GUIA 5 CULTIVO POR LOTE ALIMENTADO

5.1.- Una fermentacin se realiza por lotes alimentado utilizando una alimentacin constante de 0,8 L/h, con una concentracin de sustrato limitante de 120 g/L. El cultivo se inicia por lotes con un volumen de lquido de 20 litros. La concentracin celular despus de inocular es de 0,1 g/L, en un medio de cultivo con 7,5 g/L de nutriente limitante. El cultivo por lotes contina hasta que la masa celular se quintuplica, inicindose entonces la alimentacin. Determine: a. Condiciones iniciales del cultivo por lotes alimentado b. Condiciones de transicin c. Condiciones finales, correspondientes al momento en que el volumen de caldo es de 30 litros. Datos: M = 0,62 h-1, KS = 80 mg/L, Yx/s = 0,45 5.2.- Se quiere instalar un sistema de cultivo por lotes alimentado en el cual se obtenga crecimiento exponencial con alimentacin a flujo constante y concentracin de nutriente limitante variable con el tiempo. a. Deduzca las ecuaciones que representan el comportamiento del sistema b. Determine el tiempo de alimentacin si en el fermentador, inicialmente con 22 m3 de lquido, se desean obtener 640 kg de biomasa seca a una de 0,5 h-1. Calcule tambin la masa total de glucosa alimentada y su concentracin inicial y final en el fermentador. Datos adicionales: X0 = 8 g/L, M = 0,62 h-1, KS = 0,045 g/L, Yx/s = 0,4 y F = 1 L/h 5.3.- Se le ha solicitado a usted disear una fermentacin por lotes alimentado con alimentacin constante (F y Sf constantes). El microorganismo a cultivar es una bacteria que posee un M= 0,4 h-1, Yx/s= 0,4 y KS= 0,010 g/L, cuando se utiliza glucosa como fuente de carbono y energa. Para estos efectos se cuenta con un fermentador piloto de 200 litros de volumen total. Usando glucosa como nutriente limitante, se debe cumplir que finalizada la zona de crecimiento exponencial (ZCE) se alimenta el flujo F de alimentacin de tal modo que se obtenga una segunda fase de crecimiento exponencial de crecimiento igual a la primera y que su trmino coincida con que se ha ocupado un 80% del volumen del fermentador. Los valores de S0 y X0 al tiempo inicial son 0 y 1,5 g/L, respectivamente. El tiempo total del CLA no debe sobrepasar 6 horas, cuando se parte con un volumen inicial de 140 litros. a. Cul ser el valor de F en la segunda ZCE? b. Cul es la concentracin final de microorganismos alcanzada? c. Cul es el valor mximo de S que se alcanza en cada una de las ZCE? 5.4.- Se desea utilizar una fermentacin por lotes alimentado en una planta piloto. La bacteria de inters presenta una velocidad especfica mxima de crecimiento de 0,34 h-1, un KS de 0,029 g/L. La fase por lotes se lleva a cabo en 320 litros de medio, obtenindose una concentracin celular de 7 g/L al iniciar la alimentacin, momento en el cual la concentracin de maltosa es de 0,01 g/L. La alimentacin, con una concentracin de 66 g/L de maltosa, se realiza de acuerdo a: F = F0 + 3,3 t Se desea que al inicio de la alimentacin la oferta sea el 80% de la demanda de maltosa. Calcular el tiempo de alimentacin requerido para alcanzar una masa celular de 10 kg en base seca y el volumen de caldo en el fermentador es ese momento. Yx/s = 0,41 5.5.- En un CLA se utiliza alimentacin con flujo lineal de la forma F = 27 t (L/h) El volumen inicial es de 1.300 litros, con concentraciones X0 = 8,5 g/L y S0 = 0,35 g/L. La concentracin de nutriente limitante en la alimentacin es 170 g/L, con un rendimiento global de sustrato en clulas igual a 0,41. Se cultiva una levadura de M = 0,44 h-1 y KS = 0,06 g/L. Determinar el tiempo de alimentacin para alcanzar una biomasa de 20 kg y calcular los valores finales de S, X, V y .

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5.6.- Se desea operar una fermentacin bajo la modalidad lote alimentado. Se inoculan 20 litros de medio de cultivo, con una concentracin de sustrato de 11,3 g/L, con 5 litros de un preparado microbiano 1,5 g/L. La primera etapa del cultivo se inicia por lotes hasta que la masa microbiana alcanza 4 veces su valor inicial. Se inicia entonces una alimentacin variable de sustrato (F [L/h] = 0,5 t + 4) , con una concentracin de 180 g/L. La fermentacin se detendr al alcanzar los 165 litros de volumen. M = 0,5 h-1, Ks = 65 mg/L, YX/S = 0,45 Determinar a. Condiciones iniciales del cultivo por lotes alimentado b. Condiciones de transicin c. Condiciones finales 5.7.- En una planta de levadura la produccin se realiza mediante CLA con alimentacin exponencial de medio de cultivo, con cte e igual a 0,24 h-1. El volumen base es de 65.000 L de medio. Datos: X0 = 1 g/L, Yx/s = 0,52, SF = 250 g/L, KS = 0,1 g/L, M = 0,48 h-1. Despus de 6 horas se produce una falla en la bomba programable de alimentacin, debiendo ser reemplazada por otra cuyo flujo viene dado por: F = 100 t3 Calcular las condiciones al momento de la falla y despus de 20 horas de trabajo (V, , X, S). 5.8.- En una fermentacin por lotes alimentados realizada en un fermentador de 200 litros de volumen total, se obtuvieron los siguientes resultados: t (h) XV (g) 0 210 1 313 2 467 3 697 4 1040 5 1552 6 1797 7 2032 8 2267 9 2500

