ENZIMAS

Enzimas
Importncia Biomdica
Histrico
Nomenclatura
Classificao
Caractersticas Gerais
Estrutura Enzimtica
Enzimas como Catalisadores
Componentes da Reao Enzimtica
Ligao Enzima-Substrato
Propriedades das Enzimas
Cofatores
Enzimas
Importncia Biolgica
Biocatalisadores
regulam as velocidades de todos os
processos fisiolgicos
Papel fundamental na sade e na
doena
CONCEITO
As enzimas so protenas com
propriedades catalisadora sobre as
reaes que ocorrem nos sistemas
biolgicos, sendo especficas para
seus substratos.
ENZIMAS - HISTRICO
Catlise biolgica incio sc. XIX
digesto da carne: estmago;
digesto do amido: saliva.
Dcada de 50
Louis Pasteur - concluiu que a
fermentao do acar em lcool pela
levedura era catalisada por fermentos =
enzimas.
Eduard Buchner (1897)
extratos de levedo podiam fermentar o
acar at lcool;
enzimas funcionavam mesmo quando
removidas da clula viva.
ENZIMAS - HISTRICO
James Sumner (1926)
Isolou e cristalizou a urease;
Cristais eram de protenas;
Postulou que todas as enzimas so
protenas.
John Northrop (dcada 30)
Cristalizou a pepsina e a tripsina
bovinas;
Dcada de 50 sc. XX
75 enzimas isoladas e cristalizadas;
Ficou evidenciado carter protico.
Atualmente + 2000 enzimas so conhecidas.
ENZIMAS
Definio:
Catalisadores biolgicos;
Longas cadeias de pequenas molculas
chamadas aminocidos.
Funo:
Viabilizar a atividade das clulas,
quebrando molculas ou juntando-as
para formar novos compostos.
Com exceo de um pequeno grupo de
molculas de RNA com propriedades
catalticas, chamadas de RIBOZIMAS, todas
as enzimas so PROTENAS.
Aminocidos:
H
R C* COOH
NH2
Enzimas
Protenas especializadas
Aceleram reaes qumicas
Enzimas
1 Catalisadores de reaes nos
sistemas biolgicos
2 Grande eficincia cataltica
3 Alto grau de especificidade por
seus substratos
4 Funcionam
em solues aquosas
em pH e temperaturas fisiolgicas
Enzimas
Protenas
Ribozimas
RNAs
Simples Conjugadas
Holoenzima
Apoenzima Cofator + apoenzima
Estrutura
Enzimtica
Enzimas
Com exceo de um pequeno
grupo de molculas de RNA que
possuem atividade enzimtica e
so chamadas de RIBOZIMAS,
todas as enzimas so PROTENAS
Enzimas
Catalisadores
Aumentam a velocidade das reaes
Atuam diminuindo a energia de ativao
ENZIMAS PROTENA
Classificao protenas
Protenas globulares Protenas
fibrosas
Estrutura das protenas
Primaria Secundaria Terciria
Quaternria
ENZIMAS
Protenas globulares
Protenas com alto peso
molecular, maioria entre 15 a
1000 Kilo Daltons Unit (KD)
OBS: 1 Dalton = 1 unidade de
peso molecular (AMU)
ENZIMAS ESTRUTURA
RNA
Estrutura
Enzimtica
Ribozimas
Se covalente
Apoenzima ou
Apoprotena
Grupo Prosttico
Holoenzima
Cofator
Coenzima
Protena
Pode ser:
on inorgnico
molcula orgnica
ENZIMAS CARACTERSTICAS GERAIS
Apresentam alto grau de especificidade;
So produtos naturais biolgicos;
Reaes baratas e seguras;
So altamente eficientes, acelerando a velocidade
das reaes (10
8
a 10
11
+ rpida);
So econmicas, reduzindo a energia de ativao;
No so txicas;
Condies favorveis de pH, temperatura,
polaridade do solvente e fora inica.
