Metabolismoquimitrofo de la energa:respiracinaerobia

T-r

-n el captuloanterior hemosaprendidoque algunas clulas satisfacen susrequisitosenergticos mediantela fermentacin aerbica, bien porquesean anaerobias estrictas porque o bien seanclulas anaerobias facultativas, capaces de funcionar en situaciones de ausencia o escasez de oxlgeno. Sin embargo, tambinhemosvisto quela fermentacin produce nicamentecantidades limitadas de energa. En ausencia de un aceptorde electrones externo-uno que no forma parte por s mismo de la ruta glucoltica- los que seliberan de un compuesto electrones orgnicode tres carbonos(gliceraldehdo-3-fosfato) setransfieren al final a (piruvato), y la diferencia otro compuesto detrescarbonos de energa estal que slo segeneran dos molculas de ATP por cadamolcula de glucosa. En resumen, la fermentacin puedesatisfacer los requisitosenergticos pero el rendimientodeAIP de una clula, esbajo,porquela clulaslo tiene acceso a una partelimitada de la energalibre potencialmente disponible de las molculasoxidables, que usa como sustratos. Adems,la fermentacintiene a menudo como consecuencia, la acumulacin de productosde desecho como el etanolo el lactato,quesi seacumulan,sontxicosparala clula,a no ser, claro est,que seanexcretados por la clulay metabolizadosposteriormente en otro lugar del organismo.

Respiracin celular: maximizando el rendimiento del ATP

Todo esto cambia dramticamente cuando se trata de la respiracin celular, o para abreviar, respiracin.Cuando se dispone de un aceptor de electrones externo, se puede dar la oxidacin completa del sustrato, obtenindose ms ATP.

Seentiendecomorespiracin celular, elflujo deelectrones en o a travs deuna membrana, desde coenzimas reducidas hasta un aceptor de electrones, normalmente acompaado de la produccin deATP.Posteriormente abordaremos el signifiy de <produccin cado de <membrana> de ATP>de esta definicin.Por ahora,centrmonos en las coenzimas rey los aceptores ductoras de electrones. Yahemosvisto que por el catabolismo la coenzima reducidaque segenera glucoltico de los azcares o compuestos relacionados es el NADH. Como veremos a continuacin, otrasdos coenzimas,EAD (dinucletido y flavina) y coenzima de adenina Q (o ubiquinona), tambinrecogen los electrones, que seliylos transfieberandesde compuestos orgnicos oxidables ren al aceptorfinal de electrones, a travsde una seriede transportadores electrnicos. Paramuchosorganismos, incluyendoal autor y los lectoresde estelibro, el aceptorfinal de electrones esel oxgeno,laforma reducida de este aceptor esel agua,yseconoce al procesoen su conjunto como respiracin aerobia. Mientras que la gran mayora de los quimitrofos en la Tierra llevan a cabo la respiracinaerobia,existenvarios aceptores finalesde electrones que son usados por otros organismos, especialmentepor las bacterias. Algunos ejemplos aceptores y de susformasrede estos alternativos ducidas son el azufre(S/H2S), los protones(H+/Hr) y los ionesde hierro (Fe3+/Fe2*). Losprocesos respiratorios que incluyenaceptores de electrones como stos, no necesitan el ogeno moleculary son,por tanto,ejemplos de respiracin anaerobia.La respiracinanaerobiadesempea un papel importante en los ciclos ambientales de elementos como el azufre,el hidrgenoy el hierro,y contribuyensignificativamentea la economaenergtica de la biosfera. Nosotros,sin embargo, nos centraremos aquen la respiraRespiracin celular: maximizando el rendimiento delATP

273

porquerepresenta cin aerobia la fuenteprincipaldel metabolismo energtico en el mundo aerbico del quesomos partenosotros y otrosorganismos superiores.

Pondremos especialatencin en la mitocondria (Figura 10.1) porque la mayor parte de la produccin aerbica de AIP tiene lugar dentro de esteorgnulo.

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DEL TCA

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(b) Localizacion de la resprracion aeroba dentro de la mitocondria Figura10.1 Papelde la mitocondria (a) La mitocondria desempea en la tespitacin aerobia. un papel centralen la respiracin aerobia; la mayor parte de la produccinde AIP de la respiracin en las clulas eucariotas ocurre en esteorgnulo.(b) La oxidacinde la glucosa y de otros azcares comienzaen el citosolcon 1aglucolisis(etapa1), producindose piruvato.El piruvato setransportaa travsde la membrana mitocondrial interna y seoxida dentro de 1amatriz a Acetil CoA, el primer sustratodel ciclo del cido tricarboxlico(TCA) (etapa2). El Acetil CoA sepuedeformar tambin por la p-oxidacinde los cidosgrasos. (etapa3a) estacopladoa un El transportede electrones bombeo de protones(etapa3b), conservndose la energa del transportede electrones como un gradienteelectroqumico di protonesa travsde la membranainterna de la mitocondria (o de Ia membranaplasmtica, en el casode los procariotas). La energa del gradientede protonesseusa,en parte,para la sntesis de ATP a partir de ADP y fosfatoinorgnico(etapa4).

274

quimitrofo Captulo 10 Metaboljsmo delaener$a: respiracin aerobia

a,
como en la fermentacin, el pirude aceptorde electrones vato esoxidadoposteriormentea un compuestodenomiA (acetilCoA),queentra enla efapa2, nadoacetilcoenzima podede electrones, Con el ogenocomo ltimo aceptor (TCA). Estaruta cclicaoxiel ciclodel cidotricarboxlico por la glucolisis da completamente desde el piruvatogenerado mos empezar los carbonos entrantes a COry consery preguntarnos cmo secataboliza el piruvatoy cmo se va la energa reducidas, en forma de coenzimas llue son,en median- s mismos, la energa libre producidaen el proceso, conserva ricos en energa. compuestos por el Captute la produccindeATP.Comoya sabemos de electrones, La etapa3 consiste en el transporte es deaerobia cir, la transferencia lo 9, los productosterminalesde la respiracin de electrones desde coenzimas reducisonel dixido de carbonoy el agua(vaseReaccin9.12). das hasta el oxgeno,acopladoa un transporteactivo,o la con las que comienza stas son las mismasmolculas de protones a travs de una membrana. La transbombeo, fotosntesis, exigencia del flujo cclico de materia entre el desde lascoenzimas hastael ogeno ferenciade electrones mundo quimiotrpicoy el fototrpico.Por otra parte,el y aporta la energaque dirige el esun procesoexergnico aerobia esconsi- bombeode electrones de la respiracin rendimientoenergtico a travsde la membranaen la que En vezde mayorque el de la fermentacin. derablemente los transportadores, generando un graestnembebidos la dos molculas de ATP por cadamolculade glucosa, deprotones a ambosIadosde la memdienteelectroqumico puedeproducir potencialmente hasta brana.En la etapa respiracin aerobia 4,la energia de este gradiente de protoen procade ATP por molculade glucosa 38 molculas de ATP. Este modelode nesseusaparaimpulsarla sntesis de ATP por cadamolriotas,y entre 36 y 38 molculas de oigeno sedenomina/osfodeATPdependiente sntesis del tipo dependiendo cula de glucosaen eurocariotas, rilacinoxidativa. celular. Nuestro objetivo en estecaptulo es comprenderlos El oxgenohace posible todo esto sirviendo como el procesos 2,3 y 4 en la Figura10.lb. sealados comoetapas y proporcionandoun aceptor terminal de electrones, ( 1) quocurreconel piqueremos examinar En particular, modo de reoxidacincontinuadel NADH y de otrascoenruvato (y otros sustratosoxidablescomo los lpidos y los duEstasmolculas aceptanelectrones zimasreducidas. (2) cmo median en situaciones aerbicas; aminocidos) orgnicos las coenzimas rante la oxidacinposteriorde intermediarios y otros transportadores de electrones la Transoxidables. derivadosdel piruvato u otros sustratos desde exergnica de electrones sustratos oxitransferencia al oxgenopor medio de fieren despus estoselectrones (3) cmo seusala energa del transpordables al oxgeno; de electrones unidos a de transportadores una secuencia paramantenerel gradiente electroqumico te de electrones aerobia incluye, de protones; la respiracin membrana. De esta manera) gradiente y (4) cmo la energla de este dirige tanto rutasde oxidacinen lasqueseliberanlos electrones la sntesis el estudio del metabolisdeATP. Comenzaremos transde sustratosorgnicosy transferidosa coenzimas centrndonos en Ia mitocondria, mo energtico aerbico, en los que las portadores, concomitantes como procesos quedesempea este orgnudebidoal papeldeterminante (portadoras de electrones) sonreoxireducidas coenzimas energtico eucariota. lo en el metabolismo al oxgeno,con la dadaspor el transporte de electrones produccinindirectade ATP. la glucolisis, el ciclodelTCA, La respiracin incluye y la sintess de ATP el transporte de electrones la respiracin aerobiaen cuatro etapas, Consideraremos por oxidativosmediados dos que serefierena los procesos y otros dos,que incluyenla reoxidacinde las coenzimas y la produccin de AIP. Estasetapasse muescoenzimas por supuesto, todosestran enla Figura10.lb.En la clula, y al mismo tiempo. ocurrencontinuamente tos procesos arbitrariaspuedesertil para Su divisin en cuatro etapas su discusin,pero tenga en cuentaque ninguna de estas cadauna esuna parte inteetapas funciona aisladamente; general. gral del proceso respiratorio que hemostratado en el La etapaI esla ruta glucoltica Captulo 9. La glucolisistiene el mismo resultadoen cony anaerbicas: la oxidacinde la glucodicionesaerbicas sa a piruvato. Pero el destino del piruvato es diferenteen (vaseFigura presencia de oxgeno 9.8).En lugarde servir

ptoduce mucha msenet$a aerobia Larespiracin quela fermentacin

La mitocondria: donde tiene lugar todo el proceso

aerobiacomenzar de la respiracin con Nuestroanlisis de la mitocondria,ya quela mayorparte una descripcin aerbicoocurre dentro de del metabolismoenergtico Debidoa esto, Ia mitocondriaesfrecuenteesteorgnulo. la <central energtica> dela clulaeucariomentellamada RudolphKlliker,descriel bilogoalemn ta.Yaen 1850, de lo que l llam <unaserieordenada de bi la presencia queestas partculas> musculares. Seobserv en lasclulas lo que llev a partculas aisladas sehinchaban en el agua, partculas de queestas estaban roKllikera la conclusin Actualmente de una membrana semipermeable. se deadas partculas y secreeque comomitocondrias conoce a estas que fueron englobadas por clulas provienende bacterias y quedaron peroquesobrevivieron msgrandes, comorepermanentes en el citoplasma de la clulahospesidentes Teora Endosimbitica, Anexo 11A). dadora(vasela
donde lugar todo el proceso 275 Lamitocondria: tiene

Hacecasi100aosque empezaron a acumularse pruebasque sugeran la participacinde esteorgnuloen procesosoxidativos. En 1913,por ejemplo,Otto Warburg mostr que estos orgnulospodan consumirogeno.Sin embargo,la mayor parte de nuestro conocimientoacerca de la funcin de la mitocondria en el metabolismoenergtico provienedel desarrollode la centrifugacindiferencial, desarrollado por Albert Claude(vaseFigura I2A.2). En 1948se consiguiaislarmedianteestatcnica, mitocondriasintactasy funcionalmente activas. Posteriormente, EugeneKenned Albert Lehningery otros, mosrraron que estosorgnuloseran capaces de llevar a cabotodaslas reacciones del ciclo del TCA, el transportede electrones y la fosforilacinoxidativa. Lasmitocondras se encuenttan con ftecuenca en los lugatesen los que la necesidad de ATPes mayol Las mitocondriasestnpresentes en prcticamente todas las clulasaerbicas de los organismos y son eucariotas elementos destacados de la mayorade los tipos celulares cuando se examinan al microscopio electrnico (Figura I0.2).Lasmitocondrias seencuentran, tanto en lasclulas quimitrofascomo en las fottrofasy por lo tanto son elementos comunesno slo en los animales, sino tambin

en las plantas.Su presenciaen clulasfottrofas nos recuerdaque tambin los organismos fotosintticos pueden llevar a cabola respiracin, de la que dependen para satisfacersusnecesidades energticas y de carbonodurantelos periodosde oscuridad, y en todo momentoen los tejidos no fotosintticos, como lasraces de lasplantas. La importanciade la mitocondria para cubrir lasnecesidades celulares deATR sereflejafrecuentemente en la 1ocalizacin de lasmitocondriasdentro de la clula.Muchas veces, lasmitocondrias seencuentran agrupadas en lasregiones celularescon mayor actividad metablica,donde los requerimientos de AIP son mayores. Lasclulasmusculares son un buen ejemplode esto(taseFigwa4.13). En estas clulas, las mitocondriasseencuentranorganizadasen columnasa lo largo delasfibrillas responsables de la contraccin. Otros ejemplos de estas localizaciones estratgicas delasmitocondrias seobservan enlos ciliosy flage(vaseFigura los o en la colade los espermatozoides 4.I2). fedesintetconectadas en vez Sonlas mitocondrias de orgnulos independientes? Cuandoseobservan mitocondrias en micrografas electrnicascomo las de las FigurasI0.2 y 4.13,suelen aparecer como estructuras ovaladas, con forma de salchicha. con

Retculo endoplsmico rugoso

Grnulos
de glucgeno

\.1

Mitocondrias

Peroxisomas

0,5pm Fi$uta10.2 La impottanciade las mitocondlias, Las mitocondrias son elementosdestacados en estafotograffa de microscopio electrnico de una clula heptica de rata. Semuestran tambin otros componentescelulares,como el retculo endoplsmico rugoso,los grnulos de (TEM). glucgeno ylos peroxisomas

276

quimitrofo Captulo 10 Metabolismo dela energa: respiracin aerobia

una longitud de variosmicrmetrosy con un dimetrode 0,5-1,0lm, si bien puedentener formasy tamaosdiferentesdependiendo del tipo celular.Estaapariencia ha fomentadola ampliamenteaceptada visin de que las mitocondrias son entidadesseparadas y que son orginulos grandes y muy numerosos. De hecho,una mitocondria de esas dimensiones tiene un tamao similar a una bacteriay representa el orgnu1o msgrandedespus del ncleoen la (vaseFigura mayoa delasclulas animales 1A.1).(Enlas clulasvegetales, los cloroplastosy algunasvacuolasson normalmentems grandes incluso que las mitocondrias). Sehan hechoclculos basados en micrografas electrnicasde cortestransversales, que indican que el nmero de mitocondriaspor clulaesmuy variable,en un rango que va desde una o muy pocaspor clulaen muchosprotistas, hongos y algas(y en muchasclulasde mamferostambin) hastamilespor clulaen algunostejidosde vegetales superiores y de animales. Por ejemplo,seestimaque cada hepatocitode mamfero contienealrededorde 500-1.000 mitocondrias, a pesarde que slounaspocasde ellasseven en una seccin fina tlpica preparadapara microscopa electrnica, comosemuestra en la Figura10.2. El conceptode que las formas mitocondrialesque se observanen las micrograflaselectrnicas representan orgnulosindependientes de tamaoy abundancia conocido cambi a partir del trabajo de Hans-PeterHoffrnan y CharlotteAvers.Despus de examinarseriescompletas de

cortesfinos a 1olargo de toda la clulade una levadura, dichos investigadores concluyeronque las formas ovaladas que seobservaban en micrograffasindividualesrepresentaban porcionesde una nica mitocondria grandey muy ramificada(Figura10.3). Estosresultados que el sugieren nmero de mitocondriaspresentes en una clulapuedeser considerablemente menor quelo que sesuele pensar, y que el tamaode una mitocondria puedesermucho mayordel que se puede calculara partir de las formas individuales observadas en cortestransversales de micrograflas electrnicasde cortesdelgados. Losestudios de clulas vivasintactas, examinadas con el microscopiode contraste de fases o mediantemicroscopa de fluorescencia, utilizandocolorantes fluorescentes especficos de las mitocondrias,suponenun apoyo aadido al conceptode que la mitocondriasforman una red interconectada msque un conjunto de numerosos orgnulosseparados. Estas investigaciones ponen de manifiestoque las clulas vivascontienenmitocondriasgrandes y ramificadas en un estado de flujo dinmico,con segmentos separndoy fusionndose sepor gemacin con otra mitocondria. y lasiiustraciones Gran partedel anlisis de estecaptuIo sebasarn en la visin convencional de lasmitocondrias pero recuerdeque lo que como unidadesindependientes, entendemoscomo mitocondrias individuales, bien podran se$ al menos en algunostipos celulares, partes de una gran red dinmica.

Figuta10.3 El modelode las redesmitoconddalesintelconectadas. Estemodelo sepropuso tras examinar seriescompletasde cortes finos a lo'largo de una clula epidrmica. Semuestra que los perfiles mitocondriales indiduales, observadosen micrograftas de secciones finas, pueden representarpartes de una red ms grande de mitocondrias interconectadas. Algunos estudiosde microscopa de contrastede fasesen clulasvivas apoyan estemodelo.

l mitocondria: donde tiene lugar todo el proceso 277

Las membranas extelna e internadefinendos compaimientos separados En la Figura 10.4serepresenta una mitocondriatpica-o puedeque un pequeofragmentode una red mucho ms grande--;.De cualquiermanera,la presencia de dos membranas,llamadasmembranaexternae interna, es una caracterstica distintiva.La membranaexternano representa una barrerade permeabilidad significativa para el pasode ionesy molculas pequeas, ya que disponede unos canales proteicos transmembranosos denominadosporinas, que permiten el pasode solutosde un pesomolecularde hasta5.000.Estas protenasson similares a las que encontramosen lasmembranas externas delos cloroplastos delas plantaso en la membranaexternad9 las bacterias Gramnegativas. Debidoa quelasporinaspermitenel libre trasiego de pequeas molculas e ionesa travsde la membrana externa,el espaciointermembrana entre la membranaexterna y la interna de la mitocondria o del cloroplasto,es esencialmente continuocon el citosol,con relacina los solutos importantespara la funcin de estosorgnulos. Sin embargo,las enzimaslocalizadasen el espaciointermembrana se encuentran precisamenteconfinadasall porque lasenzimas, al igualqueotrasprotenas solubles, sondemaparapasara travsde lasporinas. siadograndes A diferenciade la membranaexterna, la membranainterna de la mitocondria s representa una barrerapara la permeabilidad de la mayorlade los solutos, separando, por tanto, los espacios intermembranay del interior del orgnlo, en dos compartimientos separados.

La membranainterna de la mayora de las mitoconllamadas driaspresenta unasinvaginaciones caractersticas crestas,que aumentan enormementesu superficie.Por ejemplo,en una mitocondriaheptica normal, el reade la membranainternaesaproximadamente cincoveces mayor que la de la membranaexterna. Gracias a estagran superficie, la membranainterna puedealojar un gran nmero de complejosproteicosnecesarios para el transporte de y electrones la sntesis de ATR aumentandode estamanera la capacidadde la mitocondria para producir ATP.La Figura 10.5muestralos detalles estructurales de las membranasmitocondriales internay externamediantela tcnicade criofracturadescritaen elApndice. Pngase especial atencinen la gran densidad deprotenas asociadas con las dos carasde fractura de la membranainterna.Lasprotenasrepresentan hastael75o/o del pesode la membranainterna,una proporcin mayor que en cualquierotra membrana celular. Entre estas protenas se encuentran las partestransmembranosas de lasprotenas implicadasen el transportede solutos, en el transportede electrones y en la sntesis de AIP. La relativaimportanciade lascrestas en la mitocondria reflejanormalmentela actividadmetablicarelativade la clulao el tejido en el que seencuentra el orgnulo.Lasclulasdel corazn,el rin o los mrlsculos presentan actividadesrespiratorias y en correspondencia elevadas, un elevado nmero de crestas. Losmsculosdelwelo de lasaves tienen una actividadrespiratoriaespecialmente elevada y susmitocondriasestnparticularmente dotadas de crestas.

y externa Membranas interna

Membrana externa
Fcneni

intermembrana Membrana interna

Crestas

(a) Diagramaesquemtico

(b) Micrografa electrnica

1pm

Fitun 10.4 Estructuramitoconddal, (a) La estructura mitocondrial serepresentaesquemticamente en estavisin tridimensional (b) Imagen de una mitocondria del pncreasde un murcilago vista con microscpa electrnica de transmisin (TEM). seccionada, Las crestasson invaginacionesde Ia membrana interna.

quimitrofo Captulo 10 Metabolismo de la energa: respiracin aerobia

Tabla 10.1 Localizacin delasfunciones metablicas dentro dela mitocondria

Memblana o compartimiento
N/embrana mitocondrial Caras de fractura de la membrana mitocondrial externa
Membrana externa

Funciones metablicas
Sntesis de fosfolpidos Insaturacinde cidosgrasos Elongacinde cidosgrasos Tiansportede electrones Fosforilacinoxidativa Tiansportemetablico Oxidacindel piruvato Ciclo del TCA de lpidos B-oxidacin Replicacin del DNA Sntesis de RNA (transcripcin) (traduccin) Sntesis de protenas

Membrana interna

Matriz
a^"^^ uota A^ +"^^+,,"^ uE il aututa

de la membrana mitocondnal interna

Espacio

Membrana mitocondrial interna

nlermemDrana y Figura 10,5 Estructura delasmembranas mitocondriales interna extetna. Cuando sesomete a lasmembranas mitocondriales interna y externa a criofractura, cada unadelasmembranas se por suinteriorhidrofbico escinde en doscaras defractura. En esta figurasehansuperpuesto partes demicrograffas electrnicas delas doscaras defractura tantoparala membrana interna comola externa, a un diagrama esquemtico delasmembranas fracturadas, proteicas la densidad de partculas en cada f.r;il;il*

En contraste,las clulasvegetales, tienen tasasde respiracin menores que la mayoria de las clulasanimalesy tienen, por lo tanto, menos crestas en sus mitocondrias. El interior de la mitocondria estrelleno de una matriz semifluida. En la matriz se encuentran muchas de las enzimas involucradas en la funcin mitocondrial, al igual que molculas de DNA y ribosomas. En la mayor parte de los mamferos,el genoma mitocondrial consisteen una molcula circular de DNA de entre 15.000 y 20.000 pares de basesque codifican RNAs ribosomales,RNAs de transferencia y alrededor de una docena de subunidadespolipeptdicas de protenasde la membrana interna. Adems de las protenas que estn codificadas en el genoma mitocondrial, la mitocondria contiene numerosasprotenascodificadasen el ncleo, que se sintetizan en los ribosomas citoplasmticosy que son importadas posterioimente por la mitocondria (v ase Capitulo 22).

