OBSERVACIN MICROSCPICA DE MICROORGANISMOS

Resumen: La tincin de Gram es la tcnica principal utilizada para el examen microscpico de las bacterias, el azul Lactofenol es un colorante para el examen directo o para teir hongos de un medio de cultivo. Este estudio tiene como objetivo onocer e identificar los componentes de un microscopio ptico, as! como emplear las diferentes tcnicas de tincin de microorganismos. Las muestras utilizadas para esta tincin fueron "ogurt, bacterias " hongos, las cuales se observaron en un microscopio en diferentes aumentos con a"uda de colorantes para poder visualizar las estructuras celulares. #ue posible ver mediante la tincin de Gram $ue diferencia las bacterias como Gram positivas o Gram negativas dependiendo de la composicin de la pared celular $ue presenta cada bacteria, siendo las primeras las de ma"or grosor " las cuales se tien de color rosado mientras $ue las segundas se observan incoloras. En la tincin con azul Lactofenol, el colorante es fuertemente %cido " se usa para la tincin directa de micelio miclico, el cual toma un delicado color azul claro. Esta coloracin permite ver estructuras b%sicas de hongos Palabras clave: tincin, microorganismos, bacterias, hongos, microscopio INTRODUCCION &La microscopia ptica tiene aplicaciones para bacterias, hongos " par%sitos. 'in embargo, los colorantes utilizados para estos grupos microbianos difieren mucho. Los mtodos de tincin se utilizan en forma directa con las muestras, o se aplican a los preparados obtenidos a partir del desarrollo de los microorganismos en cultivos. El material $ue se va a teir se coloca en la forma de una gota (si la muestra es l!$uida) o se rota (si est% en un hisopo) sobre la superficie de un portaobjeto limpio " seco. Es importante evitar la contaminacin de los medios de cultivo. *ara la tincin de microorganismos $ue crecen en cultivos puede utilizarse una aguja estril para transferir una pe$uea cantidad de cultivo desarrollado en un medio solido a la superficie del portaobjetos. En La tincin de Gram es la tcnica principal utilizada para el examen microscpico de las bacterias, puede utilizarse para separar la ma"or!a de las especies bacterianas en dos grandes grupos, las $ue captan el colorante b%sico, cristal violeta (es decir, las bacterias Gram positivas) " las $ue pierden ese colorante por lavado (es decir, las bacterias Gram negativas).+ (#orbes, 'ahm, ,eissfeld, -../) En la tincin con azul Lactofenol, el colorante es fuertemente %cido " se usa para la tincin directa de micelio miclico, el cual toma un delicado color azul

claro.1 Esta coloracin permite ver estructuras b%sicas de hongos. omo objetivos propuestos est% el manejo de tcnicas frecuentes en el laboratorio como tincin de microorganismos " manejo de microscopio. *lantear interpretar " discutir resultados. MATERIA ES ! METODOS *ara la realizacin de la pr%ctica se utiliz el mtodo de tincin de Gram, " tincin con azul de lactofenol, llevado acabo utilizando los posteriores materiales0 una muestras de bacterias, una muestra de "ogurt, agua de florero " una muestras de hongos, portaobjetos, agua destilada, mechero, un asa redonda. *ara la coloracin de Gram0 colorante catinico cristal violeta, lugol, decolorante alcohol acetona, colorante de contraste fushina, papel absorbente, cubre objetos, cinta pegante, azul de lactofenol, aceite de inmersin " microscopio. *ara la identificacin de 1acterias0 se agreg sobre el portaobjetos una gota de agua2 luego, cerca al mechero se abrieron las cajas de *etri " con el asa se tom un pe$uea parte de la colonia dispers%ndola sobre la gota de agua $ue anteriormente colocamos en el portaobjetos. ontinuo a esto, se pas a flamear de manera r%pida la muestra para fijarla " luego se dej secar durante cinco minutos. *ara la coloracin0 adicionar cristal violeta durante un minuto, se adicionaron unas gotas de lugol dej%ndolas durante un minuto se, despus fue agregado el decolorante acetona durante $uince segundos, para finalizar se aplic la fushina dej%ndola actuar durante treinta segundos (lavando " escurriendo en cada tincin, terminado el tiempo re$uerido). La observacin en el microscopio iniciando por el lente de 3x hasta llegar al lente de 4..x, para la observacin en este 5ltimo lente se agreg sobre la laminilla una gota de aceite de inmersin. *ara la observacin de los hongos0 se agreg un gota de lactofenol sobre el portaobjetos, despus con un trozo de cinta se tom de una caja de *etri una muestra de la colonia " se pas a ubicar la cinta sobre el lactofenol sin dejar burbujas entre la cinta " el portaobjetos, el exceso de agua fue secado con papel de arroz " seguidamente se pas a la observacin en el microscopio.