Enzimas - Nomenclatura
No sculo XIX - poucas enzimas identificadas
Adicionava-se sufixo ASE ao nome do substrato
enzima que hidrolisam
gorduras (lipo - grego) - LIPASE
amido (amylon - grego) - AMILASE
protenas - PROTEASE
Nomes arbitrrios
Tripsina e pepsina - proteases
Catalase - H
2
O
2
Enzimas - Nomenclatura
No sculo XX - | quantidade de enzimas
descritas
Nomenclatura existente se tornou ineficaz
Dcada de 60 - IUB - Unio Internacional
de Bioqumica adotou um novo sistema de
nomenclatura e classificao
mais complexo
sem ambigidades
baseado no mecanismo de reao
Enzimas - Nomenclatura
Sistema Oficial IUB
Cada enzima - n
o
de cdigo (E.C.-
Enzime Comission) com 4 dgitos
que caracterizam o tipo de reao
1
o
dgito - classe
2
o
dgito - subclasse
3
o
dgito - sub-subclasse
4
o
dgito - indica o substrato
ENZIMAS CLASSIFICAO
1. Oxido-redutases (reaes de oxidao-reduo ou transferncia de eltrons)
1.1.atuando em CH-OH
1.2.atuando em C=O
1.3.atuando em C=O-
1.4.atuando em CH-NH
2
1.5.atuando em CH-NH-
1.6.atuando em NADH, NADPH
2.Transferases (transferem grupos funcionais entre molculas)
2.1.grupos com um carbono
2.2.grupos aldedo ou cetona
2.3.grupos acil
2.4.grupos glicosil
2.7.grupos fosfatos
2.8.grupos contendo enxofre
3.Hidrolases (reaes de hidrlise)
3.1.steres
3.2.ligaes glicosdicas
3.4.ligaes peptdicas
3.5.outras ligaes C-N
3.6.anidridos cidos
Classificao das enzimas segundo a Comisso
de Enzimas.
ENZIMAS CLASSIFICAO
4.Liases (catalisam a quebra de ligaes covalentes e a remoo de molculas de
gua, amnia e gs carbnico)
4.1. =C=C=
4.2. =C=O
4.3. =C=N-
5.Isomerases (transferncia de grupos dentro da mesma molcula para formar
ismeros)
5.1.racemases
6.Ligases (catalisam reaes de formao de novas molculas a partir da ligao entre
duas pr-existentes, sempre s custas de energia)
6.1. C-O
6.2. C-S
6.3. C-N
6.4. C-C
Classificao das enzimas segundo a Comisso de
Enzimas.
Enzimas - Classificao
AH
2
+ B A + BH
2
Exemplo cido Ltico Desidrogenase
COOH NADH NAD
ox
COOH

CO H-C- OH

CH
3
CH
3
cido Pirvico cido Ltico
1. Oxirredutases transferncia de eltrons
Lactato desidrogenase
Enzimas - Classificao
1. Oxirredutases transferncia de eltrons
Etanol
Acetaldedo
Enzimas - Classificao
Exemplo: Hexoquinase
2. Transferases
transferncia de grupos
Enzimas - Classificao
Exemplo: Aminotransferase - TGP
2. Transferases- transferncia de grupos
Enzimas - Classificao
Exemplo: Glicognio Sintase
2. Transferases
transferncia de grupos
Enzimas - Classificao
3. Hidrolases - reaes de hidrlise
Lactose
(o-D-glicopironosil-|-D-
galactopiranose )
H
2
O
Glicose + Galactose
Exemplo: Lactase
Enzimas - Classificao
3. Hidrolases - reaes de hidrlise
Exemplo: Quimiotripsina
Enzimas - Classificao
4. Liases
adio ou remoo
de grupos (H
2
O,
NH
4
+
, CO
2
).
Ex: Fumarase
Enzimas - Classificao
5. Isomerase transferncia de grupos dentro da mesma
molcula, formao de ismeros
Triose Phosphate
Isomerase
Enzimas - Classificao
6. Ligases reaes de sntese com consumo de ATP
Exemplo: Piruvato carboxilase
Enzimas - Classificao
ATP + D-Glicose ADP + D-Glicose-6-fosfato
IUB - ATP:glicose fosfotransferase
E.C. 2.7.1.1
2 - classe - transferase
7 - sub-classe - fosfotransferase
1 - sub-subclasse - fosfotransferase que utiliza grupo
hidroxila como receptor
1 - indica ser a D-glicose o aceptor do grupo fosfato
Hexoquinase
FATORES QUE
INFLUENCIAM A
ATIVIDADE ENZIMTICA
pH
O efeito do pH sobre a enzima deve-se s
variaes no estado de ionizao dos
componentes do sistema medida que o pH
varia.
Enzimas grupos ionizveis, existem em
estados de ionizao.
TEMPERATURA
| temperatura dois efeitos ocorrem:
(a) a taxa de reao aumenta, como se observa na maioria
das reaes qumicas;
(b) a estabilidade da protena decresce devido a
desativao trmica.
O efeito da temperatura depende:
- pH e a fora inica do meio;
- a presena ou ausncia de ligantes.