Las funciones mitocondriales tenen lugar enmembranas especficas o dentro deloscompartimientos ylasrutas Las funciones especficas sehanlocalizado enla mitocondria mediante la ruptura y la separadelorgnulo
cin de susdistintos componentes.La Thbla 10.1recogeal-

gunasde las funciones principales que tienen lugar en cada uno de los compartimientos de la mitocondria. La mayor parte de las enzimas mitocondriales que participan en Ia oxidacin del piruvato, en el ciclo del TCA, y en el catabolismo de cidos grasosy de aminocidos, son enzimas de lamafriz.De hecho, cuando serompe la mitocondria en condiciones muy suaves, se liberan 6 de las 8 enzimas del ciclo del TCA como un nico complejo multiproteico, lo que sugiere que el producto de una enzima pasa directamente a la enzima siguiente sin tener que difundir por la matriz. Por otro lado, la mayora de los intermediarios en Ia cadena de transporte de electronesson componentes integralesde Ia membrana interna, donde se encuentran organizados formando grandes complejos. Sobresaliendo desdela membrana interna hacia la matriz se encuentran unas esferascon forma de puo que se llaman complejos F, (Figura 10.6).Cada complejo consisteen seispolipptidos ensamblados.En la Figura 10.6a se puede observan uno de los complejos Fr, una micrografa electrnica tomada a gran aumento usando una tcnica denominada tincin negativa, que tiene como resultadouna imagen clara sobre un fondo oscuro.Los complejos F, tienen un dimetro aproximado de 9 nm y son especialmente abundantes en las crestas(Figura 10.6b). Cada complejo F, estunido mediante un pequeo tallo proteico a un complejo Fo*, conjunto ensamblado de protenas hidrofbicas que se encuentra insertado en Ia membrana interna (Figura 10.6c). La asociacin de un complejo F, y otro Fo,se conoce como complejo FoF,y se consideracomo una AIP sintasa,porque saes su funcin habitual en el metabolismo energtico. El complejo FoF, es de hecho el responsable de la mayor parte de la produccin de ATP que tiene lugar en la mitocondria -as como tambin en las clulasprocariotas y en los cloroplastos-. En
* Obsrvese que el subndice de Fo es la letra (o) y no e1nmero 0. Esto es debido a que, en su da, se demostr que el complejo Fo confera resistenciaal antibitico olisomicina.

Lamitocondria: donde tiene lugar todo el proceso

279

ja) Membrana mitocondrial interna Crestas

Membranaexterna Espaciointermembrana

Membrana interna

Matriz(con ribosomas)

DNA transversal esquemtico de unamitocondria ib) Corte

(c) Cortetransversal esquemtico de una parte de una cresta que muestralos complejosFoF,

Figuta10.6 los complejosF y Fode la membrana mitocondrialinterna. (a) Esta micrograffa electrnicaseprepar mediante tincin negativapara mostrar los complejos Ft esfricosalineadosen la cara de la membrana interna que da a la matriz de una mitocondria del corazn de una oveja (TEM). (b) Corte transversalde una mitocondria, mostrando sus principales caractersticas estructurales.(c) Detalle de un pequeo fragmento de una cresta,que muestra cmo los complejos F, seproyectan desdela cara que da a la matriz de la membrana interna, y a los complejos Fo insertadosen la membrana interna. Cada complejo F, estunido a un complejo Fo mediante un tallo proteico. La pareja FoF,constituye una AIP sintasafuncional.

todos los casos, la produccin de ATP por los complejos Fo por F, estdirigida un gradiente electroqumico de protones a ambos lados de la membrana en la que dichos complejos Fo F, estn anclados, asunto que trataremos ms adelante en este captulo.

Enlosprocafotas, lasfunciones resptatorias se plasmtica y enel citoplasma localizan en la membrana Losprocariotas no tienenmitocondrias la sin embargo,
mayoria de las clulas procariotas son capacesde realizarla respiracin aerobia. Dnde se encuentran los distintos componentes del metabolismo respiratorio en la clula procariota? Bsicamente, el citoplasma y la membrana plasmtica de una clula procariota realizan las mismas funciones, respectivamente, que la matriz mitocondrial y

la membrana interna. En las clulas procariotas, por tanto, lamayoria de las enzimas de la glucolisis, del ciclo del TCA y del catabolismo de cidos grasos y aminocidos, se encuentran en el citoplasma, mientras que las protenas del transporte de electrones,selocalizan en la membrana plasmtica. El complejo FoF, est tambin en la membrana plasmtica de los procariotas, con el componente Fo incrustado en la membrana y el componente F, sobresaliendo desde la membrana hacia el citoolasma.

El ciclo del cido tricarboxflico: a vueltas con la oxidacin

Habiendoconsiderado lalocalzacinde lasfuncionesrespiratorias en la mitocondria y en las clulasprocariotas,

280

quimiofo Captulo 10 Metabolismo de laenerga: respiracin aerobia

ahora al contextoeucariotay seguiremos una volveremos molculade piruvato a travsde la membranainterna de all dentro. una mitocondria paraver qu destinole espera En presencia el piruvato seoxida completade oxgeno, liberadaen el promentea dixido de carbonoy la energa de AIP. La primera cesose usa para promover la sntesis que esla piedra esuna ruta cclica, etapaen esteproceso de casitodaslos quiangulardel metabolismoenergtico importanteen estas mitrofosaerbicos. Un intermediario cclicas esel citrato,que tienetres gruseries de reacciones pos carboxilo por lo tanto,esun cidotricarboxlico.Por estarazn,estaruta sedenominaciclo del cido tricarboxlico (TCA). Esteciclo tambin seconocehabitualmente comociclodeKrebs en honor a HansKrebs,cuyolaboratode rio desempe un papelcentralen el descubrimiento de 1930. esta ruta metablica en la dcada El ciclo del TCA metabolizaacetil coenzimaA (acetil CoA),queconsiste en un acetato unido a un transportador por llamadocoenzima A. (La coenzima A fue descubierta Fritz Lipmann,que compartiel PremioNobelcon Krebs El aerobia.) en 1953por su trabajo sobrela respiracin oxidativa del acetil CoA proviene de la descarboxilacin piruvato o de la ruptura oxidativa de los cidos grasos (vaseFigura de su origen,el 10.1b). Independientemente grupo su acetato a un aceptorde cuaacetilCoA transfiere formndose de estamatro carbonos llamadoe&l4lg]l4[g, posteriomente nera citrato.El citrato es sometidoa dos oxidativasy a varias oxidaciones, dedescarboxilaciones jando al final un compuesto a partir de cuatro carbonos el oxalacetato inicial. del cual seregenera Cadavueltadel ciclo de Krebsimplica la entradade dos (el acetato carbonos del acetilCoA), la liberacinde dos y la regeneracarbonos en forma de dixido de carbono, La oxidacintiene lugar en cinco etacin de oxalacetato. que pas: cuatrodentrodel mismocicloy una en la reaccin los convierteel piruvato en acetilCoA. En todoslos casos, por coenzimas. Los sustratos del electrones son captados ciclo de Krebsson por tanto, el acetil CoA, las coenzimas oxidadas, el ADR y el Pu y los productosson dixido de y una molcula de AIP (o coenzimas reducidas, carbono, GTR un nucletidontimamenterelacionado). general, el Teniendopresente esteesquema analizemos centrndonos en lo que ciclo del TCA msdetalladamente, les sucede a las molculas de carbonoque entran como la energa liberadaen cada acetilCoA y cmo seconserva en forma de coenzimas reducidas. una de las oxidaciones A mediante El piruvato se convefte en acetlcoenzma oxidativa la descarboxilacin la entradade carbonoen el ciclo Como hemossealado, del TCA esen forma de acetil CoA, pero en el Captulo 9 hemosvisto que la ruta de la glucolisistermina en piruvato, y no en acetilCoA. El pasode piruvato a acetilCoA re(PDH), an quierela actividadde la piruvato deshidrogenasa

complejo multiproteico enorme, con peso molecular de 4.6 x 10o,que consta de tres enzimas,cinco coenzimas,y dos protenas reguladoras.Todos estos componentes trabajan juntos para catalizar Ia descarboxilacinoxidativa del piruvato:

. ,l' " coA-SH+'cu.-l-oCoenzima A Piruvato

NTAnr

NranH

r',

CoA-SiC-CH3 AcetilCoA

o ,ll)

+ CO2

(10.1)

Estareaccin esuna descarboxilacinporque uno delos carbonos del piruvato (el tqmo de carbono 1) se libera como dixido de carbono.El resultadoesque,los tomos de carbono 2 y 3 del piruvato se convierten,respectivaI y 2 del acetato. Adems, esta reacmente, en loscarbonos porquesetransfieren doselectrones cin esuna oxidacin (adems de un protn) desdeel sustratoa la coenzima por el NADH repretransportados NAD+. Los electrones potencialque seutiliza cuandoel NADH es sentanenerga posteriormente por el sistema de transporte reoxidado de electrones. La oxidacin del piruvato tiene lugar en el tomo de carbono2, que esoxidadode un a-cetoa un grupo carboa la eliminacin lico. Estaoxidacines posiblegracias concominante del tomo de carbono 1 en forma de dixido de carbono. La oxidacin es altamente exergnica (AGo': -7,5 kcallmol),y la energa libre se lutilizapara mediantesu unin al grupo activarla molculade acetato sulfhidrilodela coenzimaA(CoA),formandoacetilCoA. en la FiguraI0.7,la CoA esuna moComo semuestra pantoque contiene a la vitaminaB cido lculacompleja que igual la nicotinamida del tnico. N NAD+, el cido pantotnico se clasificacomo una vitamina porque los Ia necesitan hombresy otros vertebrados como parte de queno pueden por smisesencial sintetizar unacoenzima mos. El grupo sulfhidrilo, o tiol en eI extremode la molcula de CoA puede formar un enlacetioster con cidos El grupo tiol es lo suficienteorgnicoscomo el acetato. la coenmenteimportantepara que cuandoabreviemos zima A no lo hagamos como CoA slo, sino como con un enlace ster, el enlace CoA-SH. Si lo comparamos porqueseliberasignimsenergtico tioster esun enlace ficativamente ms energatras su hidrlisis. De la misma para el transporte maneraque el NAD* estdiseado de la coenzima A Io estpara el transportedel aceelectrones, el <A>de su nomtato o de otrosgruposacilo.(De hecho, bre viene de su funcin transportadorade grupos acilos.) Por lo tanto, el grupo acetiloque setransfierea la coenzima A medianteuna de las enzimasdel complejoPDH (representado en la Figura 10.7como E-SH), esten una forma activada, o de alta energa.
Elciclo delcido tricarboxlico: a vueltas conla oxidacin

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Figura10.7 Estructura de la coenzima Ay fotmacinde acetil CoA. La parte de la coenzima recuadradaen rojo es el cido pantotnico, pertenecienteal complejo vitamnico B. La formacin del enlace tioster entre la CoA y un grupo acetilo generala acetil coenzimaA. El grupo acetilo se forma por la descarboxilacin oxidativa del piruvato (reaccinPDH en la Figura 10.8)y estransferidoa la CoA por una de las enzimasdel complejo piruvato deshidrogenasa, a la que est unido como un tioster tras la oxidacin del piruvato.

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Elciclo comienza delTCA conla entrada deacetato enfoma deacetilGoA El ciclodelTCA(Figura 10.8) comienzacon la entrada de
acetato en forma de acetil CoA. En cada melta del ciclo del TCA, entran dos tomos de carbono en la forma orgnica (como acetato) y salen dos tomos de carbono en forma inorgnica (como dixido de carbono). En la primera reaccin(TCA-1), el grupo acetatode dos carbonos del acetil CoA, se une al compuesto de cuatro carbonos oxalacetato,para formar citrato, una molcula que contiene seis carbonos. Esta condensacin est dirigida por la energalibre de hidrlisis del enlacetioster y estcatalizada por la enzima citrato sintasa. Obsrvese que el citrato es un cido tricarboxlico -el tipo de compuesto que da al ciclo del TCA su nombre-. (Los dos tomos de carbono entrantes se muestran en color rosa en la Figura 10.8, con el fin de facilitar su bsqueda en las reacciones subsiguientes.)

Endosleaccones deoxidacin delciclodelTCA se y forma NADH se libera C02

que cuatrode lasochoetapas A continuacin veremos del TCA son oxidaciones. Estehecho es patenteen la Figu(TCA-3,TCA-4, ra 10.8ya que en cuatrode lasreacciones TCA-6y TCA-8)intervienen queentranen forcoenzimas ma oxidaday salenen forma reducida.Cadauna de estas por una deshidrogenasa, reacciones estcatahzada que es especfica de un sustratoen particular.Lasdosprimerasde estas reacciones, TCA-3y TCA- , son tambinetapas descarboxilativas: se elimina una molcula de CO, en cada una)y sereduceel nmero de carbonos de seisa cincoy despus de cincoa cuatro. Previamente, sin embargo, la reaccin TCA-2 convierte al citrato en un compuestorelacionado, el isocitrato,mediantela aconitasa.A diferencia del citrato,el isocitratotiene un grupo hidroxilo que puedeser fcilmenteoxidable. Estegrupo hidroxilo del isocitratoseconvierteen la diana

282

quimitrofo 10 Metabollsmo Capitulo respiracin de laenerga: aerobia

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Enzimas que cataizanestas reacciones PDH: Piruvatodeshidrogenasa TCA-1: Citratosintasa TCA-2: Aconitasa TCA-3: lsocitratodeshidrogenasa TCA-4: a-cetoglutarato deshidrogenasa TCA-S: SuccinilCoA sintetasa TCA-6: Succinatodeshidrogenasa TCA-7: Fumaratohidratasa TCA-8: Malatodeshidrogenasa

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Figura10.8 El ciclo del cido tricarboxlico. Los dos tomos de carbono del piruvato que entran en el ciclo va Acetil CoA se sealanen rosa en el citrato y las siguientesmolculas,hasta que sedesordenanpor la simetra de la molcula del fumarato. El tomo de carbono que sepierde en forma de CO, se muestra en gris, ya que son los dos grupos carboxilos del oxalacetatolos que generanCO, en las reacciones cinco son oxidaciones,con el NAD- como aceptor de electronesen cuatro de ellas (PDH, TCA-3, TCA-3 y TCA-4. De todas las reacciones, TCA-4 y TCA-S) y FAD en un caso (TCA-6). La forma reducida de la coenzima semuestra en violeta en cada caso.Ntese que cuando se libera CO2, no se desprendeningn H+ durante la reduccin del NAD+, mantenindosede estamanera el equilibrio de cargade estas reacciones. La produccin de GTP que se indica en la reaccin TCA-5 escaractersticode las mitocondrias de los animales.En las y de las bacterias,se forma AIP directamente,pero las reaccionesson equivalentesdesdeun punto de vista mitocondrias de los vegetales energticoya que le GTP y el ATP poseenla misma energade hidrlisis y son fcilmente interconvertibles,como semuestra en TCA-5.

Elciclo delcido tricarboxlico: a vueltas conlaoxidacin 283

de la primera oxidacin, o deshidrogenacin, del ciclo (TCA-3). El isocitrato es oxidado por la enzima isocitrato deshidrogenasaa un compuesto de seis carbonos llamado oxalosuccinafo (que no se muestra en la figura), con el NAD+ como aceptor de electrones.EI oxalosuccinato es inestable e inmediatamente sufre una descarboxilacin y se convierte en a-cetoglutarato. Esta reaccin es la primera de las dos reacciones de descarboxilacin oxidativa del ciclo. La segunda descarboxilacin oxidativa tiene lugar en el siguiente paso, la reaccin TCA-4, y tambin utiliza al NAD* como aceptor de electrones.Esta reaccin es parecida a la descarboxilacinoxidativa del piruvato mostrada anteriormente. Thnto el a-cetoglutarato, como el piruvato son a-cetocidos,por lo que no debe sorprender que el mecanismo de oxidacin sea el mismo en los dos, finalizando con una descarboxilacin y la unin del producto de la oxidacin a la coenzima A, en forma de tioster. De esta manera, el a-cetoglutarato se oxida a succinil CoA, en una reaccin catalizadapor la enzim a a-cetoglutaratodeshidrogenasa.

(o ATP) Laptoduccin directa deGTP tienelugar en una etapa delciclodelTCA

En estos momentos, el balance de carbono delcicloest satisfecho: han entradodos tomosde carbonoen forma de acetilCoA,y sehan liberadodostomos de carbonocomo COr. (Peroobserve con atencin en la Figura10.8quelos dos tomosde carbonoque son liberados en un ciclo ro son los mismosdos tomosque entraron en la reaccin TCA-1 del ciclo).Yanoshemosencontrado con dosde las cuatro reacciones de oxidacindel ciclo del TCA por lo tanto,sehan generado dosmolculas de NADH. Adems, hemosvisto que el succinil CoA es un compuestoque, al igual que el acetil CoA, tiene un enlacetioster,cuya hidrlisisesaltamente exergnica. La energa de este enlace tiosterseusaparagenerar una molculade AIP (en lasmitocondriasde bacterias y de clulas vegetales) o GTP (en las mitocondriasde las clulas animales). De hecho,esla formacin de succinilCoA ms (TCA-4),el que el succinato libre de la reaccin precedente que conserva Ia energa de la oxidacindel a-cetoglutarato en forma de un enlace tioster, el cual,una vezhidrolizado, escapazde generar ATP o GTP posteriormente en Ia reacque el GTP y el AIP sonenergticacin TCA-5.Obsrvese ya que susunionesfosfoanhdridas menteequivalentes terminalestienenla misma energa libre de hidrlisis.De esta manera, el resultado neto dela hidrlisisdel succinilCoA es la produccinde una molculade AIR ya seadirectamente o a travs del GTR como serecoge en la Figura10.8. Lasreacciones oxdativas finalesdel ciclo del TGA generan y NADH FADH2 De las tres etapas restantes del ciclo del TCA, dos son oxidaciones. En la reaccin TCA-6,el succinato formado en el
284

pasoanterior seoxida a fumarato.Estareaccinesnica, provienende tomosde en el sentidode que los electrones carbono adyacentes y se forma de estamanera un doble enlaceC:C. (Hastaahora,todaslas oxidaciones que nos hemosencontrado implicaban la prdidade electrones de un carbonoy un oxgenoadyacentes, generndose un doble enlace C:O). La oxidacin de un enlace carbono-carbono libera menosenergaque Ia oxidacinde un enlace carbono-ogeno, de hechono essuficiente paratransferir los electrones exergnicamente al NAD+. Por esto, el acepparaestadeshidrogenacin tor de electrones no esNAD+ sino una coenzimade menor energa, el dinucletido de flavinayadenina(FAD).Al igualqueel NAD* yla coenzima A, el FAD posee una vitamina del complejoB como parte de su estructura, riboflavina,en estecaso (Figura 10.9). El FAD acepta dosprotones y doselectrones, por lo quela forma reducida seindicacomoFADHT. Comoveremosms adelante, el rendimiento miximo de ATP de la oxidacinde lascoenzimas esde aproxidamente trespara el NADH y sloalrededor de dosparael FADHT. pasodel ciclo,el dobleenlace En el siguiente del fumarato es hidratado,formndose malato (reaccinTCA-7, por la enzimafumarato hidratasa). catalizada Dado que el fumaratoesuna molculasimtrica,el grupo hidroxilo del agua tienela mismaprobabilidad de unirsea cualquiera de los tomosde carbonointernos. Como resultado, los tomos de carbono dela Figura10.8queestaban marcados en rosaparaseguir la pistaal grupo acetato queha entradoen el ciclo ms recientemente, se distribuyenal azaren este paso y por lo tantono semarcarn con ningncolora partir de ahora.En la reaccin TCA-8,el grupo hidroxilo del malatoseconvierteen la dianade la oxidacinfinal del ciclo.De nuevo,el NAD* actacomo aceptor de electrones, y el productolo constituye el correspondiente a-cetocido, el oxalacetato. En tesumen: los productos del ciclo del TCAson C02, y FADH2 ATB NADH Con la regeneracin del oxalacetato, secompletauna vuelta del ciclo.Podemos resumirel proceso sealando las siguientes propiedades del ciclo del TCA: 1. El acetato entraen el ciclocomoacetilCoA y seune a una molculaaceptora de cuatrotomosde carbono para formar citrato,un compuesto de seiscarbonos. 2. La descarboxilacin ocurre en dos etapasdel ciclo por lo que la entradade dos carbonos en forma de acetato secompensa por la prdidade doscarbonos en forma de dixido de carbono. 3. La oxidacin tiene lugar en cuatro etapas,con el NAD- comoaceptor de electrones en trescasos y el FAD en uno de ellos. 4, EI ATP segenera en un solomomento,con el GTP como intermediarioen las clulas animales.

quimitrofo Gapitulo 10 Metabolismo delaenerga: respiracin aerobia

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Figura y leduccin. La parte de la coenzimarecuadrada 10.9 Estructufa de FADy su oxidacin en rojo esla riboflavina,una vitamina B. Lasflechas sealan los dos tomosde nitrgeno de la riboflavina que toman cadauno un protn y un electrncuando el FAD sereducea FADH2. La mitad de la molcula que incluye a la riboflavina y a un grupo fosfato representala estructura del mononucletido de flavina (FMN), una coenzimarelacionada.

