Curso de Qumica Industrial

GR02307- LABORATRIO DE QUMICA ORGNICA

EXPERIMENTO 3 28/02/2013

Cromatografia em camada delgada (CCD) e cromatografia em coluna (CLC).

Resumo
Nessa prtica, utilizaram-se dois sistemas cromatogrficos: cromatografia em camada delgada e cromatografia em coluna clssica. Na primeira, foi possvel analisar a composio do medicamento CafiAspirina, comprovando a presena do cido acetilsaliclico e da cafena, devido a comportamentos semelhantes das substncias em relao ao eluentes. Tambm se calcularam os tempos de reteno (Rf) das substncias. Na cromatografia em coluna clssica, foi possvel observar a separao do azul de metileno e do alaranjado de metila em duas colunas diferentes, uma contendo alumina na fase estacionria e a outra contendo slica gel. Observaram-se comportamentos diferentes na ordem de eluio devido aos efeitos de afinidades entre os eluentes e a substncias em anlise. As tcnicas empregadas foram eficientes tanto para a anlise da composio quanto para a separao de compostos.

Introduo Terica
Cromatografia A cromatografia um processo fsico-qumico de separao de misturas, mais especificamente, de slidos em uma soluo (mistura homognea de duas ou mais substncias). Esse processo fundamenta-se no fato das substncias presentes na mistura terem diferentes propriedades e composies, assim, a interao delas com as duas fases imiscveis (fase estacionria e fase mvel) ser diferente tambm. Ou seja, a velocidade com que uma migra ser maior e de outra, ser menor. Estas duas fases mencionadas so caracterizadas da seguinte forma: Fase estacionria: fase fixa onde a substncia que est sendo separada ou identificada fixa-se na superfcie de outro material. Por exemplo, um papel de filtro. Fase mvel: nesta fase as substncias que queremos isolar so arrastadas por um solvente fluido, que pode ser lquido ou gasoso. Por exemplo, vapor do lcool Etlico. Visto ser uma tcnica bastante verstil e de grande aplicao, existem vrios tipos de Cromatografia:

1. Quanto ao tipo de Sistema Cromatogrfico: 1.1. Em coluna: cromatografia lquida, gasosa e supercrtica. 1.2. Planar: Centrfuga, em papel e camada delgada. 2. Quanto ao tipo de fase mvel: Cromatografia Gasosa (CG), Cromatografia Gasosa de Alta Resoluo (CGAR), Cromatografia Lquida Clssica (CLC), Cromatografia Lquida de Alta Eficincia (CLAE) e Cromatografia Supercrtica (CSC).

3. Quanto ao tipo de fase estacionria: Lquida slida e quimicamente Ligada.

4. De acordo com o modo de separao: Por adsoro, por partio, por troca inica e por afinidade.1 A cromatografia tem como objetivo principal a separao de substncias de uma mistura, com fins analticos ou preparativos, muito utilizado em laboratrios industriais, de pesquisa e de ensino. Todas as tcnicas cromatogrficas utilizam uma fase estacionria e uma fase mvel. A fase estacionria formada de um material escolhido para reter de forma diferenciada os componentes da amostra que se deseja separar. A fase mvel o material que se desloca pela fase estacionria, arrastando os componentes da amostra. Aps transitar pela fase estacionria, por um percurso de distncia adequadamente escolhida, os componentes da amostra se separam e so assinalados pelo sistema detector na sequencia: do primeiro componente menos retido, ao ltimo componente mais retido pela fase estacionria.2

Parmetros de reteno Atravs da velocidade com que os componentes da amostra se deslocam em relao ao solvente pode-se efetuar a separao cromatogrfica e determinar a razo de reteno.

Na cromatografia plana, define-se geralmente, outro parmetro de reteno, a razo de reteno Rf. Este valor no coincide exatamente com o anterior, pois avalia a distncia percorrida pela substncia e pelo eluente e a velocidade da frente do eluente, deslocando-se no suporte seco, superior velocidade mdia do suporte molhado. 3

Cromatografia lquida clssica (CLC)

