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POLTICA EDITORIAL FITOPATOLOGA COLOMBIANA

La revista FITOPATOLOGA COLOMBIANA es una publicacin de la Asociacin Colombiana de Fitopatologa y Ciencias Afines ASCOLFI con circulacin semestral a nivel Nacional e Internacional. Est dirigida a todos los profesionales interesados en el estudio de las enfermedades de las plantas, su control y manejo (Ingenieros agrnomos, investigadores, fitopatlogos, profesores, tcnicos, extensionistas, etc) . Tambin, se incluye a otros profesionales de ciencias afines, tales como bilogos, microbilogos, botnicos, fitomejoradores, etc, y a entidades representativas del sector agropecuario, centros educativos y a los centros de investigacin nacionales e internacionales. Est orientada hacia la publicacin de artculos originales de carcter cientfico y tcnico de inters fitopatolgico. Incluye tambin notas cientficas de alta calidad, revisiones bibliogrficas de naturaleza crtica, cartas al editor sobre informacin publicada, opiniones e ideas, recomendaciones y resmenes de congresos. Los trabajos deben ser inditos. Aquellos presentados en congresos, simposios, conferencias o reuniones cientficas pueden ser aceptados para su publicacin. Las tesis de pregrado y postgrado, lo mismo que resultados de trabajos divulgados en forma preliminar de manera sucinta, en informes o avances tcnicos tambin pueden ser objeto de publicacin. Todas las opiniones, editoriales y artculos publicados en Fitopatologa Colombiana son responsabilidad del autor o autores y no reflejan necesariamente los puntos de vista de ASCOLFI o la de las instituciones a las cuales estn afiliados quienes los escriben, en otras palabras el autor es el nico responsable por los conceptos, ideas u opiniones emitidas en el trabajo. El Comit Editorial se reserva el derecho directo de aceptar o no las cartas, los artculos, notas y revisiones o de hacerlo indirectamente mediante su cuerpo de asesores cientficos. Los trabajos deben ser remitidos en original y dos copias, adems del disquete o disco compacto con el archivo en un procesador de texto (preferiblemente Word) al editor de la revista, Apartado Areo 5004 de Cali y debern ceirse a las Normas para la elaboracin de artculos instituidas por la Asociacin. En el caso de correcciones y modificaciones el editor devolver al autor el trabajo acompaado de las sugerencias y comentarios realizados por el grupo de asesores cientficos. El artculo corregido deber enviarse nuevamente en un plazo mximo de 30 das. Una fe de erratas podr eventualmente ser incluida en el siguiente nmero, para efectuar las rectificaciones necesarias. Los trabajos no aceptados para la publicacin sern devueltos a los autores a los siguientes 30 das contados a partir de la fecha de recepcin. Cargos por pgina impresa Teniendo en cuenta los altos costos que implica las publicaciones se ha considerado conveniente solicitar a los autores una contribucin razonable para llevar a feliz trmino el propsito de divulgar los resultados de la investigacin fitopatolgica en Colombia... Se ha estimado para socios activos que el valor por pgina impresa ser el equivalente en pesos de: U.S $25, 30, 35 segn contenga solamente texto, texto con ilustraciones en blanco y negro o texto con ilustraciones de color, respectivamente. El valor de los cargos estar sujeto a ajustes y no se definir hasta cuando el autor reciba para su revisin la prueba de impresin y su pago deber hacerse efectivo despus de la impresin del artculo en la revista. La tarifa tendr un descuento de U.S. $ 5 por pgina para aquellos autores que remitan el escrito segn las normas de publicacin de ASCOLFI y satisfactoriamente preparado para proceso electrnico del texto. Para no socios la contribucin ser de U.S $ 40, 45 y 50 segn se trate solamente de texto, texto con ilustraciones en blanco y negro o texto con ilustraciones de color, respectivamente. Para anticipar la estimacin de costos se debe tener en cuenta que por cada tres pginas tamao carta escritas a doble espacio, a razn de 12 caracteres por pulgada (12cpi), se obtienen tres pginas impresas en FITOPATOLOGIA COLOMBIANA. Los autores debern enviar con su artculo una carta personal o de la institucin, compaa o benefactor del proyecto para el cual trabajan responsabilizndose por el pago de la publicacin. La factura correspondiente se enviar a cada autor, institucin, compaa o benefactor del caso antes de publicarse el artculo. Una vez hecho efectivo el pago el autor recibir dos ejemplares de cortesa. Separatas No se suministrarn copias gratuitas. Se podrn preparar separatas al costo a peticin de los autores, segn un formato que debe diligenciarse al momento de regresar las prueba de impresin. Autorizacin para reproduccin de artculos. La autorizacin para la reproduccin, total o parcial, de los artculos publicados en la revista Fitopatologa Colombiana, se debe solicitar por escrito al editor.

FITOPATOLOGA COLOMBIANA
ISSN 0120-0143

VOLUMEN 35
JUNTA DIRECTIVA ASCOLFI 2009-2011 Principales Suplentes

NMERO 1

JUNIO 2011

CONTENIDO
Poltica Editorial ........................................................................... i

Presidencia Rodrigo O. Campo A. Vicepresidencia Benjamn Pineda L. Celsa Garca Secretara Gustavo Adolfo Prado Nancy Arciniegas Tesorera Juan Carlos ngel S. Cristian Norea Vocales Bertha Lucia Castro Gabriel Andrs Torres L. . Revisora Fiscal Jos Albeiro Arias Cristian Olaya Representantes Internacionales Francisco J. Morales Fernando Correa V. Gabriel Cadena Revista FITOPATOLOGA COLOMBIANA RGANO DE DIFUSIN DE LA ASOCIACIN COLOMBIANA DE FITOPATOLOGA Y CIENCIAS AFINES- ASCOLFI ISSN 01120-0143 Licencia de Min. Gobierno No 001808, Cali, Apartado Areo 5004, Nit. : 891 301.725-6 Sociedad sin nimo de lucro, Personera Jurdica 1097 de abril 1 de 1977 Editor Benjamn Pineda L, Ing. Agr. M Sc. b.pinedalopez@gmail.com COMIT EDITORIAL
Benjamn Pineda Lpez Ing .Agr. M Sc Fitopatologa Elizabeth lvarez C. Ing. Agr. Ph D Fitopatologa Francisco J. Morales G. Ing. Agr. Ph D Virologa Jorge I. Victoria K. Ing. Agr. Ph D Bacteriologa Rodrigo O. Campo A. Ing. Agr. Ph D Fitopatologa

Efecto del mildeo aerolado (Ramularia areola Atkinson) en el rendimiento de dos genotipos de algodn en el departamento de Crdoba Nelson E. Villarreal y Rodrigo O. Campo 1

Eficacia del tratamiento de semillas de frjol (Phaseolus vulgaris L.), sobre la erradicacin de microorganismos Claudia Nohemy Montoya Estrada y Jairo Castao Zapata 7

Evaluacin del potencial antagnico de bacterias aisladas de la rizsfera de papa criolla ( Solanum phureja) sobre Phytophthora infestans (Mont.) de Bary. David Granada, Gina F. Pasaje H., Eliana M. Zuluaga R., Felipe A. Gmez V., Carlos Pelez J. y E. Antoni Rueda L . 11 Evaluacin de la respuesta fitoalexnica en papa (Solanum tuberosum) y determinacin preliminar de priming en tomate (Solanum lycopersicum) David Granada, Jennifer Salguero, Walter Murillo, Carlos Pelez y E. Antoni Rueda... 15 Manejo integrado de la bacteriosis causada por Xanthomonas axonopodis Starr & Garcs en el cultivo de gulupa (Passiflora edulis Sims.) Eugenio Guerrero-Lpez, Luz Mery Velandia y Lilliana Hoyos-Carvajal.. 21 Manejo integrado del mildeo velloso (Peronospora sparsa Berkeley) de la rosa Nathali Lpez-Cardona y Jairo Castao Zapata.... 27 Fitopatologa Colombiana, normas para la elaboracin de artculos...... 33

Representante de publicidad Gabriel Robayo V., Ing Agr, M.Art Contacto Revista: Oficina Ascolfi, Km 1 Via al Penal Granja Corpoica C.I. Palmira, cel +57- 3164303079 Palmira - Valle del Cauca Colombia Apartado Areo 5004- Cali- Valle del Cauca -Colombia Correos electrnicos: ascolfi.colombia@gmail.com Pgina web:
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Publicacin Indexada por COLCIENCIAS en la Categora C del ndice Nacional de Publicaciones Seriadas Cientficas y Tecnolgicas de Colombia (Publindex). Referenciada internacionalmente por el ndice Latinoamericano de Publicaciones Cientficas y Tecnolgicas (Latindex).
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Editorial
Las plantas para defenderse de sus enemigos no pueden correr como nosotros o los animales, estn ancladas en el suelo con su sistema de races. No les queda otra alternativa que enfrentar al enemigo de pie y firmes porque tiene que vivir. Para hacerlo su sistema defensivo es diferente al de los miembros del reino animal, pero es efectivo y trasciende. Indudablemente, para que el sistema funcione debe incluir un subsistema de alertas tempranas que activen todos los mecanismo responsables de la defensa, segn la posible magnitud del ataque. En este orden de ideas, entendiendo los mecanismos del sistema defensivo es posible aplicarlos oportunamente para que la planta reacciones y neutralice la accin de los organismos patognicos de manera que el efecto de estos sobre la salud de las plantas sea menor y por ende se obtengan mayores rendimientos, siempre y cuando en los sistemas productivos se utilicen de manera integral las buenas prcticas agrcolas. Quiero, en esta nota, destacar dos artculos, relacionados con el sistema defensivo de las plantas, que aporta informacin til para comprender y aplicar los principios de la resistencia inducida. En uno de ellos se hace referencia al efecto de inductores en la produccin del estado Fisiolgico llamado Priming (an sin una palabra equivalente en espaol?) segn el cual las plantas se preparan, de acuerdo a los autores, para un posterior ataque por patgenos, insectos o en respuesta a estreses abiticos, sin todava desencadenar las respuestas de defensa celular y mostrando dicha activacin de manera ms fuerte y rpida que las no inducidas, solo hasta la llegada del estrs . En el otro, se evala el efecto de inductores de resistencia para el manejo integrado de la bacteriosis en el cultivo de la Gulupa, un frutal promisorio para los pequeos, medianos y grandes fruticultores colombianos Recomiendo a nuestros lectores la lectura de los artculos mencionados, si descuidar tambin los dems documentos del fascculo que contienen informacin relacionada con algodn, frijol, ornamentales y el potencial antagnico de bateras de la rizsfera de papa. Benjamn Pineda Lpez Editor Revista Fitopatologa Colombiana

2010 Fitopatologa Colombiana /Volumen 34 No2

EFECTO DEL MILDEO AEROLADO (Ramularia areola Atkinson) EN EL RENDIMIENTO DE DOS GENOTIPOS DE ALGODN EN EL DEPARTAMENTO DE CORDOBA*
Nelson E. Villarreal1 y Rodrigo O. Campo2
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Instituto Colombiano Agropecuario, Laboratorio de Diagnstico Fitosanitario CISA-Ceret 2 Universidad de Crdoba, Departamento de Ingeniera Agronmica y Desarrollo Rural

Correos electrnicos de contacto : nelson.villarreal @ica.gov.co ; rcampo@sinu.unicordoba.edu.co

*Artculo cientfico, recibido para publicacin el 09/02/2011; aceptado el 14/04/2011

RESUMEN
En el Departamento de Crdoba, Colombia, se evalu el efecto del mildeo aerolado, causado Ramularia areola Atkinson, en la produccin de fibra del algodonero, para lo cual se establecieron dos experimentos en la temporada 2004-2005, en el municipio de Ceret. El primero fue sembrado en septiembre 2004 (poca temprana) y el segundo a finales de octubre 2004 (poca tarda) en un diseo de bloques completos al azar en un arreglo de parcelas divididas, con cuatro repeticiones. Durante el estudio se utilizaron las variedades Delta Opal y Delta Pine 90 con y sin aplicacin de fungicida. Se realiz el estudio temporal de la severidad de la enfermedad y se estimaron las prdidas econmicas de la produccin. Las curvas de progreso de la enfermedad, en los dos experimentos, se ajustaron al modelo Gompertz con una tasa aparente de infeccin baja entre 0,029 y 0,032 unidades por da. La enfermedad afect significativamente los rendimientos cuando se sembr en la poca tarda, reducindolos en 18,46% en la variedad Delta Opal y en 10,56% en Delta Pine 90. El uso de fungicidas increment los rendimientos de la fibra en las dos pocas de siembra dando una tasa marginal de retorno (TMR) en la poca temprana de 14,50% en Delta Pine 90 y 16,65% en Delta Opal. En la poca tarda la TMR fue 50,59% para Delta Pine 90 y 133,17% para Delta Opal. Se concluye que el mildeo areolado afecta la produccin de la fibra, especialmente cuando se siembra tardamente, siendo importante establecer un plan de manejo de la enfermedad. Palabras claves: Gossypium hirsutum, enfermedades del algodonero, epidemiologa, prdidas

SUMMARY
Aerolate mildew (Ramularia areola Atkinson) disease effect in the yield of two cotton genotypes at Cordoba Department The influence of aerolate mildew disease on cotton yield was evaluated in two experiments on 2004-2005 crop seasons at Cerete, (Cordoba department of Colombia). The first trial was planting on September (normal planting date) and the second one on October (late planting date). The experiments were conducted using a random complete block in split plot design with four repetitions. In the treatments were: used the varieties Delta Opal and Delta Pine 90 with and without fungicides. The seed cotton yield was evaluate on the two central rows by each treatment and makes it an economic analysis. The disease progress curves were transformed and adjust to Gompertz`s model, using statistical program SAS, with apparent infection rate the 0.029 by days with fungicides and 0.032 without fungicides. The aerolate midew showed significant differences in the yield when was planting out of time on October causing yield loss the 18,46% in Delta Opal and 10,56% in Delta Pine 90, respectively. The fungicides use increment the seed cotton yield in the two planting date; where the marginal return rate TMR in the early date was 14,50% in Delta Pine 90 and 16,65% in Delta Opal. In the late planting date the TMR was 50.59% in Delta Pine 90 and 133,17% in Delta Opal. As a conclusion the aerolate mildew disease affect the seed cotton yield, specialty which it planting in late date Key words: Gossypium hirsutum, cotton diseases, epidemiology, yield loss

INTRODUCCIN
El cultivo del algodn en Colombia, ha sido incluido dentro de las polticas de gobierno en razn a la demanda de mano de obra que genera todo el ciclo vegetativo del cultivo (Cano, 2004). En el departamento de Crdoba el algodn se siembra principalmente en el Valle de Sin, en suelos aluviales generando 130 jornales por hectrea/ao y aportando al Producto Interno Bruto (PIB) departamental, aproximadamente 76 mil millones de pesos anuales segn el Comit Regional de la Cadena Productora Algodn Textil (CRC PAT, 2003). En los ltimos cinco aos ha preocupado a los agricultores, las incidencias tempranas de Ramularia areola Atkinson, a tal punto que algunos realizan hasta tres aplicaciones de fungicidas que representan un costo adicional equivalente a 150 Kg de algodn

semilla por hectrea (estimado con base a tres aplicaciones a $ 93.152 cada una a precios de 2005). Las aplicaciones de fungicidas en Crdoba no obedecen a trabajos realizados en la regin; sino con base en recomendaciones que hacen las casas comerciales de semillas tomadas de investigaciones hechas en otros pases como el Brasil. El hongo R. areola pertenece al orden Moniliales, familia Moniliaceae y presenta como Teliomorfo: Mycosphaerella areola (J. Ehrlich y F. A. Wolf) (Alexopoulos, 1996). La enfermedad es conocida como Ramularia, Mildeo areolado, Tizn escarchado. En condiciones de campo Ramularia areola, se manifiesta en tres fases distintas durante su ciclo. En la fase asexual o conidial el hongo se desarrolla sobre tejido vivo; la fase espermogonial ocurre en las hojas que caen al suelo y la fase sexual, las ascosporas, se desarrolla sobre los restos del cultivo tales
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como las hojas secas. Esta capacidad reproductiva, convierte a R. areola en un patgeno capaz de generar epidemias devastadoras en variedades susceptibles (Lamamoto, 2003). La enfermedad es favorecida por temperaturas entre 12 a 32 C, siendo la optima entre 22-26 C; humedad relativa mayor del 80% (Bell, 1981). El hongo se disemina a travs del viento, el agua de lluvia o de riego, por personas y maquinarias que transitan por el rea afectada segn la Federacin de Algodoneros (FEDERALGODON, 1980). Los sntomas tpicos de la enfermedad se caracterizan por presentar crecimiento blanquecino o amarillento del hongo sobre el envs de las hojas, los cuales producen una escarcha con apariencia harinosa. Las manchas son angulares y delimitadas por las venas de las hojas. Observadas desde arriba las lesiones presentan coloracin verde brillante a verde amarillento y generalmente se 1

observa una capa blanquecina tpica en el envs de las hojas afectadas. En las brcteas que recubren las cpsulas se pueden observar lesiones similares (Blank, 1953; Araujo, 2000). En el Brasil, el Mildeo Aerolado o mancha Ramularia es considerada de importancia econmica al manifestarse en la fase vegetativa de la planta en las nuevas variedades cultivadas (EMBRAPA, 2000). La enfermedad ha ocasionado defoliaciones precoces en los tercios inferiores y medios de la planta y como consecuencia se presenta una apertura prematura de cpsulas, y reducciones de la productividad hasta del 35%(Araujo, 2000). El manejo de la enfermedad en Brasil se realiza con aplicaciones de fungicidas del grupo de los bencimidazoles, triazoles y estrobilurinas y se inician los controles cuando la enfermedad alcanza a afectar un 25% del rea foliar en el tercio inferior de las plantas (Andrade et al., 1999; Cassetari y Machado, 2005; Prade et al., 2000). En Argentina el Instituto Nacional de Tecnologa Agropecuaria (INTA, 2004) recomienda tratamientos qumicos foliares mediante el uso de fungicidas sistmicos, siempre que la enfermedad ataque antes de la apertura de capsulas y con cpsulas verdes todava en desarrollo iniciando las aspersiones al follaje tan pronto se observen los sntomas en el cultivo. La segunda aspersin, si fuera necesario, se recomienda efectuarla dos semanas despus de la primera. En cambio en la India el National centre for integrated pest management(NCIPM, por sus siglas en Ingls) recomienda un manejo integrado con la remocin y quema de residuos de cosecha; rotar el cultivo con cereales, utilizar variedades resistentes en las zonas endmicas y aplicaciones foliares con fungicidas a base de sulfuro, benomil o carbendazim (NCIPM, 2004). En Colombia, la Federacin Nacional de Algodoneros (1980) recomienda el tratamiento de semillas, fertilizacin adecuada y eliminacin de residuos. En Crdoba no se han realizado estudios epidemiolgicos que orienten al agricultor para el manejo de la enfermedad, lo que se hace ms evidente con el ingreso de nuevos genotipos de algodn. Debido a lo anterior, se plante evaluar los niveles de dao ocasionados por R. areola en el cultivo del algodonero en el Valle del Sin Medio a partir de la etapa de prefloracin, y relacionar la incidencia y severidad del dad del Mildeo aerolado con la produccin y la rentabilidad.

MATERIALES Y MTODOS
El trabajo se realiz en condiciones de campo en predios del ICA-CISA ubicado en el retiro de los Indios, Ceret a 8 56 25 de Latitud Norte 75 49 07 de Longitud Oeste, a 1 4 msnm, con 28C de temperatura promedio; una precipitacin anual promedio de 1.200 mm y el 80% de humedad relativa. 2

Se establecieron dos experimentos, uno en poca temprana (de finales de Agosto a finales de Septiembre) y el otro en poca tarda (de finales de Septiembre a finales de Octubre) de la temporada algodonera de los aos 2004-2005. Cada experimento se estableci en un diseo de bloques completos al azar con arreglo en parcelas divididas, con cuatro repeticiones. En las parcelas principales se establecieron las variedades Delta Opal (DO) y Delta Pine 90 (90) y en las subparcelas los tratamientos con fungicidas (T) y sin fungicidas (NT). Las subparcelas constaron de cuatro surcos de cinco metros de largo, las cuales se sembraron en forma manual con una densidad de 55 mil plantas/hectrea para la poca temprana y de 99 mil plantas /hectrea para la poca tarda. Las labores agronmicas fueron las mismas que utiliza el agricultor en Crdoba. El efecto de la R. areola en cada variedad se determin con el mtodo de parcela experimental comparando parcelas protegidas con fungicidas y parcelas no protegidas (Campbell y Madden, 1990). Las parcelas protegidas con fungicida fueron asperjadas cada tres semanas con Carbendazim en una dosis de 400cm3 de producto comercial/ hectrea (200g de ia/ha) a partir de los 40 das despus de la germinacin (ddg); para un total de cinco aplicaciones en la primera poca y cuatro en la segunda poca. En los dos surcos centrales de cada subparcela se marcaron cinco plantas a las cuales semanalmente se les cuantific la severidad de la enfermedad con base a porcentaje del rea foliar afectada en cada planta, empleando la escala de Horrsfall y Barrat (Osada y Mora, 1997). Con los datos de severidad se construyeron curvas de progreso de la enfermedad, se estim la tasa aparente de infeccin (r), la mxima severidad (Y max) y el rea bajo la curva de la enfermedad (ABCPE). Las curvas de progreso se ajustaron a los modelos Exponencial, Monomolecular, Logstico y Gompertz, usndose el programa estadstico SAS. La seleccin de modelo que explicara en mejor forma la epidemia, se hizo con base al que present mayor coeficiente de determinacin (R2), la menor desviacin estndar de la tasa aparente de infeccin (r), el menor cuadrado medio del error y el menor residuo del error estndar (Cambell y Madden, 1990). El efecto de la enfermedad en la produccin se estim por hectrea con base al peso de las motas obtenidas en los dos surcos centrales de cada parcela. Se realiz anlisis de varianza por experimento, por poca de siembra y un anlisis combinado entre pocas de siembra, al rea bajo la curva de progreso de la enfermedad ABCPE y a la produccin. Adems, se hizo la comparacin de medias empleando la prueba de Duncan (P=0,05) a travs del programa estadstico SAS.
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En cada experimento se realiz un anlisis econmico determinando la rentabilidad de cada tratamiento mediante el mtodo del presupuesto parcial y dominancia marginal (CIMMYT, 1988). Los costos de produccin y rentabilidad de los tratamientos fueron ajustados a precios de 2005.