Atemperatura tima para que a
enzima atinja sua atividade
mxima, a temperatura mxima
na qual a enzima possui uma
atividade cte. por um perodo de
tempo.
CONCENTRAO DAS ENZIMAS
Velocidade de transformao do S em P ~ qtidade de E.
Desvios da linearidade ocorrem:
Presena de inibidores na soluo de enzima;
Presena de substncias txicas;
Presena de um ativador que dissocia a enzima;
Limitaes impostas pelo mtodo de anlise.
Recomenda-se:
Enzimas com alto grau de pureza;
Substratos puros;
Mtodos de anlise confivel.
CONCENTRAO DOS SUBSTRATOS
[S] varia durante o curso da reao medida que S convertido
em P.
Medir Vo = velocidade inicial da reao.
[E] = cte.
[S] pequenas Vo| linearmente.
[S] maiores Vo| por incrementos cada
vez menores.
Vmax [S]| Vo| insignificantes.
Vmax atingida E estiverem na forma
ES e a [E] livre insignificante, ento, E
saturada com o S e V no | com | de [S].
vo
[S]
Vmax
CINTICA ENZIMTICA
Cintica Enzimtica estudada para:
Determinar as constantes de afinidade do S e
dos inibidores;
Conhecer as condies timas da catlise;
Ajudar a elucidar os mecanismos de reao;
Determinar a funo de uma determinada
enzima em uma rota metablica.
ENZIMAS
CINTICA ENZIMTICA
Victor Henri (1903): E + S ES
1913
Leonor Michaelis -Enzimologista
Maud Menten - Pediatra
E + S
K1
K-1
ES
Kp
E + P
Etapa rpida Etapa lenta
Enzimas
Energia de ativao
Diferena entre os nveis de energia do
estado basal e do estado de transio
Representao esquemtica das alteraes de energia
que acompanham a formao do complexo ES, do
estado de transio e a subseqente liberao do
produto da reao
ENZIMAS
CINTICA ENZIMTICA
v =
Vmax [S]
Km + [S]
[S]
v
Vmax
2
v = Vmax
v = Vmax [S]
Km
Km
1
2
3
1- [S]+ Km>>[S]
2- [S]| [S]>>Km
3- v = Vmax
2
Enzimas
ordem da reao
Quando a formao de
P for proporcional [S]
a velocidade da reao
de 1
a
ORDEM
Quando a velocidade
da reao independe
da [S] a reao de
ORDEM ZERO
V
[S]
[S]+ [S] <<Km
v = Vmax
v = Vmax [S]
Km
v = K[S]
[S]| [S]>>Km
ENZIMAS
MTODOS GRFICOS
max
V
1
[S]
max
V
m
K
v
1
+ =
Grfico dos Recprocos de Lineweaver-Burk
1
[S]
1
v
-1
Km
1
Vmax
Km
Vmax
Inclinao =
ENZIMAS
INIBIO ENZIMTICA
Qualquer substncia que reduz a velocidade de uma
reao enzimtica.
INIBIDORES
REVERSVEIS IRREVERSVEIS
COMPETITIVOS NO COMPETITIVOS INCOMPETITIVOS
ENZIMAS
INIBIO COMPETITIVA
Inibidor competitivo concorre com o S pelo sitio ativo da E
livre.
I anlogo no metabolizvel, derivado de um S
verdadeiro, S substituto da E ou um P da reao.
[substrato] necessria para
obter a mesma [ES]
afinidade da enzima pelo
substrato
I compostos com estrutura
molecular lembra S
Km aparente
da enzima
ENZIMAS
INIBIO COMPETITIVA
E + S
ES E + P
EI
I
+

K
1
K
I
K
2
] [
1
)
] [
1 (
1 1
] [ )
] [
1 (
] [
] [
] ][ [
max max
max
S K
I
V
K
V v
S
K
I
K
S V
v
EI
I E
K
I
m
I
m
I
+ + =
+ +
=
=
Michaelis-Menten
Lineweaver-Burk
ENZIMAS
INIBIO COMPETITIVA
1- sem inibidor
2- com inibidor na concentrao [I1]
3- com inibidor na concentrao [I2] > [I1]
ENZIMAS
INIBIO NO-COMPETITIVA
Inibidor no-competitivo se liga reversivelmente,
aleatria e independentemente em um stio que lhe
prprio.
