Caracterizacin de Enfermedades Parasitarias Apcolas en el Per

Informe de Prcticas Vacacionales de Laboratorio

Alain Christian Len Castro

PROFESIONAL RESPONSABLE: M.V. Washington Valencia Lmaco

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INFORME DE PRCTICAS VACACIONALES DE LABORATORIO CENTRO DE DIAGNOSTICO DE SANIDAD ANIMAL (UCDSA-SENASA) (LIMA - 2013)

_________________________ Alain Christian Len Castro Estudiante

________________________ M.V. Vctor Carrasco Pea Asesor

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INTRODUCCIN
A principios del siglo XX, el mdico veterinario recurra, en raras ocasiones, a los procedimientos del laboratorio para diagnosticar enfermedades. Y, en algunas ocasiones, acuda al farmacutico para hacer las dosificaciones, por simples que stas fueran. Alrededor de mediados de siglo, fue cuando los mdicos veterinarios ya tienen ms contacto con el laboratorio, al tener ms conocimientos tanto de las tcnicas antiguas como de las nuevas que empiezan a surgir. An, cuando el mdico veterinario sigue atendiendo a sus pacientes y al laboratorio, se ve desbordado por el surgir de nuevos avances en los procedimientos del laboratorio. De todos modos, el veterinario sigue interpretando los resultados que les proporciona el laboratorio. Si el mdico veterinario puede precisar el significado de los anlisis con una mayor exactitud es posible gracias, en mayor o menor medida, a los datos tanto fisiolgicos como patolgicos ofrecidos por el tcnico del laboratorio y, estos resultados, conllevan al seguimiento de la enfermedad y de su posible tratamiento. El Servicio Nacional de Sanidad Agraria (SENASA), es un Organismo Pblico Tcnico Especializado Adscrito al Ministerio de Agricultura con Autoridad Oficial en materia de Sanidad Agraria, Calidad de Insumos, Produccin Orgnica e Inocuidad agroalimentaria. El SENASA, mantiene un sistema de Vigilancia Fitosanitaria y Zoosanitaria, que protegen al pas del ingreso de plagas y enfermedades que no se encuentran en el Per. Hoy, es una realidad la modernizacin de los Centros de Diagnstico de Sanidad Vegetal y Sanidad Animal, el Centro de Produccin de Moscas de la Fruta Estriles, as como el Centro de Desarrollo de Mtodos de Produccin de Entomopatgenos. El SENASA, brinda los servicios de inspeccin, verificacin y certificacin fitosanitaria y zoosanitaria, diagnostica, identifica y provee controladores biolgicos. Adems registra y fiscaliza los plaguicidas, semillas y viveros; de igual manera, los medicamentos veterinarios, alimentos para animales, a los importadores, fabricantes, puntos de venta y profesionales encargados y emite licencias de internamiento de productos agropecuarios. El SENASA, tambin capacita a profesionales y tcnicos elevando su nivel para ofrecer un mejor servicio. Tambin capacita a productores,

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autoridades y poblacin rural y urbana; logrando cambios de actitud y mayor conciencia de la sanidad agraria del pas. Asimismo, implementa normas y recomendaciones de organismos internacionales suscribe protocolos y convenios con organismos de sanidad agraria de otros pases, conquistando mercados para la exportacin de productos agropecuarios. El SENASA, que interacta con organismos pblicos y privados, nacionales y extranjeros, firma alianzas estratgicas con Universidades, Gobiernos Locales y organizaciones de productores, vinculndolos en los procesos de proteccin y mejora de la sanidad agropecuaria del pas. La UCDSA del SENASA cuenta con el laboratorio ms moderno de la Regin Andina y Amrica Latina, para el diagnstico de las enfermedades de los animales domsticos y el control de calidad de los productos de uso veterinario, en apoyo a los Programas Nacionales de Salud Animal, la Industria Pecuaria y la Comercializacin Nacional e Internacional. El Centro y sus laboratorios constituyen el Laboratorio Oficial de Referencia Nacional en Sanidad Animal, importante para mantener el estatus sanitario del pas y el reconocimiento del mismo por la Organizacin Mundial de Sanidad Animal, OIE. Los laboratorios para su funcionamiento cuentan con personal altamente calificado, infraestructura y equipos modernos, procedimientos y metodologas aprobadas internacionalmente, bajo un sistema de calidad, y en cumplimiento de las normas y acuerdos internacionales. La varroosis es una enfermedad de las abejas causada por un caro ectoparsito conocido como varroa y que actualmente supone un grave problema para la apicultura mundial. Investigadores murcianos ha estudiado el perfil gentico del ectoparsito varroa en colonias de abejas infestadas. El microsporidio Nosema apis es un protozoo parsito exclusivo de las clulas epiteliales del ventrculo de las abejas adultas, y la enfermedad se presenta en todo el mundo. La infeccin se produce por la ingestin de esporas con el alimento, por la trofalaxis o quizs despus de la limpieza de los pelos del cuerpo. El parsito se multiplica a una tasa especfica a lo largo del ao. Los niveles de Nosema aumentan cuando las abejas estn confinadas, como sucede en otoo e invierno en los climas ms fros, cuando disminuyela cantidad de cras, y posiblemente a principios de la primavera, cuando se produce un aumento de la progenie. Finalmente, y para no alargar demasiado el asunto, cuando citamos uno o dos mtodos para una misma investigacin, no significar que el resto sea de menor importancia sino que son los que creemos que se dan con mayor frecuencia en dicha investigacin.