RESU TADOS

"IGURA BACTERIAS

OBSERVACIN

!OGURT

AGUA DE C#ARCO O " ORERO

"RUTA CON MO#O

DISCUSIN DE RESU TADOS

'e mostr $ue las bacterias Gram positivas " gram negativos se tieron en un principio con el cristal violeta, pero posteriormente el etanol fue el responsable de la decoloracin de stas 5ltimas, " la fushina hizo su parte como agente de contraste para teir las Gran negativas $ue se encontraban decoloradas. Las bacterias gram negativas no se tien ni de azul ni de violeta despus de realizar una tincin de Gram, en algunos casos puede coger un color rosado tenue como en las muestras $ue se realizaron, esta caracter!stica al igual $ue las bacterias Gram positivas est% ligada a la estructura de la pared celular la cual es mucho mas gruesa en las gram positivas. omparando la Euglena con las bacterias fue posibles diferencias las clulas eucarioticas de las procarioticas. 6 nivel microscpico se pudo comprobar $ue los hongos filamentosos se identifican a partir de la morfolog!a del micelio " por las caracter!sticas microscpicas de sus esporas. CONC USIONES #ue posible observar a travs del microscopio microorganismos circundantes de la cotidianidad, (7ogurt, frutas con moho, agua de charco, florero o plantas). 'e aprendieron las diferentes tcnicas existentes de coloracin para la identificacin de estructuras bacterianas, de las cuales se conclu"e $ue la tincin de Gram resulta de gran importancia para poder identificar el tipo de bacteria de acuerdo a la clasificacin dada por la composicin de sus paredes en Gram positivas " Gram negativas, as! mismo para la identificacin morfolgica de las mismas.

CUESTIONARIO

1$ 8ediante un diagrama " explicacin escrita por usted describa las diferencias entre la pared de bacterias Gran positivas " Gram negativas.

La pared de la bacteria Gran *ositiva contiene polisac%ridos %cidos conocidos como %cidos teicoicos, los cuales se presentan en la pared. 'iempre $ue se haga mencin a los %cidos teicoicos, har% referencia a los pol!metros de la pared de la bacteria gran positivo. 9tro de los %cidos encontrados en la pared son los %cidos lipoteicoicos los cuales no son m%s $ue %cidos teicoicos $ue contienen glicerol los cuales est%n unidos a los l!pidos de la membrana de la bacteria Gram positiva. :ambin se encuentran una molcula la cual puede ser destruida por la accin de algunos agentes esta molcula es conocida como el peptidoglicano. (8adigan, -..-). La pared de la bacteria Gran ;egativa posee la molcula del peptidoglicano la diferencia con la pared de la bacteria gran positiva, es $ue la pared de la bacteria gran negativa conserva una capa adicional $ue esta compuesta por lipopolisacarido. Esta capa constitu"e una segunda bicapa lip!dica. 'e enfatiza $ue esta no solamente se constitu"e de fosfol!pidos como la membrana citoplasm%tica, a esta se le suma polisac%ridos " prote!nas.