I no tem semelhana
estrutural com o S
[substrato] no diminui a
inibio
Km da enzima NO se altera
Vmax na presena do
inibidor
ENZIMAS
INIBIO NO-COMPETITIVA
E + S
ES E + P
EI + S
EIS
+
I
+
I
K
S
K
I
K
2
K
I
K
S
(
)
] [
1 (
1
] [
1
)
] [
1 (
1
)
] [
1 ]( [ )
] [
1
] [
] [
] ][ [
] [
] ][ [
max max
max
I I
m
I I
m
I
K
I
V S K
I
V
K
v
K
I
S
K
I
K
S V
v
EI S
I ES
EI
I E
K
+ + + =
+ + +
=
= =
Lineweaver-Burk
Michaelis-Menten
ENZIMAS
INIBIO NO-COMPETITIVA
1- sem inibidor
2- com inibidor na concentrao [I1]
3- com inibidor na concentrao [I2] > [I1]
ENZIMAS
INIBIO INCOMPETITIVA
Inibidor incompetitivo se liga reversivelmente, em
um stio prprio, ao complexo ES.
I no tem semelhana
estrutural com o S
I favorece a formao do ES
Km e Vmax da enzima
ENZIMAS
INIBIO INCOMPETITIVA
E + S
ES E + P
EIS
+
I
K
S
K
2
K
I
)
] [
1 (
1
] [
1 1
] [
] [
1
] [
] [
1
] [
] ][ [
max max
max
I
m
I
m
i
I
K
I
V S V
K
v
S
K
I
K
S
K
I
V
v
EIS
I ES
K
+ + =
+
+
+
=
=
Lineweaver-Burk
Michaelis-Menten
ENZIMAS
INIBIO INCOMPETITIVA
1- sem inibidor.
2- com inibidor na concentrao [I1]
3- com inibidor na concentrao [I2] > [I1]
ENZIMAS
INIBIO IRREVERSVEL
I se combina com um grupo funcional, na molcula
da E, que essencial para sua atividade.
Podem promover a destruio do grupo funcional
Forma-se uma ligao COVALENTE entre o I e a E.
Vmax + parte da E completamente removida do
sistema e Km permanece a mesma.
K
2
E + P
E + S
ES
K
1
EI
+
I
ENZIMAS
ENZIMAS REGULATRIAS
No obedecem a cintica de Michaelis-Menten.
Controlam a etapa limitante em uma cadeia de
reaes enzimticas.
Tem sua atividade cataltica aumentada ou diminuda
em resposta a determinados sinais, molculas
sinalizadoras (pequenos metablicos ou cofatores).
Classes de enzimas reguladoras:
Enzimas alostricas;
Enzimas reguladas pela modificao covalente
reversvel.
ENZIMAS
ENZIMAS REGULATRIAS
Enzimas alostricas
Funcionam atravs da ligao no-covalente e reversvel
de um metablito regulador chamado modulador;
Moduladores podem ser inibidores ou ativadores;
So maiores e mais complexas, possuem duas ou mais
cadeias polipeptdicas.
Enzimas reguladas pela modificao covalente
reversvel
Grupos qumicos so ligados covalentemente e
removidos da enzima reguladora por enzimas , podem
ser: fosfato, adenosina monofosfato, grupos metil, etc.
ENZIMAS
ENZIMAS REGULATRIAS
1- Comportamento tipo Michaelis-Menten.
2- Comportamento Alostrico.