A cromatografia lquida clssica uma tcnica de partio entre duas fases, slida e lquida, baseada na capacidade de adsoro e solubilidade. Consiste em uma coluna de vidro, metal ou plstico, preenchida com um adsorvente adequado. O adsorvente pode ser colocado na coluna diretamente (seco) ou suspendido em um solvente adequado (geralmente o prprio eluente a ser usado no processo de separao). O slido deve ser um material insolvel na fase lquida associada, sendo que os mais utilizados so a slica gel (SiO2) e alumina (Al2O3), geralmente na forma de p. A substncia a ser separada ou analisada colocada na coluna pela parte superior e o eluente vertido aps, em quantidade suficiente para promover a separao. A coluna pode ser um simples tubo de vidro, aberto em ambas as extremidades, ou semelhante a uma bureta. Em alguns casos aplica-se vcuo pela parte inferior da coluna ou uma ligeira sobrepresso pela parte superior da mesma. Uma sequencia de eluentes normalmente utilizada a seguinte: ter de petrleo, hexano, ter etlico, tetracloreto de carbono, acetato de etila, etanol, metanol, gua e cido actico. Quando a amostra a ser cromatografada possui cor, podem-se visualizar as diferentes zonas coloridas descendo pela coluna, que so recolhidas, separadamente, pela extremidade inferior. Quando a amostra no possui cor, recolhem-se vrias fraes iguais de eluente, testando-as quanto presena ou no de substncias dissolvidas atravs do uso de reveladores adequados (luz UV, reveladores qumicos, etc.). O fluxo de solvente deve ser contnuo. Os diferentes componentes da mistura mover-se-o com velocidade distintas dependendo de sua afinidade relativa pelo adsorvente (grupos polares interagem melhor com o adsorvente) e tambm pelo eluente. A ordem das substncias depender da sua polaridade, assim, a capacidade de um determinado eluente em arrastar um composto adsorvido na coluna depende quase diretamente da polaridade do solvente com relao ao composto. medida que os compostos da mistura so separados, bandas ou zonas mveis comeam a ser formadas; cada banda contendo somente um composto. Em geral, os compostos apolares passam atravs da coluna com uma velocidade maior do que os compostos polares, porque os primeiros tm menor afinidade com a fase estacionria. Se o adsorvente escolhido interagir fortemente com todos os compostos da mistura, ela no se mover. Por outro lado, se for escolhido um solvente muito polar, todos os solutos podem ser eludos sem serem separados. Por uma escolha cuidadosa das condies, praticamente qualquer mistura pode ser separada. Outros adsorventes slidos para cromatografia de coluna em ordem crescente de capacidade de reteno de compostos polares so: papel, amido, aucares, sulfato de clcio, slica gel, xido de magnsio, alumina e carvo ativo. Ainda, a alumina usada comercialmente pode ser cida, bsica ou neutra. A alumina cida til na separao de cidos carboxlicos e aminocidos; a bsica utilizada para a separao de aminas.4

Cromatografia em camada delgada (CCD)

Cromatografia em camada delgada (CCD): uma tcnica de adsoro lquida slido. Nesse caso, a separao se d pela diferena de afinidade dos componentes de uma mistura pela fase estacionria. As amostras a serem analisadas devem ser aplicadas a com a ajuda de um capilar. Aps a aplicao da amostra sobre a placa, a mesma deve ser introduzida num recipiente contendo a fase mvel adequada. A placa deixada no recipiente, onde o solvente ir subir por capilaridade. Ao subir, o solvente ir arrastar mais os compostos que tm menor interao com a fase estacionria, separando-os dos que possuem uma maior interao. O parmetro mais importante a ser considerado em CCD o fator de reteno (Rf), o qual a razo entre a distncia percorrida pela substncia em questo e a distncia percorrida pela fase mvel. O valor Rf caracterstico para cada composto, num determinado suporte e com um determinado solvente, e assim pode ser usado como mtodo de identificao de substncias. Por ser um mtodo simples, rpido, visual e econmico, muito utilizado para a purificao de substncias e para a identificao de fraes de solues. 5

Objetivos
Anlise da composio de um medicamento usando a cromatografia em camada delgada. Separao dos componentes de uma mistura por cromatografia lquida clssica.

Materiais e Reagentes
Materiais utilizados Placas cromatogrficas Tubos de ensaio Almofariz e pistilo Esptula Pipetas graduadas Papel filtro Tubo capilar Balana analtica Aparelho com luz UV Funil de vidro Lpis grafite Algodo Coluna para cromatografia Suporte universal Basto de vidro Bquer Reagentes utilizados Comprimido de CafiAspirina Cafena Iodo cido acetilsaliclico Metanol Acetona Clorofrmio Tolueno Acido actico glacial Slica gel Hexano Sol.etanlica de alaranjado de metila e azul de metileno Etanol gua destilada Acido actico 1M