5. Secompleta unavueltadel cicloconla regeneracin Hay dos aspectoschocantesen estareaccin de resumen: del oxoalacetato, que el rendimiento de AIP despus de todo, es bastante el aceptororiginal de cuatrocarbonos. modesto y que son muchaslas molculasde coenzimasque Reuniendo las ocho reacciones que componen el ciclo del TCA quesemuestra en la Figura10.8, obtenemos a una reaccin global(en sta y en lasreacciones posteriores, los protones y lasmolculas de aguano semuestran explcitamentesi estn slopresentes parala compensacin elctrica o qumica). Estareaccin tienela siguiente forma: Acetil coA + 3 NAD* + FAD + ADP t P,---> 2CO2+ 3NADH + FADH2* CoA-SH + ATP (10.2) Comoel ciclotienequeverificarse parametadosveces bolizar lasdosmolculas de acetilCoA que derivande una nicamolcula de glucosa, la produccin por molcula de glucosa sepuedeobtenermultiplicandopor dos la Reaccin 10.2. Si aadimos despus a stael conjuntode reaccionesde la glucolisis hastapiruvato (Reaccin 9.16)y la descarboxilacinoxidativa del piruvato a acetil CoA (Reaccin 10.2, multiplicada tambinpor 2), obtenemos la globalqueresume siguiente reaccin la secuencia completa de Ia glucosa a lo largo del ciclo del TCA: + 10NAD+ + 2FAD + 4ADP f 4P,--> glucosa (10.3) 6CO2+ 1ONADH+ 2FADH2+ 4ATP
se reducen durante la oxidacin de la glucosa.No obstante, debemostener tambin en cuenta que las coenzimasNADH y FADH, son compuestos de alta energa. Como veremos ms adelante en estecaptulo, la transferencia de electrones desdeestascoenzimas hasta el oigeno esaltamente exergnica. De esta manera, la reoxidacin de 12 coenzimasreducidas que se muestran en la parte derecha de la Reaccin 10.3,proporciona Ia energanecesariapara dirigir la sntesis de la mayor parte de las molculas de AIP que se producen durante la oxidacin completa de la glucosa. Paralaliberacin de esaenerga,debemos tratar las etapas restantesdel metabolismo respirateyi6 -fsporte de electronesy la fosforilacin oxidativa-. No obstante, antes de hacerlo, trataremos algunos aspectosadicionales del ciclo del TCA; su regulacin, su papel central en el metabolismo energtico y su funcin en otras rutas metablicas.

Varias enzimas delcclo delTCA estn sujetas a una regulacin alostrica

Como todas las rutas metablicas,el ciclo del TCA debeestar cuidadosamente regulado para asegurar que su activiElciclo delcido tricarboxlico: a vueltas conlaoxidacin 285

dad est acoplada a lasnecesidades de la clula. Losprincipales lugares de regulacin semuestran en la Figura10.10. La mayor parte del control consiste en la regulacinalostrica de cuatro enzimasclave,por medio de molculas

que se unen a ellas de forma reversible. efectorasespecficas Como podemos recordar del Captulo 6, las molculas efectoraspueden ser tanto inhibidoras como activadoras, y son indicadas, respectivamente, como un signo menos de

Enzmasque catalizan estas reacciones E1: PDH fosfatasa E2:PDH quinasa Todaslas dems enzimascomo se muestran en la Figura10-8

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Figuta10.10 Regulacin del ciclo del TCA. EI ciclo del TCA y la reaccin deshidrogenasa precedentedel piruvato semuestran aqu en formato resaltado,con las enzimasreguladorasen azul. Los efectosreguladoresprincipales seindican como activacin (+) o inhibicin (-). Los reguladoresalostricosincluyen CoA, NAD+, AMP yADP como activadoresy acetil CoA, NADH, AIP y succinil CoA como inhibidores. Aparte de su efecto alostrico sobrela actividad de la piruvato deshidrogenasa, el AIP activa la PDH quinasa (Er), la enzima que fosforila uno de los componentesdel complejo PDH, haciendo que se inactive.La enzimaPDH fosfatasa(8,), elimina el grupo fosfato,volviendo a activar al complejo PDH.

quimitrofo Captulo 10 Metabolsmo de laenerga: respiracin aerobia

color rojo y un signo ms de color verde, en la Figupiel complejo alostrica, Apartede la regulacin ra 10.10. (PDH) seactivae inactivamedianruvato deshidrogenasa de uno de reversible te una fosforilaciny desfosforilacin proteicos. suscomponentes del ciclo del de la regulacin el significado Paraapreciar queusaacetilCoA,NAD*, FADyADP como TCA,recuerde y que generacomo productosNADH, FADH2, sustratos productos 10.3). Tiesde estos Reaccin CO, yATP (vasela -NADH, AIR y acetilCoA- sonimportantes de efectores como se muestraen la Figura 10.10. una o ms enzimas, NAD+, ADP y AMP activancadauno al menosa Adems, punto devista,el Desde este reguladoras. las una de enzimas de energtico los estados redoxy sensible a cicloesaltamente y las NADH/NAD* la relacin la clula,valoradoscomo relativas deATRADP yAMP. concentraciones generadoras de NADH que Lascuatrodeshidrogenasas en la Figura10.10son inhibidaspor NADH. semuestran de NADH en la mitoconEl aumentode la concentracin deshidrogepor tanto,la actividadde estas dria disminuye, lo que conducea una reduccinen la actividaddel nasas, el complejoPDH esinhibido por el ciclo del TCA.Adems, y cuandohay muchaenerga), ATP (que esmsabundante son actitanto la PDH como la isocitratodeshidrogenasa cuandoserepor el ADP y AMP (msabundantes vadas quiereenergla). de acetilCoA estdeterminaLa disponibilidadgeneral da principalmente por la actividad del complejo PDH (taseReaccin que esinhibido alostricamente 10.1), Por NADH, ATP y acetilCoA y esactivadopor NAD+, AMP y complejoenzimeste CoA libre (Figura10.10).Asimismo, por la fosforilacinde uno de suscompotico esinactivado proteicos cuandola relacin[ATP]/[ADP] esbaja. nentes estn de fosforilaciny desfosforilacin Estasreacciones respectiporla PDH quinasaylaPDH fosfatas4 catalizadas por lo tanto, que el AIP sea No essorprendente vamente. y un inhibidor de la fosfatasa. un inactivadorde la quinasa Como resultado de estos mltiples mecanismosde a las relacontrol, la produccin de acetil CoA essensible ciones[acetilCoA]/[CoA] y [NADH]/[NAD] en la mitocondria y tambin al contenido mitocondrial de ATP. del reguladores sobrelasreacciones efectos Apartede estos del ciclo del TCA, existeun control por retroalimentacin gracias los efectos inhibiglucoltica, a la ruta sobre ciclo doresdel citrato y de la acetilCoA sobrela fosfofructoqui(vanseFigts' respectivamente nasay la piruvatoquinasa, y 10.10). ras9.I2 central un pape El ciclo del TCAdesempea de grasasy proteinas en el catabolismo Es imprescindibleentenderel papel central del ciclo del TCA en todo el metabolismoenergticoaerbico.Hasta ahora, hemos consideradoa la glucosacomo el sustrato A pesarde que la mayor principal de la respiracincelular.

para el metabogenerales descritas parte de las reacciones lismo energtico quimitrofo consideran a Ia glucosa como el compuestode partida, debemossealarel papel alternativas como carburanteen el mede otrasmolculas celular y en el ciclo del TCA, espetabolismo energtico Lejosde ser una ruta cialmentelos lpidos y las protenas. de un nico azicar,el ciclo del menor para el catabolismo la principal opcin del metabolismoenerTCA representa desde gtico aerobio en un gran abanicode organismos, y los animales. superiores los microbioshastalos vegetales La Efasa comounafuentede energfa, Cuando nos enconen el Captulo3, analitramospor primeraveza lasgrasas y obserde energa zamossu papelen el almacenamiento vamos que son compuestosaltamente reducidos que Iiberan ms energapor gramo tras su oxidacin que los razn, lasgrasas sonun almacn de Poresta carbohidratos. Lasreserde largo plazoparamuchosorganismos. energa en los animaimportantes son especialmente vasde grasa tambin una les hibernantesy migratorios y representan energay carbono por las forma comn de almacenar parasu funLasgrasas son ideales plantas en sussemillas. permiten miximo porque el almacenacin de almacn peso y volumen. mlnimo con el miento de caloras en forma de triacilLa mayorade la grasasealmacena (tambin que son llamados triacilgJicridos), gliceroles grasos cadena larga de neutrosde glicerolycidos tristeres (vaseFignra de los triacilgliceroles El catabolismo 3.27b). licon su hidrlisisen gliceroly cidosgrasos comienza bres.El glicerol se desvaa la ruta glucollticapor su confosfato,como seinversinoxidativaen dihidroxiacetona estnunidos a la dica en la Figura9.9.Los cidosgrasos que son posteA para formar acil CoA grasos, coenzima por oxidacin mediante un proceso riormentedegradados y la eliminaque implica la oxidacinsucesiva secuencial generndose acetilCoA de doscarbonos, cin de unidades reducidas NADH y FADHT. ylas coenzimas de cidosgrasos secuencial de catabolismo Esteproceso a acetilCoA sedenominaB oxidacin porqueel acontecitienelugaren miento oxidativoinicial en cadaciclosucesivo en la posicinB del el tomo de carbonoque seencuentra carbonodesde el grupo carcidograso(esdecir,el segundo derivados de las boxilo). De estamanera,los cidosgrasos grasas, al igual que el piruvato derivadode los carbohidrapospor oxidacinen acetilCoA,queser tos,seconvierten por el ciclo del TCA. Es ms,las teriormentecatabolizado estnlocalizade la oxidacinde los cidosgrasos enzimas dasen la mitocondriaen muchas(si no en todas)lasclulas por lo que el acetilCoA que provienede lasgraeucariotas, dentro del misseproducey secataboliza sasnormalmente e Figura I 0.1b ). celular(vas mo compartimiento y de aminocidos. comounafuentede enefgla Las protenas normalmentecomo fuente Lasprotenasno seconsideran papelesms importantes de energaya que desempean
a vueltas conlaoxidacin 287 tricarboxlico: Elciclo delcido

dentro de la clula -como enzimas, protenas transportadoras,hormonas y receptores, por ejemplo-. pero lasprotenas,tambin pueden ser catabolizadas para generarATp si es necesario, especialmente cuando los depsitosde grasasy de azwcarcs estn vacos o no estn disponibles. En los animales,el catabolismoproteico es importante en condicionesde ayuno o de inanicin, o cuando la ingestade protenas en la dieta supera las necesidades de aminocidos. En los vegetales, el catabolismo de protenas proporciona la materia prima para la sntesisde protenas durante la germinacin o durante el almacenamientode protelnas en las semillas.Asimismo, todas las clulasllevan a cabo una renovacin de las protenasy de las estructurasque contienen protenas.Los aminocidos en los que una protena se degrada, puedenser reciclados en proteinaso serdegradados oxidativamentepara obtener energa. El catabolismo de las protenas comienza con la hidrIisis del enlacepeptdico que mantiene a los aminocidos unidos en una cadenapolipeptdica.El procesose denomina proteolisis, y las enzimasque lo llevan a cabo,proteasas.

Los productos de la digestin proteoltica son pequeos pptidos y aminocidos libres. Las digestionesposteriores de los pptidos estn catalizadas por las peptidasas,que hidrolizan, tanto enlacespeptdicos internos (endopiptidasas),como externos (exopeptidasas). Los aminocidos libres, ya seaningeridos o provengan de la digestin de las protenas, pueden ser catabolizaos para la obtencin de energa. Normalmente, estossustratos alternativosse convierten en intermediarios de rutas metablicas ms importantes en el menor nmero de pasosposible.A pesar de su diversidad numrica y qumica, todas estas rutas desembocan finalmente en unos pocos intermediarios del ciclo del TCA, principalmente acetil CoA, a-cetoglutarato,oxoalacetato, fumarato y succinil CoA. De los 20 aminocidos que se pueden encontrar en las protenas,tres dan lugar a intermediarios del ciclo del TCA de una manera directa. Estos aminocidos son la alanina, el aspartatoy el glutamato, que pueden ser convertidos en piruvato, oxoalacetato y a-cetoglutarato, respectivamente (Figura 10.11).Los dems aminocidos requieren rutas

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Figura 10,11 Interconversin de varios y sus conespondientes aminocidos cetocidos en el ciclo del TCA. Los aminocidos(a) alanina,(b) aspartato v (c) glutamato puedenserconvelrtidos eversiblemente en suscorrespondientes z-cetocidos: piruvato,oxalacetato y r-cetogl utarato, respectivamente. Cada uno de estos cetocidos esun intermediario del ciclo dei TCA, del que se representa una parte para situar el contextometablicopara estas reacciones. En cadacaso, el grupo amino semuestra en azul y el grupo ceto en amarillo. Estas reacciones son rpidamentereversibles y desempean la funcincatabolica de convertirlos aminocidos en intermediariosdel ciclo del TCA para la oxidacinaCOry HrO y la funcin anablica de convertir ios intermediarios del ciclo del TCA en aminocidos para usarlos en la snlesis de proteinas. Lasrutas catablicas y anablicas para otros aminocidos pero son menosdirectas, tambien finalizan y parten de intermed iariosdel metabolismo respiratorio.

288

Captulo 10

Metabolismo quimitrofo de la energa: respracin aerobta

con muchos intermefrecuentemente ms complicadas, estasrutas en el futuro' diarios. Encontrarseguramente probablemente en un cursodebioqumica.Cuandoassea, de distinguir cuntosde ellos tienen productos asegrese finalesque son intermediariosdel ciclo del TCA' porque esto reforzarms an el papel central del ciclo del TCA celular. para todo el metabolismoenergtico unafuentede preculsores El ciclo del TCAconsttuye pafatutas anablicas el La funcin principal del ciclo del TCA es,claramente, habidacuentade su papelen la oxidacindel catabolismo, conacetilCoA a dixido de carbono,con la consiguiente reducicoenzimas forma de libre en energa de servacin la mayorade las clulasexisteun das.En prcticamente y fuera del ciclo de intermediadentro flujo considerable Estas reacy seis tomosde carbono' rios de cuatro,cinco intermediarios de suministro reponen el colaterales ciones a \a vez que se utilizan en el ciclo, segnlas necesidades, de algunode los derivados de compuestos parala sntesis intermediariosdel ciclo.Debido a que el ciclo del TCA rea y anablicas, presentaun nexo entre rutas catablicas (del menudo se le denomina como una ruta anfiblica <ambos>). significa griegoamphi-,que el ciclo Ademsde su papel central en el catabolismo, anablicos. del TCA estinvolucradoen variosprocesos en la Fique semuestran las tresreacciones Por ejemplo, a-cetodel ciclo los intermediarios gura 10.11convierten y glutamaaspartato alanina, del TCA en los aminocidos de lasprotenas, son constituyentes to. Estosaminocidos en asque el ciclo del TCA estimplicado indirectamente proteica, aportandovariosde los aminocidos la sntesis El citratoy el succinilCoA en el proceso. que senecesitan que proveeel ciclo del metablicos son otros precursores TCA.El succinilCoA esel punto de partidaparala sntesis del grupo hemo,mientrasque el citrato puedeser transportado a la mitocondria y usado como fuente de acetil grasos en el citosol. posterior de cidos CoA parala slntesis

queposeen estaruta puedensintetizar Los organismos como el azicaresipartir de -ompuestosde dos carbonos, la posibilita tambin converglioxilato El ciclo del acetato. en carbohidratos. almacenadas sin de las grasas

Transporte de electrones: flrrjo d electrones desde las coenzimas al oxgeno

etapas dela reslasdosprimeras ya considerado Habiendo piracin aerobia-la glucolisisy el ciclo del TCA- hagaquhemosconseparapreguntarnos pausa mosuna breve 10.3, el en Ia Reaccin guido hastaahora.Como seseala metabolismoquimitrofo de la energaa travsdel ciclo de cuatro moldel TCA, tiene como resultadola sntesis y otras dos de la glucolisis culasde ATP por cadaglucosa, dos del ciclo del TCA. La oxidacincompletade la glucosa hea CO, puedeproducir 686kcal/mol,peronicamente de esacantidad(slo4 AIP mos obtenidomenosdel l0o/o 10kcal/molcadauno, basndonos con aproximadamente de ATP en una clula en el valor de AG' parala sntesis estel sepodra uno podrapreguntar, normal) Dnde, rendimienel cundo obtendremos de la energa? resto Y de la mayor de AIP caracterstico to significativamente respiracin? justo ah en La energa est esmuy sencilla. La respuesta por las molculas de coenzirepresentada 10.3, la Reaccin veremos a contiy FADHT. Como NADH mas reducidas energa cuando gran de cantidad nuacin,se libera una por la transfereducidasson reoxidadas estascoenzimas al ogeno molecular.De hecho, rencia de sus electrones potenciallibre que estpresende la energa cercadel 90o/o en las l0 moleseconserva de glucosa te en una molcula que seforde FADHT, culasde NADH y en las2 molculas man cuando se oxida una molculade glucosaa COt son, por tanto, (vase 10.3).Dichascoenzimas Reaccin que puedenser usadospara de alta energa compuestos en la de serconvertidos deAIP despus impulsarIa sntesis transmemelectroqumico potencial del gradiente energa elacetil CoA convierte El ciclodelglioxilato branade protones. en carbohdratos mediantela de reoxidacinde lascoenzimas El proceso se conoce como al oxgeno de electrones transferencia pero del TCA, ciclo con el que relacionada est Una ruta de electrones esla El transporte electrones. de transporte gliodel es el ciclo anablica funcin una que desempea (vase Figurespiratorio metabolismo etapa del tercera tiene reaccin 10A. Esta el Anexo que describe en se xilato de ATP que lo acompaa de sntesis El proceso llamadoglioxiso- ra 10.1b). de peroxisoma lugar en un tipo especial posteriormente en este captulo. (etapa 4), se analizar .ma.Elciclo el reacciones con varias glioxilato comparte del que de electroel transporte no obstante, Tenga en cuenta, descarbode las dos reacciones ciclo del TCA pero le faltan procesos independientes. no son de ATP y la sntesis nes de acemolculas En su lugar,seusandos xilacin de ste. Los dos son parte integrantede la respiracincelulary estato (queentranen la ruta como acetilCoA) paraproducir el uno al otro por el gravinculados,funcionalmente, (vase tn Figuun compuestode cuatro carbonos succinato, que esal mismo tiemprotones' de diente electroqumico fosfoenolen despus seconvierte ra I0A.2).El succinato y el origende la electrones de po del transporte el resultado por glucoazcares piruvato del que puedensintetizarse AIP. que la sntesis de impulsa energa neognesis.
al oxigeno 289 lascoenzimas desde flujo deelectrones delectrones: Transporte

Er crcro DEL GLIoxILATo, Los clroxrsoMAs y LA GERMINACTN oE sEMTLLAS

Las especies vegetales que almacenanreservas sustanciales de carbono y energlaen sus semillasen forma de grasa,seenfrentan a un particular reto metablico cuando sussemillasgerminan: deben convertir la grasaalmacenada en sacarosa, que eslifuente inmediata de carbono y energapara la mayora de las clulasdurante la germinacin. Muchas plantas pertenecena estacategora, incluyendo especies oleaginosas tan conocidascomo Ia soja,el cacahuete, el girasol,el ricino y el m alz.La grasaestformada principalmente en triacilgliceroles(triglicridos) y sealmacena como cuerpos lpidicos,yaseaen los cotiledonesdel embrin de la planta o en el endospermo,el tejido nutritivo que rodea y nutre al embrin durante su desarrollo.La micrografia electrnicade la Figura 10A.1muestra la prominencia de los cuerposlipdicos en el cotiledn de una semilla de pepino. La ventaja de almacenargrasaen vez de carbohidratos, sehace patente si consideramosque un gramo de triacilglicerol contiene ms del doble de energaque un gramo de carbohidratos. Esta diferencia permite a las especies que almacenangrasas, empaquetar Ia mayor cantidad de carbono y calorasen el mnimo esp"tio posible. Sin embargo,esto implica que dichas especies tienen que ser capaces de convertir la grasaalmacenadaenazicar cuando las semillasgerminen. La transformacin de grasasen azcar no esposible para la mayora de los organismos.Muchos organismosconvierten rpidamente azcary otros carbohidratos en grasasque se almacenan.Pero la mayora de los organismos eucariotasno pueden llevar a cabo el proceso inverso.Paralas semillasde las especies vegetales que almacenangrasa,sin embargo,la conversin de los triacilglicerolesalmacenadosen sacarosa esesencial,porque la sacarosa esla forma en la que setransporta carbono y energal brote en crecimiento y a los picesde las racesde la semilla en desarrollo. Las rutas metablicasque hacen esto posible son la B-oxidacin y el ciclo del glioxilato. La funcin de la B-oxidacin esdegradarla grasaalmacenadaa acetil CoA. El acetil CoA entra despusen el ciclo del glioxilato (Figura 10A.2),una ruta cclica de cinco pasos, que recibe su nombre de uno de sus intermediarios, el cetoiido de dos carbonos denominado glioxilato. El ciclo del glioxilato est relacionado con el ciclo del TCA, con quien tiene tres reaccionesen comn. Sin embargo,hay una diferencia crucial: la presenciade dos enzimasespecficas de los glioxisomas,la isocitratoliasayla malato sintasa.Atravs del uso de estasdos enzimas,el ciclo del glioxilato sesaltalas dos reaccionesde descarboxilacindel ciclo del TCA. Adems,el ciclo del glioxilato introduce no una, sino dos molculas de acetil CoA por luelta del ciclo, generndose succinato,una molcula de cuatro tomos de carbono. As, el ciclo del glioxilato es anablico (el carbono entra como molcula de dos tomos de carbono y 1oabandona en forma de molcula de cuatro carbonos), mientras que el ciclo del TCA es catablico (el carbono entra como una molcula de dos carbonosy lo abandonacomo 2 molculasde

Co')'

En las semillasde las especies oleosas, las enzimasde la B-oxidacin y del ciclo del glioxilato selocalizan en orgnulos denominados glioxisomas. Los glioxisomasse encueniran en las semiasde las especies que almacenangrasay algunasvecesen las hojas ejas. En la micrografia electrnica de la Figura 10A.1 se pueden observar los glioxisomas.La ntima asociacinde los glioxisomascon los cuerpos lipdicos, presumiblemente facilita el transporte de cidos grasosdesdeestosultimos a aqullos. La Figura 104.2 recogetodo el metabolismo relivante dentro del contexto intracelular. Los triacilglicerolesalmacenadosse hidrolizan en los cuerposlipldicos, Iiberando cidos grasos.Estosse transportan dentro del glioxisoma y son degradadosmediante la oxidacin a acetil CoA, que estransformado en succinato por las enzimasdel ciclo del glioxilato. El succinato pasaa la mitocondria, donde se convierte en malato pasandopor fumarato en una reaccin que forma parte del ciclo del TCA. (Desecuenta de que existentambin mitocondrias en el cotiledn del pepino de l Figura 10A.1.) El malato estransportado posteriormente al citosol y oxidado a oxalacetato, el cual es descarboxiladopara formar

Proplastidos Glioxisomas lpdicos

Mtocondria

5 rm

Fi$uta10A.1 La asociacinentre los glioxisomasy los cuerposlipidicosen las semillasoleaginosas. Aqu semuestra Ia clula de un cotiledn de una semilla de pepino durante las primeras etapasdel desarrollo germinativo.los glioxisomasy las mitocondrias implicadas en la movilizacin de grasas y en la gluconeognesis estnlntimamente asociadas-con los cuerpos pdicos en ls que se almacenala grasa.La grasaesr,presente principalmente-en forma de triacilgliceroles (tambin llamados triglicridos). Sepuede obseivar la presenciad! proplastid-ios en vez de plastosmaduros, lo que pone en evidencia que el cotiledn no es an fotosiniticamente activo y espor lo tanto, heterotrfico en su modo de nutrirse (TEM).

