+imas o grupos prost ticos, que son esenciales para la accin de la en+ima. E veces las en+imas son inactivas catalticamente, si no se encuentran en presencia de ciertos iones metlicos.

E la lu+ de muchos estudios se ha logrado establecer que no toda la mol cula de protena presenta actividad cataltica, sino (nicamente una regin relativamente peque'a, la cual se denomina centro activo. #os mecanismos de reaccin de las en+imas son muy complejos, implicando un n(mero de etapas elementales cada una de las cuales puede incluir interacciones complejas entre varios grupos de las mol culas de la en+ima y el sustrato. En las reacciones catali+adas por en+imas las velocidades de reaccin, as como los mecanismos se ven afectados por cambios en la concentracin, el p% y la temperatura.

9E$>->#>TIE -IETJE9E -E D#)U>

+ondiciones )rea 4.28 9, ml Buffer de fosfato p% ptimo, ml %g,l2, gotas $emperatura de incubacin, [,

/ubos B 8 6.8 6 07 0 8 6.8 HH 4 2 8 6.8 HH 07 : 8 6.8 HH := 6 8 6.8 HH 74 8 8 6.8 HH <2

,olocar cada tubo en ba'o de agua a la temperatura indicada por cinco minutos y sin sacarlos agregar. 5olucin de ureasa, ml 4.8 4.8 4.8 4.8 4.8 4.8

Egitar e incubar por 28 minutos a la temperatura correspondiente %g,l2 0G, gotas HH 6 6 6 6 6

$itular con %,l !normalidad conocida" Jesultados, ml de %,l 89 # 79 # 89 # 79# 89 # 79#

$itulacin con acido clorhdrico

B 0 2 : 6 8 :.< 0.2 4.8 8ml 0ml

0 :.6 2.8 4.7 7ml 0.:ml

2 4,6 4,: 4.8 8ml 0,2ml

: 0 0.0 4.= 7ml 2ml

6 0.7 0.7 4.: 8ml 2,;ml

4.: 7ml

4.8

4.6

,oncentracin del acido clorhdrico es de 4,02 *

E*E#I5I5 -E JE5)#$E->5

5egun los resultados obtenidos la ureasa tiene un comportamiento optimo a los 74Y, ya que a otras temperaturas es inestable y no se puede determinar su funcin adecuada y no permite neutrali+ar el acido que se agrega.

BIB#I>TJEDIE

9odulo de bioqumica http.@@ZZZ.utadeo.edu.co@comunidades@estudiantes@cienciasPbasicas@bioqui mica@guiaP8P2.pdf