La fermentacin se detuvo cuando el volumen de caldo alcanz al 80% del volumen total. Las caractersticas de las bacterias cultivadas son M= 0,4 h-1, Yx/s=0,4 y KS=0,010 g/L para el nutriente limitante utilizado. Determine el tipo de alimentacin usado sabiendo que Sf es constante y calcule los valores de F y Sf. Calcule las concentraciones iniciales de sustrato y clula, considerando que se inicia el cultivo con un volumen de 140 litros. 5.9.- En un proceso industrial por lotes alimentado se utiliza un fermentador inicialmente con 30.000 litros de medio. La alimentacin contiene 200 gramos de sacarosa por litro y debe mantenerse un de 0,2 h-1. El microorganismo tiene un M de 0,33 h-1 y un Ks de 0,050 g/L. La concentracin celular al trmino de la fase por lotes es de 10 g/L y se alimenta durante 7 horas. El volumen mximo de lquido en el fermentador es de 40 m3. Determinar el flujo al inicio y al final de la alimentacin, el rendimiento de sacarosa, la concentracin celular final y la masa total de sacarosa alimentada. 5.10.- Se desea llevar a cabo una fermentacin bajo la modalidad lote alimentado. Para ello se inoculan 45 litros de medio de cultivo (12 g/L sustrato) con 5 litros de un preparado microbiano de 4 g/L. La primera etapa del cultivo se inicia por lotes hasta que el sustrato es consumido en un 90%. Se inicia entonces una alimentacin variable de sustrato (lineal), con una concentracin de 100 g/L y un flujo inicial de 5 L/h. La fermentacin se detendr al alcanzar los 100 litros de volumen. La cepa utilizada, Kluyveromyces fragilis, tiene un tiempo de duplicacin de 1,39 horas. En relacin al sustrato utilizado, presenta un Ks = 20 mg/L y un rendimiento constante YX/S = 0,45 Determinar: a. Condiciones iniciales del cultivo por lote alimentado (X, S, , t, V) b. Funcin de flujo si la transicin ocurre a las 3 horas de iniciada la alimentacin c. Condiciones finales del cultivo por lotes alimentado (X, S, , t, V)
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5.11.- Como futuro Ingeniero le ha sido encomendado el diseo de una fermentacin por lotes alimentados, con alimentacin exponencial del tipo: F = 2,85 t2 + 1 Para esto se dispone de un fermentador que contiene inicialmente 50 litros de medio que son inoculados con 2,5 litros de un cultivo de concentracin celular de 10 g/L, quedando luego de la inoculacin con una concentracin de sustrato limitante de 10 g/L. En el momento en que la concentracin de sustrato llegue a 0,1 g/L, comenzar la alimentacin exponencial, con una concentracin de sustrato limitante de 120 g/L. El microorganismo a cultivar es una bacteria que presenta las siguientes caractersticas: M = 0,5 h-1, YX/S = 0,46, KS = 40 mg/L a. Calcular el tiempo transcurrido hasta que el crecimiento comienza a estar limitado por la alimentacin b. Determinar las concentraciones de sustrato y clulas, el volumen y la velocidad especfica de crecimiento una vez transcurrido el tiempo de crecimiento exponencial. 5.12.- Una fermentacin se realiza por lotes alimentados utilizando una alimentacin variable de tipo lineal, con una concentracin de sustrato limitante de 120 g/L. El cultivo se inicia por lotes con un volumen de lquido de 20 litros. La concentracin celular despus de inocular es de 0,1 g/L, con un medio de cultivo con 7,5 g/L de nutriente limitante. El cultivo por lotes contina hasta que la masa celular se quintuplica, inicindose entonces la alimentacin. El volumen del fermentador es 50 litros, siendo detenida la fermentacin al completar un 70% de este. Datos: M = 0,62 (h-1), Ks = 80 (mg/L), YX/S = 0,45 Determinar F = 0,6 t + 2 [ L/h ] a. Condiciones iniciales del cultivo por lotes alimentado b. Condiciones de transicin c. Condiciones finales 5.13.- Se desea analizar la posibilidad de usar un CLA con alimentacin exponencial para producir levaduras forrajeras utilizando melaza y sales minerales. Para estos efectos se dispone de un fermentador de 75.000 litros de volumen y los equipos necesarios para lograr este tipo de alimentacin. Estudios previos han demostrado que el microorganismo crece a mxima velocidad especfica de crecimiento y con un rendimiento en masa celular tambin mximo si la concentracin de sacarosa se mantiene en 1 g/L en el fermentador. De acuerdo a las caractersticas del microorganismo y del fermentador se ha estimado que la concentracin mxima de masa celular que se puede obtener creciendo a M sin que exista limitacin por O2 es de 30 g/L. La melaza contiene 55% de sacarosa y 6% de protena. Dado que esta alimentacin no provee todo el nitrgeno necesario, se desea que este sea suplementado con sulfato de amonio y agregado al fermentador al inicio del CLA (t=0). Caractersticas del microorganismo: M= 0,35 h-1 Yx/s= 0,5 Condiciones iniciales: S0 = 1 g/L sacarosa X0 = 2 g/L (NH4)2SO4 SNO = 0,4 g/L Se le solicita a usted que use las condiciones de proceso que tienden a obtener la mayor produccin de biomasa. Calcule el tiempo que dura el CLA, la cantidad de sulfato de amonio necesaria a agregar y el perfil de la concentracin de nitrgeno disponible como nutriente dentro del fermentador durante todo el CLA.

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