Estudio qumico-analtico del de semillas d e p o r naranja

aceite

M. de Mingo, O. Fernndez y A. Toledano

La naranja es una de las riquezas nacionales ms estimables. Existen mltiples industrias derivadas de su total aprovechamiento, como, por ejemplo, las alimenticias, de preparacin de bebidas refrescantes y zumos, la obtencin de pectina, e l beneficio de la esencia, los concentrados que sirven de materia prima para la posterior obtencin de vitaminas y un nmero variable de otras secundarias. No obstante, existe un producto de desecho al que no se le ha prestado todava atencin: es la grasa contenida en la semilla. De la bibliografa consultada no se ha obtenido dato alguno relacionado con su aprovechamiento, y los referentes a la composicin de la grasa de la semilla son muy incompletos y de relativo valor. De aqu nuestro inters de estudiar las caractersticas fisicoqumicas del aceite de naranjas y completar as e l cuadro analtico de las grasas obtenidas de las plantas de la familia de las Auranciceas. Materia prima Como materia prima para la obtencin de la grasa hemos utilizado semillas de las plantaciones valencianas, correspondientes al Citrus Aurantium, que e l Dr. Trigo nos ha suministrado generosamente, y a quien en este lugar expresamos nuestras ms cumplidas gracias. Tales semillas proceden de los residuos de la preparacin industrial de zumo. El marco industrial, despus de limpio, se deja secar espontneamente al aire y, por ltimo, se separan por tamizacin las semillas enteras, perfectamente purgadas, de los residuos de endocarpio que las acompaan. Segn Diedrichs (1), las naranjas estn constituidas por 27,82 grs. por 100 de epicarpio y mesocarpio, un 70,99 grs. por 100 de endocarpio y 1,99 grs. por 100 de semillas. Para sus investigaciones u t i l i z e l

ANALES DEL JARDN BOTNICO DB MADRID

aceite de las semillas, a las que asign una riqueza de un 57,31 grs. por 100 de materia grasa. Como los datos obtenidos por varios experimentadores eran poco congruentes, decidimos e l estudio de la grasa con las tcnicas modernas. Rendimiento.Las semillas secas al aire se descascarillan, proporcionando asi un albumen fcilmente triturable. La relacin de epispermo a almendra encontrada es la siguiente: i 40 grs. de epispermo. ! ' 104 grs. de albumen.

144 grs. de semillas enteras

es decir, un 72,22 grs. por 100 de albumen y 27,77 grs. por 100 de epispermo. Diedrichs estima la proporcin de epispermo y albumen en 13,1 grs. y 86,9 grs. por 100 respectivamente (2). Agotada la semilla total, previa trituracin, proporciona un 36,2 grs. por 100 de aceite: Semillas Aceite obtenido / o de a c e i t e en semillas 67 gramos 24,25 36,20

El albumen, liberado de la cascarilla y agotado igualmente con ter, suministra un porcentaje en aceite de 46,39 grs. Albumen Aceite obtenido / 0 de a c e i t e en e l albumen 73,46 gramos 34,084 46,39

Fcilmente se comprende que al epispermo de las semillas l e corresponde una riqueza grasa de un 2,7 grs. por 100. Los datos relativos al contenido en aceite que hemos podido coleccionar se resumen en e l siguiente cuadro:

A. Qrn L e w k o w i t s d i N o s o t r o s / 0 de a c e i t e en l a s semilla .33 37 / 0 de a c e i t e en e l albumen 54 47 / 0 de a c e i t e en e l epispermo.. 2 20-28 36,2 46,39 2 , 7

ANALES DEL JARDN BOTNICO DE MADRID

Nuestros valores concuerdan con los de A. Griin; solamente e l rendimiento obtenido, trabajando con e l albumen limpio, es inferior al que Grn asigna a estas semillas. Probablemente la causa de la disparidad estriba en que nosotros hemos agotado e l albumen directamente, seco al aire, y quiz el autor a quien mencionamos haya procedido a una desecacin previa, l o que, por otra parte, no est consignado en la fuente bibliogrfica a que nos referimos. Con los datos obtenidos podemos inquirir de modo aproximado el valor anual de beneficios de la grasa que, la cosecha espaola de naranjas, podra suministrar. No poseemos ms informacin normal, para intentar este balance, que la publicada en el Anuario Estadstico de la Produccin Agrcola de 1935 (Ministerio de Agricultura). He aqu resumidos tales valores: Guasa de semilla que se puede obtener de la produccin de naranja de espaa N a r a n j a S e m i l l a Orasa

293,31 grs. Por rbol 31,000 ers. 616,9 grs. Produccin t o t a l de Espaa. 9 . 0 9 8 , 0 3 1 q. m. 55.763,65 q.m. 181,050,81 q. m. 27.881,82 V. 18.587,88 > V. 1 3 . 9 4 0 , 9 1 > Vi 1 1 . 1 5 2 , 7 3 V.

