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MTODOS CROMATOGRFICOS
Por: Raphael Gonalves Nicsio Tema: Metodologia

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A cromatografia uma forma de anlise muito importante, por ser facilmente adaptvel a diversas molculas e ons, ser rpida, prtica e precisa. Do grego !"#$: chroma, cor e %"$&'(): grafein, grafia, envolve uma srie de processos fsico-qumicos de separao de misturas em funo de suas caractersticas moleculares e se destaca pela facilidade em efetuar no apenas a separao, mas tambm identificao e quantificao das espcies qumicas, sozinha ou combinada com outros mtodos de anlise. Possui ainda uma faixa de aplicao ilimitada, podendo ser usada para separao de molculas menores, como H2 e D2, at as maiores, como protenas.

Classificao das tcnicas cromatogrficas

Pelo estado fsico da fase mvel ! Cromatografia gasosa: a fase mvel um gs, geralmente nitrognio, hlio, hidrognio e argnio, armazenado sob alta presso, que impulsiona a amostra, que pode ser lquida, slida ou gasosa. ! Cromatografia lquida: tem como fase mvel um lquido. Pode ser baseada em um sistema de alta performance - HPLC (High Performance Liquid Chromatography). ! Cromatografia supercrtica: a fase mvel um vapor pressurizado, com temperatura acima da crtica, com viscosidade menor que do lquido, mas ainda assim, mantendo as propriedades de interao com o soluto. Pela fase estacionria No caso da fase estacionria ser constituda por um slido ou um lquido e este ltimo pode estar simplesmente sobre um suporte slido ou imobilizado sobre ele. Suportes modificados so considerados separadamente, como fases quimicamente ligadas, por normalmente diferirem dos outros dois em seus mecanismos de separao. Pelo modo de separao Cromatografia por adsoro

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Destes mecanismos de separao, todos podem ser aproveitados na fase lquida e somente a adsoro e partio so possveis na fase gasosa.

Cromatografia Planar
A cromatografia em papel (CP) uma tcnica de partio lquido-lquido, estando um deles fixado a um suporte slido. Baseia-se na diferena de solubilidade das substncias em questo entre duas fases imiscveis, sendo geralmente a gua um dos lquidos. O solvente saturado em gua e a partio se d devido presena de gua em celulose (papel de filtro). Este mtodo, embora menos eficiente que a Cromatografia em Camada Delgada (CCD), muito til para a separao de compostos polares, sendo largamente usado em bioqumica. A CCD uma tcnica de adsoro lquido-slido. Nesse caso, a separao se d pela diferena de afinidade dos componentes de uma mistura pela fase estacionria. Em um cromatograma obtido por CCD, pode-se observar a diferena de afinidade de substncias pela fase estacionria, sendo a primeira substncia mais retida que a segunda ou vice-versa.

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Esquema de Cromatografia Planar.

Utilizao Por ser um mtodo simples, rpido, visual e econmico, a CCD a tcnica predominantemente escolhida para o acompanhamento de reaes orgnicas, sendo tambm muito utilizada para a purificao de substncias e para a identificao de fraes coletadas em cromatografia lquida clssica. O parmetro mais importante a ser considerado em CCD o fator de reteno (Rf), o qual a razo entre a distncia percorrida pela substncia em questo e a distncia percorrida pela fase mvel. Os valores ideais para Rf esto entre 0,4 e 0,6.

Cromatografia gasosa
A Cromatografia Gasosa uma tcnica para separao e anlise de misturas de substncias volteis, que possuam ponto de fuso de at 300C e sejam termoestveis, atravs da introduo do material gasoso na fase estacionria, que pode ser slida ou lquida pouco voltil; e posterior anlise de cada substncia separada pela coluna cromatogrfica. O mtodo da cromatografia gasosa dividido basicamente em trs tipos:

!"Cromatografia gs-slido ou de partio ! Cromatografia gs-lquido ou de adsoro !"Cromatografia gasosa de alta resoluo

Esquema de Cromatografia Gasosa.

Utilizao A cromatografia gasosa muito utilizada em diversas reas, como a farmacutica, alimentcia, petroqumica, anlise ambiental, entre outras, por ser muito verstil e poder separar e quantificar

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diversas substncias, alm de ser capaz de identificar algumas delas, sendo associada a um espectrmetro de massas.

Cromatografia Lquida Clssica

A principal etapa ao se utilizar essa tcnica o empacotamento, o qual, entre outros fatores, definir a eficincia da separao. As fases estacionrias mais utilizadas so slica e alumina, entretanto estes adsorventes podem servir simplesmente como suporte para uma fase estacionria lquida. Fases estacionrias slidas levam separao por adsoro e fases estacionrias lquidas por partio. Suportes quimicamente modificados tambm tm sido usados, sendo o processo de separao misto neste caso.

Esquema de Cromatografia Lquida Clssica.

Utilizao Esta tcnica muito utilizada para isolamento de produtos naturais e purificao de produtos de reaes qumicas.

Cromatografia Lquida de Alta Eficincia (CLAE ou HPLC)

A Cromatografia Lquida de Alta Eficincia surgiu como aprimoramento da cromatografia lquida clssica devido s dificuldades de se separar alguns compostos com esse mtodo, como corantes polares, ismeros, drogas bsicas e seus metablitos. Este mtodo capaz de separar e analisar quantitativamente vrios compostos da amostra em poucos minutos, com alta resoluo, eficincia e sensibilidade. A CLAE separa e detecta amostras em temperatura ambiente. Por essa razo, agncias como United States Food and Drug Administration (FDA) adotaram e recomendaram esse mtodo para anlises de compostos no volteis, de alta polaridade e termicamente estveis. Sendo, portanto um mtodo mais eficiente e verstil que a Cromatografia a Gs.

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Esquema de Cromatografia Lquida de Alta Eficincia.

Utilizao So amostras tpicas desse mtodo: aminocidos, explosivos, lipdeos polares, metablicos de animais e plantas, pigmentos de plantas, polmeros sintticos, polissacardeos, produtos farmacuticos, protenas e tintas. Algumas determinaes de substncias cujas anlises por outras tcnicas so muito difceis, demoradas ou impossveis, seriam: preparao de compostos marcados e anlises toxicolgicas; separao de componentes de comprimido analgsico, logo aps a fabricao ou aps algum tempo, para controlar o problema de estabilidade; anlise de mistura de anticonvulsionantes no soro sanguneo de pacientes para identificar o tempo de permanncia desses no sangue; determinao de esterides base de cortisona, que no podem ser identificados por cromatografia gasosa, pois ocorre absoro irreversvel ou decomposio; controle de qualidade do mel e caracterizao atravs da anlise qumica do acar; determinao de contaminao ambiental por pesticidas.

Referncias ISSUFO, C.H.N.; CALU, J.; LOPES, N.P.R.; NAZARETH, T.S. Mtodos cromatogrficos. 2009. DEGANI, A.L.G.; CASS, Q.B.; VIEIRA, P.C. Cromatografia: um breve ensaio. Qumica Nova Escola, 1998.

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Jos Eugnio Rios Ricci Jr.
* um ms atrs

Gostei muito do Blog. As ilustraes esto timas. Estava com dificuldade em encontrar temas sobre o assunto. Outras referncias boas so da Wikipdia e de LANAS FM.; MCNAIR HM. Cromatografia em fase gasosa. 1.Teoria Elementar. Qumica Nova, v. 6, n. 1, p. 6-13, 1983. Colocar o ttulo "Mtodos Cromatogrficos" e a data da ltima atualizao/ modificao ajudaria muito para utiliz-lo em referncias... Abc!
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