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OBJETIVOS:
Objetivo General:
O Complementar la formacin profesional en el aspecto terico - prctico en el rea de Laboratorio.

Objetivos Especficos:
O Reconocer las instalaciones que posee el Unidad Centro de Diagnstico de Sanidad Animal (UCDSA-SENASA) para el diagnstico de las enfermedades de los animales domsticos y el control de calidad de los productos veterinarios. O Conocer la infraestructura, materiales y equipos que se utilizan, y conocer su adecuada utilizacin. O Conocer el procedimiento que se realiza al recepcionar alguna muestra para analizar. O Observar las medidas de bioseguridad implementadas en el Centro de Diagnstico de Sanidad Animal.

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MARCO CONCEPTUAL
Abeja Nodriza: Abeja muy joven que slo se dedica a alimentar y cuidar las larvas. Abeja Pecoreadora o Forrajera: Abeja que recolecta nctar, polen, agua y propleos. Aguijn:Es el rgano que usan las abejas para defender la colonia, con l inyectan el veneno. Ahumador: Es un aparato muy importante para el apicultor con el cual hace humo para calmar alas abejas. Apiario: O tambin llamado colmenar, es el lugar donde el apicultor establece y maneja las colonias de abejas melferas que ha ubicado en sus respectivas colmenas. Apicultor: Tambin conocido como colmenero, es una persona que cuida y mantiene a las abejas melferas con el propsito de obtener de ellas los beneficios que pueden brindar, siendo el principal de estos la polinizacin, adems de la clsica y ampliamente conocida, produccin de la miel, junto con otros como la obtencin de polen, cera, jalea real y veneno (Apitoxina). Bastidor: Es un cuadro de madera en donde se pone alambre y cera estampada para que las abejas construyan un panal. Tambin se lo conoce como marco, cuadro, panal, etc. Cmara de cra: Caja de la colmena donde se realiza la postura de la reina. Celda o celdilla: Cada uno de los compartimentos de un panal. Celdas de Obreras: Son las celdas de los panales destinados para las celdas de las abejas obreras. Tambin en estas celdas las abejas almacenan miel y polen. Colmena: Es la vivienda de una colonia de abejas y, por extensin, la colonia que vive en ella, donde se confinar a la colonia de abejas que puede provenir de un enjambre natural, de una colonia o colmena rstica, o de un ncleo o paquete de abejas que se compran a otros apicultores. Piquera: Es la abertura normalmente entre el piso y la cmara de cra, si es inferior. Por esta abertura ingresan las abejas a la colmena. Durante el invierno se mantiene cerrada por medio de una madera denominada guardapiquera. En la estacin clida este guardapiquera es retirado a fines de facilitar el ingreso, debido a que la colmena duplica o triplica su poblacin de abejas. SENASA: Servicio Nacional de Sanidad Agraria.