290

Captulo quimifofo 10 Metabolismo delaenerga: respiracin aerobia

fosfoenolpiruvato (PEP).EI PEP sirve como punto de partida de la en el citosol, dando como producto final sacarosa, gluconeognesis que setransporta a los tejidos en ' el carbohidrato por excelencia, crecimientode la planta. esobviamente La ruta desdelos triacilgliceroleshastala sacarosa bastantecompleja,e implica a enzimasde los cuerposlipdicos, de los

el glioxisomas,de la mitocondria y del citosol. Perorepresenta cordn umbilical metablico del que dependenlas semillasde todas Y complementagran de plantasque almacenangrasa. las especies parte del metabolismo que hemos estadoviendo en los Captulos 9 y el ciclo del TCA, Ia B-oxidacin, 10,incluyendo la gluconeognesis, y ahora tambin el ciclo del glioxilato.

Acidos grasos

F+Pl-l
lJ I F-6-P

tr , lf+F"*,."*l Gluconeognesis

+
| |

tlr'.sa fosf"t"l

t t

t F".f"".l"Iri--rt"i. l- O

I I Oxalacetato Gii,qdl'ts

_1_
lvatato I

clrosol

GLIOXISOMA

que catalizan Enzimas estas reacciones sintasa GC-1:Citrato GC-2:Aconitasa liasa GC-3: lsocitrato sintasa GC-4: Malato GC-5:Malatodeshdrogenasa

MITOCONDRIA

en las semillasoleaginosas. Las semillasde las plantas que almacenangrasapueden Figura10A.2 El ciclo del glioxilato y la gluconeognesis seoxidan a acetil CoA mediante el transformar staen azicar. Los cidosgrasosderivadosde la hidrlisis de los triacilglicerolesalmacenados, anablicade cinco en succinatomediante el ciclo del glioxilato, una secuencia procesode la B-oxidacin. El acetil CoA setransforma despus Todas GC-3 y GC-4, respectivamente. que recibe su nombre del glioxilato, la molcula que seconsumey segeneraen las reacciones ieacciones, las enzimase Ia B-oxidacin y del ciclo del glioxilato seencuentran en el glioxisoma.La transformacin de succinatoen malato tiene lugar en tiene y por tanto, a sacarosa, la mitocondria, mientras que el metabolismo posterior del malato pasandopor el fosfoenolpiruvato,a hexosas el maz y el ricino, el acetil CoA proviene de como la soja,el cacahuete, lugar en el citosol. En las semillasde las plantas que almacenangrasas, de crecersobresustratosde dos carbonoscomo el h y'-oxidacin de cidosgrasos.En las bacteriasy el los microorganismos eucariotascapaces enol o el actafo, el a,rtil CoA se genera a parfir del acetato lilre en una fosfurilac'n dependienged9,ATP

al oxgeno 291 desde lascoenzimas flujo deelectrones delectrones: Transporte

El sistemade transporte de electlones conduce los electrones desdelas coenzimas reducidas al oxgeno Evidentemente, buena parte de la energaliberadapor el catabolismooxidativo de los carbohidratos, grasao protenasse almacena en las coenzimas reducidasde elevada queseproducen energa proceso. en este Esms,estos procesos oxidativospuedencontinuar nicamentesi hay molculas de coenzimas oxidadas disponibles como aceptores de electrones. Esto, a su vez, dependede la reoxidacin continua de coenzimas reducidasmediantela transferen-Or, ciade electrones a un aceptor terminalde electrones en el casode la respiracinaerobia.

coenzimas reducidasal oxgeno,estacopladoal bombeo de protones a travsde la membrana,producindose de estamanera el gradienteelectroqumicode protones del quedepende la sntesis de AIP? El sistemade transporte de electrones consisteen cnco tipos diferentes de transportadores

Los transportadores que constituyenel sistemasonflavoprotenas,ferrosulfoprotenas, citocromos, citocromos que contienen cobrey una quinonadenominada coenzima Q. Excepto la coenzima sonproQ, todoslostransportadores tenascon grupos prostticos especficos capaces de ser oxidados y reducidos reversiblemente. Casi todas las transy El transporte de electrones la oxidacin de las coenzimas. ferencias de electrones ocurren en las membranas, por lo El transportede electrones implica la oxidacinaltamente que no essorprendente que la mayor parte de estos transexergnica del NADH y de FADH, con el oxgenocomo portadores sean molculas hidrfobas. De hecho, la mayoaceptorterminal de electrones, pudiendo escribirlas reacra de estos intermediarios aparecen en la membrana como cionesglobales de la manerasiguiente: partede grandes complejos de protenas llamados compleNADH+H++iOr-NAD++H2O jos respiratorlos. Echaremos un vistazoa la qumica de esAGo' : -52,4kcallmol (10.4) tostransportadores de electrones y despus veremos cmo se organizan en complejos respiratorios y se ordenan en FADH2+ )Or--+ FAD + H2O una cadena de transportadores, que transfieren los electro-45,9 : AGo' kcalimol (10.5) nesdesde lascoenzimas reducidas al oxgeno. El transporte deelectrones, por lo tanto,no sloconlleva Ia reoxidacinde las coenzimas y el consumode oigeFlavoplotenas. En el transportede electrones participan no, sinotambinla liberacin de agua, que esla forma revariasflavoprotenas unidas a membrana,que usancomo ducidadel oigeno y uno de los dos productos finales grupo prosttico, del bien al dinucletido deflavina adenina metabolismo (El otro productofinal es energtico aerobio. (FAD),bien al mononucletido deflavina (FMN). El FMN el dixido de carbonoproducido en el ciclo delTCA;van- es,en esencia, mediamolculade FAD,como semuestra sela Figura10.8 y la Reaccin 10.19.) en la Figura10.9. Un ejemplode flavoprotena esla NADH deshidrogenasa, que forma parte del complejo proteico Elsistema de transporte de electrones.El aspecto que aceptalos pares de electrones msimque provienen del portantede las Reacciones 10.4y 10.5esla gran cantidad NADH. Otro ejemplo, ya conocidopor nosotros del ciclo de energa libre desprendidadurante la oxidacin del del TCA,esla enzimasuccinato deshidrogenasa, que tiene NADH y del FADH, por la transferencia de electrones al FAD como grupo prostticoy forma parte de un comal oxgeno. Losvalores de AG'' de estas reacciones dejanclaplejorespiratorio unido a membrana,queacepta lospares ro que la oxidacinde una coenzima es un proceso altade electrones del succinatoa travsdel FAD.Una caractementeexergnico. La transferencia de electrones selleva a rsticaimportante de las flavoprotenas (y de la coenzima caboen un proceso de muchospasos, que implicauna se- NADH tambin)esquetransfieren, tanto protones, como rie de transportadores de electrones oxidablesreversible- electrones a medidaqueson oxidados y reducidos reversimente que funcionan conjuntamenteen lo que se ha llablemente. mado cadenade transporte de electrones(ETS).De esta manera, la gran diferenciade energa libre entrelascoenziFenosulfoplotenas. Las ferrosulfolrotenas,tambin llamas reducidas y el oxgenoestrepartidaen una seriede (protenas madas ferredoxinas frricassingrupohemo),fortransferencias de electrones y seliberade maneragradual, man parte de una familia de protenas, cadauna con un llevando al mximolas oportunidadespara la sntesis (Fe-S), de centro queconsiste en tomos de hieferrosulfuroso AIP y minimizando la prdida de energaen forma de rroy antfreasociados con los gruposcistena de la protecalor. na.Seconocen, al menos, una docena de centros Fe-Scue Nuestroanlisis del sistema de transportede electrones participan en el sistemamitocondrial de transportede se centraren tres cuestiones: (1) Cules son los prinelectrones. Los tomosde hierro de estos centrosson los cipales transportadores de electrones en la ETS?(2) Cal verdaderos transportadores. Cadatomo de hierro alterna es Ia secuencia de estostransportadores (Fe3*) en la cadena? entrela forma oxidada (Fe2+) y la reducida durante (3) Cmo seorganizan estos transportadores en la memel transportede electrones, que en estecasoafectaa un brana,para garantizarqrreel flujo de electrones desdelas nico electrn.Es ms, las protenas ferrosulfurosas no 292
quimitrofo Captulo 10 Metabolismo dela energa: respiracin aerobia

toman o cedenprotonesmientrascambianentre los estay los reducidos, dosoxidados un aspecto cuyaimportancia seharpatentemsadelante. Gitocromos, A1 igual que las ferrosulfoprotenas, los citocromostambincontienen hierro,pero formandopartedel grupo prosttico deuna porfirina llamadohemo, d, queprobablemente ustereconozca como componente de la hemoglobina(vanseFiguras3.4y 10.12). Existen, al menos, cinco tiposdiferentes de citocromos en el sistema detransporte de electrones, designados comocitocromosh c,cp ay ar.El tomo de hierro del grupo prosttico hemo,al igual que el del centroferrosulfuroso, sirvecomotransportador de electronesen los citocromos. fu, Ios citocromosson tambin transportadores de un nico electrn,sin transferirprotones.Mientrasque los citocromosb, cr, Ay a3son protenas integrales de membrana, el citocromoc esuna protenaperifricade membrana, asociada indirectamente a la caraexterna de sta.Es ms,el citocromo c no forma partede un grancomplejoy puedepor tanto difundir muchomsrpidamente, una propiedadclave paradesempear su papelen proteicos. la transferencia de electrones entrecomplejos quecontienen Citocromos cobre. Ademsde sustomosde hierro, los citocromosay a3tambin contienenun tomo de cobreunido al grupo hemo del citocromo,dondeseen-

cuentraasociado con un tomo de hierro para formar un centro bimetilico hierro-cobre (Fe-Cu).De la mismamanera que los tomos de hierro, el cobre tambin puede convertirse reversiblemente de la forma oxidada(Cu2*) a (Cu+)aceptando la reducida o donandoelectrones. El centro hierro-cobredesempea un papelcrucialmanteniendo una molculade O, unida al complejocitocromo oxidasa hastaque hayatomado los cuatro electrones y los cuatro protones requeridos,momento en el que el O, se libera como dosmolculas de agua.(Un dato nutricional: si alguna vez se ha preguntadopara qu necesita los elementos cobrey hierro en la dieta,el transportede electrones esun buen ejemplo.) Coenzima Q. La coenzimaQ (CoQ), el nico componente no proteico de la ETS,es una quinona cuya estructurase muestra en la Figura10.13. Debidoa su carcter ubicuoen Ianaturaleza, seconocea la coenzimaQ como ubiquinona. La Figura 10.13ilustra tambinla reduccinreversible, en

tl H3c-o\c,,.."roH.

gH. l" i i (cN2cH: c - cHr),oH , .,-^rc-c',c tl

O CoQ (ubiquinona)

r.**-.lf
\l
+ Grupos vinilo

H^C
OJ -n-n-nu -nl

cH,

I I
/ 7

tl
o i
,-, _.,rc-c "" l
, , e v v I

llr'"** |l
l" I - (cH2cH= c - cHr),oH 2c
OH (semiquinona) CoQH

Hac-o\C,,c=..arcH.

cH"

CH:CH,

r.**-.ll
cH^ cH^ o
l'

\l

9H, I
I oHEIVO Figwa LQ.L2 La estructuta del gtupo hemo. El grupo hemo, tambin llamado ferroprotoporfirina IX, es el grupo prosttico en los citocromos b, c,y c Una molcula parecida,llamada hemo A, estpresenteen los citocromos ay a3.El hemo de los citocromos c, y c, esfunido covalentementea la protena mediante enlaces tioster entre los grupos sulfhidrilo de dos cistenasde la protena y grupos vinilo (-CH:CHr) del hemo (destacados en amarillo). En los otros citocromos, el grupo prosttico hemo estunido de forma no covalentea la protena.

ll

'-*n llr tf

OH I H.C O..".C*,rCHs

CH. llll" (CH2-cH :c - CH2) loH , .. -^rC-c 2c "l OH CoQHr(dihidroquinona)

Figura10.13 Las formas oxidadasy reducidasde la coenzimaQ. La coenzima Q (tambin llamada ubiquinona) aceptatanto electrones como protones segnva siendo reversiblementereducido en dos pasossucesivos de un electrn cada uno, formndose primero CoQH (la forma semiquinona) y posteriormente CoQH, (la forma dihidroquinona).

Transporte de lectrones: flujodeelectrones desde lascoenzimas al oxgeno

293

la forma quinona (CoQ) a dospasosde un electrn,desde (CoQHr), pasando la forma dihidroquinona antespor la (CoQH). A diferenciade la mayorade forma semiquinona las protenasde la ETS,la coenzimaQ no forma parte de un complejorespiratorio,sino que seencuentraen el interior apolarde la membranamitocondrial interna (o de la membranaplasmtica, en el casode procariotas). Lasmolculasde CoQ son los transportadores de electrones ms abundantes en la membranay ocupanun lugar centralen la ETS,sirviendo como un punto de recoleccin de electronesdesde los gruposprostticos reducidosde las deshidrogenasas unidasal FMN o al FAD en la membrana. Desecuentade que la coenzima los Q no slo acepta electrones cuandosereduce, sino tambinlos protonesy que libera,tanto los electrones, como los protonescuando seoxida.Estapropiedadescrucialen la funcin de la coenzima Q en el transporteactivo,o bombeo,de protonesa travsde la membrana mitocondrialinterna.Cuando la CoQ sereducea CoQH2,acepta siemprelos protones desde un lado de la membrana, posteriormente difunde a travsde ella haciala superficieexterna,donde se oxida a CoQ, propulsandolos protoneshaciael otro lado de la membrana.Esto proporcionauna bomba de protonesacoplada al transporte que esuno de electrones, por los que se piensaque las mitode los mecanismos y los procariotasestablecen y condrias,los cloroplastos mantienenun gradiente electroqumico de protonesque la energa se usa para almacenar del transportede electrones. Lostranspoltadoles de electlones funcionan en una quevenedeteminadaporsus potenciales secuenca de reduccin Ahora que conocemos los tipos de transportadores que conforman la ETS,nuestrasiguientepreguntahace referenciaa la secuencia en que estos transportadores operan. qu significael poParaello, es precisoque entendamos tencial de reduccin estndar, Es', que esuna medida,en por los voltios(V), de la afinidadquetieneun compuesto Describe la facilidadde un compuesto para gaelectrones. y reducirse. nar electrones Lospotenciales de reduccin se por un par redox (reducdeterminanexperimentalmente cin-oxidacin), que consisteen dos molculasque son por la prdida o gananciade electrones. interconvertibles Por ejemplo,el NAD+ y el NADH constituyenun par rey el Fe3+, dox,al igualque el Fe2+ o el ]O, y el HrO, como semuestra en lasEcuaciones 10.6a 10.8. (10.6) NAD- + H- + 2e- -""'-> NADH
..

presentes electrones cuandovariosparesredoxestn en un mismo sistema, como esel casodel sistemade transporte de electrones. Como seha descritoanteriormente, el potencialde reduccin es una medida de la afinidad por los electrones, quetienela forma oxidadade un par redox.Tenerun valor positivo de Eo' para un par redox significa que la forma oxidadatiene una gran afinidadpor los electrones, y constituye, por tanto, un buen aceptor de electrones. Por ejemplo, el valor de Eo'paraeI par OrlHrO esaltamente positique que vo, 1o significa el O, es un buen aceptor de electrones. Por su parte,el par NAD+/NADH tiene un valor de Eo' muy negativo, lo que quieredecir que el NAD+ esun aceptorde electrones malo. Por otro lado, un valor negativode Eo' puedeservisto como una medidade la capacidadcomo donador de electrones, que tiene la forma reducidade un par redox.De estamanera,el valor de Eo' tan negativodel par NADH significaque el NADH constituyeun buen donadorde electrones. Conocimientos delospotencales deleduccin estndaLPara estandarizar los clculos y lascomparaciones delos potenciales de reduccin de variospares redox,necesitamos valores determinados bajo condicionesespecficas. Con este propsito,usaremos el potencialde reduccinestndar (Eo'),que esel potencial para un par redox de reduccin (25 "C, I M de concentracin, bajocondiciones estndar 1 atmsfera de presiny un pH de 7,0).Los potenciales de reduccinde los paresredox ms relevantes se muestran en la Thbla10.2. Por convencin, seusael par redox2H+/H, comoreferencia,al que se le asigna el valor de 0,00V (Tabla10.2, lnea en negrita).Un par redox que tengaun potencialde reduccin estndarpositivo significa que, bajo condicionesestndar, la forma oxidadadel par poseeuna afinidad que el H- y que aceptar mayorpor los electrones los electronesdel Hr. En cambio,un potencialde reduccinnegativo quieredecir que la forma oxidadadel par tiene menos queel H+ y quepor lo tantodoafinidadpor loselectrones narlos electrones al H- paraformar Hr. Lospares redoxde la Tabla10.2estn colocados en or(es deci los den, con los valoresde Eo' ms negativos y, por tanto,los agentes mejoresdonadores de electrones reductores ms fuertes)en la parte superior.Todoslos pares redoxque semuestranen la Figura10.2puedenllevar a cabouna reaccin redox con cualquierotro par.El sentidode dichareaccin bajo condiciones estndar pueporque,la forma reducida de predecirse, par de cualquier redoxreducirespontneamente la forma oxidadade cualpor debajo quierpar queseencuentre de l en Ia tabla.De estamanera,el NADH puedereducir al piruvato alactato, pero no puedemediarla reduccindel a-cetoglutarato a isocitrato. La tendenciade una forma reducidade un par a reducir la forma oxidadade otro par puedecuantificarse deter-

te-

t+

+e

- )+ ---------)Fe-

(r0.7)
(lo.s)

ior+

2l':'++ 2e- -------->Hro

Losvaloresrelativosde Eo' nos permiten compararpares redox y predeciren qu direccin tenderna fluir los
294

quimitrofo Captulo 10 Metabolismo delaenerga: respiracin aerobia

para lospares redox Tabla 10.2 Potenciales de reduccin de importancia biolgica*

Palesredox * forma (forma reducida) oxidada
Acetato --+ piruvato Succinato --+ d-cetoglutarato Acetato + acetaldehdo 3-fosfoglicerato --+ gliceraldehdo 3-P a-cetoglutarato + NAD- +NADH FMN+FMNH2 + 1,3-difosfoglicee Acetaldehdo + Piruvato + etanol gliceraldehdo 3-P isocitrato

N,e de electrones

lla con un valor negativo de AGo'y positivode AEo'.Para reaccin cualquier de oxidacin-reduccin, AGo'est relala ecuacin: cionadocon AEn'mediante

Eo'(V)
-0,70 -0,67 -0,60 -0,55 -0,38 -0,32 -0,30 -0,29 -0,20 - 0,19 - 0,18

AG' : -nF a,Eo'

(r0.rr)

z
2 2 2 2

y F es la donde n es el nmero de electrones transferido constante de Faraday(23.062callmol). Por ejemplo,la reaccin del NADH con el ogeno (Reaccin 10.4)implide doselectrones, por lo quela AGo'de cala transferencia puedecalcularse reaccin esta de la siguiente manera AGo': -2F LEo': *2(23.062)(+1.136) : 52,400 (10.12) callmol:52,4 kcal/mol El valorde esta reaccin esnegativo, por lo quela transferencia de electrones desde el NADH al O, estermodinmicamente espontnea bajo condiciones estndar. Es,de potenciales hecho,Ia diferencia de de reduccin entrelos pares redoxNAD+/NADHy OrlHrO,la quedirigela ETSy mantiene el gradiente electroqumico de protones.