RESULTADOS Y DISCUSIN
El Mildeo aerolado se present epidmicamente en los dos experimentos. Los sntomas iniciales fueron manchas foliares, azuladas de 0,5 mm de dimetro en el envs de las hojas. La enfermedad progres de las hojas bajeras del tercio inferior hacia arriba y de las hojas internas hacia las externas. El periodo transcurrido desde la aparicin de manchas azules hasta formar los primeros conidiforos (crecimiento blanquecino algodonoso) en el envs de las hojas, oscil entre 25 y 28 das. Anlisis de la Epidemia poca temprana. La aplicacin de fungicidas influy en el desarrollo de la epidemia (Figura 1a). En las variedades Delta Opal y Delta Pine 90 no tratadas con fungicidas, la enfermedad se inici 60 das despus de germinacin (ddg), en los comienzos de la produccin de flores y cpsulas, comenzando la fase epidmica en la poca de mayor produccin de cpsulas (70 ddg); mientras que en las variedades protegidas los primeros sntomas se observaron en etapa de mxima produccin de cpsulas, 70 ddg, y la epidemia se inici en la etapa de produccin de cpsulas maduras en los tercios inferiores, a los 92 ddg. La mxima severidad de la enfermedad se alcanz una severidad del 50% a los 137 ddg (etapa de apertura de primeras cpsulas) en las variedades no protegidas y del 34% en Delta Opal y 25% en Delta Pine 90, protegidas. El rea de progreso de la enfermedad bajo la curva (ABCPE) fue mayor para Delta Opal cuando no se protegi con respecto al Delta Opal tratado; igualmente fue mayor en Delta Pine 90 no protegido con respecto a la tratada con fungicida. El anlisis de varianza para la variable ABCPE mostr diferencias altamente significativas entre las variedades (P=0,01), siendo la variedad Delta Pine 90 la menos afectada. Esta variable tambin present alta significancia al comparar el efecto del fungicida, sin tener en cuenta la variedad, en el desarrollo de la enfermedad, son ms sanas las plantas tratadas con fungicidas con un ABCPE de 557 unidades; mientras que las no tratadas presentan un ABCPE de 1613 unidades. La tasas aparentes de infeccin ajustadas al modelo de Gompertz (rG) fueron bajas tanto en las variedades tratadas con fungicidas como en las no tratadas; siendo para Delta Opal tratada 0,027, Delta Opal no

tratada 0,032; Delta Pine tratada 0,023 y Delta Pine no tratada 0,029. Esto indica que el desarrollo de Ramularia en las dos variedades present una baja velocidad en el progreso de la enfermedad. poca tarda. La aplicacin del fungicida influy en el desarrollo de la epidemia (Figura 1b). En las variedades Delta Opal y Delta Pine 90 no tratadas con fungicidas los primeros sntomas de la enfermedad se observaron a los 54 ddg (Etapa de floracin y cpsulas pequeas en el tercio inferior) inicindose la fase epidmica a los 70 ddg (mayor produccin de cpsulas); mientras que, cuando las variedades fueron protegidas los primeros sntomas se presentaron a los 54 ddg (etapa de mxima produccin de cpsulas) y la epidemia se inici a los 88 ddg (etapa de produccin con cpsulas maduras en el tercio inferior). La mxima severidad de la enfermedad se alcanz a los 100 ddg (etapa de apertura de primeras cpsulas) en las variedades no protegidas con el fungicida con una severidad del 41,1% en Delta Opal y 42,1% en Delta Pine 90. En las variedades tratadas con el fungicida la mxima severidad se alcanz a los 126 ddg con severidad de 21,2% en Delta Opal y 29,3% en Delta Pine 90. El rea bajo la curva de progreso de la enfermedad, ABCPE, fue significativamente mayor en las variedades no protegidas con un promedio de 1500 unidades; mientras que, cuando se protegi con fungicida la variedad Delta Opal redujo el rea foliar afectada en 49% y la Delta Pine en 57%. El anlisis de varianza para la variable ABCPE mostr diferencias altamente significativas entre las variedades (P=0,01), siendo la variedad Delta Pine 90 la menos afectada. Esta variable tambin present alta significancia al comparar el efecto del fungicida, sin tener en cuenta la variedad, en el desarrollo de la enfermedad, siendo menos afectadas las plantas tratadas con fungicida con un ABCPE de 816 unidades mientras que las no tratadas presentaron un ABCPE de 1.521 unidades. El anlisis de varianza de la variable ABCPE mostr diferencias altamente significativas entre variedades y entre tratamientos. La prueba de Duncan al 5% de significancia mostr que hubo diferencias entre los tratamientos y entre las variedades, siendo la ms tolerante a R. areola la Delta Opal. Las tasas aparentes de infeccin ajustadas al modelo de Gompertz (rG) fueron bajas tanto en las variedades tratadas con fungicida como las no tratadas. Las tasas de Delta Opal y Delta Pine tratadas fueron de 0,021 y 0,022, respectivamente, mientras que para las mismas variedades no tratadas fueron del 0,024. Esto indica que la epidemia en las dos variedades tuvo una baja velocidad y desarrollo.

La curva de progreso de la epidemia en la poca temprana (Septiembre 17) muestra que la enfermedad se inici a partir de los 60 das despus de germinado (ddg), mientras que, en la poca de siembra tarda (Octubre 28) inici a partir de los 47 ddg . Esta diferencia de 17 das es importante para explicar prdidas en la produccin ya que trabajos realizados en Brasil han demostrado que la enfermedad es limitante si se presenta antes del desarrollo de las cpsulas de algodn (Araujo, 2000). La severidad de la enfermedad en la poca temprana, en todos los tratamientos a los 80 ddg (produccin de cpsulas) no super el 10%; caso contrario, en la poca tarda donde se observ que las variedades no tratadas con fungicida presentaron severidades de 12 y 18% en Delta Opal y Delta Pine

90 , respectivamente, siendo considerada esta la fase crtica en la cual se define la produccin. El desarrollo de la epidemia tuvo relacin con el dficit hdrico, manifestndose en la poca temprana a los 70 ddg, momento en la cual finalizaron las lluvias. En la poca tarda, la sequa se inici a los 20 ddg, por lo cual el Mildeo areolado se manifest ms temprano, 44 ddg (Figura 1). Estos resultados concuerdan con los trabajos de Lamamoto (2003) quien encontr que la enfermedad es favorecida por bajas precipitaciones y alta humedad relativas. En relacin a la resistencia de las variedades y al efecto de carbendazim sobre R. areola se concluye en que en ambas pocas de siembra hubo mayor porcentaje de severidad en las variedades no tratadas y que la

Anlisis de la poca de siembra

Figura 1. Curvas de desarrollo del Mildeo aerolado en algodn en las variedades Delta Opal y DP 90 tratadas con carbendazim y sin tratar. a. poca de siembra temprana (Septiembre de 2004) b. poca de siembra tarda (Octubre de 2004).
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variedad Delta Pine 90 fue la ms afectada presentando respuesta positiva al tratamiento con el fungicida. Produccin poca Temprana. El anlisis de varianza no mostr diferencia significativa entre los tratamientos ni entre variedades. Sin embargo, al compararse las variedades no tratadas (NT) con las tratadas con el fungicida (T), en stas ltimas se not un incremento en el rendimiento de algodn semilla, siendo para la variedad Delta Opal de 173 kg/ha y en la variedad Delta Pine 90 de 168 kg/ha. La ms productiva fue la Delta Opal con 2.803 Kg de algodn semilla/ha, superando a la Delta Pine 90 en 26,14%. poca tarda. El anlisis de varianza mostr diferencia significativa entre los tratamientos; indicando que la enfermedad afect significativamente los rendimientos de algodn semilla. La prueba de Duncan (P 0,05) indic que hubo diferencias significativas entre variedades tanto en las tratadas con el fungicida como en las no tratadas. La enfermedad afect significativamente, los rendimientos causando prdidas de 548 Kg de algodn semilla/ha (18,46%) en Delta Opal y de 250 Kg de algodn semilla /ha (10,56%) en Delta Pine 90. Anlisis Combinado Los rendimientos de algodn semilla no fueron afectados por la poca de siembra, pero si por la presencia del Mildeo aerolado , permitiendo los mayores rendimientos en las dos variedades evaluadas cuando se trataron con fungicida. La severidad de la enfermedad medida como ABCPE present diferencia altamente significativa entre variedades, tratamientos, poca de siembra y entre las interacciones variedad x tratamiento y tratamiento x poca de siembra. La prueba de Duncan (P 0,05) mostr diferencia altamente significativa entre variedades siendo Delta Opal la de mayor rea afectada con 1.185 unidades, superando a Delta Pine 90 en 116 unidades. Anlisis Econmico En la poca normal de siembra los tratamientos con el fungicida fueron los de mayor eficiencia presentando una tasa marginal de retorno TMR en la variedad Delta Opal de 16,65% y en Delta Pine 90 de 14,50% (Tabla 1). En la poca tarda, el comportamiento de las variedades protegidas con el fungicida permiti altas TMR siendo para Delta Opal de 133,17% y para la Delta Pine 90 de 50,59% (Tabla 2), lo cual indica que cuando se siembra el algodn tardamente la enfermedad afecta econ micamente la produccin tenindose que establecer medidas de manejo preventivas. 4

Tabla 1. Anlisis marginal en el manejo de Ramularia areola Atkinson para la poca de siembra temprana. Tratamiento TCV ($/ha) CM($/ha) TCVSTTCVAT BN ($/ha) TRM (%) BNM($/ha) (BNM/CM) BNST-BNAT x100

Delta Pine 90 sin aplicacin de 945.970,03 267.275,91 carbendazin Delta Pine 90 con aplicacin de 1.181.372,66 235.402,63 301.409,27 34.133,36 14,49999518 carbendazin Delta Opal sin aplicacin de 130.592,97 124.549,31 875.659,97 574.250,7 461,062932 carbendazin Delta Opal con aplicacin de 1.542.932,27 237.010,3 915.129,67 39.469,7 16,.65315811 carbendazin TCV: TotCostos Variables, CM: Costo Marginal, BN: Beneficio Neto, BNM: Beneficio Neto Marginal, TRM: Tasa de Retorno Marginal Tabla 2. Anlisis marginal en el manejo de Ramularia areola Atkinson para la poca de siembra tarda CM($/Ha) TRM (%) BNM($/Ha) Tratamiento TCV($/Ha) TCVSTBN ($/Ha) (BNM/CM) x BNST-BNAT TCVAT 100 Delta Pine 90 sin aplicacin de 948.990,69 135.007,25 carbendazin Delta Pine 90 con aplicacin de 1.214.598,18 265.607,93 269.399,32 134.392,07 50,5979132 carbendazin Delta Opal sin aplicacin de 1.230.980,42 16.381,81 338.009,51 68.610,19 418,819349 carbendazin Delta Opal con aplicacin de 1607139,06 376.338,8 839.174,68 501.165,17 133,168616 carbendazin TCV: Total Costos Variables, CM: Costo Marginal, BN: Beneficio Neto, BNM: Beneficio Neto Marginal, TRM: Tasa de Retorno Marginal

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS CONCLUSIONES

En ambas pocas de siembra analizadas las variedades que no fueron tratados con fungicida presentaron mayor severidad de la Mildeo areolado, mostrando diferencias estadsticas significativas con respecto a las variedades tratadas. El modelo de Gompertz result ser el ms apropiado para describir el progreso y desarrollo del mildeo areolado (Ramularia areola Atkinson), en los distintos tratamientos y pocas estudiadas Los rendimientos en trminos de algodn semilla por hectrea no presentaron diferencias estadsticas significativas en la poca temprana. En la tarda la variedad Delta Pine 90 no tratada, estadsticamente y econmicamente, mostr que requiere de un manejo del mildeo areolado pues fue la ms afectada (reduccin del rendimiento en 10,56%) El anlisis combinado, mostr que la variedad Delta Opal present los mayores rendimientos (P =,001) de algodn semilla, no requiriendo control contra el mildeo areolado en ninguna de las pocas estudiadas y superando a la variedad Delta Pine 90 en 592,4 Kg. Alexopoulos, C. J., Mins, C.W y Blackwell, M. 1996. Introductory Mycology. John Willey & Sons, Inc. 4 ed. New York. 869 p. Andrade, P. M. C, Cassetari, D y Machado, A.Q. 1999. Controle qumico de doenas em algodo no Mato Grosso. Fitopatologia Brasileira, Braslia, v. 24, p. 262, (Abstract). Araujo, A. E. 2000. Doenas da cultura do algodoeiro no cerrado. En: Congresso internacional do algodo; Seminrio estadual do algodo, 5., Cuiab. Palestras. 2000. p.189-195. Bell, A. A. 1981. Aerolate Mildew. In: Watkins, G.M. Compendium of Cotton Diseases. Fortaleza, Vol 2, No 3. p 89 Blank, L. M. 1953. The Leaf Spots of Cotton Plants, En: Plant Diseases, Yearbook of Agriculture, United States Department of Agriculture. 317 p Cano, C. 2004. Memorias 2002-2003. Manejo Social del Campo. Ministerio de Agricultura y Desarrollo Rural. Imprenta Nacional de Colombia. p 126-128 Cambell, C. L. y Madden, L.V. 1990. Introduction to plant disease epidemiology. New York: John Wiley & Sons. pp 129202 Cassetari, N. y Machado A. 2005 Doenas do algodoeiro: diagnose e controle. Vrzea Grande MT. Universidade de Vrzea Grande e Universidade Federal de Mato Grosso.

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ASOCIACIN COLOMBIANA DE FITOPATOLOGIA Y CIENCIAS AFINES, ASCOLFI

XXX Congreso Colombiano y XVI Latinoamericano de Fitopatologa

Bogot (Colombia), Hotel Crowne Plaza Tequendama del 16 al 19 de agosto de 2011.

Actividad conjunta con la ALF, Asociacin Latinoamericana de Fitopatologa

Informes Sede Congreso http://concolfi.com/ ascolfi2011@gmail.com

Sede ASCOLFI www.ascolficolombia.org ascolfi.colombia@gmail.com Cel. +57- 316-4303079

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EFICACIA DEL TRATAMIENTO DE SEMILLAS DE FRJOL (Phaseolus vulgaris L.) SOBRE LA ERRADICACIN DE MICROORGANISMOS*
Claudia Nohemy Montoya Estrada y Jairo Castao Zapata Facultad de Ciencias Agropecuarias, Universidad de Caldas Correos electrnicos de contacto: claudia_montoyaestrada@hotmail.com; jairo.castano_z@ucaldas.edu.co
*Artculo Cientfico, recibido para publicacin el 13/02/2011; aceptado el 14/04/2011

RESUMEN
La semilla es el principal medio de dispersin de patgenos a grandes distancias. Mucha de la semilla de frijol utilizada por los agricultores de escasos recursos econmicos es de mala calidad y transporta fitopatgenos que inciden sobre su germinacin. Por esta razn se hace necesario implementar tcticas efectivas para producir semilla de buena calidad. Esta investigacin tuvo como objetivo principal erradicar los microorganismos presentes en semillas de frijol mediante productos con diferente mecanismo de accin, como Benomil, Captan, Carboxin+Captan y Burkholderia cepacia. Se utiliz agar-agua al 2%. Se sembraron cinco semillas por caja Petri, con cinco replicas, para un total de 25 semillas por tratamiento, en un diseo de bloques completamente al azar. Por cada producto se emplearon cuatro dosis. Las semillas se incubaron entre 20 y 25C, durante 14 das. Despus de siete das, Benomil en dosis de 100, 200 y 400 ppm, permiti una germinacin superior al 90% y se mantuvo estable despus los 14 das. Despus de Benomil, la mezcla de Carboxin+Captan en las mismas dosis, fue el mejor tratamiento, obtenindose una germinacin entre 80 y 92%. La germinacin en los testigos oscil entre el 48 y 68%. Benomil en dosis de 200 ppm, erradic totalmente los hongos presentes en las semillas an despus de 14 das, contrastando con el testigo que a los siete das tena una incidencia del 100%. Se identificaron cinco gneros de hongos: Fusarium, Penicillium, Rhizopus, Rhizoctonia y Alternaria y, dos de bacterias: Xanthomonas y Bacillus. Fusarium, fue el microorganismo ms frecuente. El fungicida Benomil, es una alternativa eficaz para la erradicacin de microorganismos presentes en semillas de frjol. Palabras clave: leguminosas, hongos, bacterias, fungicidas, eliminacin

SUMMARY
Efficacy of seed treatment of bean (Phaseolus vulgaris L.) on the eradication of microorganisms The seed is the main dissemination mean of pathogens to long distances. Most of the bean seed used by farmers of scarce economic resources is of low quality and transport plant pathogens that affect its germination. For this reason it is necessary to implement effective practices to produce good quality of seed. This research had as main objective to eradicate those microorganisms presented in seeds of bean through products with different mechanism of action, such as Benomil, Captan, Carboxin+Captan and Burkholderia cepacia. It was used agarwater at 2%, plating five seeds per Petri dish, with five replications and 25 seeds per treatment, in a completely randomized block design. For each product were used four doses. The seeds were incubated between 20 and 25C, during 14 days. After 7 days, Benomil at 100, 200 and 400 ppm, allowed germination higher than 90% and kept up stable after 14 days. After Benomil, the mixture of Carboxin+Captan at the same doses was the best treatment, with germination between 80 and 92%. The germination in the controls ranged between 48 and 68%. Benomil at 200 ppm, totally eradicated the fungi presented in the seeds even after 14 days, contrarily with the control, in which after 7 days reached an incidence of 100% of fungi. It was ident ified five genera of fungi: Fusarium, Penicillium, Rhizopus, Rhizoctonia and Alternaria and, two of bacteria: Xanthomonas and Bacillus. Fusarium, was the most frequent microorganism. Fungicides, such as Benomil, offer an effective alternative to eradicate microorganisms in seeds of bean. Key words: legumes, fungi, bacteria, fungicides, elimination

INTRODUCCIN
En Colombia predomina el uso de variedades criollas de frjol (Phaseolus vulgaris L.), tales como el Cargamanto, del cual se han identificado muchos tipos: C. blanco, C. comn, C. ombligo amarillo, C. rojo, C. gigante, entre otros. El frjol Cargamanto es cultivado en condiciones de clima fro y clima fro moderado en la subregin del Oriente antioqueo. Estas variedades son de hbito voluble o de enredadera (hbito IV) (Arias et al., 2007). Una caracterstica desfavorable de los frjoles tipo Cargamanto es su susceptibilidad a enfermedades (Arias et al., 2007). La Antracnosis, causada por el hongo Glomerella lindemuthiana Shear [anamorfo, Colletotrichum lindemuthianum (Sacc. & Magnus) Lams.-Scrib], es probablemente la enfermedad ms importante de P. vulgaris y puede

llegar a causar prdidas en rendimiento hasta del 95%. Su severidad induce a muchos agricultores a la utilizacin de varios fungicidas, lo cual representa altos costos en la produccin, adems de la contaminacin ambiental (Santana y Mahuku, 2002). Los hongos causan el mayor nmero de enfermedades en plantas y ocurren con mayor frecuencia en semillas que los virus, las bacterias, o nematodos (Castao-Zapata y Zepeda, 1987). Por lo tanto, las semillas de frjol pueden ser un medio ideal para el transporte de inculo de patgenos de origen fungoso, viral, bacterial o viral e inclusive de nematodos. Por ejemplo, Richardson (1979), reporta 32 hongos, 12 virus, siete bacterias y un nematodo, que se transmiten a travs de la semilla. Las semillas que portan hongos patognicos son importantes para la agricultura debido
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a que: pierden viabilidad, lo que resulta en una disminucin significante de la germinacin; pueden portar inculo, el cual bajo condiciones apropiadas puede iniciar una epidemia; pueden introducir patgenos exticos, no obstante que son tratadas con agroqumicos; pueden portar patgenos viables resultando en cualquiera de las situaciones anteriores; y el ataque de la semilla por diversos microorganismos antes de la cosecha puede causar una reduccin en la calidad y rendimiento del grano (Baker, 1972). La semilla se convierte de esta manera en el principal medio de dispersin de patgenos a grandes distancias, incluyendo pases y continentes. Algunos hongos causantes de Antracnosis, como la del frjol, se dispersan principalmente por semilla, por lo que el uso de semilla de calidad, puede conducir a la au7

sencia de esta enfermedad, aun cuando la variedad sea susceptible (Villalobos y Hernndez, s. f.). En una semilla de mala calidad, se pueden transportar hongos habitantes del suelo, que una vez introducidos al campo, son muy difciles de manejar, como por ejemplo, Fusarium oxysporum Schlechtend.:Fr, Sclerotium rolfsii Sacc, Sclerotinia sclerotiorum (Lib.) de Bary, Macrophomina phaseolina (Tassi) Goidanich y Rhizoctonia solani Khn. La sobrevivencia de los patgenos que atacan al frijol y se transmiten por semilla como Phaeoisariopsis griseola (Sacc.) Ferrais, Glomerella lindemuthiana Shear, Thanatephorus cucumeris (A. B. Frank) Donk (anamarfo, Rhizoctonia solani Khn), Xanthomonas campestris pv. phaseoli Pammel, y Pseudomonas syringae pv.. phaseolicola Van Hall, pueden permanecer en el suelo o residuos de cosecha hasta tres aos (Jara, 2006; Godoy, 2007). Se sabe que para Thanatephorus cucumeris (A. B. Frank) Donk, la semilla es un medio muy efectivo de sobrevivencia (hasta dos aos) y fuente de inculo para la parte area (Schwartz y Glvez, 1980). Groenewold et al. (2003), encontraron que patgenos como: Rhizoctonia solani Khn, Sclerotium rolfsii Sacc, Fusarium Link ex Grey., Colletotrichum lindemuthianum (Sacc. & Magnus) Briosi & Cavara, Uromyces appendiculatus (Pers:Pers) Unger, Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli Smith, Pseudomonas syringae pv. phaseolicola Van Hall y el virus del Mosaico comn del frijol, BCMV, (Stewart & Reddick) Pierce, constituyen un problema de gran impacto en la produccin de semilla de frjol de calidad. Enfermedades bacteriales, como el Tizn de halo (Pseudomonas syringae pv. phaseolicola Van Hall), la Mancha parda ( Pseudomonas syringae pv. syringae Van Hall), el Tizn comn (Xanthomonas campestris pv. phaseoli Smith), y la Marchitez (Curtobacterium flaccumfaciens subsp. flaccumfaciens (Hedges) Dowson, afectan al cultivo de frijol y reas de produccin. Debido a que estas bacterias se transmiten por semilla, la presencia de plantas enfermas en los campos de semillas afecta la elegibilidad de certificacin de la cosecha, segn la definicin de las normas de certificacin y los reglamentos. Los ataques de enfermedades bacteriales reducen el rendimiento y la calidad de la cosecha (Franc, 1998). El tratamiento de semillas probablemente es la medida ms antigua, econmica y ms segura en el manejo de patgenos transmitidos por semillas, especialmente hongos. El tratamiento qumico es el ms difundido y consiste en la aplicacin de fungicidas, insecticidas, antibiticos y/o nematcidas a las semillas. Para que el tratamiento qumico sea eficiente, se debe seleccionar un producto capaz de erradicar los patgenos presentes en las semillas, el cual no debe ser txico a las 8

plantas, a humanos y al ambiente, debe presentar alta estabilidad, adherencia y proteccin, no ser corrosivo ni de alto costo, adems de ser compatible con otros productos (Lucca, 2009). Existe un gran nmero de productos en el mercado aptos para ser usados en el tratamiento de semillas, presentando caractersticas diferentes. Los productos llamados protectantes son aquellos que actan superficialmente, y tienen poca capacidad de penetrar en la semilla, restringiendo su accin a los patgenos localizados en el tegumento o debajo de ste, an sin penetrar en los tejidos embrionarios. Como ejemplo clsico de este grupo estn los fungicidas Thiram y Captan. Los productos sistmicos son aquellos que son absorbidos por la semilla junto con el agua y translocados en la planta, confiriendo cierta proteccin en los estados iniciales de desarrollo de las plntulas, tales como Benomil, Carboxin, Tiofanato metilico, etc. (Diccionario de Especialidades Agroqumicas, 2010; Lucca, 2009). Este estudio tuvo como objetivo principal evaluar la eficacia de tres fungicidas y una bacteria sobre la germinacin y erradicacin de microorganismos presentes en semillas de frjol variedad Cargamanto blanco.

o-Zapata y Salazar (1998). Los montajes se hicieron en azul de lactofenol (azul de algodn 0,05 g, cido lctico 20 g, cristales de fenol 20 g, glicerina 40 g, agua destilada 20 mL) y posteriormente con la ayuda de un microscopio compuesto marca Boeco se realiz la identificacin. La identificacin de bacterias se realiz siguiendo algunas pautas del esquema de Schaad (1988), complementado con pruebas morfolgicas, fisiolgicas y bioqumicas. Los porcentajes de germinacin de semillas e incidencia de hongos y de bacterias, de acuerdo al tratamiento, fueron sometidos a anlisis de varianza, complementado con la prueba de comparacin de Duncan al 5%.