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MARCO TERICO Nosemosis

La nosemosis o nosematosis es una enfermedad producida por el parasito protozoario Nosema apis, parsito que vive en el interior de las clulas epiteliales del ventrculo (Intestino medio) de las abejas adultas: abejas obreras, los znganos y de la abeja reina. El esporo de N. apis es ingerido con el alimento y destruye las clulas epiteliales encargadas de la digestin y asimilacin, de tal manera que no se aprovecha convenientemente el alimento ingerido. Produce una inflamacin del intestino de la abeja, generando diarrea. Nosema apis se transmiten verticalmente. Esto significa que las reinas pasan el organismo encendido a su descendiente a travs de sus huevos. Esto puede conducir a los problemas serios en la produccin de reinas y de paquetes. Adems, el organismo forma esporas duraderas, potencialmente virulentas. Afortunadamente, todas no germinen, sino una proporcin pequea Las esporas viven en las heces o evacuaciones durante ms de dos aos; en el suelo de 44 a 71 das, y en la miel durante dos a cuatro meses. Las esporas de Nosema apis son cuerpos grandes, ovales, 4-6 um de largo por 2-4 um de par en par. Las esporas convirtase exclusivamente dentro de las clulas epiteliales del ventriculus de la abeja. En invierno, rara vez aparecen esporas o solo se encuentran en abejas fuertemente infectadas. Cualquier defensa natural inherente de una colonia de abejas frente a una infeccin fuerte por el parsito depende tanto del tamao de la colonia como de las condiciones climticas al comienzo del otoo del ao previo. Si estas condiciones no son favorables, se reduce la esperanza de vida del conjunto de la colonia. Esto puede conducir a la muerte prematura de las abejas durante el invierno o el inicio de la primavera. En un caso tpico de una colonia mermada debido a la infeccin por Nosema, se puede observar a la reina rodeada por unas pocas abejas, atendiendo confusamente a la progenie que ya est operculada. La enfermedad de Nosema se manifiesta generalmente en las abejas se confinan que; por lo tanto, las infecciones ms pesadas se encuentran en abejas del invierno, abejas del paquete, las abejas usadas para la polinizacin en invernaderos, el etc. .

Caracterizacin de Enfermedades Parasitarias Apcolas en el Per Clasificacin Taxonmica

Tipo : Clase : Orden : Suborden: Familia: Protozoarios Esporozooarios Cniclosporidios Microsporidios Nosematidae

Caractersticas Morfofisiolgicas
Tiene la caracterstica de que produce esporos, los cuales son de forma ovalada, incoloros y refringentes, con un tamao de 4.5-6.4 m x 2.5-3 m. Tiene una doble pared que encierra un protoplasma granulosa con ncleos y vacuola en forma de un filamento largo y fino que parece enrollado.

Patogenia
La susceptibilidad es mayor en abejas adultas de ms de 15 das de edad. En virtud que tiene el tracto digestivo maduro. El contagio se produce por pillaje, deriva, mala praxis de manejo apcola, o por introduccin de colmenas enfermas. Es una enfermedad estacional, en primavera al empezar la cra, sobreviene una multiplicacin del parsito, producindose un estado de equilibrio entre el husped y el parsito. Aqu podemos decir que hay nosemosis latente. En verano disminuye o se diluyen los esporos infectantes, llegando a bajar la infeccin. Ante el stress, manejo, clima o estado interno de la colmena, algunas colmenas aparentemente sanas en invierno, enferman en primavera. Hay quienes hablan de fase de reposos en invierno.

Sintomatologa
Las abejas tienen sntomas de debilidad general y una imposibilidad de volar, probablemente a consecuencia de una compresin de los sacos areos abdominales. Se manifiestan temblores y parlisis. Por tratarse de una inflamacin aguda del intestino en virtud que este se lastima, cambia su apariencia y coloracin. Los intestinos enfermos son de color blanquecino, inflamados, flcidos, deformados; mientras los intestinos de abejas sanas son de color verdoso amarillento y turgentes (podra utilizarse como diagnstico a campo).

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El insecto presenta abdomen globoso y distendido por la acumulacin de excrementos, no pudiendo evacuar los efluentes o hacindolo con dificultad; que no siempre generan una diarrea intensa, con deyecciones de color marrn claro verdoso y olor ftido. Al alterarse dichos procesos bsicos en el metabolismo de los nutrientes, se desencadenan una serie de trastornos metablicos los cuales derivan en los signos clnicos. Dentro de stos encontramos: Muerte prematura de abejas, incapacidad para el vuelo, temblores de alas, movimientos espasmdicos causados por la inanicin. Desarrollo deficiente de glndulas Aumento del consumo, con una digestin disminuida. Replecin de intestino y ampolla rectal, aumento de peso, compresin de sacos areos Defecacin en un perodo avanzado de la enfermedad. Heces claras en bordes externos de las celdas, marrn claro y amarillo en la piquera: enfermedad avanzada. No es signo patognomnico. Disminucin de vida media de las abejas, por disminucin de reservas, carencia proteica Escasa actividad de vuelo Deficiente atencin a la cra Abejas volando aisladamente en invierno Desarrollo atrasado de la colonia, principalmente en primavera. Muerte de abejas adultas Debilitamiento de la colmena

Diagnstico
Clnico. Se recurre al anlisis de laboratorio.