z
2

z
2 2 2 2 2 2 I 2

Iactato

FAD+FADH2 Oxalacetato --+ malato Fumarato + succinato

-0,r7 -0,03
0,00+* +0,04 +0,07 +0,25 +0,29 +0,55 +0,77 +0,816

Reuniendo el sistema de transporte de electrones, En este momento disponemos de la informacinnecesaria para 1 Citocromo c (Fe3++ Fe2t) juntar laspiezas de la ETS.Como ya sabemos, consiste en 1 Lltocromo a (t'e" + te- ) varias deshidrogenasas unidas al FMN y al FAD, protenas .- + - )+. t Lltocromo4J(te- +te) ferrosulfurosas con un totalde 12o mscentros Fe/S, cinco -. 1+ -- )+ ,. + (ion Fe'Fe' inorgnico) 1 citocromos, dosde elloscon un centroFe/S, y un conjunto tlzOr+ 11rg 1 de molculas de CoQ queseencuentran en una forma oxi(CoQ), (CoQH) parcialmente dada reducida o en la forma * El valor de AEo' corresponde a la siguientehemirreaccin, donde n esel (CoQHr). reducida En la Figura 10.14 muestran se losprinnmero de electrones transferidos: cipales componentes de la ETS ordenados en funcin desus + Forma oxidada* nH- I ne forma reducida (los ** Por definicin,estepar redox esel punto de referencia potenciales de reduccin estndar valores de AEo' estn que seusapara que [H]] : 1,0My determinar losvalores de losotrospares redox; serequiere calculados segn Ia Thbla10.2), desde el NADH libre (Eo': po tanto,el pH es0,0.A un pH de 7,0,el valordelpar 2H*lH2es -0,42. -0,32V) y el del FADH2 de la succinatodeshidrogenasa (Eo': -0,18V) al ogeno (Eo': +0,816V). En trminos de energa, el punto clavede la Figura 10.14 esque la posicinde cadatransportador estdeminando AEo',la diferencia entre los valores de Eo' entre terminado por su potencial de reduccin estndar.En dos pares: el sistema de transporte de electrones con(lo.e) otraspalabras, AEo' : Eo'u..pto.- Eo'donudo, siste en una serie de transportadores quedifierenqumicamenteentres y cuyo orden de partipacinen Ia transfePor ejemplo, AEo' para la transferencia de electrones (Reaccin renciade electrones por suspotenciales desdeNADH al O, 10.4) se calcula de la manera estdeterminada siguiente,con el NADH como donador y el O, como acepde reduccinrelativos. A su vez,estoquieredecir que la tor: transferencia de electrones desde el NADH o el FADH, en parte parte la superior al O, en la inferior esespontnea y AEo' : Eo'u*ro, E''do*dor: * 0,816- (-0,32): t1.136V exergnica, con algunas de las transferencias entretrans(1o.ro) portadoressucesivos por grandesdiferencaracfeizadas ciasen susvaloresde Eo' y en consecuencia por grandes en la energa libre. cambios La refacin entte AGo'y AF', Como yahabr podido imaCitocromo & (Fe3+--+ Fe2*)

2H+ +Hz CoQ- --+ 66q1,

ginar, AE6' es una medida de Ia esponteanidadde la reaccin redox entre dos pares redox cualquiera en condiciones estndar.La espontaneidadde una reaccin redox en condicionesestndarpuede expresarse como AGo' o AEo'. Por convencin el signo de AEo' es el contrario del de AGo', de tal manera que una reaccin exergnicaes aqu-

La mayora de los transportadores estnorSanizados en cuatrograndes compleos respitatorios Aunque existenmuchostransportadores de electrones implicadosen la ETS,la mayorpartede ellosno seencuentran

delectrones: flujo deelectrones Transporte desde lascoenzimas al oxgeno 295

@*"
-0,2
Gomplejo l: NADH-coenzima Q oxidorreductasa Complejo ll: Succinato-coenzima Q oxidorreductasa
o
X 6 C q)

o
C

o.)

c.) o)
X

o
(J

IJJ

Complejolll: Coenzima c Q-citocromo oxidorreductasa

u,tr '@

b c) oq) c O

c) o q
C) c

o
O

b tu v,a <
\o

(
O Y

(\
lV: Compleo Citocromo c oxidasa

0,0
y sus energticas, Los intermediarios Figuta10.14 Pilncipales componentes de los complejos lespitatorios ms importantesen el transportede electrones desdeel NADH (*0,32 V) secolocanverticalmente en funcin de susniveles energticos, que semiden por sus (Eo', ejeizquierdo).Semuestranlos cuatro complejosrespiratorios potenciales de reduccinestndar como grandesva1os marrones,que contienenlos principalestransportadores de electrones encuadrados en otro valo interior. La coenzimaQ y el citocromo cson intermediariosmvilesy pequeos que transfierenlos electrones entre varios complejos. Laslneasrosasmarcanel flujo exergnico de electrones a lo largo del sistema. En los ejesde la derecha seencuentranlos valoresde AE,' y AG,,' del oxgeno(esdecir,los cambiosen los potenciales de reduccinestndar yla energa libre estndar de la transferencia de electrones al O,).

en la membrana como entidadesindividuales.Al contrario, el comportamiento de estostransportadoresen experimentos de aislamiento mitocondrial indican que estn organizados en complejos mubiproteicos. Por ejemplo, cuando se extraen membranas mitocondriales mediante procedimientos delicados, slo la coenzimaQ y el citocromo c seliberan fcilmente.Los dems transportadorespermanecen unidos a Ia membrana interna y no se liberan, a no ser que setrate a la membrana con detergentes o con solucionessalinas concentradas. Dichos tratamientos extraenel resto de los transportadoresde electrones no como molculasindividuales sino como cuatro grandescomplejos. Basndose en stosy otros resultadossimilares,sepiensa que los transportadoresde electronesen la ETS estnor296

ganizadosen la membrana mitocondrial interna en cuatro tipos diferentesde complejos respiratorios. Estoscomplejos se muestranen la Figura 10.14en forma de valosmarrones y con nmeros romanos, que indican no slo el orden de los diferentes transportadores de electrones en funcin de susvaloresde En' sino tambin su orsanizacin en Ia membrana. Propiedades de los complejos respiratorios. Cada complejo respiratorio est formado por la unin de polipptidos y grupos prostticos,y cadauno desempeauna nica funcin en el proceso del transporte de electrones.La Tabla 10.3 recoge algunas de las propiedades de estos complejos.

quimitrofo Captulo 10 Metabolismo delaenerga: respiracin aerobia

Tabla 10.3 Ptopiedades de loscomplejos respiratorios mitocondriales

Complejo respiratorio

Flujode electrones Nmero de polipptidos*

A2

Nmero

Nombre
NADH-coencima Q oxirreductasa (NADH deshidrogenasa) Succinato-coenzima Q oxidorreductasa (succinato deshidrogenasa) Coenzima Q-citocromo c oxidorreductasa (complejo citocromo b-c,) Citocromo coxidasa

Grupos prostticos
I FMN 6-9 centros Fe-S l FAD 3 Fe-S centros 2 citocromo&
f .i+^"nmn.

Aceptado de NADH

Pasadoa
Coenzima Q

Protonestranslocados (por par de electrones)

\7) 4 (0) 11 (t) I3 (3)

Succinato a Coenzima Q travs de enzima unida a FAD) Coenzima Q Citocomo c

1 centro Fe-S 1 citocomo a

l -;+^--^-^ r trLU\rurrru al

Citocromo c

Oigeno (Or)

2 centros Cu (comocentros Fe-Cu con el citocromoa3)

*En cada complejo se indica entre parntesis el nmero de polipptidos codificado por el genoma mitocondrial. **El valor del complejo III incluye 2 protones translocados por la coenzima Q.

El complejo I transfiere los electronesdesdeel NADH a la coenzima Q y se denomina compleio NADH-coenzima Q oxidorreductasa (o coffiplejo NADH deshidrogenasa).EI complejo II transfiere a la CoQ los electronesderivados del succinato de la reaccin TCA-6. Estecomplejo se conoceformalmente como complejo succinato-coenzima Q oxidorreductasa, aunque frecuentementese utiliza el nombre abreviado,succinatodeshidrogena.sc. El complejo III se denomina complejo coenzima Q-citocromo oxidorreductasa porque aceptalos electronesde la coenzima sehacereferenciaa este Q y los pasaal citocromo c.A veces, complejo como citocromo b/c, porque son estosdos citocromos sus principales componentes. El complejo IV transfiere los electronesdesdeel citocromo c al oxgeno y se llama citocromo c oxidasa. La Figura 10.15muestra los tres complejosnecesarios para la oxidacin del NADH (complejos I, III y IV) en su apropiado contexto eurocariota, la membrana mitocondrial interna (no se incluye el complejo II en la figura porque steno participa en la oxidacin del NADH). Tambin se muestra en Ia figura el bombeo hacia el exterior de protones a travsde la membrana, que acompaaal transporte de electrones.Cada uno de estos complejos representa un punto de bombeo de protones. El paso de electronesa travsdel complejo II no estasociadoa una translocacin de protones a travsde la membrana. La funcinde la citoclomoc oxidasa. Entre todos los complejos respiratorios que participan en la respiracin aerobia en el hombre, slo la citocromo c oxidasa,al final del sistemade transporte de electrones,es una oxidasa termilnal,capazde transferir directamente los electronesal o-

geno. Este complejo representa,por tanto, el nexo crucial entre la respiracin aerobiay el oxgeno que hacetodo esto posible. Los iones de cianida y azidason extremadamente txicos para casi todas las clulasaerobiasporque se unen fuertemente al centro de hierro-cobre de la citocromo c oxidasa,y bloquean, por lo tanto, el transporte de electrones.

Loscomplejos tespiratotos se mueven liblemente dentro dela membrana ntefna

A diferencia de ciertas protenas integralesde la membrana plasmtica, los complejos proteicos de la membrana mitocondrial interna son mviles y pueden difundir libremente a lo largo del plano de la membrana. Esta difusin puede demostrarseexperimentalmente.En un experimento, por ejemplo, se colocaron las membranas mitocondriales internas en un campo elctrico y se analiz la distribucin posteriormente mediante criofractura. Se observ que Ias partculas que correspondana los complejos proteicos se acumulaban en un extremo de la membrana. Cuando seinterrumpa el campo elctrico,las partculasse distribuan aleatoriamente en cuestin de segundos,demostrando claramentela capacidadde difundir libremente en una bicapa lipdica. Los resultadosde stey de otros experimentosdemuestran que los complejos respiratorios no se estn alineados en una membrana de la manera ordenada que muestran los libros de texto, sino que son complejos mviles en la membrana. De hecho, la membrana mitocondrial interna poseeuna elevadaproporcin de fosfolpidos insaturados con respectoa los saturadosy no tiene casi colesterol,por

Transporte de lectrones: flujo deelectrones desde lascoenzjmas al oxgeno 297

10H*
4Ht 2H+ 2H+

ESPACIO INTERMEMBRANA 3H+

4+'

12e-

2e-

2H+

[ochir'lrnnonaccc

'fYft / |

NAD++ H+ \
l

lor+zn

3H+ MATRIZ

Figura10.15 El flujo de electronesa travs de los complejosI, lll y lV con el concomitantebombeodileccionalde plotones, Los electrones derivados de los sustratosoxidablesen la matriz mitocondrial setransportan a la superficie de la membrana interna graciasal NADH, mediante un flujo exergnicodesdeel NADH al ogeno, a travsde los complejos respiratorios I, III y IV. Las transferenciasde electrones entreloscomplejoslyllyentreloslllylV,estnmediadasporlacoenzimaQ(CoQ) yelcitocromoc(citc),respectivamente.Encada complejo se muestran los principales transportadoresde electrones;la mayora de ellos son protenas Fe-So citocromos. Tambin se indica el nmero de protones bombeadosdesdela matriz al espaciointermembrana por cadapar de electronestransferidos por cadacomplejo. Estosnmeros representanlos valoresadmitidos por la mayorla de los investigadores en cada caso.El nmero de protones requerido para la sntesisde una molcula de ATP por la AIP sintasaFoF,seencuentra entre 3 y 4; en estecaptulo, seasumir un valor de 3 a la hora de r ealizarclculosenergticos.

lo que presentauna elevada fluidez y consecuentemente, poseen los complejos respiratorios una granmovilidad. Frecuentemente suelehacerse referenciaal sistemade transporte de electrones como una <cadena>. Estaesuna, acertada si Ia entendemos en el sentidode que descripcin el flujo neto de electrones ocurre desde el NADH a la citocromo oxidasay que cadatransportador de la secuencia puede interaccionarnicamentecon el componentedel y con el componenteal que selos que recibelos electrones dona.Sinembargo, el trmino<cadena, no esapropiado si sugierealgntipo de localizacinfija o secuencia ordenada de los transportadores dentrode la membrana. Al contrario, cadacomplejodifunde aleatoriamente, al igual que las molculasde coenzimaQ y el citocromo c que transportanlos electrones entreellos. Como seindicaen la Figura10.14, el NADH, la coenzima Q y el citocromo c son intermediariosclaveen el procesode transferencia de electrones. El NADH une la ETS (oxidacin)del cilas reacciones con de deshidrogenacin y clo del TCA con casicualquierotra reaccin de oxidacin que tengalugar en lamatriz mitocondrial (o en el citoplasma, en el casode lasclulas procariotas), dondela coenzima Q y el citocromo ctransfierenelectrones entrecomplejos respiratorios. La coenzimaQ aceptalos electrones
298

tanto del complejoI como del II, y representa de hecho, el <embudo> querecoge los electrones de casicualquier reaccin de oxidacinde Ia clula.La coenzimaQ y el citocropequeas que pueden mo c son molculasrelativamente difundir rpidamente,ya sea dentro de la membrana (coenzima de sta(citocromo c). Q) comopor la superficie -se ha estimadoque exismuy numerosas Son,adems, de 10molculas de citocromocy 50 molcuten alrededor las de ubiquinonapor cadacomplejoI-. Debido a su y movilidad, estostransportadores abundancia colisionan con los complejosprincipalescon la suficientefrecuencia paraexplicarlastasas de transferencia de electrones observadasen la mitocondria con respiracinactiva.

El gradiente electroqumico de protones: la clave para el acoplamiento de energa

quelascoenzimas Hastaahora,hemosaprendido sereducen durante Ios procesos oxidativosque tienen lugar durante la glucolisisy el ciclo del TCA, la primera y segunda etapasde la respiracinaerobia(etapas1 y 2 de la Figu-

quimitrofo Capitulo 10 Metabolismo delaenergla: respiracin aerobia

quelascoenzimas reTmbin hemosaprendido ra 10.1b). mediantela transfererencia exerducidasson reoxidadas gnicade electrones al oigeno, a travsde un sistemade y que reversiblemente intermediariosque puedenoxidarse estn localizadosen la membrana mitocondrial interna (etapa3a).Ahora consideraremos cmo seusala energa para gelibre liberadadurante el transportede electrones de protonesy cmo se nerar un gradienteelectroqumico parapromoverla sntesis de :ut:/;izala energa del gradiente la la Figura10.1b, estamos a punto de estudiar AIP. Segn etapa3b (bombeo de protones) y la etapa4 (sntesisde aerobia. ATP) de la respiracin de AIP que implica Dado que esuna forma de sntesis al transporte de elecprocesos de fosforilacin asociados el procesose denomina del oxgeno, tronesdependiente fosforilacin oxidativa, para diferenciarlade la fosforilaque tienelugar comoparteinteel de sustrato, cin desde gral de una reaccinespecfica en una ruta metablica(algunos ejemplos de estasfosforilacionesen el nivel de Gly-7 y GIy-10de la ruta de la sustratoson las reacciones TCA-5 del ciclo del TCA; vanse glucolisisy las reacciones Figuras 9.6y 10.8).

deADP esbaja(cuandola concentracin concentracin de AIP esalta). La fosforilacinoxidativaest,por tanto, recelulares de ATR de la misma guladapor las necesidades lasmolculas que el flujo de electrones desde orgmanera al oigeno est ajustado a los requerinicascombustibles mientosenergticos de la clula.Estemecanismo de regupatente durante el ejercicio, cuando la lacin se hace un increacumulacindeADP en el tejido muscularcausa seguidopor mento en la tasade transportede electrones, de oxgeno. un dramticoaumentoen lasexigencias perdidor quimiosmtico: el ueslabn El modelo de pfotones es un gradente

de AIB una reacDequ manerapuedeestarIa sntesis acoplada al transportede electrocin de deshidratacin, nes,que implica la oxidaciny reduccinsecuencial de varios complejosproteicos en una bicapa lipdica? Los perola han dadomuchas vueltasa estacuestin, cientficos susmejores esfuerzos respuesta ha resistido durantedcaconvencidos de que en la fosforiladas.La mayoraestaban cin oxidativatendran que estarimplicadossin duda inde alta energa, de la misma maneraque Io termediarios como las que tieestnen Ia fosforilacindesdesustratos y la sintesisde ATP El transporte de electrones productorasde ATP de la ruta nen lugar durantelasetapas asocados son fenmenos Reaccin de la glucolisiso del ciclo del TCA (vanse Gly-6 yla reaccin TCA-4 de la Figura 10.8). la Figura 9.7 de punto la fosforilacin oxide vista mecanstico, Desdeun Peromientrasque otros continuabansu febril bsquedativaesun procesode mayor complejidadque la fosforiel bioqumicobritniintermediariosde altaenerga, de da de hecho, ha sido un asunto De lacin desdesustratos. plante la revolucionaria ideade queesos co Peter Mitchell aos de hisy confusin durantesus60 gran controversia pudiesen En no existir. 1961, Mitchellprointermediarios un cientficode renombre toria, llevandoa Efraim Racker, que puso alternativa, llam el modelo de que una explicacin en el campo,a comentaren un determinadomomento quimiosmtico. modelo, acoplamiento Segn este la tras<Aquelque no estconfundido respecto a la fosforilacin por de electrones medio de los comla situacinu. ferenciaexergnica no comprende esquesimplemente, oxidativa por el bombeo plejos respiratorios estabaacompaada queel nexocrucialensabemos Actualmente, sin embargo, a travs la membrana en la que unidireccional de protones y la produccin de ATP es tre el transportede electrones de transporte.EI gradienteelectroel sistema un gradienteelectroqulmicode protones que seestablece selocalizaba y semantienede esta qumicode protonesque segenera dela mempor el bombeodireccional deprotones a travs de electrones. forma proporciona la fuerzaimpulsora de la sntesisde ocurriendo el transporte branaenla queest perdido>entreel transel <eslabn ATP.En otraspalabras, son El trmino acoplamiento significa que dos procesos y la sntesis de AIP no era un intermeuno del otro. Decir que el transportede elec- porte de electrones dependientes sino un gradienteelectroqumico diario de alta energa de no slo quiere de AIP estnacoplados tronesy la sntesis protones. Este mecanismo seilustraenla Figura10.15, que del flujo de AIP depende crticamente decir que la sntesis muestra, tanto el bombeo hacia fuera de protones que el flujo de electrones esnisino queadems de electrones, entrelos complejos al transporte de electrones acompaa posiblecuandopuedesintetizarse el AIP. camente de AIR promovidapor los proI, III y IV comola sntesis al complejoFoFr. tonesgracias del tmnsporte de electrones.Ya que eI Contlolrespiratodo la teorade Mitchell se encontr Como podr suponer, de AIR estacopladoa la sntesis transportede electrones inicial y un escepticismo considerables. la disponibilidadde ADP regulala tasade la fosforilacin con una resistencia No slosetratabade una posturaradicalquenadatenaque Estoes oxidativa por lo tanto,el transportede electrones. acerca del acoplamienver con el conocimientoconvencional lo que sellama control respiratorio, y su importancia fiMitchell la propusosin ningn dato exel transportede electro- to, sino que adems siolgicaesfcilmenteapreciable: perimental. Sin embargo, con el pasode los aos, sehan ido cuandola nesy la produccinde AIP estarnfavorecidos (esdecir,cuandola cony acumulandouna gran cantidadde pruebasque la apoyan, concentracin de ADP eselevada conelpremioNobelporsu en1978 Mitchellfuegalardonado centracinde AIP es baja) y estn inhibidos cuando la
para la clave el acoplamiento deenergia electroqumico deprotones: Elgradiente 299

trabajopionero.Hoy en da,el modelode acoplamiento quimiosttico esun conceptobien verificado que proporciona un contexto unificadordel conocimiento de lastransformaciones energticas no sloen lasmembranas mitocondriales, sinotambinen los cloroplastos y enlasbacterias. El aspecto principal del modelo quimiosmticoesque el nexoentreel transporte de electrones y la produccinde ,4TPes un potencialelectroqumico a ambosladosde una membrana. Es esteaspecto, de hecho,el que da al modelo su nombre:la parte de <quimio>hacereferencia a los proqumicos cesos de oxidacinyalatransferencia de electronesy la parte<osmticoproviene de la palabra griegaosmos, qluesignifica <empujar>-empujar los protones a travsde una membrana, en estecaso-. El modelo cuimiosmticoha resultado serexcepcionalmente til no slo porque explicade forma muy plausiblela produccin de ATP acoplada, sino tambin por la influencia dominante quetieneen la manera en queentendemos la conservacin de energa en los sistemas biolgicos. La oxidacin de las coenzimas bombea los protones paragenerar suficientes y 2 ATP 3 ATPpor cadaNADH por cadaFADH2 Antes de considerar las pruebasexperimentales que han confirmadoel modeloquimiosmtico, que la Fiobserve gura 10.15 nos proporciona una estimacin de los protonesbombeados haciafuerapor los trescomplejos respiratorios que participan en la oxidacin del NADH, al igual quedel nmerode protones queserequiercparaimpulsar la sntesis de ATP por el complejoFoF,. La palabra<estimacin>aquesimportanteporquelos investigadores todava no seponende acuerdo en estos nmeros. Como ya hemosvisto,la mayora de lasdeshidrogenasas de la matriz mitocondrial transfieren los electrones desde sustratosoxidablesal NAD+, producindose NADH. El NADH, a su vez, transfierelos electrones al componente FMN del complejo I, y por tanto,seiniciael sistema detransporte de electrones. Como muestra la Figura10.15, la transferencia dedoselectrones delNADH al oigeno, a travs dela cadena respiratoria vieneacompaada por el bombeotransmembrana de4 protones por el complejoI, 4 protones por la CoQ ms el complejoIII, y 2 protonespor el complejoIV, quesumanun total de 10protones por cadaNADH. Se piensaque el nmero de protonesrequeridospara promoverla sntesis de una molcula deATPpor la ATPsintasaFoF, al nmerode3 comoel ms , esde3 4,tenindose probable.Si asumimosque se bombean 10 protonespor cadamolculade NADH oxidaday que senecesitan 3 protonespor cadamolculade AIR podremosentonces concluir que la fosforilacinoxidativatieneun rendimientode 3 molculas de ATP por cadamolculade NADH oxidada. Estoencaja bien con lasevidencias existentes desde1940de quegeneralmente existe una relacinfija entreel nmerode molculas deATPgeneradas y el nmero de tomosde o300