%$ <escriba la utilidad, finalidad " los pasos para desarrollar para las siguientes coloraciones 0

a) &'e(l Neelsen: es una tcnica de tincin diferencial $ue se basa en $ue las paredes celulares de ciertas bacterias contienen %cidos grasos (%cidos miclicos) de cadena larga (=. a /. %tomos de carbono) $ue les confieren la propiedad de resistir la decoloracin con alcohol>acido, despus de la tincin con colorantes b%sicos. Esta tincin tiene inters desde el punto de vista del diagnstico cl!nico puesto $ue algunos microorganismos patgenos %cido> alcohol resistentes, tales como 8"cobacterimumtuberculosis son patgenos mu" importantes para los humanos. Las micobacterias no constitu"en el 5nico grupo

$ue tienen propiedades alcohol>acido resistentes. Las especies de ;ocardia " ?hodococcus poseen una alcohol>acido resistencia parcial as! como Legion ellamicdadei causante de neumon!a. Los $uistes de los gneros r"ptosporidium e@ sospora tienen resistencia definida a las tinciones con acido alcohol. (Larre%tegui A 6venatti)

CO ORACIN EN CA IENTE PROCEDIMIENTO: 4) 'e fija la muestra al portaobjetos con calor o alcohol. -) 'e cubre el frotis con papel filtro. B) olocamos el reactivo de colorante de carbolfuscina cubriendo todo la placa. 3) 'e calienta con suavidad hasta la aparicin de vapores mediante flameo por debajo de la rejilla desostn con un mechero de gas, si el colorante se evapora demasiado se coloca mas. =) 'e deja actuar el colorante sobre el portaobjetos durante 3>=minutos, sin calentar. C) 'e retira el papel filtro, inclina el frotis para eliminar el exceso de colorante " se lava con agua destilada con un chorro constante " no fuerte. D) 'e decoloran con acido alcohol al B,. E durante B minutos. F) 'e lavan los frotis con agua destilada " se los inclina para escurrir el resto de agua. /) 'e cubren los frotis con reactivo de azul de metileno durante 4 minuto. 4.)'e lavan con agua destilada " se dejan secar al aire. CO ORACION EN "RIO PROCEDIMIENTO: 4) 'e fija la muestra al porta objetos con calor o alcohol. -) 'e cubre el frotis con papel filtro. B) olocamos el reactivo de colorante de carbolfuscina cubriendo todo la placa. 3) 'e deja actuar el colorante sobre el portaobjetos durante -.> B. minutos, sin calentar. =) 'e retira el papel filtro, inclina el frotis para eliminar el exceso de colorante " se lava con agua destilada con un chorro constante " no fuerte. C) 'e decoloran con acido alcohol al B,. E durante B minutos. D) 'e lavan los frotis con agua destilada " se los inclina para escurrir el resto de agua. F) 'e cubren los frotis con reactivo de azul de metileno durante 4 minuto. /) 'e lavan con agua destilada " se dejan secar al aire. (Larre%tegui A 6venatti)

b) T'n)a C('na: La utilidad de la tinta china ($ue es una suspensin de part!culas de carbono coloidal). Es la de aprovechar tincin negativa $ue es un modo satisfactorio de aumentar el contraste de las clulas en la microscopia ptica, pero su m%xima utilidad est% en revelar la presencia de c%psulas alrededor de las clulas bacterianas. La finalidad de la tinta china, es la de permitir observar con claridad microorganismos rodeados de c%psula ( por ej. r"ptococcus neoformans ). (1io$uimicbo" -..D)

PROCEDIMIENTO: 4) 'e coloca en un extremo del portaobjetos una gota de tinta china o nigrosina " otra de la suspensin microbiana " se mezclan bien con el ansa. -) Luego, con otro porta se apo"a sobre la mezcla " se hace un extendido a lo largo del porta. B) 'e deja secar bien " se observa con el objetivo de inmersin. D( 8anacorda et al. -..D).
c) S(ae**er + "ul),n: La utilidad de la tincin de 'haeffer G #ulton es la de tinturar para reconocer las estructuras espec!ficas. La finalidad es la de reconocer las esporas para su observacin. F (Gmez -..F)

PROCEDIMIENTO: 4. *reparar una extensin a partir del cultivo bacteriano. -. olocar la extensin sobre un soporte " agregar suficiente solucin. B. #lamear la extensin pasando por debajo de sta el mechero 1unsen l%mpara de alcohol hasta observar una ligera emisin de vapores por espacio de minuto " medio, evitando $ue se evapore totalmente el colorante. 3. Lavar enrgicamente al chorro del agua, hasta eliminar exceso de colorante. =. ubrir la preparacin con solucin de contraste, 'afranina al =E, " dejar actuar el colorante durante un minuto " medio. C. Lavar al chorro del agua hasta eliminar el exceso de colorante. D. 'ecar al aire o utilizando papel absorbente.
F. 9bservar al microscopio con objetivo de inmersin en aceite.

d) Ne-r, .e Su./n: es un colorante de auxocromo indiferente " por un

efecto f!sico (solubilidad) tiene preferencia por los l!pidos del tejido. La finalidad es la de teir los l!pidos del tejido.