Laboratorial. Se diagnostica visualizando esporos de Nosema apis en preparacin microscpica. Diferencial. La presencia de diarrea, no es nica de esta enfermedad; por lo tanto no sirve como diagnstico diferencial. No deben confundirse los esporos de Nosema apis con levaduras y hongos que se tien con los colorantes

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utilizados, siendo uno de los ms utilizados el 'azul de metilo'. El esporo de este protozoo es similar, bajo microscopio ptico de 400 a 600 aumentos, a una semilla de meln (de forma elipsoidal). Hay que sealar que los quistes de Malpighamoebamellificae (amebiosis) son circulares y con un dimetro un poco inferior al eje longitudinal de los esporos. El organismo tambin activa virus. sta aparece ser la misma clase de fenmeno pensada para ser asociado a los caros traqueales, y para ser juntado con parasitismo por los caros de Varroa, y ahora para la condicin llamada sndrome parsito del caro de la abeja melfera.

Recomendaciones para prevenir

Evitar el exceso de humedad dentro de la colmena, como as tambin los lugares hmedos para la instalacin del colmenar Invernar con buena reserva de miel y polen Tener colmenas con buena poblacin y parejas durante todo el ao Realizar cambio de reina por lo menos cada dos aos Realizar por lo menos una vez al ao (otoo o primavera) un muestreo de abejas del colmenar para su anlisis en laboratorio

Tratamiento
Fumagilina

Vas de administracin: Jarabe: Debe preparase y usarse en el momento Preparar 24 litros de jarabe utilizando dos partes de miel y una parte de agua (jarabe de otoo) Disolver el envase de 25 g de fugiprin "b" en medio litro de jarabe La temperatura del jarabe no debe ser superior a 30 grados. Incorporar el producto disuelto al resto del jarabe Se debe administrar un litro del jarabe por colmena tres veces a intervalos de 7 das Para el tratamiento de primavera se procede de igual manera, slo que el jarabe a utilizar deber ser de una parte de azcar y una de agua.

Desafortunadamente, el fumagilin no es eficaz contra esporas del nosema. As, un rgimen de alimentacin continuo se requiere para guardar infestaciones activas a un mnimo.

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Varroasis
Clasificacin Taxonmica
Tipo: Clase: Orden: Suborden: Artropoda Arachnida Parasitiformes Garrasida

Parsito que afecta la produccin directa (miel, polen, propleo, veneno, etc.) y la produccin indirecta en la polinizacin. Presenta dimorfismo sexual. En las hembras, tienen forma elipsoidal, con un tamao de 0.8 a 1.5 mm de longitud y 1.3 a 1.9 mm de ancho. Tiene el cuerpo recubierto de tegumento queratinoso rojizo con pelos rgidos y ramificados. Tiene como hospedadores principales a los znganos A. cerena. La hembra llega a poner 5 huevos en las celdillas de obreras, y 7 huevos en las celdillas de znganos. Estos huevos se llegan a desarrollar en 48 horas. Una larva hepxoda (inactiva), luego se vuelve protoninfa, continua como deutoninfa y finalmente adulta. En el estado de protoninfa, la hembra es de color blanco vidrioso, presenta 8 patas y mide

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ACTIVIDAD REALIZADA EN LAS INSTALACIONES

El da mircoles 13 de febrero del 2013, se realiz la presentacin formal con el personal encargado, desde el Mdico Veterinario encargado de la evaluacin del alumno, el M.V. Luis Olivera Samaniego, Director de la Unidad del Centro de Diagnstico de Sanidad Animal (UCDSA) del SENASA, al cual se le hizo entrega de los documentos dirigidos hacia su persona, por parte del Decano de la Facultad de Zootecnia-UNP, Dr. Francisco Takayama Cieza, incluyndola carta y la Ficha de Evaluacin Integral. Se le comunic al alumno que realizar las prcticas en el rea de Parasitologa, para lo cual se present al M.V. Washington Valencia Lmaco, Responsable del Laboratorio de Parasitologa. A su vez, el M.V. Washington Valencia Lmaco, present a la M.V. Mara Chileno Morn, encargada del Programa de Caracterizacin de Enfermedades Parasitarias Apcolas en el Per. Luego se realiz el Reconocimiento de las Instalaciones, as como Equipos y Materiales del rea de Parasitologa, incluyendo el Laboratorio de Parasitologa y de Inmunidad Parasitaria. Se comunic que se debe cumplir las estrictas medidas de Bioseguridad, utilizando Mandil, guantes de ltex, mascarilla y gorro.