genoconsumidos enla respiracin, segn sepasan un par de electrones a lo largode la secuencia de transportadores desde lascoenzimas reducidas al oxgeno. Racker y suscolaboradores, por ejemplo,mostraronen vesculas sintticas de fosfolpidos que contenan los complejos I, III o el complejo IV que sepodagenerar una molculade ATP por cadapar de electrones quepasan a travsdel complejo. Estos resultados estnde acuerdocon nuestroconocimientoactualde que cadauno de estos tres complejos funcionancomo una bomba de protones, contribuyendode estamaneraal gradientede protonesquepromueve la sntesis deAIP. Parafacilitar nuestroanlisis, asumiremos que el rendimiento deATP es3 para el NADH y 2 parael FADHT, aunque teniendopresente que dichosrendimientos no seconocen de una manera precisa. Estos nmeros son razonables, teniendo en cuenta queel valorde AGo'parala oxidacindel NADH por el oxgenomolecularesde -52 kcal/mol.Estosuponeun cambiode energa libre suficiente paraproducir 3 AIP (cadauno de ellosrequiereaproximadamente 10kcal/mol),aun en el casode quela eficacia seaslodel 50ol0. quimiosmtico El modelo por un ha sido comprobado conjuntoimpresionante de evidencias Desde que seenuncipor primeravezen 1961, el modelo quimiosmtico ha sido universalmente aceptado como el nexo entre el transportede electrones y la sntesis de AIP. Paraentender por qu, consideraremos primero algunas de las llneasde pruebas experimentales ms importantes que apoyanestemodelo.Durante el proceso, aprenderemostambinalgomssobre el mecanismo deacoplamiento quimiosmtico. 1,, El transporte provoca de electrones el bombeo de protones fuerade la matlizmitocondrial Pocodespus de proponerel modeloquimiosmtico, Mitchelly su colaboradora ]ennifer Moyle demostraronexperimentalmenteque el flujo de electrones a lo largo del ETS vieneacompaado del movimiento de protonesa travsde la membrana mitocondrialinterna.En primer lugar,colocaronmitocondrias en un medio en el que no podatener lugar la transferencia de electrones porqueno habaoxgeno. La concentracin de protones(es decir,el pH) del medioseiba midiendoconformeseestimulaba la transferenciade electrones aadiendo ogeno. Bajoestas condiciones, el pH del medio descenda rpidamente ya fuesela fuente de electronesel NADH o el succinato (Figura 10.16). Yaque un descenso en el pH reflejaun incremento en la concentracin de protones,Mitchell y Moyle concluyeron que la transferencia de electrones en la membrana mitocondrial interna est acompaadade un bombeo unidireccional de protones desdela matriz mitocondrial al medio externo.

quimitrofo Captulo 10 Metabolismo delaenerga: respiracin aerobia

Succinato

ilempo

----------->

Figura10.16 Prueba de experimental de que el transporte electlonesgeneraun gtadientede ptotones, Seincubaron mitocondrias aisladascon NADH o succinato como fuente de electronesen un medio sin oxgeno.El pH del medio seiba midiendo conforme se estimulabael transporte de oxgeno rpido del aadiendo una cantidad conocida de ste.El descenso de protones,lo que pH reflejaun incrementode la concentracin indica que sebombeaban hacia fuera de la matriz mitocondrial cuando haba oxgeno disponible. El cambio de pH fue reproduciblementemayor con el NADH que con el succinato,Io que concuerdacon el mayor rendimiento que se obtiene con la oxidacin del NADH.

asimtricamente denconformanla ETSestndispuestos Si no fuese as,los protonespodran, tro de la membrana. en lasdosdirecciones. en teora,bombearaleatoriamente utilizandovariosanticuerclaramente, Seha demostrado para interpos,enzimas y agentes marcadores diseados de la membrana,que accionarcon varios componentes respiratorios de los complejos esalgunosconstituyentes haciala matriz mitocondrial,otros estn tn orientados en el lado contrario, y otros son protenas expuestos Dichos descubrimientos confirman la transmembrana. del ETSestndistrisuposicin de que los componentes a lo largo de la membranamitobuidosasimtricamente que semuestraen la Figuinterna, en la manera condrial ra 10.15. quecontienen los complejos I, Ill o lV, 3, Lasvesculas gradentes de protones establecen proviene Otra pruebaen favordel modeloquimiosmtico que consisten en la reconstruccin de de los experimentos de los componentes vesculas a partir de la combinacin por separado. Dado que cadacomplejorespiratorio I,III y para la sntesis IV presenta un sitio de acoplamiento de Figura10.15), el modeloquimiosmtico supoNIP (yase complejos debera ser capaz de ne que cadauno de estos mitocondrial bombearprotonesa travsde la membrana ha sidoconfirmada experimentalsuposicin interna.Esta vesculas de fosfolpidos artificiales mentereconstruyendo I, III o IV. Cuandoselesproque contienen los complejos porcionaun estrato oxidable apropiado, cadauno de estos protones escapaz debombear a travs de la trescomplejos Como sehabaapuntadoantemembranade la vescula. de sintetivesculas son tambincapaces riormente,estas zar NIP. oxidativa requele un compartmiento 4. La fosforilacin porunamembrana rodeado esquela obviadel modeloquimiosmtico Una prediccin tiene lugar dentro de un oxidativa slo comfosforilacin mitocondrialinpartimientocerradopor una membrana no podramantenerse el gradiente tacta.De otra manera, permite que la sntesis deATP. Estasuposicin deprotones mediante la deha sido confirmada experimentalmente de electrones llevada mostracin de que la transferencia a no puedeacoplarse aislados a la sntecabopor complejos complejos estn incorporados sisdeAIP a no serqueestos queformenuna vescula cerrada. en membranas impiden desacoplantes tanto 5. Lassustancias de un gtadiente la sintesisde ATPcomola generacn de protones Una pruebaadicionalque enfatizael papel desempeado por el gradientede protonesen la sntesisde ATR

El mecanismo por el cual se acopla Ia transferencia de

electronesde un transportador a otro en el transporte direccional de protones, no se conoce muy bien todava. De hecho, esposible que existams de un mecanismo.Uno de los posibleses el comentado anteriormente de la coenzima Q, que translocados protones a travsde la membrana mitocondrial alavez que transporta dos electronedel complejo I al complejo III (Figura 10.15). Los datos experimentalesactualessugieren que, en el casodel bombeo de protones por parte de los complejos I y IV, existeun segundomecanismo de bombeo que puede consistir en cambios alostricosde la conformacin de las protenas. En un estado conformacional, un polipptido del complejo podra unir un protn en la superficie interna de la membrana. La transferenciade uno o ms electrones a travs del complejo, causaraun cambio conformacional del polipptido, que liberara el protn en la cara externa de la membrana. De esta manera, el bombeo de protones puede llevarsea cabo bien por el desplazamiento fsico de una molcula transportadora como en el casode la coenzima Q, o bien mediante un cambio conformacional en un polipptido de un complejo respiratorio.

2. Loscomponentes delsstema detranspotte dentro estn orientados asimtricamente deelectrones mitocondrial intetna de la membrana
El bombeo unidireccional que demostraron Mitchell y Moyle exige que los transportadores de electrones que

para laclave el acoplamiento deenerga 301 deprotones: Elgradiente electroqumico

provienede los estudios en los que sehan usadosustanque el potencial Observe de membranaesresponsable cias como el dinitrofenol (DNP), que se sabeque desde msdel7\o/odel pmf mitocondrial.En el siguientecapiacoplala sntesisde ATP del transporte de electrones. tulo veremos quela mayorparte del pmf del cloroplasto se Por ejemplo,Mitchell demostren 1963que las memdebe,en cambio,a la diferenciaexcesiva de pH a amboslabranassevuelvenpermeables a los protonesen presencia dosde la membrana. de DNP.En otraspalabras, el dinitrofenol inhibe tanto la Al igual que el potencial redox, el pmf es una fuerza sntesis de ATP como la capacidad de una membranade elctrica en voltiosy puedeutilizarse paracalcular AGo',el mantenerun gradientede protones.Estedescubrimien- cambio de energalibre estndarpara el movimiento de to encaja perfectamente con el conceptode que la snte- protonesa travsde la membrana,siguiendola siguiente sis de ATP estpromovida por un gradienteelectroqu- ecuacin: mico de protones. : -5,1kcal/mol AGo'= -nF(pmf) : -(23.062)(0,22) 6. El gradiente de protones tiene la suficente energfa parampulsar la sntesisde ATP Paraqueel modeloquimiosmtico posible, sea el gradiente de protonesgenerado por el transportede electrones debealmacenar Ia suficiente energa parapermitir la sntesis de AIP. Podemosabordar estepunto con unos pocos clculostermodinmicos.El gradienteelectroqumicode protonesa ambosladosde la membranainterna de una mitocondria metablicamenteactiva, implica, tanto un potencial (el componente de membrana <electro> del gradiente),como un gradiente (el compode concentracin nente<qumico>). Como podrrecordar del Captulo8, la que seutiliza paracuantificarestegradienteelececuacin troqumicotiene dos trminos,uno para el potencialde membranaVm,y el otro parael gradientede concentraciones,que en el casode los protones, esun gradiente de pH (vaseTabla 8.4). Lasmitocondrias queparticipanactivamente en la respiracin aerobiaposeennormalmenteun potencialde membranade unos 0,16V (el valor espositivoen el lado queda al espacio intermembrana) y un gradiente de pH de (mayoren el lado de la matriz).Este cerca de 1,0unidades gradiente electroqumico ejerce una fuerzaprotn-motriz (pmF) que tiendea empujara los protonesde !'uelta,se-es decir,de vueltaa la gn su gradiente de concentracin juntando matriz mitocondrial-. La pmf puedecalcularse las contribucionesdel potencial de membranay el gradientede pH segnla siguiente ecuacin: pmf : V^+ 2.303 RT ApH/F (10.1s) De estamanera, una fuerzaprotn-motrizde 0,22Y a travs de la membrana mitocondrial interna correspondea un cambiode energa libre de alrededor de -5,1 kcal por mol de protones.staserla cantidadde energa que serliberadacuando los protonesregresen a la matriz. de AIP? Esestosuficientepara impulsar la sntesis No es sorprendente que la respuesta seas, aunquedependede cuntosprotonessenecesitan para impulsarla sntesis de una molculade ATP por el complejoF"F,.El modelo original de Mitchell asume dos protones por ATR lo queproporcionara aproxidamente I0,2 kcal/mol, una cantidadmuy justa para producir la sntesis de ATR si consideramos que la AG' parala fosforilacin del ADP es de cercade 10 kcal/mol, en las condiciones mitocondriales.Todavaexistendiferentesopinionesacercadel nmerode protonespor ATP,pero el nmerorealprobablementeseencuentre ms cercade tres o cuatro,lo que proporcionaraalrededorde l5-20 kcal de energapor ATR una cantidadsuficientepara asegurar que la reaccin estdirigida claramente en el sentidode la formacin de estamolcula. 7. Gradientes pueden de protones aificiales impulsar la sntesisde ATPen ausenca de transporte de electrones

( 1 0 . 1 3 ) Una prueba directa de que un gradientede de protones puedede hechoimpulsar la sntesis de AIP seobtuvo exdondepmf esla fuerzaprotn-motriz en voltios, V- esel poniendoa lasmitocondrias o a vesculas compuestas por potencialde membranaen voltios,ApH esla diferenciade la membranainterna a gradientes de pH artificiales. CuanpH a ambosladosde membrana (ApH : pH*"t,i, - pH". do las mitocondriasse introducen en una solucin en la (1.987 R esla constante de los gases callmol-oK), T es tosol), que la concentracin externade protonesseve incremenla temperaturaen gradosKelvin,y F esla constante de Fatadarepentinamente por la adicinde un cido,segenera r aday(23,062callmol). AIP en respuesta al gradiente deprotonescreadoartificialParauna mitocondriacon un V- de 0,016Vy un gramente.Dado que estosgradientes de pH artificialesindudientede pH de 1,0,el pmf sepuedecalcular de la manera cen la formacin de AIP incluso en ausencia de sustratos siguiente: oxidablesque, en otra circunstancia, cederan los electro+ zzz)(t,o) \ nesa la ETS,esevidente quela sntesis deAIP puedeindun m f: 0 . 1 6+ (z.to z0 .g a z)Gt 23,062 cirsepor un gradientede protonesaunqueno existatrans\ ) = 0,16 = + 0,06 0,22Y (10.14) porte de electrones. 302
quimitrofo Gapitulo 10 Metabolismo delaenerga: respiracln aerobia

Sntesisde ATP: juntando las piezas

preparados para estudiarla cuartay ltima Ya estamos de AIP. Hemos aerobia: la sntesis fasede la respiracin visto cmo parte de la energade un sustratooxidable dureducidas a coenzimas setransfiere como la glucosa, y el ciclo de oxidacinde la glucolisis rantelasreacciones I y 2 de la Figura 10.lb) y del cidotricarboxlico(fases para generarun gradienteeleccmo se utiliza despus troqumico de protonesa travsde la membranamitocondrial interna (fase3). Ahora podemospreguntarnos parala sntela pmf de esegradiente cmo seaprovecha sis de ATP.Para ello, volvamosa los complejosFr que internade lascrespueden verse a 1olargode la superficie son las cules Figura 10.6a)y preguntmonos tas (vase que de sintetizar esferas son capaces de estas evidencias AIP.

ATP Fl tienen actividad sintasa Laspartculas

La evidenciaclavesobreel papel de las partculasFr proviene de los estudiosque condujerona Efraim Rackery a a probar la hiptesisquimiosmticade suscolaboradores puedeacoplarel presente queuna ATPasa en la membrana, de AIP. Emde protonesa la sntesis transportereversible intacta(Figura10.17a) fueron pezando conla mitocondria de forma que seproducanpede perturbar a sta, capaces llamadaspartculassubmitocondriales a queasvesculas, partir de fragmentos de la membrana interna (Figupartculas fueron casubmitocondriales Estas ra 10.17b). y la sntepaces de llevar a caboel transportede electrones sis de ATP. Sometiendo a estas partculas a agitacin sepudierondesplacon proteasas o tratamiento mecnica (Figumembranosas F, de lasvesculas zar lasestructuras ra 10.17c). por centrifugacinlas partculas Cuandosesepararon la fraccinmembranosa todavapoda F, y las vesculas,

Membrana Membrana mitocondrial mitocondrial Esferas F, interna externa

'^+i*7 -ft-:o:
*Z'="t*Y:#:,","?,:;riJrll*i.1[1rir;
(a) Mitocondria ntacta. de electrones? Transporte de ATP? S S.Sntesis ')f

t., ,io;
| | + f
r.(

oe Atf.s i asrntesis No ATPasa? zActividad

? . .! , t ( ). -,

" -.( ).Vb. A

(c) Partculas
disociadas.

'

'.!. .,,^', ft*---l\-'- ' r u>'

(d) Fraccinde membrana.
de Transporte e l e c t r o n eS. electrones? s?S. de ATP?No. Sntesis
| | q, ,oPv, (e ve

r r
Ya

Transportedeelectrones? No. deATP? S.Sntesis ATPasa? s Actividad

y Figura10.17 Disociacin reconstitucindel sistema de sintesis de ATPmitocondrial. (a) Perturbacin de la mitocondria intacta y formacin de fragmentos de la membrana interna que dan lugar a (b) partculas de submitocondriales capaces transportar electronesy sintetizar ATP (c) Cuando estaspartculas se disocian por agitacin mecnicao tratamiento enzimtico los componentessepueden separaren (d) una fraccinde membranasin capacidadde slntesisde ATP y (e) F, y una fraccin soluble con esferas actividad AIPasa. (f) Mezclando las dos fraccionesse reconstituyela estructura y serecupera la actividad AIP sintasa.

--v-"rt''
I

de solublecon te) Fraccin

No ArPasa? Actividad

^ .L. .A Y lIt

I I . lWf *r i .f \.r

F1. esferas Transporte d e electrnes? de e l e c t r o n eNo. s?N o.Sntesis Sn de ATP?No.Actividad

?d'shlt t)4,fb
-r\dt - ' -

ArPasa? s

(f) Partculasreconstituidas de electrones? Tranporte de ATP? S. S. Sntesis ATPasa?No Actividad

juntando laspiezas Sntesis deATP:

303

llevar a cabo el transporte de electronespero no poda seguir sintetizandoAIP;las dos funciones se desacoplan(Figura 10.17d).Las partculas F, aisladas, por otra parte, no fueron capaces de transportar electronesy no tenan actividad AIPasa (Figura I0.l7e), un hecho que concuerda con la actividad ATPasa de tipo F que ahora atribuimos al complejo FoF, (vase Tabla 8.3). La capacidadde sintetizar ATP de la fraccin membranosa,se recuperabaaadiendo de nuevo partculasF, a las membranas,lo que sugeraque las proyeccionesesfricas que veamos en las superficieinterna de la membrana mitocondrial interna eran una Darte importante del complejo de membranacapazde generar ATP. Estaspartculas se denominaron, por lo tanto, factores (la <F> deFr) de acoplamiento y ahora son conocidas por ser las estructuras responsables de la actividad de sntesis de ATP en la membrana mitocondrial interna y en la membrana plasmtica bacteriana.

Elcomplejo FoFr: el transporte de protones a travs deFo permite queFl sintetice ATP Como vimos enlaFigura 10.15, elcomplejo F,esslo parte delcomplejo delaAIP sintasa. F, est unidoal complejo Fopor medio de un pequeo complejo con forma de tallo. Fo est embebido en la membrana mitocondrial interna en la base del tallo (vaseFigura 10.6c).Ahora sabemos que el complejo F" funciona como transportador de protones, el canal que facilita el flujo de electrones manteniendo un gradiente electroqumico que permite la actividad de sntesisdel AIP del complejo F,. As, el complejo FoF, es la AIP sintasa funcional. El componente Fo proporciona un canal para el flujo exergnicode protones desdefuera hacia dentro de la membrana, que dispara la pmf o fuerza motriz del gradiente electroqumico de pro-

tones.El componente F, llevaa cabola sntesis deATp graciasa la energa generada por estegradiente de protones. La Tabla10.4 presenta la composicin polipeptdica del complejoFoF,de Escherichia coli,yla Figura10.18 ilustra su ensamblaje en el complejofuncional.(La mayorparte delo queseconoce sobre estos complejos hace referencia a E.coli; sepiensa que el complejomitocondrialFoF,esbastanteparecido, aunque mscomplejoen cuantoa subunidades.) El complejoF, consta de trespolipptidos n y tres como tres complejos aB que forman un B, organizados hexgono cataltico. El sitio catalticode sntesis e hidrlisis del ATP selocalizaen la subunidadfr; la subunidada sirve comositio de unin ATP/ADP. El tallo consta de trespolipptidos: gamma(7), delta(6) y psilon(e).Estas subunidades seprolonganhastalasestructuras F, y Fo,como indicala Figura10.18. Lassubunidades d y e son necesarias parael ensamblaje del complejoF.F, y la subunidad 7 parecerotar a medidaque los electrones semuevena travs del canalen la estructura Fo.Este mecanismo fascinante se describir mejor en la siguiente seccin. El complejoFoconsta de los polipptidos a, by c conI subunidad a,2 subunidades by de9 a12subunidades cen cadacomplejofuncional. Secreeque lassubunidades c se organrzan en formade crculo, generando un canaldeprotonesa travs de la membrana. Lassubunidades ay b aparentemente estabilizan el canalde protones y la subunidad b seune al tallo, anclando la estructura F,/tallo a la base
de Fo.

porFoFl Lasntesis deATP implica la rotacin fsica dela gamma subunidad

Una vez que se estableciel nexo entre el transporte de electroneshacia dentro de la membrana y el bombeo de

Tabfa 10.4 Composicin polipeptdica de la FoFr-ATp sintasa de E. coli Estructura

Pollpeptldo
a

Peso moleculal**
52.000 55.000 31.000 19.000 r 5.000

Nmero de unidades presentes

Funcin
Sitio de unin ATP/ADP; promueve la actividad de la subunidad p

p
Tallo 6

3 I 1
I I 2 l0x**

Sitio cataltico para la hidrlisis y sntesis de AIp Rota para transmitir energa de Fo a F, Componente fundamental del tallo; se requiere para el ensamblajede F.F, Se une a la subunidad 6; se requiere para el ensamblaje de FoF, Estabiliza el canal de protones Estabiliza el canal de protones Forma el canal de protones

30.000 17.000 8.000

b
c *El complejo mitocondrial

FoFr es similar al complejo bacteriano pero con un polipptido adicional en F, y siete polipptidos adicionales en F.. x*El peso molecular de los tres componentes en E coli es, aproximadamente,32l000 para F, (arBr),65000 para el tallo (76) y 144000 para Fo(abrc,o). El peso molecular total para el complejo ensmblado (ararT6eab.cro) es aproximadamente S:OOOO. **x Estimacin del nmero de subunidades c en el complejo funcional F"F, de E coll, en un rango entre 9 y 12, en el que se considera el l0 como nmero ms probable.