RESULTADOS Y DISCUSIN
Germinacin de semillas. El anlisis de varianza indic diferencias significantes entre tratamientos a los 4, 7 y 14 das (p= 0,0002 y p= 0,0116 y p= 0,0813, respectivamente). A los 4 das de evaluacin, Benomil en las dosis de 100, 200 y 400 ppm, permiti una germinacin superior al 80%. Despus de 7 das, la germinacin con estas dosis, fue superior al 90% y se mantuvo estable despus de 14 das (Tabla 1). Esto confirma los resultados de Castao-Zapata y Zepeda (1987), quienes demostraron que Benomil en dosis de 1.000 ppm, permiti la germinacin de semilla de frjol significativamente, llegando hasta el 98%. Despus de Benomil y en los mismos periodos de tiempo, la mezcla de Carboxin+Captan en las dosis de 100, 200 y 400 ppm, fue el mejor tratamiento, con el cual se obtuvo una germinacin que vari entre 80 y 92%, la cual fue incrementando a travs del tiempo. La germinacin en los testigos oscil entre el 48 y 68%, lo que demuestra el efecto benfico del tratamiento de semilla de frjol con estos productos (Tabla 1). Incidencia de hongos Hubo diferencias altamente significativas a los 4, 7 y 14 das despus del tratamiento (p= 0,0098, p= <0,001, p= <0,001, respectivamente). Benomil en dosis de 200 ppm, fue el nico que erradic totalmente los hongos presentes en las semillas al cabo de los 14 das, contrastando con el testigo que al cabo de los siete das ya tena una incidencia del 100% de hongos (Tabla 2), lo que demuestra la gran eficacia de este producto para la erradicacin de hongos en semillas. CastaoZapata y Zepeda (1987), demostraron previamente este efecto en semillas de frjol, el cual es atribuido a la actividad sistmica de Benomil y a su amplio espectro de accin. Esto destaca la gran importancia que tiene el tratamiento de semillas destinadas para siem-

MATERIALES Y MTODOS
La investigacin se llev a cabo en el laboratorio de Fitopatologa, del Departamento de Fitotecnia, Facultad de Ciencias Agropecuarias, Universidad de Caldas (Manizales, Colombia). Se analizaron semillas de frijol variedad Cargamanto blanco, procedentes de un supermercado Tipo B. Se utilizaron cuatro productos: Benomil (Zellus), Captan (Orthocide 50%), Carboxin+Captan (Vitavax 300) y Burkholderia cepacia Burkholder (Botrycid). Para el tratamiento de la semilla se utiliz la metodologa descrita por Castao-Zapata (1998). Las semillas se trataron en grupos de 25 con Benomil, Captan, Carboxin+ Captan a concentraciones de 0, 50, 100, 200 y 400 ppm y B. cepacia en dosis de 0, 1, 1,5, 2 y 2,5 de mL i.a./ 100 mL de agua. El tratamiento se hizo en bolsas de plstico, mediante agitacin constante y durante un minuto. Luego se extendieron las semillas sobre papel y con la ayuda de unas pinzas, se sembraron cinco semillas por caja Petri conteniendo agar agua al 2%. Cada concentracin tuvo cinco replicas (25 cajas por fungicida), para un total de 125 semillas por producto. Se incubaron a 2025C en una incubadora WTB Binder durante 14 das. Se realizaron observaciones a los cuatro, siete y 14 das evaluando la germinacin y nmero de semillas con presencia de hongos, bacterias, o ambos. La identificacin de hongos se realiz con base a la descripcin taxonmica de Streets (s.f) Barnett y Hunter (1987) y Casta2011 Fitopatologa Colombiana /Volumen 35 No 1

bras con producto de accin sistmica. El tratamientos con Carboxin+Captan no reflej los resultados esperados, aunque se obtuvo germinaciones entre 76 y 92% a los 14 das despus del tratamiento, con una incidencia de hongos que oscil entre 88 y 100%. Resultados similares obtuvo Mora (1996) quien al tratar semilla de frjol con Carboxin + Captan obtuvo una incidencia alta de hongos (57%) a los 18 das de evaluacin en comparacin con el testigo (37%), y una germinacin del 86%.
Tabla 1. Germinacin (%) de semillas de frijol Cargamanto blanco de acuerdo con el tratamiento Incidencia (%) de Tratamiento hongos (ppm o mL)
4 DDT 7 DDT 14 DDT Benomil 50 Benomil 100 Benomil 200 Benomil 400 Captan 50 Captan 100 Captan 200 Captan 400 Carboxin+Captan 50 Carboxin+Captan 100 Carboxin+Captan 200 Carboxin+Captan 400 Burkholderia cepacia 1,0 Burkholderia cepacia 1,5 Burkholderia cepacia 2,0 Burkholderia cepacia 2,5 Testigo absoluto

Tabla 2. Incidencia (%) de hongos en semillas de frijol Cargamanto blanco de acuerdo con el tratamiento. Tratamiento (ppm o mL) Xanthomonas Rhizoctonia Penicillium Alternaria Fusarium Rhizopus Producto Bacillus

Benomil

0c 0c 0c 0c 8 abc 4 bc 0c 0c 4 bc 4 bc 0c 28 a 8 abc 24 ab 8 abc

0f 4 ef 0f 4 ef

40 cd 16 de 0e 8e

32 cdef 48 bc 36 cde 48 bc 32 cdef 40 cd 20 def 40 cd 52 cd 60 bc 52 cd 44 cd 40 cd 88 a 88 a 96 a 100 a 100 a 92 a

50 20 20 100 8 8 200 4 400 4 Captan 50 20 16 100 4 4 8 200 20 400 32 20 Carboxin+Captan 50 88 100 60 8 20 200 76 16 400 24 20 24 20 Burkholderia cepacia 1,0 68 4 28 1,5 84 12 4 2,0 40 20 32 2,5 60 4 4 Testigo 0 80 20 DDT = Das despus del tratamiento *Letras iguales denotan que no existen diferencias significativas al 5% de probabilidad.

12 abc 88 ab

de Fusarium sp. (20%), Rhizopus sp. (20%) y Alternaria sp. (8%), pero, a dosis altas (200 y 400 ppm), no crecieron hongos, slo Xanthomonas sp. y Bacillus sp. con 4%. Por el contrario, los productos que tuvieron la mayor incidencia de hongos y en las cuatro dosis empleadas fueron Carboxin+Captan y B. cepacia, en un rango de 24 y 88% (Tabla 3).

poblacin de plantas, o bien causar problemas patolgicos en los cultivos una vez establecidos. Por esto se requiere emplear prcticas que eliminen el inculo presente en la semilla. Los fungicidas, en particular sistmicos, como Benomil, ofrecen una alternativa eficaz para la erradicacin de hongos, si no se dispone de semilla certificada.

36 cde 100 a 28 cdef 76 ab Tabla 3. Incidencia (%) de gneros de hongos y bacterias presentes en semillas de frijol Cargamanto blanco. Tratamiento Germinacin (%) de semillas 4 DDT 7 DDT 14 DDT Producto (ppm o mL) Benomil 50 72 abc* 80 abcd 88 abc 100 88 ab 92 ab 92 ab 200 92 a 96 a 96 a 400 84 abc 96 a 96 a Captan 50 44 cde 84 abc 92 ab 100 64 abc 88 abc 96 a 200 60 abc 92 ab 92 ab 400 52 abcde 92 ab 92 ab Carboxin+Captan 50 72 abc 72 abcd 76 abc 100 76 abc 88 abc 88 abc 200 76 abc 88 abc 88 abc 400 80 abc 92 ab 92 ab Burkholderia cepacia 1,0 20 de 68 bcd 76 abc 1,5 60 abc 92 ab 92 ab 2,0 56 abcd 80 abcd 80 abc 2,5 16 e 64 cd 64 c Testigo 48 bcde 56 d 68 bc DDT = Das despus del tratamiento *Letras iguales denotan que no existen diferencias significativas al 5% de probabilidad.

28 a 100 a 100 a DDT = Das despus del tratamiento. *Letras iguales denotan que no existen diferencias significativas al 5% de probabilidad

Identificacin de microorganismos. Se identificaron cinco gneros de hongos: Fusarium Link ex Grey, Penicillium Link, Alternaria (Fries) Keissler, Rhizoctonia Khn y Rhizopus (Ehrenberg: Fries) Vuillemin y dos de bacterias Xanthomonas Smith y Bacillus Cohn. Schanathorst (1954) identifico varias especies de Bacillus en semillas de frijol, entre ellos B. subtilis (Ehrenberg) Cohn, B. cereus Frankland & Frankland y B. megaterium Cohn y estos fueron el grupo de microorganismos ms frecuentes encontrados en semillas. Ninguna de las bacterias fue patognica para P. vulgaris. var. Black Valentine. La evidencia indica que no hay bacterias presentes en tejidos embrionarios, pero son comunes bajo la testa de las semillas de frijol. Lo anterior confirma que la colonia de Bacillus Cohn encontrada en la semilla de frijol pudo estar presente como un controlador biolgico o como un contaminante ms no como una bacteria patognica. El producto que tuvo la menor incidencia de microorganismos fue Benomil, con el cual a dosis bajas (50 y 100 ppm) tuvo presencia

De acuerdo a estos resultados, el tratamiento que produjo el mayor porcentaje de semillas sanas fue Benomil con 96% en las dosis de 200 y 400 ppm. Por el contrario, B. cepacia, en las dosis de 1,0 y 1,5 mL, tuvieron una incidencia de microorganismos del 100%, igual al testigo (Figura 1). Los resultados demostraron que las semillas de frjol pueden ser un medio ideal para el transporte de microorganismos, en particular de hongos, que afectan la germinacin y
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CONCLUSIONES
El tratamiento ms eficaz para erradicar hongos presentes en la semilla de frijol variedad Cargamanto blanco fue Benomil a una dosis de 200 ppm, incrementando significativamente la germinacin. El hongo ms frecuente en las semillas fue Fusarium sp. 9

Figura 1. Porcentaje de semillas sanas segn el tratamiento. Deteccin de microorganismos en semillas y tratamiento qumico de semillas. Segunda edicin. Universidad de Caldas. Facultad de Ciencias Agropecuarias. Departamento de Fitotecnia. Escuela Agrcola Panamericana. Departamento de Proteccin Vegetal. Pp. 79-80. Castao-Zapata, J y Salazar, H. 1998. Illustrated guide for identification of plant pathogens. Universidad de Caldas. Manizales, Colombia. Pp. 74-98. Diccionario de Especialidades Agroqumicas.2010. PLM Edicin 20. Colombia. 1118p. Franc, G. D. 1998. Bacterial diseases of beans. College of Agriculture. University of Wyoming Laramie, USA. 7p. Godoy, G. 2007. Sobrevivencia de Thanatephorus cucumeris en semilla de frijol y en el suelo. Centro de Investigaciones Agrcolas del Suroeste (CIAS). San Juan de la Maguana. Repblica Dominicana. 42p. Groenewold, L. B., Mayec, P. N. y Padilla, J. S. 2003. Hongos asociados a la semilla de frijol (Phaseolus vulgaris) en Aguascalientes, Mxico. Revista Mexicana de Fi-

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EVALUACIN DEL POTENCIAL ANTAGNICO DE BACTERIAS AISLADAS DE LA RIZSFERA DE PAPA CRIOLLA (Solanum phureja) SOBRE Phytophthora infestans (Mont.) de Bary*
David Granada1., Gina F. Pasaje H1., Eliana M. Zuluaga R1., Felipe A. Gmez V1., Carlos Pelez J2. y E. Antoni Rueda L.1
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Unidad Fitosanidad y Control Biolgico Corporacin para Investigaciones Biolgicas (CIB), 2 Grupo GIEM Universidad de Antioquia Correo electrnico de contacto: antonyrueda@yahoo.es
*Artculo cientfico, recibido para publicacin el 21-04-2011; aceptado el 18/05/2011

RESUMEN
El oomiceto Phytophthora infestans (Mont.) de Bary es el causante del tizn tardo en cultivos de papa (Solanum spp.). Su control qumico genera altos costos con poca efectividad y alta residualidad. El objetivo de este estudio fue evaluar la capacidad antagnica de diez aislamientos bacterianos, obtenidos de suelos cultivados con Solanum phureja como controladores potenciales de Phytophthora infestans . Para demostrar su capacidad de restriccin del crecimiento del patgeno. se emplearon pruebas de antagonismo in vitro por enfrentamiento directo y evaluaciones de la actividad extractos, obtenidos a partir de fermentaciones del antagonista. Cinco de los aislamientos evaluados mostraron actividad antagnica; de los cuales, tres exhibieron actividad antimicrobiana en sus extractos. Al evaluar la actividad inhibitoria a concentraciones del 1; 0,8; 0,6; 0,4; 0,2 y 0,05 %, se observ la inhibicin total de P. infestans con los extractos de los aislamientos 4-ant-04 y 7-ant-04 a concentraciones de 0,4 y 0,2 %, respectivamente. Este resultado se correlacion directamente con los ensayos de antagonismo donde 4-ant-04 y 7-ant-04 presentaron los mximos valores de inhibicin (79 y 69 %, respectivamente). Los resultados revelan la importancia de la produccin de compuestos activos con la capacidad antagnica y sugieren que algunos de los aislamientos bacterianos empleados en este estudio, al igual que sus extractos crudos, tienen un enorme potencial en el control de P. infestans. Palabras clave: tizn tardo, antagonismo, extracto crudo, aislamientos bacterianos

SUMMARY
Evaluation of the antagonistic potential of the bacteria isolated from rhizosphere of native potato (Solanum phureja) on Phytophthora infestans (Mont.) de Bary. Phytophthora infestans (Mont.) de Bary is the causal agent of the late blight disease on potato crops (Solanum spp.). Its chemical control generates high costs, low efficiency and high residual effect on the environment. The objective of this work was to evaluate the antagonistic capacity of ten bacterial isolates, obtained from soil cultivated with Solanum phureja, against Phytophthora infestans. In vitro antagonistic determinations by direct confrontation were used and crude extracts, obtained by fermentation processes of the isolates, were assessed through bioassay. Five of the isolates showed antagonistic activity. The extracts of three of them exhibited biological activity. Moreover, the inhibitory activity of the extracts at different concentrations (1, 0.8, 0.6, 0.4, 0.2 y 0.05 %) showed a 100 % inhibition for the isolates 4ant-04 and 7-ant-04 at concentrations of 0.4 y 0.2 %, respectively. Since a maximum inhibition for de antagonism test was observed for 4-ant-04 and 7-ant-04 (79 y 69 %, respectively), there was a direct correlation between this result and the crude extracts bioassay. Active compounds production has been found vital for the antagonist capacity. The results suggest that some bacterial isolates employed in this study, as well as their bacterial crude extracts, have great potential to control P. infestans. Keywords: late blight, antagonism, bacterial crude extracts

INTRODUCCIN
En Colombia el cultivo de papa constituye una de las actividades agrcolas de mayor importancia a nivel econmico y social, por su aporte a la seguridad alimentaria del pas y por el nivel de empleo rural que genera (Canter, 1999; Rivera et al., 2010). El sistema productivo de la papa presenta ataques de plagas y enfermedades que obligan a los agricultores a realizar labores de prevencin, manejo y control, acordes con la disponibilidad de recursos tcnicos y financieros (Bernal y Hernn, 2001). La enfermedad que ocasiona ms prdidas econmicas en cultivos de papa es el tizn tardo, causada por el Oomycete (Phytophthora infestans) (Zoteyeba y Patrikeeva, 2010; Boonekamp et al., 2008; Cruz, 2002; Lozoya et al., 2006a; Fry y Goodwin 1997.. En Colombia, es especialmente importante, debido a la ubicacin de los cultivos en

regiones con condiciones climticas favorables para el desarrollo del patgeno (zonas altas y fras de la regin andina) y a la siembra de materiales altamente susceptibles, condiciones que contribuyen a que el patgeno tenga un ciclo muy corto y de mayor agresividad (Vega, 2004). Por otra parte, sus caractersticas reproductivas generan cepas con alta variabilidad gentica, las cuales pueden ser ms agresivas y resistentes a los fungicidas empleados para su manejo (Daayf et al., 2003; Jaramillo, 2004; Lozoya et al., 2006b). Para controlar la enfermedad en los cultivos de papa, los agricultores colombianos realizan aplicaciones de fungicidas protectantes y/o sistmicos de manera intensiva, lo cual representa un costo que oscila entre el 10 y el 30 % del valor total de la produccin de los cultivos de papa (Jaramillo, 2004). donde los ms empleados son el Metalaxil y Manzate. El uso excesivo de estos pesticidas genera
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problemas ambientales, sobre la salud humana y otros seres vivos, a lo que se le suma la aparicin de genotipos del patgeno resistentes a los fungicidas (Maldonado et al., 2002; Solange, 2007). El control biolgico mediante el uso de microorganismos antagonistas es una de las alternativas que ms atencin ha recibido en los ltimos aos (Rivera et al., 2010; Valdir, 2006; Daayf et al., 2003). La existencia de microorganismos asociados de forma natural a las plantas, los hace ideales para seleccionar entre estos a aquellos que tienen la capacidad de inhibir patgenos. As, el control biolgico mediante el uso de microorganismos antagonistas, surge como respuesta a la bsqueda de nuevas formas de control de patgenos en la produccin agrcola, en las que prima la calidad de las cosechas y el respeto a los recursos naturales y humanos (Ezziyyani, 2006).

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La presente investigacin se enfoc en evaluar la capacidad antagnica de diez aislamientos bacterianos obtenidos de suelos cultivados con Solanum phureja y en la determinacin de la actividad antimicrobiana de sus productos metablicos sobre P. infestans, bajo condiciones de laboratorio, como fundamento para la generacin de alternativas de control del Tizn tardo, basadas en el desarrollo de productos eficaces y de bajo impacto ambiental para su uso en el sistema productivo de la papa.