Con slo aprovechar un quinto de los residuos anuales de la cosecha naranjera, se podra obtener un beneficio de 11.000 quintales mtricos, en nmeros redondos, de grasa, l o que significa un aumento bastante considerable en materia prima para usos industriales de los ms variados. Estudio qumico-analtico Caracteres.El aceite obtenido constituye un liquido algo viscoso, de color amarillento y sabor amargo, debido a la hesperidina. Por enfriamiento enturbia, depositando glicridos de los cidos slidos, que vuelven a disolverse en cuanto se eleva la temperatura. Lewkowitsch c a l i f i c a a esta grasa como un aceite semisecante poco conocido. Expuesto al aire, se espesa muy lentamente, no llegando a formar pelcula. Interesafijare l coeficiente de secantividad para la determinacin den-

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nitiva del grupo a que pertenece la muestra en estudio. Para e l l o hemos seguido e l mtodo de Livache (3) que proporciona los siguientes valores, en el transcurso de una semana, al terminar la cual no se encontr aumento de peso:

DtAS 22-142 23-1-42 24-1-42 26-1-42 27-1-42 28-1-42 29-1-42

Peso de l a c+p~a+o 22,6761 grs. 22,0786 22,0902 22,0990 > 22,1000 22,1003 22,1003

Aumento p o ro x i g e n of i j a d o P a r c i a l e s Totales

0 , 0 1 1 6 grs. 0,0088 0,0010 0,0003 0,0000

, 4 9 0,0025 grs. 0 0 , 0 1 4 1 2 , 7 9 4 , 5 3 0 , 0 2 2 9 , 7 3 0 , 0 2 3 9 > 4 , 7 9 0,0242 4 4 , 7 9 0,0242

grs.

En funcin de estos datos, debemos c a l i f i c a r al aceite de semillas de naranja como no secante y perteneciente al grupo de los aceites de ssamo, cacahut, colza, etc. Reacciones coloreadas.Reaccin de Haydenreich.Coloracin amar i l l ol a d r i l l o oscuro, que pierde en intensidad poco a poco, quedando a los tres minutos una capa homognea de color amarillo claro. Reaccin de Hauchecorne.Coloracin amarillo plida. Toma color rojo l a d r i l l o claro al cabo de veinte minutos s i la mezcla se coloca en bao de agua hirviente. Reaccin de Liebermann.Coloracin verde muy fugaz, quedando e l liquido de color pardo. Reaccin de Macciotta.A los dos minutos un color amarillo verde claro en la zona de contacto; a los cuatro minutos, se forma debajo de este anillo amarillo otro de color violeta, y, transcurrido algn tiempo, se produce en la capa etrea unafluorescenciaverde. Constantes fsicas Densidad (DM) ndice de refraccin (n)* Grado refractomtrico Viscosidad r e l a t i v a( a c e i t e a 60 y agua a20C.) Polarizacin Punto de s o l i d i f i c a c i n 0 , 9 2 0 3 1 , 4 6 6 6 * 61,1 17,2 .No desvia e . l plano de luz. 0 , 2

ANALB8 DEL JARDN BOTNICO DB MADRID Constantes qumicas * El estudio sistemtico se ha verificado siguiendo los mtodos consignados en los Deutsche Einheitsmtthoden de 1930, que constituyen, hasta que se publique la prxima edicin, las normas unificadas para hacer comparativos los resultados obtenidos por distintos investigadores. En el caso concreto del ndice de iodo, hemos dado preferencia al mtodo de Wijs, porque, segn Grn (i), puede tener lugar una s u s t i tucin de hidrgeno por halgeno, cuando se opera con combinaciones muy no saturadas. Estima e l mismo autor que con e l mtodo de Wijs es como hay menos peligro de sustitucin, y slo en los casos en que aqulla pueda presuponerse debe emplearse e l mtodo de Meigen y Winogradoff. Por otra parte, e l mtodo de Wijs est consignado o f i c i a l mente en los mtodos americanos para anlisis de cereales y grasas de 1935. El ndice de sulfociangeno o de rodan, se ha realizado siguiendo las prescripciones de su descubridor, profesor doctor Kaufmann. En e l caso del ndice de acetilo, se ha procedido segn el mtodo ocial alemn y e l de A. Verley y F. Btflsing (5). El residuo insaponificatle se evalu por e l mtodo de precisin de Schicht y Halpern (6), ya que, por e l consignado en el WizOff de 1930* se obtuvieron resultados discordantes en varias determinaciones seriadas. Constantes qumicas ndice de cido 1,254 ndice < l es a p o n i f i c a c i n 191,15 ndice de iodo. Farmacopea germnica. ... 93,10 ndice de iodo (Wijs) 103,5 ndice de sulfociangeno 61,27 ndice de a c e t i l o (Wizoff) 5 , 8 3 ndice de a c e t i l o (Verley-Bolaing) 8 , 5 4 ndice de ReichertMeissl 0 , 5 2 ndice de Polenske 0 , 4 5 Insaponificable 0 , 4 5 ndice de Hehner 95,27 ndice de Hexabromo 1 , 6 7 Secantividad (Livache) 4 , 7 9 cidos grasos totales Los cidos grasos totales se obtuvieron como operacin complementaria de la determinacin del residuo insaponificable. Con e lfin,sin

ANALES DBL JARDN BOTNICO DU MADRID

embargo, de disponer de una cantidad mayor que nos permitiera su estudio inmediato partimos de un peso mayor de grasa neutra, 25 grs. Se saponific, liberndole de insaponificatile, y descompuestos los jabones con cido clorhdrico al 20 por 100, se extrajeron los cidos grasos con ter e t l i c o , que, desecado con sulfato sdico anhidro, abandon aqullos en estado de pureza. Tales cidos se desecaron en vacio, sobre cido sulfrico a 50 C. Caracteres organolpticos.Se obtuvo una masa semislida de olor tpico y caracterstico a grasa, de color casi blanco, tirando algo al crema. No es dura, y su consistencia es ms bien parecida a la de la manteca de cerdo. El sabor es ligeramente amargo, como el de la grasa neutra. Analticamente presenta las siguientes constantes fsico-qumicas: Punto de fusin Punto de s o l i d i f i c a c i n (Titulo) ndice de refraccin (n) ^ Grado refractomtrico a 40 ndice de iodo ndice de sulfociangeno Nmero de neutralizacin Peso molecular medio ' . Porcentaje de cidos grasos t e r i c o 37 41,25 35,4 1 , 4 5 5 8 44,9 1 1 0 , 3 5 63,16 212,2 280,3 95,67

