Elementos Transponveis DEFINIO Elementos Transponveis so seqncias de DNA que tem capacidade de se inserirem em outros locais do genoma de forma

que estes podem alterar a expresso gnica e causar mutaes, dessa forma eles tambm so chamados de DNAs saltitante. A quantidade de copias podem variar dependendo do elemento. Eles podem ser classificados de duas formas uma quanto ao mecanismo de insero e o outro quanto a autonomia de insero. Eles geralmente apresentam baixa seletividade de stio de insero. Os elementos que possuem autonmia de insero so assim chamados, pois possuem todo aparato para que ocorra a transposio dentro da sua seqncia, ou seja, eles codificam todas seqncias que os capacitam a fazer a transposio. Os elementos no-autnomos, no possuem toda a estrutura necessria e, por isso necessitam de outras protenas, codificadas por outras partes do genoma, para que ocorra a transposio. DESCOBERTA Os elementos de transposio foram inicialmente conceituados por Barbara McClintock em 1940 antes mesmo da descoberta do DNA. Ela observou em seus experimentos com gros de milho que a cor era alterada aps os cruzamentos e viu que existiam elementos controladores que modificavam a atividade de alguns genes, pois possuam a capacidade de mover-se entre os cromossomos. Esses elementos se moviam quando as clulas se dividiam e, mutando o gene somente em algumas dessas clulas. Essas transposies aconteciam nos genes reguladores da pigmentao e isso influenciava a colorao. Com isso Barbara McClintock refutou a idia de que o DNA era estvel, quebrando o dogma da poca. Somente em 1970 que outros estudos com mosca da fruta e bactrias mostraram que os elementos capazes de remover-se e inserir-se em outros locais so os maiores constituintes do genoma. Barbara McClintock ganhou o Prmio Nobel de Fisiologia ou Medicina de 1983. Os elementos

transponveis j foram identificados em animais, plantas, bactrias, leveduras e em fungos filamentosos CONTRIBUIO NA EVOLUO DO GENOMA As mutaes so um dos principais fatores evolutivos, pois criam variabilidade gentica e a seleo natural pode atuar, o que vital para a evoluo. Os transposons criam mutaes, alterando a arquitetura genmica, modificando a estrutura e a regulao gnica. Eles podem tambm se inserir em um gene, inativando-o ou mudando sua expresso. O estudo dos elementos transponveis contribuem tambm na pesquisa pois so ferramentas para estudo filogentico. Possuem maquinaria semelhante a replicao de vrus e so importantes para estudo de evoluo. Eles tambm so responsveis pelo alto custo do seqenciamento, assim como outros tipos de sequencias repetitivas.

CLASSES Os elementos transponveis so divididos em grupos que possuem aspectos em comum, classe, subclasse, ordem, superfamlia, famlia, subfamlia. A classe que o nvel mais alto divide esses elementos em dois grandes grupos, os de classe I e classe II, pela presena de um intermedirio, o RNA. Os elementos de classe I so aqueles que necessitam de RNA como intermedirio, so estes o retrotransposons. Esse tipo codifica uma transcriptase reversa que transcreve reversamente o RNA em DNA, gerando uma nova cpia. O de Classe II no possui intermedirio de RNA, e dividido em duas subclasses. Na subclasse 1, a transposio feita pela enzima transposase que cliva em ambas as fitas quando reconhece o elemento de ordem TIR. Na subclasse 2 os elementos desse tipo no cliva a dupla fita, eles ento, copiam e colam, envolvendo apenas uma das fitas. Essas divises so feitas com base nas caractersticas estruturais, organizao interna, tamanho no stio-alvo gerado na insero e similaridades nas seqncias.

ELEMENTOS TRANSPONVEIS EM PROCARIOTOS 1) Elementos de insero de sequncia (IS) 2) Transposons (Tn) 3) Bacterifago Mu 1) Elementos de insero de sequncia (IS) Foram os primeiros elementos transponveis identificados como insero espontanea em operon de bactrias. So pequenos de 800 a 1500 pares ladeado por 10-40 repeties terminais invertidas. Carregam a informao gentica necessria para transposio ( gene para enzima transposase). A transposio requer que o elemento IS transporte um promotor que ser reconhecido pela RNA polimerase da clula hospedeira. 2) Transposons (Tn) Similares aos elementos IS, mas mais complexos estruturalmente e carregando genes adicionais. Existem dois tipos: transposons compostos e transposons no compostos. Transposons compostos: algum segmento de DNA que flanqueado por duas cpias de IS e regio de cdigo central contm gene de resistncia a antibiticos. Transposon no composto: no termina com elementos IS, mas contm repeties invertidas terminais. 3)Bacterifagos Mu