MATERIALES Y MTODOS
Material biolgico Se emplearon diez aislamientos bacterianos correspondientes a bacilos Gram negativos, codificados como 4-ant-04, 4-ant-08, 4-ant10, 6-ant-04, 7-ant-03, 7-ant-04, 7-ant-05, 7ant-08, 7-ant-09, 7-ant-10, con capacidad antagnica, suministrados por el grupo de investigacin en Microbiologa Agrcola del Instituto de Biotecnologa (IBUN), adscrito a la Universidad Nacional de Colombia, sede Bogot. La cepa del fitopatgeno, Phytophthora infestans, fue proporcionada por el laboratorio de Micologa y Fitopatologa de la Universidad de los Andes.. Determinacin de las condiciones de crecimiento y cultivo de P. infestans (Mont.) de Bary, y los aislamientos bacterianos El crecimiento del patgeno y de los aislamientos bacterianos se evalu en los medios de cultivo Papa Dextrosa agar (PDA) Merck, agar Sabouraud, Merck y agar Centeno (agar 16 g.L-1 + harina de centeno al 2 % (p/v)). Este crecimiento se evalu a 18 y 30 C, bajo condiciones de luz o oscuridad (Slininger, 2007). Para las pruebas de antagonismo se evaluaron los medios Sabouraud, Merck ms Centeno y Luria Bertani (LB) BD; ambos suplementados con harina de centeno al 2% (p/v). Determinacin de antagonismo in vitro Para evaluar la actividad antagnica de los aislamientos bacterianos se realizaron ensayos de enfrentamiento en cajas de Petri, utilizando como medio de cultivo agarSabouraud ms Centeno al 2 %. A partir de una una caja cultivada con Phytophthora infestans en agar Centeno e incubada en oscuridad a 18 C durante 20 das, se tom un disco de 6 mm y se ubic en la periferia de varias cajas de Petri. Despus de trece das de incubacin a 18 C, se inocularon los aislamientos bacterianos, previamente incubados en agar LB durante 48 horas a 25 C. La inoculacin de la bacteria se realiz a partir de una colonia aislada, sembrando mediante una lnea recta en el lado opuesto a la siembra 12

de P. infestans. Cada aislamiento cont con cinco rplicas. El efecto antagnico de las bacterias se determin mediante mediciones del radio de crecimiento del fitopatgeno en comparacin con un control no tratado en un intervalo de tres das. El antagonismo se expres como el porcentaje de inhibicin, calculado a partir del rea bajo la curva (ABC) de la cintica de crecimiento de P. infestans enfrentado a los aislamientos con respecto al ABC de su control no enfrentado. El ABC se determin mediante el conteo de nmero de pxeles en el programa de fotografa GIMP, a partir de los grficos de la cintica de crecimiento Evaluacin del efecto inhibitorio de los extractos bacterianos Basados en los ensayos de antagonismo, se seleccionaron los aislamientos que presentaron mayor efecto inhibitorio. Las bacterias seleccionadas se multiplicaron en medio lquido, inoculando un mL de suspensin en 250 mL de medio Tripticasa de Soya (TSB), Merck. Despus de inoculacin el medio se ferment en un agitador orbital a 30 C, 150 rpm, durante seis das. Posterior a la incubacin, los caldos fermentados se filtraron para extraer su biomasa y los sobrenadantes se congelaron a -20 C y luego se liofilizaron. El slido obtenido se extrajo empleando tres porciones de 30 mL de metanol. El solvente se elimin por evaporacin bajo presin reducida, obtenindose de este modo el extracto crudo para cada aislamiento. Los extractos obtenidos se diluyeron en agua destilada estril, llevndose a concentraciones de 10, 8, 6, 4, 2 y 0,5 %, y se trataron con radiacin UV durante 30 minutos. Para evaluar la actividad antimicrobiana, se realiz una dilucin 1:10 de los extractos (1 mL de extracto en 9 mL de medio) en agar Sabouraud con centeno a 45 C, para una concentracin final de 1; 0,8; 0,6; 0,4; 0,2 y 0,05 %. Luego de una rpida agitacin en un Vortex, se sirvieron en cajas de Petri de 5,3 cm de dimetro. Una vez solidificado el agar, se sembr un disco del fitopatgeno en el centro de cada caja y se incubaron durante 20 das a 18 C en oscuridad. Cada tratamiento cont con cinco rplicas. La inhibicin de los extractos se calcul a partir del ABC de la cintica de crecimiento de P. infestans en presencia del extracto, con respecto al ABC de un control sin tratamiento. La evaluacin de las diferentes concentraciones se llev a cabo nicamente con los aislamientos que presentaron la mayor inhibicin a una concentracin de 1% de extracto. Evaluacin de la concentracin de los extractos bacterianos En la evaluacin antimicrobiana de los ex2011 Fitopatologa Colombiana /Volumen 35 No 1

tractos bacterianos, de los cinco aislamientos que presentaban mayor inhibicin se seleccionaron tres, a los cuales se les realiz diluciones sucesivas (1:9) de los extractos inciales para obtener 6 concentraciones diferentes de los mismos (8000, 6000, 4000, 2000 y 500 ppm) posteriormente se sirvieron en cajas de petri. Luego se sembr un disco del fitopatgeno del cultivo base en cada caja y se incubaron durante 20 das a 18 C en oscuridad. Se realizaron mediciones del dimetro de crecimiento del fitopatgeno (mm) en comparacin con un tratamiento control donde no se aplic ningn extracto bacteriano. Anlisis Estadstico Todos los experimentos se realizaron bajo un diseo completamente al azar, se establecieron dos ensayos independientes en el tiempo, que fueron evaluados mediante un anlisis de varianza (Anova). Para cada ensayo se realiz un Anova con un nivel de significancia del 0,05 mediante el paquete estadstico SAS, complementariamente se realiz una prueba de comparacin de medias de Tukey.

RESULTADOS
Determinacin de las condiciones de crecimiento y cultivo de P. infestans (Mont.) de Bary, y de los aislamientos bacterianos El medio de cultivo agar centeno, entre los tres medios evaluados, fue el que permiti el mejor desarrollo de P. infestans, mientras que las mejores condiciones de crecimiento se dieron a 18 C en oscuridad. Para los ensayos de antagonismo, el medio con mejor desempeo fue Sabouraud suplementado con Centeno, ya que favoreci el crecimiento, tanto de P. infestans como de los aislamientos bacterianos Determinacin de antagonismo in vitro Se encontr que cinco de los aislamientos bacterianos utilizados, 7-ant-04, 4-ant-04, 4ant-08, 4-ant-10 y 7-ant-10, mostraron efecto antagnico frente P. infestans, con un porcentaje de inhibicin superior al 45 % en el ensayo No 1 y al 49 % en el ensayo No 2, destacndose los aislamientos 7-ant-04, 4ant-04, 4-ant-08 y 4-ant-10, con inhibiciones de 49,3; 57,4 y 45,3 % respectivamente (ensayo No 1) , y 65,6; 69,8; 58 y 49 % respectivamente (ensayo No 2). El aislamiento 4-ant-04 present la mejor actividad durante los dos ensayos (Figura 1). Adicionalmente, se observo variabilidad en la actividad en los aislamientos 7-ant-05 y 7ant-10 (Figura 2). El anlisis de varianza mostr diferencias estadsticas altamente significativas entre los aislamientos con una p <0,0090 para el ensayo No 1 y p<0,0001 para el ensayo No 2.

Evaluacin de los extractos bacterianos De manera concordante con los ensayos No 1 y No 2, independientes en el tiempo, de los extractos obtenidos a partir de los cinco aislamientos con actividad antagnica, los provenientes de las bacterias 7-ant-04, 4-ant04 y 4-ant-10 presentaron actividad frente a P. infestans, mientras que los de las bacterias 4-ant-08 y 7-ant-10 no mostraron inhibicin. Adicionalmente, se evidenci efecto significativo de la concentracin sobre la actividad inhibitoria (p <0,0001) (Figura 3). Se destacan los extractos de los aislamientos 7-ant-04 y 4-ant-04, los cuales mostraron inhibicin del 100 % a partir de las concentraciones de 0,2 y 0,4 %, respectivamente (Figura 3).

Figura 1. Ensayo antagnico. a. Control. b. Aislamiento 4-Ant-04 contra P. infestans, c. Aislamiento 7Ant-04 contra P. infestans. Ntese la diferencia entre las zonas de inhibicin del crecimiento por efecto de los aislamientos antagnicos

DISCUSIN
Cinco de los diez aislamientos bacterianos evaluados tuvieron efecto antagnico sobre P. infestans. La capacidad de inhibicin fue notoria, ya que los aislamientos presentaron inhibiciones por encima del 45,3 % y con un mximo de 69,8 %. Este resultado es muy promisorio, segn el criterio definido por Bentez et al (2004), quin sugiere una inhibicin mnima 40 % para ser considerada significativa. Los resultados del antagonismo, obtenidos por enfrentamientos duales, muestra que los aislamientos 7-ant-04 y 4-ant-04 fueron los mejores inhibidores del crecimiento de P. infestans, con valores de inhibicin del 65,6 % y 69,8 %, en el ensayo No 2, y de 57,4 % y 49,3 %, en el ensayo No 1. Las diferencias en los porcentajes de inhibicin entre los aislamientos bacterianos pueden estar directamente relacionadas con diferencias taxonmicas y genotpicas entre estos microorganismos, lo cual se refleja en la expresin diferencial de su potencial antagnico. Por otra parte, se encontr que los extractos de los aislamientos bacterianos 7-ant-04 y 4-ant-04 tuvieron alta capacidad de inhibicin sobre P. infestans a concentraciones relativamente bajas (0,2 y 0,4 %, respectivamente); resultados que estn en concordancia con reportes de investigaciones que emplean extractos de bacterias como Bacillus subtilis o extractos de plantas como Solidago canadensis, con actividad promisoria sobre P. infestans (Worasatit et al., 1994). La actividad mostrada por los extractos, especialmente los provenientes de los aislamientos 7-ant-04, 4-ant-04 y 4ant-10, sugiere que el control ejercido sobre el fitopatgeno se debe principalmente a un mecanismo de antibiosis. La produccin de compuestos con actividad antimicrobiana, por parte del antagonista, se puede soportar con la presencia de halos de inhibicin, el hecho de que el medio tenga la cantidad de nutrientes suficientes para descar-

Figura 2. Ensayos de antagonismo (repetidos en el tiempo) de los aislamientos bacterianos sobre Phytophthora infestans. Letras diferentes indican diferencias significativas entre los tratamientos a un nivel de significancia del 0,05

Figura 3. Porcentaje de inhibicin de los extractos de los aislamientos bacterianos sobre Phytophthora infestans

tar la competencia como un posible modo de accin y las evidencias que reportan diferentes autores sobre el potencial de las bacterias como prolficos productores de compuestos antimicrobianos (Landa et al, 1997; Mizubuti et al., 2007). A pesar de que las pruebas de antagonismo in vitro no representan necesariamente el grado de expresin de un biocontrolador en condiciones naturales, s reflejan la capacidad y variabilidad gentica del antagonista, y la del fitopatgeno para resistirlo, lo que indica el potencial que tienen estos aislamientos para ser evaluados a nivel de campo (De Costa et al, 2008). Adicionalmente, se resalta una importante correlacin entre los resultados obtenidos para los enfrentamientos duales y la inhibicin mediante el uso de los extractos, donde los aislamientos 7-ant-04 y 4-ant-04 fueron los ms destacados por su alta inhibicin
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tanto en los ensayos de antagonismo como en los ensayos de actividad antimicrobiana.

CONCLUSIONES
La evaluacin de la capacidad antagnica de los aislamientos bacterianos de rizsfera de papa frente a Phytophthora infestans mediante enfrentamiento directo permiti determinar que los aislamientos con mayor capacidad inhibitoria fueron: 7-ant-04, 4-ant-04, 4-ant08, 4-ant-10 y 7-ant-10. La capacidad de inhibicin, medida en porcentaje, fue notoria, ya que los aislamientos con actividad presentaron inhibiciones por encima del 45,3% y con un mximo de 69,8%, siendo resultados de inhibicin promisorios segn el criterio sugerido por Bentez et al. (Bentez et al., 2004). Se han reportado hallazgos de aislamientos bacterianos para el control del Tizn 13

tardo por parte de autores como Daayf et al. (2003), quienes, a partir de filsfera y rizoplano de papa, encontraron grupos bacterianos con capacidad inhibidora de P. infestans. De igual forma, El-Sheikh et al. (2002), trabajando en papa, evaluaron, in vitro, 83 aislamientos bacterianos, de los cuales catorce tuvieron la capacidad de restringir el crecimiento de P. infestans. Esto permite destacar la importancia de los microorganismos asociados a los propios cultivos como alternativa potencial para el control del Tizn tardo (Cao y Forrer, 2001; Tran et al., 2007). A partir de los ensayos de actividad antimicrobiana de los extractos fue posible determinar que los productos metablicos de excrecin, o secrecin, de las bacterias antagonistas tienen un aporte importante en la actividad antagnica. Adicionalmente, los experimentos realizados, permitieron determinar un efecto diferencial de la actividad antimicrobiana de los extractos obtenidos de los diferentes aislamientos, encontrndose que los provenientes de 7-ant-04 y 4-ant-04 tuvieron la mayor capacidad de inhibicin sobre P. infestans, resultados que estn en concordancia con reportes en los que se emplearon extractos de bacterias como Bacillus subtilis, o extractos de plantas como Solidago canadensis, con promisoria actividad sobre P. infestans (Worasatit et al., 1994). Igualmente, a partir de los hallazgos de Tan et al. (2007), donde se evaluaron molculas de Pseudomonas sp. con resultados sobresalientes en la inhibicin de P. infestans, se destacaron mecanismo de antibiosis por produccin de metabolitos bacterianos. En nuestro caso, el mecanismo de antibiosis por parte de las rizobacterias se hizo evidente debido a la correspondencia entre los resultados obtenidos en los enfrentamientos duales y la inhibicin mediante el uso de los extractos, los cuales a su vez demostraron un efecto sobre el fitopatgeno dependiente de la concentracin. La importancia del presente estudio radica en la seleccin preliminar y tipificacin de aislamientos con uso potencial como bioconroladores, de modo que puedan usarse, ya sea de manera directa en cultivos con el fin de enriquecer la microflora edfica y de la filsfera o a travs de la aplicacin de un principio activo aislado a partir del microorganismo antagonista.

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EVALUACIN DE LA RESPUESTA FITOALEXNICA EN PAPA (Solanum tuberosum) Y DETERMINACIN PRELIMINAR DE PRIMING EN TOMATE (Solanum lycopersicum )*
David Granada1, Jennifer Salguero1, Walter Murillo3, Carlos Pelez2 y Antoni Rueda1
1

Unidad de Fitosanidad y Control biolgico, Corporacin para Investigaciones Biolgicas. Medelln, Antioquia, Colombia; 2 Grupo GIEM Universidad de Antioquia; 3Grupo GIPRONUT Universidad del Tolima Autor para correspondencia: Ever Antoni Rueda Lorza, correo electrnico: arueda@cib.org.co
*Artculo cientfico, recibido para publicacin el 21/04/2011; aceptado el 18/05/2011

RESUMEN
La produccin de fitoalexinas de tipo sesquiterpnicas en la familia Solancea ocupa un lugar muy importante en los mecanismos de defensa al interior de este grupo taxonmico. En esta investigacin se evalu la induccin de la respuesta fitoalexnica en dos Solanceas de importancia econmica en Colombia, como fundamento para comprender aspectos fisiolgicos y bioqumicos de las respuestas de defensa. Se realiz la induccin abitica en papa, variedad Diacol, y una aproximacin a la induccin del estado fisiolgico de priming en tomate con radiacin ultravioleta frente a la infeccin con Fusarium oxysporum. La induccin de papa con CuCl2 mostr un aumento en la biosntesis de metabolitos de estrs con actividad antifngica de manera diferencial al control no inducido, el cual no present dicha actividad. El anlisis conjunto de los resultados cromatogrficos, espectroscpicos y de los bioensayos muestran que la inoculacin de tomate con F. oxysporum evidencia la activacin de la respuesta fitoalexnica y la induccin previa con radiacin UV sugiere la activacin de un mecanismo de priming. Palabras clave: fitoalexinas, induccin abitica y abitica, Fusarium oxysporum.

SUMMARY
Evaluation of phytoalexin response in potato (Solanum tuberosum) and preliminary determination of priming in tomato ( Solanum lycopersicum) The production of like-sesquiterpene phytoalexins in the family Solanaceae has an important place in the defense mechanisms inside this taxonomic group. The induction of phytoalexin response in two economically important Solanaceae in Colombia was evaluated, as a basis for understanding physiological and biochemical defense responses. The abiotic induction in potato variety Diacol and an approach to the induction of physiological state called priming with ultraviolet radiation in tomato against Fusarium oxysporum infection was carried out. The CuCl2 induction of potato showed an increase in the biosynthesis of stress metabolites with antifungal activity compared with untreated control, which did not show such activity. The joint analysis of the chromatographic results, spectroscopic and bioassays showed that inoculation of tomato with F. oxysporum induced the phytoalexin response activation. A mechanism of priming activation after induction with UV radiation is suggested. Keywords: Potato, tomato, phytoalexins, biotic and abiotic induction, Fusarium oxysporum

INTRODUCCIN
La familia Solancea rene especies de importancia econmica en el mundo y en Colombia en donde se destacan los cultivos de tomate de rbol, papa, tomate de mesa y tabaco (Hawkes, 1999). El potencial productivo de estas especies se ve afectado por el ataque de fitopatgenos que influyen negativamente sobre su produccin (Anderson et al, 2004). Un enfoque de la investigacin dirigido hacia la bsqueda de alternativas para el control de las enfermedades tiene que ver con el potencial gentico y bioqumico para activar respuestas de defensa frente a estreses biticos y abiticos. Dentro de dichas respuestas, la produccin de fitoalexinas ha sido uno de los mecanismos que ms ha llamado la atencin de investigadores, debido a las actividades antimicrobianas directas sobre los fitopatgenos (Grayer 2001; Jeandet et al, 2003). Las fitoalexinas se consideran fundamentalmente como un tipo especial de metabolitos de estrs, cuya sntesis de novo es inducida por factores qumicos, fsicos,

microbiolgicos (Walters et al, 2007) y que desempean un papel importante y activo en la resistencia de las plantas a los patgenos (Woodward y Pegg, 1986).. La familia Solancea ocupa histricamente un lugar importante en la investigacin relacionada con las fitoalexinas si se considera que el primer reporte de la presencia de estos compuestos se realiz precisamente en papa (Poiatti et al, 2009). La evaluacin sobre varias especies de la familia Solancea identific fitoalexinas sesquiterpnicas (Kawauchi et al, 2010; Harborne, 1999), destacndose, la rishitina que fue aislada de Lycopersicon esculentum despus de inocularse frutos de tomate con Phytophthora infestans (Elgersma, 1980). Un enfoque que han tenido los trabajos con fitoalexinas es la posibilidad de asperjar los cultivos con elicitores para inducir respuestas preventivas de defensa a varias enfermedades en los cultivos (Hammerschmidt, 1999. Sin embargo, se ha mencionado que esta aproximacin tiene como inconveniente el hecho de que la aplicacin repetida de elicitores podra causar un gasto marcado
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de energa y fuente de carbono de los procesos vitales, ya que se conoce que las plantas cuando desarrollan reacciones de defensa disminuyen su metabolismo productivo y se centran en la defensa (lvarez y Espinosa, 2004). Por lo tanto el rendimiento de plantas elicitadas, sin saber cundo se va a producir un ataque de un patgeno, redundara en un gasto innecesario de energa (Grayer y Kokubun, 2001). No obstante, investigaciones recientes en resistencia inducida plantean un nuevo enfoque en el tema de inductores que permitira atacar la dificultad mencionada. Al respecto, se afirma que ciertos inductores causan la produccin de un estado fisiolgico llamado priming en el cual las plantas inducidas se preparan para un posterior ataque por patgenos, insectos o en respuesta a estreses abiticos, sin todava desencadenar las respuestas de defensa celular y mostrando dicha activacin de manera ms fuerte y rpida que las no inducidas, solo hasta la llegada del estrs. Aunque el fenmeno ha sido conocido por dcadas, los mayores progresos en el entendimiento de 15

priming solo se han logrado en los ltimos aos (Conrath et al, 2006). En el presente trabajo se determin el efecto de la induccin abitica en papa sobre la respuesta fitoalexnica y la induccin de priming en tomate, asistida por radiacin ultravioleta. La actividad de los extractos y sus fracciones se evalu sobre F. oxysporum. Adems, se emple cromatografa lquida de alta eficiencia (HPLC) y resonancia magntica nuclear de protn (RMN1H) para realizar inferencias sobre la biosntesis de fitoalexinas.