Los cidos grasos totales cuyas caractersticas hemosfijado,son, naturalmente, una mezcla de distintos cidos saturados y no saturados. Entre estos ltimos deben exitir trminos en cuya cadena la no saturacin sea doble y quiz triple, y para resolver este empeoconfirmado, adems, por la diferencia numrica entre los ndices de iodo y de sulfociangeno, desde e l punto de vista cualitativo y cuantitativo, no hay ms remedio que llegar a la separacin de los componentes slidos (saturados?) y lquidos (no saturados?) que forman pane y dan caracterstica tpica a cada grasa. cidos rasos slidos Evaluacin y separacin.La proporcin en que entran a formar parte del aceite los componentes cidos slidos (saturados?) ha sido determinada por dos mtodos fundamentales, que han permitido, al mismo tiempo, profundizar ms en l o que se r e f i e r e a rendimiento y calidad de los componentes obtenidos. Han sido aqullos e l mtodo clsico de Twitchell (7) y e l de S. H. Bertram (8). Los valores obtenidos

ANALM9 DBL JARDN BOTNICO DB MADRID

con uno y otro mtodo se consignan a continuacin, en tantos por cientos referidos a cidos grasos totales: Mtodo de Twitchell C a n t i d a d Peso de c i d o s p e s a d a de c i d o s g r a s o ss l i d o s g r a s o s totales 2 , 0 6 5 5 grs. 4 , 7 0 5 6 4 , 9 2 5 2 0,3580 grs. 0 , 8 6 3 7 0,9485

/ 0 de c i d o s g r a s o ss l i d o s 17,38 grs. 18,35 19,25

Mtodo de S. H. Bebtkam C a n t i d a d P e s o de c i d o s p e s a d a de c i d o s g r a s o ss l i d o s g r a s o st o t a l e s 4,9848 grs. 5,0180 > 1 , 3 8 3 3 gn. 1 , 4 0 3 0 " / , de c i d o s g r a s o ss l i d o s 27,75 grs. 27,95

Nosotros hemos encontrado, para el ndice de iodo de las fracciones slidas obtenidas por uno y otro mtodo, valores que confirman la ms exacta separacin, segn S. H. Bertram. ndice de iodo de los cidos grasos slidos: 2,17 Twitchell. 1 , 6 1 Bertram.

El mtodo de Bertram constituye, pues, e l de eleccin para evaluar los cidos grasos slidos de una grasa. Lo expuesto encuentra su confirmacin s i se sigue el camino iniciado por Kaufmann en sus estudios rodanomtricos. Este autor, a base de consideraciones tericas y resultados experimentales sobre la fijacin de halgeno y sulfociangeno en la molcula de los cidos grasos, ha deducido una serie de frmulas con las que se puede calcular el porcentaje de cidos slidos y lquidos. Tales ecuaciones conducen a obtener valores que, en nuestro caso concreto, concuerdan extraordinariamente con la realidad, obtenindose

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as un valor de 27,09 grs. por 100 de cidos grasos slidos. Valor tambin acorde con e l resultado prctico de 27,85 grs. por 100 de cidos slidos obtenidos segn el procedimiento de S. H. Bertram. Aspecto culitativo-cuantitativo.Los cidos grasos slidos obtenidos segn S. H. Bertram, presentan las siguientes caractersticas: Punto de fusin Punto de s o l i d i f i c a c i n ndice de refraccin (n) ** Orado refractomtrico a 40 ndice de iodo Nmero de neutralizacin Peso molecular medio 56,25 - 56,75 54,25 1 , 4 4 1 5 24,0 1 , 6 1 208,3 269,3

El ndice de refraccin de los cidos slidos, aunque no detnitivo, permite hacer algunas consideraciones de tipo cuantitativo. El valor encontrado es de 1,4462 a 25C. Tanto e l cido palmtico como el esterico, presentan valores de 1,4434 y 1,4565, respectivamente, a 25 C. y la semisuma se aproxima bastante al resultado experimental. Podra pensarse que los cidos slidos, brasdico y ercico, con ndices de refraccin parecidos, estuvieran tambin presentes, pero e l bajo ndice de iodo de los cidos grasos slidos obtenidos experimentalmente, descarta esta posibilidad, ya que e l ndice de iodo de los mencionados cidos es de 75. Los puntos de fusin y solidificacin, e l ndice de refraccin y e l peso molecular medio, orientan en e l sentido de que, fundamentalmente, slo hay una mezcla de cidos palmtico y esterico. El punto de fusin obtenido de 56,25 56,75 corresponde al de la mezcla eutctica de partes iguales de palmtico y esterico, 55,5 56,5 difcilmente desdobable, que motiv por su constancia en las propiedades fsicas, se la conceptuase como una especie qumica, el cido datrico o margrico. Segn Abderhalden (9), la resolucin de una t a l mezcla de modo cuantitativo en sus componentes, puede realizarse en funcin del peso molecular, s i slo existen dos cidos, y por t a l mtodo indicamos ms adelante e l resultado conseguido. E. Twitchell (10) pudo comprobar que los puntos de fusin de los cidos grasos experimentaban grandes depresiones cuando se encontraban mezclados, descendiendo el esterico y palmtico de 69,3 y 62,6, respectivamente, a un punto de fusin constante de 55,5 56,5 C. W . Heintz (11) estudi, confinescuantitativos, tales depresiones en mezclas de porcentajes conocidos de cidos palmtico y esterico, construyendo una tabla de valores que permite calcular, en funcin del punto de fusin, la composicin de la mezcla. Valindonos de ella, en-