0$ Hsted desea determinar si procedimiento podr!a realizarK

sus

bacterias

son

mviles.

IJu

Htilizar!a la tinta china, esto se debe a $ue se presenta una suspensin de part!culas de carbono coloidal. on esto se aprovechar!a la tincin negativa $ue es un modo satisfactorio de aumentar el contraste de las clulas en la microscopia ptica.

1$ <escriba = gneros de bacterias Gram positivas " = de Gram negativas, resaltando en cada gnero por$ue son importantes o reconocidas.

G?68 *9'@:@L6'.

4) L@':E?@6 es un gnero bacteriano $ue comprende seis especies. Lleva su nombre en honor a Moseph Lister. Las especies de Listeria son bacilos Gram>positivos. L. monoc"togenes, es la especie t!pica " es el patgeno causante de la listeriosis. L. ivanovii es un patgeno de rumiantes $ue puede infectar a los ratones en el laboratorio, aun$ue es mu" raro $ue produzca enfermedades en humanos.

-)

Los ':6*N7L9 9 H' son microorganismos $ue est%n presentes en la mucosa " en la piel de los humanos " de otros mam!feros " aves. El gnero comprende en la actualidad a B= especies " 4D subespecies, muchas de las cuales se encuentran en los humanos. Las especies $ue se asocian con m%s frecuencia a las enfermedades en humanos son 'taph"lococcus aureus (el miembro m%s virulento " conocido del gnero), 'taph"lococcus epidermidis, 'taph"lococcus saprophticus, 'taph"lococcus capitis " 'taph"lococcus haemol"ticus. Entre sus factores de virulencia $ue le sirven para la invasiOn " le sirven al laboratorista para su identificacin est%n0

La presencia de catalasa. La presencia de coagulasa en el caso del estafilococo aureus (patogneumonico) La fermentacin del az5car 8anitol espec!fico como la cuagulasa del estafilococo aureus (el m%s importante) *resencia de 1 lactamasa, $ue rompe el anillo b lact%mico de los antibiticos con esta estructura.

B) Los E':?E*:9 9 9' son un gnero de bacterias Gram positivas, esfricas pertenecientes al filo #irmicutes " al grupo de las bacterias %cido l%cticas. Estas bacterias crecen en cadenas o pares, donde cada divisin celular ocurre a lo largo de un eje. <e all! $ue su nombre, del griego streptos, significa $ue se dobla retuerce con facilidad, como una cadena. 6dem%s de las severas enfermedades de infecciones $ue causan algunas especies de estafilococo, otras no son patognicas. los estreptococos forman parte de la flora saprfita de la boca, piel, intestino " el tracto respiratorio superior. *or regla general, las especies individuales de los estreptococo se clasifican basados en sus propiedades hemol!ticas

3) E;:E?9 9 H' causa importantes infecciones cl!nicas, inclu"endo infeccin urinaria, bacteremia, endocarditis, diverticulitis " meningitis. Las cepas sensibles de estas bacterias pueden tratarse con ampicilina " vancomicina

=) L9' L9':?@<@H8 inclu"en bacterias comunes " libres en la naturaleza, as! como patgenos de importancia. Na" cuatro especies principales responsables de enfermedades en humanos0 . 1otulinum, un organismo productor de una toxina alimenticia causante de botulismo, un desorden neurolgico agudo potencialmente letal. . <ifficile, el cual puede sobrepopular la flora saprfita intestinal durante terapias con antibiticos, causando colitis seudomembranosa.

G?68 ;EG6:@L6'.