304

Captulo quimifofo 10 Metabolismo delaenerga: respiracin aerobia

3ll
(a) Componentes de F1:el talloy Fo (b) Ensamblaje del complejoFoF, (c) ATPsintasafuncional

Figuta10.18 Los componentes F1y Fode la FoF,sintasa bacteriana. El complejo F, es una proyeccin esfricade la superficie interna de la membrana plasmticade una clula procariota o de la membrana mitocondrial interna de una clula eucariotay es el responsablede la generacinde ATP.El complejo Foestembebido en la membrana y proporciona un canal para el transporte exergnicode protones desdeel exterior hacia el interior. (a) En una clula bacterianala partcula F, es un complejo de 3 unidades ay 3 B que se organizan como un hexgono cataltico.EI complejo Foconsta de una subunidad a"2 subunidades by entre 9 y t2 subunidadesc, estasrlltimas ensambladas circularmente para formar un canal cilndrico a travs de la membrana. (b) Ft y Fo estnunidas a travs de un tallo que consta de subunidades7, 6 y e que se extienden hacia los complejos F, y F.. (c) El complejo FoFrensambladoes capazde usar la energadel flujo de protones a travs del complejo F. permitiendo a las subunidadesB de la partcula F I sintetizar el AIP. El mecanismo que acopla el transporte en la Figura 10.19. con la sntesis de electrones de AIP implica Ia rotacin de la subunidad7, como serepresenta

protones a travsde la membrana,la siguientepieza del puzle debi de ser desalentadora: Cmopuedeel flujo exergnico de protonesa travsdel componenteFo de la permitir la sntesis deATP-de otro modo enATPsintasa por los de las tres dergnicamedio de sitioscatalticos Boyer sugisubunidades B del complejoF,?En 1979Paul paraesta proponiendo cuestin, el ri una nuevarespuesta modelo de cambio por unin mostrado en la Figura proponequeel sitio cataltico de 10.19. El modelode Boyer cadauna de lastressubunidades del complejoFr puedeendiferentes, con distintas contrarseen tres conformaciones afinidadespor los sustratos(ADP y P,) y el producto (ATP).Boyerlasdefinicomo:conformacin L (de la paque significarelajada),que une dbillabra inglesaloose, mentea ADP y P conformacinT (por la palabrainglesa a ADP y tight, qte significatensa),que seune fuertemente Pi , catalizando as su condensacin espontnea a ATR al cual seune tambin con alta afinidad.La conformacinO (del ingls,open,abiefto),presenta una afinidad muy baja como por los productosy se entanto por los sustratos

por tanto,desocupada la mayorpartedel tiempo. cuentra, Boyer propuso que, en cualquiermomento, cadauno de los tres sitiosactivosesten una conformacindiferentey que el anillo hexagonalde las subunidades d,y a rota rcspecto al tallo central,graciasal flujo exergnico de protonesa travsdel complejoFode la membrana. Aunqueen principiono seacept mayoritariamente, el confirmadoen 1994 modelo de Boyerfue esencialmente por ]ohn Walkery suscolaboradores, que mediantecristael primer modelo atmiIografade rayosX desarrollaron co detalladodel complejo F,. Estemodelo identific concretamente estructuras en los sitios activos de las a lasconformaciones subunidades O, B que correspondan y que L y T de Boyer confirmaron cadauno de estos tressitios activosseencontraba en una confirmacindistinta en cadamomento.Esms,sevio que la subunidady del tallo que conecta los complejos F, y Fo (vaseFigura 10.18)se extenda haciael centrode la estructuraF, de forma asimtrica de forma que su interacciny su efectosobrelas subunidades6 esdiferenteen cadamomento.
juntando Sntesis deATP: laspiezas

30s

@.@

Flujode protones a travsde Fo; y rola 12Oo

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Flujode protones a travsde Fo; y rola 12Oo

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F!r-".^9::1lT:\o

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Fi$ura10.19' El modelode cambio pot unlon para la sintesis de AIP por las unidadesp del complejoFoFr, De acuerdo con estemodelo, cada una de las subunidadesB del complejo F, seencuentra una conformacin distinta en cadamomento y cada una experimenta una secuenciade cambiosdesdela conformacin O (abierta)a la conformacinT (tensa),pasandopor la conformacin L (relajada), dirigiendo Ia rotacin de la subunidad 7' cuya asimetra afectade distinta manera a cada subunidad B en los distintos puntos de rotacin. (La subunidad e del tallo tambin rota-as como, probablemente, el anillo de subunidades B del complejo Fo,aunque aqu slo serepresentanlas subunidades y.) Como semuestra en Ia subunidadde la parte superior del diagrama (que seidentifica arbitrariamntecomo r;las tres subunidades son, de hecho,idnticasen secuenciaamino y estructura), el proceso de slntesisde AIP empieza con la subunidad B1 en su conformacin O e implica @ una rotacin de 120ode la subunidad 7 (indicada esquemticamentepor el cambio de orientacin de la flecha proyectada hacia fuera de la subunidad del 7 centro),que a Ia subunidad B, a su conformacin L y causa, por tanto, la relajacinde la unin a ADP y Pi; @ generacin de AIp por una de las (r); @ una segunda otras subunidades rotacin de 120"de la subunidad 7, que induce un cambio a la conformacin ! que haceque los sustratosse unan fuertemente al sitio cataltico, ene como resultado, en @ la condensacin de estossustratospara dar lugar a la molcula de TP; @ una tercera rotacin de 120" de la subunidad 7, que deurelve a la subunidad B, a la conformacin O y produce una liberacin de la nueva molcula de AIP generada;seguidade la @ generacin de AIp por el sitio Br, completando un ciclo de ctlisis. Observe que en los dems sitios, seha dado la misma secuenciade acontecimientos,pero seencuentra inactiva temporalmente, ya que selibera slo I molcula de AIp despusde cada rotacin de 120' de la subunidad 7, con un total de 3 molculas de AIP por cadavuelta completa.

por unn El modelo de cambio en accn. La secuencia de acontecimientos que semuestraen la Figura 10.19es un modelo real de cmo el flujo exergnico de protonesa travsdel complejoFopermite la sntesis de AIP en los sitios p del complejoF,. El flucatalticos de lastressubunidades jo de protones a travs de un canalde la subunidadadeFo dirige la rotacin del anillo de las subunidades c en la estructura Fo,y por tanto, tambin la rotacin de la subunidad g del tallo, que seencuentra ancladoal anillo de lassubunidadesc.La asimetra dela subunidad7no slosupone interacciones particularmentedistintascon las tres subu306

nidades b en un momento dado sino queprovocaque cada subunidadp pasesucesivamente a travsde las conformacionesO, L y T a medidaque la subunidad0 rota 360 grados. La subunidadp, empieza con la conformacinO, en la que los sustratos ADP y P, puedenentrar librementeal sitio cataltico(vaseFigara 10.19). El sitio cataltico tiene poca afinidad por ellos en estaconformacin.A medida que los protonesfluyen a travsde la subunidadFo de la membrana, el anillo formado por la subunidadc yla subunidad g ancladaa 1,rotan 120" grados(paso la). Esto

Captulo quimiofo 10 Metabolismo delaenerg'n: respiracin aerobia

induce un cambio en el sitio 1,9ue pasa de la conformacin O alaL (y produce, asimismo, un cambio en la conformacin de otras dos subunidades). La conformacin L tiene una afinidad algo mayor por ADP y P lo que permite la unin de estos sustratos al sitio activo. Despusde la produccin de una molcula de AIP por la subunidadpr(paso 1b),la subunidadg rota otros 120o, dirigida de nuevo por el flujo de protones a travs del canal F. (paso 2a). Esto induce un cambio en la subunidad Bt, que pasa a la conformacin T, que incrementa la afinidad del sitio activo por las molculas de sustrato.Ahora estn fuertemente unidas al sitio cataltico en una orientacin que facilita al miximo la interaccin. En estascondiciones las molculas de ADP y Pi se condensanespontneamente para formar ATP (paso 2b). La subunidad g rota ahora otros 120o,devolviendo a B, ala conformacin O y liberando, por tanto, el ATP del sitio cataltico (paso 3a). Tras la produccin de ATP por una de las otras subunidades(la subunidad f z) paso 3b), se completa un ciclo y la subunidad B, estdisponible para otra ronda de sntesisde AIP. Observe que esta misma secuencia de reaccionesse ha As, cadavueldado tambin en las otras dos subunidades. ta completa de la subunidad 7 implica tres rotaciones de 120" que requieren energa.Esto tiene como resultado la sntesisde 3 molculas de AIR una por cada subunidad B. de ATP? Un anlisis detallado de la FiStesisespontnea gura 10.19 revela que cada uno de los pasosen los que se sintetizaAIP a partir de ADP y P1(esdecir,los pasoslb, 2b y 3b) no requieren energa.Ya sabemosque la sntesisde AIP es una reaccin altamenteendergnica.Entonces,podramos preguntarnos, cmo puede darse la sntesisde AIP espontneamenteen el sitio cataltico de la subunidad B en su conformacin T? De hecho, Io que sabemosrealmente es que la sntesisde ATP es una reaccin altamente endergnicaen una solucinacuosa diluida, que es el nico de AIP hastaahora. contexto en que hemos visto la sntesis Sin embargo,la reaccinen el sitio catalticode Ia subunidad B implica intermediarios que seunen a la enzima en un ambiente drsticamentedistinto-tan distinto, de hecho,que la reaccinen estas condicionestiene una AG"' cercanaa cero (Figura 10.20b)y puede, por tanto, darse espontneamente, sin ningn requerimiento energticoinmediato. Esto no significa que la sntesisde ATP tenga lugar, sin embargo, sin un coste termodinmico; esto significa simplemente que se requiere energaen otro punto de1ciclo. De hecho, se requiere energa,tanto antes de la formacin de ATR como despus:se necesita un aporte de energa previo para permitir la transicin del sitio cataltico de la conformacin L a la conformacin T, empaquetando estrechamenteADP y Pt y facilitando su interaccin (como en el paso 2a de \a Figura 10.19). La liberacin del ATP producido, unido con alta afinidad al sitio cataltico, requiere un aporte energtico posterior (como en el paso 3a).

ADP + P, + H++ ATP + HrO AG"' = +7,3 kcal/mol de ATPen solucin (a) Sntesis diluida acuosa

.@
G" = 0 kcalimol (b) Sntesis de ATPa partirde ADP y P,unidosa protena Figura10.20 Gomparativa energtica de la sintesisde ATP. El para la sntesis de AIP esmuy distinto requerimientoenergtico del ambiente.(a) En una solucinacuosa diluida, la dependiendo de AIP a partir de ADP y Psolubleesaltamente sntesis con una AG'' de *7,3 kcal/mol. (b) En el sitio endergnica, catalticode la subunidadb en su conformacinI sin embargo, el ambienteesdrsticamente distinto y la reaccintiene una AG"' a 0 (esdecir,la K"oescercana a 1) y por tanto, puededarse cercana sin ningn requerimientoinmediato de energa. espontneamente

quimiosmtico implica untrfico deprotones Elmodelo dela membrana dinmico a travs

En la Figura 10.21 se resume la dinmica del modelo quimiosmtico. Los complejos I, III y IV del ETS bombean protones hacia fuera de la membrana mitocondrial interna y el gradiente electromecnicoresultantepromueve la generacin de ATP por medio de los complejos FoF, asociados a la misma membrana. Ha en otras palabras,un trfico dinmico y continuo de protones a travs de la membrana interna (o la membrana plasmtica,en el caso de los procariotas). Suponiendo que el nmero de protones expulsadospor cada uno de los complejos respiratorios, es como se muestra, y que se requieren 3 protones para la sntesisde 1 molcula de ATR entoncestiene sentido que Ia produccin seade 3 ATP por NADH y 2 AIP por FADH2.

La respiracin aerobia: resumen global

Para resumir la respiracin aerobia,volvamos a la Figura 10.1 de nuevo y recordemos el papel de cada uno de sus componentes.A medida que los sustratoscomo los carbohidratos y las grasasse van oxidando para generar energa, se van reduciendo coenzimas.Estas coenzimas reducidas representanuna forma de almacenamientode la energalibre liberada por las molculas de sustrato originales durante la oxidacin. Esta energa puede utilizarse para la sntesisde AIP mientras las coenzimasson reoxidadaspor el ETS. A medida que los electrones se transportan del global resumen Larespiracin aerobia:

307

IDeshidrogenasas]

\t/ @

Succinato Fumarato
z4H+

4H'-*^.-'

H* + NAD+
zn

t2H*
n
-/ fl

2H' CoQpool
\---

2 t)'

(O,) \.:/ 2H"

'22

Citocromo c
H'
Z fl \s--

( o")
2N*

(H,o) \:_,/
-

oTt

.'...._JI-1

@*O
-/ '*-/,5 t1

<ArPa 1,^^{-

JM,7

Jn

IVATRIZ

Membrana interna

r::til'iiir :i.lr.-::i Dinmica del gtadiente electtoqumico de ptotones. Los complejosrespiratorios I, II, III y IV son componentes integrales de 1a membranamitocondrial interna.Los complejosI, III y IV (pero no el complejoII) acoplanel flujo exergnico (lneasrosas)a de electrones travsdel complejo con el bombeo de protoneshaciafuera de 1amembrana (azul).La fuerzamotriz resultante de1gradienteelectroqumico de protonespermite la sntesis de ATP por F' a medida que los protonesatraviesan de vuelta la membranapor e1cornplejoFn,que es1 tambin ancladoa la membranainterna.Observeque la sntesis de AIP consumeprotonesen la matriz mitocondrial,una carencia que contribuyeal gradientede protonesen la membrana,responsable de la sntesis de AIp.

NADH o FADH2 al oxgeno,van pasandoa travsde varios complejos respiratorios,donde el transporte de electrones se acopla al bombeo direccional de protones, a travs de la membrana. El gradiente electroqumicoresultante ejerce unA pmf que sirve como fuerza motriz para la sntesisde ATP. En la mayora de las condiciones se puede mantener una pmf establea travs de la membr ana.La transferencia de electronesdesdelas coenzimasal oxgeno se ajusta cuidadosa y continuamente, de manera que el bombeo de electroneshacia fuera equilibra el flujo de entrada de protones necesariopara que la sntesisde ATP se d a la velocidad adecuada.

Ei maxinlo rendiniento de ATPen la respiracion aerobia es de 36-38 ATPspor molecillacleglucosa Ahora podemos volver a Ia cuestin de cul es el mximo rendimiento deAIP por molcula de glucosaen condiciones aerbicas. Recordemosde Ia Reaccin 10.3 aue la oxidacin completa de la glucosaa dixido de carbno por la glucolisis y el ciclo del TCA tiene como resultado la produccin de 4 molculas de ATP por fosforilacin desde sustratos.La mayor parte de la energalibre restantede Ia oxidacin de la glucosase almacenaen las 12 molculas de coenzima -10 de NADH v 2 de FADH.-. En los nroca-

308

quimitrofo Captulo 10 l\4etabolrsmo de laenerga: respiracin aerobia

riotasy en algunas clulaseucariotas, los electrones de todaslasmolculas de NADH pasana travsde los trescomplejosresponsables de la sntesis deATP del ETS,dandolugar a 3 molculasde.AIP por molculade coenzima. Los por otra parte,atraviesan del FADHT, slo 2 de electrones de AIP los complejos, dandolugar a,tan slo,2 molculas por molculade coenzima. El mximo rendimientoterico deATP obtenidopor la reoxidacinde las 12 molculas de coenzimaformadasa partir de cadaglucosa, se puede manera: representar de la siguiente lONADH + 10H+ + 50, + 30ADP+30P,-)

i rouro + 3oATi, toNAD+ + O, + 4ADP *4P, -+ 2FADH"

2FAD+2H2O+4NlP

(to.l6)
(lo.l7)

Sumandoestas reacciones, obtenemos la reaccingloy de la sntesis bal del transporteelectrnico de ATP: + 10H++ 2FADH. + 60" + 34ADP* 34P,-+ 1ONADH IONAD+ + 2FAD + :^;jH;o+ 34ATP (rd.l8) globalde la La sumade la reaccin 10.18 a la reaccin glucolisisy el ciclo del TCA (Reaccin10.3)lleva a la siguienteexpresin generalpara el rendimientomximo terico de AIP, obtenido por la respiracincompletade la glucosa y otrashexosas:
38ADP+38Pi C6H12o6+6C,2 \ 38ATP n,

6CO2+ 6H2O

(10.19)

general Estareaccin esvilidaparala mayoriadelascy paraalgunostipos de clulas eucariotas. lulasprocariotas el miximo renDependiendo del tipo celular, sin embargo, puedeserde 36 dimiento deAIP parauna clulaeucariota en lugar de 38 debidoal menor rendimientode molculas a la mitocondria de NADH generadas en el citosolrespecto (vase planteadas la primerade laspreguntas, msabajo). Antesdeabandonar la Reaccin 10. 19y el metabolismo aerbico que esta reaccin resume,consideraremos dos bastante frecuentes cuestiones cue le ayudarna entender la respiracin aerobia. quel rendimiento t. Por mximo de ATP en lasclulas euporcadaglucosa? Recuercariotas variaentre36 y 38 ATPs de que cuando la glucosase cataboliza aerbicamente en una clula eucariota,la glucolisis genera,en el citosol, 2 molculasde NADH por cadaglucosa, mientras que el catabolismodel piruvato generaotras ocho molculasde NADH en la matriz mitocondrial.Estadistincin espacial esimportanteporquela membranainterna de la mitocontransportadorapara el NADH o dria no tieneuna protena el NAD+, de forma que el NADH generado en el citosolno puedeentrar en la mitocondria para liberar suselectrones al complejoI del ETS.En lugar de eso,los electrones e ionesH+ pasanhaciael interior medianteuno de los distin-

que difieren en el de transporte de electrones tos sistemas nmero de molculasde ATP formadaspor molcula de NADH oxidada. Un sistemade transporte de electronesconstade uno que puedenserredude electrones o mstransportadores Estasprotenastransportadoras cidos reversiblemente. se puedenencontraren la membranatanto en la forma reducida como oxidada.Para que pueda producirseel movimiento de los electrones hacia la mitocondria, el NADH y protonesa una molcula del citosol pasasus electrones transportadora del citosoly seoxidaa NAD*, que sepuede en la glucolisis usarde nuevocomo aceptorde electrones o citoslicos. Mientrastanto,la forma reen otrosprocesos ducida del transportadorentra en la mitocondria, donde es oxidadapor una enzimamitocondrial, dando lugar a NADH o FADHT.La diferenciaen el rendimiento de AIP eucariotas estribaen el modo de oxidacin entrelasclulas de la molculatransportadoradentro de la mitocondria, que puedeimplicar la transferencia de electrones a NAD+ o FAD,dependiendo del tipo celular(2ATPlglucosa menos por transferencia al FAD mitocondrial). En lasclulas del hlgado,el rin y el corazn, los electronesdel NADH citoslicosetransfierena la mitocondria por medio del sistema de transporte malato-aspartato, an complejo mecanismoque da lugar a NADH a partir de NAD+ en h matriz.Loselectrones derivados del NADH citoslicopasanasa travsde tres complejosde bombeode y son,por lo tanto,caprotones del sistema de transporte paces tres molculas de AIP por cadamolcula de generar de coenzima. y Por otro lado,en el msculoesqueltico, en el cerebro en otros tejidos,el NADH citoslicolibera electrones hacia por medio de mitocondriales respiratorios los complejos un mecanismode transporte que usa FAD en lugar de NAD+ como aceptorde electrones mitocondrial.En la Figura 10.22 se representaeste mecanismo,denominado Itnzadera del glicerol fosfato. En la lanzadera del glicerol fosfato participan las isoformascitoslicay mitocondrial (G3PDH), deshidrogenasa de la enzimaglicerol-3-fosfato (glicerol-3que oxida reversiblemente al glicerol-3-fosfato fosfato(DHAP).La forma citoslica P) a dihidroxiacetona de la enzimatransfiereelectrones del NADH al DHAR rea glicerol-3-P. ducindolo El glicerol3-P pasaluego a la mitocondria,donde se reoxida a DHAP mediante una G3PDH dependientede en la caraexternade la membranainterna. FAD localizada Dado que estaenzimaunida a la membranauttTiza FAD en lugar de NAD+ como aceptorde electrones, stos setransfieren directamente a la coenzimaQ. En consecuencia los pasan por no el primer lugar de conservacin electrones de energadel ETS,generndose slo dos molculasde ATP en lugar de tres y reducindose el rendimiento miximo terico en una molcula de AIP por NADH citoslicoy por tanto, en dos molculas de ATP por cadamolculade (de glucosa 38 a 36). global 309 |: respiracin aerobia: resumen

(!Ag"
+H+

/---->.

c H 2- o H l-

cHe-oH l-

cl, -o-@

cnr-o-@
Glicerol-3{osfato deshidrogenesa mitocondrial

Glicerol-3fosfato deshidrogenasa citoslica

H-

C-OH

-o-@ cH,

H-C-OH I

-o-@ cH2
MATRIZ

2H*

"-

2H*.'-

Espacio intermembrana

+o
3H+

Jnref '?^/'f
CITOSOL

J\A^,4

-._/
Membrana mitocondrial externa Membrana mitocondrial interna

Fgur 1.;:Ll La lanzadera del glicetolfosfato. La membranamitocondrial interna esimpermeableal NADH de maneraque los electrones del NADH entran a la mitocondria mediantedos tipos de sistemas de transporte.Las clulas del msculo esqueltico, cerebroy otros tejidos usanel sistema de transportedel glicerolfosfato.Laslneasrosasindican la ruta de los electrones desdeel NADH citoslicohastaei oxigeno. (1) La enzimacitoslicaglicerol-3-fosfato (G3PDH) usa electrones (y protones)del NADH para reducir dihidroxiacetona deshidrogenasa (glicerol-3-P)que (2) puedeatravesar fosfato(DHAP) a glicerol-3-fosfato la membranamitocondrial externadifundiendo a travsde un canalde porinas.(3) El glicerol-3-Pesoxidadodespus a DHAP por una FAD-G3PDH de Ia membranainterna,con la reduccin concomitantede FAD a FADH,. Dado que la NADH esuna coenzimade mayor energa que el FADHT,el transportede entradade electrones, facilitadopor la diferenciade potenciales de reduccinde las dos coenzimas, esexergnico. El costede estaentradade electrones esun menor rendimiento de AIP porque (4) los electrones del FADH, generado por la G3PDH mitocondrial,no pasanpor el complejo I, de maneraque sereduceel nmero de protonesbombeados a travsde la membranainterna.