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contramos para el punto de fusin observado, 56,25C, una proporcin de 60 partes de cido palmitico por 40 partes de cido esterico. Si en lugar del punto de fusin tomamos como referencia e l de s o l i nificacin encontrado por nosotros para los cidos slidos, 54,25C, se obtiene un porcentaje de 60 partes de cido palmitico por 40 partes de cido esterico (12). El nmero de neutralizacin de los cidos slidos, sirvi tambin a Mangold y Marazza (13) para resolver el problema. Por este camino, obtuvimos un valor experimental de 55 partes de cido palmitico por 45 de cido esterico. El mtodo que O. Hehner y C. A. Mitchell (14) desarrollaron para desdoblar las mezclas de cido esterico y palmitico, fundado en u t i l i zar como medio de cristalizacin alcohol saturado de cido esterico, no conduce, segn Kreiss y Hafner (15), a resultados aceptables, porque las disoluciones alcohlicas de cido esterico, presentan fenmenos de sobresaturacin que determinan errores en los resultadosfinales,y W . Heintz (16) reconoci que las mezclas de cidos grasos no se dejaban descomponer por cristalizacin fraccionada, al extremo de que se las poda conceptuar como individualidades qumicas, con el consiguiente error. Anteriormente hemos indicado la posibilidad de u t i l i z a re l peso molecular medio de los cidos slidos para averiguar su composicin. El nmero de neutralizacin encontrado por nosotros para los cidos grasos slidos, 208,3, corresponde a un peso molecular medio de 269,3. Si consideramos ahora los pesos moleculares de los cidos palmitico y esterico, as como sus respectivos nmeros de neutralizacin, veremos:

P e s om o l e c u l a r Nmero d en e u t r a l i z a c i n cido e s t e r i c o Acido palmitico 2 8 4 , 2 ! ) 256,26 197,55 219,15

Que los valores alcanzados por nosotros corresponden sensiblemente a la media aritmtica de los nmeros de neutralizacin y peso molecular de los cidos palmitico y esterico. Media d e l peso molecular Media del nmero de neutralizacin 270,27 208,3

Quiere esto decir que los dos cidos, palmitico y esterico, se encuentran en una proporcin muy prxima a la relacin 1:1.

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ANALBS DEL JARDN BOTNICO DU MADRID

Podra objetarse que no hemos tomado en cuenta la posible presencia de cido arquico, abundantemente repartido en los aceites obtenidos de semilla. Tericamente, los elevados pesos moleculares del cido arquico (312) y del lignocerico (368) descartan esta posibilidad. Sin embargo, no hemos renunciado a su comprobacin experimental, u t i l i zando el mtodo de H. Kreiss y E. Roth (17). Siguiendo esta tcnica, no hemos obtenido ningn precipitado a partir de la segunda c r i s t a l i zacin, de los cidos grasos slidos, en alcohol de 90. Queda descartada tambin la posible existencia, en gran cantidad, de cidos saturados de cadena corta, pues el pequeo nmero de Reichert-Meissl, expresin cuantitativa aproximada del contenido en cidos saturados hasta e l trmino 12, nos afirma en la creencia de su poca significacin e importancia cuantitativo-cualitativa como constituyentes que prestasen a esta grasa una caracterstica particular. Podemos deducir que, en funcin de los valores experimentales hallados por el mtodo de Heintz y Mangold y Marazza, la mezcla de cidos grasos slidos est constituida verosmilmente por cido palmtico y esterico en la proporcin de 57,5 y 42,5 grs. por 100 respectivamente. Tales valores son, a nuestro modesto juicio, la expresin media ms aproximada a la realidad. cidos crasos lquidos El estudio cualitativo de la fraccin que contienen los denominados cidos grasos lquidos, se ha realizado tradicionalmente por tres mtodos fundamentales: El primero de e l l o s se debe a K. Hazura, y est fundado en oxidar con permauganato potsico en medio alcalino una disolucin de los cidos grasos lquidos, aislamiento posterior de los distintos oxicidos producidos, aprovechando su distinta solubilidad en agua (cido hexaoxiesterico) y en ter (cidos dioxi y tetraoxiestericos) y caracterizacin de ellos, bien por su punto de fusin y forma cristalina o por e l ndice de acetilo. El segundo mtodo se funda en la capacidadfijadorade halgeno que presentan tales cidos disueltos en un disolvente neutro (acetona, cloroformo, ter de petrleo), aislamiento de los derivados bromados por su distinta solubilidad en e l ter de petrleo y caracterizacin del derivado halogenado por su punto de fusin y contenido en bromo. Y, por ltimo, e l tercer mtodo, supone la destilacin en alto vacio, bien de los cidos grasos directamente o de sus respectivos esteres metlicos o e t l i c o s . Mtodo de K. Hazura.Los cidos lquidos necesarios se obtuvieron por el mtodo de Twitchell, y con e l l o s se procedi a la oxidacin s i guiendo paso a paso e l mtodo original de K. Hazura y partiendo de