4) 'almonella enterica subgrupo enterica serotipo :"phimuriun (tambin llamada 'almonella t"phimurium por simplificacin). El nombre enterica est% asociado a las estructuras intestinales. Esta bacteria se encuentra a menudo en pollos " sus huevos " en reptiles como las tortugas, por eso no es recomendable mantener a estos animales como mascotas. La salmonella es un bacilo gram negativo $ue pertenece a la familia Enterobacteriaceae. 'e ha sabido, recientemente, $ue la causa m%s com5n del envenenamiento de comida por especies de 'almonella es debido a la '. :"phimurium. omo su nombre sugiere, esta bacteria causa enfermedades parecidas a la fiebre tifoidea en ratones. En humanos, '. t"phimurium no causa una enfermedad tan severa como la '. t"phi (otra variacin de 'almonella $ue causa la fiebre tifoidea) " normalmente no es fatal. La enfermedad se caracteriza por causar diarreas, dolores abdominales, vmitos " n%useas, ", generalmente, dura aproximadamente siete d!as. <esafortunadamente, en personas cu"o sistema inmune este comprometido, como es el caso de las personas de edad, jvenes, o personas con el sistema inmune deprimido, la infeccin por la 'almonella termina siendo fatal si es $ue no es tratada a tiempo con antibiticos.

2) 1rucella0 considerados como par%sitos intracelulares facultativos. 'on

cocobacilos pe$ueos (.,=>.,D por ..C>4.= Pm), no mviles " no encapsulados. 'e conocen unas pocas especies de 1rucella, algunas de ellas con distintos biotipos, cada una de las cuales se diferencia ligeramente en la especificidad del husped0 1. melitensis infecta cabras " ovejas, 1. abortus infecta vacas, 1. suis infecta cerdos, 1. ovis infecta ovejas " 1. neotomae. ?ecientemente se ha descubierto una nueva especie en mam!feros marinos0 1. pinnipediae. 1rucella es la causa de la brucelosis, una verdadera enfermedad zoontica (no se ha descrito la transmisin humano>a>humano). Es transmitida por la ingestin de comida infectada, contacto directo con un animal infectado o por inhalacin de aerosoles. La exposicin infecciosa m!nima est% en 4.>4.. organismos. La brucelosis se produce principalmente por exposicin ocupacional (por ejemplo, exposicin al ganado, ovejas, cerdos), pero tambin por el consumo de productos l%cteos no pasteurizados. Estas bacterias invaden las clulas del sistema mononuclear fagoc!tico, dirigindose primero a los ndulos linf%ticos regionales, " luego, v!a sangre o linfa, a rganos " tejidos con clulas ret!culo endoteliares como h!gado, bazo, riones, o con eritritol, como placenta, gl%ndula mamaria, 5tero " epid!dimo lo $ue explica los s!ntomas de la brucelosis en el aparato reproductor (ej.abortos, or$uitis).

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3) *seudomonas es un gnero de bacilos rectos o ligeramente curvados, Gram negativos, oxidasa positivos, aerbicos estrictos aun$ue en algunos casos pueden utilizar el nitrato como aceptor de electrones. El catabolismo de los gl5cidos se realiza por la ruta de Etner><oudoroff " el ciclo de los %cidos tricarbox!licos. 6lgunos miembros del gnero son psicrfilos, mientras $ue otros sintetizan siderforos fluorescentes de color amarillo> verdoso con gran valor taxonmico. Es com5n la presencia de pl%smidos " no forman esporas.
on el reciente an%lisis de secuencias del ?;6r 4C' se han definido la taxonom!a de muchas especies bacterianas " como resultado, el gnero *seudomonas inclu"en algunas cepas clasificadas anteriormente dentro de las hr"seomonas " #lavimonas. 9tras cepas clasificadas previamente en el gnero *seudomonas, ahora son agrupadas en los gneros 1urQholderia " ?alstonia.