Usam a transposio replicativa como o mecaniso normal para a replicao vegetativa do genoma do fago durante crescimento ltico e para a insero do profago durante lisogenia. Duas funes Mu codificadas pelos genes A e B afetam diretamente a transposio Mu-mediada. A funo A absolutamente necessria para todos os processos relacionados com a transposio, se mutante para esse gene sero defeituosos para a integrao, a replicao de DNA. Mutantes para o gene B ainda podem promover rearranjos de DNA mas em baixas frequncias.

As funes A e B so necessrias para associao fsica entre Mu contendo plasmdeo e o cromossomo alvo bacteriano aps induo de Mu. Provavelmente um dos passos iniciais da transposio. Os genes A e B esto localizados adjacentes ou muito prximos um ao outro numa das extremidades do genoma do fago. So separados por uma regiao pequena reguladora que codifica um fago repressor clssico mais um segundo determinante imunidade sendo que ambos regulam negativamente a expresso destes genes. Em contraste com a classe I e classe II de transponsons, as extremidades do Mu no tem repeties invertidas terminais ( apenas 2pb). Homologias entre as extremidades ocorrem mas no esto simetricamente dispostos.

ELEMENTOS TRANSPONVEIS EM PLANTAS A poro ativa dos elementos transponves (TEs) comporta apenas uma pequena parte deles. Milhares, e at milhes, so encontrados na forma inativa. Os primeiros estudos sobre os TEs basearam-se nos fentipos mutantes encontrados no milho, atravs da anlise de fentipos instveis que so expressos na camada aleurona do milho, uma regio de biossntese de pigmento. Os alelos induzidos por TE de diversos genes na via de biossntese da antocianina (pigmento) d origem a diferentes padres com respeito ao tamanho, frequncia e intensidade dos setores. Os primeiros TEs reconhecidos foram o Dissociation (Ds) e o Activator (Ac), sendo o primeiro no autnomo e o segundo autnomo. A anlise de dados da genmica de plantas mostra que dois tipos de TEs, os MITEs e os LTR retrotransposons, tem maiores contribuies para as plantas que os LINEs, SINES e os no-LTR-retrotransposons. Os MITEs so pequenas regies de DNA repetidas e elementos no-autnomos que predominam na regio no codificante dos genes da grama. Tambm so encontrados em outros organismos. A maioria dos MITE pode hoje ser classificado em dois grupos: Tourist-like MITEs e os Stowaway-like MITEs. Duas tecnologias tem sido utilizadas para estabelecer relaes entre cada grupo e as famliasde transposases de plantas

recentemente descobertas. So a bottom-up e a top-down, onde a primeira usa a sequncia de MITE para identificar a transposase relacionada, enquanto a outra conecta uma fonte ativa de transposase a uam famlia de MITE. Os LTR retrotransposons so os componentes mais largos dos genomas das plantas. So membros da classe I. Foram primeiramente descobertos como fontes de mutaes espontneas de tabaco e milho. Um dos exemplos mais conhecidos o Bs1, que faz insero na alcohol dehydrogenase1 gene (adh1). RETROTRANSPOSIO POR UM ELEMENTO Ty As classes de retrotransposons tanto LTR (condicionada regio extracromossomica) como no LTR (condicionada ao alvo) so abundantes nos eucariotos. Dentre os retrotransposons LTR, esto vrios elementos Ty diferentes de S. cerevisiae e o elemento gypsy de Drosophila. Os retrotransposons no LTR incluem os LINEs (elementos nucleares intercalados curtos, junto com certos tipos de introns). Os LTR retrotransposons esto muito intimamente relacionados com os retrovrus discutidos a seguir: A transposio de Ty. Um elemento Ty, integrado no cromossomo de DNA da clula hospedeira, transcrito e produz uma molcula de mRNA de fita simples com a cauda de poli(A) caracterstica dos mRNA eucariticos. O mRNA transportados do ncleo ao citoplasma, onde traduzido e produz vrias protenas Ty, inclusiva a transcriptase reversa (pol), a integrasse (int) e uma protena estrutural denominada Gag. O mRNA encapsulado em uma partcula similar a vrus, em que a transcripstase reversa catalisa a formao de um DNA de fita dupla linear complementar, em duas etapas. O DNA transportado de volta para dentro do ncleo com o auxilio da VPL. Dentro do ncleo, a capa externa da VLP, que consiste na protena Gag, trocada, e a integrasse insere o DNA duplex dentro do cromossomo hospedeiro em um local novo. Praticamente todas as etapas so auxiliadas por uma ou mais protenas codificadas pela clula hospedeira. Os elemenos ty so retrotransposons. De fato, suas similaridades com o retrovrus vo alm de seu mecanismo de transposio: o RNA de ty encontrado nas clulas empacotado em uma espcie de partcula viral. Assim, esses elementos parecem ser