Parte Experimental
1) Cromatografia em camada delgada Em trs tubos de ensaio colocou-se, respectivamente, um comprimido de CafiAspirina macerado, uma ponta de esptula de cido acetilsaliclico e uma ponta de esptula de cafena. Adicionou-se, em cada tubo, 2,5mL de metanol e agitou-se por 5 minutos. Filtrou-se somente a mistura da CafiAspirina, desprezando os slidos insolveis. Em duas placas cromatogrficas, com um tubo capilar, aplicou-se uma amostra das trs solues metanlicas, a uma distncia de 1 cm uma da outra, aproximadamente. Prepararam-se dois sistemas de eluentes: I) Acetona e clorofrmio 1:1; II) tolueno, clorofrmio, cido actico glacial e metanol 12: 5: 1,8: 0,1. Colocou-se cada sistema e as placas cromatogrficas, em um bquer. Tampou-se o sistema. Aguardouse a eluio. Retiraram-se as placas e deixaram-nas secar. Em seguida revelou-as na luz UV e aps, na atmosfera de Iodo. Contornaram-se as manchas observadas com um lpis grafite.

2) Cromatografia lquida clssica

Inicialmente realizou-se o empacotamento da coluna cromatogrfica: preparouse uma coluna para cromatografia, colocando um pequeno pedao de algodo no fundo da coluna. A) Slica-gel Em um bquer, agitou-se 10g de slica gel em hexano, com um basto de vidro, at que se obtivesse uma pasta fluida homognea e sem bolhas de ar. Derramou-se, com um funil de vidro, a pasta fluida sobre a coluna. Controlou- se o nvel de solvente com a abertura da torneira. Deixou-se o nvel de hexano 0,5 cm acima da coluna de slica. Distribuiu-se homogeneamente, com o auxilio de uma pipeta comprida, 3mL de uma soluo etanlica de alaranjado de metila e azul de metileno sobre o topo da coluna de slica. Aguardou-se a adsoro pela coluna, em seguida adicionou-se etanol, verteu-se cuidadosamente o solvente pelas paredes internas da coluna, tomouse cuidado para no causar distrbios ou agitao na coluna. Abriu-se a torneira para escoar o solvente. Eluiu-se o alaranjado de metila com o etanol. Colocou-se gua para eluir o azul de metileno e adicionou-se uma soluo aquosa de acido actico 1M para que elusse completamente. B) Alumina. No procedimento demonstrativo, repetiu-se o mesmo procedimento acima, utilizando 15 g de alumina neutra como fase fixa. Eluindo primeiramente o azul de metileno com ter e em seguida o alaranjado de metila com a gua e o cido actico.

Resultados
1) Cromatografia em camada delgada (CCD)

Placa A (eluentes: acetona e clorofrmio)

Figura 1: esquerda, observao da corrida cromatogrfica em luz UV. direita, manchas reveladas na atmosfera de iodo.

Sendo: 1 = CafiAspirina; 2 = cido Acetilsaliclico; 3 = Cafena

Amostra cido acetilsaliclico Cafena

Rf 0,7 0,6

Placa B: (eluentes: tolueno, clorofrmio, cido actico glacial, metanol).

Figura 2: esquerda, observao da corrida cromatogrfica em luz UV. direita, manchas reveladas na atmosfera de iodo.

Sendo: 1 = CafiAspirina; 2 = cido Acetilsaliclico; 3 = Cafena

Amostra cido acetilsaliclico Cafena

Rf 0,3 0,1

Discusso
1) Cromatografia em camada delgada. Inicialmente, o metanol, que um solvente polar, foi utilizado para dissolver as substncias que seriam utilizadas: CafiAspirina, cido acetilsaliclico e cafena. Formando assim solues aquosas destas. A droga analgsica utilizada foi a CafiAspirina, que contm em sua composio (em um comprimido) 500 mg de cido acetilsaliclico e 50 mg de cafena6 . Ao dissolv-la em metanol, houve a formao de um slido insolvel, que provavelmente seria a supersaturao da substncia. Ento se realizou a filtrao para separar o slido da soluo. Na placa A, a fase mvel era composta por acetona e clorofrmio, e a fase estacionria era polar, constituda por slica gel. Ao analisar o cromatograma (figura 1), observa-se que a cafena apresentou maior afinidade com a fase estacionria, devido sua maior polaridade, assim, sendo adsorvida mais fortemente e permanecendo mais tempo na fase estacionria. O cido acetilsaliclico se concentrou na parte superior da placa, devido sua menor polaridade, por ser adsorvido menos