4) 'pirochaetes Las espiro$uetas ('pirochaetes) son un filo de bacterias $ue

tienen clulas alargadas " enrolladas helicoidalmente.4 :ienen una longitud comprendida entre = " =.. Pm " un di%metro de alrededor de .,4>.,C Pm. asi todas son unicelulares, si bien se sospecha $ue 'pirochaeta plicatis pudiera ser pluricelular. *oseen una membrana externa formada por m5ltiples capas llamada Renvoltura celularR o Rvaina externaR $ue rodea completamente el cilindro protoplasm%tico. 'pirochaetes se distingue de los dem%s filos bacterianos por la presencia de unos flagelos especializados denominados filamentos axiales situados entre la envoltura celular externa " el cilindro protoplasm%tico (en el espacio periplasm%tico) $ue producen un movimiento giratorio $ue permite a la bacteria entera desplazarse hacia delante, como si fuese un sacacorchos. *ueden tener (seg5n la especie) de dos a 4.. flagelos por clula, uno de cu"os extremos se inserta cerca de un polo de la clula, $uedando el otro extremo libre. Los flagelos son de estructura " composicin similar al resto de las bacterias, diferenci%ndose en $ue son completamente intracelulares. La movilidad de las espiro$uetas es diferente al resto de las bacterias mviles. *ueden emplear tres tipos de movimiento, en medio l!$uido, rotacin alrededor de su eje, contracciones flexulosas " movimiento helicoidal. :ambin pueden desplazarse en ambientes altamente viscosos, incluso en medios slidos con un 4E de agar. 'on organismos $uimiohetertrofos, la ma"or!a anaerobios $ue viven libremente, pero ha" numerosas excepciones de par%sitos.

=) 'higella Es un gnero de bacterias con forma de bacilo Gram negativas, no mviles, no formadoras de esporas e incapaces de fermentar la lactosa, $ue pueden ocasionar diarrea en los seres humanos. #ue descubierto hace 4.. aos por el cient!fico japons Si"oshi 'higa, de $uien tom su
nombre.

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2$ <escriba - gneros de hongos reconocidos para cada una de estas caracter!sticas0 1iorremediadores de compuestos policarbonados, biocontroladores, patgenos de piel, patgenos en animales.

1iorremediadores de compuestos policarbonatos.

1) Geotrichum Es un hongo hallado cosmopolitamente en suelo, agua, aire, detritos, plantas, cereales, productos l%cteos2 com5n en la flora normal humana " se aisla de esputo " heces. 6s! como coloniza el tracto intestinal,
Geotrichum causar infecciones oportunistas en huspedes inmunocomprometidos2 esas infecciones se refieren como geotricosis. Las infecciones usualmente se ad$uieren v!a ingestin o inhalacin. En condiciones clim%ticas tropicales (B. T " /.E de humedad relativa), destru"e los < " <L<. 'e reproduce sobre el soporte " destru"e la informacin almacenada, primero degradando el borde externo del soporte. Esto ocurre por$ue el hongo se alimenta del carbono " el nitrgeno de la capa pl%stica de policarbonato, destru"endo as! las pistas de informacin. Este hongo crece " se reproduce con facilidad dentro de la estructura de un < o <L< en las condiciones expuestas. 1iocontroladores puede

4)

lonostach"s f rosea. ?osea, (*rez et al. -..C), tambin conocido como Gliocladium roseum, es una especie de hongo en la 1ionectriaceae familia. 'e coloniza plantas vivas como un endfito digiere el material en el suelo como un saprofito " tambin se conoce como un par%sito de otros hongos " de los nematodos. 'e produce una amplia gama de compuestos org%nicos vol%tiles $ue son txicos para los organismos, inclu"endo otros hongos, bacterias e insectos, " es de inters como un agente de control de plagas biolgico. lonostach"s rosea protege las plantas contra 1otr"tis cinerea (Rmoho grisR) por la supresin de la produccin de esporas. 'u hifas se ha encontrado $ue la bobina alrededor, penetrar " crecen dentro de las hifas " conidios de 1. cinera. Los nematodos son infectadas por la pitiriasis ., cuando los conidios del hongo dan a su cut!cula " germinar, va a producir tubos germinales $ue penetran en el cuerpo del anfitrin " acabar con l.