inducidos y no inducidos y a partir de ellas se realizaron diluciones a 0,9, 0,6 y 0,3 % en agar. Como inculo, se tomaron trozos de cinco mm de dimetro F. oxysporum crecido en PDA y se determin la actividad antifngica mediante la medicin cintica del crecimiento del fitopatgeno a 25 C cada 24 horas, durante 10 das, con respecto al control no tratado. Caracterizacin qumica de los metabolitos activos: A los extractos crudos, tanto inducido como no inducido, se les realiz una caracterizacin preliminar cualitativa para terpenoides mediante la reaccin de 0,5 mL de solucin diclorometalica de extracto con 0,5 mL de anhdrido actico y una gota de H2SO4. Fraccionamiento del extracto inducido crudo: Se aplic cromatografa de columna empleando slica 60 (Merck) como fase estacionaria (5x50cm) y sistemas de solventes compuestos por hexano: acetato de etilo (4:1, 3:1, 2:1, 1:1), acetato de etilo:diclorometano (1:1, 2:1) y metanol (100%) (Merck). Aislamiento de la rishitina: La fraccin ms activa obtenida a partir del extracto de material inducido (fraccin 2) fue sometida a un posterior fraccionamiento mediante cromatografa de columna hasta obtener un compuesto puro con el Rf reportado para la rishitina (D'harlingue et al, 1995). La purificacin final se realiz por cromatografa en capa delgada en un sistema de solventes ciclohexano: acetato de etilo 1:1. Se visualiz la placa a 254 nm y aplic revelado en los bordes con vainillina. Al compuesto aislado se le realizaron anlisis preliminares por resonancia magntica nuclear de protn (RMN1H). Resonancia magntica nuclear de protn (RMN1H): Se tom una cantidad inferior a tres mg del compuesto puro y se disolvi en cloroformo deuterado. Los espectros de RMN1H registraron a 300 MHz (frecuencia de 1H), en un espectrmetro Bruker, a 25 C. Los desplazamientos qumicos () s e expresados en ppm. Induccin de priming en tomate asistido con radiacin ultravioleta Se tomaron dos kg de tomate y de manera aleatoria se dividieron en dos grupos. A uno de ellos se le aplic luz UV-C por 10 min en una cmara de flujo laminar. Tanto el material inducido por UV como el no inducido fueron almacenados en recipientes diferentes a temperatura ambiente y en oscuridad por 48 h. Induccin bitica con Fusarium oxysporum: Trascurridas 48 h, tanto el material inducido por UV como el no inducido se
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MATERIALES Y MTODOS
Reactivos, microorganismos y material vegetal Se utilizaron tubrculos de papa (Solanum tuberosum) variedad Capira, de tipo comercial. Para los ensayos de actividad, se emple el hongo fitopatgeno Fusarium oxysporum ATCC 15648 cultivado en agar extracto de malta (Sigma) a 25 C. y como reactivos cloruro de cobre pentahidratado (CuCl2.5H2O), metanol y diclorometano (Sigma) Evaluacin de la respuesta fitoalexnica en papa Induccin: Se tomaron 15 kg de tubrculos de papa, los cuales se cortaron en rodajas entre 0,6 y 1 cm de espesor y se dispusieron en canastas plsticas, en porciones de dos kilogramos aproximadamente. Se asperjaron con una solucin de cloruro de cobre 10 mM cada 24 h y se mantuvieron a temperatura ambiente durante 48 h. Posteriormente, las rodajas se secaron en estufa a 45 C por 48 h y luego se procesaron en un molino de discos. Extraccin de metabolitos secundarios: A 500 g del material seco y molido proveniente del ensayo de induccin se le agreg 1 L de metanol y se dejo en agitacin por 24 h. Luego se filtro en algodn y el residuo slido se someti nuevamente al mismo proceso de extraccin dos veces ms. La solucin metanlica obtenida se filtr nuevamente con papel y se someti a evaporacin con vaci hasta eliminar por completo el solvente. El extracto resultante se lav tres veces con porciones de 30 mL de diclorometano. Se filtr el material insoluble en el solvente y se someti a evaporacin con vaco hasta que quedo completamente seco. Evaluacin in vitro de la actividad antifngica de los extractos: La actividad antifngica se evalu mediante el mtodo de difusin en agar en cajas de Petri de 5,3 cm de dimetro, a diferentes concentraciones. Para ello se prepararon emulsiones al 7,2 % con los extractos crudos de los tubrculos 16

sometieron a desinfestacin de su superficie con etanol al 96 %. Una vez desinfestado se tom el material inducido por UV, se dividi en dos subgrupos al azar y a uno de ellos se inocul con F. oxysporum mediante 20 punciones empleando una asa estril y posterior aspersin con una suspensin de conidias a una concentracin de 1x105 conidias/mL. Se aplic el mismo procedimiento al material no inducido por UV obtenindose cuatro tratamientos denominados: SUSI = sin UV, sin inculo; SUCI = sin UV, con inculo; CUSI = con UV, sin inculo; CUCI = con UV, con inculo. Finalmente los materiales obtenidos se almacenaron en diferentes recipientes en oscuridad por 72 h a 25 C. Obtencin de extractos y ensayos de actividad antifngica: Transcurrido el tiempo total de induccin, a cada tratamiento, por separado, se les extrajo el endocarpio, se agreg nitrgeno lquido y se llevaron a -20 C. El material se someti a liofilizacin y posterior extraccin con metanol (2 x 150 mL). El solvente se evapor por vaco para obtener finalmente los extractos crudos SUSI, SUCI, CUSI y CUCI. La actividad de estos extractos se evalu por mediciones de densidad ptica, empleando un lector de microplacas a 595 nm, donde el aumento en la densidad ptica es proporcional al crecimiento del microorganismo. Perfiles cromatogrficos: Para la obtencin de los perfiles se emple cromatografa lquida de alta eficiencia (HPLC) usando un equipo Agilent serie 1200 con deteccin UV-DAD (ultravioleta con arreglo de diodos). Las muestras se llevaron a una concentracin de 1000 ppm en metanol:agua (metanol grado HPLC, Merck; agua MiliQ) en proporcin 20:80 y se pasaron por un filtro de 0,45 m. Se emple una columna C18 (150 x 2 mm, 5 m), un flujo de 0,5 mL/min y un volumen de inyeccin de 20 L.

RESULTADOS Y DISCUSIN
Evaluacin de la respuesta fitoalexnica en papa El extracto obtenido a partir de los tubrculos de papa inducidos con CuCl2 present diferencias en la actividad sobre F. oxysporum con respecto al extracto de los no tratados los cuales carecieron de actividad. El anlisis de varianza de los ensayos dosisrespuesta mostr diferencias con respecto a los controles, observndose que el efecto sobre el hongo se increment a medida que se aument la concentracin del extracto (Figura 1). Se observaron diferencias estadsticamente significativas de la tasa de crecimiento en funcin de la concentracin para las fracciones dos y tres del material

inducido con cobre, con una mayor actividad por parte de la fraccin dos. Caracterizacin qumica Los anlisis mostraron un perfil qumico diferencial entre los extractos obtenidos del material inducido y no inducido. Las pruebas fitoqumicas cualitativas sobre las fracciones que mostraron actividad biolgica fueron positivas para alcaloides y terpenoides (datos no mostrados). Igualmente la cromatografa en capa delgada present un compuesto con Rf de 0,2 (banda de coloracin rojiza al revelar con vainillina) acorde con el reportado para el revelado de fitoalexinas sesquiterpnicas (D'harlingue et al, 1995).. Adicionalmente, el espectro de RMN1H de un compuesto purificado a partir de la fraccin dos del extracto de material inducido mostr un patrn de seales compatible con el ncleo de una fitoalexina tipo sesquiterpnica (Stoessl et al, 1978). Aunque, en el espectro no se aprecia adecuadamente la multiplicidad de las seales debido a la poca cantidad de muestra purificada, se pueden observar las carcterticas espectrales del ncleo de la rishitina como son los protones allicos entre 1-2 ppmm, protones vecinales a carbonos oxigenados (seal alrededor de 3,5 ppm) y protones metilnicos entre 4-5.5 ppm (Figura 2) (Oliveira et al, 2000). Induccin de priming en tomate
HO

Figura 1. Efecto de la concentracin de las fracciones de los extractos de papa inducida y no inducida, sobre el crecimiento de Fusarium oxysporum. No elicitada (), elicitada extracto crudo (), fraccin 1(), fraccin 2 (), fraccin 3 ().

A
HO

El ensayo de induccin de priming en frutos de tomate, asistido con radiacin ultravioleta en respuesta a la inoculacin con F. oxysporum, mostr que hubo biosntesis de metabolitos secundarios por efecto de la induccin con F. oxysporum y la induccin con luz ultravioleta (Charles et al, 2008; Brindle et al, 1983). Los bioensayos de actividad antifngica, expresados como porcentajes de inhibicin y la tasa de crecimiento, demuestran la activacin de la respuesta fitoalexnica en los frutos de tomate (Figura 3). Los cromatogramas obtenidos de las fracciones de los frutos tratados y no tratados confirman la biosntesis de metabolitos, previamente evaluados por su actividad antifngica (Figura 4). Para los extractos inoculados con el hongo no hay diferencia entre el inducido con UV y el no inducido en trminos de la actividad biolgica. Sin embargo, esta s se manifiesta en la actividad de los extractos no inoculados (Figura 3). Adems, los perfiles cromatogrficos exhiben diferencias entre los inoculados y los no inoculados, observndose la desaparicin de picos en el material control, sin ningn tipo de induccin (Figura 4. SUSI), y los materiales inducidos, principalmente los que se inocularon con F. oxysporum, los cuales se destacan por mostrar un pico con tiempo de retencin de

Figura 2. Espectro de RMN1H de un compuesto obtenido a partir de la fraccin 2 de las muestras de papa inducidas con cobre. (A) Estructura de la fitolalexina rishitina

1,2 min, cuyo espectro UV coincide con el reportado para la rishitina (205 nm) (Mureau et al, 1992) Respecto a la induccin de priming, los cromatogramas confirman la biosntesis de fitoalexinas, no solamente por efecto de la inducin con el hongo, sino tambin por la induccin previa con radiacin ultravioleta. Esto se evidencia en la similitud que presenta este perfil con los perfiles de los extractos ms activos, aunque mostrando claramente una menor concentracin con respecto a estos Aunque, el bioensayo no muestra claramente el efecto de la induccin de priming con la luz UV, el perfil cromatogrfico si demuestra el efecto sobre la biosntesis de fitoalexinas. Lo anterior se debe probable2011 Fitopatologa Colombiana /Volumen 35 No 1

mente a que a determinada concentracin de la fitoalexina ya no se detecte un efecto en la respuesta antifngica debida a la concentracin. CONCLUSIONES Los ensayos con los extractos de tubrculos de papa inducidos y no inducidos con CuCl2 10 mM muestran una actividad antifngica por parte de los extractos de los tubrculos inducidos, y que no es observada en los extractos de los tubrculos sin inducir, sugiriendo que la induccin es capaz de generar una respuesta en los tejidos de papa, que se manifiesta en un aumento de la biosntesis de metabolitos con actividad antifngica. 17

Figura 3. Actividad antifngica de extractos provenientes de de frutos de tomate tratados con radiacin ultravioleta (CUSI), inoculacin con F. oxysporum (SUCI), radiacin ultravioleta + inoculacin con F. oxysporum (CUCI) y testigo no tratado (SUSI). Las barras representan el porcentaje de inhibicin mientras que los cuadros vacos representan la tasa de crecimiento del hongo.

SUSI
SUCI CUSI CUCI

Figura 4. Perfiles cromatogrficos de extractos provenientes de frutos de tomate tratados con radiacin ultravioleta (CUSI), inoculacin con F. oxysporum (SUCI), radiacin ultravioleta + inoculacin con F. oxysporum (CUCI) y testigo no tratado (SUSI)

Durante la caracterizacin fitoqumica cualitativa preliminar de los extractos activos se resalta, la prueba positiva para terpenoides, lo cual es de importancia si se considera que las fitoalexinas de la familia solancea poseen un ncleo sesquiterpnico. Las observaciones realizadas a travs de cromatografa en capa delgada y el espectro de resonancia magntica nuclear de protn de un compuesto purificado sugieren que se trata de un compuesto compatible con un ncleo sesquiterpnico. Los perfiles qumicos diferenciales entre extractos inducidos y no inducidos, las caractersticas estructurales del compuesto purificado del extracto activo y el evidente 18

efecto dosis respuesta de los extractos inducidos en funcin de la actividad antifngica demuestran la activacin de la respuesta fitoalexnica en los tubrculos de papa. Los ensayos de induccin bitica en tomate con F. oxysporum, asistida por radiacin ultravioleta, sugieren que se pueden activar mecanismos de priming en la planta, los cuales pueden potenciar la aparicin de metabolitos con actividad antifngica como un mecanismo de defensa frente al ataque de patgenos. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

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La Clnica de Plantas se realizan actividades de investigacin y extensin a travs de la prestacin de servicios de: Cuantificacin de poblaciones de hongos, bacterias y hematodos en suelos (sin especificar gnero, ni patogenicidad). Cultivos puros de hongos y Determinacin de unidades formadoras de colonias (ufe) de hongos y bacterias sin identificacin (suelo y sustratos). Deteccin molecular de virus fitopatgenos. Cortes histolgicos de vegetales. Diagnstico de una alteracin de origen presumiblemente bitico o abitico. Montajes permanentes de hongos, bacterias y nemtodos (2 lminas). bacterias (2 cajas o tubos por espcimen). Indexacin de esquejes de clavel (5 esquejes). Anlisis microbiolgico de semillas con identificacin (gnero) de hongos y bacterias.

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Las muestras se reciben en el laboratorio 321 de la Facultad de Agronoma (Edificio 500), Universidad Nacional de Colombia, Ciudad Universitaria (Carrera 30 No. 45-03), sede Bogot, de lunes a viernes de 9 am - 12 am y 2 pm - 4pm, acompoadas del Formato de Recepcin de Muestras, correctamente diligenciado, el cual se encuentra en la pgina web de la Clnica de Plantas www.clinicadeplantasun.unal.edu.co

MANEJO INTEGRADO DE LA BACTERIOSIS CAUSADA POR Xanthomonas axonopodis Starr & Garcs EN EL CULTIVO DE GULUPA (Passiflora edulis Sims.)
Eugenio Guerrero-Lpez1, Luz Mery Velandia2 y Lilliana Hoyos-Carvajal1
1

Departamento de Agronoma, Facultad de Agronoma, Universidad Nacional de Colombia, Bogot (Colombia). 2Facultad de Ciencias Agropecuarias, Universidad de Cundinamarca, Fusagasug (Colombia). Correo electrnico de contacto: limhoyosca@unal.edu.co
Artculo Cientfico, recibido para publicacin el 9/05/2011; aceptado el 13/06/2011

RESUMEN
Se evalu la eficacia de los inductores de resistencia Acibenzolar-smetil(0,05 g L-1) y cido saliclico (0,025 g L-1), al igual que Sulfato de cobre (0,75 g L-1) y la prctica de deshoje manual para el control de la Bacteriosis en el cultivo de gulupa en dos localidades del departamento de Cundinamarca (Colombia). Los productos fueron asperjados solos y dentro de un plan de rotacin en forma peridica sobre el follaje de plantas. Estas medidas de saneamiento fueron comparadas con Oxicloruro de cobre (2,5 g L-1) usado convencionalmente por los productores de la regin y un testigo absoluto. En cada tratamiento se evalu la incidencia de la enfermedad, la longitud de ramas centrales, el nmero de hojas, botones florales y frutos. Como parmetros poscosecha se midi el dimetro ecuatorial y polar, peso fresco y seco y los slidos solubles en frutos maduros. Se observ que los inductores de resistencia en las dosis evaluadas impiden el desarrollo de sntomas de bacteriosis y disminuyen sntomas causados por virus y roa. El nmero de estructuras vegetativas y reproductivas es afectado negativamente por la aplicacin de los inductores como consecuencia de un desgaste energtico producido en la planta. El deshoje por s solo no es efectivo para el control de la enfermedad y tampoco el sulfato de cobre, que por el contrario mostr fitotoxicidad en la dosis aplicada. Palabras clave: resistencia sistmica adquirida, rotacin, prcticas culturales, desgaste energtico.

SUMMARY
Integrated management of bacterial spot caused by Xanthomonas axonopodis Starr & Garces in purple passion fruit (Passiflora edulis Sims.) There was evaluated the efficacy of the resistance inductors Acibenzolar-s-metil (0,05 g L-1) and Acid salicilic (0,025 g L-1), as Sulphate of copper (0,75 g L-1) and the practice of manual falling of leaves for the control of the bacterial spot in the crop of purple passion fruit in two localities of the department of Cundinamarca (Colombia). The products were sprayed alone and inside a plan of rotation in periodic form on the foliage of plants. These measurements of sanitation were compared with Copper oxychloride (2,5 g L-1) used conventional by the producers of the region and the untreated control plants. In every treatment there was evaluated the incidence of the disease, the length of central branches, the number of leaves, floral buttons and fruits. As parameters postharvest there measured itself the equatorial and polar diameter, fresh and dry weight and the soluble solids was valued for mature fruits. It was observed that the resistance inductors in the evaluated dosages prevent the development of symptoms of like bacterial spot and diminish symptoms caused by virus and scab. The number of vegetative and reproductive structures is affected negatively by the application of the inductors as consequence of an energy expense produced in the plant. The falling of leaves for yes is not only effective for the control of the disease or the sulphate of copper, which on the contrary showed phytotoxicity in the applied dosage. Keywords: systemic acquired resistance, rotation, cultural practices, energy expense

INTRODUCCIN
El cultivo de la gulupa ( Passiflora edulisSims.) se ha convertido en una opcin agrcola atractiva para pequeos, medianos y grandes productores, debido a su alta productividad, su gran potencial de uso y su buena rentabilidad (Isaacs, 2009). En los ltimos aos se han incrementado los volmenes exportados, as como el rea cultivada en Colombia; llegndose a exportar 1860,89 toneladas de gulupa en fresco en el ao 2010, por un valor de 7,54 millones de dlares, principalmente hacia los pases de la Comunidad Europea (MADR, 2010). Una de las principales limitantes en la produccin y comercializacin de este cultivo y otras pasifloras es su susceptibilidad al ataque de diversas enfermedades, como es el caso de la Bacteriosis o Mancha de aceite, causada por la bacteria Xanthomonas axonopodis Starr &

Garcs Este patgeno ataca la parte area de la planta afectando hojas, tallos y frutos, en forma sistmica (Bentez, 2010). Actualmente el manejo de la enfermedad es limitado debido a que este se basa principalmente en la utilizacin de antibiticos, los cuales no han sido eficaces para el control de la bacteria (Farfn y Hoyos-Carvajal, 2010). Lo anterior ha conducido a que se propongan diversas medidas de control de la Bacteriosis, bajo el esquema del manejo integrado, utilizando todas las herramientas de manejo disponibles, las cuales son de carcter preventivo y ninguna de ellas por si sola es efectiva para controlar la enfermedad (Miranda, 2004 citado por Brancaglione et al., 2009). Dentro de stas, est la resistencia inducida en plantas con el uso de agentes qumicos (Riveros, 2010); en razn de que las plantas disponen de una gran cantidad de seales, que les permiten reconocer agentes
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extraos y activar todos sus mecanismos de defensa, que incluye reacciones qumicas y/o bioqumicas, para alertar a las clulas, y activar la produccin de sustancias txicas, enzimas u otros compuestos, que inhiban la penetracin y posterior colonizacin de la planta por parte del patgeno (Dangl y Jones, 2001 citado por Riveros, 2010). En teora, las plantas poseen en forma constitutiva, todos los genes necesarios para responder a la agresin y estn de manera permanente en la planta, pero en ciertos casos conviene inducirla o activarla a travs del uso de la resistencia sistmica inducida (RSI) y la resistencia sistmica adquirida (RSA) (Riveros, 2010). Mientras la RSI consiste en un proceso de proteccin activa (sistmica) de una planta, donde actan como inductores las rizobacterias promotoras de crecimiento; la RSA se presenta por la mediacin activa de un inductor (aplicacin exgena) que hace 21

que se desencadenen uno o varios mecanismos de defensa contra ese patgeno en particular o inespecfico contra otros potenciales agresores, produciendo una seal sistmica, protegiendo diferentes rganos de la misma planta, en un amplio espectro y duracin. Entre los inductores de RSA se encuentra el cido saliclico (AS) sus derivados y sus anlogos funcionales, el cido nicotnico y el acibenzolar-S-metil(ASM), el cual fue el primer qumico sinttico desarrollado que funciona estrictamente como activador de RSA (Ruess et al.,1996, citado por Riveros et al., 2004). Se considera que el cido jasmnico (AJ) y el etileno (E) potencian la sealizacin para la RSA por vas diferentes a la dependiente del AS (Riveros, 2010; Pieterse y Loon, 1999). En varios trabajos se han demostrado las bondades del uso del AS y el ASM para el control de hongos, bacterias, virus y algunas plagas en cultivos de tomate chonto (Lycopersicun esculentum), pepino (Cucumis sativus), tabaco (Nicotiana tabacum), frjol caup (Vigna unguiculata), girasol (Helianthus annuus), soya (Glycine max), canola (Brassica napus), crcuma (Curcuma longa), meln (Cucumis melo), pera (Pyrus communis), tomate de rbol (Solanum betacea) y plantas ornamentales como el ciclamen (Cyclamen persicum) (Cole, 1999; Pappu et al., 2000; Latunde-Dada y Lucas, 2001; Amborab et al., 2002; Prats et al., 2002; Prez et al., 2003; Smith-Becker et al., 2003; Soylu et al., 2003; Sparla et al., 2004; Gurgel et al., 2005; Pradhanang et al., 2005; Elmer, 2006; Malolepsza, 2006; Hacisalihoglu et al., 2007;AboElyousr y El-Hendawy, 2008; Roberts et al., 2008; Wu et al., 2008; Debona et al., 2009; LaMondia, 2009;Mandal et al., 2009; Meja et al., 2009;Moraes et al., 2009; Vronsi et al., 2009; Radhakrishnan et al., 2010). El objetivo de este trabajo fue evaluar el grado de control que ejerce la aplicacin de los inductores de RSA, AS, ASM, productos cpricos (Sulfato y Oxicloruro de Cobre) y la prctica del deshoje sobre la incidencia de la Bacteriosis en el cultivo de gulupa, para poder incluirlos como una alternativa o herramienta de manejo adicional de esta enfermedad.

promedio: 17,7C, humedad relativa: 77%, precipitacin:1700 mm/ao);en cultivos comerciales de gulupa entre los 12 y 24 meses de edad, dentro de estos se seleccion una parcela de780 m2. En cada una de las parcelas experimentales, se aplicaron nueve tratamientos. Tratamientos T1: cuatro aplicaciones de Sulfato de cobre (SC) en dosis de 0,75 g L-1cada ocho das T2: cuatro aplicaciones de Acibenzolar-SMetil (ASM) en dosis de 0,05g L-1 cada 20 das. T3: cuatro aplicaciones de Acido saliclico (AS) en dosis de 0,025g L-1 cada 20 das. T4: dos ciclos de rotacin de Sulfato de cobre, Acibenzolar-S-Metil y cido saliclico (SC/ASM/AS)en las mismas dosis y frecuencias mencionadas anteriormente T5: dos ciclos de rotacin (SC/ASM/AS) en las mismas dosis y frecuencias mencionadas anteriormente ms recoleccin semanal de hojas enfermas con Bacteriosis antes de cada aplicacin. T6: recoleccin semanal de hojas afectadas por Bacteriosis nicamente T7: testigo comercial realizando cinco aplicaciones de Oxicloruro de cobre (OC) en dosis de 2,5 g L-1, ms recolecciones semanales de hojas afectadas por Bacteriosis. T8: testigo comercial realizando cinco aplicaciones de OC en dosis de 2,5 g L-1, sin recolecciones manuales de hojas afectadas. T9: testigo absoluto (Plantas sin ningn tipo de deshoje, ni aplicacin). Aplicacin de Inductores y productos cpricos El AS utilizado, se extrajo a partir del cido acetil saliclico de acuerdo con el protocolo sugerido por Patio (2009).El ASM al 50%,proviene de un producto comercial. El SCse adquiri en la presentacin de fertilizante foliar con un contenido de cobre del 24%. Se emple el mismo OC utilizado por los productores al 58.8%. Cada uno de los productos se disolvi en el volumen de agua calculado para cada planta (0,75 L) y fueron aplicados con atomizador a cada una de las plantas segn el tratamiento realizando un buen cubrimiento del follaje total de la planta. Parmetros monitoreados Se realizaron mediciones semanales durante 18 semanas (semana 17 a 35 del 2010), registrando datos antes y despus de la aplicacin de los diferentes tratamientos, partiendo de infecciones naturales. Se registraron variables relacionadas con la enfermedad, fisiologa de la planta y calidad poscosecha del fruto:
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Parmetros relacionados con la enfermedad. Semanalmente se cuantific el nmero de individuos enfermos sobre el total de la poblacin (Incidencia). Parmetros fisiolgicos. Se cuantificaron tres variables, segn se describe a continuacin: Longitud de ramas: Se midi el crecimiento semanal de las mismas ramas en donde se evalu la severidad. Para esto se utiliz un flexmetroque fue desplegado desde la base de cada rama hasta el pice para calcular la longitud. Nmero de hojas: Se cont semanalmente el nmero de hojas emitidas en las mismas ramas del tercio medio marcadas previamente en cada tratamiento. Nmero de botones florales y frutos: En las mismas ramas, se realiz el conteo semanal de estas estructuras. Parmetros poscosecha de frutos maduros. Se tuvieron en cuenta cuatro variables tal como se describe a continuacin: Dimetro ecuatorial y polar: medido con un calibrador pie de rey. Peso fresco determinado en una balanza electrnica marca Kern 440-33. Peso seco: los frutos se sometieron a una temperatura de 100C durante tres das en un horno marca Thelco Precision Scientific y se pesaron en una balanza electrnica marca Startorius Laboratory L310. Slidos solubles: determinados a travs de los grados Brix medidos con un refractmetro marca Carlzeiss Jena. Calidad externa y presentacin de cada uno de los frutos cosechados en cada tratamiento: en donde se tuvo en cuenta la presencia de daos mecnicos en la epidermis y lesiones por ataque de patgenos o insectos para finalmente clasificarlos como fruto nacional o exportacin. Diseo experimental Los tratamientos se distribuyeron en un diseo completamente al azar con tres repeticiones. Cada repeticin const de una planta de gulupa en edad productiva. En cada parcela se aleatoriz la distribucin de los tratamientos, dejando plantas intermedias para separar los tratamientos. Los datos fueron sometidos a un anlisis de varianza (ANOVA) y a prueba de comparacin mltiple de Duncan (P0,05). El anl isis estadstico se realiz con el programa SAS versin 9.0 (SAS Institute Inc., Cary, NC).