ANALES DBL JARDN BOTNICO DH MADRID

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30 grs. de cidos lquidos. He aqu, ahora, las distintas fracciones obtenidas, fracciones que, fueron recristalizadas en alcohol de 96 y desecadas sobre plato poroso en vaco. 1 . a Fraccin.Tablillas rmbicas que se funden de 121,5 a 122C Corresponden al cido dioxiesterico obtenido por oxidacin del cido petroselinico en disolucin alcohlica con permanganato potsico, cido al que Vongerichten asign un punto de fusin de 122C (18). 2 . Fraccin.Cuerpo slido que se funde a 127 C. Parece corresponder al cido dioxiesterico que obtuvo Ponzio por oxidacin del cido oleico A 2 3 con permanganato al 1 por 100 (19). Le Suer obtuvo tambin el mismo cido (20). 3." Fraccin.Escamas blancas, que funden de 133C 135,7C. Este cido fue obtenido por Saytzew y le asign un punto de fusin de 136,5C (21). Emden l e asign un punto de fusin de 134C (22), pero segn Le Suer (23), funde de 131,5 C a 132 C. Nuestra fraccin corresponde indudablemente a este cido, cuyo punto de fusin ha sido tan debatido. 4.a Fraccin.El residuo de la purificacin etrea de los oxicidos insolubles en agua fue recristalizado en alcohol de 96, y obtuvimos un cuerpo slido, blanco, que fundi a 154 C. Este cuerpo corresponde al cido tetraoxiesterico que, Meyer y Ecker aislaron por cristalizacin en alcohol de 30, y se funda a 158C (24). Fahrion l e obtuvo partiendo del cido linoleico del aceite de semilla de algodn y se funde a 152 C (25). H. Matthes y L. Raht le asignan un punto de fusin de 156 (26). 5." Fraccin.Procede de las aguas defiltracinque se alcalinizaron, concentraron y, por ltimo, descompusieron con cido sulfrico en presencia de rojo Congo. La cantidad obtenida fue casi i n s i g n i f i cante, y fundi, previa cristalizacin, a 170C. Corresponde este punto de fusin al del cido insolinusnico, que Bauer y Hardegg (27) aislaron oxidando cido linolnico con permanganato potsico en solucin alcalina, y tambin al cido que K. Taufel, M. de Mingo y H. Thaler (28) obtuvieron con aceite de linaza y que se funda a 171,5 C. Critica de los resultados obtenidos.El ndice de iodo de 133,5 de los cidos lquidos muestra la presencia de cidos no saturados superiores al cido oleico. Los ndices de sulfociangeno y de iodo del aceite de semillas de naranja confirman ms este criterio al observar la marcada diferencia entre uno y otro. La presencia de distintos ismeros oleicos generadores de distintos cidos dioxiestericos en una misma grasa natural, no ha sido sealada, y aunque el estudio de la estructura de los glicridos ha conducido a la afirmacin de que la naturaleza produce fundamentalmente glicridos mixtos, no se ha sealado todava con argumentos convincentes e l hecho de presentarse los distintos ismeros de un mismo cido en la

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ANALBS DEL JARDN BOTNICO DB MADRID

grasa de una sola especie vegetal. A resolver este problema de extraordinario inters biolgico, han tendido los trabajos de Hildicht (29) y de Armstrong (30), quienes han elaborado nuevos mtodos de trabajo para e l estudio directo de la constitucin de los glicridos naturales. En la serie linoleica las dos formas alfa y beta del cido linoleico, han sido sealadas en especies vegetales distintas, a saber: e l Papaver Somniferus y la soja hispida, pero no en la misma grasa de una sola especie vegetal (31). Cmo explicarnos los resultados experimentales encontrados por nosotros? No hay ms posibilidad que admitir una emigracin del doble enlace en e l momento de verificarse la oxidacin en medio alcalino. Este c r i t e r i o est sustentado por Bauer y Krallis (32) al afirmar que, la emigracin del doble enlace es la nica posibilidad de explicar los fenmenos que se producen al oxidar e l cido oleico en medio alcalino con permanganato potsico y en medio cido por perhidrol. En e l mismo sentido abunda la opinin de una autoridad como T. P. Hildicht, y es definitiva como afirmatoria de esta hiptesis la observacin por I . Iwone y Suzuki (33) de cuatro estereoismeros de los cidos dioxi y dibromoestericos partiendo del mismo cido oleico y desdoblando los racmicos por medio de la estricnina. Este hecho no tiene ms explicacin que una emigracin en l a posicin del doble enlace, no solamente en los cidos de la serie oleica, sino en algunos de la linoleica. Tal fenmeno se ha comprobado. Vanse s i no los trabajos de Hawickenbrauch y Kaufmann (34). Nuestros resultados experimentales no tienen en la actualidad ms explicacin que la de admitir durante la oxidacin con permanganato potsico en medio alcalino una emigracin o salto del doble enlace. En e l aceite de semillas de naranja se encuentran tambin, como hemos visto, cidos doblemente no saturados, e l linoleico normal y pequesima cantidad de linolnico. Ntense las constantes analticas de los cidos lquidos estudiados: ndice de refraccin (n)D5 ndice de iodo Punto de fusin del hexabromuro 1 , 4 5 5 4 135,5 181,7"

Determinacin cuantitativa del cido o l e i c o y del cido linoleico. Nmero de Rodan, segn Kaufmann.Este nmero mide la cantidad de sulfociangeno, quefijauna grasa, expresada por la equivalencia de iodo correspondiente a 100 grs. de aqulla, y se ha verificado segn los Einheitliche. Untersuch.