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-) :richoderma (*rez et al. (-..C), es un gnero de hongos $ue est%n presentes en todos los suelos, dnde est%n los hongos cultivables m%s prevalentes. 8uchas especies de este gnero puede ser caracterizado como oportunistas simbiontes vegetales avirulentas Larias cepas de :richoderma se han desarrollado como agentes de control biolgico contra las enfermedades f5ngicas de las plantas. Los diversos mecanismos inclu"en la antibiosis, parasitismo, resistencia a la induccin de la planta hospedante, " la competencia. La ma"or!a de los agentes de control biolgico son de la especie :. harzianum, :. viride " :. hamatum. El agente de control biolgico en general, crece en su h%bitat natural en la superficie de la ra!z, lo cual afecta la enfermedad de la ra!z, en particular, pero tambin puede ser eficaz contra las enfermedades foliares.
4) *atogenos de piel

:richosporon beigelii, (*ea (-..F). Es un organismo levaduriforme, artrosporado $ue pertenece a los <euterom"cetes " $ue forma parte del la familia r"ptococcaceae. Es el agente causal de la piedra blanca, una infeccin inocua del pelo de la barva, pecho " pubis, donde se le encuentra formando ndulos de aspecto grasoso " consistencia blanda. *uede encontr%rsele en orina, esputo " piel humana " es un habitante normal del suelo " se le puede hallar en el agua. El hallazgo de este hongo causando infecciones diseminadas es poco com5n pero los reportes de este tipo de casos son cada vez m%s frecuentes " est%n relacionados con alta mortalidad, por el hecho de $ue :richosporon beigelii se reporta como resistente a la 6nfotericina 1 , uno de los mejores antimicticos con los $ue se cuenta para el tratamiento de infecciones invasivas. La infeccin diseminada para pacientes inmunosupresos es de inicio r%pido con fungemia, funguria, azotemia, presencia de infiltrados pulmonares, lesiones cut%neas, diseminacin a rin " otros tejidos . (Nerrera et al (4//=)

-) *it"rosporum foliculitis o foliculitis por malassezia es una condicin de la piel causada por una infeccin por levaduras pit"rosporum. La piel de la zona superior del tronco como los brazos superiores de la espalda, "a veces el cuello es a menudo afectada " esta condicin es a menudo visto en el joven para adultos de mediana edad. 'u diagnstico se basa en el prurito (picor), p%pulo>p5stulas $ue se encuentran en un patrn folicular en estas regiones. *5stulas blancas forman a partir de un crecimiento excesivo de la levadura, malessezia furfur, tapar los fol!culos. 8. #urfur es lipof!lica, lo $ue re$uiere %cidos grasos, como lo $ue est% presente en la piel grasa a proliferar. Es parte de la flora normal se encuentran en la piel, pero crecen demasiado en a$uellos $ue tienen una propensin a su groUth.overgroUth se asocia con la

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piel grasa, humedad u otras condiciones pre>existentes dermatolgicos como la dermatitis seborreica " la caspa severa. *6:VGE;9' E; 6;@86LE'

1) Epidermoph"ton floccosum es un hongo dermatofito antropof!lico ($ue prefiere los humanos a otros hospedadores) de distribucin mundial. Esta especie es la 5nica patognica de las dos especies del gnero Epidermoph"ton. Los hospedadores del hongo son tanto humanos como animales, salvajes o domsticos, en los $ue causa las infecciones de la piel conocidas como :inea corporis (tia), :inea cruris, :inea pedis (pie de atleta) " :inea unguiWm (onicomicosis). 'e contagia por contacto, en el
caso de humanos, especialmente en duchas " baos p5blicos. La infeccin se detiene mediante lavado con agua " jabn, " la aplicacin de un fungicida apropiado. 6simismo, puede ser contagiado entre humanos " ardillas. El hongo puede llegar a infectar tan solo la capa crnea inerte, de la epidermis. 'in embargo, una infeccin invasiva ha sido documentada en un paciente inmunodeprimido $ue padec!a del s!ndrome de 1ehXet. Hn estudio realizado en orea entre los aos 4/DC a 4//D sobre /.. pacientes afectados de E. floccosum revel $ue las co>infecciones en la misma persona por E. floccosum " otro dermatofito son bastante poco frecuentes.

-) 6spergillus fumigatus es un hongo del gnero 6spergillus, " es la especie

m%s frecuente $ue causa enfermedad en pacientes fundamentalmente inmunodeprimidos. 6dem%s, puede causar la aspergilosis en las abejas.