2. Porqu se considera el rendimiento de ATPen la respiracin aerobia como (el mximorendlmiento telico"? Esta expresin es una forma de recordar que el rendimiento de 36 a 38 molculas de ATP por molcula de glucosaslo es posible asumiendo que la energa del gradiente electroqumico de protones se utiliza nicamente para la sntesis de ATP. Esta suposicin puede ser til para el clculo de posibles rendimientos, pero no es realista,ya que la pmf

del gradiente de protones no sirve slo para la sntesisde AIR sino tambin para otros procesosy reaccionesque requieren energa.Por ejemplo, parte de la energadel gradiente de protones se utiliza para facilitar el transporte de varios metabolitos e iones a travs de la membranay para importar protenas hacia la mitocondria. En la Figura 10.23se representanalgunos de estosprocesosde transporte.

310

quimitrofo Captulo 10 Metabolismo delaenerga: respiracin aerobia

Figura10,23 Pilncipalessistemasde tlansporte de la membrana mitocondrialnterna. Aqu se muestran las principales protenas de transporte localizadasen la membrana mitocondrial interna. (a) El transportador de piruvato cotransporta piruvato y protones hacia el interior, impulsado por la pmf del gradiente electroqumico de protones. (b) Dicarboxilato y (c) tricarboxilato transportan cidos orginicos a travs de la membrana. El sentido del transporte dependede las concentracionesrelativasde cidos di y tricarboxlicos en el interior y en el exterior de la membrana interna (d) El transportador respectivamente. de ATP-ADP sacaAIP y mete ADP y (e) el transportador de fosfato acopla el movimiento de entrada de fosfato con el de salida de iones hidroxilo. que son neutralizadospor protones en el espaciointermembrana. (El mecanismo de entrada de electrones serepresentaen Ia Figura 10.22.)

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Membrana mitocondrial externa

Membranamitocondrial interna

Dependiendo de la concentracin relativade piruvato, grasos, aminocidose intermediariosdel ciclo del cidos TCA en el citosoly en la matriz mitocondrial,puedenneque variables de energa para asegurar cesitarse cantidades la mitocondria tiene los suministrosadecuados de sustratos oxidables e intermediariosdel ciclo del TCA. Esms,la parala sntesiq entradade ionesfosfatonecesarios de ATP por la salidaconcomitantede iones hiestacompaada droxilo, que son neutralizados por los protonesen el espacio intermembrana,generandotambin un gradientede protones. La respiracin aerobia es un proceso muyefcaz Paradeterminarla eficaciageneralde la produccinde quepreguntarnos AIP n la respiracin aerobia tenemos

qu proporcin de la energa de oxidacinde la glucosa queda en las 36 38 molculasde ATP generadas por El valor de AG"' de la oxidacadamolculade glucosa. cin completa de la glucosa a CO2 y HzO es -686 kcal/mol.La hidrlisisde ATP tiene un valor de AGo' de alrededorde -7,3 kcal/mol pero el valor real de AG' sueleencontrarse en el rango de -10 a -14 kcal/mol. Asumiendoun valor de 10kcal/mol como hicimosantelos 36-38molesdeAIP generiormenteen estecaptulo, radospor la respiracinaerobiade 1 mol de glucosa en una clula aerbicacorresponden a aproximadamente por mol de glucosa 360-380kcal de energaconservada oxidada.Esto supone un rendimiento en torno al 52que esbastante 55%o, superiora la que podemosobtener que somoscapaces de las mquinasms eficientes de fabricar.
global Larespiracin aerobia: Resumen 311

Comparada con la fermentacin, la respiracin aerobia permite a las clulas acceder a una proporcin mayor de la energa libre que se puede obtener de sustratos orgnicos como azicares, grasasy protenas, El catabolismo completo de los carbohidratos comienza con la ruta glucoltica, pero el piruvato que se forma entra despusen la mitocondria, donde se descarboxila oxidativamente a acetilCoA. El acetilCoA es oxidado despusa CO, por Ias enzimas del ciclo del TCA. Los cidos grasosson sustratosalternativos del metabolismo energtico en muchas clulas. Su catabolismo empieza en la matriz mitocondrial con la d oxidacin a acetilCoA que entra en el ciclo del TCA. Las protenas pueden usarse tambin como fuente de energa, especialmente en condiciones de a1.uno. En estos casos,las protenas se degradan a aminocidos y stos son catabolizadosa uno o ms productos finales que entran en la ruta glucoltica o en el ciclo del TCA. La mayor parte del rendimiento energtico del catabolismo aerbico de Ia glucosa se obtiene de las coenzimas reducidas (NADH y FADH,), que son reoxidadaspor un sistema de transporte de electrones. Estesistemase compone de complejos respiratorios,que son grandes complejos multiproteicos embebidos en la membrana mitocondrial interna (o, en el caso de los procariotas, en la membrana plasmtica). Los complejos respiratorios son libres para moverse lateralmente por la membrana. La coenzima Q y el citocromo c, que transfieren electronesen-

tre los complejos, son intermediariosclave del sistema de transportede electrones. En los organismos aerobiosel oigeno es el aceptorfinal de electrones y el aguaes el producto final. Tiesde los cuatroprincipalescomplejos respiratorios, los complejos I, III y IV, acoplanla transferencia de electrones al bombeo de protoneshacia fuera de la membrana.Esto establece un gradiente electroqumico de protones que es la fuerzamotriz para la produccinde ATP. Ei sistema de sntesis deAIP consta de un transportador de protones, Fo,insertado en Ia membranay una AIP sintasa, F,, protuberante que seprocuyaestructura yecta desde la membrana internadel lado de la matriz (o en el lado citoslico de la plasmtica membrana prode lasclulas cariotas). F, sintetizaAlPa medidaqueel gradiente de protones facilita el movimientode stos a travs de Fo. As,el gradiente electroqumico de protonesy el AIP son,en efecto, formas interconvertiblesde energa almacenada. La mitocondriaesel lugardondetiene lugar el metabolismo respiratorio en las clulaseucariotas. Las mitocondrias son orgnulos prominentes tanto en tamao como en nmero.Puedenfomar grandes redes interconectadas en algunos pero aqu las describimos tipos celulares como orgnulos independientes. Sepresentanen un nmero de entre una y varios cientoso inclusomilespor clulay suelentener una longitud de variasmicras.Una mitocondriaestrodeada por dos membranas. La membranainterna

tiene muchos plegamientos llamados queincrementanmucho la supercrestas, ficiede la membrana y por lo tanto su capacidad de acomodar los numerosos complejos respiratorios, complejos y FoF, las protenas de transporte necesarios para llevar a cabola funcin respiratoria. La membrana mitocondrial externa espermeable a los iones y pequeas molculas debidoa la presencia de porinas. Sin embargo, se requieren transportadores especficos para el transportede entada de piruvato,cidosgrasos y otras molculas orgnicas a travsde la membranainternadel orgnulo. El transporte de salida de ATP est acoplado a la entrada de ADP y el movimientosimultneo de entradade ionesfosfato estacoplado a la salida de iones hidroxilo, facilitado por el gradiente de protones. Los electronesde las molculas de coenzima que se reducen en el citosoldeben entraral sistema de transportede electrones por un mecanismo de transporte especfico porque la membranainternano espermeable a lascoenzimas. stees,por tanto,el metabolismo aerbicode la energa. Sintransistores, partes mecnicas, ruido, contaminacin, y todo en trminosde organizacin querequierenun microscopio electrnico para visualizarlos. Todo el procesotiene lugar continuamente en Ia clulacon un grado de integracin, eficiencia, fidelidady control que apenas podemoscomprender lo suficientemente bien para apreciarlo totalmente, parapoderreproducirlo menos en nuestros tubos de ensavo.

Problemas
problemas Los demayor dificultad estn marcados con un .. 10.1 Localizacinde molculasy funcionesen la mitocondria.Indiquesi esperara encontrar o no (NO), cada una de lassiguientes molculas o funcionesen Ia matriz (MA), (OM), o espacio membrana interna(IM), membrana externa (IS) de la mitocondria. intermembrana (a) Coenzima A (b) Coenzima Q
(c) Fosforilacin de nucletidos (d) Succinatodeshidrogenasa (e) Malato deshidrogenasa (0 Elongacin de cidos grasos (g) Tiansportadordedicarboxilato (h) Conversin de lactato en piruvato (i) (j) AIP sintasa Acumulacin de una concentracin alta de protones

312

quimitrofo Capitulo 10 Metabolismo delaenerga: respiracn aerobia

L0.2 Localizacinde molculasy funciones en la clula procariota.Repitael Problema peroindicandodnde 10.1, esperara encontrarcadauna de lasmolculas o funcionesdel listado,en la clulaprocariota.Lasposibles localizaciones son: (CY),membrana (PM), exteriorcelular plasmtica citoplasma (EX),o no est (NO). presente 10.3 Verdaderoo falso. Sealar cules de las siguientes (V) o falsas (F). En lasfalsas, afirmaciones son verdaderas replantee la afirmacinde maneracorrecta. (a) El flujo ordenado de carbonoen el ciclodel TCA esposible porque cadauna de lasenzimasdel ciclo estenglobada en la membranamitocondrial,de maneraque su disposicin del ciclo. seajusta a la propiasecuencia (b) Termodinmicamente, posibilitar la el acetilCoAdebera fosforilacindel ADP (o del GDP), de la misma forma que Io hacela succinilCoA. asumiendo Ia disoonibilidad de la enzima apropiada. (c) La respiracin esun proceso aerbico en todoslos porqueel oxgeno organismos, esel nico aceptor parala reoxidacin de electrones conocido de las coenzimas. (d) Podemos predecirel flujo de electrones a travsdel sistema porque el par redox de transportede electrones y el par tiene NAD-/NADH tieneuna AEo'muy negativa una OrlHrO AEo'muy positiva. (e) A diferencia del NAD+, Ia coenzima FAD tiendea estar quelo usan fuertemente asociada a lasdeshidrogenasas comoaceptor de electrones. (0 Serequierennueveciclosde B oxidacinpara degradar completamente un cidograso de 18carbonos hasta acetilCoA. L0.4 Transportemitocondrial. Paraque sed la respiracin que debenencontrarse aerobia, hay variassustancias en flujo constante a Io largode la membrana mitocondrial interna.Para una cluladel cerebro, en la que la glucosa esla nica fuentede produciran energa, indiquecules de lassiguientes sustancias un flujo netoen la membrana molculas se si esas,cantas movilizarny en qu sentido,por cadamolculade glucosa catabolizada. (a) Piruvato (b) Oxgeno (c) ATP (d) ADP (e) AcetilCoA (f) Gliceroi-3-fosfato (g) NADH (h) FADH2 (i) (j) Oxalacetato Agua

(a) La conversin de citrato en a-cetoglutarato mediantelas reacciones TCA-2 y TCA-3 implica como intermediarios, no slo al isocitrato,sino tambin a lasmolculas (perono mostradas identificadas en la Figura10.8), como aconitatoy oxalosuccinato. Represente la ruta del citrato a a-cetoglutarato, mostrandolasestructuras y el orden de los tresintermediarios. (b) La sntesis del aminocidoglutamatosepuedellevar a cabo a partir de piruvato y alaninamediantela secuencia metablicaque suponeel papelanfiblicodel ciclo del TCA. Ilustre esaruta, asumiendola disponibilidadde cualquier enzimaadicional necesaria. (c) Si seintroduceel piruvato-2-raC (piruvatocon el carbono centralmarcadoradiactivamente) en 1arespiracin mitocondrial,la mayor parte de la radiactividadse incorporaren el citrato.Tiacela ruta por Ia que los tomosde carbonomarcados radiactivamente, se incorporanal citratoe indiquela molcula de citrato. 10.6 El bilogo celular calculando.Usela Tabla10.2de la pgna paralos clculos 295comobase necesarios para contestar a lassiguientes cuestiones. (a) Sinhacerclculos iniciales, prediga si el isocitrato puede ceder electrones exergnicamente al NAD- en condiciones quhaceesa prediccin? estndar. Por (b) Cul es1a AEo'parala oxidacin del isocitrato a NAD+ en condiciones estndar? este clculo Ia prediccin Confirma que hizo en el apartadoa?Expliquesu respuesta. (c) Calcule la AGo' parael proceso de oxidacindel isocitratopor NAD- en condiciones estndar. Porqu es relevante esteclculoparael metabolismo aerobiode Ia energa? (d) Repitalaspartesa-c parala oxidacindel lactatoa piruvato por NAD-. Por qu esrelevante parael este clculo metabolismo aerobio de la energa? (e) Ahora repitalaspartesa-cpaalaoxidacin del succinato a fumarato, con el NAD- como aceptor de electrones. Debera obtener un valor de AGo' muy positivo. nos Qu indica estevalor sobrela probabilidadde que el NAD* puedaservircomoaceptor parala reaccin de electrones por la succinatodeshidrogenasa catalizada del ciclo del TCA? (0 Por ltimo,repitalaspartes a-cparala oxidacin del succinato a fumarato con la coenzimaQ como aceptorde qutienesentidoconsiderar electrones. a la coenzima Por de electrones como el aceptor cuandoserepresenta la Q succinato deshidrogenasa de la Figura10.8, con el FAD inmediatode electrones? comoaceptor L0.7 Calculandolos rendimientos miximos de AIP. La Tabla10.5esuna forma de resumir el rendimientode AIP durantela oxidacinaerbica de la glucosa. (a) Complete la Tabla10.5parauna clula procariota. es Cul el rendimientomximo de AIP? (b) Indiqueen la Tabla10.5 los cambios necesarios para calcularel mximo rendimientode AIP para una clula eucariotaque usaIalanzadera glicerolfosfatopara transportarIos electrones desde el citosolhastala matriz mitocondrial.

(k) Electrones (l) Protones 10.5 Completandola ruta. En cadauno de los siguientes y el orden de casos, completela ruta, indicandolasestructuras los intermediarios.

Problemas 3t3

Tabla 10.5 Clculo delrendimiento mximo deATP de la oxidacin aerbica de la glucosa

Etapa de la resplracin
Rendimiento de CO,

Glucolisis (glucosa --+ 2 pruvatos)

Oxidacin del piruvato (2 piruvatos --+2 acetil GoA)

Giclo del TGA (2 vueltas)

Rendimiento de NADH

ATP a partir de NADH

Rendimiento de FADH,

AIP a partir de FADH,

AIP de la fosforilacin desde sustratos

ATP de la fosforilacin oxidativa

Rendimiento mximo deATP

10,8 Regulacindel metabolismo.Expliquela ventajade cada uno de los siguientes mecanismos de regulacin parala clula. (a) La isocitrato (Figura deshidrogenasa 10,8, reaccin TCA-3) esactivada alostricamente por ADP. (b) Lasdeshidrogenasas queoxidanisocitrato, d-cetoglutarato y malato(reacciones TCA-3,TCA-4y TCA-8)estn inhibidas alostricamente por NADH. (c) La piruvatodeshidrogenasa (Figura18.0, Reaccin l0.l) est inhibidaalostricamente por AIP. (d) La fosfofructoquinasa (Figura9.6,reaccin Gly-3)est inhibida alostricamente por citrato. (e) La piruvatodeshidrogenasa (Figura10.10, quinasa enzima E,) estactivada alostricamente por NADH. (0 La a-cetoglutarato (Figura10.8, deshidrogenasa reaccin TCA-4)est inhibidaalostricamente por succinilCoA. 10.9 Slntesis letal.Lashojasde Dichapetalum cymosum,va planta surafricana, son muy venenosas. Los animales que ingierensushojastienen com'ulsiones y normalmentemueren en pocotiempo.Uno de los efectos msdestacados de su toxicidadesun notableincrementoen la concentracin de citrato y un bloqueodel ciclo del TCA en la mayorade los rganosdel animal afectado. El agente txico de lashojasde la planta esel fluoroacetato, pero el venenoreal que seencuentra en los tejidosanimales esel fluorocitrato.Si seincuba el fluoroacetato con enzimas purificadasdel ciclo del TCA, no hay un efectoinhibitorio sobrela actividad enzmtica. (a) Porqu esperaras que el fluorocitrato tuvieseun efecto inhibitorio en una o msenzimasdel ciclo del TCA cuando seincuba con lasenzimas purificadasin vitro, a pesarde que el fluoroacetato no tieneningn efecto?

(b) Culde las enzimas del ciclo del TCA sospecha que est afectadapor el fluorocitrato? Exponga dos razonesque argumenten su resPuesta. (c) Cmo se puede convertir el fluoroacetato en fluorocitrato? (d) Porqu se conoce estefenmeno como sntesis leta? 10.10 Oxidacin del NADH citoslico,En algunasclulas eucariotas,el NADH generadopor Ia glucolisis en el citosol es de nuevo reoxidado por la lanzadera del glicerol fosfato que se representaen la Figura 10.22. (a) Escribalas reaccionesajustadasparalareduccin de la dihidroxiacetona fosfato (DHAP) a glicerol-3-fosfato (glicerol-3-P) por el NADH citoslico y parala oxidacin del glicerol-3-P a DHAP por la glicerol-3-P deshidrogenasa unida a FAD en la membrana mitocondrial inrerna. (b) Sume las dos reaccionesdel apartado (a) para obtener una reaccin global de la transferencia de electrones del NADH citoslico al FAD mitocondrial. Calcule la AE ' y AG"' de estareaccin.Estermodinmicamente factible la entrada de electronesen condiciones estndar? (c) Escriba una reaccin ajustadapara la oxidacin del FADH2 por la coenzima Q en la membrana interna, asumiendo que la CoQ se reduce a CoQHr. Calcule AGo' y AG", de estareaccin.Esestatransferenciatermodinmicamente factible en condiciones estndar? (d) Escriba una reaccin ajustada paralatransferencia de electrones del NADH citoslico a la Coe mitocondrial y calcule AEo' y AG"' de esta reaccin. Esesta transferencia termodinmicamente factible en condiciones estndar? (e) Asuma que la relacin [NADH]/[NAD*] es 5,0 y que la relacin [CoQHr]/[CoQ] en la membrana interna es 2,0.

3t4

quimitrofo Capitulo 10 N4etabolismo delaenerga: respiracin aerobia

(d) a25'Cy esla AG' de la reaccin del apartado Curl pH7,0? (0 Se ve afectadalaLG' de la transferencia de electrones del NADH a CoQ por la relacinforma reducidalforma oxidadade la enzimadependiente de FAD de la membrana interna?Expliquepor qu. 'L0.L1, Grasaparda y termogenina.La mayorade los mamferosneonatos, incluyendolos bebs humanos,tienen un parda,en el tipo especial de tejido adiposodenominadograsa que seencuentra, de forma natural y anclada a la membrana mitocondrial interna,una protenadesacopladora denominada termogenina. Estaprotenadesacopla el procesode sntesis de AIP del transportede electrones, de maneraque la energa Iiberadapor el flujo de electrones a travsde la cadena de transportesepierdeen forma de calor. (a) Qu pasacon la energa que selibera cuandocontina el perocesa transporte de electrones la sntesis deAIP? Por qupuedeserventajoso paraun bebtenertermogenina en la membranainterna de lasmitocondriasdel tejido pardo? adiposo (b) Algunosmamferosadultospresentan tambin grasaparda. encontrarmstejido adiposopardo y ms Esperara termogeninaen un oso en hibernacinque en un oso fsicamente activo? Expliquesu razonamiento. (c) Dadasu localizacin celular,propongaun modo de accin parala termogenina. Qutipo de experimentopuede sugerirpara probar su hiptesis? (d) Qu le pasara a un mamferosi todassusmitocondrias presentaran una protenadesacopladora, apartede la que seencuentra pardo? en el tejido adiposo .L0.L2 Diseccionandoel sistemade transporte de Paradeterminarqu partesdel sistema electrones. de

(ETS)esresponsable transporte de electrones del bombeode protonesy por lo tanto de la sntesis de ATR los investigadores solanincubarlasmitocondrias en condiciones en lasque slo esfuncionaluna parte del ETS.Una de lasaproximaciones es suministrar a la fraccin mitocondrial un donador y un que sesabeque bloqueanel ETSen aceptorde electrones puntosconcretos. Adems, suelenaadirse inhibidoresde especificidad conocida. En uno de estos experimentos, la mitocondria seincuba con B-hidroxibutirato, citocromo c oxidado, ADR Pi y cianida.(La mitocondriatieneuna deshidrogenasa dependiente de NAD* que escapaz de oxidar ) B-hidroxibutiratoa B-cetobutirato. (a) Culesel donador de electrones de estesistema? es Cul el aceptor? es la ruta de transporte de electrones ms Cul probablede estesistema? (b) Basndose en 1oqueya sabe del ETS,cantos molesde que seformaran por cadamol de AIP esperara Escribauna ecuacinajustada B-hidrobutirato oxidado? para la reaccinque seda en estesistema. (c) La cianidaesel nico agente que seaadeal sistema que no esparte de la ecuacinajustada de la reaccin. qu se Para aade cianida al sistema? resultado esperara si no se Qu aadiera cianida? (d) Esperara que las enzimas del TCA estuvieran activas en este sistema? Explique su razonamiento. (e) Por quesimportanteque el B-cetobutirato no pueda seguirmetabolizndose en estesistema? El lactatoes parecidoestructuralmente bastante al B-cetobutirato;Qu efectohabratenido si los investigadores hubieranusado lactatocomo sustratooxidableen luqar de -hidroxibutirato?

Bibliografa recomendada
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quimitrofo Capitulo 10 Metabolismo delaenerga: respiracin aerobia