ANALES DEL JARDN BOTNICO DB MADRID Resultados obtenidos: Aceite de semillas de naranja

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Peso de l ag r a s a 0,3113 f f r s . 0 , 2 6 3 8 0 , 2 5 5 8

Nmero de Rodan 61,91 61,15 60,77

Media

61,27

CIDOS GRASOS TOTALES

Peso de l o s c i d o s Nmero g r a s o st o t a l e s de Rodan 0,2444 grs. 0 , 2 5 0 8 0 , 2 3 4 3 63,15 63,16 63,18

Media

63,16

Con este dato y e l correspondiente ndice de iodo de la grasa, se puede calcular siguiendo a H. P. Kaufmann y W . O. Schubert (35) e l porcentaje de cido oleico y linoleico existentes en los cidos grasos totales. Para e l l o hacemos uso de la frmula consignada por aquellos investigadores: L= 1 , 1 0 4 (JZ Rh) O = l,113(2RhZ JZ) en la que L y O representan los cidos linoleico y oleico respectivamente, y J Z y Rh Z los ndices de iodo y sulfociangeno de la grasa. Sustituyendo en la frmula los valores 103,5 para el ndice de iodo y 61,2 para el nmero de rodan, se obtiene 46,69 grs. por 100 de cido linoleico y 21,03 grs. por 100 de cido oleico. Determinacin del cido UnoUnico.Para e l l o se ha procedido al aislamiento del derivado bromado correspondiente, segn los mtodos varias veces referidos.

14 Resultados:

ANALHS DBL JAKDIN BOTNICO DB /MADRID

e r i v a d o Nmero P e s od e c i d o sP e s od e ld e r i v a d o% de d g r a s o st o t a l e s hexabromado hexabromado de hexabromo 2,6150 grs. 2,7032 0 , 0 4 5 0 grs. 0 , 0 4 4 1 1 , 7 2 grs. 1 , 6 7 grs. / 0 1 , 6 3

El valor de 1,67 grs. por 100 se denomina ndice o nmero de hexabromuro. De l se puede pasar al porcentaje de cido linolnico multiplicando por el factor de transformacin 0,36, obteniendo as una cantidad de 0,612 grs. de cido linolnico por 100. Los valores numricos obtenidos para las fracciones cidos slidos y lquidos respectivamente, permiten establecer la composicin centesimal ms prxima a la realidad, que presentan los componentes cidos del aceite de semillas de naranja. Hela aqu: Acido l i u o l e i c o Acido l i u o l n i c o Acido o l e i c o cidos s l i d o s (Bertram) 46,69 g i s . / 0 0,612 > 21,03 27,85

Si a estos valores aadimos el correspondiente al residuo insaponificable, valor que es igual a 0,45 grs. por 100, obtendremos una cifra de 96,632 grs. La diferencia a ciento, corresponde a la glicerina, es decir, 3,368 grs. por 100. Ya en imprenta este trabajo, conocemos los resultado obtenidos por H. P. Kaufmann (Dissertation Ramadan 1931), sobre la composicin del aceite de semillas de naranja, que transcribimos: Rendimiento en grasa, 30 por 100. Contenido en cidos grasos, 88,9 grs. por 100. cidos slidos (Bertram), 29,1 grs. por 100. Constantes del aceite: VZ = 205; SZ = 1,74; JZ = 98,3; RhZ = 62,4; insaponificable = 0,478 grs. por 100; HexaZ = 3,16. Composicin de los cidos grasos: cidos saturados = 29,1 grs. por 100; cido oleico = 29,5 grs. por 100; cido linoleico = 40,5 grs. por 100; cido linolnico = 1 , 1 grs. por 100. Alcoholisis. Lo hasta ahora transcrito, permite formarse como una idea muy aproximada a la verdad, de la composicin cualitativo-cuantitativo del aceite que estudiamos. Sin embargo, se i n s i s t e en que e l camino ms prctico para el estudio de los componentes saturados y no saturados de una grasa o aceite, es precisamente, la destilacin fraccio-

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nada en vaco de los esteres metlicos obtenidos de la grasa natural sin necesidad de separarla antes en sus componentes slidos y lquidos. Por este mtodo, los resultados obtenidos por nosotros no pueden considerarse como halageos, ya que no se ha conseguido un resultado que se pudiera considerar como satisfactorio. 1 . a Fraccin. Se recogi l o que destil hasta 198C, lmite del pal mi tato de metilo. Se obtuvo una masa seinislida de color amarillo plido, que presenta las siguientes constantes: (n)?= 1 , 4 4 9 6 ndice de s a p o n i f i c a c i n

202,9

El ester metil palmtico, hierve a 198C a 15 m m . y tiene n ndice de refraccin a 45 de 1,4311 (48) y un ndice de saponificacin de 207,9. Parece como s i el destilado estuviera formado en su mayora por palmitato de metilo, junto a una pequea fraccin lquida. A fin de caracterizar ms escrupulosamente los componentes de esta fraccin, se procede a separarla en sus fracciones slida y lquida. Para e l l o se saponifica e l conjunto, beneficiando los cidos grasosprevia descomposicin con cido sulfricopor extraccin etrea. El residuo de destilar el ter, constituido por los cidos, se desdobla en slidos y lquidos por el mtodo de Twitchell. Valores obtenidos: Acmos slidos Punto de fusin Nmero de neutralizacin Peso molecular medio cidos lquidos ndice de iodo 53 61V 217 258

Las constantes de los cidos slidos corresponden sensiblemente a las del cido palmtico confirmando, pues, su presencia. La fraccin lquida presenta un ndice de iodo excesivamente bajo, que no permite adscribirlo a ningn cido no saturado existente en las sustancias grasas naturales. Ms bien habr que pensar en una impurificacin que determina e l descenso en e l ndice de iodo. 2 . a Fraccin.Constituida por l o que destila entre 198 y 2O7C a 15 mm. de mercurio: Eepresenta unos 14 grs. de un liquido de color amarillento que suministra los siguientes valores:

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ANALES DEL JARDN BOTNICO DB MADRID Iudice de refraccin a 21,5 Nmero de neutralizacin ndice de iodo Peso molecular medio 1 , 4 5 3 8 192,8 87,16 291

Esta fraccin debera estar constituida, lgicamente, por productos que contuviesen derivados del cido palmitico, ya que los puntos de ebullicin de los esteres metlicos de los cidos esterico, oleico y linoleico, oscilan entre 211 y 215C. a 15 m m . No obstante, algo ha destilado, y las constantes indican la presencia de compuestos no saturados, de una parte, ms otra slida que se deposita al enfriar el destilado a unos 20. En consecuencia, procedemos a fraccionar esta porcin recogiendo dos subfracciones que, por separado, se saponifican despus, determinando en cada una los componentes slidos y lquidos por e l ya mencionado mtodo de Twitchell. 1 . Stibfi-accin.Se recoge l o que destila entre 198 y 201 a 11 m m . de presin. Al cabo de cuatro das deposita una parte slida. ndice de iodo, 85,10, que corresponde al valor terico, de 85,8 del ester metil-oleico. Separada en sus componentes slidos y lquidos, seencuentian para los cidos slidos las siguientes caractersticas: Punto de fusin Nmero de neutralizacin Peso molecular medio 61 216,9 258,6

Estas constantes corresponden al cido palmitico, al que la bibliografa asigna las siguientes constantes: Punto de fusin Nmero de neutralizacin Peso molecular medio 62 218,9 256,3

2. Subfraccin.Comprende lo que destil entre 201 y 206 a 13,5 mm. Lquido de color amarillo claro, en el seno del cual se depos i t a un abundante precipitado blanco. Separada esta fraccin en los componentes slidos y lquidos, previa saponificacin, se obtuvo: cidos slidos Punto de fusin Nmero de neutralizacin Peso molecular medio 62,8 214,8 261,2

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1?

Sensiblemente, estas constantes corresponden a un cido anlogo al de la subfraccin anterior, algo impurificado. Agidos lquidos ndice de iodo 74,45

Si se piensa en que quiz no sea completa la separacin total de los cidos slidos, es probable que stos, al mezclarse con el oleico, determinen un descenso del ndice correspondiente al oleico. 3 . IVaccin.Comprende l o que destila entre 207 y 230 a 15 nim. de presin. Es una sustancia lquida,fluida,que a 19 s o l i d i f i c a casi por completo. A partir de 224 se desprenden productos gaseosos que pican fuertemente en los ojos y no se condensan, razn por la que no se rebasa la temperatura de 230. Analizada, presenta las siguientes constantes: ndice de s a p o n i f i c a c i n ndice de iodo 190,9 96,06

Tales valores indican la presencia de esteres de cidos no saturados al considerar los correspondientes tericos del ester metil-oleico y linoleato de metilo, que son, respectivamente, 85,8 y 173,2. El ndice de saponificacin de esta fraccin bruta no permite concluir consecuencias precisas, ya que los valores de los esteres metlicos de los cidos esterico, oleico y linoleico, destilables a esta temperatura, oscilan entre: Ester m e t i l e s t e r i c o Ester m e t i l o l e i c o Ester m e t i l l i n o l e i c o 181,86 189,34 190,65

y el valor encontrado no es diferencial para ninguno de ellos. Se impone, por l o tanto, una nueva rectificacin que, realizada, suministra las dos siguientes subfracciones: 1 . Subfraccin. Se recoge lo que destila entre 206 y 216 a 14,5 m m . Constituye una sustancia fundamentalmente slida, acompaada de una pequea parte lquida. Separada, previa saponificacin, en los componentes slidos y lquidos, se obtiene: cidos slidos Punto de fusin Nmero de neutralizacin Peso molecular medio 68* 197,1 284,6

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ANAL1S DHL JARDN BOTNICO D MADRID CIDOS LQUIDOS ndice de iodo 84,12

Los componentes slidos corresponden en sus constantes a los valores del cido esterico, cuyo nmero de neutralizacin y peso molecular medio son 197,3 y 284,3, respectivamente. La parte lquida no corresponde, por su ndice de iodo, a ninguna fraccin que pudiera adscribirse a los cidos oleico, linoleico o linolnico. 2. Subfraccin.Se recoge l o que destila entre 216 y e l tope de temperatura a 14,5 mm. de presin. Saponificada y desdoblada por e l mtodo de Twitchell, se obtienen los siguientes resultados: cidos slidos ' Punto de fusin Nmero de neutralizacin Peso molecular medio cidos lquidos ndice de iodo 108 68 196 286,2

La fraccin slida corresponde en sus constantes, sensiblemente, a las del cido esterico. La parte lquida, a una mezcla, indesdoblable por la vecindad en los puntos de ebullicin, de cidos oleico y linoleico; de aqu que el ndice de iodo se mueva entre los dos extremos de 90 y 181, de los cidos oleico y linoleico, respectivamente. Lo transcrito permite una visin de conjunto en lo que a la composicin cido-grasa se refiere, pero no es l o completa que "debiera para deducir conclusiones definitivas. Para alcanzar stas es preciso profundizar ms, y a estefin,realizamos e l desdoblamiento por la tcnica que describiremos a continuacin, junto con los resultados experimentales. Separacin de los componentes saturados y no saturados, por e l mtodo de bromacin de G r r l n y Janko.Los autores mencionados (36) han elaborado un rntodo en el que la fraccin no saturada se separa por destilacin de los esteres metlicos de los cidos no saturados bromados, pues e l punto de ebullicin de stos es, en igualdad de las dems condiciones, mucho ms alto que el del correspondiente cido saturado. El ester metil-bromo-esterico hierbe a 192 a 2 mm. de presin, y el el ester metil-esterico a 172 a la misma presin. Tericamente no se puede hacer al mtodo preconizado ninguna objecin; pero n la prctica los resultados conseguidos por nosotros, siguiendo exactamente las prescripciones de los autores mencionados, no permiten deducir una conclusin halagea en e l sentido de obtener una separacin absoluta de la parte saturada y de la que no l o es.