vrus, mas no podem sair de uma clula nem infectar novas clulas. Os elementos Ty se integram, preferencialmente, em regies cromossmicas especificas. Por exemplo, os elementos Ty1 quase sempre se transpem no DNA na regio anterior a um stio de iniciao de transcrio pela enzima RNA polimerase III da clula hospedeira. Porque os elementos Ty apresentam preferencia regional pelo sitio-alvo? Acredita-se que essa especificidade pelo alvo permita a manuteno do transposon no organismo hospedeiro, pois concentra a maioria de suas inseres em regies afastadas das regies importantes do genoma, envolvidas diretamente na sntese de protenas. A utilizao desse tipo de transposio direcionada especialmente importante em organismos com genomas pequenos e com alta densidade genica (rico em gene), como as leveduras. RETROTRANSPOSONS Os retrotransposons, elementos de transposio que se amplificam atravs de um intermedirio RNA, compem mais de 60% de certos genomas vegetais e so geralmente ativados pelo estresse. Essa ativao poderia ter um impacto sobre a expresso dos genes celulares e estar associada resposta do hospedeiro a certos estmulos. Os retrotransposons replicativos no modo de transposio, por meio de um intermedirio de RNA, aumentam rapidamente os nmeros de cpias de elementos e, assim, podem aumentar o tamanho do genoma), retrotransposons podem induzir mutaes por fora ou por dentro dos genes. Alm disso, as mutaes induzidas, retrotransposons so relativamente estveis, porque a sequncia no local de insero mantida atravs da replicao. Retrotransposons copiam o RNA e depois voltam para o DNA que podem integrar de volta para o genoma. O segundo passo da formao de DNA pode ser realizado por uma transcriptase reversa, que codifica o retrotranspon. Transposio e sobrevivncia de retrotransposes no genoma do hospedeiro possivelmente esto reguladas tanto por fatores do hospedeiro e codificados, para evitar os efeitos deletrios sobre hospedeiro, o retrotransposon mantm uma ligao que j existe h milhes de anos

entre os seus hospedeiros. A maioria dos retrotransposons so muito antigos e, por meio de mutaes acumuladas, no so mais capazes de retrotranspor-se. Retrotransposons so tambm conhecidos como elementos transponveis classe I, so constitudas de dois sub-tipos, a repetio terminal longa (LTR) e os retrotransposons no -LTR . LTR retrotransposons possuem LTRs que variam de 100 bp a mais de 5 kb de tamanho, so sub- classificados em Ty1 copia like e Ty3 gypsy like e em grupos de Pao BEL como base tanto no seu grau de similaridade de sequencia ou ordem dos produtos de genes codificados. Retrotransposons no-LTR consistem em dois sub-tipos, elementos longos intercalados (Lines) e elementos curtos intercalados (Sines). Os LINEs so elementos longos intercalados so um grupo de elementos genticos que so encontrados em grandes nmeros em genomas eucariticos. Eles so transcritos para um RNA usando um promotor de RNA polimerase II que reside no interior da fita. Os SINEs so elementos curtos intercalados que so sequncias curtas de DNA (<500 bases), representam as molculas de RNA reversamente transcritas originalmente transcritos pela RNA polimerase III em tRNA , 5S RNA ribossmico e outros pequenos RNAs nucleares. SINEs no codificam uma protena funcional de transcriptase reversa e dependem de outros elementos mveis de transposio.