fortemente, permaneceu menos tempo na fase estacionria. Tambm foi possvel observar a presena das duas substncias na CafiAspirina, devido ao fato de que a mancha atrelou por todo o caminho. Na placa B, a fase mvel era composta por tolueno, clorofrmio, cido actico glacial e metanol, e a fase estacionria por slica gel. Ao analisar o cromatograma (figura 2), observa-se que a cafena e o AAS apresentaram o mesmo comportamento que na placa A, sendo que a cafena apresentou maior afinidade com a fase estacionria e o AAS, menor afinidade. Tambm foi possvel observar a presena das duas substncias na CafiAspirina, devido ao fato de que a mancha atrelou por todo o caminho. Aps o desenvolvimento do cromatograma e secagem das placas deve-se revela-las. A etapa da revelao consiste em tornar visveis as substncias incolores presentes na amostra. Os mtodos utilizados foram a de placas onde a fase estacionria fluorescente, revelando os compostos na cmera de luz ultravioleta; e a exposio da cromatoplaca a vapores de iodo, revelando-se sob a forma de manchas marrom, tanto mais escuras quanto maior o tempo de exposio e a concentrao da amostra. A formao desses complexos reversvel (muitas vezes rapidamente), porque o iodo se une apenas fisicamente com as substncias saturadas.

Clculo do Rf
O Rf obtido pela diviso da distncia percorrida pela substncia (ds) pela distncia total (dm). Placa A: Amostra cido acetilsaliclico Cafena ds (cm) 3,3 2,3 dm (cm) 4,2 4,2 Rf 0,7 0,6

Tabela 1: Valores de Rf obtidos no experimento, na placa A.

Placa B: Amostra cido acetilsaliclico Cafena ds (cm) 1,3 0,4 dm (cm) 3,8 3,8 Rf 0,3 0,1

Tabela 1: Valores de Rf obtidos no experimento, na placa B.

A cafena apresenta maior polaridade, pois esta apresenta quatro grupos aminas e duas cetonas alm da aromaticidade (figura 3). O cido acetilsaliclico apresenta um grupo de cido carboxlico, um grupo aldedo e um grupo ter, alm da aromaticidade (figura 4). Apesar do AAS apresentar o grupo com maior polaridade, a cafena apresenta maior quantidade de grupos altamente polares, o que faz com que a polaridade desta seja maior.

Figura 3: Frmula estrutural da cafena

Figura 4: Frmula estrutural do AAS

As diferenas observadas foi que na placa B a corrida foi mais devagar do que na placa A. O solvente, que a fase mvel, tem uma influncia importante na corrida. A soluo de acetona e clorofrmio um solvente mais polar, assim as substncias correram mais rapidamente e tiveram um deslocamento maior, atingindo quase extremidade da placa. J a soluo de tolueno, clorofrmio, cido actico glacial e metanol, um solvente menos polar, assim a corrida foi mais devagar e o deslocamento foi somente at o meio da placa cromatogrfica. Isso mostra que a polaridade do solvente tem a sua importncia na cromatografia.

2) Cromatografia lquida clssica. Na cromatografia lquida clssica necessrio realizar o empacotamento da coluna, colocando-se um pequeno pedao de algodo no incio do estreitamento da coluna a fim de dar suporte fase estacionria, impedindo sua passagem. Adiciona-se certo volume de hexano a esta slica, num bquer, preparando-se uma pasta fluida de adsorvente (slica) com solvente (hexano). Esta pasta ento vertida na coluna. Devese evitar a formao de bolhas, pois estas dificultam o processo de eluio, tornandose obstculos passagem do eluente e formando caminhos alternativos mais fceis para a passagem da amostra. Deixa-se o adsorvente depositar e o excesso de solvente escoar pela sada inferior. A superfcie superior da coluna de adsorvente deve permanecer sempre coberta com o lquido (eluente), a fim de evitar sua secagem, contrao e, consequentemente, alteraes na natureza das substncias analisadas, assim como e aparecimento de rachaduras e poros. Inicialmente utilizou-se a slica como fase estacionria e o etanol, primeiramente, e a gua, posteriormente, como fases mveis. Sendo a coluna adsorvente polar, conforme observado na figura 5.

Figura 5: Slica gel ativada

A primeira fase mvel, etanol, possui em sua molcula, uma parte polar e uma apolar. A cadeia carbnica consiste na parte apolar, enquanto a hidroxila constitui a parte polar da molcula, como observado em sua frmula estrutural na figura 6. J a gua uma substncia polar.