ANALR* DBL JARDN BOTNICO DB i t A D f t D

id

1 mtodo, para su realizacin, se divide en cuatro operaciones fundamentales: 1 . a Preparacin de los esteres metlicos. 2.* Bromacin. 3 . a Destilacin, y 4 . a Desbromacin de los esteres metlicos. Primer experimento.Partimos de 16 gramos de esteres metlicos preparados segn Haller. Estos se broman con 3,7 c. c. de bromo puro, obteniendo un peso de derivado bromado de 17,64 grs. Fraccionado ste en vaco, se obtuvieron las siguientes porciones: Destilacin Presin 705 mm. 11 7 7 T e m p e r a t u r a Producto destilado

112 113 Destila poco, s o l i d i f i c a n d o en parte con c o l o r pardo. 140 178 Muy poco, s l i d o ,c o l o r pardo dem, i d .

190 -195 dem, id.

Todas las fracciones recogidas presentan un intenso color pardo oscuro y olor a bromo, quedando en e l matraz un residuo casi negro y pastoso. Parece como s i hubiera habido una separacin de halgeno con descomposicin del producto, lo que imposibilita un trabajo posterior. Segundo experimento.Partimos de 20 gramos de esteres metlicos que se halogenan con 4,63 c. c. de bromo. Obtenemos 19,71 grs. de esteres bromados totales, perfectamente transparentes y de color caramelo, que destilamos en vacio. Destilacin Presin 2 mm. T e m p e r a t u r a Producto destilado

148149,5O Muy pequea cantidad, s o l i da, incolora. Se observa * descenso termomtrico. 174o177 Producto, s l i d o e incoloro. Producto: s l i d o mezclado a algo de liquido. Coloreado.

2 >

178#

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ANALES DEL JARDN BOTNICO DU MADRID

Rendimiento.19,71 grs. de derivacfo bromado proporcionan un peso de destilado total de 2,75 grs., o sea un 14 por 100 del rendimiento. Quedan en e l matraz de destilacin 16,38 grs. de residuo, l o que supone una prdida de 0,58 grs. La temperatura no ha rebasado los 178, porque al llegar a este punto, se inicia la descomposicin del contenido del matraz, desprendindose humos coloreados y pasando al colector una o dos gotas de lquido teido, correspondiente a la tercera fraccin, lo que indica se debe suspender la destilacin. A fin de comprobar s ie l destilado incoloro est constituido solamente por esteres de los cidos saturados slidos, l e saponificamos, descomponiendo despus con exceso de cido mineral y recogiendo en ter. Destilado ste, obtenemos 2,36 grs. de cidos grasos slidos, en los que procedemos a determinar el ndice de iodo. Io0,7018 grs. acs. gasos s l i d o s : ndice de iodo = 38,42 2.-0,4748 > > > =38,91 Como consecuencia del estudio de estos datos, debemos concluir que la fraccin considerada como saturada, no lo es en la realidad, puesto que lafijacinde halgeno demuestra, de manera indudable, el paso de componentes no saturados, cuya separacin por este camino no es lo precisa y segura que caba esperar, confirmando as e lc r i t e r i o sustentado, entre otros, por Kaufmann (50), quien asegura que el mtodo es laborioso y poco exacto para poderle considerar como de aplicacin general.

Conclusiones I) Se ha verificado una revisin general de las constantes f s i c o qumicas conocidas del aceite de semillas de naranja, corrigindolas en algunos casos y amplindolas en otros, con las nuevas adquisiciones cientficas en la qumica de las sustancias grasas. II) Se hanfijadopor primera vea las constantes o ndices analticos correspondientes a las fracciones de los cidos grasos slidos y cidos grasos lquidos de este aceite. III) Se ha determinado la composicin cuantitativa, ms aproximada a la realidad, de los cidos grasos slidos, y se hafijado,al mismo tiempo, e l porcentaje existente de stos en el aceite de semillas de naranja.

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IV) Se ha determinado por primera vez la proporcin centesimal de los cidos grasos oleico, linoleico y linolnico presentes en esta grasa. V) Se han obtenido distintos ismeros de los cidos dioxiestericos partiendo del mismo cido oleico natural, demostrando con e l l o la posibilidad de la emigracin o salto del doble enlace cuando el cido oleico se oxida en medio alcalino con permanganato potsico. VI) Se ha comprobado la dificultad de separar los componentes cidos, saturados y no saturados, del aceite de semillas de naranja por el mtodo de Grn y Janko. VII) Se ha confirmado la exactitud del mtodo de S. H. Bertram para la separacin y evaluacin de los cidos grasos slidos. U n i v e r s i d a dC e n t r a l . F a c u l t a d de Farmacia. L a b o r a t o r i o de A n l i s i s de Medicamentos O r g n i c o s . S e c c i n de Qumica d e lI n s t i t u t oN a c i o n a l de Sanidad. M a d r i d ,2 9 de Mayo de 1 9 4 2 .