Investigacin en proceso: Caracterizacin Enfermedades Parasitarias Apcolas en el Per.

de

Se est realizando una investigacin sobre los 2 principales parsitos que afecten a la salud y produccin de las abejas, para lo cual se han recibido muestras de todos los departamentos del Per. Los parsitos que se estn estudiando, son Varroa sp. (parsito externo) y Nosema sp. (parsito interno). Este programa se encuentra a cargo de la M.V. Mara Chileno Morn. Se tiene proyectado recibir un total de 6630 muestras de abejas, clasificadas en: 3315 muestras para Nosema sp. y 3315 para Varroa sp. Estas muestras son enviadas de las oficinas de SENASA de los 24 departamentos del Per.

Caracterizacin de Enfermedades Parasitarias Apcolas en el Per PROCEDIMIENTO DE COLECCIN DE MUESTRAS EN CAMPO: Varroa sp.
1. Seleccionar 03 celdas de cra al azar. 2. Corroborar que entre estas seleccionadas no se encuentre la reina. 3. Realizar un arrastre con un depsito de boca ancha con alcohol 70, calculando que ingresen aproximadamente 200-300 abejas nodrizas. 4. Tapar el frasco 5. Rotular el frasco

Nosema sp.
1. Tapar piquera con un trapo o papel 2. Con un depsito de boca ancha con alcohol 70, se realiza una recoleccin rpida, calculando que entren un total de 100 abejas adultas. 3. Tapar el frasco 4. Rotular el frasco

DIAGNSTICO DE LABORATORIO Varroa sp.

Materiales

Tamices: N 4, 10 y 35. Solucin detergente Plumn marcador permanente Muestra Contador Fuente o depsito de plstico

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Procedimiento:

1. 2. 3. 4.

Se toma la muestra y se contabilizan Se le agrega una solucin detergente. Se agita manualmente para la liberacin de varroas. Se pasa por dos tamices, de diferente grosor: el mayor par que queden las abejas, y el ms pequeo donde quedan las varroas. 5. Se realiza el conteo de las varroas presentes en la muestra. 6. Se halla el porcentaje de infestacin, en relacin al nmero de abejas de la muestra: Nmero de varroas Nmero de abejas 7. Se registra. X 100

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Nosema sp.
Materiales Placas Petri de vidrio Pinzas Mortero Tamices Tubos de Ensayo Gradillas Microscopio Cmara de Neubauer Lminas Portaobjetos Lminas Cubreobjetos Pipeta Pasteur Matraz Enlenmeyer Agua destilada

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Procedimiento 1. Separacin de abdmenes de abejas.

2. Homogenizacin en mortero

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3. Agregar 50 ml. De agua destilada

4. Tamizar

5. Verter el lquido en tubos de ensayo

6. Ver al microscopio (40X)

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CONCLUSIONES Y DISCUSIONES
O Se logr poner en prctica los conocimientos adquiridos del manejo de equipos y datos de laboratorio. O Con respecto al estado sanitario de las abejas en el Per, se pudo determinar que en los departamentos de Junn, Ancas y Piura hay una mayor infestacin de los parsitos estudiados en las abejas. O Se aprendi y conoci el manejo de los materiales y algunos equipos presentes en los Laboratorios. O SENASA al observar que el campo de la apicultura est tomando fuerza en nuestro pas, ya sea en lo comercial como en lo relacionado a la salud pblica, se ha visto necesario realizar estudios para determinar la situacin en que se encuentra este campo, y as poder tomar las medidas necesarias para tener una adecuada Vigilancia sanitaria, y certificar la calidad de los productos que se puedan ofrecer en este campo. O Si bien las medidas y material de bioseguridad estn dadas, no son cumplidas y utilizadas correctamente por el personal.

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BIBLIOGRAFA

CORDERO DEL CAMPILLO, M.; ROJO VZQUEZ, F. A. Parasitologa Veterinaria. Ed. Mc Graw Hill Interamericana. VIGIL JIMENEZ, Alberto. Apicultura en el Estado de Nuevo Len. Nuevo Len Mxico. 2011. Wikipedia. Concepto de Tamizado. Modificada el 23 de marzo del 2013. Disponible en: http://es.wikipedia.org/wiki/Tamizado Wikipedia. Concepto de Piquera. Modificada el 8 de marzo del 2013. Disponible en: http://es.wikipedia.org/wiki/Piquera Wikipedia. Concepto de Apicultor. Modificada el 9 de marzo del 2013. Disponible en: http://es.wikipedia.org/wiki/Apicultor Wikipedia. Concepto de Colmena. Modificada el 9 de marzo del 2013. Disponible en: http://es.wikipedia.org/wiki/Colmena