Figura 6. Frmula estrutura do etanol.

Nota-se que os componentes da mistura so transportados pelo solvente com diferentes velocidades. No processo de separao entram em jogo dois fatores: a afinidade da substncia para com o solvente utilizado e a afinidade da substncia em relao ao adsorvente. O alaranjado de metila foi primeiramente eludo com o etanol, separando-se o azul de metileno. A conluso que se chegou foi de que o azul de metileno uma espcie bsica, interagindo fortemento com a slica, que tem natureza cida devido ao xido de silcio, ficando retido na fase estacionria. O azul de metileno, no eluiu em etanol, necessitando de um sistema eluente mais polar, ento utilizou-se a gua para elu-lo.

Figura 7: alaranjado de metila

Figura 8: azul de metileno

No procedimento demonstrativo, foi realizado a CLC utilizando a alumina na fase estacionria. Observou-se que que a ordem de eluio, em comparao com a slica na fase estacionria, foi invertida. O azul de metileno foi eluido primeiro com o etanol. A alumina tem ao bsica, interagindo fortemente com alaranjado de metila, que possui carter cido devido a presena do cido sulfnico em sua estrutura (SO3H), ento este ficou retido na fase estacionria. Somente eluiu-se ao adicionar um solvente mais polar, no caso a gua. Tanto na CLC com a slica, quanto com a alumina, os solventes escolhidos foram eficientes, pois foi possvel separar o alaranjado de metila do azul de metileno.

Concluso
Com a cromatografia delgada, foi possvel analisar a composio do medicamento CafiAspirina, comprovando a existncia de cido acetilsaliclico e de cafena, atravs da eluio destas em duas placas cromatogrficas com sistemas de eluentes distintos. Atravs das eluies, foi possvel observar que algumas substncia foram mais arrastadas que outras devido a suas polaridades: a cafena foi menos arrastada (mais polar), ou seja, apresentou mais interao com a slica, enquanto o cido acetilsaliclico foi mais arrastado (menos polar), apresentando menos interao com a slica. Os Rf do cido acetilsaliclico e da cafena calculados apresentaram valores diferentes em cada placa cromatogrfica, como uma propriedade fsica constante para cada substncia, provavelmente houve algum erro, por parte do grupo, durante a eluico ou no uso das placas cromatogrficas. Mesmo com erros, foi possvel observar a presena do AAS e da cafena na CafiAspirina. Na cromatografia em coluna, utilizaram-se duas fases estacinarias, uma com slica-gel e a outra com alumina. Na coluna com slica o alaranjado de metila eluiu-se primeiramente ao adicionar etanol, e o azul de metileno ficou retido na fase estacionria, pois devido ao fato de ser uma espcie bsica, interagiu fortemento com a slica, que tem natureza cida devido ao xido de silcio, ficando assim retido na fase estacionria. J na coluna com alumina, o alaranjado de metila ficou retido na fase estacionria, pois possui carter cido e interagiu fortemente com a alumina, s foi eludo com a adio da gua, que um solvente mais polar. Conclui-se ento que os mtodos de anlise e separao de compostos atravs das cromatografias, so extremamentes eficientes e esto diretamente relacionados com a foras intermoleculares dos compostos e com efeitos especficos de afinidade e solubilidade.

Bibliografia
1) http://www.mundoeducacao.com.br/quimica/analise-cromatografica-oucromatografia.htm (Acesso em 02/03/2013) 2) http://www.tele.ed.nom.br/croma0p.html (Acesso em 02/03/2013) 3) http://froque.no.sapo.pt/CROMATOGRAFIA-TLQ2.pdf (Acesso em 02/03/2013) 4) http://www.ebah.com.br/content/ABAAABarwAJ/relatorio-metodos-extracaocromatografia-cg-clc-clae (Acesso em 02/03/2013) 5) http://www.ebah.com.br/content/ABAAABIuQAB/cromatografia (Acesso em 02/03/2013) 6) http://www.folheto.net/cafiaspirina-bula-do-medicamento/ (Acesso em 01/03/2013) 7) Figura 3: http://www.brasilescola.com/upload/conteudo/images/estrutura-dacafeina.jpg (Acesso em 01/03/2013) 8) figura 4: http://www.infoescola.com/wp-content/uploads/2011/08/acidoacetilsalicilico.jpg (Acesso em 01/03/2013) 9) figuras 5 e 6: http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/8/82/Ethanol-2Dskeletal.svg/800px-Ethanol-2D-skeletal.svg.png (Acesso em 01/03/2013)