Papel da enzima no aumento da
velocidade de reao atravs da reduo
da entropia
Enzimas
Componentes da Reao Enzimtica
E + S E S E + P
E - Enzima
S - Substrato(s)
ES - Complexo Enzima -Substrato
P Produto(s)
Enzimas
Componentes da Reao Enzimtica
E + S E S P + E
Substrato se liga ao
STIO ATIVO
da enzima
Enzimas - Via Metablica
Substrato inicial
Enzimas
Substratos
Complexo ES (Enzima-Substrato)
Ligao Stio Ativo
Chave-fechadura
Incaixe induzido
Liberao do Produto
+
Enzima inalterada
Enzimas
Ligao da Enzima ao Substrato
2 modelos propostos:
Chave-Fechadura
Encaixe Induzido
Enzimas
Ligao da enzima ao substrato
Modelo
Chave-Fechadura
Modelo Encaixe Induzido
Modelo Encaixe Induzido combinado com a tenso do substrato
Enzimas
Modelos de ligao da enzima ao
substrato
Enzimas
Centro Cataltico / Stio Ativo
Regio da molcula enzimtica que
participa da reao com o substrato
Pode possuir componentes no proticos
cofatores
Possui aminocidos auxiliares e de contato
Enzimas
Propriedades
Enzimas = Catalisadores
Propriedades
Aceleram as reaes
No so consumidos na reao
Atuam em pequenas concentraes
No alteram o equilbrio das reaes
Enzimas - Propriedades
- No so consumidos na reao
H
2
O
2
H
2
O O
2
+
Catalase
E + S E + P
ES
Enzimas - Propriedades
- Atuam em pequenas concentraes
1 molcula de Catalase
decompe
5 000 000 de
molculas de H
2
O
2
pH = 6,8 em 1 min
Nmero de renovao
TURNOVER NUMBER
Enzimas - Propriedades
- No alteram o estado de equilbrio
no nvel basal (forma estvel), S e/ou P contm uma
quantidade caracterstica de energia livre
o equilbrio entre S e P reflete a diferena em energia
livre dos seus estados basais
Caminho da Reao
Energia de ativao sem enzima
S
P
Energia de ativao com enzima
Diferena entre
a energia livre
de S e P
Enzimas
Especificidade
Comparao entre a hidrlise de vrios
substratos por:
Catalisador Inorgnico e Enzima
Enzimas- Especificidade
Hidrlise catalisada pelo
HCl a quente
Protenas Aminocidos
Triacilgliceris Glicerol +
c. Graxos
Glicognio Glicose
Hidrlise catalisada por uma
enzima especfica para
o glicognio
Protenas Inalteradas
Triacilgliceris Inalterados
Glicognio Glicose +
Maltose +
Oligossacardeos
ramificados
Enzimas
Especificidade Estereoqumica
Enzimas
Especificidade de Grupo
Tipo de ligao e um dos fragmentos
devem ser especficos
Ex: maltase digesto de glicdios
Glicose Glicose
Maltose
Metade da molcula deve ser a glicose
Glicose Ex: ose
Frutose
Galactose
Arabinose
Xilulose
Enzimas
Cofatores
Enzimas - Cofatores
Poro protica
APOENZIMA
Cofator
HOLOENZIMA
on
Coenzima
Grupamento
prosttico
Molculas orgnicas ou inorgnicas que
condicionam a atividade das enzimas
Enzimas - Cofatores
ons
Cofatores inorgnicos
Exemplos:
Magnsio - Reaes de fosforilao
Mangans- Superxido dismutase mitocondrial
Zinco - Anidrase carbnica, Carboxipeptidase
Enzimas - Cofatores
Ativadores - ons
Magnsio - co-substrato para o ATP
Enzimas - Cofatores
Mg
+2
como Ativador
Hexoquinase - transferncia do fosfato
do ATP para a glicose
Enzimas - Cofatores
Coenzimas
Cofatores orgnicos
Maioria deriva de vitaminas hidrossolveis
Classificam-se em:
transportadoras de hidrognio
transportadoras de grupos qumicos
Coenzimas transportadoras de
hidrognio
Coenzima Abreviatura Reao
catalisada
Origem
Nicotinamida adenina
dinucleotdio
NAD
+
Oxi-reduo
Niacina ou
Vitamina B
3
Nicotinamida adenina
dinucleotdio fosfato
NADP
+
Oxi-reduo
Niacina ou
Vitamina B
3
Flavina adenina
dinucleotdio
FAD Oxi-reduo
Riboflavina ou
Vitamina B
2
NAD
+
Nicotinamida
adenina
dinucleotdio (B3)
FAD Flavina Adenina Dinucleotdio (B2)
Exemplo da ao do FAD como coenzima
Reao da sucinato desidrogenase
Coenzimas transportadoras
de grupos qumicos
Coenzima Abrev. Reao catalisada Origem
Coenzima A CoA-SH
Transferncia de
grupo acil
Pantotenato ou
Vitamina B
5
Biotina
Transferncia de
CO
2
Biotina ou
Vitamina H
Piridoxal fosfato PyF
Transferncia de
grupo amino
Piridoxina ou
Vitamina B
6
Metilcobalamina
Transferncia de
unidades de carbono
Cobalamina ou
Vitamina B
12
Tetrahidrofolato THF
Transferncia de
unidades de carbono
cido flico
Tiamina
pirofosfato
TPP
Transferncia de
grupo aldedo
Tiamina ou
Vitamina B
1
Sntese da CoA
+
4-fosfopantotenato
+
4-fosfopantotenoilcistena
+
4-fosfopantetona
+
Defosfocoenzima A
+
(B
5
)
forma ligaes com grupamentos acil ( -C R )
O
Piridoxal fosfato (B
6
)
Coenzima: Transaminao
Descarboxilao
Desidratao