MATERIALES Y MTODOS
Localizacin El ensayo se realiz en dos localidades de la regin del Sumapaz, en el departamento de Cundinamarca (Colombia), en cuatro parcelas experimentales: dos en la vereda de San Francisco en el municipio de Tibacuy, (altura: 1800 msnm, temperatura promedio: 18C, humedad relativa promedio: 85%, precipitacin: 1300 mm/ao) y dos parcelas en la vereda de Aposentos en el municipio de Venecia (altura: 1900 msnm, temperatura 22

RESULTADOS Y DISCUSIN
Incidencia de la enfermedad

Durante las primeras semanas de desarrollo de los experimentos, el comportamiento de la incidencia se mantuvo igual, no encontrando plantas con sntomas de la enfermedad en ninguno de los tratamientos evaluados. A partir de la semana 23 del ao, se empezaron a observar lesiones tpicas de Bacteriosis en hojas bajeras e internas de las plantas que conformaban el testigo absoluto (Figura 1A) y el tratamiento T1 en donde se aplic SC, muy posiblemente debido a que este producto es el menos efectivo para el control de la bacteria; adems de facilitar el ingreso del patgeno por las heridas causadas a las plantas con la quemazn. Dos semanas despus se present un comportamiento similar de la incidencia, pero adems se empezaron a observar lesiones en el tratamiento T8 en el que se realizaron aplicaciones de OC (Figura 2). En la semana 27 la enfermedad se empez a presentar en el tratamiento T6 el cual consisti en el deshoje semanal. Esto sugiere que el deshoje retrasa la aparicin de sntomas con respecto al testigo absoluto, como consecuencia de una mejor aireacin y penetracin de luz al interior de la planta, pero no implica el control del patgeno. En la semana 28 se empez a observar la aparicin de la enfermedad en el tratamiento T7 en donde se aplic OC combinado con deshojes semanales. En las semanas siguientes y hasta la ltima semana de realizacin de los ensayos (semana 35) la incidencia de la enfermedad aument gradualmente en los tratamientos T1, T6, T7, T8 y T9; llegndose a presentar el mayor porcentaje de incidencia acumulada en la semana 32 (Figura 2). Los tratamientos en los que se aplicaron productos qumicos inductores de resistencia (AS y ASM) solos (T2 y T3) y en rotacin (T4 y T5) no permitieron la colonizacin de la bacteria ni la progresin de sntomas durante el transcurso de tiempo en el que se desarrollaron estos ensayos (Figura 1B y Figura 2). Solo en el tratamiento T4 se present un bajo porcentaje de incidencia de la enfermedad a partir de la semana 29, la cual se detuvo por completo en la semana 33 en donde ya no se observaron sntomas ni avance de los mismos en la planta (Figura 3). Lo anterior sugiere que el uso de AS y ASM solos y en un plan de rotacin controla y suprime eficientemente la enfermedad porque impide la penetracin y posterior colonizacin de la bacteria en la planta, gracias al desencadenamiento de los mecanismos de defensa a travs de la RSA. Es necesario resaltar que las aplicaciones de los inductores de resistencia se hicieron antes de la aparicin de los primeros sntomas de la enfermedad; es decir en forma preventiva. La eficacia encontrada en el presente trabajo de los inductores de resistencia AS y su

Figura 1. Comportamiento de la incidencia de bacteriosis en la semana 28 de 2010. A, Testigo absoluto (T9). B, cido saliclico (T3).

Figura 2. Comportamiento semanal del porcentaje de incidencia de bacteriosis en plantas de gulupa para cada tratamiento a travs de las semanas del ao. SC (Sulfato de Cobre), ASM (Acibenzolar-s-Metil), AS (cido Saliclico), R (Rotacin), R+DH (Rotacin + Deshoje), DH (Deshoje), OC+DH (Oxicloruro de Cobre + Deshoje), OC (Oxicloruro de Cobre), TEST (Testigo absoluto).

Figura 3. Porcentaje de incidencia acumulada de bacteriosis en las 4 parcelas experimentales durante el tiempo de evaluacin de los experimentos. * barras con letras distintas indican diferencia significativa segn la prueba de Duncan (P0,05). Las barras sobre las columnas indican desviacin estndar

anlogo funcional el ASM para el control de la Bacteriosis en cultivos de gulupa, lo convierte en una alternativa viable y ambientalmente sostenible para el control de dicha enfermedad. Zuluaga et al., 2007 mencionan
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que el uso de estas sustancias inductoras de resistencia para el control de Sigatoka negra (Mycosphaerella fijiensis) en banano logr reducir la aplicacin de fungicidas convencionales entre el 46 y el 100%. Adems, 23

Soylu et al., 2003 afirman que el ASM presenta bajo impacto para los humanos y el medio ambiente por lo que es viable su uso tanto en cultivos de campo, como en invernadero. Por otro lado, la ineficacia de productos cpricos empleados en este estudio para detener la aparicin y la progresin de sntomas causados por X. axonopodis ha sido ampliamente documentada en diversos trabajos en los que se reportan cepas de Xanthomonas tolerantes al cobre (Aguiar et al., 2003; Martin et al., 2004; Voloudakis et al., 2005), esto hace considerar el uso de productos inductores de resistencia, pues minimizan el riesgo de generar tolerancia en los microorganismos fitopatgenos que atacan la gulupa, ya que stos tienen menos probabilidad de vencer los mecanismos involucrados en la resistencia sistmica adquirida (RSA) que otros mtodos de control como la resistencia gentica de plantas transgnicas o fungicidas convencionales (Malamy et al., 1996 citado por Cole, 1999; Riveros et al., 2002). Observaciones de campo en los tratamientos con inductores de resistencia permiten notaruna reduccin de sntomas causados por enfermedades como la Virosis y la Roa causada por Cladosporium sp., mejorando as la calidad comercial de los frutos de gulupa. Esto se explica porque la resistencia sistmica adquirida (RSA) es de amplio espectro causando proteccin a tejidos no infectados a un amplio rango de patgenos dentro de los que se encuentran hongos, bacterias, virus e incluso algunas plagas como mosca blanca (Ryals et al., 1995 citado por Hunt et al., 1996; Moraes et al., 2009). Comportamiento del nmero de estructuras vegetativas y reproductivas por rama con la aplicacin de los productos qumicos La prctica del deshoje, promovi significativamente un aumento de la longitud de la rama, seguido por la aplicacin de OC ms deshoje y el testigo absoluto. Por el contrario este parmetro se reduce cuando se realiza la rotacin de los inductores combinado con el deshoje manual y la aplicacin de SC. La aplicacin de ASM y AS no aumentan la longitud de las ramas en gulupa (Tabla 1). De igual forma, el nmero de hojas es mayor cuando se emplea la prctica del deshoje manual y es menor cuando se aplic el SC en forma individual. Esto pudo haber sucedido por la fitotoxicidad que present la aplicacin de este producto. En los tratamientos (T1, T4 y T5) en donde se aplic SC, se observaron sntomas severos de fitotoxicidad; la cual se present como quemazones blanquecinas en bordes y distribuidas en toda la superficie de la hoja en forma circular, en donde hubo contacto de las gotas de la aspersin con el tejido. En frutos se observaron sntomas similares, afectando la calidad comercial de stos. Estos sntomas 24

se fueron acentuando cada vez ms en el tratamiento T1 debido a la frecuencia de aplicacin de SC (cada 8 das). Gilardi et al., (2010) al utilizar productos cpricos para el control de Pseudomonas syringae en tomate, tambin observaron problemas de fitotoxicidad, la cual se manifest como una reduccin en la altura de las plantas. Con respecto al nmero de botones florales, se observa un promedio muy bajo de estos en todos los tratamientos; siendo el valor ms alto el presentado en el testigo absoluto, seguido por el tratamiento de deshoje; mientras que la rotacin de los inductores, combinado con deshojes y las aplicaciones SC presentan los menores promedios (Tabla 1).

planta (Barbosa et al., 2008; Walters y Heil, 2007; Durrant y Dong, 2004). Adems la acumulacin de los metabolitos secundarios a altas concentraciones causa efectos fitotxicos. Este inconveniente ha sido trabajado y solventado con la incorporacin de cationes (Cu, Mn y Zn) presentes en enmiendas orgnicas o adicionadas externamente en el sustrato. Estos cationes atrapan y reducen los radicales libres de oxigeno que se acumulan durante el desarrollo de la enfermedad, coadyuvan al transporte de iones calcio en el mbito celular, incrementa la accin de hormonas de crecimiento y la actividad del RNA, entre otras tareas celulares (Riveros et al., 2004).

Tabla 1. Prueba de comparacin de medias para las variables longitud de ramas, nmero de hojas, botones florales y frutos por rama en las plantas de gulupa evaluadas. No. Trat. 1 2 3 4 Tratamiento Estructuras Vegetativas y Reproductivas Longitud rama No. Botones No. Hojas No. Frutos (cm) florales 65,99 f* 12,91 e 0,37 c 0,07 bc 69,63 de 15,77 bc 0,52 bc 0,11 bac 67,08 fe 14,8 d 0,45 bc 0,06 dc 71,73 dc 15,32 dc 0,50 bc 0,04 d 0,01 e 0,10 bac 0,14 a 0,12 ba 0,09 bac la prueba de

Sulfato de cobre (SC) Acibenzolar-s-Metil (ASM) Acido saliclico (AS) Rotacin (SC/ASM/AS) Rotacin (SC/ASM/AS) + Des5 hoje 62,56 g 13,48 e 0,19 d 6 Deshoje 78,30 a 16,47 a 0,70 ba Oxicloruro de cobre (OC) + 7 deshoje 75,36 ba 16,37 ba 0,62 bc 8 Oxicloruro de cobre (OC) 74,12 bc 15,79 bc 0,45 bc 9 Testigo absoluto 75,67 ba 16,1 ba 1,00 a *Promedios con letras distintas en la misma columna indican diferencia significativa segn Duncan (P0,05).

Finalmente, el nmero de frutos/rama tambin presenta un bajo promedio, siendo el tratamiento de OC ms deshoje el de mayor nmero, mientras que la rotacin de los inductores presenta la ms baja produccin. En trminos de parmetros fisiolgicos, el ASM fue el que siempre present mayores valores con respecto al AS cuando estos fueron aplicados en forma individual, pero los valores obtenidos con estos inductores de resistencia son muy inferiores a los dems tratamientos e incluso al testigo absoluto. Es de tener en cuenta que la induccin de resistencia con el uso de inductores qumicos tiene un costo fisiolgico para la planta (teora del costo de la defensa), pues la aplicacin de inductores de resistencia puede reducir el tamao de la planta, presentar prdida de dominancia apical, producir entorchamiento de hojas, disminucin de la fertilidad, reduccin en la produccin de la planta e inclusive efectos negativos en la simbiosis de las plantas con microorganismos benficos como las micorrizas o Rhizobium(Barbosa et al., 2008; Walters y Heil, 2007; Durrant y Dong, 2004). Hay que tener en cuenta que la activacin de la resistencia tiene lugar a altas demandas de energa o puede hacer que se desven metabolitos y energa destinada para el crecimiento y otros procesos importantes en la
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Comportamiento de parmetros poscosecha con la aplicacin de los productos qumicos El tratamiento T7 (OC + Deshoje) present los valores ms altos de peso fresco, peso seco y dimetro ecuatorial y polar en los frutos cosechados con respecto a los dems tratamientos; mientras que por el contrario el tratamiento T4 (Rotacin (SC/ASM/AS) es el que presenta el menor valor para estos mismos parmetros (Tabla 2). No se observan diferencias significativas para estos mismos parmetros entre los tratamientos T1(SC), T2 (ASM) y T3 (AS) pero si se observan diferencias entre estos tratamientos y el testigo absoluto siendo este ltimo un poco superior en estos parmetros a excepcin del peso seco de los frutos (Tabla 2). En cuanto a los slidos solubles, los tratamientos que presentaron la mayor concentracin de grados Brixfueronel T5 (Rotacin (SC/ASM/AS) + Deshoje), T4 (Rotacin (SC/ASM/AS)), T1 (SC) y T3 (AS),no habiendo diferencias significativas entre estos (Tabla 2). El tratamiento en el que se obtuvo la menor concentracin de grados Brixes el T2 (ASM), seguido de los tratamientos con OC (T7 y T8) y el deshoje (T6). Se compararon estos mismos parmetros

Tabla 2. Prueba de comparacin de medias para las variables peso fresco, peso seco, dimetro ecuatorial, dimetro polar y slidos solubles evaluadas en frutos maduros de gulupa. No. Trat. 1 2 3 4 Parmetros Poscosecha Dimetro Peso Fresco Dimetro Peso Seco (g) ecuatorial (g) polar (cm) (cm) 54,59 ba* 9,45 ba 5,46 b 5,09 bac 53,36 ba 9,84 ba 5,45 b 5,06 bac 53,93 ba 9,67 ba 5,37 b 5,12 bac 50,65 b 9,06 b 5,37 b 4,87 d 9,49 ba 9,33 ba 10,11 a 5,38 b 5,56 ba 5,74 a 4,97 dc 5,02 bdc 5,23 a Slidos Solubles ( Brix) 14,33 a 13,32 c 14,27 a 14,40 a 14,48 a 13,69 cb 13,72 cb

Tratamiento

Sulfato de cobre (SC) Acibenzolar-s-Metil (ASM) Acido saliclico (AS) Rotacin (SC/ASM/AS) Rotacin (SC/ASM/AS) + 55,19 a 5 Deshoje 52,64 ba 6 Deshoje Oxicloruro de cobre (OC) + 56,58 a 7 deshoje 55,61 a 8 Oxicloruro de cobre (OC) 55,56 a 9 Testigo absoluto Plantas enfermas con bacteriosis 52,61 *Promedios con letras distintas en la misma columna Duncan (P0,05).

10,09 a 5,54 b 5,15 bac 13,48 cb 9,42 ba 5,56 ba 5,17 ba 13,79 b 7,86 5,45 5,10 12,05 indican diferencia significativa segn la prueba de

de poscosecha en frutos maduros cosechados de plantas severamente afectadas por bacteriosis con los tratamientos aplicados y se encontr que el peso seco de los frutos y los slidos solubles son notoriamente reducidos por la enfermedad. Esto es muy importante porque aunque lo que ms limita la comercializacin de los frutos de gulupa es su calidad y aspecto externo (presencia o ausencia de daos mecnicos o lesiones causadas por patgenos en la epidermis como roa), en un futuro prximo la calidad organolptica puede convertirse en un requisito indispensable para la comercializacin de la gulupa, diferenciando el mercado entre los pases productores de este frutal de exportacin.

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
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CONCLUSIONES
El uso de los inductores de resistencia AS(0,025 g L-1) y su anlogo funcional el ASM (0,05 g L-1)es una herramienta novedosa y viable para el control de la Bacteriosis en el cultivo de gulupa, pero debe estar enmarcada dentro del manejo integrado. La aplicacin de estos productos se debe realizar en forma preventiva antes de la aparicin de los primeros sntomas de la enfermedad, ya que estos productos no son biocidas y no van a actuar directamente sobre la bacteria, sino que van a activar los mecanismos de defensa en la planta. Adems debe llevarse un estricto manejo de la fertilizacin, con el fin de compensar los efectos adversos que tiene la aplicacin de estos inductores de resistencia sobre el nmero de estructuras vegetativas y reproductivas y algunos parmetros poscosecha, para no comprometer la produccin y rentabilidad de los cultivos como consecuencia de un alto gasto energtico y una sobreproduccin de metabolitos secundarios indeseables para el ptimo desarrollo fisiolgico del cultivo.

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MANEJO INTEGRADO DEL MILDEO VELLOSO (Peronospora sparsa Berkeley) DE LA ROSA *

Nathali Lpez-Cardona y Jairo Castao Zapata Universidad de Caldas, Facultad de Ciencias Agropecuarias Correo electrnico contactos: nathali.lopez.cardoaplicadona@gmail.com; jairo.castano_z@ucaldas.edu.co
*Artculo de Revisin de literatura, recibido para publicacin el 21/04/2011; aceptado el 18/05/2011

RESUMEN
El Mildeo velloso ( Peronospora sparsa) de la rosa, es una de las enfermedades ms limitantes del cultivo de rosa en Colombia. Aunque recientemente se han publicado algunos trabajos de investigacin sobre la epidemiologa y manejo de la enfermedad, no existe un programa definido de Manejo integrado para la enfermedad. Esta revisin pretende integrar resultados de investigaciones con diferentes prcticas de manejo de la enfermedad, a fin de establecer un programa de Manejo Integrado para el Mildeo velloso de la rosa en Colombia. Palabras clave: exclusin, erradicacin, proteccin, inmunizacin.

SUMMARY
Integrated management of the downy mildew (Peronospora sparsa Berkeley) of rose The Downy mildew ( Peronospora sparsa) of rose is one of the most important diseases of the crop in Colombia. Although several papers have been recently published about the epidemiology and management of the disease, there is not a program of integrated management for the disease. This review aims to integrate research results with different management practices, to establish an integrated management program for the Downy mildew of rose in Colombia. Key words: exclusion, eradication, protection, immunization

INTRODUCCIN
El Manejo Integrado de Enfermedades, MIE, es una tecnologa efectiva para los floricultores y ofrece una alternativa al uso excesivo de fungicidas con el fin de disminuir la contaminacin ambiental, los riesgos a los operarios y mejorar la rentabilidad de los sistemas de produccin. El MIE involucra actividades en programas de produccin que reducen las enfermedades introducidas, y mantienen los daos de tal manera que causen prdidas econmicas mnimas (Engelhard, 1991). ltimamente los compradores de flores en todo el mundo estn interesados en adquirir flores producidas mediante prcticas sanas desde un punto de vista ambiental. Por esto, los programas de ECO-etiquetado como el MPS (Milieu Project Sierteelt) de Holanda, el programa Florverde de Colombia, el Flower Label Program (FLP) de Alemania y el Kenya Flower Label, se adoptan cada vez ms en el mundo (Pizano, 2001). Colombia posee una ventaja competitiva importante para la produccin de flores tropicales. En los ltimos 30 aos el pas ha incrementado sus divisas, pasando de unos cuantos miles de dlares anuales a ms de US $1.114,11 millones de dlares en el 2007. En la actualidad Colombia es el segundo exportador de flores del mundo, con una participacin del 14 % sobre el total de las exportaciones mundiales, con un rea cultivada de 7.290 ha (Asocolflores, 2007). Peronospora sparsa Berkeley, es uno de los patgenos ms limitantes en los cultivos de rosa bajo invernadero en el mundo. El primer reporte de este microorganismo fue realizado en Inglaterra en1862, y al poco

tiempo se registr en Europa continental, especficamente en los pases escandinavos y la antigua Unin Sovitica. En 1880, se report en el medio oeste de los Estados Unidos, y desde all se dispers por el mundo. Aunque la literatura registra a P. sparsa como un patgeno endmico del rea norte del trpico de Cncer, en la actualidad el patgeno causa daos significativos en pases tropicales y subtropicales como Brasil, Colombia, Israel, Egipto y Nueva Zelanda (Horst, 1983; Arbelez, 1999; Walter et al., 2004). En Colombia existen registros de la ocurrencia del Mildeo velloso desde la dcada de los 70`s (Martnez, 2002); y actualmente la enfermedad es el principal problema fitosanitario de la rosa en la sabana de Bogot. En 1999, se estim en cinco millones de dlares las prdidas por la enfermedad (Ziga, 2003) y actualmente se considera que ocasiona una disminucin del 10% en la produccin total de rosas en el pas, lo que corresponde a US$ 20.000 ha- en variedades susceptibles (Gmez, 2004; Surez, 1999). Debido a la importancia del Mildeo velloso de la rosa y a la ausencia de un enfoque de MIE para esta enfermedad, este trabajo pretende integrar resultados de investigaciones con diferentes prcticas de manejo, a fin de establecer un programa de Manejo Integrado para el Mildeo velloso de la rosa en Colombia. DIAGNSTICO OPORTUNO: CLAVE DEL MANEJO INTEGRADO DE LA ENFERMEDAD El reconocimiento de los sntomas tpicos de la enfermedad, esencialmente en sus primeros
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estados, es la clave para la realizacin del manejo oportuno del patgeno. Cuando el inculo inicial del patgeno es muy bajo, es decir, cuando la enfermedad se encuentra en las primeras fases de desarrollo, se puede optimizar el beneficio del control qumico. As mismo, la identificacin correcta de la presencia del patgeno servir de base para la eleccin correcta de los fungicidas ms efectivos, as como la planificacin de otras prcticas compatibles de manejo de la enfermedad. Sntomas del mildeo velloso y signos del patgeno. Los sntomas se manifiestan sobre hojas, tallos, pednculos, cliz y ptalos de las plantas de rosa, aunque generalmente la infeccin es restringida a los tejidos jvenes de las plantas. Sobre la haz de las hojas se desarrollan manchas irregulares de color rojizo-prpura a pardo-oscuro, las cuales se rodean de un halo clortico (Figura 1a), mientras que en el envs se producen los signos del patgeno. Una observacin a simple vista, permite observar una esporulacin de color blanco en el envs de las hojas u otros rganos afectados, que corresponden al conjunto de esporangiforos y esporangios del patgeno, que dan la apariencia vellosa caracterstica de la enfermedad (Horst, 1983; Arbelez, 1999; Hollier et al., 2001). Una observacin al microscopio, permite la diferenciacin del patgeno, debido a que los esporangiforos poseen una tpica ramificacin dicotmica, con pices agudos, y las ramas forman un ngulo ms o menos agudo (Figura 1b). La enfermedad puede inducir defoliacin severa (Flrez, 1996; Restrepo, 1996) y es 27

El manejo de la enfermedad puede ser logrado a travs de la integracin de cuatro principios fundamentales, formulados por Whetzel (1929): exclusin, erradicacin, proteccin, e inmunizacin, los cuales se detallan a continuacin: Exclusin Uno de los controles ms efectivos es mantener el patgeno lejos de la planta hospedante. Esto se puede lograr mediante el empleo de una o ms medidas generales, las cuales involucran tcticas legales de control. Segn Castao-Zapata (1994), la exclusin involucra: Exclusin mediante intercepcin y rechazo: Implica inspeccionar el material vegetal. Las rosas para exportacin, son inspeccionadas no solamente en el puerto de entrada al pas, sino tambin en el mar abierto an en el mismo sitio de origen para detectar la presencia de la enfermedad. S se encuentra la presencia del patgeno en el material, este puede ser rechazado y negrsele la entrada al pas de destino o al rea dnde se desea introducir. Por otra parte, el material tambin puede ser rechazado si se sabe que proviene de un rea dnde el patgeno es una amenaza. Exclusin mediante intercepcin y eliminacin: Involucra el proceso anterior, pero en lugar de rechazar todo el envo, se remueve individualmente el material enfermo y se destruye. Prohibicin: Es una medida mediante la cual se previene por Ley, la entrada de ciertos materiales al pas o rea de destino. Este proceso incluye las Cuarentenas.

