Patognesis de las infecciones causadas por

Pseudomonas aeruginosa

Dra. Marisa Gmez

Dpto. de Microbiologa, Parasitologa e Inmunologa Facultad de Medicina, UBA-CONICET

Pseudomonas aeruginosa
Bacilo gram negativo no fermentador Aerobio estricto Ambiental ubicuo -- Patgeno Oportunista Tamao y complejidad del genoma Versatilidad metablica Capacidad de adaptacin al microambiente

P. aeruginosa Infecciones
Neumona Nosocomial Comunidad Condicin predisponente (EPOC) Infecciones del Tracto Urinario Infecciones de piel y partes blandas (Heridas, quemaduras) Sepsis

P. aeruginosa Grupos de riesgo

Pacientes hospitalizados (ARM, sondas) Individuos inmunosuprimidos (neutropnicos) Personas con quemaduras graves extensas Individuos con condiciones predisponentes EPOC Pacientes Fibroqusticos

P. aeruginosa Factores de Virulencia

Adherencia Flagelo y fimbrias (o pili), matriz exopolisacrida Dao e invasin Accin directa de Toxinas y exoenzimas Mediado por la respuesta inflamatoria Persistencia Biofilms / Adaptacin al microambiente

P. aeruginosa Factores de Virulencia

FLAGELO
FILAMENTO FLAGELINA

FIMBRIA

FIMBRINA PILINA

MEMBRANA EXTERNA

GANCHO

PEPTIDOGLICANO PERIPLASMA
MEMBRANA CITOPLASMTICA

FUNCION ESTRUCTURAL FUNCION EN RECONOCIMIENTO

MOTILIDAD Unin a TLR2/TLR5

ADHERENCIA Unin a aGM1

P. aeruginosa
Unin a receptores del epitelio respiratorio
Clulas polarizadas Uniones estrechas Produccin de mucus Epitelio ciliado

ADHERENCIA

Fimbria (Pili) asialoGM1 (aGM1) Flagelina Toll Like Receptor 5 (TLR5) Neuraminidasa Exposicin de aGM1

Neuraminidasa Accin sobre receptores del epitelio y consecuencias en patognesis

Expresin de aGM1

PAO1: P. aeruginosa 2794: NanA-

Fimbria (Pili) asialoGM1 (aGM1) Flagelina Toll Like Receptor 5 (TLR5)

Implicancias en la induccin de respuesta inflamatoria

Pseudomonas aeruginosa
Reconocimiento por TLRs
TLR: Toll Like Receptor Reconocimiento de Patrones Moleculares Conservados en Microorganismos Pilina - Flagelina aGM1-TLR2
Molculas adaptadoras Protenas Quinasas

Flagelina TLR5 LPS TLR4 Efecto sistmico Expresados por clulas epiteliales, endoteliales y macrfagos

Factores de transcripcin

Citoquinas y Quimioquinas Pro-inflamatorias (IL-1, TNF-, IL-6, IL-8)

Gmez MI, Curr Opin Pharmacol, 2007

Reclutamiento de neutrfilos Rol dual durante la infeccin

Pseudomonas aeruginosa
Respuesta Inflamatoria
24 h luego del desafo con P. aeruginosa

Macrfagos
50 % IL-6 positive cells 40 30 20 10 0 Media Flagella

Clulas Epiteliales
IL-6 (pg/ 150 g protein)

Flagelina intranasal
80 70 60 50 40 30 20 10 0

350 300 250 200 150 100 50 0 C

** ** *

0.01 0.1

10

Flagella (g/ml)

% PMN

**

Control Flagelina

P. aeruginosa
Dao e invasin del epitelio respiratorio
Exoenzimas (Elastasa, hialuronidasa, neuraminidasa) Exotoxina A - Citotoxina Exo T, Exo S, Exo U, Exo Y Funciones diversas Expresadas en >80% aislamientos de infecciones agudas

Ruptura de la barrera epitelial

P. aeruginosa
Cmo se libera la Exotoxina A?
Sistema de Secrecin de tipo II

SECRETINA

SECRETOMA

P. aeruginosa Exotoxina A
Endocitosis

B: unin al receptor

Dominio T se inserta en la membrana de la vacuola

ADP-R: ADP-Ribosila al factor E2 Muerte celular

A: alcanza el citoplasma

P. aeruginosa
Cmo se liberan las toxinas Exo?
Sistema de Secrecin de Tipo III (TTSS)

Joanne Engel University of California, San Francisco

P. aeruginosa - Toxinas Exo

Exo U Fosfolipasa Expresada en 1/3 aislamientos Exo Y - Adenilato Ciclasa AMPc Rearreglos del citoesqueleto

P. aeruginosa - Toxinas Exo

Toxinas bi-funcionales Presentes en la mayora de los aislamientos

Accin sobre citoesqueleto y protenas de las uniones intercelulares

Inhibe internalizacin de bacterias Evasin Induce apoptosis Evasin y dao

P. aeruginosa Rol de ExoSTY en patognesis

PAK: P. aeruginosa STY Mutante que no expresa ExoS, ExoT, ExoY Protenas que forman las uniones intercelulares estrechas ZO-1, Occludin, Ezrin
Invasin celular T3SS ExoS ExoT Muerte celular

P. aeruginosa P. aeruginosa aGM1/TLR2/TLR5

ZO-1

Ezrin

Occludin

IL-1, IL-6, IL-8, TNF

P. aeruginosa - Infeccin Aguda

Respuesta inflamatoria - Dao Ruptura de barrera epitelial - Dao Formacin de Biofilms Desarrollo de infeccin crnica

10

P. aeruginosa - Biofilms

P. aeruginosa
Adaptacin - Persistencia
Fibrosis Qustica
Enfermedad hereditaria autosmica recesiva CFTR (Canal de Cloro dependiente de AMPc) no funcional Menor secrecin de cloro y mayor reabsorcin de sodio Mayor viscosidad de mucus que recubre el epitelio respiratorio Menor funcionalidad de las cilias Persistencia bacteriana
Intensa pero ineficiente respuesta inflamatoria Dao pulmonar progresivo

11

Fibrosis Qustica Modelos de estudio in vivo

FQ - Modelos de estudio in vivo

12

Fibrosis Qustica Modelos de estudio in vivo

ENaC Tg WT ENaC Tg

P. aeruginosa
Persistencia en Pacientes Fibroqusticos

Adaptacin al microambiente del pulmn Implicancias en patognesis y diagnstico

13

Patognesis de las infecciones pulmonares por P. aeruginosa

Algunos nombres para mencionar
Joseph Barbieri

P. aeruginosa

Carol Bausbam Pamela Davis

Joanne Engel

Clulas epiteliales

Barbara Iglewski Alice Prince

Rol en inmunidad innata

MUCHAS GRACIAS!

14