3$ <escriba caracter!sticas de tincin de los siguientes grupos " su importancia en diagnsticos de aguas " suelos, en $ue se diferencianK0 a) b) oliformes fecales oliformes totales

Los oliformes #ecales son un subgrupo de los oliformes totales, capaz de fermentar la lactosa a 33T en vez de BD T como lo hacen los totales. 6proximadamente el /=E del grupo de los oliformes presentes en heces est%n formados por Escherichia oli " ciertas especies de Slebsiella. 7a $ue los oliformes #ecales se encuentran casi exclusivamente en las heces de los animales de sangre caliente, se considera $ue reflejan mejor la presencia de contaminacin fecal. Ystos 5ltimos se denominan termotolerantes por su

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capacidad de soportar temperaturas m%s elevadas. Esta es la caracter!stica $ue diferencia a oliformes :otales " #ecales. La capacidad de los oliformes fecales de reproducirse fuera del intestino de los animales homeotrmicos es favorecida por la existencia de condiciones adecuadas de materia org%nica, pN, humedadZ <esde hace mucho tiempo se han utilizado como indicador ideal de contaminacin fecal. 'u presencia se interpreta como una indicacin de $ue los organismos patgenos pueden estar presentes " su ausencia indica $ue el agua se halla exenta de organismos productores de enfermedades. Pr,ce.'m'en),: Lamos a seguir el mismo mtodo para la determinacin de los dos tipos de oliformes, lo 5nico $ue variar% ser% la temperatura de incubacin de cada determinacin, $ue para los oliformes :otales ser% de BD T " para los fecales ha de ser de 33 T . Prueba 4resun)'va: *ara determinar estos oliformes se va a utilizar el medio de cultivo 1G11 (dispuesto en tubo), $ue es un medio selectivo " de enri$uecimiento "a $ue inhibe el crecimiento de microorganismos distintos de los del grupo de los oliformes a la vez $ue permite $ue stos crezcan sin restriccin, se distribu"e el medio en nueve tubos (tres series de tres tubos) con diez mililitros cada uno de medio de cultivo " echando 4. ml de el agua a la primera serie de tubos, 4 ml de agua a la segunda serie, " .,4 ml a la tercera. Prueba c,n*'rma)'va: siembra en E81 Levine0 En los tubos donde se introdujo .,4 ml de agua problema, o resultados positivos en la prueba presuntiva, se introduce un asa de siembra estril " se toma una porcin $ue va a sembrarse en estr!a en una placa *etri con medio E81 Levine. El E81 Levine contiene eosina " azul de metileno $ue inhiben parcialmente el crecimiento de los microorganismos Gram negativos, adem%s la combinacin de azul de metileno " eosina permitir%n diferenciar microorganismos lactosa positiva de los negativos. 'e incuban los tubos -3 > incoloras. Pruebas IMV'C: Las bacterias pertenecientes a la familia Enterobacteriaceae, pueden identificarse a travs de una serie de pruebas bio$u!micas, $ue permiten determinar la presencia o ausencia de ciertas enzimas " a veces incluso permiten determinar la existencia de una secuencia metablica. on este fin se han desarrollado diversos es$uemas de clasificacin, uno de los m%s conocidos " utilizados corresponde al @8Li $ue se desarroll para clasificar especies de la familia antes mencionada " correspondientes al grupo de bacterias coliformes (bacterias aerbicas o anaerbicas facultativas, Gran negativos, bacilares, no esporgenas $ue producen %cido " gas durante la fermentacin de la lactosa). In.,l: El triptfano, amino%cido suministrado por una peptona adecuada, se descompone en indol por accin de algunos microorganismos. La pr%ctica va a consistir en observar si el microorganismo es capaz de producir indol

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cuando est% en presencia de agua de peptona. El indol producido es detectado por indol de Qovacs $ue produce una coloracin al reaccionar con l. 'e coge con un asa de siembra, colonias de la placas de E81 " se siembra en un tubo con agua de peptona. 'e incuba horas a la temperatura correspondiente seg5n se trate de oliformes :otales #ecales, -3>3F horas, pasado el tiempo de incubacin se sacan los tubos de la estufa " se les aade 4 mL de reactivo indol de Sovacs " se deja reposar. 'i aparece una coloracin roja indica $ue la prueba es positiva, el microorganismo produce indol.

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