Figura 1. a. Sntomas tpicos del Mildeo velloso. b. Caractersticas del hongo. Fotografas: Cortesa del Ing. Agr. Carlos Fernando Castillo.

comn que los sntomas foliares se confundan con quemaduras o toxicidad inducidas por pesticidas. Sobre los tallos, cliz y pednculos, la enfermedad se manifiesta como manchas prpuras a negras que varan en tamao e incluso pueden coalescer produciendo la muerte de ramas y momificacin de botones florales (Horst, 1983; Hollier et al., 2001; Infoagro, 2004) propiciando la invasin secundaria por Botrytis cinerea Pers.:Fr. (Aegerter et al., 2002). Ciclo de vida de P. sparsa. Normalmente sobrevive mediante oosporas, micelio en tallos, hojas, brotes, spalos y coronas. En Colombia se crea que el patgeno no produca oosporas, conocidas como estructuras de resistencia sobrevivencia, sin embargo, Gmez y Arbelez (2004), demostraron la presencia de estas estructuras en cultivos comerciales de rosa en el pas. Los esporangios pueden ser producidos por periodos largos de tiempo en condiciones de humedad relativa alta (>85%) y condiciones frescas de temperatura (18C). Estos pueden ser diseminados y depositados por el viento por salpique de gotas de agua lluvia de riego, germinan y penetran directamente a travs de la cutcula y la epidermis; el microorganismo se alimenta de las clulas del parnquima por medio de haustorios y una profusa red de micelio intercelular (Michelmore et al., 1988). Los esporangiforos y esporangios emergen por los estomas del envs de las hojas y los esporangios son diseminados nuevamente para iniciar un nuevo ciclo de infeccin (Horst, 1983). Epidemiologa. Las condiciones ms favorables para el desarrollo del patgeno bajo invernadero corresponden a temperaturas que oscilan entre 15 y 20 C durante el proceso de 28

infeccin y de 20 a 25 C para la colonizacin del patgeno. La infeccin es influenciada por la presencia de una lmina de agua libre sobre la superficie del tejido por un perodo mnimo de dos horas, sin embargo, el proceso infectivo se incrementa cuando dichas condiciones de humedad superan las 10 horas (Aegerter et al., 2003). En la sabana de Bogot, la temperatura ptima para la germinacin de los esporangios es 14 C, y se requiere un periodo mnimo de cuatro horas de agua libre sobre los tejidos para que ocurra el proceso infectivo del patgeno. La esporulacin del patgeno ocurre principalmente cuando se presenta una humedad relativa superior al 85% y temperaturas que oscilan entre 18 y 22 C (Gmez, 2004; Gmez y Arbelez, 2004). A 10 C el periodo de latencia de P. sparsa oscila entre 6 y 7 das a, mientras que a una temperatura de 18 a 22 C, el periodo se reduce a solo 3 5 das. Con respecto al perodo de incubacin, puede variar entre siete y ocho das bajo condiciones de invernadero (Gmez y Arbelez, 2003). La infeccin de este patgeno se produce tanto por la haz como por el envs de las hojas (Filgueira, 2004).

Erradicacin Implica remover, eliminar o destruir el patgeno en un rea en una planta individual donde sea establecido. En otras palabras se trata de establecer estrictas medidas de SANIDAD. Uso de material de siembra libre del patgeno. Otro punto clave del Manejo Integrado es comenzar con material de siembra libre del patgeno. Debido a que la rosa es propagada vegetativamente, existe un mayor riesgo de transmisin de la enfermedad. La produccin de material de propagacin limpio, partiendo de plantas certificadas producidas mediante tcnicas de multiplicacin in vitro, por termoterapia, se constituyen en una alternativa importante para el establecimiento y/o renovacin de reas productivas. Aegerter et al. (2002), demostraron que la inmersin de esquejes de rosa, variedad

PRINCIPIOS INTEGRADO (MIE)

DEL MANEJO DE ENFERMEDADES

Un programa sanitario de plantas ornamentales, debe garantizar la salud del material vegetal, proporcionar los tratamientos culturales para evitar el desarrollo de enfermedades, y hacer los arreglos necesarios para identificar y tratar correctamente los problemas que surgen. La integracin de estos principios es el secreto de una gestin eficaz (Daughtrey y Benson, 2005).
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'Manetti, en Metalaxil Mefenoxam en dosis de 100 a 10.000 mg i.a./L por 10 min, y agua caliente a 44C por 15 min, redujo significativamente la incidencia de la enfermedad (ABCPE) de 63 a 76. El xito del control del Mildeo velloso de la rosa por la inmersin de esquejes en fungicidas o agua caliente, soporta los resultados previos de que le patgeno puede sobrevivir en tallos. De esta forma, los tratamientos con inmersin de esquejes pueden retrasar el comienzo de una epidemia y reducir la severidad de la enfermedad (Aegerter et al., 2002). Erradicacin de tejido enfermo. El tejido afectado puede ser eliminado mediante la realizacin de podas sanitarias, y de esta forma, se reduce la cantidad de inculo inicial del patgeno que puede iniciar una epidemia. Los restos de material vegetal deben ser incinerados a fin de erradicar completamente el patgeno. Manejo de hospedantes alternos. P. sparsa tiene un rango muy estrecho de hospedantes, puede afectar los gneros Rosa, y Rubus como R. fruticosu L., R. arcticus L. y R. chamaemorus L. (Lindqvist-Kreuze et al., 2002; Walter et al., 2004); recientemente se ha indicado que es el agente causante del Mildeo velloso de la mora (Rubus glaucus Bentham) en Venezuela (Montilla et al., 2003) y Colombia (Tamayo, 2001). Hall et al. (1992), reportaron que el patpogeno puede atacar el Laurel Cerezo ( Prunus laurocerasus L.) cv. Rotundiflora. El establecimiento de cultivos de rosa cerca a plantaciones de mora puede proveer una ventaja al patgeno para su sobrevivencia. La fuente de inculo puede incrementar en plantas de mora en ausencia de plantas de rosa viceversa, s el cultivo de inters es la mora, tornando ineficiente cualquier medida de manejo de la enfermedad debido a la cantidad de inculo en el ambiente. Erradicacin mediante rotacin de cultivos. El ciclo de produccin de las flores en Colombia depende de la variedad cultivada, en general, las rosas se cosechan cada 90 das y cada rosal tiene una vida til hasta de 15 aos (Tenjo et al., 2006). En Colombia existen aproximadamente 7.290 ha cultivadas en flores, representadas de la siguiente manera, 30,3% corresponde a rosas, 13,5% a claveles, 8% a miniclaveles, 8,2% a crisantemos, 26,4 % a ramos y el restante 6,6% a otro tipo de flores, incluyendo en stos dos ltimos porcentajes flores tropicales y dentro de stas las heliconias (Asocolflores, 2007). Aunque no existen reportes acerca del beneficio de la rotacin de cultivos en el manejo de esta enfermedad, el cambio de cultivo con hospedantes no susceptibles como clavel y crisantemo, aunque no se conducira a una erradicacin completa de la enfermedad, permitira que las poblaciones del pat-

geno sean reducidas para evitar el desarrollo de una epidemia en siembras futuras sin afectar la produccin del sector floricultor. Desinfestacin de herramientas. Las herramientas empleadas en la injertacin, recoleccin de flores y podas, debern esterilizarse en una solucin de formaldehido 2% y de hidrxido sdico 2% durante 6 segundos. Es recomendable utilizar dos juegos de herramientas de corte y de guantes, trabajando con uno, mientras el otro permanece sumergido en la solucin hasta su uso (INFOAGRO, s.f.). Esta prctica es efectiva para disminuir la cantidad de inculo inicial que puede ser diseminado ente plantas. Proteccin El concepto de proteccin implic originalmente colocar algn tipo de barrera entre el hospedante y el patgeno con el fin de prevenir la infeccin. El concepto ha sido ampliado para incluir otras medidas de prevencin de la infeccin, tales como la manipulacin de los factores ambientales que controlan el proceso de infeccin, manejo del cultivo para disminuir o evitar la infeccin (Castao-Zapata, 1994). A continuacin, se mencionan las principales medidas involucradas: Proteccin mediante el uso de fungicidas. La eleccin del fungicida correcto es la otra clave del MIE. Peronospora pertenece a la clase de los Oomycetes, incluidos dentro del reino Straminipila que aagrupa organismos que o producen quitina, pero tiene celulosa como componente fibrilar de la pared celular, y no sintetiza sus propios esteroles funcionales (por ejemplo, ergosterol) sino que la toma de los tejidos del hospedante, antes de la conversin y su incorporacin en sus membranas. La especificidad de los compuestos antifngicos se basan en estas diferencias metablicas entre esta clase de pseudohongos y los hongos verdaderos (Gisi, 2002) Oneill et al. (2002), encontraron que las aspersiones foliares de Fluazinam, Fosetil-Al y la mezcla de Cymoxanil + Mancozeb + Oxadixil, reducen significativamente la severidad del Mildeo velloso y la cantidad de cada de hojas. As mismo, la altura de la planta mejora notablemente con estos fungicidas. El conocimiento de la distribucin y preferencia de ataque del patgeno en la planta es vital para dirigir las aplicaciones de fungicidas. En un estudio realizado por Quiroga y Arbelez (2004), se encontr que la parte inferior de los tallos evaluados (estrato uno) exhibieron en promedio la mayor incidencia y severidad del Mildeo velloso; seguido por el estrato dos, el cual corresponde a la parte media de los tallos. El estrato tres, es decir, la parte ms joven de los tallos, fue el que
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present la menor incidencia y severidad de la enfermedad. El mismo estudio indic que Fosetil-Al en aplicaciones foliares es altamente efectivo para el manejo de la enfermedad, en contraste, el tratamiento que mostr el mayor nmero de tallos afectados fue el mismo producto, pero aplicado al suelo. La mezcla de Metalaxil + Mancozeb, es ampliamente utilizada para el control de diversos Oomycetes en cultivos como papa, hortalizas, tabaco, aguacate, entre otros (Gisi, 2002), pero en la investigacin realizada por Quiroga y Arbelez (2004), no mostr un control eficaz del Mildeo velloso, ni aplicado al suelo ni al follaje. Una de las causas de la posible ineficiencia de este fungicida puede ser la resistencia del patgeno al producto, en particular a Metalaxil, como ha ocurrido en otros cultivos en el mundo (Viranyi, 1988). Control biolgico. El concepto actual de control biolgico en patologa vegetal incluye la utilizacin deliberada de organismos vivos introducidos o residentes, distintos de las plantas hospedantes de la enfermedad objetivo, para suprimir las actividades y las poblaciones de uno o ms patgenos de plantas. Esto puede implicar el uso de inoculantes microbianos para suprimir un solo tipo clase de enfermedades de plantas, , la utilizacin de organismos nativos del suelo para la represin de patgenos causantes de enfermedades en plantas (Pal y McSpadden, 2006). Los agentes de control biolgico de P. sparsa han sido poco estudiados. Actualmente solo los trabajos de Chase (2005) con Bacillus subtilis (Rhapsody) y las sales de cobre (Camelot) estn publicados. Esta investigadora descubri que las sales de cobre previenen el Mildeo velloso de la rosa eficazmente, mientras que B. subtilis por s solo no tiene un efecto marcado en la prevencin de la enfermedad, pero cuando se combinan los dos, aunque el efecto es mucho menor que las aplicaciones solas de cobre, se logra reducir considerablemente la severidad del Mildeo Velloso Aunque los reportes de la eficacia de controladores biolgicos sobre P. sparsa, son limitados, una investigacin realizada por Stefanova et al. (2007), con el Moho azul de tabaco (Peronospora tabacina D.B. Adam) indic que la aplicacin de Pseudomonas aeruginosa (Schroeter) Migula, cepa PSS (Gluticid), redujo la enfermedad en un 50% comparado con el testigo. El producto biolgico aplicado cada siete das a la dosis de 0,09 kg / ha del ingrediente activo, mostr efectividad sobre la enfermedad, y su eficacia fue igual a la obtenida con Mancozeb. Las rizobacterias del gnero Pseudomonas Migula, producen diferentes metabolitos extracelulares, entre ellos siderforos, diversos antifngicos y cido saliclico, entre otros, que contribuyen a la supresin de fitopatgenos mediante la formacin de 29

quelatos de hierro que les confieren ventaja competitiva como agentes biocontroladores por la suplementacin limitada de minerales esenciales en hbitats naturales, accin controladora y el aumento de la resistencia y defensa de las plantas (Keel et al., 1990; Maurhofer et al., 1994; Thomashow y Weller, 1995; Wipps, 2001). Proteccin mediante manipulacin del ambiente. El Mildeo velloso se desarrolla mejor en condiciones hmedas. Debido a esto, Beckerman (2009), del Servicio de Extensin de la Universidad de Purdue y Hausbeck (2007) de la Universidad Estatal de Michigan, Estados Unidos, sugieren mantener las rosas tan secas como sea posible para reducir el crecimiento del P. sparza; para ello, se debe usar riego por goteo en vez de riego por aspersin a fin de evitar agua libre en el tejido. De igual forma, Gill (1977) sugiere ventilar los invernaderos para reducir la humedad relativa por debajo del 90% y elevar las temperaturas por encima de 27C. Sistema de pronstico de la enfermedad. En el ao 2003, Aegerter et al., desarrollaron el primer sistema de pronstico del Mildeo velloso basado en la evaluacin de la temperatura, la humedad foliar, y la humedad relativa en el desarrollo de la infeccin y la colonizacin de la rosa por P. sparsa en las condiciones del Valle de San Joaqun del estado de California, Estados Unidos. Usando un modelo de regresin lineal, incorporaron las variables ambientales calculadas como los totales acumulados en un periodo de 10 das. As, se pudo determinar un ptimo de infeccin de 8,4 h de duracin de la humedad foliar por da en un total de 10 das acumulados cuando la temperatura es menor a 20C. Estos resultados deberan ser validados para las condiciones de la sabana de Bogot dnde se concentra la produccin de rosas en Colombia. Una vez validados los datos, el sistema de pronstico servira para alertar sobre la primera aplicacin de fungicidas y la programacin en el tiempo de las mismas. Distancias de siembra. Alterar la distancia de siembra de las plantas tiene efectos directos e indirectos sobre el comportamiento de la enfermedad. Para el primero, existen dos factores relacionados: (a) un cambio en el nmero de plantas hospedantes disponibles para interceptar inculo diseminado a travs del espacio el tiempo, y (b) variacin de los espaciamientos entre plantas y por lo tanto la dispersin espacial del inculo que tiene xito para producir infeccin. Los efectos de a y b se refuerzan mutuamente. Por lo tanto, un aumento en la densidad de siembra, aumenta el nmero de plantas susceptibles y con ello la probabilidad de que una unidad de inculo en el aire sea depositada en el tejido susceptible (Burdon y Chilvers, 1982). 30

Los resultados del trabajo de Oneill et al. (2002), demuestran que la severidad de la enfermedad disminuye considerablemente cuando incrementa la distancia entre plantas de 18 a 32 cm. El aumento del espaciamiento entre plantas mejora la circulacin de aire y aumenta tambin la exposicin de las hojas inferiores a la luz, lo que reduce la senescencia prematura y la esporulacin de P. sparsa (Hausbeck et al., 1996). Mtodo de riego. Debido a que P. sparsa es un patgeno dependiente del agua libre en las hojas para su desarrollo, el mantenimiento del follaje seco a travs de la estacin del cultivo se convierte en una herramienta vital para el manejo de la enfermedad. As, Oneill et al. (2002), demostraron que el riego aplicado al suelo (subirrigacin en tnel) ayuda a reducir el porcentaje de plantas afectadas a un mnimo nivel comparado con el sistema de riego por aspersin. Aunque mejores resultados se obtienen cuando se combinan la aplicacin de fungicidas con el riego apropiado para el manejo de la enfermedad. El porcentaje del rea afectada en las hojas es reducido cuando se aplican fungicidas al suelo como Fosetil-Al, seguido por la mezcla de Cimoxanil + Mancozeb + Oxadixil, la mezcla de Thiram + Metalaxil y aspersiones foliares de Clorotalonil, alterando aplicaciones cada 10 14 das; y cuando se sigue un programa de riego por subirrigacin al suelo, comparado con riego por aspersin. Manejo de la fertilizacin. El vigor del hospedante mediante una nutricin adecuada es una prctica comn de manejo preventivo de enfermedades y se hace con el fin de que las plantas sean menos susceptibles a los patgenos. Segn la literatura, algunos elementos nutricionales como: nitrgeno, potasio, calcio, boro, silicio y la relacin N: K son importantes en el aumento de resistencia a parsitos obligados como P. sparsa (Ivancovich, 1996; Krauss, 2001). Un estudio realizado por Castillo et al, (2010), demostraron que el aumento de la concentracin de N, favoreci la incidencia y severidad del Mildeo velloso, mientras que el aumento de la concentracin de Si, Ca y Mn, redujo la incidencia y severidad de la enfermedad. Varios reportes han descrito la efectividad del fosfonato (sales de potasio) como inductores de resistencia en varios patosistemas, por ejemplo, en los patosistemas maz/Puccinia sorghi Schwein (Reuveni et al., 1994), maz/Exserohilum turcicum (Pass.)K.J. Leonard & Sugss., pepino/Sphaerotheca fuliginea (Schltdl.) Polacci (Reuveni et al., 1993), pimentn/Leveillula taurica (Lev.) Arnaud (Reuveni et al., 1998) y coliflor/ Peronospora parastica (Pers. ex Fr.) Fr. (Becot et al., 2000). Inmunizacin
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Es el proceso mediante el cual, se cambia la naturaleza fisiolgica y fsica del hospedante con el fin de prevenir la infeccin, o permitirle a la planta rechazar la infeccin. En esencia, inmunizacin es mejoramiento de la resistencia a enfermedades (Castao-Zapata, 1994). El manejo del Mildeo velloso con variedades resistentes es difcil, debido a la alta susceptibilidad de la mayora de las variedades comerciales de rosa cultivadas en el mundo. En Colombia, el patgeno es altamente agresivo sobre las variedades Charlotte, Classy, Dolores, Frisco, Konfetti, Livia, Mystique, Osiana, Pavarotti y Ravel (Flrez, 1996; Restrepo, 1996). Con respecto al grado de susceptibilidad de los patrones, Martnez (2002), evalu la respuesta de tres materiales injertados: Charlotte, Livia y Aalsmeer Gold, sobre los patrones Manetti y Natal Brier, y logr determinar que las plantas injertadas sobre Manetti presentaban mayor enfermedad en comparacin con Natal Brier. Gmez y Arbelez, (2005) demostraron que la variedad Classy presenta los perodos de latencia ms cortos y la mayor produccin de esporangios en cuatro temperaturas evaluadas (10, 14, 18 y 22 C), mientras que los perodos ms largos se presentan en First Red con una produccin reducida de esp orangios. El conocimiento del nivel de variabilidad de un patgeno y de su estructura poblacional en una regin determinada, es fundamental para el diseo de estrategias de manejo de la enfermedad que causa, por cuanto ofrece informacin valiosa sobre los linajes genticos del patgeno que deben incluir los programas de resistencia. Actualmente, en la Universidad Nacional de Colombia sede Medelln, existe una coleccin representativa de 34 aislamientos de P. sparsa colectados en la sabana de Bogot y el oriente antioqueo, principales zonas cultivadoras de rosas para exportacin en Colombia (Ayala-Vsquez, et al., 2008). INTEGRACION DE LAS PRCTICAS DE MANEJO. James Edward Van der Plank (1963), fue el primero en incluir el modelo logstico en el manejo de enfermedades de plantas. Este modelo reconoce que la infeccin que causa enfermedad produce ms propgulos despus de un periodo de latencia y la velocidad de desarrollo de la enfermedad depende de las condiciones ambientales (Castao-Zapata, 2002). A continuacin se describe el modelo logstico para manejar exitosamente una enfermedad: X = X0ert Donde X: cantidad de enfermedad final inculo final, X0: cantidad de enfermedad inicial inculo inicial; e: constante universal

(2,718281828); r: velocidad con la que se desarrolla la enfermedad; y t: tiempo que transcurre para la produccin final de enfermedad (X). Examinando este modelo, se puede concluir que existen tres formas para reducir la cantidad de enfermedad final en cualquier punto de la epidemia, as: reducir el inculo inicial, reducir la velocidad de desarrollo de la epidemia reducir la duracin de la epidemia. En la Tabla 1, se resumen las prcticas de manejo integrado del Mildeo velloso de la rosa y sus implicaciones epidemiolgicas, desde el punto de vista del modelo logstico.

