Identificacin y medicin de la respuesta inmune

PRUEBAS SECUNDARIAS

La prueba a realizar depende de las caractersticas del Ag

SOLUBLE PARTICULADO
PRECIPITACIN

AGLUTINACIN

SUPERFICIE + COMPLEMENTO

FIJACIN DE COMPLEMENTO

Comparacin precipitacin - aglutinacin

Antgeno SOLUBLE

Anticuerpo

Formacin de retculo

Amontonamiento

PRECIPITACIN

AGLUTINACIN

Y
Antgeno PARTICULADO

PRECIPITACIN

Fundamento: un antgeno soluble, al ser puesto en contacto con su anticuerpo especfico, forma complejos inmunes que al encontrarse en proporciones ptimas se insolubilizan dando una reaccin de precipitacin

Precipitacin
Exceso de AC Proporciones ptimas Exceso de Ag

AC ESPECFICO Ag SOLUBLE

MEDIO PROPORCIN

RETCULO SOLUBLE

Y YY YY Y Y Y

Y Y Y Y

Y Y Y Y Y

Ag/mg

MEDIO LQUIDO SLIDO

Test de Ascoli - Valente CARBUNCLO

DIFUSIN DOBLE INMUNOELECTROFORESIS (IEF) INMUNODIFUSIN RADIAL (IDR) CONTRAINMUNOELECTROFORESIS (CIEF)

DIFUSIN DOBLE

Inmunodifusin en Gel de Agar

Fundamento: empleando el medio adecuado (agar gel), es posible hacer migrar por difusin tanto Ag como Ac (difusin doble), de modo que al encontrarse en proporciones ptimas, interaccionen, produciendo una banda de precipitado visible

Ejemplo: test de Coggins para diagnstico de AIE

Test de Coggins para AIE

Placa de Petri
7 5. Antgeno especfico (reactivo)

3. Suero problema

4. Suero testigo (+) (reactivo)

1. Agar gel 6 5 2.Sacabocados

1 7 4 2 3 6 5

1 2 7 3 4 6 2 7 4

2 7 4

6.Cmara hmeda 48 hs

7. LECTURA (fondo oscuro) e INTERPRETACIN

A D. NEGATIVO E. Fuertemente POSITIVO C A. NEGATIVO B. POSITIVO C.
Dbilmente POSITIVO

2 7 4

F. POSITIVO D G

I G. POSITIVO

H. Banda INESPECFICA I. Banda INESPECFICA

APLICACIONES EN VETERINARIA

ANEMIA INFECCIOSA EQUINA PIROPLASMOSIS EQUINA LEUCOSIS BOVINA BRUCELOSIS OVINA BRUCELOSIS CANINA

AGLUTINACIN
Fundamento: un antgeno particulado (ejemplo: bacterias, eritrocitos), al ser puesto en contacto con su anticuerpo especfico en proporciones ptimas, se une por medio de enlaces cruzados. Este complejo de unin agruma, produciendo una reaccin de aglutinacin.

FENMENO DE ZONA O PROZONA

Se produce cuando existe un marcado exceso de Ac con respecto a los determinantes antignicos de la partcula, de tal manera que es poco probable que los dos sitios de unin de la Ig puedan unirse a dos determinantes antignicos de dos partculas distintas, inhibindose de este modo la aglutinacin. Generalmente ocurre en las diluciones bajas de sueros muy positivos.

A G L U T I N A C I N

AGLUTINACIN AGLUTINACIN PASIVA COAGLUTINACIN HEMOAGLUTINACIN / INHIBICIN H. A.

YY + YY Y
Antgeno particulado (reactivo) Suero problema

Proporcin

Y
Medio

Y Y

AGLUTINACIN

Y Y

AGLUTINACIN

En PLACA

En TUBO

Salmonella Brucella Micoplasma

Brucella

BPA

SAT+2-ME

PAL

Aglutinacin en placa: BPA

Prueba del Antgeno Bruclico Acidificado

1. Suero problema

2. Antgeno especfico (reactivo)

Aglutinoscopio + placa de vidrio

8 MINUTOS

3. Mezclar

LECTURA E INTERPRETACIN

Con GRUMOS

Sin GRUMOS

AGLUTINACIN POSITIVA

Negativa

Aglutinacin en tubo: SAT + 2-ME

SAT (Seroaglutinacin en Tubo)

Ig M

Ig G

Se realizan en simultneo

2- ME (2- Mercaptoetanol)

En TUBO: SAT + 2- ME
2. Solucin fisiolgica fenicada (SFF) 1. Suero problema 3. Antgeno

60 MINUTOS
SUERO BPA (+) SAT 1/50
37C-48 hs

1/25

1/100

1/200

Ttulo

2. Solucin 2-ME

2-ME

LECTURA e INTERPRETACIN

37C-48 hs

POSITIVA

INCOMPLETA

NEGATIVA

Aglutinacin en tubo: PAL PRUEBA DEL ANILLO EN LECHE

Fundamento: si en una muestra de leche se encuentra un anticuerpo especfico, y se le agrega un antgeno particulado coloreado, ambos se unirn, formando un complejo Ag-Ac que se adhiere a los glbulos de grasa y asciende con la nata

PAL

2. Antgeno (reactivo) 1. Leche problema

LECTURA e INTERPRETACIN

37C-1 hora

++

+++

++++

APLICACIONES EN R. A.

BRUCELOSIS BOVINA
Prueba TAMIZ COMPLEMENTARIAS DEFINITORIA VIGILANCIA EPIDEMIOLGICA

BPA ELISA I SAT + 2-ME FPA

ELISA C

FC PAL - ELISA I

PRUEBAS TERCIARIAS
v IN VITRO NEUTRALIZACIN

v IN VIVO

PROTECCIN

NEUTRALIZACIN
Fundamento: estimacin de la capacidad de una anticuerpo de neutralizar la actividad biolgica de un antgeno cuando se mezcla con l in vitro

PROTECCIN
Fundamento: forma de anlisis de neutralizacin que se realiza totalmente in vivo para determinar la capacidad protectora de un anticuerpo especfico frente a su antgeno

RESPUESTA INMUNE CELULAR

v PURIFICACIN DE LINFOCITOS v IDENTIFICACIN LINFOCITOS T v IDENTIFICACIN LINFOCITOS B v PRUEBA DE FUNCIN DE LINFOCITOS