Tabla 1. Integracin de las prcticas de manejo Integrado del Mildeo velloso de la rosa causado por P. sparsa y su efecto epidemiolgico, de acuerdo al modelo logstico. Mtodo de manejo Evitacin del patgeno Seleccin del sitio de siembra Uso de esquejes libre de la enfermedad Exclusin del patgeno Tratamiento de esquejes Inspeccin y certificacin de material de propagacin Erradicacin del patgeno Destruccin de tejido enfermo Destruccin de hospedantes alternos Rotacin de cultivos Desinfestacin de herramientas Proteccin de la planta Aspersiones con fungicidas Control biolgico Manejo de la fertilizacin Manipulacin de ambiente Arreglo de las distancias de siembra Manejo del riego Inmunizacin (resistencia gentica) Resistencia monognica Resistencia polignica Factor epidemiolgico

X0 / X0

X0

r r

CONCLUSIONES Esta revisin de literatura se convierte en la base fundamental para el desarrollo de un programa de manejo Integrado del Mildeo velloso de la rosa en Colombia. Aunque algunas investigaciones necesitan ser validadas para las condiciones de cultivo en el pas, como por ejemplo, el sistema de pronstico desarrollado en california, estados Unidos, la mayora de las tcticas alternativas al manejo qumico han demostrado ser altamente eficaces, seguras y fciles de implementar. Quiz la razn ms importante para el desarrollo de este enfoque, es la disminucin del riesgo de resistencia por parte del patgeno al uso indiscriminado de molculas qumicas de accin especfica como Metalaxil FosetilAl. Es necesario que la comunidad cientfica, principalmente de fitopatlogos y fitomejoradores, propongan investigaciones en control biolgico y desarrollo de variedades resistentes al Mildeo velloso de la rosa, debido a que son los temas menos estudiados, no obstante la gran importancia que tiene el cultivo de la rosa en Colombia. REFERENCIAS BIBLOGRFICAS Aegerter, B., Nuez, J., y Davis, R. 2002. Detection and management of downy mildew in rose rootstock. Plant Dis. 86:1363-1368. Aegerter, B., Nuez,J., y Davis, R 2003. Environmental factors affecting rose downy mildew and development of a forecasting model for a nursery production system. Plant Dis. 87:732-738. Ayala-Vsquez, M., Argel-Roldan, L., Jaramillo-Villegas, S .y Marn-Montoya, M. 2008. Diversidad gentica de Peronospora sparsa (Peronosporaceae) en cultivos de rosa de Colombia. Acta Biol. Colomb. 13(1):Pp.79-94. Beckerman, J. 2009. Downy mildews. En: Purdue extension diseases of landscape

X0 r

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REVISTA FITOPATOLOGA COLOMBIANA

Normas para la elaboracin de artculos
Presentacin del Trabajo Para enviar el trabajo a la revista (original y tres copias), se deber aplicar el siguiente orden, comenzando cada tem en pginas independientes, segn lo detallado a continuacin: Cartula: Una pgina con el ttulo del artculo, el autor, su direccin y el tipo de publicacin y la entidad. (1 pgina). Resumen y palabras claves (1 pgina) Summary y palabras claves en ingls (1 pgina). Cuerpo del trabajo (Texto). (Las necesarias sin sobrepasar los lmites de este reglamento). Agradecimientos (si lo considera necesario). Referencias Bibliogrficas. Tablas (1 por pgina). (Con su respectivo ttulo ). Figuras (una por pgina, debidamente numeradas). "Leyendas" o pies de las figuras.

Estructura general, secciones El artculo cientfico incluir las secciones que se indican ms adelante; en la nota cientfica se podrn unir algunas de las secciones y la revisin bibliogrfica es de estructura libre. Los tres tipos de colaboraciones deben incluir siempre el resumen y el summary. La estructura del artculo cientfico debe contener lo siguiente:

1. Ttulo Deber reflejar adecuadamente el contenido de la publicacin con el menor nmero posible de palabras; estas no deben ser ms de veinte. El ttulo no debe incluir abreviaturas ni frmulas qumicas (salvo para los istopos).

2. Autor(es) Se describirn su nombre y apellidos debajo del ttulo, seguidos del nombre de la entidad donde se gener la investigacin y la direccin y la del autor. Enseguida se coloca, si es el caso, toda la informacin correspondiente al personal tcnico que haya colaborado en la investigacin. 3. Resumen y Summary El resumen debe hablar de la naturaleza e importancia del trabajo, la metodologa usada y los resultados sobresalientes. Debe tener un mximo de una pgina (200 a 300 palabras) si corresponde a un artculo cientfico, o de media pgina si corresponde a una nota tcnica o cientfica. 4. El summary Es la traduccin al portugus o al ingls del resumen, incluido el ttulo. Si se desea, se pueden adicionar resmenes en Portugus, Francs, o Alemn.

5. Palabras claves Deber seleccionarse la palabra o palabras claves ms importantes, preferiblemente no contenidas en el ttulo, y colocarlas en un listado lo ms breve posible.

6. Introduccin Deber destacar la necesidad e importancia de la investigacin, mencionar las limitaciones del trabajo, y los resultados de otros trabajos similares o relacionados (revisin de literatura breve referida a la informacin ms relevante).

7. Materiales y mtodos
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Se deben escribir en forma ordenada, clara y precisa, con detalles suficientes para que el lector pueda, si lo desea, repetir el experimento.

8. Resultados y discusin: Ambos temas se pueden incluir preferiblemente en una sola seccin. Los resultados se deben escribir en forma precisa y ordenada. En la discusin se explican los hechos y se relacionan con los resultados de otras investigaciones, debidamente sustentados con citas bibliogrficas entre parntesis, utilizando el Sistema Autor, Ao.

9. Conclusiones Deben ser breves y claras y basarse estrictamente en los resultados (no en conjeturas).

10. Agradecimientos (Si se desea).

11. Referencias Bibliogrficas Se debe limitar a la estrictamente necesaria y en relacin directa con la investigacin realizada. Todas las referencias citadas en esta seccin deben ser citadas en el texto. Las referencias se deben colocar en la lista en orden alfabtico por los apellidos de los autores. Cuando hay varias referencias encabezadas por un mismo autor, se escriben primero aquellas en las cuales ste aparece slo, y luego aquellas en las que est seguido por coautores; dentro de cada grupo se sigue en orden cronolgico. No use la palabra Annimo para asignar autores desconocidos; en su lugar, escriba el nombre del editor (seguido de un parntesis con la abreviatura ed. o eds.) o el de la editorial o, si no hay ninguno comience con el ttulo de la obra. No incluya en la bibliografa las referencias de informaciones personales, ni de trabajos sin publicar aunque estn aceptados. Estas fuentes se pueden citar en el texto, entre parntesis. La referencia de una publicacin peridica se har en el siguiente orden: autor, ao, ttulo del artculo, nombre abreviado de la revista, volumen, nmero (entre parntesis) y pginas.

Ejemplo: Bowman, J.M., Delwiche, P.A., Brabiebson, R.L. y Williams, P.H. 1980. Lepthosphaeria maculans on cabbage in Wisconsin. Plant. Dis. 64(3):326328. En los libros y folletos el orden general es: autor, ao, ttulo, nmero de la edicin, casa editora, lugar de la publicacin y nmero de pginas. En caso de incluir referencias consultadas electrnicamente en Internet estas se pueden presentar en el siguiente orden:

Autor(es). Ao de publicacin. Ttulo del documento. Subttulo. El medio, en lnea [entre corchetes]. Nmero de la edicin (slo a partir de la segunda). Editorial o entidad que publica en web. Lugar de publicacin. Fecha en que se consult el material, para los documentos en lnea [entre corchetes].Serie, si la tiene (entre parntesis). Disponible en:

Ejemplos:

Dollar, D. y Kraay, A. 2000. Growth is good for the poor [en lnea]. World Bank. Washington, DC. [consultado 15 Septiembre 2001]. Disponible en : http://www.worldbank.org/research/growth/pdfiles/growthgoodforpoor.pdf Jimnez, C. (s.f.). Intervencin del hombre en los ecosistemas naturales [en lnea]. [citado 16 octubre 2001]. Disponible en: http://www.monografias.com/trabajos7/ecna/ecna.shtml Gottret, M.V. y Raymond, M. 1999. An analysis of a cassava integrated research and development approach: Has it really contributed to poverty alleviation? [on line]. In: International Workshop Assessing the Impact of Agricultural Research on Poverty Alleviation (1999, San Jos, Costa Rica). Centro Internacional de Agricultura Tropical (CIAT), Cali, CO. [consultado 21 Septiembre 2001]. Disponible en : http://ciatlibrary.ciat.cgiar.org/paper_pobreza/038.pdf

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Myers, M.P., Yang, J. y Stampe, P. 1999. Visualization and functional analysis of a maxi-K-channel (mSlo) fused to green fluorescent protein (GFP). Electronic Journal of Biotechnology 2(3) [en lnea ]. [consultado 21 Marzo 2000]. Disponible en : http://www.ejb.org/content/vol2/issue3/full/3/index/html Dvila, M. y Coyne, D. 2000. Deteccin de genes de letalidad en caraota mediante el uso de la tcnica de anlisis de segregantes en grupos. Agronoma Tropical 50(3):323-335 [en lnea]. [citado 12 octubre 2001]. Disponible en: http://www.redpav-fpolar.info.ve/agrotrop/index.html

Extensin y formato para los trabajos La extensin mxima del artculo completo (Resumen, summary cuerpo, agradecimientos, referencias, tablas y figuras ) escrito con un tipo de letra de 12 cpi (caracteres por 2,5 cm o una pulgada) ser de 16 pginas a doble espacio si se trata de un "artculo cientfico" o una "revisin bibliogrfica"; 6 pginas si es una "nota cientfica" y una pgina si es una "carta al editor Cualquier colaboracin para la revista debe estar mecanografiada o mecanotipiada en papel tamao carta, por una sola cara, a doble espacio y con letra grande (no ms de 12 caracteres por pulgada). Los mrgenes superior, inferior, izquierdo y derecho tendrn 2,5 cm. Cada pgina se numerar en la esquina inferior derecha. Se prefieren los trabajos elaborados en computador utilizando el procesador de palabra "Word". A la copias del escrito impresas en texto de alta calidad se anexar el disquete o el Disco compacto respectivo conteniendo exactamente lo presentado en el escrito.. Los ttulos de primer orden deben ser en maysculas; los ttulos de segundo orden deben ir en minsculas; los ttulos de tercer orden son en minscula, dos puntos y seguido de texto, as:

TITULO DE PRIMER ORDEN

Ttulo de segundo orden

Ttulo de tercer orden: Seguido de texto como en este ejemplo.

Redaccin general y estilo El trabajo se debe redactar en pasado impersonal y debe ser claro, conciso, coherente y exacto. Los nombres cientficos se deben escribir en itlicas y completos la primera vez que se nombren; despus se pueden abreviar, escribiendo slo la inicial del gnero, pero dejando la especie completa. Las referencias deben ser citadas en el texto utilizando el Sistema Autor, Ao, colocados en parntesis, por ejemplo (Arbelez, 1988). Cuando son varios (ms de dos) los autores de la publicacin citada, debe colocarse el primer autor seguido del latn et al. y luego el ao respectivo, pero en el listado de Referencias Bibliogrficas deben figurar todos los autores. Al referirse a productos se deben preferir los nombres comunes a los comerciales. En el caso de nombres de marcas registradas, se deben escribir seguidos de la letra R (mayscula) y de la direccin del fabricante. Para las unidades de medida se debe usar el Sistema Internacional de Unidades (SI). Tanto las tablas como las figuras se deben numerar en forma consecutiva con nmeros arbigos. Todos ellos, al igual que todas las referencias bibliogrficas se deben citar en el texto. En la medida de lo posible se deben evitar las notas de pie de pgina. Es preferible reemplazarlas por parntesis dentro del texto.

Elaboracin de tablas

Cada tabla o figura se debe presentar en una hoja aparte, al final del texto, pero debe estar nombrada dentro de ste.

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Las tablas deben ser sencillas y contener slo la informacin indispensable para claridad del trabajo. Su formato puede o no llevar lneas verticales; se recomienda dejar solamente las horizontales necesarias para destacar el encabezamiento (ttulos y subttulos de las columnas) y para cerrar los datos, al final de la misma. La tabla debe estar identificada por un nmero y por un ttulo, el cual debe ser claro y autoexplicativo. Los datos no deben ser una repeticin de los del texto o de alguna figura y debern limitarse a aquellos indispensables para claridad del artculo cientfico. Ejemplo: Los valores contenidos en las tablas deben usar el punto (.) para separar los miles y la coma (,) para los decimales, ejemplo 1.545,20.

Tabla 5. Incidencia y severidad de la Antracnosis en mango cultivar HadenICA, bajo diferentes medidas de manejo de la enfermedad, durante 1993. Tratamientos 1 2 3 4 5 6 9 12 13 Aspersin floracin Aspersin frutos alfileres Aspersin frutos con 50% de maduracin Aspersiones floracin y frutos alfileres Aspersiones floracin y frutos con 50% maduracin Aspersiones floracin a cosecha (8 aspersiones) Podas floracin a cosecha Aspersiones floracin a cosecha y podas Testigo absoluto Incidencia (%) 81,7 AB 80,33 AB 73,33 B 74,33 B 72,66 B 50,50 C 66,67 B 25,34 D 90,0 A Severidad (%) 50 A 50 A 40 AB 40 AB 38 AB 20 C 45 A 10 D 55 A

La tabla puede incluir abreviaturas y llamadas, las cuales se identificarn con letras minsculas (usadas a manera de exponentes para que no se confundan con los correspondientes a diferencias estadsticas). Las llamadas se aclararn en las notas de pie. Cuando hay niveles de significacin estadstica, se indican con asteriscos (uno a tres) y se explican en las notas del pie de la tabla. El nmero de tablas a incluir en el artculo deben ser las estrictamente necesarias Figuras Por figuras se entienden diferentes ilustraciones como fotografas, grficas, mapas, dibujos, etc. Al igual que las tablas, deben tener un ttulo claro, y estar numeradas en el orden en que se citan en el texto. Deben ser muy ntidas y de buen tamao, teniendo en cuenta que su calidad disminuye en el proceso de impresin, y que en dicho proceso ellas no se ampliarn sino que muy probablemente se reducirn. Las fotografas deben ser en papel brillante y con buen contraste, y estar bien enfocadas sin elementos distractores (etiquetas elaboradas a mano con letras ms grandes que el sujeto a destacar); tambin se aceptan transparencias a color de buena calidad o imgenes electrnicas en formato JPG entre 500 y 1000KB en su respectivo diskette o CD. En cuanto al nmero de fotografas a incluir deben ser las estrictamente necesarias y preferiblemente en una composicin. Las grficas deben ser sencillas en la medida que lo permita el trabajo y todos sus elementos deben estar identificados claramente. Cuando se elaboren mediante el uso de computador debe incluirse los archivos en el disquete o un disco compacto, indicado en la etiqueta el programa y la versin del mismo. Utilizar tramas y tonos de gris contrastantes. Se prefiere que las grficas no sean a color. Las leyendas de las figuras y las convenciones, si las hay, deben quedar dentro del rea del grfico colocadas en una posicin conveniente de manera que faciliten la interpretacin. Los pies de figuras o ttulos de estas deben elaborarse en una pgina aparte y no dentro del rea de la grfica del archivo electrnico, el texto debe ser lo suficientemente descriptivo como para que se pueda entender sin recurrir al texto. Cada figura debe estar identificada al respaldo con su nmero correspondiente y con el nombre del autor del artculo. Figuras desalineadas, con lneas borrosas o fotocopias no sern aceptadas. Solamente incluir las estrictamente necesarias (los costos de separacin de color e impresin son muy altos). Nota: Para mayor ilustracin respecto a estas normas se pueden consultar las guas para preparacin de artculos de Plant Disease, Phytopathology y especialmente las instrucciones para los autores de la Revista Corpoica 2(1): 64-70, 1997

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FITOPATOLOGA COLOMBIANA

rgano de difusin de la Asociacin Colombiana de Fitopatologa y Ciencias Afines- ASCOLFI

ISSN 01120-0143

Contacto Revista: Oficina Ascolfi, Km 1 Va al Penal Granja Corpoica C.I. Palmira Cel. +57- 3164303079 Palmira - Valle del Cauca Colombia Apartado Areo 5004- Cali- Valle del Cauca -Colombia Correos electrnicos: ascolfi.colombia@gmail.com contacto@ascolficolombia.org Pgina web: http://www.ascolficolombia.org/

Suscripciones y Canje: publicaciones@ascolficolombia.org

ascolfi.colombia@gmail.com

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ASOCIACIN COLOMBIANA DE FITOPATOLOGIA Y CIENCIAS AFINES, ASCOLFI

Misin Contribuir a la creacin y utilizacin del conocimiento cientfico en la fitosanidad para facilitar soluciones a los problemas de la produccin de cultivos sanos con rentabilidad social y econmica, protegiendo el medio ambiente Visin Ser una entidad lder, reconocida nacional e internacionalmente por su excelente labor en beneficio de la promocin, divulgacin y consolidacin del conocimiento cientfico de personas e instituciones allegadas a la fitosanidad y sus ciencias afines como elemento esencial de la produccin de cultivos de alta calidad Objetivos Contribuir a la creacin de una conciencia nacional sobre la importancia de la ciencia y tecnologa en la sanidad vegetal como aporte al desarrollo agropecuario y econmico del pas Promover el inters en todos los aspectos de la fitopatologa y ciencias afines Contribuir a la creacin y difusin del conocimiento cientfico de la fitopatologa y ciencias afines Promover y estimular la publicacin de los resultados de los estudios y/o investigaciones sobre fitopatologa y ciencias afines Promover la cooperacin entre entidades del sector pblico y privado tanto nacional como internacional que tengan inters en estas disciplinas Promover el mejoramiento del nivel acadmico de sus asociados y de quienes manifiesten inters en las reas de la fitopatologa y ciencias afines Estrechar los vnculos de solidaridad y compaerismo entre sus afiliados Informar y motivar a la opinin pblica y sus representantes sobre la problemtica de las enfermedades de las plantas y su control

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COMIT CIENTIFICO Alberto Pez Redondo Benjamn Pineda Lpez Bernardo Villegas Estrada Carlos Germn Muoz Perea Diana Marcela Vanegas Villa Edwinson Alberto Rojas Trivio Elizabeth lvarez Cabrera Francia Varn de Agudelo Francisco Jos Morales Garzn Gerardo Martnez Lpez Gloria Mara Mosquera Cifuentes Gustavo Adolfo Prado Ivn Lozano Potes Jairo Castao Zapata Jess Eliecer Larrahondo Aguilar Jess Humberto Gil Gonzales Jhon Jairo Mndez Arteaga Jorge Enrique Gmez Hurtado Jorge Ignacio Victoria Kafure Jos Mara Hernndez Murillo Juan Carlos ngel Snchez Juan Gonzalo Morales Osorio Liliana Mara Hoyos Carvajal Marina Snchez de Prager Maritza Cuervo Ibaez Mnica Betancourth Vsquez Oscar Adrin Guzmn Piedrahita Pedro Alfonso Alarcn Gmez Rodrigo Orlando Campo Arana Ing. Agr. M Sc Fitopatologa Ing. Agr. M Sc Fitopatologa Ing. Agr. M Sc Fitopatologa Ing. Agr. Ph D in Plant Sciences Adm.CAgr. M Sc. Biotecnologa Microbilogo M Sc Fitopatologa Ing. Agr. Ph D Fitopatologa Ing. Agr. M Sc Fitopatologa Ing. Agr. Ph D Virologa Ing. Agr. Ph D Virologa Bacteriloga Ph D Fitopatologa Ing. Agr. M Sc Ciencias Agrcolas Bilogo Genetista M Sc Ciencias Ing. Agr. Ph D Fitopatologa Qumico Ph D Fitoqumica Quimico- Ph D Ciencias Qumicas Lic. Bio-Qumica, - Ph D Ciencias Qumicas Ing. Agr. M Sc. Fitopatologa Ing. Agr. Ph D Bacteriologa Ing. Agr. Espec. Fitopatologa Ing. Agr. M Sc Fitopatologa Ing. Agr, - Ph D Ing. Agr. Ph D Biologa Ing. Agr. Ph D Suelos y Aguas Ing. Agr. - M Sc Rec. Fitogenticos Ing. Agr. Ph D Biotecnologa Ing. Agr. M Sc Fitopatologa Ing. Agr. M Sc Fitopatologa Ing. Agr. Ph D Fitopatologa

ARBITROS Ana Cecilia Velasco Fernndez Bernardo Villegas Estrada Bertha Lucia Castro C Diana Marcela Vanegas Villa Jos Maria Hernndez Murillo Maria Luisa Guzmn Mauricio Castao Jaramillo Nelson Bravo Otero Octavio Montoya Estrada Bacteriloga Ing. Agr. M Sc Fitopatologa Ing. Agr. M Sc.Fitopatologa Adm. C Agr. M Sc. Biotecnologa Ing. Agr. Espec. En Fitopatologa Bacteriloga y Laboratorista Clnica Ing. Agr. Ing. Agr. M Sc Sistemas de Semilla Ing. Agr.